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Physiologie du stress

Applications Biotechnologiques

Pr. Mimoun MOKHTARI mokhtari@iavcha.ac.ma

Plan
Introduction Introduction I- Type de stress 1. Stress abiotique et biotique 2. Stress danoxie 3. Stress salin 4. Stress hydrique

II- Les outils de la biotechnologie pour la lutte contre le stress 1. Culture in vitro 2. Tests des caractres cellulaires 3. Tests des caractres lis l'intgration des fonctions physiologiques 4. De la slection naturelle la slection dirige 5. Objectifs d'amlioration 6. Les ressources gntiques 7. Etude de ca: Tolrance la scheresse du Granium

introduction
Les stress biotiques et abiotiques constituent une cause majeure de perte de rendement, pour tous les types de culture Les plantes poussent et se dveloppent dans un environnement et subissent ces contraintes et donc elles doivent sadapter ou disparatre La comprhension des bases physiologiques et gntiques qui sous-tendent ces stratgies adaptatives est d'une importance majeure

I- Type de Stress

1 2

Stress biotique et abiotique

Stress danoxie

3
4

Stress de salinit

Stress hydrique

Type de stress
Les plantes poussent et se dveloppent dans un environnement donn dont elles ne peuvent schapper. Elles subissent donc de plein fouet les contraintes lies cet environnement et doivent y tre adaptes ou disparatre.

La qualit des plantes est donc comprise ici par la capacit rpondre ces contraintes, ces rponses se refltent rapidement au niveau des signaux lumineux et thermiques mis par les feuilles.

Type de stress Stress

Biotique Abiotique

Les stress biotiques sont nombreux et ont pour origine les virus, les organismes phytophages et les pathognes

Les stress climatiques : stress hydrique, fortes tempratures, gel. Les stress pdologiques : dgradation de certains sols, rosion Les changements hyperhypoxiques, acido-basiques Les stress de nature chimique : pesticide, contamination des sols par les mtaux lourds

Type de stress
La connaissance des rponses cellulaires et molculaires des plantes aux conditions de stress est trs importante afin damliorer la rponse des plantes cultives aux diffrents stress environnementaux. Mcanisme gnral de rponse des plantes un stress :

Une perte deau dans les cellules peut affecter ngativement la photosynthse et par consquence le rendement de la plante. Dans ce cas, La rponses physiologique ce stress est la scrtion de :
des osmoprotectants. des protines spcifiques. des acides gras. NB: Les osmoprotectants, comme la proline ou la glycine btane, permettent de maintenir lquilibre en eau entre la cellule vgtale et lenvironnement extrieur, Les acides gras permet la modification de la permabilit de la membrane plasmique.

Un excs de lumire par rapport la capacit de photosynthse dclenche toutefois une production de radicaux oxygne, nuisibles pour leur part la croissance vgtale phnomne appel photoinhibition.

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Type de stress
La biotechnologie pourrait constituer une solution contre le stress et lamlioration du rendements en y intgrant des gnes impliqus dans la rponse des plantes aux stress.

Actuellement, aucune varit transgnique tolrante un stress nest commercialise, elles sont en valuations

Type de stress
Exemple: Haricot commun
l'quilibre photosynthtique chez lharicot est trs influenc par les effets cumuls des autres paramtres environnementaux. Par exemple cette plante est

trs sensible la scheresse aux carences nutritives des sols le rayonnement ultraviolet

Alors pour survivre a ce dsquilibres environnementaux, la plante dveloppent des rponses leur permettant de rsister sont nanmoins encore trs mal connus au niveau molculaire.

Type de stress

1) Le stress biotique et abiotique

Type de stress
a) Le stress biotique:
Il est pour origine:
les virus les organismes phytophages les pathognes.

Alors pour faire face, les plantes mettent en place un systme de dfense faisant intervenir une chane de raction o Les protines vont dfendre contre les nuisibles.

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Type de stress
Exemple: du soja
Quand les nuisibles secrtent des protases, la plante scrte dinhibiteurs de ces dernirs due un burst oxydatif (BO) qui stablit et conduisant aux transferts de signaux chimiques notamment par lintermdiaire de lthylne. diffusion dthylne dans la plante permet dacqurir une rsistance globale face aux nuisibles en secrtant des protines de dfense souvent allergnes. Exemple: il a t montr que la scrtion de protine PR10 SAM22 de la famille bet v-1 like , est la rponse dune attaque dun nmatode. La scrtion des inhibiteurs de srines protase (STKI) pour se dfendre des larves dinsectes.

Type
b) Le stress abiotique
Parmi les stress abiotiques les plus importants, La scheresse, le froid et la salinit imposent aux plantes des changements mtaboliques globaux

Exemple : linduction des acides phosphatases purple (PAP) par les stress de la salinit chez le soja mais La synthse des protines PAP ainsi induite conduit un stress. En rponse ce stress oxydatif, le soja forme des protines allergnes comme la thiol protase.
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Type de stress

2) Stress danoxie

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Type de stress
une carence aigu en oxygne = anoxie
le maintien de lquilibre hydrique est un des dfis majeurs chez les plantes. Par exemple lors des inondations des sols en hiver ou aprs irrigation en excs. On provoque chez les racines une anoxie ce qui va affect l'absorption d'eau par les racines.

Selon les chercheurs, le blocage complet du transport racinaire d'eau en condition d'anoxie est strictement li une acidification de l'intrieur des cellules. cette acidification est comme un signal pour provoquer la fermeture des aquaporines localises sur la membrane des cellules. Elle est due un dsquilibre mtabolique engendr par l'anoxie .

Type de stress

3) Stress de salinit

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Type de stress
La salinit constitue l'un des stress abiotiques les plus rpandus au niveau de la plante et limite fortement les rendements. Le figuier de barbarie, opuntia ficus indica L, alors pour la valorisation des ressources gntiques de lespce, on utilise des marqueures biochimiques physiologiques et molculaires comme Les peroxydases (POX) qui sont des oxydorductases .

Du point de vue biochimique, l'extraction par solubilisation progressive des peroxydases a permis de rvler que le stress salin provoque une augmentation des peroxydases dans les fractions solubles et ioniques prpares partir dcotypes tolrants. Ces changements sont reflts au niveau des profils lectrophortiques par l'apparition d'isoformes acides et basiques chez les cotypes dont la croissance n'est pas affecte par le sel. Les autres cotypes rpondent en majorit par l'activation d'isoformes prexistants.

Type de stress

Exemple: Effet du stress salin sur l'accumulation de la proline et des sucres solubles dans les feuilles de trois porte-greffes d'agrumes

Type de stress
Au Maroc, les agrumes souffrent de la salinit du sol et de leau dirrigation ainsi que de la raret des pluies. Alors il faut choisir un bon porte greffe tolrant ce stress abiotique Vis--vis au stress salin, il y a 3 portes greffes introduits au Maroc: cintrage Carazo et de deux hybrides, H1 et H2, issus du croisement Ponceurs trifoliata et Citrus sunki

Citrus sunki

Ponceurs trifoliata

Type de stress

Daprs les expriences faites sur ces portes greffes, on a conclu que l'effet des concentrations salines utilises a pu tre compens par l'accumulation de sucres solubles dans les feuilles, notamment dans celles du porte-greffe H1. Celui-ci ayant montr moins de toxicit foliaire que les deux autres porte-greffes, l'accumulation de sucres solubles dans la feuille d'agrumes pourrait tre un indice de tolrance la salinit.

Type de stress

4) Stress hydrique

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Type de stress
A) Dfinition de la scheresse pour la plante
La scheresse est un manque deau qui a des effets ngatifs sur le dveloppement de la plante et par consquence sur le rendement qui diminuera par rapport aux conditions favorables. Leau a un rle nergtique et climatique considrable. elle intervient dans la raction de la photosynthse et donc la formation de la matire sche

Elle

a un effet important sur le climat d sa capacit de stocker de lnergie (80 cal/g) ce qui permet daugmenter la temprature du milieu ambiant (lutte contre le gel).

Quand elle se transforme du liquide en vapeur elle absorbe de lnergie (720 cal/g)

Permet un adoucissement des tempratures la surface des vgtaux

b) Les consquences de la scheresse sur le fonctionnement des plantes i. ii. iii. iv. un change "eau contre carbone un change "eau contre chaleur" Limitations de la croissance des organes de la plante Limitation de l'alimentation minrale par un dficit hydrique

Type de stress
i. un change "eau contre carbone

Le gaz carbonique (CO2) de la photosynthse pntre dans les feuilles par les stomates, qui contrlent aussi la transpiration cette dernire est rgle par louverture et la fermeture des stomates au niveau de la feuille

la photosynthse est intrinsquement lie la transpiration, car une diminution de la photosynthse a des consquences sur le mtabolisme du carbone, et certaines enzymes impliques dans la circulation des assimilas sont rgules en rponse au dficit hydrique

Si l'nergie solaire capte par les photosystmes de la feuille n'est plus utilise entirement par la photosynthse, des formes toxiques de l'oxygne peuvent apparatre, radicaux superoxydes (O2-), peroxyde d'hydrogne (H2O2) et radicaux hydroxyles (OH). Ces radicaux sont les mmes que ceux qui causent le vieillissement des cellules vgtales et animales, en provoquant la peroxydation des lipides et la dnaturation des protines et de l'ADN Diffrents mcanismes permettent de contrecarrer cette accumulation de radicaux toxiques.

Un premier consiste dissiper l'nergie lumineuse sous forme de chaleur Un deuxime mcanisme est la dtoxification, qui consiste empcher l'accumulation d'hydroxyles en intervenant diffrentes tapes de leur formation

ii. un change "eau contre chaleur

L'change "eau contre chaleur" est une stratgie gntique qui consiste rduire la transpiration par contrle stomatique et qui se trouve confronte au risque de stress thermique. La transpiration est un phnomne bnfique la plante car elle permet de disperser une partie importante de l'nergie radiative incidente sinon on aura un chauffement de la feuille.

Le dficit hydrique est souvent associ au stress thermique. Puisque les priodes sches sont souvent chaudes donc une rduction de la transpiration

iii. Limitations de la croissance des organes de la plante

Afin de rduire la transpiration, la plante adopte un mcanisme qui permet de limiter la croissance. cette limitation se fait soit directement par la rduction de la vitesse de croissance soit indirectement en rduisant le nombre d'organes portant des feuilles. Les mcanismes de La rduction de vitesse de croissance foliaire:

La vitesse de division cellulaire dcrot les parois cellulaires deviennent plus rigides La turgescence dcrot
Un dficit hydrique se traduit par une modification importante de l'architecture de la plante

iv. Limitation de l'alimentation minrale par un dficit hydrique

La scheresse peut causer une augmentation de la quantit de lazote donc le sol car elle altre les besoins en azote des cultures puisque ceux-ci croissent avec la biomasse produite. Aussi la mortalit des racines durant la priode sche, peut librer encore davantage dazote dans le sol. En face ces contrainte la plante est oblig de se protg contre le stress mais. Ca influencera sur la productivit. Par exemple: Le contrle stomatique et la rduction de surface foliaire sont ncessaires au maintien de l'tat hydrique des plantes, mais elles se traduisent par une baisse de photosynthse. L'appareil reproducteur rduit le nombre de grains pour maintenir leur viabilit, mais ceci rduit de faon irrversible le rendement.

c) Consquences de priodes de dficit hydrique sur la qualit des produits rcolts Caractristiques physique Les caractristiques physiques diffrent dun produit un autre par exemple: Chez les fruits et les lgumes frais: les proprits physiques(taille, forme, couleur...) reprsentent un premier critre de Chez les espces graine: la masse d'un grain de bl et sa duret sont des critres importants

Effets de la scheresse sur la composition primaire des graines et des fruits la composition primaire des graines et des fruits est: hydrates de carbone, lipides et protines, qui reprsentent la plus grande partie de la masse des organes rcolts. Gnralement on dit que la scheresse augmente la qualit mais ce nest pas une rgle gnrale par exemple: Chez les plantes graines: les conditions chaudes et sches causent une teneur suprieure en protines chez le bl et une diminution de la teneur en huile chez le tournesol Chez les fruits surtout consommation frais: Une scheresse prcoce pendant le dveloppement du fruit induit une amlioration de la qualit par augmentation de la concentration en sucres et de lintensit de la couleur rouge du fruit.

Chez la vigne: La priode prcoce du dveloppement de la baie est la plus sensible la scheresse en ce qui concerne la croissance de la baie, sans effet majeur sur la concentration en sucres qui s'accumulent dans un volume plus faible. Si la scheresse est continue depuis la floraison la maturit, le rendement baisse mais la concentration en sucre continue de baisser. Les effets dpendent trs largement du stade pendant lequel le dficit hydrique se produit

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d) Consquences en termes de stratgies de tolrance la scheresse et de tolrances relatives de diffrentes espces au dficit hydrique
Esquive, vitement et maintien de la croissance L'esquive consiste placer le cycle cultural pendant des priodes o la demande climatique est faible et/ou pluvieuses.cest dire il consiste viter les priodes forte demande climatique. Gnralement la plus efficace consite viter lt oula demande est deux fois plus que celle du printemps. Ainsi pour garder les stomates ouverts il faut une grande quantit deau Par exemple: le bl ait une efficience de l'eau similaire celle du mas bien que ce dernier ait une efficience intrinsque suprieure cause de son mtabolisme

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Une autre stratgie efficace consiste implanter des espces ou gnotypes cycle cultural court, qui peuvent se dvelopper avant les priodes les plus stressantes. Ce raccourcissement du cycle se traduit aussi par une rduction de la photosynthse cumule et donc du rendement potentiel Inconvnients de lesquive: Dans les deux cas, l'esquive ne peut se raisonner qu' l'chelle de l'exploitation agricole et des systmes de culture.

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L'vitement consiste empcher que la plante ne soit soumise un stress hydrique important.
Gntiquement, il s'agit: des limitations de la surface foliaire e de la transpiration, d'un dveloppement favoris du systme racinaire. D'une certaine manire, la limitation du nombre de grains peut tre considre comme un mcanisme d'vitement. Culturellement, il s'agit : d'une irrigation rationne, qui consiste apporter la quantit minimale d'eau pour maintenir une production acceptable. Le maintien consiste maintenir les fonctions de la plante malgr le dficit hydrique. Elle est de nature essentiellement gntique.
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II- Biotechnologie
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Tests des caractres cellulaires

Tests des caractres lis l'intgration des fonctions physiologiques

De la slection naturelle la slection dirige Objectifs damlioration

4
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Les ressources gntiques

Biotechnologie 1. Dfinition
Ensemble des mthodes ou techniques utilisant des lments du vivant (organismes, cellules, lments subcellulaires ou molculaires) pour rechercher, produire ou modifier des lments ou organismes d'origine animale ou vgtale.

Biotechnologie 2) Culture in vitro

La culture in vitro offre la possibilit de caractriser, un niveau cellulaire, des marqueurs physiologiques associs la rsistance au sel. Cette technique prsente l'avantage d'un meilleur contrle des conditions de nutrition, tout en autorisant la manipulation d'un grand nombre de cellules, ce qui augmente la probabilit d'obtention de variantes avec les caractristiques souhaits de rsistance au sel.

Biotechnologie
Les cals cellulaires des feuilles, tiges et racines des deux espces sauvages de tomate tolrantes au sel (L. peruvianum et L. pennellii) et de l'espce cultive sensible (L. esculentum) prsentent les mmes caractristiques de rsistance NaCl que les plantes mres: les cals provenant des espces tolrantes se dveloppent mieux sur NaCl et accumulent plus de Na+ et Cl- que les cals issus de l'espce sensible.

Biotechnologie

La diffrence de sensibilit au sel de neuf varits de vigne se retrouve aussi au niveau de fragments apicaux de tige cultivs in vitro sur des milieux contenant jusqu' 100 mM NaCl. des cals d'ovaires immatures prlevs sur deux espces d'orge (Hordeum vulgare et H. jubitatum) expriment in vitro des degrs de rsistance au sel en rapport avec la rsistance relative au sel des plantes entires.

Ces diffrents exemples montrent bien que le degr de rsistance au sel, exprim in vitro, ne reflte pas toujours correctement le degr de rsistance au sel de la plante entire

Biotechnologie
Amelioration gntique
La variabilit intraspcifique pour la tolrance aux stress permet d'envisager une amlioration varitale, or les effets des stress dpendent du stade de dveloppement de la plante, des techniques culturales et des conditions climatiques et daphiques. Cette cration varitale ncessite des tests suffisamment simples et rapides pour permettre un tri grande chelle avant les essais de rendement au champ.

Biotechnologie Objectifs d'amlioration

Deux types d'objectifs sont le plus souvent recherchs: le rendement et la qualit. a- Le rendement La productivit est la capacit potentielle d'une varit produire des rendements levs quand les conditions optimales sont ralises. Les caractres quantitatifs sont sous la dpendance de plusieurs gnes dont l'hrdit ne peut s'expliquer par l'analyse mendlienne classique. La vigueur hybride est un bon exemple d'interaction entre gnes qui procure un supplment de productivit.

Biotechnologie
b- La souplesse d'adaptation Adaptation au milieu abiotique On recherchera la rsistance au froid, la scheresse, la pluie, pour attnuer les consquences agro-climatiques, ainsi que la prcocit, la tolrance au sel. Variabilit gntique et tolrance aux contraintes abiotiques: Les stress abiotiques constituent une cause majeure de perte de rendement, pour tous les types de culture, sous toutes les latitudes Les plantes mettent en oeuvre une grande varit de stratgies de tolrance et de survie. La comprhension des bases physiologiques et gntiques qui sous-tendent ces stratgies adaptatives est d'une importance majeure aussi bien pour des objectifs de biologie vgtale fondamentale, que pour une amlioration des plantes cultives qui participe la mise en place d'une agriculture durable.

Biotechnologie
Adaptation au milieu biotique La cration de varits rsistantes aux parasites et aux agents pathognes est une solution certains problmes de pathologie face auxquels aucun traitement chimique n'existe pas. La rsistance totale ou absolue, mono gnique, est de faible dure car elle est trs vite surmonte par l'agent pathogne: de nouveaux pathotypes La rsistance partielle, polygnique, repose sur de nombreux gnes mineurs qui, associs, confrent aux plantes une rsistance gnrale suffisante, non spcifique. Ce type de rsistance est plus durable, car le pathogne doit s'adapter progressivement aux diffrents gnes par mutations successives.

Biotechnologie
Variation et tolrance au stress abiotique

Les stress abiotiques constituent une cause majeure de perte de rendement, pour tous les types de culture, sous toutes les latitudes. Les plantes, organismes infods leur milieu, ont la capacit de tolrer des variations climatiques importantes, parfois extrmes en mettant en oeuvre une grande varit de stratgies de tolrance et de survie. La comprhension des bases physiologiques et gntiques qui sous-tendent ces stratgies adaptatives est d'une importance majeure aussi bien pour des objectifs de biologie vgtale fondamentale, que pour une amlioration des plantes cultives qui participe la mise en place d'une agriculture durable.

Biotechnologie
c- La valeur d'utilisation: la qualit

Les critres de qualit sont troitement en relation avec l'utilisation du produit pour la consommation humaine et l'alimentation animale, ou pour la transformation le slectionneur doit tenir compte de l'volution du got des consommateurs, des technologies de la transformation, des techniques culturales (mcanisation de plus en plus pousse du semis la rcolte) tant donne la priode qui s'coule entre le moment o les objectifs fixs sont atteints (de 6 10 ans minimum).

Biotechnologie Les ressources gntiques

Crer une varit nouvelle consiste amliorer une varit existante en transformant son gnotype. La modification d'un gnotype peut se faire : Qualitativement: Elle porte sur la nature des gnes qui contrlent les caractres recherchs et sur leur assemblage Quantitativement: Le dosage de l'information gntique tant modifi en augmentant (ou en diminuant) le nombre des chromosomes de l'espce

Biotechnologie 1) Tests des caractres cellulaires

a- Rsistance protoplasmique
La rsistance protoplasmique permet de dfinir la capacit de la cellule supporter les fortes concentrations internes de sel Le test consiste faire sjourner des coupes fines de tiges dans des solutions diffrentes concentrations de NaCl (jusqu' 1,5 M) pendant 24 h, puis dans une solution hypertonique de saccharose 1,5 2 M pendant encore 24 h. Le taux de cellules plasmolyses est ensuite dtermin aprs examen en microscopie optique Le test plasmolytique donne une bonne indication de la rsistance des plantes entires au sel.

Biotechnologie
b- Permabilit cellulaire L'augmentation de la permabilit cellulaire sous l'effet d'un stress salin ou hydrique peut tre estime par la fuite d'lectrolytes hors de la cellule. Le principe du test est d'immerger des disques foliaires basse temprature dans une solution dont le potentiel osmotique a t abaiss par du polythylneglycol. La perte d'lectrolytes est mesure par l'augmentation de la conductivit lectrique du milieu d'exsorption. Appliqu la tomate, ce test rvle curieusement une meilleure stabilit membranaire chez l'espce sensible, Lycopersicon esculentum, que chez les espces tolrantes au sel

Biotechnologie
c- Marqueurs molculaires

Synthse de protines Le sel induit des modifications qualitatives et quantitatives dans la synthse des protines, dtectables par lectrophorse sur gel de polyacrylamide

Au niveau des feuilles, le sel induit la synthse de cinq nouvelles protines de Mr 20 40 Kd et de pl 6,3 7,2.Trois d'entre elles sont spcifiques de la varit sensible et les deux autres communes aux deux varits. Au niveau des racines, six nouvelles protines sont synthtises par les deux varits.

Biotechnologie
Fragments de restriction (efficience de l'eau)
L'efficience de l'eau est une composante importante de la rsistance la salinit et la scheresse. Elle est dfinie par la quantit de biomasse produite (ou de moles de C incorpores dans la matire sche) par gramme d'eau absorbe. Il existe une variabilit considrable entre espces et varits pour ce paramtre, mais l'amlioration pour l'efficience de l'eau n'a pu tre ralise en raison de la difficult de son valuation en conditions de plein champ

Biotechnologie
Accumulation de proline
L'accumulation de proline est l'une des manifestations les plus remarquables du stress salin et hydrique Le rle de la proline dans la rsistance au stress salin n'est pas encore lucid. Il peut s'agir d'un osmoticum dont l'accumulation cytoplasmique permet de neutraliser les effets ioniques et osmotiques de l'accumulation du sel dans la vacuole. Selon un autre point de vue, l'accumulation de proline n'est pas une raction d'adaptation au stress, mais plutt le signe d'une perturbation mtabolique.

Biotechnologie
Accumulation de sucres

Les teneurs en saccharose et en amidon des racines et des feuilles semblent indicatrices du degr de rsistance des espces la salinit. Une tude comparative a t mene sur le haricot (trs sensible), le riz (sensible), le soja (moyennement rsistant) et le cotonnier (tolrant). Les analyses de sucres ont t faites sur des plantes de 21 35 jours, cultives pendant sept jours sur des solutions contenant 40 60 mM NaCl.

Biotechnologie
Les rsultats rvlent que la teneur en saccharose des feuilles: Augmente considrablement chez le haricot et plus faiblement chez le riz. Diminue lgrement chez le soja et plus fortement chez le cotonnier.

La teneur des racines en saccharose augmente en relation inverse avec la rsistance au sel: l'espce la plus sensible est celle qui prsente la plus forte accumulation racinaire de saccharose. La teneur en amidon des feuilles est augmente chez le haricot, alors qu'elle diminue chez le cotonnier

Biotechnologie

Biotechnologie
2) Tests des caractres lis l'intgration des fonctions physiologiques
a- Germination et mergence
La germination et l'mergence des plantules en conditions de stress salin sont rvlatrices d'un potentiel gntique de tolrance la salinit, au moins ce stade de dveloppement de la plante Des diffrences marques dans la capacit merger en milieu sal apparaissent l'examen de quatre varits de triticale. Mais l'tude du comportement de ces varits au champ ne rvle aucune relation claire entre la performance au stade jeune et la rsistance au sel au stade adulte

Dans le cas de l'orge, la comparaison du test d'mergence des plantules en prsence de 400 mM NaCI avec le rendement au champ des plantes donne un coefficient de corrlation de 0,12 [, ce qui met en cause la validit de ce test chez les espces dont la sensibilit au sel varie avec le stade de dveloppement

Biotechnologie
b- Croissance, dveloppement et survie

La tolrance au sel s'exprime habituellement en termes de croissance, de rendement ou de survie. Pour la plupart des plantes tudies, elle peut tre dfinie par une quation linaire simple du type YR = 100 - B (Ke - A), o Yr reprsente la croissance ou le rendement, Ke la conductivit lectrique du sol, A le seuil de conductivit lectrique partir duquel on observe une baisse de croissance, et B le pourcentage de rduction de croissance par unit d'augmentation de conductivit lectrique au-del du seuil A. Dans les tests de survie, le taux de mortalit est mesur en fonction de la concentration de sel dans le milieu. Il permet de dfinir le paramtre Dso, qui est le temps ncessaire pour observer 50 % de mortalit.

Biotechnologie
3) De la slection naturelle la slection dirige
a) volution des populations naturelles : slection naturelle

Une population gntique est constitue par l'ensemble des individus se reproduisant librement entre eux et vivant dans un mme milieu. Un quilibre s'tablit entre le milieu biologique et la population dont l'effectif est stable de gnration en gnration.

Biotechnologie
b) Hrdit non chromosomique (hrdit cytoplasmique)

Le patrimoine hrditaire d'une plante ne comprend pas uniquement les gnes de l'ADN chromosomique, mais galement les gnes de l'ADN mitochondrial et de l'ADN chloroplastique. On dsigne par hrdit non chromosomique ou hrdit cytoplasmique l'information gntique situe dans les mitochondries et les chloroplastes.

Biotechnologie
c) Exemples d'hrdit non chromosomique
Hrdit d'origine chloroplastique La rsistance certains herbicides est localise dans les chloroplastes. Hrdit d'origine mitochondriale Le cas d'hrdit cytoplasmique situe dans les mitochondries qui ouvre les perspectives les plus intressantes, est celui de la strilit mle cytoplasmique. En effet, l'existence de types mles striles (pollen avort) permet la production d'hybrides en vitant la castration manuelle.

Biotechnologie d) La pression de slection

Elle limine, bien que non totalement, les gnotypes incapables de produire des descendants adapts leur milieu ou un nouveau milieu.

Remarque: les allles muts rcessifs ou ltaux l'tat homozygote sont maintenus en proportion notable et constituent une rserve de variabilit pour les populations htrozygotes susceptibles de s'adapter un nouveau milieu.

Biotechnologie
f) L'amlioration mthodique des plantes Lapparition d'une nouvelle varit n'est plus le fruit du hasard de l'hybridation ou des mutations. L'amliorateur ne se limite plus exercer une seule pression de slection, il cre une varit mieux adapte aux besoins de l'agriculture, il dirige lvolution en orientant la pression de diversification.

Etude de cas
La tolrance la scheresse du Granium
Le Granium (Pelargonium x hortorum) est une espce ornementale qui s'adapte diverses utilisations. Vu le contexte mondiale de l'eau, l'enjeu de crer des varits rsistantes la scheresse est devenue une priorit

La culture in vitro se pratique pour assurer la multiplication clonale des gnotypes lites et se considre comme une technique alternative efficace pour la recherche de nouvelles varits qui s'utilise pour l'induction de la rsistance aux agents biotiques (bactries et virus pathognes) et abiotiques (scheresse, salinit) par hybridation somatique, variation somaclonale ou par transformation gntique.

Varits de granium tolrantes

Les techniques de rgnration de plantes partir des disques foliaires ont t largement utilises en slection, cependant il existe une grande variabilit de milieux selon le gnotype et les objectifs de la culture.

Varits de granium tolrantes

La culture des protoplastes est aussi un outil potentiel pour dvelopper des clones. Cette technologie est utilise pour la cration des varits par mutagense, fusion somatique variation soma-clonale, et transformation gntique. Pour le plargonium, le tissu msophylien des jeunes feuilles est le matriel qui donne les meilleurs rsultats

Varits de granium tolrantes

Pour tester la raction du cal issues de disques foliaires et des protoplastes la scheresse induite, diffrentes concentrations dosomoticum (Saccharose, Mannitol et Sorbitol de 0,2 jusqu' 1,2M) ont t ajoutes au milieu pour augmenter la pression osmotique du milieu afin de crer les conditions de stress. Deux gnotypes de Pelargonium x hortorum ('Deep Salmon' et 'Panach Sud') ont t utiliss dans ce travail. La varit 'Deep Salmon' a t obtenue par semis suivi de repiquage et par micro bouturage in vitro alors que la varit 'Panach Sud' a t multiplie par micro-bouturage de pousses terminales in vitro.

Varits de granium tolrantes

a- Effet du milieu sur la croissance des disques foliaires et leur callogense
Au dbut de la culture des disques foliaires, il n' y a pas eu de diffrence significative entre les 2 types d'agar et c'est seulement la fin de la 3me semaine que le Phytagel a fini par avoir un effet meilleur que le Gelrite sur la croissance des disques foliaires et sur le dveloppement du Cal (Fig. l-A). Aprs 21 jours, la croissance des disques ainsi leur callognse ont t favorises par la dilution du milieu MS de base. Le milieu dilu MS/2 a caus une formation de cal gale au double de celle mesure dans le milieu MS normal (Fig. I-B). Le taux de croissance des disques et des cals a t favoris par l'obscurit (Fig. l-C): La lumire a partiellement inhib la croissance des cals. La meilleure croissance a t ralise en prsence de la combinaison (C2) la plus riche en cytokinines (contenant Img/l de BAP et de Zatine au lieu de 0,5 mg/l chacune, Fig. I-D).

Varits de granium tolrantes

Fig.1: Effet du type d'agar (A), de la concentration du milieu (B), de la lumire (C) et de la combinaison en hormones (D) sur la croissance des disques foliaires et leur callognse

Varits de granium tolrantes

b Effet d'une scheresse induite par les agents osmoplasmolysants (sucres) sur la survie et croissance des cals

Le taux de croissance des cals (volution du poids du cal noform) chez la varit 'Deep Salmon' est inversement proportionnel la concentration en agent plasmolysant (sucres). Aprs 3 semaines, les cals ont pu rsister des concentrations infrieures O,58 M pour le Saccharose et 0,32M pour le Mannitol et Sorbitol. (Fig.2).

Varits de granium tolrantes

Fig.2: Effet des concentrations d'agents plasmolysants (Saccharose, Mannitol et Sorbitol) sur la callognse chez 'Deep Salmon' (exprimeen grammede cal produit aprs 21 jours).

Varits de granium tolrantes

c- Isolation et purification des protoplastes
Le pourcentage de viabilit et le rendement des protoplastes ont augment aprs rinages successifs Le maximum de viabilit et de rendement ainsi que le plus grand diamtre des protoplastes sont obtenus chez 'Panach' Sud' aprs deux rinages avec les valeurs respectives de 90,6%, Il.3 5.106 P/g MF et 40,75mm.
La callognse ( partir des disques foliaires) et la culture de protoplastes peuvent permettre dans un temps relativement rapide (21 jours) d'accder la mutagense in vitro chez le Pelargonium x hortorum. La technique des disques foliaires, mme s'elle ne permet pas une matrise de la fusion directe des cellules, elle est cependant considre la plus simple techniquement car elle ne fait pas appel du matriel sophistiqu.

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