Curs 2.

FIZIOLOGIA MEMBRANEI CELULARE

CUPRINS 1.Funcia de transport a membranei celulare Transportul activ
1.1. Transportul activ primar 1.2. Transportul activ secundar 1.3. Pompele ionice

2. Funcia membranei n transferul de informaie

2.1. Receptorii membranari 2.2. Interaciunea ligand-receptor 2.3. Proteinele G membranare 2.4. Sisteme de semnalizare intracelulare
CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I ef.lucr.dr.LAVINIA NOVEANU 1

OBIECTIVELE CURSULUI 2 Studentul trebuie s: Defineasc principalele caracteristici ale transportului activ membranar i ale principalelor tipuri de pompe ionice neleag diferena dintre transportul activ i transportul pasiv, dintre transportul activ primar i transportul activ secundar Cunoasc mecanismul general de funcionare i rolurile pompei Na+/K+, pompei de Ca2+, pompei H+/K+ i a pompelor protonice Discute rolul mecanismelor de transport activ n generarea gradientelor fizice care ntrein transportul pasiv Discute despre importana transportului activ n schimburile transmembranare de la nivelul suprafeelor de schimb epiteliale (digestive, renale) Defineasc i s clasifice receptorii membranari Cunoasc diferena dintre rspunsul celular de tip agonist/ antagonist Defineasc i s descrie schema general de funcionare i rolurile principale ale sistemelor de semnalizare intracelular
CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I ef.lucr.dr.LAVINIA NOVEANU 2

1. FUNCIA DE TRANSPORT A MEMBRANEI TRANSPORTUL ACTIV (S4.slide 3-17)

CARACTERISTICI se desfoar mpotriva gradientului electrochimic este specific
Transport activ

necesit o protein transportoare specific

necesit consum energetic (ATP) este dependent de energetica celular i condiiile de mediu are caracter limitativ se desfoar pn la Tmax dependent numai de capacitatea transportorului poate fi competitiv pentru substane nrudite chimic care au acelai transportor (ex:aminoacizii)
CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I ef.lucr.dr.LAVINIA NOVEANU 3

ROLURI asigur transportul moleculelor organice (glucoza, aminoacizi) i a majoritii ionilor (Na+, K+, Ca2+, PO3-, Fe2+, H+, etc.) asigur diferena de concentraie a substanelor ntre mediul intracelular i extracelular pasiv CLASIFICARE - dup modalitatea de utilizare a ENERGIEI transport activ primar consum direct al energiei transport activ secundar consum indirect al energiei prin utilizarea gradientului de concentraie ionic asigurat
ef.lucr.dr.LAVINIA NOVEANU

ntreine mecanismele de transport

prin transport activ primar

CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I 4

1.1. TRANSPORTUL ACTIV PRIMAR

CARACTERISTICI este specific pentru transportul ionilor proteina transportoare se numete POMP IONIC proteina transportoare este o ATP- az ATP ADP + Pi + E TIPURI DE POMPE IONICE pompa Na+/K+ (Na+/K+- ATP-aza) pompa H+/K+ (H+/K+- ATP-aza) pompa de Ca2+ (Ca2+ - ATP-aza) pompele protonice (H+- ATP-aze)
Pompa Na+/K+
CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I ef.lucr.dr.LAVINIA NOVEANU 5

1.2. TRANSPORTUL ACTIV SECUNDAR

CARACTERISTICI este transportul contragradient al unei substane organice sau a unor ioni este un transport cuplat cel mai frecvent cu transportul Na+ se desfoar n sensul gradientului electrochimic al Na+ ntreinut de pompa Na+/K+ (prin consum de energie)

Pompa Na+/K+
CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I

Cotransportori

Schimbtori ionici
6

ef.lucr.dr.LAVINIA NOVEANU

CLASIFICARE: n funcie de direcia de transfer cuplat cu Na+ Cotransport n aceeai direcie cu Na+ Ex: cotransportor Na+/glucoz, Na+/aminoacizi Schimbtor ionic n direcie opus cu Na+ Ex: schimbtor Na+/H+, schimbtor Na+/Ca2+

Pompa Na+/K+
CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I

Cotransportori

Schimbtori ionici
7

ef.lucr.dr.LAVINIA NOVEANU

SCHIMBTORUL HCO3-/Cl- - transferul depinde de gradientul de concentraie carbonice (CA) al HCO3determinat de activitatea anhidrazei CO2 + H20 H2CO3 HCO3- + H+

Eritrocit rol n echilibrul acido bazic prin producie de HCO3Celula parietal gastric rol n secreia de HCl Nefrocit rol n echilibrul acido bazic prin acidifierea urinii
CA

Eritrocit
CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I

Celula parietal gastric

ef.lucr.dr.LAVINIA NOVEANU

Nefrocit
8

1.3. POMPELE IONICE

au toate caracteristicile i rolurile transportului activ primar SECVENA GENERAL DE FUNCIONARE A POMPELOR IONICE 1.Fixarea ionulului pe partea unde aceasta se gsete n concentraia mai mic 2.Fixarea 1 ATP la nivelul situsului nucleotidic urmat de hidroliz ATP ADP + Pi + E

Pompa de Ca2+
CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I ef.lucr.dr.LAVINIA NOVEANU 9

gruparea fosfat (Pi) este utilizat pentru creterea afinitii pompei fa de ion energia (E) este utilizat pentru modificarea de conformaie a proteinei transportoare 3.Eliberarea ionul pe partea cu concentraie mai mare: situsul nucleotidic elibereaz produii de hidroliz ai ATP proteina transportoare revine la conformaia iniial

Pompa de Ca2+
CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I ef.lucr.dr.LAVINIA NOVEANU 10

FUNCIILE GENERALE ALE POMPELOR IONICE

Glucoz Na+

Na+

La nivelul epiteliilor generarea gradientelor fizice care ntrein transportul pasiv transmembranar rol important n procese de absorbie/reabsorbie de la nivelul suprafeelor de schimb epiteliale (digestive, renale) La nivelul neuronului meninerea i restabilirea echilibrului ionic dup depolarizare (pompa Na+/K+) La nivelul fibrei musculare declanarea relaxrii musculare (pompa Ca2+)
ef.lucr.dr.LAVINIA NOVEANU 11

Na+

Na+ Glucoz

CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I

(a) Pompa Na+/K+ (Na+/K+- ATP-aza)

CARACTERISTICI cea mai important ATP-az de transport transport 3 Na+ spre exterior i 2 K+ spre interior pentru 1 ATP este mare consumatoare de energie - 50% n cazul neuronului i nefrocitului - 10% n cazul fibrei musculare i a hepatocitului STRUCTUR dou subuniti cu rol catalitic dou subuniti cu rol reglator
CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I ef.lucr.dr.LAVINIA NOVEANU

12

Subunitile - rol catalitic prezint la interior: situsuri de fixare pentru 3 Na+ situs de fixare pentru 1 ATP situs de fosforilare pentru 1 Pi prezint la exterior: situsuri de fixare pentru 2K+ Subunitile - au rol reglator: translocarea pompei din citoplasm n membran distribuia polarizat a pompelor pe suprafaa celular la polul bazal al celulelor
CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I ef.lucr.dr.LAVINIA NOVEANU 13

ROLURILE pompei Na+/K+

asigur HOMEOSTAZIA CELULAR

pomp electrogenic ncrcare electronegativ la interior - menine potenialul de repaus - reface echilibrul ionic dup depolarizare - activat n exces hiperpolarizare - inhibat n exces depolarizare uoar asigur gradientul de Na+ necesar transportului activ secundar particip la meninerea volumului celular (H2O urmeaz Na+) REGLAREA ACTIVITII pompei Na+/K+ activare: insulin, hormoni tiroidieni, catecolamine creterea volumului celular inhibiie: ouabain (specific), tonicardiace (digoxin)
CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I ef.lucr.dr.LAVINIA NOVEANU 14

(b) Pompa de Ca2+

LOCALIZARE: n fibra muscular la nivelul sarcolemei expulzeaz 2 Ca2+ n mediul extracelular la nivelul membranei RS recapteaz 2 Ca2+ din citoplasm ROL: scderea Ca2+ citosolic relaxare muscular

RETICUL SARCOPLASMATIC (RS)

CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I ef.lucr.dr.LAVINIA NOVEANU

Pompa de Ca2+
15

(c) Pompa H+/K+

LOCALIZARE: n epitelii transport n celul 1 K+ la schimb cu 1 H+ celula parietal gastric formarea HCl nefrocit acidifierea urinii i echilibrul acido-bazic

Celula parietal gastric

CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I ef.lucr.dr.LAVINIA NOVEANU

Nefrocit
16

(d) Pompele protonice (de H+)

LOCALIZARE membranele mitocondriale transportul electronilor n timpul fosforilrii oxidative (producie de ATP) nefrocit acidiferea urinii i echilibrul acido-bazic

Mitocondrie
CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I ef.lucr.dr.LAVINIA NOVEANU

Nefrocit
17

2. FUNCIA MEMBRANEI N TRANSFERUL DE INFORMAIE

INFORMAIA = totalitatea semnalelor biochimice transmise de substane biologic active (mesageri primari, de ordinul I) care interacioneaz cu receptori specifici i declaneaz un rspuns celular specific MESAGERII PRIMARI cu aciune pe receptori membranari: Neurotransmitori - mediatori chimici n cadrul unei sinapse

CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I

ef.lucr.dr.LAVINIA NOVEANU

18

Hormoni endocrini - secretai n snge (aciune endocrin)

Hormoni tisulari - secretai local (aciune paracrin sau autocrin)

Aciune paracrin
CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I

Aciune autocrin
19

ef.lucr.dr.LAVINIA NOVEANU

2.1. RECEPTORII MEMBRANARI

(S5.slide 20-27)

DEFINIIE: proteine integrale complexe care capteaz, amplific i moduleaz informaia primit de la mesagerii primari CLASIFICARE n raport cu modalitatea de semnalizare intracelular receptori protein - canal ionic receptori cuplai cu o enzim membranar receptori cuplai cu proteina G membranar receptori catalitici

CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I

ef.lucr.dr.LAVINIA NOVEANU

20

(a) Receptorii protein canal ionic

CARACTERISTIC: ligandul ataat de receptorul specific deschide un canal ionic flux ionic depolarizant sau hiperpolarizant

EXEMPLU: acetilcolina (ACh) deschide canalele de Na+ din structura receptorului nicotinic situat n membrana postsinaptic a plcii motorii influx de Na+ cu efect depolarizant

CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I

ef.lucr.dr.LAVINIA NOVEANU

21

(b) Receptorii cuplai cu o enzim membranar

CARACTERISTIC: ligandul ataat de receptorul specific determin activarea unei enzime membranare cuplat cu receptorul pe faa intern a membranei sintetiza unui mesager secundar activarea EXEMPLU: acetilcolina (ACh) se fixeaz de receptorul muscarinic de la nivelul fibrei musculare netede vasculare guanilatciclazei membranare (GCm) cu formare de GMPc

CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I

ef.lucr.dr.LAVINIA NOVEANU

22

(c) Receptorii cuplai cu proteina G membranar

CARACTERISTIC: ligandul ataat de receptorul specific activeaz proteina G membranar care cupleaz RECEPTORUL cu EFECTORUL: un canal ionic (de Ca2+ sau K+) sau o unitate catalitic (enzim membranar, intracelular,factori de transcripie) EXEMPLU: noradrenalina acioneaz pe receptorii -adrenergici cuplai prin proteina Gs cu adenilatciclaza, iar generarea de AMPc activeaz canale de Ca2+ membranare
CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I ef.lucr.dr.LAVINIA NOVEANU

23

(d) Receptorii catalitici

CARACTERISTICI ligandul este un hormon de cretere Exemplu: STH, insulina fixarea ligandului determin dimerizarea receptorului are activitate enzimatic intrinsec care modific structura altor proteine intracelulare moduleaz activitatea unor sisteme complexe de semnalizare intracelular cu rol n reglarea transcripiei genelor
CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I ef.lucr.dr.LAVINIA NOVEANU

STH

Insulina

24

2.2. INTERACIUNEA LIGAND-RECEPTOR

DEFINIIE: totalitatea proceselor fizico-chimice declanate de fixarea ligandului pe receptorul specific ETAPE I.Formarea COMPLEXULUI LIGAND-RECEPTOR ACTIVAT selecia steric a ligandului aflat n concentraii foarte mici (nanograme sau picograme) fixarea ligandului prin interaciuni fizico-chimice slabe INTERACIUNEA: bimolecular, reversibil, desfurat secvenial i foarte rapid

CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I

ef.lucr.dr.LAVINIA NOVEANU

25

II.Activarea MECANISMULUI DE SEMNALIZARE INTRACELULAR

modificarea configuraiei structurale a receptorului modificarea funciei receptorului la extremitatea sa distal

CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I ef.lucr.dr.LAVINIA NOVEANU

26

TIPURI DE INTERACIUNI LIGAND RECEPTOR De tip AGONIST - formarea complexului ligand-receptor activat determin rspunsul fiziologic specific n proporie de 80-100% DE tip AGONIST PARIAL - formarea complexului ligandreceptor activat determin rspunsul fiziologic specific n proporie de 10 - 40% De tip ANTAGONIST - formarea complexului ligand-receptor activat NU determin rspunsul fiziologic specific (agonism 0%)

CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I

ef.lucr.dr.LAVINIA NOVEANU

27

2.3. PROTEINELE G MEMBRANARE

(S6.slide 28-30)

DEFINIIE: proteine traductor ataate de faa intern a membranei, care asigur cuplarea RECEPTORULUI cu EFECTORUL = canal ionic (K+ sau Ca2+) i/sau unitate catalitic (enzim) STRUCTUR 3 subuniti (a) subunitatea = GTP-az care asigur funcia i specificitatea proteinei form inactiv cnd fixeaz o molecul de GDP form activ cnd fixeaz o molecul de GTP (b) subunitile i - formeaz un complex
CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I ef.lucr.dr.LAVINIA NOVEANU 28

TIPURI DE PROTEINE G
RECEPTOR Gs Gi 1- adrenergici 2- adrenergici 2 adrenergici colinergici - M2 EFECTOR adenilatciclaza adenilatciclaza Mesager secundar AMPc ( influxul de Ca2+ ) AMPc ( efluxul de K+) IP3, DAG, Ca2+- calmodulina

Gq

1 adrenergici fosfolipaza C colinergici - M1,M3

Receptorii adrenergici (1, 2) i (1-3) ligand NA Receptorii colinergici nicotinici (N) i muscarinici (M1 M3) ligand ACh
ef.lucr.dr.LAVINIA NOVEANU 29

CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I

ROLURI activarea unor fluxuri ionice transmembranare (Ca2+, K+) modificri de potenial membranar modularea activitii unor enzime membranare i intracelulare sinteza de mesageri secundari modularea transcripiei unor gene sintez de proteine i modificri structurale specifice

CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I

ef.lucr.dr.LAVINIA NOVEANU

30

2.4.SISTEME DE SEMNALIZARE INTRACELULAR

(S7.slide 31-40)

DEFINIIE:

sisteme

complexe

de

proteine

membranare

intracelulare care transform informaia purtat de mesagerii primari n rspuns celular specific CLASIFICARE sistemul adenilatciclaz AMPc sistemul guanilatciclaz GMPc sistemul derivailor de fosfatidil inozitol (IP3, DAG) sistemul Ca2+ - calmodulin

CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I

ef.lucr.dr.LAVINIA NOVEANU

31

SCHEMA GENERAL DE FUNCIONARE I.Mesagerul PRIMAR (de ordinul I) acioneaz pe receptori membranari specifici determin activarea mesagerilor secundari II. Mesagerul SECUNDAR (ordinul II) amplific informaia de 10 x activeaz mesagerii teriari (PK) III. Mesagerul TERIAR (ordinul III) amplific informaia de 100 x prin activarea masei critice de proteine intracelulare care asigur RSPUNSUL CELULAR = modificri funcionale, metabolice i structurale ale celulei
CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I ef.lucr.dr.LAVINIA NOVEANU 32

(a) Sistemul adenilatciclaz - AMPc

CARACTERISTICI cel mai important sistem de semnalizare intracelular asociat receptorilor membranari cuplai cu proteinele Gs i Gi formarea AMPc are sub aciunea adenilatciclazei degradarea AMPc are sub aciunea AMPc fosfodiesterazei are asociat cu proteinkinaza A (PKA) ca mesager teriar

CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I

ef.lucr.dr.LAVINIA NOVEANU

33

ROLURI mediaz efectele celulare ale neurotransmitorilor i hormonilor polipeptidici Neurotransmitori - rspunsul postsinaptic - sinteza de proteine neuronale Hormoni polipeptidici - metabolism celular - secreie celular

CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I

ef.lucr.dr.LAVINIA NOVEANU

34

(b) Sistemul guanilatciclaz - GMPc

CARACTERISTICI formarea GMPc are sub aciunea guanilatciclazei (GC) form membranar (GCm) form citoplasmatic sau solubil (GCs) degradarea GMPc are loc sub aciunea GMPc fosfodiesterazei are ataat proteinkinaza G (PKG) ca mesager teriar

CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I

ef.lucr.dr.LAVINIA NOVEANU

35

ROLURI (a) Relaxarea musculaturii netede vasculare peptidul natriuretic atrial (ANP) activeaz GCm oxidul nitric (NO) activeaz GCs (b) Mediaz o parte din efectele acetilcolinei asupra receptorilor muscarinici (cuplai cu GCm) deschidera canalelor de K+

CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I

ef.lucr.dr.LAVINIA NOVEANU

36

(c) Sistemul derivailor de fosfatidil-inozitol

IP3 i DAG se formeaz din inozitolfosfolipidele (PIP2) membranare sub aciunea fosfolipazei C membranare, activat de proteina Gq cuplat cu receptorii 1 adrenergici i colinergici (M1,M3) DAG are ataat proteinkinaza C membranar (PKC) ca mesager teriar

CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I

ef.lucr.dr.LAVINIA NOVEANU

37

ROLURI (a) Regleaz activitatea contractil a fibrei musculare netede IP3 activeaz canale de Ca2+ din membrana reticulului sarcoplasmatic eliberarea Ca2+ n citoplasm cu activarea contraciei musculare DAG activeaz sistemul PKC modularea contraciei muchiului neted reglarea metabolismului celular (b) Mediaz efectele celulare pentru: neurotransmitori (ex: noradrenalina, adrenalina, etc) neurohormoni hipotalamici (ex: TRH, ADH, oxitocin, etc) hormoni gastro intestinali (ex: gastrina, colecistokinina, etc)
CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I ef.lucr.dr.LAVINIA NOVEANU 38

(d) Sistemul Ca2+ - CALMODULIN

CARACTERISTICI cel mai complex sistem de semnalizare intracelular activat prin creterea Ca2+ citosolic inactivat prin scderea Ca2+ citosolic

Ca2+ Ca2+ Canalul de Ca2+ - sarcolem - membrana RS

CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I

Pompa de Ca2+ - sarcolem - membrana RS

ef.lucr.dr.LAVINIA NOVEANU 39

ROLURI (a) Declaneaz contracia fibrei musculare netede prin activarea

myosin light C kinasei (MLCK)

fosforileaz lanul uor miozinic

Miozina (b) Mediaz efectele celulare ale hormonilor hipotalamici (c) Moduleaz activitatea enzimelor implicate n sistemele de semnalizare intracelular
CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I ef.lucr.dr.LAVINIA NOVEANU

CAMPK
40