Curs Biofizica MG 2008-2009 Fotobiologie

Radiaii. Noiuni generale. Elemente de fotobiologie Radiaie = propagarea n spaiu a unor cmpuri de fore sub form de unde sau a unor fluxuri de particule. Clasificarea radiaiilor Se face dup mai multe criterii: 1. n funcie de natura lor: - Radiaii electromagnetice (EM) propagarea sub form de unde transversale a undelor electromagnetice - Elastice: propagarea sub form de unde longitudinale a vibraiilor unui mediu elastic - Corpusculare: fascicule de particule de mare energie 2. n funcie de energie, n raport efectul lor asupra substanei cu care interacioneaz: - Ionizante cele care sunt capabile s produc ionizarea, datorit energiei mari - Neionizante radiaii de energie mic, incapabile s produc ionizarea. Dualismul und - corpuscul Unda reprezint propagarea n spaiu a variaiei unui parametru fizic. Poate fi declanat de o micare oscilatorie a unor particule materiale, dar se propag n spaiu la distan, particulele rmnnd s oscileze n jurul unor poziii fixe. Prin intermediul interaciunilor fizice specifice, unda determin micri oscilatorii sau alte efecte asupra particulelor aflate n calea ei. Undele pot fi transversale (oscilaia se propag perpendicular pe direcia de naintare a undei; de exemplu lumina und electromagnetic transversal) sau longitudinale (oscilaia se propag paralel cu direcia de naintare a undei; de exemplu unda sonor und mecanic longitudinal). Viteza de propagare a undei difer de viteza de oscilaie a particulelor materiale. Pornind de la incapacitatea fizicii clasice de a explica unele fenomene, de exemplu efectul fotoelectric sau radiaia corpului negru, fizica cuantic modern asociaz fiecrei unde o particul fr masa de repaus (fotonul pentru unda electromagnetic) dualitatea und - corpuscul. Manifestrile ondulatorii sunt evidente la frecvene joase, cele corpusculare la frecvene nalte. Interaciunea radiaiilor cu substana La interaciunea cu substana, radiaia cedeaz o parte din energia sa, n general conform unei legi de absorbie exponeniale: I = I0e-kd unde I0 reprezint intensitatea incident, I intensitatea emergent, d grosimea stratului de substan strbtut, k coeficient specific de atenuare (acesta depinde de natura radiaiei i de caracteristicile substanei) Energia cedat se transform n alte forme de energie, producnd efecte diferite cu att mai importante cu ct energia absorbit de substan este mai mare. Interaciunea radiaie - substan se realizeaz la diferite nivele de organizare a materialului absorbant: - La nivel molecular efecte termice, excitri vibraionale i rotaionale ale moleculelor, reacii chimice; - La nivel atomic, producnd excitri ale ionilor sau ionizri; - La nivel nuclear excitri ale nucleului sau declanarea unor reacii nucleare.
1

Curs Biofizica MG 2008-2009 Fotobiologie

Generarea i propagarea radiaiilor electromagnetice Radiaiile electromagnetice pot fi produse de micri oscilatorii ale unor sarcini electrice. Cmpul electrostatic produs n jurul unei sarcini electrice Q, aflate n repaus, la Q distana r are valoarea: E= 4r 2 n cazul n care sarcina efectueaz o micare oscilatorie, intensitatea cmpului electric variaz. Simultan, datorit sarcinii electrice n micare apare i un cmp magnetic a crui inducie B este orientat perpendicular pe directia cmpului electric E. Prin urmare, o sarcin electric oscilant creeaz un cmp electric i un cmp magnetic reciproc perpendiculare. Maxwell a artat c cele dou cmpuri se propag n spaiu cu vitez constant (viteza luminii n vid) pe o direcie perpendicular pe cei doi vectori (Fig. 1) und electromagnetic transversal. Parametrii caracteristici undelor electromagnetice transversale Mrimile caracteristice undelor sunt perioada T (timpul dup care oscilaia se repet), lungimea de und (spaiul parcurs ntr-un interval de timp egal cu o perioad T) i frecvena (inversul perioadei T). Relaiile care exist ntre mrimile caracteristice undelor sunt urmtoarele: unde c reprezint viteza de propagare a undei.

Fig. 1 Componentele undei electromagnetice transversale Undele electromagnetice sunt unde transversale care au component magnetic i o component electric, vectorii electric i magnetic fiind perpendiculari unul pe cellalt i pe direcia de propagare (Fig. 1). Din punct de vedere al caracteristicilor ondulatorii spectrul radiaiilor electromagnetice se ntinde de la undele radio lungi caracterizate prin frecvene mici i lungimi de und mari (km) pn la razele de mare energie, de frecvene mari i lungimi de und mici () (Fig. 2). Conform relaiei lui Planck, energia unei unde electromagnetice este: E = h = hc/ unde h = 6,62 *10-34 Js, constanta lui Planck, iar c = 3* 108 m/s, viteza luminii n vid.

Curs Biofizica MG 2008-2009 Fotobiologie

Fig. 2 Spectrul radiaiilor electromagnetice Clasificarea radiaiilor electromagnetice Din punct de vedere al energiei transportate, radiaiile electromagnetice se clasific n: I. Radiaii neionizante II. Radiaii ionizante La interacia cu substana, radiaiile electromagnetice cedeaz energie atomilor i moleculelor. Efectele interaciei pot fi: - creterea energiei de agitaie termic a atomilor i moleculelor - excitarea atomilor i moleculelor (electronii ce intr n alctuirea acestora pot trece pe nivele de energie superioare, tranziiile fiind cuantificate) - ionizarea atomilor i moleculelor (extragerea electronilor din nveliurile electronice ale acestora). Elemente de fotobiologie Fotobiologia studiaz interaciunea radiaiilor electromagnetice neionizante cu sistemele biologice. Energia de ionizare a principalilor atomi care intr n structura biomoleculelor este: 13,54 eV pentru hidrogen, 13,17 pentru oxigen, 11,24 pentru carbon i 14,51 pentru azot (1 eV = 1,6 10-19 J). Se observ c energia cea mai mic de ionizare este cea pentru carbon. Se poate calcula lungimea de und a radiaiei care are energia suficient pentru a produce ionizarea carbonului: E = hc/ = hc/E = 6,62 10-34 3 108/11,241,6 10-19= 110 nm n spectrul radiaiilor electromagnetice, numai radiaiile X i ndeplinesc condiia ca lungimea de und s fie mai mic de 100 nm, deci numai acestea pot produce ionizri ale principalilor atomi din componena materiei vii. De aceea, radiaiile X i se numesc radiaii ionizante. Radiaiile cu lungimea de und mai mare de 100 nm, ncepnd cu UV (radiaii ultraviolete) extrem (100-190 nm) i mergnd spre undele radio lungi sunt radiaii neionizante. Radiaiile neionizante din domeniul radiaiilor vizibile i ale celor cu lungimi de und apropiate de acestea i interacia lor cu substana constituie obiectul de studiu al
3

Curs Biofizica MG 2008-2009 Fotobiologie

fotobiologiei. Ele sunt radiaii cu care aproape toate sistemele vii convieuiesc i sunt absorbite selectiv de ctre moleculele componente ale sistemelor vii. Interaciunea radiaiilor neionizante cu substana Se realizeaz prin: 1. Transferul energiei undelor electromagnetice ctre molecule. Energia total a moleculelor E se poate scrie astfel: E = Ee + Ev + Er unde Ee energia electronilor, Ev energia de vibraie, Er energia de rotaie Prin creterea energiilor de rotaie i vibraie are loc nclzirea substanei (creterea agitaiei termice): E = Ev + Er Radiaiile infraroii (IR) pot mri numai energiile de vibraie i rotaie ale moleculelor, pe cnd radiaiile ultraviolete pot mri toate tipurile de energie. 2. Transferul energiei undelor electromagnetice ctre electronii periferici ai atomilor i moleculelor, Ee. Prin acest transfer se produce excitarea atomilor i moleculelor, respectiv trecerea lor pe nivele de energie superioare. Conform principiului de incertitudine al lui Heisenberg, electronii nu pot rmne mult timp n stare excitat (10-8 10-3 s). Dup aceste interval de timp, electronii se dezexcit, iar dezexcitarea poate fi de dou feluri: a dezexcitare radiativ b dezexcitare neradiativ. Dezexcitarea radiativ este numit i fotoluminescen. Absorbia fotonului este urmat de emisia unui foton cu o lungime de und mai mare sau egal cu cea a fotonului absorbit. Exist dou tipuri de fotoluminescen: fluorescena i fosforescena. Atunci cnd lungimea de und n reemisie este egal cu cea a fotonului absorbit, fluorescena se numete de rezonan. Durata fluorescenei este foarte mic, practic emisia se face n acelai timp cu excitarea. n fosforescen emisia continu i dup ncetarea excitrii. 3. Transferul energiei undelor electromagnetice ctre molecule, avnd drept rezultat creterea reactivitii chimice a acestora ori producerea unor reacii fotochimice. Dintre aceste reacii fotochimice se pot meniona: izomerizri i rearanjri interne ale moleculei, polimerizri sau combinri ntre molecule, fotosensibilizri. Reacii fotochimice se desfoar conform legilor fotochimiei. Legile fotochimiei 1. Legea Grotthus-Draper: radiaia trebuie s fie absorbit de o molecul nainte ca reacia fotochimic s aib loc; dac substana iradiat nu absoarbe radiaii, nu se produce reacia fotochimic. 2. Legea Stark-Einstein: radiaia absorbit nu duce n mod obligatoriu la o reacie fotochimic, dac totui se produce reacia, pentru fiecare molecul transformat este necesar un singur foton. n legtur cu aceasta se definete randamentul cuantic : = Nm/Nf Nm numrul de molecule (respectiv moli) care au reacionat Nf numrul de fotoni (respectiv Einsteini) care au fost absorbii 1 Einstein = NA * h 3. Legea Bunsen-Roscoe: cantitatea de substan (Q) care intr ntr-o reacie fotochimic este proporional cu fluxul de energie radiant () i cu timpul de iradiere (t) Q=kt Rezult c viteza unei reacii fotochimice este proporional cu fluxul incident.

Curs Biofizica MG 2008-2009 Fotobiologie

n sistemele biologice efectele la nivel molecular determin efectele la nivel celular sau la cel al organismului. Efectele radiaiilor vizibile Fotosinteza Const n conversia energiei radiante n energie chimic folosit n sinteza unor molecule complexe. Celulele plantelor verzi conin organite celulare numite cloroplaste, n care se afl pigmeni clorofilieni i carotenoizi. Clorofilele sunt molecule complexe care conin grupri cromofore n sisteme de duble legturi conjugate. Prin absorbia luminii de ctre gruprile cromofore se produce excitarea electronilor pe nivele superioare de energie. Revenirea lor pe nivelul fundamental se face n trepte, de-a lungul lanului transportor de electroni. n fiecare treapt are loc o reacie de fosforilare a ADP cu formare de ATP. Astfel, energia luminoas este transformat n energie chimic nmagazinat n ATP. Fotosinteza se realizeaz prin dou tipuri de reacii: - reacii la lumin, direct dependente de energia luminoas (faza fotolitic) - reacii la ntuneric, n absena luminii (faza de sintez propriu-zis) ntr-o variant foarte simplificat, reaciile la lumin sunt cele de fotoliz a apei, de formare a NADPH (nicotinamid-adenin dinucleotid-difosfat) i a ATP, n timp ce n reaciile la ntuneric are loc reducerea CO2 cu formarea de polimeri hexozici. Bilanul n sinteza moleculei de glucoz este: h 6H2O + 6CO2 C6H12O6 + 6O2 Aceste reacii se produc n nite structuri lamelare (discuri lipoproteice) ale cloroplastelor numite membrane tilacoide sau tilacoizi. Fotorecepia cu ajutorul pigmenilor rodopsinici Rodopsinele vizuale, rodopsina i iodopsinele, fac parte din clasa proteinelor retinale, al cror cromofor este aldehida vitaminei A numit retinal. Sub aciunea radiaiilor luminoase vizibile se produce izomerizarea retinalului din configuraia 11-cis n cea all-trans i desprinderea acestuia de opsin. n acest mod se produce activarea rodopsinei i se declaneaz ciclul de reacii biochimice la ntuneric. Energia radiaiei luminoase este utilizat pentru declanarea excitaiei vizuale. Pentru ntreaga cascad de reacii biochimice ce urmeaz, i care se ncheie cu nchiderea canalelor de Na i Ca i hiperpolarizarea membranei, este utilizat energia metabolic. Efectele radiaiilor ultraviolete (UV) Radiaiile UV se situeaz n spectru dincolo de radiaiile vizibile de lungime de und mic (violet) i din punct de vedere al efectelor biologice sunt clasificate astfel: UV-A, cu lungimea de und cuprins ntre 315-400 nm UV-B, cu lungimea de und cuprins ntre 280 - 315 nm UV-C, cu lungimea de und mai mic de 280 nm. Cea mai mic energie o au radiaiile UV-A i cea mai mare UV-C. Energia radiaiilor UV se afl n domeniul 3-7 eV, deci este mai mic dect energia de ionizare a principalilor atomi constitueni ai biomoleculelor. Radiaiile UV pot produce ruperi de legturi chimice i reacii fotochimice. Dintre efectele radiaiilor UV se pot meniona urmtoarele: - Dimerizarea unor perechi de baze azotate (ex. dimerizarea timinei) cu sudura lanurilor de ADN n locul respectiv. Aceast sudur mpiedic copierea informaiei de pe ADN pe ARN. Una din consecinele dimerizrii este aciunea bactericid a UV ndeprtat (lungimi de und mai mici dect 300 nm), prin mpiedicarea transcripiei este oprit diviziunea celular. Demonstrarea acestui lucru se poate face prin fotoreactivare: bacteriile iradiate cu
5

Curs Biofizica MG 2008-2009 Fotobiologie

UV sunt imediat iradiate cu radiaii vizibile (380-450 nm). Se activeaz prin aceasta o enzim care desface dimerii timinei. Reactivarea nu se face ns 100%, eficacitatea procesului fiind determinat prin intermediul unei curbe doz-efect. - Efecte asupra ADN: formare de dimeri, hidratarea bazelor pirimidinice, ruperea legturilor de H, ruperea lanului de ADN, formarea unor legturi cu proteinele (ADN-protein cross-links). - Producere de eritem (arsuri tegumentare) UV-B (290-320 nm). Locul de aciune se presupune a fi fosfolipidele din membranele organitelor celulare care conin hidrolaze, n special lipozomii din celulele epidermice. Tot n aceast zon se observ i efectul cancerigen al radiaiilor UV, 91% din cancerele pielii, n special melanoamele, se afl n zone cu expunere solar mare. Cele mai periculoase sunt radiaiile cu 300 nm. - Pigmentarea pielii (UV-A, 320-420 nm) se datoreaz creterii concentraiei de melanin din piele, sectretat de melanocite. Melanocitele deriv, din punct de vedere embriologic, din sistemul nervos i au prelungiri dendritice prin care injecteaz melanina n celelalte celule ale epidermei. Melanina provine din oxidarea tirozinei, catalizat de tirozinaz. Spectrul de aciune se consider a fi 300 420 nm, acestui domeniu corespunzndu-i ns numai oxidarea unui leucoderivat al melaninei, care d o pigmentare lejer i precoce. Spectrul de formare a melaninei coincide cu spectrul de aciune al eritemului. Pigmentarea datorat melaninei este mult mai intens i mai tardiv reprezentnd o protecie eficient mpotriva eritemului. Dup 10-12 zile de expunere la soare 90% din radiaiile UV sunt absorbite. - Transformarea ergosterolului n vitamina D2 (antirahitic). Spectrul de aciune are un maximum la 280 nm. Iradierea n UV este folosit pentru prevenirea rahitismului, fiind suficient o doz de 1/20 din cea eritemal, aplicat zilnic pe o suprafa a pielii de 200 cm ptrai. - Inflamaia corneei numit keratit putndu-se ajunge la cecitate tranzitorie sau chiar definitiv. Oftalmia este dat de UV reflectate de zpad, chiar i pe vreme ceoas, la mare altitudine, de aceea se recomand ochelari din sticl special pentru protecie. Protecia cea mai important fa de aciunea nociv a UV de energii mari este realizat prin stratul de ozon (O3) din partea superioar a atmosferei. Oxigenul absoarbe radiaiile UV-C i se produc reaciile: O2 + h O + O O + O2 O3 O - radicali liberi foarte nocivi i activi Ozonul rezultat absoarbe radiaiile UV-B cu lungimi de und mai mici de 300 nm care sunt foarte duntoare pentru organismele vii. h + O3 O2 + O Fotoproduii rezultai reintr n reaciile anterioare. n acest fel radiaiile UV duc la formarea de ozon n straturile superioare ale atmosferei, n mod limitat. Cea mai bun protecie se realizeaz prin evitarea expunerii la UV. Se pot folosi ecrane protectoare cum ar fi ochelarii speciali din substane absorbante (colir) prentru protecia ochilor i creme pentru piele. Principalele substane folosite sunt acidul paraaminobenzonic (absoarbe ntre 290 i 315 nm), benzotenona care absoarbe ntregul spectru UV, sau preparate opace pe baz de oxid de zinc sau de titan care asigur o protecie total.