Rapport de biochimie

2010-2011

Le dosage du calcium et du magnsium par complexomtrie dans leau

Introduction
Les titrages complexomtriques sont des mthodes titrimtriques bases sur la formation de complexes. Ces complexes sont constitus d'un ion central et de particules (charges ou neutres) appeles ligands ou coordinats. Les Ligands, couramment utiliss pour effectuer le dosage des cations, doivent possder au moins un pair dlectrons non liants disponible pour former la liaison avec lion central. Le nombre de liaisons quun cation peut former avec des donneurs dlectrons est son nombre de coordination. La stabilit des complexes dpend de plusieurs facteurs, notamment : la nature du mtal central et du ligand et de la composition du milieu (pH, solvant, ions trangers, etc.). Les acides amino-carboxyliques sont des excellents agents complexant; le plus utilis d'entre eux est l'acide thylne diamine et l'EDTA. Cette mthode est base essentiellement sur les proprits de lacide thylne-diamine-ttra actique, sel disodique et de ces complexes mtalliques. On le note H2Y.

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A. Introduction aux dosages complexometriques
I. Action du complexon iii sur les ions et

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1. Le complexon III (acide thylne diamine ttra actique sel disodique)

Il cristallise avec 2molcules deau ; il est trs soluble dans leau , N N

On le symbolise par : EDTA N Dans leau N 2

OU N

2. Raction avec les cations (complexation)

Latome dazote possde un doublet libre capable de raliser une liaison donneur-accepteur avec un cation. Dautre part les H des fonctions acide carboxylique(cation EQUATION-BILAN : Remarque : - Le donneur de doubl dans un complexe est appel ligand . Dans le cas prsent, le ligand donne plusieurs doubls ; le calcium semble saisi entre les pinces de lion complexant (ligand). Le complexe obtenu est un chlate. ) peuvent partir et il peut se former deux liaisons avec le

II.

DETERMINATION DES DIFFERENTES DURETES D'UN EAU PAR COMPLEXOMETRIE

1. Dfinitions de quelques concepts

Duret totale: Cest la concentration en ions calcium et en ion magnsium dune eau. Duret calcique : Cest la concentration en ion Ca2+ dune eau. Duret magnsienne: c'est la concentration en ion Mg2+ d'une eau. Duret permanente : Cest la concentration en ion Ca2+ et en ion Mg2+ dune eau aprs bullition prolonge et filtration. Duret temporaire : Cest la concentration en ions magnsium et calcium enlev par filtration.

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III.

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Dtermination exprimentale des diffrentes durets d'une eau par complexomtrie

1. But
La dtermination de la duret dune eau par complexomtrie est une technique permettant davoir une ide sur la potabilit dune eau .Cette manipulation permet de connatre la teneur en ion calcium Ca2+ et magnsium Mg2+ dune eau ; en effet elle permet de voir si leau mousse bien pour des utilisations industrielles ou mnagres. 3

2. PRINCIPE
Il sagit dun dosage direct de la solution de sel disodique de lEDTA par Ca 2+ en prsence du ractif de PATTON et REEDER selon la raction suivante : H2Y2-+Ca2+ H2Y2--+Ca.Ind Rouge CaY2-+2H+ CaY2-+2H++Ind2- (en fin de dosage) (H2Ind bleu)

3. Mode opratoire Matriels

Becher de 600 ml ou ballon fond plat (500ml ou 1l) Burette Eprouvette de 10 ml Fiole jauge (de 250 ml, 1l); fiole jauge de 1 l. Pipette de 50 ml de classe A; Pipette jauge de 10 ml Entonnoir et papier filtre Erlenmeyer de 250 ml Spatule Trpied+toile+bec Bunsen

Produits :
Solutions environ 0.01 du sel disodique de lEDTA Une solution calcique talon environ 0,01 molaire prpare partir de CaCO3 chimiquement pur Eau analyser et eau distille
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Solution de la soude environ 2 mol/l

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Ractif de Patton et Reeder, si possible en dilution solide dans NaCl 1% en masse Tampon ammoniacal pH=10 Noir riochrome T en pastilles ou en solution dans lalcool 95 GL (0,8g dans 200ml) Solution du complexe magnsien de lEDTA environ 10g/l Carbonate de calcium pur pour analyse. 4

IV.

Manipulation

1. talonnage d'une solution d'EDTA

Ractifs

Une solution d'environ 0,01 molaire du sel disodique de l'EDTA. Une solution calcique talon 0,01 molaire prpare partir de CaCO3 chimiquement pur. De la soude environ 2 mol.l-1. De l'acide chloridrique dilu au demi. L'indicateur de Patton et Reeder en dilution solide, raison de 1 g de ractif intimement mlang 100 g de chlorure de sodium, chimiquement pur et finement pulvris.

2.

Dtermination de la duret de leau

1. Principe Il sagit dun dosage direct de la solution de sel disodique de lEDTA par Ca2+ en prsence du ractif de PUTTON et de REEDER selon la raction :

2. Mode opratoire a. Prparation de la solution calcique talon On prpare 1000ml de solution 0,0100mol/L ; on part de auquel on peut accorder le plus de confiance. Dterminer la masse de peser (masse molaire=100,09g.

chimiquement pur et sec qui est le sel de calcium

)?

Faire passer cette masse avec le minimum deau dans une fiole jauge de 1000ml. Ajouter au goutte goute jusqu fin deffervescence et dissolution totale du carbonate de calcium (utiliser un minimum dacide chlorhydrique). Ajuster au trait de jauge leau distille. Ayoub HATEB 2eme Anne

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DOSAGE :

0 1 2 3 4 5 6 7 3. Rsultats : 8 A lquilibre on a : 9 10 11 12 13 14 15 AN : Avec 2M, 10ml et 1 pince de Patton de Reeder

3. Determination de la durete totale dune eau 16

a. Dfinition : 17 Cest un concept ancien utilis pour dcrire la teneur en ions 18 b. Dosage 19 20 Prparation de la solution et des eaux.

Dans un erlenmeyer de 250ml on met :

21 22 23 Ayoub HATEB 2eme Anne 24 25

50 ml deau analyser

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2,5ml de tampon pH=10 une pince de lindicateur color NET 1 ml de complexons magnsien

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Dans une burette on met de lH2Y2-, le volume vers est V2.

0 1 2 3 4 5 6 7 Duret totale

On dose immdiatement en agitant constamment.

9 On vers rapidement au dbut du dosage puis lentement vers la fin

On ajoute 10 solution de sel disodique de l'EDTA goutte goutte ds que la couleur de la solution la commence11 virer du rouge au bleu. La couleur ne doit plus changer par addition d'une goutte supplmentaire de solution titrante,
12 13

A lquilibre on a la 14 couleur bleue et On a 15 16 17 DT =33F 18 19 20 21 22 Ayoub HATEB 23 2eme Anne 24 25 AN:

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4. Dtermination de la duret calcique
Prparation de la solution

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Dans une fiole jauge de 50 ml on met :

50 ml deau analyser 10ml de NaOH 2M Une pince de Patton et Reeder 1 ml de complexons magnsien 7

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 A lquilibre on a une coloration bleue et 10 11 On a: 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 Ayoub HATEB 2eme Anne 22 23 Do DCa=30,8F AN: Duret calcique

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5. Dtermination de la duret magnsienne

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AN : Do

33-30,8

6. Dtermination de la duret permanente

a. Prparation de leau

Dans un bcher de 600ml, on met 250 ml deau analyser Mettre bouillir cette eau 20 30 min de faon rduire le volume initial d'environ 1/3 Refroidir la temprature ordinaire Filtrer sur l matriel sec Laisser goutter le bcher sur le filtre sans le rincer ni rincer le filtre Transvaser quantitativement le filtrat dans une fiole jauge de 250 ml Ajuster au trait de jaug l'eau distille

Bouillir leau jusquau point de reprage

Filtrer leau bouillie

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b. Dosage

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On prpare sur une prise d'essai de 100 ml du filtrat ainsi obtenu Y ajouter 5 ml de tampon pH=10,02g (ou 2 ml) d'indicateur Net ou 1 ml de Mg Y2- 10 g/l Prcision du dosage:2,8 %

0 1 2 3 4 5 6 7 A lquilibre on8 a 9 10 11 12 AN: 13 DP=9,13 F 14 =0,011 mol/l

15 7. Dtermination de la duret temporaire 16 17 18 AN: 19 20 23,87F 21 Ayoub HATEB 2eme Anne 22 23

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B. Dosage des chlorures par argentimtrie
I. Methode de charpentier volhar

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1. But :
Dterminer la concentration en Cl.

2. Principe
Il sagit dun dosage en retour c'est--dire que les ions chlorures contenus dans la solution titre sont mis en prsence dun excs dAgNO3 et seront titr par une solution de thiosulfate de potassium ou dammonium de concentration 10 connue en prsence dun indicateur color : lalun de fer et dammonium.

3. Mode opratoire
3.1 Minralisation
E=10 ml de lait XCl=? 10 ml de AgNO3 (TAg= 0,1 M , E1=10ml) 10 ml de HNO3 concentr 5 ml de KMnO4 solution satur

Dans un Erlenmayer on ajoute dans la solution 20ml deau robinet on aura donc une solution claire. On la bouille pendant 15mn feux doux ensuite on ajoute 3ml dindicateur color + 30ml deau distille.

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3.2

Dosage de lexcs dAg Prparation de la solution

On laisse refroidir la solution prcdente. on ajoute 50ml deau distille l'aide d'une prouvette et 3 ml d'indicateur color.

11

KSCN ( CSCN,V1 =7,5 ) +50 ml d'eau distille +3 ml d'alun de fer

3.3 Etalonnage de la solution de thiocyanate Prparation de la solution

Dans un erlenmeyer de 250ml, on introduit TA=0,1 mol/l de solution de nitrate dargent. 50ml deau distille. 10ml dacide nitrique concentr 2 ml de solution( alun de fer et d'ammonium).

Ensuite on titre rapidement par SCN puis on note le volume V2 correspondant au volume vers avant datteindre lquivalence.
KSCN ( CSCN,V2 =18 )

+ 50 ml d'eau distille +AgNO3( TAg=0,1 M, E2=10 ml ) + 10 ml de HNO3 +3 ml d'alun de fer

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4. Resultats
A lquivalence exprimer XCl en fonction de V1 ; V2 ; E1, E2 ,TAg, E. A lquivalence on a :

nAg =nSCN + nCl Tag*E1 =CSCN*V1+XCl*E XCl*E=TAg*E1-

12

AN : XCl =

=0,058

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C. Dosage des protines dun blanc duf par clorimtrie par la mthode du Biuret Introduction
Au cours des diffrentes manipulations faites durant notre sance de travaux pratiques le dosage des protines par colorimtrie par la mthode du Duret t l'un des objectifs de cette sance, le prsent rapport nous donne une ide gnrale sur les diffrentes dmarches ainsi que les rsultats obtenus. 13

I- But
Le but de ce dosage est la dtermination de la concentration en protines totale dans un blanc d'uf.

II- Principe
Tout compos possdant au minimum deux liaisons peptidiques va dvelopper en milieu alcalin et en prsence d'ion Ca2+ une coloration bleu violet caractristique dont la teinte est fonction du nombre de liaison peptidique. En milieu alcalin, les composs contenants au moins deux groupements -CONH- ou -CONH2 voisins forment avec les ions Cu2+ un complexe bleu violet (coloration du biuret H2N-CO-NH-CO-NH2). Cette coloration est ainsi caractristique des peptides et des protides qui possdent la liaison peptidique CONH-. La vitesse de dveloppement de la coloration, sa teinte, et son intensit dpendent de : lalcanit et du [Cu2+]. On utilise le ractif de Gornall (sulfate de cuivre II + tartrate double de sodium et de potassium + soude) pour solubiliser les protines, mme dnatur. la temprature la nature de la protine. Le maximum dabsorption se situe vers 530-540nm et varie avec le nombre de Liaisons peptidiques. Lintensit de coloration est proportionnelle ce nombre. On utilise un srum contenant un mlange de protine, comme talon un srum de commerce connu.

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IIIMode opratoire

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1. Etalonnage du spectrophotomtre
1.1. Dilutions

A partir dun srum talon 50g / l, on procde une prparation de 5ml des dilutions suivantes, laide deau physiologique (NaCl 0,9%) : 1/10 ; 1/20 ; 1/40 ; 1/80 14

1ml

Eau 9ml

5ml

5ml

5ml

5ml Rejeter

5ml srum talon 1/10 1ml 1/20 1ml 1/40 1ml 1/80 1ml

1ml eau Distille

Tubes

N0 4ml de RG

N1 4ml de RG

N2 4ml de RG

N3 4ml de RG

N4 4ml de RG

RG= Ractif de Gornall Vt= volume total

On ajoute dans les diffrents tubes 4ml de ractif de Gornall ; on mlange puis on attend 20mn, temprature ambiante, lobscurit. La coloration est stable plusieurs heures aprs.
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La gamme dtalonnage sera prsente dans un tableau rcapitulatif des diffrentes donnes. La coloration est stable plusieurs heures aprs. La gamme dtalonnage sera prsente selon un tableau en prcisant la quantit de protines en mg par tube.
1.2. Lecture au spectrophotomtre

On lit la densit optique de chaque tube contre le blanc =540 nm

15

2. Dosage des protines totales

2.1. Dilution du blanc d'uf au 1/20

1ml 1ml 0.5ml de blanc duf 1/20 Plus 9.5ml deau E1 E2

VE1 = VE2 = 5ml

On prend un tube eau, on met 0,5 ml du blanc d'uf et 9,5 ml d'eau physiologique, on homognise, on prend ensuite un autre tube et on met 1 ml du premier tube, aprs on ajoute 4 ml de Gornall et on incube pendant 20 min et on lit au spectrophotomtre.

1.

Questions Donner le tableau de composition des tubes. Tracer la courbe dtalonnage A=f (g proteines.dm-3) Dterminer la protinmie du srum analys exprime en g/l

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3. Rsultat
3.1. Courbe d'talonnage

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Calculons les quantits en mg de protine par tube

m = C x V x dilution
Ainsi pour les diffrents tubes nous avons : 16

Tube 1: Tube 2: Tube 3: Tube 4:

m1 = 50 x 1 x1/10 = 5 mg m2 = 50 x 1 x 1/20= 2,5mg m3 = 50 x 1 x1/40 = 1,25mg m4 = 50 x 1 x 1/80 = 0,625mg

Gamme d'talonnage : tableau rcapitulatif N TUBE Eau distille SE au 1/10 SE au 1/20 SE au 1/40 SE au 1/80 Blanc d'uf Ractif de Gornall Masse des protines par tube en mg Absorbance 0 1 1 1 1 1 1 4 0 4 5 4 2,5 4 1,25 4 0,625 1 4 3,2 2 3 4 PT

0,382

0,262

0,181

0,017

0,248

Tableau rcapitulative des donnes absorbance et masses de protines Tube Masse de protines/tube Absorbance 0 0 0 1 5 0,382 2 2,5 0,262 3 1,25 0,181 4 0,625 0,017 PT
3,2

0,248

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on trace la courbe des absorbances en fonction des masses de protines par tube. mx est trouv par projection de Ax sur l'axe des abscisses. mx = 3,2 mg/ml Cp= mx*20 Cp= (3.2*20) g/l

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AN: Cp= 64 g/l

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Courbe d'talonnage

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