Sunteți pe pagina 1din 8

() ..

~,Introducere

n studiul microbiologiei medicale

1. Ce este microbiologia? 2. Ce sunt microorganismele i care sunt principalele categorii de microorganisme cunoscute? 3. Obiectivele i scopurile microbiologiei fundamentale i ale microbiologiei aplicative 4. Obiectul i scopul microbiologiei medicale. 5. Repere istorice in microbiologia medicala. Principalele etape. 6. Metode utilizate n bacteriologia i micologia medical.

1. Ce este miorobiologia? Microbiologia este o ramur a biologiei care se ocup cu studiul microorganismelor i derivatelor lor, al geneticii, proprietilor biochimice i metabolice ale acestora, al sensibilitii lor la antimicrobiene, precum i al efectelor asupra strii de sntate a omului i inteidciunilor lor cu ecosistemul uman. 2. Ce sunt microorganismele i care sunt principalele categorii de micro organisme cunoscute? . Microorganismele sunt fiine de dimensiuni mici, care nu pot fi observate la nivel individual dect cu ajutorul unor instrumente optice. Principalele categorii de micro organisme cunoscute sunt: Bacteriile Virusurile Fungii microscopici Paraziii unicelulari Prionii: particule infectante care nu dein informaie genetic ntruct virusurile i paraziii de interes medical fac obiectul unor discipline separate, manualul de fa trateaz exclusiv aspectele legate de principalele genuri i specii de bacterii i fungi de interes medical. 3. Obiectivele i scopurile microbiologiei fundamentale i ale microbiologiei aplicative Exist dou tipuri de abordri tiinifice, care urmresc obiective 1 scopuri diferite. Tipul de abordare care se adreseaz acumulrii de noi cunotine i nelegerii mecanismelor care stau la baza fenomenelor naturale i a modalitilor multiple de interconectare a acestor mecanisme contribuie la constituirea fundamentului pe care se dezvolt toate celelalte activiti tiinifice. De aici deriv denumirea de tiin fundamental.

~ .

".

Al doilea tip de abordare tiinific urmrete rezolvarea unor probleme practice, pornind de la' cunotinele acumulate de tiina fundamental. Acest tip de abordare constituie demersul tiinific aplicativ. a. Microbiologia fundamental - tendine actuale Microbiologia fundamental a acumulat cunotine a cror cantitate i profunzime a evoluat exploziv, att n domeniul fiziologiei microorganismelor ct i, mai ales, n domeniul mecanismelor moleculare i corelaiilor ntre informaia genetic i expresia genelor la nivel fenotipic. Aceste aspecte au ridicat provocri serioase n faa microbiologilor, n ceea ce privete stocarea, prelucrarea i interpretarea datelor. Problemele' de acest tip i gsesc rezolvarea n domenii de grani, n care se poate manifesta interaciunea ntre microbiologi i oameni de tiint de alte specialiti, n special matematicieni, informaticieni, fizicieni, pentru a dezvolta mpreun modele ce permit studiul aprofundat al rolului microorganismelor la nivelul ecosistemelor, inclusiv prin simulare pe calculator. S-a conturat astfel o abordare complex, recunoscut sub denumirea de "microbiologia sistemelor", care-i propune s pun n eviden efectele pe care le are asupra microorganismelor interaciunea ntre gene, proteine, alte macromolecule, micromolecule, organite i mediu (Systems microbiology: Beyond microbial genomics A report from the American Academy of Microbiology - 2004, American Society of Microbiology - http://www.asmusa.org). Este clar astzi c suntem contemporanii unei noi etape n biologie, care a fost calificat drept "era postgenomic", n care studiul genomului este corelat cu studiul proteomului i al interaciunilor acestora cu factorii de mediu. b. Microbiologia aplicativ Avnd la ndemna tot mai multe cunotine i explicaii privind interrelaiile microorganismelor la nivelul ecosistemelor, microbiologia aplicativ este capabil astzi s abordeze tot mai multe probleme practice n domenii cum sunt: Microbiologia medical (om, animale), microbiologia plantelor Microbiologia alimentelor Microbiologia mediului: Microbiologia apei - tratarea apelor uzate; indicatori sanitari pentru apa potabil Microbiologia solului Microbiologie aerului, Microbiologia materialelor (lemn, hrtie, materiale de construcie, combustibili etc.) Microbiologie industrial (biotehnologie); Industria alimentar (conserve, mezeluri, brnzeturi) i a buturilor Industria farmaceutic: producerea antibioticelor majoritatea sunt produse de fungi; producerea vaccinurilor, a probioticelor etc.

Inginerie genetic - gene ale unor microorganisme cu multiplicare rapid utilizate pentru a sintetiza proteine umane si/sau alte molecule cu rol terapeutic (ex. vaccinuri recombinante) Ca urmare a abordrii sistemice n microbiologie, se contureaz tot mai pregnant faptul c delimitarea dintre ramurile microbiologiei aplicative devine din ce n ce mai flexibil. Studiul biodiversitii microbiene din diverse biosisteme contribuie la clarificarea multor aspecte cu impact direct asupra strii de sntate. A devenit posibil totodat acumularea de cunotine i intervenia uman n domenii n care sunt implicate microorganismele i care au de asemenea legtur direct cu sntatea uman, cum sunt: biodegradarea, bioregenerarea, utilizarea bacteriilor ca surs de bioenergie etc. 4. Obiectul i -scopurile microbiologiei medicale: Microbiologia medical uman se refer la studiul bacteriilor, virusurilor, fungilor i paraziilor cu potenial patogen pentru om, al interrelaiilor acestora cu organismul i cu ecosistemul uman. Bolile comune omului i animalelor se numesc zoonoze. Microbiologia medical uman urmrete urmtoarele scopuri sau obiective: a. Controlul infeciilor sau complexul aciunilor direcionate pentru: - recunoaterea bolilor, prin aplicarea metodelor de investigare proprii acestei tiine, care se perfecioneaz permanent, utiliznd tezaurul de cunotine fundamentale despre microorganisme, factori de patogenitate i patogeneza bolilor infecioase - prevenirea rspndirii infeciilor prin evidenierea i comunicarea ctre factorii de decizie din sistemele de sntate public a markerilor microbiologiei de interes epidemiologic, n scopul detectrii surselor, cilor i modalitilor de transmitere a infeciilor i adoptrii msurilor adecvate Markerii sau caracterele distinctive, care fac posibil diferenierea microorganismelor de aceeai specie implicate n infecii aprute la gazde diferite, n momente i n locuri diferite, pot fi: markeri fenotipici, adic exprimai de celula bacterian la nivel structural, metabolic, ca rezistene la antibiotice etc. i/sau markeri genetici moleculari, constnd in gene sau alte structuri specifice ale materialului genetic microbian. b. Orientarea i evaluarea eficienei terapiei cu antibiotice, vaccinuri, alte biopreparate, prin utilizarea diferitelor metode de testare a sensibilitii -la_antibiotice a microorganismelor, de evaluare a proteciei prin mecanisme imunologice fa de anumite micro organisme etc. c. Recunoaterea utilizrii microorganismelor ca arme biologice, respectiv a actelor de bioterorism, n condiiile n care evenimentele internaionale din ultima decad au artat c, din pcate, n ciuda acumulrii a tot mai multe cunotine, omenirea nu beneficiaz nc de maturitatea necesar evitrii conflictelor. Ramura microbiologiei medicale care se ocup de aceste aspecte este microbiologia medico-legal,

5. Repereistorice in microbiologia medicala. Principalele etape. Dei avem dovezi asupra existenei unor concepte intuitive despre natura exterioar i uneori animat a unora dintre maladiile care au decimat populaiile umane (ex. miasme, animalicule etc.), microbiologia bazat pe dovezi ale existenei microorganismelor s-a dezvoltat abia la sfritul secolului al XIX-lea. Epoca marilor descoperiri n microbiologia medical a fost precedat de o serie de precursori. Astfel, Hooke descrie n 1665, utiliznd o lup puternic, nite cmrue n structura feliilor subiri de lemn de pluta, crora le d denumirea de '~celule", din latinescul celula = cmru. Teoria celulei, ca Unitatea oricrei fiine vii este lansat ns abia n 1839, de ctre Schwann. r n 1674, Van Leeuwenhoek utilizeaz primul microscop, cu ajutorul cruia observ formaiuni pe care astzi le atribuim microorganismului Bacillus anthracis. n sfrit, CasimirJoseph Davaine observ n 1850 bastonae n sngele unui cadavru de oaie cu antrax i retransmite boala prin inoculare, fiind n acest fel precursorul lui Koch. Prima intervenie profilactic aparine lui Edward Jenner, care efectueaz n 1796 prima vaccinare reuit, cu virusul variolei, rar a cunoate ns natura agentului etiologie implicat. Succesul n mediile de specialitate i, mai ales succesul public a fost impresionant. Era vorba despre o boal infecioas cu mortalitate de 30-40%, astzi complet eradicat, ca urmare a interveniei energice a Organizaiei Mondiale a Sntii, precum i datorit faptului c omul este singura gazd cunoscut pna n prezent. Ultimul caz a aprut natural n Africa n 1976. John Snow este autorul primului studiu epidemiologic, n 1853. Cu o intuiie i o metod de lucru magistrale, el reuete s dovedeasc natura contagioas a holerei, nainte de a se cunoate agentul etiologie al acesteia. Secretul a constat ntr-o minuioas reprezentare grafic pe harta Londrei a aglomerrilor de cazuri de holer, care i-a dat posibilitatea s incrimineze apa de but de la cateva fntni de pe Broad Street , ca factor implicat n transmiterea bolii. Epoca de aur a microbiologiei, a marilor descoperiri, care s-a derulat ntre 18611900, este marcat de cateva personaliti proeminente ale microbiologiei. Louis Pasteur poate fi considerat printele microbiologiei medicale, dei formaia sa iniial a fost cea de chimist. n 1861, el a demontat cu argumente experimentale convingtoare teoria "generatiei spontanee", care susinea c microorganismele iau natere spontan n medii care le sunt propice. Este vorba despre experimentul celebru cu flacoane de sticl cu "gt de lebd", cau ajutorul crora a putut demonstra c mediul lichid dintr-un flacon nu se tulbur dect n cazul n care se creaz condiiile ca microorganismele nsmnate la gura flaconului s ajung n contact cu mediul lichid din partea inferioar a flaconului. Alte contribuii semnificative ale lui Pasteur au fost: procedeul de pasteurizare pentru prevenirea ncririi vinului, vaccinul contra antraxului (1881), vaccinul preventiv mpotriva rabiei (turbrii) etc. Louis Pasteur a creat coala de microbiologie francez, care a constituit iniial reperul principal al colilor de microbiologie din ntrega lume.

2. Joseph Lord Lister, distins chirurg, este primul care aplic antiseptizarea cu formol a ncperilor i materialelor din spital, pentru prevenirea infeciilor de plaga n 1865, fiind cunoscut ca tatl chirurgiei aseptice. 3. Robert Koch a fost printele microbiologiei germane i una dintre figurile marcante ale microbiologiei mondiale. Este primul care a obinut bacterii n cultur pur (Bacillus antharcis) i descoperitorul Mycobacterium tuberculosis, denumit de aceea i "bacilul Koch". Campion al gndirii practice riguros organizate, este cel care a formulat criteriile de implicare a unui microorganism n etiologia unei infecii, cunoscute sub numele de "postulatele lui Koch": 1. Microorganismul trebuie s fie prezent n cantitate mare la toate animalele care sufer de boala (infecioas), dar nu trebuie s fie prezent la animalele santoase. 2. Microorganismul trebuie s poat fi izolat de la animalele bolnave i s.fie crescut n cultur pur. 3. Microorganismul cultivat trebuie s cauzeze boala cnd este introdus ntr-un organism sntos. 4. Microorganismuf ltrebuie s fie reizolat de la animalele inoculate experimental, care s-au mbolnvit, i s fie identice cu agentul cauzal specific iniial. Totui, Koch nsui a acceptat amendamente la regulile postulate de el, cum sunt: - amendamente la postulatul Nr. 1: existent purttori sntoi asimptomatici (ex. holera, febra tifoid); ulterior a fost pus n eviden existena purttorilor cu infecie asimptomatic sau subclinic, mai ales n cazul virusurilor (polio, herpes simplex, HIV, hepatita C etc.) - amendamente la postulatul Nr.2: nu toate microorganismele _sau entitile infecioase pot fi cultivate; de exemplu prionii, unele bacterii (ex. Treponema pallidum) etc. nu pot fi cultivate pe medii de cultur - amendamente la postulatul Nr.3: n cazul anumitor bacterii, nu toate organismele expuse la acestea manifest infecia: ex. Mycobacterium tuberculosis, Vibrio cholerae etc.; explicaia poate fi buna funcionare a sistemului imunitar, imunitatea datorat unei expuneri anterioare sau vaccinrii sau unor factori genetici care confer imunitate, cum este de exemplu rezistena la Plasmodium malariae a pacienilor cu cel puin o alel pentru siclemie (hematii n form de secer). La sfritul secolului XX, au fost formulate postulatele lui Koch "moleculare", pentru identificarea genelor de virulen (Stanley Falcow -1988): 1. Fenotipul sau caracterul care este investi gat trebuie sa fie asociat cu tulpini patogene aparinnd unei specii bacteriene; de asemenea, gena respectiv trebuie sa fie prezent la toate tulpinile patogene, dar s nu fie prezent la tulpinile nepatogene.

2. Inactivarea specific a genei(lor) asociate cu caracterul de virulent suspectat trebuie 's aib ca rezultat o pierdere msurabil a patogenitii sau virulenei. 3. Reversia sau nlocuirea alelic a genei cu mutaie trebuie sa aib ca rezultat restaurarea patogenitii 4. Gena care codific caracterul de virulen trebuie s se exprime n cursul infeciei. 5. Imunitatea trebuie s fie protectoare. Alte nume de referin pentru introducerea unor metode de observaie n microbiologia medical sunt: Hans Christian Gram - descoperitorul metodei de colorare diferenial a bacteriilor (1884), Ziehl i Neelsen - autorii metodei de colorare a mycobacteriilor (1892).' n 1888, Roux i Yersin descriu toxina difterica. Ilja Metschnikovu l ScS - 1916) este considerat printele imunologiei, fiind primul care a descris fagocitoza i teoria imunitatii celulare. Cercetrile sale marcheaz etapa fiziologiei, n dezvoltarea microbiologiei medicale. Printre dicipolii marilor maetrii, civa s-au remarcat prin descoperirea unor aplicaii cu mare impact in diagnosticul i/sau n tratamentul bolilor infecioase. Astfel, Twort si d'Herelle descoper bacteriofagii (1915 - 1917), Albert Coons - tehnica cu anticorpi fluorescenti (1941), Salk i Sabin sunt autorii vaccinurilor mpotriva poliomielitei (Salk - vaccinul inactivat n 1953; Sabin - vaccinul viu atenuat pentru administrare oral n 1956). Microbiologia modern i-a fcut intrarea n scen odat cu Fleming, care n 1927 descoper penicilina. Civa ani mai trziu, cercettorul rus Ruska pune la punct primal microscop electronic, iar n 1952, Watson i Crick descriu structura dublu catenar a ADN. Utilizarea metodelor de investigare moleculare bazate pe studiul ADN explodeaz odat cu descoperirea metodei de amplificare n lan (PCR), de ctre Karry Mullis, n 1983. Primal genom bacterian complet secveniat a fost cel al bacteriei Haemophilus influenzae, n 1995. <,' Ultimul deceniu a marcat trecerea la era postgenomic, n care studiul proteinelor i interaciunilor ntre gene, proteine i factorii de mediu contribuie la descifrarea din perspectiv sistemic a relaiilor complexe care se stabilesc ntre microorganime i organismul uman. Dintre corifeii colii de microbiologie romneti, i amintim pe: Prof. Ioan Cantacuzino, Prof. Victor Babe, Prof. Ionescu Mihieti, Prof. Mihai Ciuc, Prof. Nicolae Nestorescu, Prof. Marcella Popovici, Prof. Lidia i Ioan Mesrobeanu, Prof. Andrei-Aubert Combiescu, Prof. Mihai Zamfirescu, Prof. Marian Negu. Am trecut n revist, sumar, momentele cele mai importante ale evoluiei microbiologiei. Avntul pe care l-a luat producerea de antibiotice n a doua jumtate a secolului XX l-a fcut pe medicul ef al SUA din acea vreme s proclame prematur

catigarea btliei cu microorganismele i sfritul rzboiului. i totui, de ce suntem nc ntr-un proces activ de cercetare i cunoatere a fenomenului reprezentat de bolile infecioase i a agenilor lor cauzali? Trebuie tiut c imediat dup introducerea primelor antibiotice n practica medical au nceput s fie selectate i primele tulpini rezistente. Fenomenul rezistenei la antibiotice a evoluat progresiv, pentru ca ultimul deceniu al secolului XX s marcheze momentul n care rezistena la antibioticele n uz atinge nivele ngrijortoare, mai ales n condiiile n care numrul noilor antibiotice aflate n faz de studiu clinic este foarte mic. Rezistena la antibiotice este unul dintre motivele pentru care nu este posibil eradicarea patologiei infecioase. La acesta se adaug: schimbri climatice, demografice, tehnologice; dezvoltarea turismului, comerului, care presupun mobilitatea crescut, urmat de creterea riscului transmiterii transfrontaliere a microorganismelor rezistente, avnd n vedere c microorganismele nu recunosc granitele administrative. n plus, o serie de alte ameninri, cum sunt cele provenite din utilizarea inadecvat a miroorganismelor, cum sunt bioterorismul, rspndirea microorganismelor modificate genetic etc., solicit activiti i programe de prevenire a efectelor negative asupra comunitilor umane.
t

6. Metode utilizate in bacteriologia i micologia medicala: a. Metode directe - punerea n eviden a microorganismului sau componentelor sale i/sau caracterizarea acestuia pornind de la coloniile obinute pe medii de cultur . . microscopie cultivarea microorganimelor pe medii de cultur obinerea coloniilor izolate metode de identificarea biochimic /sau serologic a microorganismelor testarea sensibilitii la antibiotice metode moleculare bazate pe studiul acizilor nucleici: detectarea microorganismelor direct n prelevatul clinic, evidenierea markerilor genetici de virulen i/sau de rezisten la antibiotice etc. b. Metode indirecte - punerea n eviden a reaciei organismului fat de microorganism sau componentele sale: anticorpi specifici evideniai in vitro (reacii ntre antigene bacteriene i serul pacientului) sau in vivo (ex. IDR pentru diagnosticul scarlatinei sau al difteriei), sau dovezi ale imunitii celulare in vivo sau in vitro (ex. IDR la PPD, evidenierea imunitii celulare prin metode in vitro).

Bibliografie: Steven W. Popper - Economic Approaches to Measuring the Performance and Benefits of Fundamental Science - RAND Domestic Research Division Final Report - 1995 http://health.rand.orglpubs/monograph reports/2006/MR 708.0.pdf Tom McMeekin et al - The future of predictive microbiology: Strategic research, innovative applications and great expectations - Int. J. Food Microbiology - 2008, 28, 1, 2-9

Systems microbiology: Beyond microbial genomics - A report from the American Academy of' Microbiology - 2004, American Society of Microbiology http://www.asmusa.org Falkow S (1988). "Molecular Koch's postulates applied to microbial pathogenicity." Rev Infect Dis lO(suppI2):S274-S276. D. Buiuc, M. Negut - Tratat de microbiologie medicala, Editia a III-a, Editura medicala, Bucuresti,2009

",'