Practica N14

AISLAMIENTO DE HONGOS

INTRODUCCION

a) OBSERVACIN DE LOS HONGOS Frecuentemente pueden observarse crecimiento de hongos sobre los alimentos y otros materiales. Se examinan estos sustratos con un lente simple pueden distinguirse el cuerpo vegetativo formado por una masa de filamentos ramificados e interlazados denominada Micelio. Cada filamento de micelio constituye una Hifa. En algunos hongos, el protoplasma recorre las hifas en forma interrumpida, constituyendo hifas Aceptadas o Cenociticas. Las hifas de otros hongos tienen paredes transversales llamadas septos con uno o varios poros que permiten el paso del protoplasma. A este tipo de hifas se les denomina Septadas. Los hongos se reproducen asexualmente a travs de esporas asexuales desarrolladas dentro de un esporangio, se denominan Esporangiosporas. Si las esporas se reproducen libremente en el extremo o al lado de las hifas, se denominan Conidiosporas. Existen hongos unicelulares que no forman estructuras filamentosas, estos reciben el nombre de levaduras y pueden distinguirse de las bacterias por su mayor tamao y por la presencia de un ncleo simple. Ocasionalmente puede observarse el desarrollo de estructuras conspicuas denominadas Cuerpos Fructferos los cuales portan las esporas sexuales de reproduccin. Estas estructuras se utilizan como base de la clasificacin natural de los hongos. De esta manera se Ascomicota y Basidiomycota. El micelio de los Zygomycota es aceptado excepto en las estructuras de reproduccin. Los miembros de esta divisin forman esporas asexuales de tipo esporangiosporas. Las esporas sexuales son la denominadas Zigosporas que desarrollan en ausencia de un cuerpo fructfera. definen tres divisiones: Zygomicota,

Los hongos al igual que la mayora de las bacterias son hetertrofos, ningn hongo es capaz de crecer bien en ausencia de sustancias alimenticias orgnicas. Ningn hongo posee pigmentos fotosintetizantes y ninguno es capaz de utilizar el dixido de carbono. Sin embargo, en presencia de un suministro exterior de azucares de otro alimento orgnico, muchos hongos exhiben una sorprendente capacidad de sntesis y produce una gran variedad de sustancias orgnicas complejas. La mayor parte de hongos son filamentosos. Los filamentos conocidos por hilos estn ordinariamente muy ramificados y forman colectivamente el talo vegetativo o Micelo. En los hongos superiores las hifas pueden agregarse para formar estructuras slidas complejas que en algunas especies pueden alcanzar un tamao muy considerado. Los Ascomycotas tienen micelio septado. La reproduccin asexual es muy variada involucrando procesos de fisin, gemacin, fragmentacin, formacin de Clamidiosporas o formacin de conidias, dependiendo de las especies y de las condiciones ambientales. La fisin y la gemacin son comunes en levaduras mientras que la mayora de ascomicetos forman uno o varios grupos de esporas terminales llamadas

Conidia que desarrollan a partir de hifas ramificadas llamadas Conidioforos y Esterigmas. Las esporas sexuales son llamadas Ascosporas desarrolladas dentro de sacos y protegidos en cuerpos fructferos denominados Ascoscarpos. Estas estructuras pueden ser de tres tipos: CLEISTOTECIO, PERITECIO Y APOTECIO, dependiendo de las caractersticas de cada grupo de Ascomycota. Los presentantes de los Basidiomycota incluyen especies filamentosas levaduriforme. Entre las formas filamentosas y levaduriforme. Entre las formas filamentosas puede encontrarse especies microscpicas y macroscpicas. Estas ltimas forman cuerpos fructferos visibles que portan las Basidias y estas a las Basidiosporas o esporas sexuales. Los basidiomicetos se reproducen asexualmente a travs de conidias, el micelio es septado y

mayormente constituido en porciones anastomosadas a manera de pseudotejido, que forma los Cuerpos. Fructiferos.

b) HABITAD: Los hongos ocupan una amplia variedad de ambientes. La mayora ocupa los lugares hmedos de la tierra, aunque algunos en particular las especies de Aspergillus, Penicillum pueden resistir unas condiciones de mayor sequedad. Muchos hongos son parientes activos de plantas, incluso de las ms importantes plantas cultivadas y algunas especies causan enfermedades en el hombre y en los animales domsticos.

C) REPRODUCCIN: La reproduccin en los hongos se realiza habitualmente por esporas. Los ms frecuentes son unas clulas aisladas incoloras, pero pueden poseer gruesas membranas esculpidas pueden llamar apndices o pueden estar rodeadas de una cubierta gelatinosa. La mayor parte de los hongos producen mas de una especie de esporas, cuando las condiciones son favorables al crecimiento de estas. La mayora de los hongos son muy variables, tanto en condiciones naturales como en el cultivo de laboratorio. Algunas veces la variacin esta inducida por cambios en las condiciones ambientales y el hongo regresa a la forma manual cuando revierten los cambios ambientales. Tambin ocurren al tener una base gentica de los cultivos de placas petri se pueden producir sectores que difiere del resto del cultivo con algunas caractersticas, como la forma, el color, la velocidad de crecimiento y la intensidad de esporulacin.

d) VARIACIN AMBIENTAL: Los hongos son afectados por muchas influencias ambientales, como la naturaleza y la concentracin del suministro nutritivo, la humedad, la temperatura, la luz y la concentracin de hidrogeniones. Los cambios de estos factores pueden inducirnos cambios tan grandes en la morfologa, que hace difcil el reconocimiento del hongo.

e) VARIACIN GENETICA: Los estudios recientes sobre las bases genticas de la variacin en los hongos han demostrado que son validos los mismos principios que para los organismos superiores.

MARCO TEORICO

Los hongos, organismos eucariticos, pueden ser pluricelulares (hongos miceliales o mohos) y unicelulares (hongos levaduriformes o levaduras).existen hongos ambientales que no causan enfermedad y otros que son patgenos. El estudio de h. patgenos puede ser realizado a partir de muestras de micosis superficiales ( que afectan piel, pelos y uas ) o en micosis sistmicas que afectan rganos internos como pulmones, intestinos, ganglios linfticos, etc. Los mtodos diagnsticos en el laboratorio varan de acuerdo a la localizacin del cuadro clnico y en consideracin del tipo o especie de hongo probable causante de la enfermedad.

PROCESO EXPERIMENTAL

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN Aislamiento: Examen directo: debe hacerse una suspensin del producto presuntamente patolgico con unas gotas de hidrxido de potasio (KOH) al 30%. La tcnica ms empleada es la de la tinta china, sobretodo en el lquido cefalorraqudeo y suero. Se hace sobretodo cuando hay sospecha de criptococos. Otra tcnica sera la tincin de gram, donde se observan clulas gram positivas grandes, pero los colorantes que ms se utilizan para los hongos sen el azul de metilenos y el giemsa. Tambin se puede utilizar blanco calcoflor, se ve con microscopio de fluorescencia y se observan de color verde fluorescente. Tambin se pueden observar a partir de cortes histolgicos que se utilizan sobretodo para hongos oportunistas. Cultivo: en general son pocos exigentes. Crecen bien al igual que las bacterias en medios de cultivo artificiales, es relativamente fcil aislarlos pero no es fcil identificarlos. El medio de cultivo por excelencia es el Sabouraud (no es el mejor para todos los hongos pero se utiliza para todos). Se emplea a pH = 56 porque dificulta el crecimiento bacteriano, para esto tambin se pueden aadir antibiticos e incluso antimicticos para hacerlos selectivos. Casi todas las descripciones sobre hongos para la identificacin y diagnstico de hongos estn basadas en el aspecto, caracterstico que resulta de este medio. La mayor parte de los medios empleados en bacteriologa tambin crecen hongos. Se cultivan en aerobiosis y la temperatura idnea es de 25-30C para los que causan infecciones superficiales; y de 35C para los que causan infecciones sistmicas. Identificacin: Deteccin de hongos

~ Aspecto macroscpico: aspecto que presentan las colonias en el medio. Se utiliza el anverso y el reverso de la placa. ~ Aspecto microscpico Deteccin de levaduras: ~ Aspecto macroscpico ~ Aspecto microscpico ~ Morfologa de las colonias cuando crecen en medios pobres ~ Prueba bioqumica: asimilacin y fermentacin de carbohidratos. Esta consiste en poner la levadura en contacto, solamente con una fuente de carbono o nitrgeno y ver si se nutre de ella o no. Para ambos se utiliza la serologa. Tiene un uso pobre en micologa porque la respuesta humoral es pobre y la serologa lo que usa es la deteccin de antgenos-anticuerpos. Deteccin de antgenos fngicos, est en desarrollo y con un buen futuro.

CONCLUSIONES

- El hongo se clasific dentro de los deuteromycetos por tener una reproduccin asexual llevada acabo por intermedio de la esporulacin (conidios). - El estudio de los hongos, tiene una gran importancia; ya que desempean un papel en la descomposicin de materia vegetal de origen terrestre que cae al agua, influyendo de manera decisiva en el transporte de materiales entre el medio terrestre y el acutico. - El estudio de los hongos en el aire ha sido muy importante para la industria debido al papel que desempean. - Se pudo establecer que el aire no tiene una microflora definida, una de las razones es que el aire es portador de polvo, material particulado, etctera, los cuales pueden estar cargados de microbios. - Se utilizo el mtodo de sedimentacin, ya que permite que por la fuerza de gravedad los microorganismos queden adheridos a la caja de petri con Agar nutritivo.

CUESTIONARIO

1,.Dibujar las estructuras de 5 hongos de diferentes genero .

2.- Describir otra tcnica de aislamiento de hongos. La tcnica de dilucin es tambin til para el aislamiento de los hongos en los productos agrcolas, pero a veces conviene sembrar el inoculo tomado directamente de la superficie de material en estudio Para el aislamiento de levaduras osmoflicas son muy tiles los medios con un 30 - 50% de glucosay 30% de agar. Luego, las especies aisladas, en su mayora, crecen sin dificultad en medios con concentraciones normales de glucosa. En sentido general se prefieren medios de cultivos slidos ya que posibilitan la observacin de las colonias (caracteres macroscpicos). Sin embargo, para el estudio de hongos acuticos el aislamiento debe iniciarse en medios lquidos para lograr una aproximacin a su hbitat

3.- Consultar en que consiste el medio de Micosel y cual es su utilidad USO Medio selectivo para aislamiento de especies de hongos patgenos de lento crecimiento a partir de diversas muestras que puedan tener alto contenido de flora bacteriana La peptona y la dextrosa proporcionan la fuente de nutrientes utilizadas para el crecimiento de los hongos. La cicloheximida inhibe a hongos saprfitos, el cloranfenicol de amplio espectro inhibe el crecimiento de una gran variedad de bacterias. Se pueden sembrar medios inclinados en tubo o en cajas de Petri estriles por duplicado, incubar a 25 y a 35C. Los dermatofitos y la mayor parte de los hongos causantes de las micosis sistmicas crecen rpidamente, la mayora de los hongos saprfitos y bacterias son inhibidos.

4.-Consultar la tcnica para la obtencin de una colonia gigante de hongo Observacin macroscpica Colonia Gigante Sembrar con ansa aguja en el centro de botellas utilizadas en los hemocultivos o tubos de ensayos con el medio dispuesto en pico de flauta, tambin se

pueden usar cajas de Petri, que contengan un sustrato de por lo menos 3-4 mm de espesor. Incubar. Describir las caracteres macroscpicos de las colonias (dimetro, elevacin, aspecto ptico, textura, bordes, color, etc.), haciendo las observaciones a los 3 4 das y luego cada semana, durante un mes. 5.-Mencionar la importancia de los hongos en Microbiologa Ambiental Importancia de los Hongos: -Se utilizan en la elaboracin de productos alimenticios como el pan, vino, cerveza y queso. -Son una valiosa fuente de alimentacin para el ser humano como los championes, las setas, las frutas. -Algunas especies se utilizan en la industria para producir cidos orgnicos, como el ctrico lctico o galico. -Algunos son patgenos, para plantas, animales, y hombre (pi de atleta, tia y candidiasis)

ANEXOS