. ANLISIS DE MOSTOS Y VINOS.

ANEXO VIII. ANLISIS DE MOSTOS Y VINOS.

NDICE

1.- ANLISIS DEL MOSTO.

1.1.- Determinacin del contenido en azcar. 1.2.- Determinacin del pH. 1.3.- Determinacin de la Acidez Total.

2.- ANLISIS DEL VINO.

2.1.- Masa Volumtrica a 20 C y Densidad Relativa a 20 C. 2.2.- Grado Alcohlico Volumtrico. 2.3.- Determinacin del Extracto Seco. 2.4.- Determinacin del pH. 2.5.- Determinacin de la Acidez Total. 2.6.- Determinacin de la Acidez Voltil. 2.7.- Determinacin de Dixido de Azufre. 2.8.- Determinacin el cido Tartrico. 2.9.- Determinacin del cido Ctrico. 2.10.- Determinacin del cido Lctico. 2.11.- Determinacin del cido Mlico.

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1.- ANLISIS DEL MOSTO

Se analizan en el mosto principalmente su contenido en azcar, el pH y la acidez total.

1.1.- Determinacin del contenido en azcar.

Se emplea el refractmetro, un instrumento sencillo que determina el contenido de azcar midiendo el ndice de refraccin del mosto. Las unidades del refractmetro suelen ser grado Brix o Baum.

1.2.- Determinacin del pH.

Se utilizan los pH-metros, se calibran con bitartrato potsico, que se prepara poniendo una pequea cantidad de dicho compuesto en alrededor de 50 ml de agua. El pH de esta solucin ser igual a 3.56 a 20C, la mayora de los vinos slo varan de este valor entre 0.5 y 1 unidad de pH.

1.3.- Determinacin de la Acidez Total.

La acidez total se determina con una solucin de NaOH de concentracin conocida, llevando la muestra previamente hasta el pH de 8.4-8.6. El punto final de valoracin se obtiene mediante un indicador (fenolftalena) o bien mediante un pH-metro.

Para hacer la valoracin se ponen 10ml de mosto en un vaso de precipitados de 250ml y se aaden 100ml de solucin despus de colocar el vaso sobre un agitador magntico y de agitar a velocidad moderada, se

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aaden unas gotas de fenolftalena y por ltimo se procede a valorar con una solucin de NaOH (0.05N) con una bureta de 25ml, hasta que el pH de la muestra sea de 8.4-8.6 (cuando vire la fenolftalena). Se anota el volumen requerido de NaOH y se calcula la Acidez total, expresada en cido tartrico segn la siguiente frmula:

g c. Tartrico/100ml=

mlNaOH NNaOH 75 100 mldevino

2.- ANLISIS DEL VINO

En funcin del Reglamento de la CEE para la determinacin de los mtodos de anlisis aplicados en el sector del vino se desarrollan a continuacin los principales mtodos de anlisis aplicables al vino.

2.1.- Masa Volumtrica a 20 C y Densidad Relativa a 20 C.

Masa volumtrica a 20 C: Cociente entre la masa de un determinado volumen de vino o mosto a una temperatura de 20 C por ese volumen. Se expresa como grados por mm y el smbolo que adopta es r2 20 C.

Densidad relativa a 20 C: Es la relacin en forma decimal, entre la masa de un cierto volumen de vino o mosto a una temperatura de 20 C y la masa del mismo volumen de agua tambin a 20 C.

Fundamento del mtodo.

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La masa y densidad a 20C se determinan en una muestra de ensayo mediante:

-Picnometra. -Aerometra o densimetra con balanza hidrosttica.

A. Picnometra.

Material de laboratorio.

Picnmetro. Es de vidrio con una capacidad de 100 ml, con termmetro mvil, sus mediciones estn graduadas en dcimas de grado. El picnmetro se compone de un tubo de 25 mm de largo con 1 mm de dimetro y colocado en posicin lateral. El tubo lateral est cubierto por un tapn que sirve de cmara de dilatacin.

Frasco. Es del mismo volumen y masa que el picnmetro. Se ajusta este recipiente a la estructura global del picnmetro.

Balanza de dos platos: Tiene una capacidad mnima de 300g.

Procedimiento del mtodo.

Se incorpora el frasco en el plato izquierdo de la balanza y el picnmetro en el derecho y se equilibran. Se llena con cuidado el picnmetro con agua destilada, se coloca el termmetro y se introduce dentro del recipiente termostato. Se agitan continuamente hasta que el termmetro marque una temperatura constante. Se enrasa con agua todo el

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tubo lateral, se seca y se incorpora el tapn y se va observando la temperatura. Se pesa el picnmetro lleno de agua. Se deben efectuar las siguientes mediciones;

-Tara del picnmetro en vaco. -Volumen de 20C -Masa de agua a 20C

B. Aerometra.

Para este mtodo se utiliza un aparato llamado aremetro. Los aremetros son de cuerpo cilndrico y de un dimetro de 3 mm. Para medir la densidad de los vinos desalcoholizados, vinos dulces, mostos se usan por lo menos cinco juegos de aremetros de:

1000->1030 1030->1060 1060->1090 1090->1120 1120->1150

Estos cinco aparatos se gradan segn la masa volumtrica a 20 C.

Material de laboratorio.

Termmetro: graduado en grados Celsius

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Probeta cilndrica. De 36 mm de dimetro interno y 320 mm de altura.

Procedimiento del mtodo.

Se vierte en la probeta cilndrica de 36 mm una cantidad de 250 ml de muestra; se introduce el aremetro y el termmetro. Se observa lo que marca el termmetro pasado 1 minuto de tiempo, despus de haber equilibrado la temperatura. Se retira el termmetro y se anotan las mediciones de masa volumtrica que queda sobre el tallo del termmetro.

2.2.- Grado alcohlico volumtrico.

Grado alcohlico volumtrico. Se define como grado alcohlico volumtrico a los litros de etanol contenidos en 100 ml de vino medidos ambos volmenes a una temperatura de 20 C y se representa el grado alcohlico como (% vol).

Fundamento del mtodo.

-Destilacin del vino mediante suspensin de hidrxido de calcio. -Determinacin de la masa volumtrica del destilado por picnometra.

Mtodos usuales:

-Determinacin del grado alcohlico por aerometra. -Determinacin del grado alcohlico por densiometra o con hidrosttica. -Determinacin del grado alcohlico por refractomera. balanza

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Para la obtencin del destilado se utiliza el siguiente material.

Material de laboratorio.

- Matraz de fondo redondo de 1 litro de capacidad. - Columna rectificadora de 20 cm de altura. - Fuente de calor. - Una probeta tipo Watson. - Refrigerante terminado en tubo que conduce el destilado hasta el matraz, conteniendo este ltimo una cantidad de pocos mml de agua destilada. - Aparato de arrastre de vapor de agua, formado por:

1. Generador de vapor de agua. 2. Borboteador. 3. Columna rectificadora. 4. Recipiente.

Se debe destilar 5 veces consecutivas una mezcla hidroalcohlica de 10% en volumen. Despus de la quinta destilacin la muestra debe presentar un grado de 9.9 % vol. sin que se produzca una prdida de moles superior a 0.02% vol. durante el proceso de cada destilacin.

Reactivos:

- Hidrxido de calcio 2M, en suspensin. En los vinos jvenes y espumosos deben de eliminarse previamente la presencia de dixido de carbono de forma que se agita una cantidad de vino de 250 a 300 ml en un

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erlenmeyer de capacidad 500 ml. Se incorpora de nuevo a un matraz una cantidad de 200 ml de vino, se anota su temperatura, se vierte a un aparato de destilacin o al borboteador del aparato de arrastre por vapor de agua, se aaden 20 ml de hidrxido clcico y fragmentos porosos inertes. Se recoge un volumen de estilado de 198-199 ml y se completa a 200 ml con agua destilada y a una T igual a la inicial del destilado.

Ejemplo de clculo del grado alcohlico de un vino, mediante picnometra con balanza de dos platos.

En primer lugar se

deben de determinar las constantes del

picnmetro y el clculo de la masa volumtrica y la densidad relativa.

Para el picnmetro lleno de destilado.

Ejemplo:

Tara = Picnmetro +destilado a T (C). T=28.70C P= 2.8074 g Masa del destilado a T(C) = P+ mP".

2.3.- Determinacin del extracto seco.

Extracto seco: Se entiende por extracto seco o materia seca al conjunto de sustancias que no se volatizan en unas determinadas condiciones fsicas.

Extracto reductor: Es el extracto seco menos los azcares totales que

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exceden de 1 g/L, el sulfato potsico y todas aquellas substancias qumicas que pudieran haberse aadido al vino. El extracto se expresa en (g/L) y presenta un porcentaje que va desde 0.5 a 2.

Fundamento del mtodo. "Mtodo densmetro".

El extracto seco total se calcula a partir de la densidad del vino desalcoholizado y se expresa el extracto como la cantidad de sacarosa disuelta en una cantidad de agua que llegue a formar una cantidad de 1 L. Para dar una solucin con la misma cantidad de residuo de vino sin alcohol.

Procedimiento del mtodo.

Se calcula la densidad del vino desalcoholizado (dr):

dr = dv + da + 1,000

dv = densidad relativa del vino a 20 C da = densidad relativa de la mezcla hidroalcholica que tiene el mismo grado alcohlico que tiene el mismo grado alcohlico que el vino, medida tambin a 20C. 1,000 = Coeficiente.

En cuanto a la expresin de los resultados, el extracto seco total se expresa en g/L con 1 decimal.

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2.4.- Determinacin del pH.

Fundamento del mtodo.

El pH se obtiene a travs de la medida realizada entre dos electrodos sumergidos en el lquido que se estudia para la medida de la diferencia de potencial.

Material de laboratorio

- pH metro graduado. - Electrodo. - Electrodo de colomenados de cloruro potsico. - Electrodo combinado.

Reactivos.

Solucin tampn:

1. Solucin de tartrato de cido de potasio (C4H5KO6) a 20 C. 2. Solucin de ftalato cido de potasio 0.05M. 3. Solucin compuesta por fosfato monopotsico (KH2PO) y fosfato bipotsico (K2HPO). Procedimiento del mtodo.

- Preparado de la muestra de vino para su anlisis.

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- Se introduce el electrodo en la muestra analizada cuya temperatura debe estar programada entre 20-25 C y se lee el valor del pH. De cada muestra se efecta dos determinaciones de lectura.

Expresin del resultado.

El pH del vino se expresa con dos decimales.

2.5.- Determinacin de la Acidez Total.

La acidez es la suma de los cidos cuando se lleva a un pH=7 aadiendo una solucin alcalina. La valoracin se hace mediante potenciometra o valoracin con azul de bromotimol como indicador de final reaccin.

Reactivos.

- Solucin tampn pH= 7. - Fosfato monopotsico (KH2PO4) - Solucin molar de hidrxido sdico 0.01 M (NaOH). - Solucin de azul de bromotiol de 4g/L. Al 96% (C27H28Br2O5S)4. Material.

1. Trompa de vaco. 2. Matraz kitasaco de 500ml.

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3. Potenciometro con escala graduada en unidades de pH y electrodos. 4. Vaso de precipitado.

Procedimiento del mtodo.

Se prepara la muestra. Al vino se le elimina el dixido de carbono. Se coloca 50 ml de vino en un matraz kitasato y se realiza el vaco con trompa de agua. Se efecta un calibrado de pH a 20 C, mediante la solucin tampn de pH=7 a 20 C. Para obtener el patrn de coloracin, se vierte en un vaso de precipitado 25ml de agua destilada hervida con 1ml de azul de bromotimol y 10ml de vino. Se aade a la solucin hidrxido de sodio 0.1 M hasta obtener una coloracin verde azulada. Se denominar n al nmero de mililitros de solucin de hidrxido sdico 0.1 M.

Clculo.

La acidez expresada en meq/L ser:

A = 10 n A2 = 0.075 acidez total expresada en gramos de cido tartrico/L

2.6.- Determinacin de la Acidez Voltil.

La acidez voltil es la formada a partir de los cidos grasos pertenecientes a la serie actica de los vinos.

Fundamento del mtodo.

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Valoracin de los cidos voltiles del vino por arrastre de vapor de agua y rectificacin de los vapores (previamente se elimina el dixido carbono del vino).

Reactivos.

1.cido tartrico cristalizado. 2. Solucin hidrxido sdico 0.1 M (NaOH). 3. Solucin de fenolftalena al 1% en alcohol neutro de 96% vol. 4.cido clorhdrico. 5. Solucin yodo 0.005 M. 6. Yoduro potsico cristalizado (KI). 7. Engrudo de almidn de 5g/L. 8. Solucin saturada de borato sdico (Na2B4O7.10H2O) Material de laboratorio.

- Aparato de arrastre de vapor de agua. - Trompa de vaco. - Matraz kitasato.

Procedimiento del mtodo.

Preparacin de la muestra eliminando el dixido de carbono. Se aaden 50 ml de vino al kitasato y se hace vaco por trompa de agua y de 1 a 2 minutos de agitado. Se realiza el arrastre por vapor de agua. Se hecha al borboteador 20 ml de vino sin carbnico. Se aade 0.5g de cido tartrico. Se recoge una cantidad de 250 ml de destilado y se valora.

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Tambin se puede valorar aadiendo una solucin de hidrxido sdico 0.1 M con 2 gotas de fenolftaleina. Se aaden 4 gotas de cido clorhdrico diluido, 2 ml de engrudo de almidn y cristales de yoduro de potasio. Se valora el dixido de azufre con una solucin de yodo 0.005 M.

Clculo.

La acidez voltil se expresa en meq/L.

A = 5( n 0.1 n2 0.05 n" ).

Acidez voltil se expresa en gramos de cido acetico/L con dos decimales, ser 0.300(n 0.1 n2 0.05 n).

R = 0.7 meq/L = 0.04g de cido actico/L.

2.7.- Determinacin de Dixido de Azufre.

El dixido de azufre est presente en el vino de la siguiente forma HSO3, cuyo equilibrio viene en funcin del pH y de la temperatura. El dixido de azufre total para expresarlo, su funcin viene dado como:

- Mtodo de referencia para el caso del vino. Arrastre del dixido de azufre en una corriente de aire o de nitrgeno, fijacin y oxidacin por borboteo en una solucin diluida y muestra de perxido de hidrgeno. Se valora el cido sulfrico valorado con hidrxido sdico.

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- El arrastre en fro (10 C) extrae la concentracin del dixido de azufre. En caliente esta corriente a 100 C se extrae el dixido de azufre total.

- Se determina el dixido de azufre por valoracin y yodometra directa tras una hidrlisis alcalina. La suma del dixido de azufre libre permite obtener el dixido de azufre total.

Material y aparatos.

1.- Se utilizan 4 tubos de ensayo que se refrigeran a 45, 31527 y 10 mm. El flujo de gas recorre el aparato de 40l/h con una trompa de agua de 20 a 30 cm para que as el caudal sea constante. Conviene colocar un medidor de flujo de tubo en el borboteador y frasco. 2.- Microburetra. 3.- cido fosfrico al 85%. 4.- Perxido de hidrgeno H2O2. 5.-Reactivo indicador rojo de metilo. Alcohol del 50%. 6.- Solucin hidrxido de sodio (NaOH) 0.01M.

Procedimiento del mtodo.

Determinacin del dixido de azufre libre. El vino se debe mantener en un frasco lleno y cerrado durante dos das antes de proceder a la determinacin. Se coloca en el borboteador de 2 a 3 ml de solucin de perxido de hidrgeno con 2 gotas de reactivo de indicador, se neutraliza la solucin de perxido de hidrgeno con solucin de hidrgeno de sodio 0.01M y se acopla el borboteador al aparato.

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En el matraz de 250ml se coloca el matraz en el borboteador durante 15 minutos. El dixido de azufre libre se oxida a cido sulfrico, se retira del borboteador y se valora el cido formado con la solucin de hidrxido sdico 0.01M.

Se expresa el dixido de azufre en mg/L sin decimales.

2.8.- Determinacin el cido Tartrico.

El cido tartrico se determina como racemato de calcio y se determina gravimtricamente. Se determina con una comparacin volumtrica. Las condiciones de precipitacin es volumen empleado, pH y concentracin de iones que precipitan.

Se le aade al vino cido metartrico, se hidroliza. El cido tartrico se asla mediante una columna cambiadora de aniones. El diluido se determina por espectrofotometra dando una coloracin roja el cido vandico.

Mtodo Gravimtrico.

En este mtodo se utilizan los siguientes reactivos:

1. Solucin de acetato clcico. 1.1. Carbonato de calcio 10g/L. 1.2. cido actico 25g. 2. Racemato de calcio cristalizado (CaC4O6H4.4H2O). 3. Licor de precipitacin.

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(1). A los vinos que no se les hallan incorporado cido metartrico, se realiza el siguiente procedimiento: Se aade en un vaso de precipitado 500 ml de licor de precipitacin y 10 ml de vino y se deja en reposo durante 12 horas. Secar en estufa a una temperatura de 70 C hasta que se alcance un peso constante y por ltimo pesar.

(2). A los vinos que se les hallan aadido cido metatartrico se proceder a una hidrlisis de este cido de la siguiente forma: Se aade en un erlenmeyer 10 ml de vino y 0.4 ml de cido actico puro, se cierra y lleva a ebollucin media hora. El lquido una vez fri se pasa a un vaso de precipitado y se procede como el paso (1).

El cido metatartrico, se expresa como cido tartrico. La cantidad de cido tartrico por litro de vino ser:

- 384.5 p, expresada en meqv. - 28.84 p, expresada en gramos de cido tartrico. - 36.15 p, expresada en gramos de tartrato cido de potasio.

Reactivos

1.cido clorhdrico. 2. Solucin EDTA 0.05 M. 3. Solucin hidrxido sdico del 40% (NaOH). 4. Indicador complexiomtrico del EDTA.

Procedimiento del mtodo.

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Despus del pesado se incorpora el precipitado de racemato de calcio en un matraz y se disuelve en 10 ml de cido clorhdrico. Se aaden 5 ml de hidrxido sdico al 40% y 30 mg de indicador. Se denominar n al nmero de milmetros empleados.

La cantidad de cido tartrico por litro de vino en meqv es igual a 5 n.

La cantidad de cido tartrico por litro de vino, expresado en gramos de cido tartrico es igual a 0.375n.

La cantidad de cido tartrico por litro de vino expresado en gramos de cido potasio es igual a 0.470n. 2.9.- Determinacin del cido Ctrico.

El cido ctrico se transforma en oxaloacetato mediante una reaccin catalizada por la citrato-liasa (CL) citrato oxalato + acetato.

En presencia de malato-deshidrogenasa (MDH) y de lactato deshidrogenasa (LDH), el oxalacetato y su derivado de descarboxilacin, el piruvato se reduce en L-malato y L-lactato por la nicotinamida -adenina -dinucletida reducida (NADH). Oxaloacetato + NADH+H+L-

malato+NDA+Piruvato+NADH+H+L-lactato+NAD+.

La cantidad de NADH oxidada a NAD+ en estas reacciones es proporcional al citrato presente. La oxidacin de la NADH se mide

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mediante la disminucin de su absorbancia a una longitud de onda de 340 nm2.

Reactivos.

1. Tampn pH=7.8 2. Solucin de nicotinamida-adenin-dinucletido -reducida (NADH). 3. Solucin de malato-deshidrogenasa lactato (MDH/LDH). 4. Citrato liasa (CL). 5. Polivinil polipinolidona (PVPP).

Material de laboratorio.

- Espectofotmetro con medidas de 340nm de absorcin de NADH. - Cubetas de vidrio de 1 cm de trayecto ptico. - Micropipetas para tomar volmenes entre 0.02 ml y 2 ml.

Preparacin de la muestra

La determinacin de citrato se efecta directamente sobre el vino sin

decoloracin ni dilucin, cuando el contenido de cido ctrico sea menor a 400 mg/L.

El vino tinto se recomienda tratarlo antes con PVPP, se pone en

suspensin al agua alrededor de 0.2g de PVPP y se deja 15 minutos en reposo. Se filtra sobre filtro de pliegues.

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. ANLISIS DE MOSTOS Y VINOS.

Se aade una cantidad de vino de 10ml a un erlenmeyer, el PVPP

hmedo se extrae con una esptula de vidrio. Se agita durante 3 minutos y se filtra de nuevo.

Procedimiento del mtodo.

Se ajusta la cantidad de onda a 340 nm y se realizan las medidas de absorbancia en cubetas de 1 cm. La absorbancia de debe ajustar con respecto al aire. Se coge una cantidad de 1 ml de testigo muestra solucin. Se mezcla transcurridos unos 5 minutos, se espera a que finalice la reaccin y se leen las absorbancias de la muestra DA = DAM.DAT.

Clculo.

El contenido de cido ctrico se expresa en (mg/L) miligramos litro. La concentracin en mg/l viene dada por la frmula general:

V= volumen total en ml. V= volumen de la muestra en ml. PM = peso molecular de la sustancia que se va a diluir. (cido ctrico). d= trayecto ptico de la cubeta. e= coeficiente de excitacin del NADH a 340 nm, e=6.3 mmol/cm. C= 479.DA.

2.10.- Determinacin del cido Lctico.

En presencia de nicotinamida adenin-dinucletido (NAD) el cido lctico total (L-lactato y D-lactato) se oxida a piruvato mediante una

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. ANLISIS DE MOSTOS Y VINOS.

reaccin que es catalizada por L-lactato deshidrogenasa (L-LDH) y Dlactato deshidrogenasa (D-LDH).

El equilibrio de la reaccin se desplaza en el sentido del lactato. La eliminacin del piruvato del medio de reaccin desplaza el equilibrio hacia la formacin de piruvato.

En presencia de L-glutamato, el piruvato se transforma mediante una reaccin catalizadora en L-alanina esta reaccin catalizadora es llevada a cabo por la glutamato-piruvato-transaminasa (GTP).

La formacin de NADH que se mide por el muestreo de absorbancia a una longitud de onda de 340nm es siempre proporcional a la cantidad de lactato presente.

El cido L-lctico se determina mediante dos reacciones:

El cido lctico, separado mediante una columna separadora de aniones, pasa a oxidarse a etanol y es determinado por colorimetra despus de que haya reaccionado con nitroprusiato y pipesidina.

Reactivos.

1. Solucin tampn pH= 10 2. Solucin de nicotinamida-adenin-dinucletido (NAD) de alrededor de 40 a 10 y 3M, se disuelven 900g en 30 ml de agua destilada. Se mantiene estable la solucin hasta 1 mes aproximadamente a una temperatura de 4 C.

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3. Suspensin glutamato-piruvato-transaminasa (GPT) de 20 mg/ml. 4. Suspensin de L-lactato deshidrogenasa (L-LDH) de 5mg/ml.

Material de laboratorio.

- Espectrofotmetro con mediciones de 340nm, mximo de absorcin de la NADH. - Cubetas de vidrio de 1 cm de trayecto ptico. Micropipetas.

Procedimiento del mtodo.

Si la concentracin de cido lctico es menor a 100mg/L, la concentracin de lactato se efecta directamente sobre el vino, pero si no diluir con agua bidestilada.

Determinacin del cido lctico.

La solucin tampn se lleva a una temperatura entre 20 a 25 C antes de proceder a la dosificacin. Se ajusta la longitud de onda a 340nm. Posteriormente se introducen en las cubetas de vidrio las siguientes soluciones:

Una vez preparada la solucin muestra y blanco, se mezcla con un agitador de vidrio y pasados unos 5 minutos se miden las absorbancia de la solucin blanco y muestra.

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Se aaden 0.02 ml de (L-LDH) y 0.05 ml de (D-LDH), se mezcla y se espera a que finalice la reaccin y se miden las absorbancia.

Por ltimo se determina las diferencias de absorbancia para el blanco y la muestra.

Diferencia absorbancia blanco (DAB). Diferencia absorbancia muestra (DAM). DA= DAM.DAB determinacin del cido L-lctico y del cido Dlctico.

La concentracin del cido lctico se expresa en (g/L) con 1 decimal.

Clculo.

Frmula general

1. V= volumen total en mml de cido L-lctico. 2. V= volumen total en mml de cido D-lctico. 3. v= volumen de la muestra en mml. 4. PM= peso molecular de la sustancia que se va a determinar. 5. EeE= coeficiente de excitacin de la NADH a 340nm.

C= 0.164.DA.

2.11.- Determinacin del cido Mlico.

Fundamento del mtodo

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En presencia de nicotamina-adenin-dinucletido (NAD) el cido L-mlico (L-malato) se oxida y pasa a oxaloacetato en una reaccin catalizada por la L-malato-deshidrogenasa (L-.MDH). El equilibrio de la reaccin se desplaza en sentido de malato. La eliminacin del oxalato de la reaccin desplaza el equilibrio a la formacin de oxaloacetato.

En presencia de L-glutamato el oxaloacetato se transforma en Laspartato, que es una reaccin catalizada por (GOT) glutamatooxaloacetato-transminasa.

La formacin de NADH, medida por el aumento de la absorbancia con longitud de onda de 340nm es proporcional a la cantidad de L-malato presente.

Reactivos

1. Solucin tampn pH= 10. 2. Solucin de nicotamina-adenin-dinucletido (NAD). Se disuelven 420mg de NDA en 12 ml de agua bidestilada mantenindolo en solucin estable durante 1 mes a 4 C. 3. Suspensin del glutamato-oxaloacetato (GOT9 de 2 mg/ml. 4. Suspensin de L-malato-deshidrogenasa (L-MDH) de 5 mg/ml.

Material de laboratorio.

- Espectrofotmetro de medidas de longitud de onda de 340nm. - Cubetas de vidrio. - Micropipetas.

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Procedimiento del mtodo.

Se ajusta la longitud de onda del espectrofotmetro realizndose las medidas de absorbancia en cubetas de 1 cm de trayecto ptico con respecto al agua.

Clculo.

Se procede igualmente que en el caso de cido lctico.

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