1. Escherichiozele. Clasificarea E.coli dupa structura antigenica. Habitatul, rolul in fiziologia omului. Factorii de patogenitate.

Fenotipurile diareigene, bacteriemice, uropatogene. Infectiile intestinale cauzate de categoriile fenotipurilor diareigene. Infectiile extraintestinale cauzate de E.coli. Diagnosticul microbiologic al colienteritelor la copii. Prelevate. Izolarea, acumularea, identificarea culturii pure (biochimica, serologica), diagnosticul serologic. FAMILIA ENTEROBACTERIACEAE. Peste 30 genuri cu 130 specii. Habitat: intestinul omului, animalelor . Martor al contaminrii fecale a mediului. Majoritatea constituie flora normal (comensal) intestinal Enterobacterii patogene: genurile Shigella, Salmonella, Yersinia, unele variante ale speciei Escherichia coli; Enterobacterii condiionat patogene: genurile Citrobacter, Enterobacter, Hafnia, Klebsiella, Morganella, Proteus, Providencia, Serratia, Edwardsiella, etc. Teste-cheie ale familiei: Bacterii (bastonae) gramnegative; Nesporogene; Mobile-peritriche/imobile; Facultativ-anaerobe; Fermenteaz glucoza (A, AG); Catalaza-pozitive; Oxidaza-negative; Reduc nitraii n nitrii Teste primare (identificarea genurilor): Utilizarea citratului de Na (mediul Simmons); Utilizarea malonatului de Na; Hidroliza ureei (testul Preus); Decarboxilarea lizinei (LDC); Dezaminarea fenilalaninei (FAD); Producere de H2S n mediul multitest (ex.: Kligler); Fermentarea glucozei pn la acizi (testul MR); Fermentarea glucozei pn la acetoin (testul VP); Mobilitatea (n geloz semilichid) Teste secundare (identificarea speciilor/variantelor): Teste biochimice (fermentarea glucidelor, decarboxilarea aminoacizilor (arginin, ornitin), producerea indolului, etc); Fagoidentificarea i lizotipia; Colicinogenotipia; Seroidentificarea ; Antibiograma Caractere morfologice: bastonae G-, 1 - 6 m x 0,3 - 1 m, mobile peritriche (Klebsiella, Yersinia pestis, Shigella imobile), nesporogene, formeaz microcapsule (Klebsiella capsulat), posed fimbrii. Caractere de cultur: Anaerobe facultativ; Temperatura optim 37 grade C (limite 18 45 grade) ; Nepretenioase nutritiv; Colonii S, apar dup 18-24 h de incubare, 2 - 3 mm (dup repicri pot apare colonii R), Klebsiella mucoide, Proteus invadeaz suprafaa mediului MEDII DE CULTUR De transport: glicerin 30%, soluie salin 3%, soluie tampon-fosfat De mbogire a bacteriilor patogene: Kauffmann, Muller, bulion selenit, etc Diferenial-diagnostice: I. De izolare ENDO, LEVIN, PLOSKIREV Componena: baz nutritiv, lactoz, indicator Coloniile L+ : colorate Coloniile L- : incolore (frecvent flora patogen) Mediul Wilson-Blair cu sulfit de Bi (Salmonella reduce sulfitul n sulfur de Bi colonii negre pe mediul verde) II. De acumulare i identificare preliminar (medii multitest) Russel, Kligler (glucoz, lactoz, sruri de Fe) Olkeniki (glucoz, lactoz, zaharoz, uree, sruri de Fe) III. De identificare final (medii cu citrat, malonat, irul Hiss, medii cu aminoacizi, gelatina, etc) CARACTERE ANTIGENICE Ag O (R), de perete, LPZ, termostabil i rezistent la alcool, sensibil la formol, specificitate de gen, specie, grup Ag H, flagelar, proteic, termolabil i inactivat de alcool, rezistent la formol, specificitate de tip (variant) Ag K, superficial, capsular, termovariabil, specificitate de specie, tip (mascheaz Ag O, inaglutinabilitate cu seruri anti-O). Variante L, A, B la E.coli, Vi la Salmonella i Citrobacter Ag F, fimbrial, termolabil, nespecific ECA antigen comun fam. Enterobacteriaceae (interes taxonomic) Ag Kunin GENUL ESCHERICHIA Genul Escherichia Spp.: E.coli, E.blattae, E.fergusonii, E.vulneris, E.hermanii Habitat: intestinul omului i animalelor (80% din flora aerob intestinal), 10 7-109 bacterii/gram fecale. Contamineaz solul i apele de suprafa. Prezena E.coli - indicator de contaminare fecal. Rolul E.coli n fiziologia uman 1. Manifest activitate antagonist fa de alte bacterii, inclusiv cele patogene. 2. Stimuleaz dezvoltarea esutului limfoid prin intermediul Ag sale 3. Particip la procesele de digestie, inclusiv n metabolismul colesterolului i acizilor biliari 4. Asigur organismul cu vitamine, sintetiznd vitamine B, K, acid nicotinic, acid folic, etc. CARACTERE MORFOBIOLOGICE E.coli enterobacterie tipic, mobil, lactoza+, fermenteaz glucidele cu formare de AG (teste primare: MR +, mobilitate +, celelalte sunt negative) Structura antigenic: Ag O 180 tipuri (O1, O2, O3......O180); Ag H 60 tipuri (H1, H2, etc); Ag K 100 tipuri Din combinaii rezult serovariante: ex. O55:H2:K1 Factori de patogenitate 1. Capsula (antifagocitar, Ag K1 camuflaj imunologic datorit epitopilor comuni cu polisialozilglicopeptide cerebrale la nou-nscui) 2. Proteine din ME i LPZ (anti-complement, protecie de factorii bactericizi ai sngelui, adeziune, invazie) 3. Fimbrii (adeziune) 4. Toxine (endotoxina, enterotoxine termostabile - ST i termolabile - LT, citotoxine Shiga-like toxine (SLT-1, SLT-2) 5. Hemolizina 6. Siderofori (sisteme de captare a Fe) ROLUL E. COLI N PATOLOGIA UMAN FENOTIPURI DIAREIGENE Tulpini enteropatogene: EPEC (O26, O55, O111, O125, O142, etc). Responsabile de gastro-enterite infantile (infecii salmoneliforme). Ader la mucoasa intestinului subire printr-o protein din membrana extern fr a penetra intracelular. Tulpini enteroinvazive: EIEC (O28, O124, O143, etc). Responsabile de sindrom dizenteric cu invazia mucoasei colonului, penetrare intracelular, ulceraii. Factori de patogenitate: adezine, citotoxine. Tulpini enterotoxigene: ETEC (O6, O8, O20, O25, O115, etc). Responsabile de diareea cltorului, sindrom holeriform. Adeziunea la enterocitele intestinului subire este asigurat de pili (CFA colonization factor antigen sau CS coli surface factors). Elaboreaz toxine enterotoxine ST i/sau LT. Activeaz adenilat- respectiv guanilat ciclaza enterocitelor, provocnd o secreie sporit a ionilor de Cl - i inhibiia absorbiei ionilor de Na+, antrennd o pierdere hidric important. Tulpini enterohemoragice: EHEC (O157:H7; O26, O111). Responsabile de colite hemoragice cu sindrom uremic-hemolitic (anemie hemolitic+trombocitopenie+insuficien renal). Posed factori de adeziune i produc citotoxine capabile de difuzie n organism (Shiga-like toxine SLT 1 i SLT 2). Produc frecvent hemolizin. Tulpini enteroagregative: EAggEC (O111:H12). Posed adezine, hemolizine i SLT. Provoac diaree persistent (peste 14 zile) la copii. Ader agregativ la suprafaa culturilor de celule. Tulpini enteroadezive: EAEC. Ader difuz la celulele intestinale i culturile de celule. Provoac sindroame diareice. FENOTIPURI UROPATOGENE (O1, O2,O4,O6). Posed afinitate pentru mucoasa uro-genital (fimbrii tipul P sau 1, Ag O i K specifice, hemolizine, etc). FENOTIPURI BACTERIEMICE Alte forme clinice provocate de E.coli: oc endotoxinic; Meningite la nou-nscui (preponderent tulpini cu Ag K1); Infecii ale plgilor (frecvent de origine nozocomial); Colecistite, peritonite, salpingite, etc.; Toxiinfecii alimentare DIAGNOSTIC DE LABORATOR Prelevate n funcie de forma clinic: materii fecale, urin, snge, LCR, puroi, etc Metode de diagnostic. Examenul microscopic de orientare (frotiu Gram n infecii extra-intestinale, RIF); Examenul bacteriologic (de baz, cantitativ); Examenul serologic (retrospectiv, de confirmare); RA cu autotulpini (titru diagnostic 1:200) Tratamentul: Antibiotice (conform antibiogramei); Eubiotice (colibacterin, lactobacterin, bifidumbacterin, bificol, etc). Profilaxia escherichiozelor - nespecific 2. Dizenteria. Clasificarea agentilor patogeni (familie, gen, spp.). Factorii de patogenitate ai shigelelor. Patogeneza dizenteriei, simptomele clinice. Diagnosticul microbiologic. Prelevatele. Microscopia (RIF), izolarea, acumularea, identificarea culturii pure (biochimica, serologica), serodiagnosticul. Profilaxia si tratamentul specific al dizenteriei. Shigelele strict umane. Cauzeaz infecii intestinale - igeloze, cea mai grav formdizenteria bacterian. Clasificarea genului Shigella (biochimic i antigenic): A Shigella dysenteriae (12 s/v, 12 b/v) Manitol B Shigella flexneri (6 s/v, 14 ss/v, 23 b/v) C Shigella boydii (18 s/v)

D Shigella sonnei (1 s/v, 7 b/v) Subgrupele B, C, D manitol + Enterobacteriaceea tipice, imobile, lactozo-negative, scindeaz glucoza pana la acizi (testul MR+), celelalte teste primare sunt negative. Factori de patogenitate: 1. Factori de adeziune la mucoasa colonului (fimbrii, LPZ) 2. Microcapsula (antifagocitar) 3. Factori de penetrare i multiplicare intracelular 4. Toxine: Shigatoxina - neurotoxic, enterotoxic, citotoxic elaborat de S.dysenteriae 1 Enterotoxine (Shiga-like toxine (SLT), verotoxine) Endotoxina Structura antigenic: Ag O i K cu specificitate de gen, specie, subspecie, variant Rezistena n mediul extern: S.dysenteriae - foarte sensibil (1-2 ore); S.flexneri persist 1-3 sptmni n ap, 2 luni n lactate; S.sonnei persist i se multiplic n lactate Sursa de infecie: bolnav, reconvalescent, purttor Transmiterea fecal-oral: Contact direct (mini murdare); Alimentar (alimente, ap); Doza infectant: 10102 bacterii; Bacteriile se multiplic n intestin, colonizeaz epiteliul colonului i macrofagele din foliculii limfoizi, penetreaz intracelular (prin macropinocitoz dirijat). Bacteriile se propag intra- i entercelular graie polimerizrii actinei la un pol al celulei (caracter determinat plasmidic). Urmeaz multiplicarea local intracelular cu invazia celulelor vecine provocnd moartea lor. Aceasta duce la inflamaie fibrinoas intens a colonului, micro-abcese i ulceraii, cu apariia mucusului, puroiului i sngelui n materiile fecale. Perioada de incubaie 2 - 4 zile Semne clinice febr, dureri abdominale, tenesme (spasme rectale), scaune lichide muco-sanguinolente frecvente. Vindecarea n 2-5 zile (clinic, apoi microbiologic). Forme cronice sau portaj sunt posibile. Prelevate: probe de scaun (elementele muco-sanguinolente), apa, alimente, lavaje de pe suprafee Metode de diagnostic. Examenul microscopic RIF. Examenul bacteriologic: Izolarea culturii pure pe medii DD (Endo, Levin, Ploskirev) sau mbogirea ighelelor n bulion selenit Coloniile L- sunt repicate pe mediile Olkeniki, Kligler pentru acumularea culturii pure i identificare preliminar (lactoza/zaharoza -, glucoza A, ureea -, H2S -) Identificarea definitiv a culturii pure: Caractere morfotinctoriale; Caractere de cultur ; Caractere biochimice (teste primare, secundare); Caractere antigenice (seroidentificarea prin RA pe lam cu seruri imune anti-Shigella poli- i monovalente); Fagoidentificarea; Virulena (testul Sereny la cobai); Antibiograma Diagnosticul serologic (din a 5-7 zi de boal) : RA, RHAI (aduli 1:400 (S.flexneri); 1:200 (S.sonnei); copii 1:100; coproanticorpi (Ig A 1:80); ELISA; RIFI Imunitate: specific de tip, 1-2 ani, umoral (IgA) Profilaxie: vaccinuri ribosomale, inactivate, atenuate (imunitate de scurt durat) Tratament: antibiotice (trimetoprim, sulfamide, tetraciclin, ampicilina, etc), eubiotice, bacteriofagi, vaccin inactivat (dizenteria cronic) 3. Salmonelozele. Clasificarea salmonelelor (familie, gen, specii, subspecii). Clasificarea Kauffmann-White dupa structura antigenica. Samonelele tifoparatifoidice. Dinamica titrului de anticorpi in febrele tifoparatifoidice, la purtatori sanatosi si ai anticorpilor anamnestici. Diagnosticul serologic. Reactia de aglutinare Widal. Tehnica efectuarii, citirea si interpretarea rezultatelor. Aplicarea practica a reactiilor RHAI, Vi-RHAI. Genul: Salmonella (Daniel Elmer Salmon, veterinar american, care a descoperit bacteria n 1885) Specii: Salmonella enterica, Salmonella bongori Subspecii ale speciei S.enterica: enterica, salamae, arizonae, diarizonae, houtenae, indica Se cunosc peste 2500 Serovariante, majoritatea tulpinilor izolate din patologii umane (99,5%) aparin ss. S.enterica enterica: S. London, S. Enteritidis, S. Typhi, S. Paratyphi A, S. Paratyphi B, S.Choleraesuis, etc Salmonella enterica subspecia enterica serovar Typhi = Salmonella Typhi CLASIFICAREA KAUFFMANN-WHITE (conform structurii antigenice) Ag O 67 varieti antigenice (O1, O2, O3, ... O65, etc), permite repartizarea salmonelelor in serogrupe (A, B, C, D, E,...Z, O51,...) Fracii antigenice majore desemneaz grupa: O2 A; O4 B, O6 C, O9 D, etc Fracii antigenice minore comune O1, O12, Ag H definete serovariante n cadrul grupei. Structura flagelinei este determinat de 2 gene -4 cromozomiale diferite, care se exprim alternativ (variaie de faz, frecvena 10 ). Ag H faza 1 (specific) Ha; Hb; Hc; Hd; Hg,m Ag H faza 2 (nespecific) H1,2; H1,5; H1,7; Serovar monofazic: O1,2,12:Ha (S.Paratyphi A) Serovar difazic: O1,4,12:HbH1,2 (S.Paratyphi B) Ag Vi (K), termolabil, prezent la S.Typhi, S.Paratyphi C, S.Dublin. Este concentrat la polii bacteriei. S. Typhi O9,12:HdVi+ / O9,12:HdViConform patogenitii pentru gazd se disting: Salmonele monopatogene (umane) (S.Typhi, S.Paratyphi A); Salmonele bipatogene (patogene pentru om i animale, ubicvitare) majoritatea 4. Salmonelozele. Salmonelele tifoparatifoide, clasificarea (familie, gen, specie, subspecii), structura antigenica, factorii de patogenitate. Patogeneza febrelor tifoparatifoide. Prelevatele si metodele de diagnostic in dependenta de perioada de boala. Izolarea, acumularea, identificarea hemoculturii si coproculturii (biochimica, serologica, fagoidentificarea). Profilaxia si tratamentul specific. Caractere de cultur Medii de mbogire : Muller, Kauffmann (medii cu bil, tetrationat), bulion cu selenit de Na Medii DD de izolare a culturii pure: Endo, Levin , Ploskirev (colonii S, lactozo-); mediul cu sulfit de bismut Wilson-Blair (colonii negre) Medii DD de acumulare i difereniere: Olkeniki, Kligler (glucoza AG, lactoza-, H2S+, ureaza-) Teste primare: utilizeaz citratul de Na, produc H2S, MR+, LDC+, mobilitate+, celelalte teste negative. Teste secundare: scindeaz glucidele AG, indol-, ornitindecarboxilaza+, etc EXCEPIE: S.Typhi citrat-, H2S-, scindeaz glucoza pn la acid; S.Paratyphi A H2S+/-, LDCFactori de patogenitate: Fimbrii (adeziune); Capacitatea de a penetra n celule i de multiplicare intracelular (Macrofage, celule epitel); Endotoxina ; Citotoxine (SLT) inhib sinteza proteic (necroz); Enterotoxine (LT, ST) activeaz adenilat/guanilatciclazele membranare (diaree); Siderofori (captarea Fe); Ag Vi (antifagocitar, inhib activarea C, rezisten la activitatea bactericid a serului). Majoritatea salmonelelor (98%) sunt sensibile la bacteriofagul O1. Exist bacteriofagi cu specificitate de specie i variant. Habitat: intestinul omului, animalelor, psrilor. Rezistena n mediul extern: salmonelele rezist la 70C 30 min., rezistente la concentraii mari de sare. Se nmulesc n produse alimentare la temperatura camerei. ROLUL SALMONELELOR N PATOLOGIA UMAN SALMONELOZE: Febre tifo-paratifoide (S.Typhi, S.Paratyphi A, B, C) Salmoneloze digestive (toxi-infecii alimentare, gastro-enterite) Manifestri extra-digestive: bacteriemii nontifoidice; infecii pleuro-pulmonare; afeciuni osteoarticulare (osteite, osteomielite, artrite septice, etc); infecii cardio-vasculare (pericardite, arterite); infecii urinare; infecii abdominale (colecistite, abces al ficatului, splinei); infecii ale SNC (meningite, abces al creierului, abces epidural, etc) FEBRELE TIFO-PARATIFOIDE Agenii cauzali S.Typhi, S.Paratyphi A, B, (C) Sursa de infecie omul bolnav, purttorul Contaminarea fecal-oral (ap, alimente), contact direct Doza infectant 105 bacterii PATOGENEZA a. Traversarea epiteliului intestinal intact b. Invazia i multiplicarea intracelular la nivelul plcilor Peyer i esutului limfoid al tubului digestiv (perioada de incubaie) c. Ptrunderea n ganglionii limfatici mezenterici cu multiplicarea salmonelelor (perioada prodromal) I sptmn de boal (bacteriemie).

Invadarea fluxului sangvin, via sistemul limfatic (diseminarea germenilor cu eliberarea endotoxinei). Endotoxina pe cale sangvin parvine la centrii neurovegetativi ai ventriculului 3, determinnd febr, stare de tifos, colaps cardio-vascular, leziuni intestinale. II sptmn de boal (difuzie parenchimatoas) Bacteriile sunt fixate n organele SRE i se multiplic n ficat, splin, mduv osoas, esut limfoid, etc III-IV sptmn de boal (faza alergic). Din ficat salmonelele ptrund n cile biliare, apoi iari n intestin. La nivelul plcilor Peyer se dezvolt o reacie de hipersensibilitate tip 4 - necroz, ulceraii. Din aceast perioad ncepe eliminarea salmonelelor cu saliva, materiile fecale, urina, bila, etc. Manifestri clinice Perioada de incubaie - 1-3 sptmni Perioada prodromal (de invazie) 1-3 zile Perioada de stare. Debut brutal, cu frison, febr 39-41 grade, cefalee, stupoare, somnolen, delir, com. Erupii cutanate (rozeole) apar pe abdomen, torace, spate n ziua a 8-9 de boal (embolii limfatice cu bacterii). Diaree, constipaie, tulburri cardiovasculare. Durata 7-10 zile Complicaii: hemoragii intestinale, perforarea intestinului, peritonit, miocardit, meningit, psihoz etc. Perioada de reconvalescen (1-3-6 luni) Imunitatea celular, umoral. 5-10% convalesceni purttori pn la 3 luni (cu depistarea salmonelelor n bil sau/i urin). 3-5% convalesceni (cu litiaz biliar) purttori cronici (1-10 ani toat viaa) Recidive sunt posibile (descrcri bacteriemice din focare profunde, forme L), se caracterizeaz prin simptome atenuate i evoluie de scurt durat PRELEVATE: snge (perioada febril, n special I sptmn de boal), urin (ncepnd cu a II sptmn), materii fecale (II-III sptmn de boal), exudat din rozeole, ser sangvin (din ziua a 7-ea), bil, mduv osoas METODE DE DIAGNOSTIC Examenul microscopic RIF Identificarea final n baza studiului caracterelor morfotinctoriale, de cultur, biochimice, antigenice (RA pe lam cu seruri imune polivalente ABCDE, seruri monovalente anti-O de grup (O2, O4, O6, O9, etc) , seruri monospecifice anti-H (de variant), seruri anti-Vi, sensibilitatea la bacteriofagi). Rezultatul definitiv negativ n ziua a 11. Rozeolocultura (exudatul din rozeole se ntroduce n 3-5 ml bulion biliat). Mielocultura (0,5 ml mduva osoas din stern n 3-5 ml bulion biliat). Bilicultura (dup 3-6 luni de la vindecare, 5-10 ml bil se ntroduc n BP). Se examineaz ca i hemocultura. Coprocultura (din spt. 2) 3-5 g materii fecale se nsmneaz direct pe medii DD i pe medii de mbogire. Urocultura (10 ml urin se centrifugheaz, sedimentul se examineaz ulterior ca i coprocultura). Serodiagnostic (din II sptmn) RA Widal (la diluii ale serului bolnavului se adaog diagnosticuri OH din S.Typhi, ParatyphiA i B). Titrul diagnostic 1/200 sau creterea n dinamic a titrului RA modificarea Felix (utilizarea separat a diagnosticurilor O i H). Anticorpii anti-O (Ig M) apar primii (ncepnd cu ziua 7-8) i dispar dup 2-3 luni (maximum spt. II-III). Anticorpii anti-H (Ig M, apoi Ig G) apar mai trziu (10-12 zi) i persist o durat mai lung. n debut de reconvalescen (sptmna a IV) titrul Ac anti-O i anti-H se egaleaz. RHAI (cu diagnosticuri eritrocitare O). Investigarea purttorilor: Coproculturi repetate; Urocultura; Bilicultura ; Serodiagnostic; Reacia de Viaglutinare (eritrocite sensibilizate cu Ag Vi). Titrul diagnostic - 1/40; Reacia de latex-aglutinare; Determinarea claselor de imunoglobuline Ig M sau Ig G Tratament: Fluorochinolone; Cefalosporine de generaia III; Cloramfenicol; Ampicilin ; Cotrimoxazol Profilaxia specific: vaccinarea selectiv (zone endemice, militari, personal medical, etc) Vaccinul chimic TABTe; Vaccinul atenuat Ty2 (administrare oral, imunitate local sIg A), contraindicat gravidelor, copiilor, imunodeprimailor; vaccinul subunitar din Ag Vi (areactogen, imunitate 3-5 ani) 5. Salmonelozele. Salmonelele nontifoidice (bipatogene). Clasificarea (familie, gen, specii, subspecii). Structura antigenica, clasificarea Kauffmann-White. Serovariante mai frecvent izolate. Factorii de patogenitate. Patogeneza salmonelozelor, formele clinice. Diagnosticul microbiologic. Prelevate, izolarea, acumularea, identificarea culturii pure (biochimica, serologica). Diagnosticul serologic. SALMONELOZE DIGESTIVE (gastro-enterite, toxi-infecii alimentare) Consecutive consumului de alimente contaminate cu salmonele (ou, maionez, patiserie cu crem, carne, etc). Agenii cauzali: salmonele bipatogene Gr. B (S. Typhimurium, S. Paratyphi B, S. Heidelberg, S. Derbi) Gr. C (S. Choleraesuis, S. Newport, S. Paratyphi C) Gr. D (S. Enteritidis, S. Dublin) Gr. E (S. Anatum) PATOGENEZA GASTROENTERITELOR Sursa de infecie: animalele domestice i psrile (bolnave sau purttori cronici) Transmiterea pe cale alimentar (alimente contaminate direct de la surs sau pe parcursul procesului tehnologic), prin ap sau contact direct. Doza infectant 106-108 salmonele Salmonelele colonizeaz mucoasa intestinului subire, fiind entero-invazive provoac distrugerea epiteliului (SLT) i o reacie inflamatoare intens (gastroenterit, gastroenterocolit acut). Enterotoxina provoac diaree (activeaz adenilatciclaza sau guanilatciclaza enterocitelor), endotoxina absorbit acioneaz asupra SNC semne de intoxicaie. Gastroenteritele pot fi urmate de bacteriemii. Manifestri clinice: Perioada de incubaie 8 - 48 ore Debut brusc i evoluie acut (1-3 zile) cu diaree, vom, febr, cefalee, stare de ru. Evoluie sever la sugari, btrni, imunodeprimai (n special cu SIDA). TOXIINFECII ALIMENTARE Survin ca urmare a ingestiei unui aliment n care s-au acumulat cantiti mari de mi/o (105 107). Nimerind n intestin, bacteriile ptrund n snge, se distrug, iar endotoxina eliberat provoac semnele clinice de intoxicare. Alte forme de salmoneloze (septicemii, meningite, infecii urinare, etc) se dezvolt la persoane cu rezistena sczut. Diagnosticul de laborator al salmonelozelor Prelevate: mase fecale, mase vomitive, snge, splturi gastrice, urin, resturi de alimente suspecte. Metode de diagnostic: Examenul bacteriologic de baz (coprocultur, hemocultur, urocultur...); RIF pentru diagnostic rapid; Serodiagnostic - RHAI Profilaxia salmonelozelor nespecific. Tratamentul simptomatic, antibioterapie la necesitate 6. Holera. Clasificarea vibrionilor (familie, gen, sp.). Criteriile de clasificare a V.cholerae n serogrupe, biovariante, serovariante. Factorii de patogenitate ai V.cholerae. Patogeneza holerei. Diagnosticul microbiologic. Prelevate. Principiile metodelor rapide, citirea, interpretarea rezultatelor. Importanta metodei serologice de diagnostic a holerei. Familia: Vibrionaceae Genuri: Vibrio Aeromonas (inf de plag, diaree, septicemii) Plesiomonas (gastroenterite, septicemii, meningite) Photobacterium (saprofit) Enhydrobacter (saprofit) Caractere generale (cheie): bastonae G-, drepte sau ncurbate, mobile (mono sau lophotrichi), reduc nitraii n nitrii, fermenteaz glucidele, oxidaza+, catalaza+ GENUL VIBRIO Bastonae G-, ncurbate, nesporogene, necapsulate, mobile monotriche Clasificarea:

Clasificare : Serogrupuri: Vibrio cholerae O1, O2, ... O155

-V.cholerae O1 i V.cholerae O139 Bengal (descris in 1992, mutant al Ag O, biovarul El Tor) agenii
cauzali ai holerei Biovariante ale V.cholerae O1 : V.cholerae cholerae (clasic) descoperit in 1817 de catre R. Koch, 6 pandemii V.cholerae El Tor izolat in 1905 in Lazaret din El Tor, in 1961 determina pandemia a VII Serovariante ale V.cholerae O1 - Ogawa, Inaba, Hikojima V.cholerae non O1/non O139 (O2, O3,... etc, vibrioni NAG) responsabili de sindrom holeriform, diaree, toxiinfecii alimentare HOLERA Agenii cauzali: V.cholerae O1 (b/v Clasic i El Tor; s/v Ogawa, Inaba, Hikojima), V.cholerae O139 Bengal Caractere de cultur: Anaerobi facultativi, temperatura optim de cultivare -- 37 grade. Cresc pe medii simple, dar prefer pH alcalin (8-9) i concentraii de 3% NaCl. Sensibili la pH acid Mediu de mbogire Apa peptonat alcalin 1% (AP) Medii de izolare a culturii pure Geloza alcalin (mediu electiv-selectiv) - GA Mediul TCBS (tiosulfat-citrat-bil-zaharoz) DD i selectiv Manifestarea creterii AP peste 6 ore de incubare vl fin la suprafaa mediului GA peste 12 ore colonii S (R atipice), transparente, cu nuan albstruie TCBS peste 12 ore colonii S, opace, galbene (fermentarea zaharozei) Caractere biochimice: V.cholerae este catalaza+ i oxidaza+, reduce nitraii n nitrii, produce indol, posed gelatinaz i LCD, fermenteaz glucoza pn la acid. Conform activitii glicolitice V.cholerae aparine grupului I Heiberg (fermenteaz zaharoza i manoza, nu fermenteaz arabinoza) Se disting 2 biotipuri (variante) de V.cholerae: clasic (V.cholerae cholerae) i El Tor (V.cholerae El Tor), identice morfologic i antigenic. Diferenierea biovariantelor STRUCTURA ANTIGENIC A VIBRIO CHOLERAE Ag O somatic, LPZ, termostabil (peste 155 serogrupe - O1, O2....O155) Ag O1 este constituit din 3 fracii - A,B,C 3 serovariante V.cholerae: Ogawa (A,B), Inaba (A, C), Hikojima (A; B; C) Ag H, proteic, termolabil, comun pentru V.cholerae FACTORI DE PATOGENITATE

Factori de adeziune (pili, Ag O1, glicocalixul) Enzime de patogenitate (mucinaza, neuraminidaza, LDC, lecitinaza) Enterotoxina (toxina holeric, holeragen), constituit dintr-o subunitate A (A1, A2) i 5 subuniti B.

Mecanismul de aciune: Subunitile B servesc la fixarea de receptorul gangliozidic GM1 de pe membrana enterocitului, A2 asigur ptrunderea intracelular a fragmentului A1. Acesta activeaz adenilatciclaza membranar, ce duce la creterea concentraiei de AMPc intracelular cu inhibitia absorbtiei bicarbonatului i secreia exagerat a cloridului. Apa i electroliii (Na + i K+) se acumuleaz n lumenul intestinal. Rezult deshidratare extracelular intens cu hemoconcentraie, oc hipovolemic i acidoz metabolic. PATOGENEZA HOLEREI I MANIFESTRILE CLINICE HOLERA toxiinfecie intestinal acut, strict uman. Agentul cauzal V.cholerae O1/O139 Sursa de infecie bolnav, convalescent, purttor sntos (crustacee acvatice?) Mecanismul de transmitere: fecal-oral; contact direct (manual); alimentar (apa, alimente) Doza infectant 109 UFC (104 pentru persoane cu hipoaciditate gastric) Vibrionii care au supravieuit nimeresc n intestinul subire. Local mucinaza descompune mucusul, ce permite adeziunea la enterocit i multiplicarea vibrionilor (colonizarea) cu secreia toxinei. Evoluia clinic a holerei: I - perioada de incubaie (2-5 zile) II enterita holeric (scaune frecvente, abundente, apoase, aspect zeam de orez) III gastro-enterita (scaune frecvente 20 ori pe zi vome abundente. Consecine deshidratare, carene de sruri, acidoz, hipoxie tisular, hipotensiune, contracii (crampe) musculare. IV - Algida holeric (stare extrem de grav, hipotermie, asfixie, colaps, com, deces) Imunitatea umoral (sIgA, IgG), antibacterian i antitoxic, de scurt durat (2 ani), reinfecii sunt posibile 7. Holera. Criteriile de clasificare a V.cholerae (serogrupe, biovariante, serovariante), factorii de patogenitate. Diagnosticul microbiologic. Prelevatele, recoltarea, conservarea. Metoda microscopica. Metoda bacteriologica: mbogairea, izolarea, acumularea, identificarea culturii pure (teste biochimice, biologice, serologice). Etapele, durata examenului bacteriologic. Profilaxia specifica a holerei. DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL HOLEREI Prelevate: mase vomitive, materii fecale, bil (purttori), de la cadavru 3 fragmente din intestinul subire i vezica biliar, prelevate din mediul extern (apa, alimente) Metode de diagnostic 1. Diagnosticul rapid: Studierea mobilitii (preparate native bacterii mobile, ncurbate, grupate n bancuri de peti sau pescrui n zbor; Frotiu Gram (bacterii G-, ncurbate); Imobilizarea vibrionilor cu serul anti-O1; Imobilizarea vibrionilor cu bacteriofagi C i ET; RIF 2. Examenul bacteriologic (de baz) Prelevatele se nsmneaz n AP I (mbogire) i GA I (TCBS) (izolarea culturii pure) termostat Peste 6 ore se examineaz cultura din AP (vl la suprafa), utilizat pentru diagnosticul rapid, apoi se rensmneaz pe AP II i GA II. Peste 12 ore se examineaz coloniile de pe GA I sau TCBS. Coloniile suspecte (plate i transparente cu nuan albstrie pe GA, galbene pe TCBS) sunt expuse diagnosticului rapid (5 teste), apoi repicate pe mediul cu lactoz i zaharoz pentru acumularea culturii pure i difereniere primar. AP II poate fi utilizat pentru efectuarea testelor rapide si nsmnare pe GA III. Culturile lactoza-/zaharoza+ sunt identificate morfologic, cultural, biochimic, serologic (cu ser O1 polivalent, apoi cu seruri monospecifice Ogawa i Inaba), diferenierea biovariantelor. 3. Depistarea toxinei In vivo (ansa ligaturata la iepure, culturi de celule) In vitro (ELISA, cu utilizarea gangliozidului GM1) Tehnici de biologie moleculara (PCR, etc) 4. Serodiagnostic (retrospectiv) Anticorpii (aglutinine, vibriocine) apar dup 10-15 zile de boal.

-RA (serul bolnavului + diagnostic din V.cholerae O1 (titrul diagnostic 1/80) -RHAI (serul bolnavului + diagnostic eritrocitar) -Dozarea antitoxinelor (ELISA, RHAI)
-Reacia de vibrioliz (serul bolnavului + cultur de vibrioni + complement). -Titrul diagnostic
10-4 Tratament: Antibiotice (tetraciclin, sulfanilamide, doxiciclina); Rehidratare; Tratament simptomatic Profilaxie: Igiena individual i colectiv; Vaccinarea (vaccin inactivat, vaccin subunitar, holeragenanatoxin); Imunitatea pn la 6 luni; Vaccinul viu este in proces de studiu.

-Vibrioni halotoleranti - Vibrio cholerae (agenii holerei i diareelor holeriforme) -Vibrioni halofili V.parahaemolyticus, V.alginolyticus, V.anguillarum, V.vulnificus, V.metschnikovii
(oportunisti, cauzeaz toxiinfecii alimentare, septicemii, meningite, supuraii)

-Vibrioni free life (saprofii)

VIBRIO CHOLERAE