AO DE LA CONSOLIDACIN ECONMICA Y SOCIAL DEL PER UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

FACULTAD DE MEDICINA HUMANA : ESCUELA DE MEDICINA HUMANA

CURSO: Estructuras Funcin Celular y Tisular I

DOCENTE

Dra. VIOLETA MORN Blog. HOLGUIN MAURICCI CARLOS

INFORME DEL AVANCE

TEMA

MEMBRANA CELULAR

ALUMNO:

CORTEGANA NIMA, MIGUEL ANGEL CRESPO MEZONES, HILDA IVETTE

PIURA - PER

2010

NDICE
Introduccin

1.

Breve historia

2.

Composicin molecular 2.1. Lpidos

2.1.1. Fosfolpidos 2.1.2. Colesterol

2.2. Glcidos

2.3.

Protenas 2.2.1. Asimetra de protenas

3. Modelos de membranas

4. Cubierta Celular

5. Modelos de Membranas

6. Diferenciaciones y especializaciones

7. Membranas de secrecin

8. Fluidez de la membrana

9. Esqueleto de la membrana 7.1 Caractersticas 7.2 Composicin

10. Permeabilidad de la membrana

11. receptores de membrana

12. Anomalas

13. Conclusiones

14. Bibliografa

INTRODUCCIN
A lo largo del descubrimiento realizado por el hombre sobre la clula, llegaron a la conclusin que todos los organismos vivos estn constituidos por clulas y que seria la unidad mnima para que existiera la vida. No conforme con eso, el hombre quera conocer su funcionamiento, su composicin, entre muchas cosas ms. Antes que se descubriera el microscopio, ya se hablaba de una capa que envolvera a la clula, y que era responsable de muchas funciones.

Ahora sabemos que la clula tiene una composicin diferente del medio que la rodea, esta diferencia se mantiene a lo largo de la vida de sta, mediante la membrana

plasmtica o celular, que regula el intercambio de iones y molculas entre la clula y el medio extracelular.

Esta membrana pudo ser observada con el perfeccionamiento del microscopio, gracias al cual se conoce que a travs de la sta las clulas se comunican entre s y se relaciona con las matrices extracelulares.

En este trabajo se pretende estudiar la membrana plasmtica desde el punto de vista de su composicin qumica, adems se estudiarn los conceptos de fluidez y esqueleto membranoso que son conceptos importantes en el estudio de la biologa molecular.

MENBRANA CELULAR
La membrana plasmtica o celular es una estructura laminar formada por lpidos (con cabeza hidrofilica y cola hidrofbica) y protenas que engloban a las clulas, define sus lmites y contribuye a mantener el equilibrio entre el interior (medio intracelular) y el exterior (medio extracelular) de stas. Adems, se asemeja a las membranas que delimitan los orgnulos de clulas eucariotas. Est compuesta por una lmina que sirve de "contenedor" para el citosol y los distintos compartimentos internos de la clula, as como tambin otorga proteccin mecnica. Est formada principalmente por fosfolpidos (fosfatidiletanolamina y fosfatidilcolina), colesterol, glcidos y protenas (integrales y perifricas). La principal caracterstica de esta barrera es su permeabilidad selectiva, lo que le permite seleccionar las molculas que deben entrar y salir de la clula. De esta forma se mantiene estable el medio intracelular, regulando el paso de agua, iones y metabolitos, a la vez que mantiene el potencial electroqumico (haciendo que el medio interno est cargado negativamente).

Cuando una molcula de gran tamao atraviesa o es expulsada de la clula y se invagina parte de la membrana plasmtica para recubrirlas cuando estn en el interior ocurren respectivamente los procesos de endocitosis y exocitosis. Tiene un grosor aproximado de 7,5 nm y no es visible al microscopio ptico pero s al microscopio electrnico, donde se pueden observar dos capas oscuras laterales y una central ms clara. En las clulas procariotas y en las eucariotas osmtrofas como plantas y hongos, se sita bajo otra capa, denominada pared celular.| Adems, las membranas cumplen las siguientes funciones:

Protegen la clula o el orgnulo Regulan el transporte hacia adentro o hacia afuera de la clula u orgnulo Permiten una fijacin selectiva a determinadas entidades qumicas a travs de receptores lo que se traduce finalmente en la transduccin de una seal Permiten el reconocimiento celular Suministran unos puntos de anclaje para filamentos citoesquelticos o componentes de la matriz extracelular lo que permite mantener una forma Permiten la compartimentacin de dominios subcelulares donde pueden tener lugar reacciones enzimticas de una forma estable Regulan la fusin con otras membranas Permiten el paso de ciertas molculas a travs de canales o ciertas junciones Permite la motilidad de algunas clulas u orgnulos

1. BREVE HISTORIA Durante siglo y medio (c.1800-c.1950) la investigacin de las clulas se bas slo en la observacin mediante microscopa ptica. sta no puede, por razones fsicas relacionadas con la longitud de onda de la luz, detectar estructuras de menos de 0,25 m (micrmetros). Se llam membrana celular al lmite celular cuando ste era visible, y ste sigue siendo el nico uso legtimo de la expresin. En la mayor parte de los casos lo que se observaba era un recubrimiento, ms o menos flexible, hecho de polisacridos, de protenas o de polmeros mixtos, al que se llama tambin pared celular. sta es precisamente la expresin que debe preferirse para eludir la ambigedad. A principios del siglo XX, investigaciones experimentales de la fisiologa celular condujeron a postular la existencia, en todas las clulas, de una membrana invisible, a la que se llam membrana plasmtica o citoplasmtica, y que deba estar compuesta esencialmente de lpidos. sta representaba la envoltura del protoplasma, la parte fisiolgicamente activa de la clula. Con el uso del microscopio electrnico, pudo observarse por fin la membrana plasmtica, cuyo espesor tpico es de slo 0,0075 m (75 ).

1855, Naegeli denomin "membrana plasmtica" a una pelcula invisible que envolvera a las clulas y sera la responsable de los fenmenos osmticos que observ en clulas vivas. 1902 Overton sostuvo que la membrana plasmtica estara compuesta probablemente por una delgada capa de lpidos, dado que las molculas liposolubles penetran con facilidad a travs de la membrana plasmtica 1925, Corter y Crendell propusieron la existencia de una bicapa fosfolipdica al observar que la cantidad de fosfolpidos de la membrana de los eritrocitos era suficiente para formar una doble capa de molculas sobre toda la superficie celular. 1935 Danielli y Davson postularon que la membrana plasmtica contena una bicapa lipdica con protenas formando capas continuas sobre ambas superficies 1959 Robertson propuso el modelo que el denomino unidad de membrana interpretando la imagen microscpica segn el modelo de Danielli y Davson, por lo cual se pens que las lneas densas corresponderan a las supuestas capas proteicas continuas que se crea que estaban adosadas a los lpidos de la bicapa central. Ahora sabemos que estas lneas densas resulta principalmente del deposito de osmio (utilizado como fijador y colorante electrnico) sobre los extremos polares de los fosfolipidos. A principio de la dcada del setenta, el mtodo de la congelacin-fractura y replica utilizado en microscopia electrnica hizo accesible el estudio morfolgico del interior de la membrana y llevo a una interpretacin completamente deferente de su estructura, ya que evidencio la existencia de numerosos glbulos proteicos dentro del plano de la membrana. La concepcin actual de la membrana es el modelo propuesto por Singer, hace ms de veinte aos, conocido como el modelo del mosaico fluido, que ha sido firmemente reconocido como la estructura bsica de la totalidad de las membranas. Segn el modelo de membrana "Modelo de mosaico fluido" propuesto en 1972 por J. Singer y G. Nicolson, la membrana est formada por una doble capa lipdica a la que se adosan molculas proteicas. Si se adosan en ambas caras de la superficie reciben el nombre de protenas extrnsecas y si, por el contrario, atraviesan la capa de lpidos, reciben el nombre de protenas intrnsecas o integrales.

Esquema de una membrana celular. Segn el modelo del mosaico fluido, las protenas (en rojo y naranja) seran como "icebergs" que navegaran en un mar de lpidos (en azul). Ntese adems que las cadenas de oligosacridos (en verde) se hallan siempre en la cara externa, pero no en la interna. 2. COMPOSICIN MOLECULAR La composicin qumica de la membrana plasmtica vara entre clulas dependiendo de la funcin o del tejido en la que se encuentren, pero se puede estudiar de forma general. Esta contiene un 52% de protenas, un 40% de lpidos y un 8% de hidratos de carbono. Las molculas lipidicas son las mas pequeas mientras que las protenas son de gran tamao. Los hidratos de carbono son cadenas de oligosacaridos y se encuentran siempre asociados a protenas o a lpidos formando glucoproteinas o glucolipidos. Las molculas ms numerosas son las de lpidos, ya que se calcula que por cada 50 lpidos hay una protena. Sin embargo, las protenas, debido a su mayor tamao, representan aproximadamente el 50% de la masa de la membrana.

Protenas: el 80% son intrnsecas, mientras que el 20% restantes son extrnsecas. Hay protenas con diferentes funciones en la membrana plasmtica: transportadoras, conectoras (conectan la membrana con la matriz extracelular o con el interior), receptoras (encargadas del reconocimiento y adhesin) y enzimas. Hidratos de carbono: estn en la membrana unidos covalentemente a protenas o a lpidos. Pueden ser polisacridos u oligosacridos. Se encuentran en el exterior de la membrana formando el glicocalix. Representan el 8% del peso seco de la membrana plasmtica. Lpidos: el 98% son anfipticos, es decir que presentan un lado hidrfilo (que da la cara al agua) y un lado hidrofbico (que no se junta con el agua). De entre los lpidos, los ms importantes son los fosfolpidos y esfingolpidos, que se encuentran en todas las clulas; le siguen los glucolpidos, as como esteroides, como el colesterol. Estos ltimos no existen o son escasos en las membranas plasmticas de las clulas procariotas. Existen tambin grasas neutras, que son lpidos no anfipticos pero slo representan un 2% del total de lpidos de membrana.

2.1 LIPIDOS El 98% de los lpidos presentes en las membranas celulares son anfipticos, es decir que presentan un extremo hidrfilo (que tiene afinidad e interacciona con el agua) y un extremo hidrofbico (que repele el agua). Los ms abundantes son los fosfoglicridos (fosfolpidos aproximadamente el 75%) y los esfingolpidos, que se encuentran en todas las clulas; le siguen los glucolpidos, as como esteroides (sobre todo colesterol). Estos ltimos no existen o son escasos en las membranas plasmticas de las clulas procariotas. Existen tambin grasas neutras, que son lpidos no anfipticos, pero slo representan un 2% del total de lpidos de membrana. Distribucin de los lpidos de membrana: Se diponen de forma asimtrica, no son los mismos en las dos caras de la membrana. En la cara externa (exoplamica) existen fostolipidos con grupo terminal colina mientras que en la cara interna o protoplasmita posee el grupo terminal amino. La fluidez es una de las caractersticas ms importantes de las membranas. Depende de factores como: la temperatura, la fluidez aumenta al aumentar la temperatura. la naturaleza de los lpidos, la presencia de lpidos insaturados y de cadena corta favorecen el aumento de fluidez; la presencia de colesterol endurece las membranas, reduciendo su fluidez y permeabilidad.

2.1.1 FOSFOLIPIDOS Uno de los principales tipos de lpidos en la membrana incluye los fosfolpidos, la molcula se divide en un grupo llamada cabeza que es polar y dos colas de hidrocarburos. Tienen una molcula de glicerol con la que se esterifica un cido fosfrico y dos cidos grasos de cadena larga; los principales fosfoglicridos de membrana son la fosfatidiletanolamina o cefalina, la fosfatidilcolina o lecitina, el fosfatidilinositol y la fosfatidilserina.

Debido a su naturaleza antiptica, en medio acuoso tienden espontneamente a agruparse formando micelas o bicapas similares a las celulares. En los fosfolpidos, el glicerol est conectado por un grupo fosfato con una de varias posibles molculas hidroflicas pequeas (los grupos polares) y con dos cidos grasos virtualmente en todos los casos, que poseen un nmero par de tomos de carbono entre 16-22. En el siguiente dibujo se observa un ejemplo de fosfolipido, la regin superior comienza con el grupo polar NH3, esta conectada por el grupo glicerol a dos colas cidos grasos, una de las colas es una cadena de cido graso saturado, la otra es un cido graso insaturado, el doble enlace del cido graso insaturado, le da a la membrana forma y movimiento en el plano lateral. La siguiente es un dibujo del fosfolpido:

La viscosidad de la bicapa depende de que tan largas sean las cadenas hidrocarbonatos, la fluidez se ve afectada por la existencia de dobles ligaduras en las cadenas, debido a

que los carbonos no saturados imparten una desviacin a la cadena que impide que las molculas se adosen estrechamente y aumenten su viscosidad. Generalmente en los fosfolpidos de las membranas uno de los cidos grasos es saturados y el otro no lo es. La diferencia entre los distintos fosfolpidos se depende principalmente del grupo polar o cabeza hidroflica, los ms comunes son: etanolamina, que forma parte de la cefalina colina, que forma parte de la lecitina; la esfingomielina tambin la posee, pero su alcohol no es el glicerol sino la esfingosina (un aminoalcohol) serina, que forma la fosfatidilserina Los grupos polares de los fosfolpidos a pH neutro no poseen carga elctrica, con la excepcin de la fosfatidilserina cuya carga es negativa, al igual que los siguientes fosfolpidos (menos abundantes): fosfoinostidos, cardiolipina, fosfatidilglicerol, sulfolpidos. En conjunto se denominan por su pH negativo fosfolpidos cidos. Los diferentes tipos de grupos polares y de cidos grasos constituyentes determinan la existencia de ms de cien tipos de diferentes de fosfolpidos en las membranas, la fosfatidiletanolamina y los fosfolpidos cidos tienden a ubicarse en la hoja de las membranas en contacto con el Citosol, con un intercambio de lpidos prcticamente nulo a travs de ambas hojas. 2.1.2 COLESTEROL La cantidad de colesterol puede variar con el tipo de membrana, membranas del plasma (eucariota) tienen una molcula de colesterol por cada molcula fosfolpida, otras membranas tales como de las bacterias (procariotas) no tienen colesterol. Este esteroide anfiptico posee una pequea cabeza polar (el oxhidrilo de carbono 3) dirigida hacia la superficie acuosa, mientras que el resto de la molcula es hidrofbico y permanece confinado en el interior de la bicapa. El anillo esteroide interacta con la porcin inicial de las cadenas de los cidos grasos, a las que inmoviliza parcialmente. Esto produce dos importantes efectos: por un lado se incrementa la impermeabilidad de la bicapa a las molculas hidroflicas, y por el otro decrece la flexibilidad y fluidez de la membrana a la temperatura central del organismo de 37C. Pero ante eventuales disminuciones de la temperatura, la presencia de colesterol previene la transicin de fase de cristal lquido a gel, como ocurrira si la bicapa fuera enteramente fosfolipdica.

La siguiente figura muestra la estructura esteroide del colesterol

La siguiente figura muestra la distribucin de las dos molculas, notar que la cabeza polar del colesterol se alinea con la cabeza polar de la molcula fosfolpida.

2.2 GLCIDOS Los hidratos de carbono delas membranas biolgicas se representan en forma de oligasacaridos, o menos frecuentemente de monosacridos, unidos en forma covalente a lpidos (glucolipidos) o a protenas (glucoproteina) de membrana. En ambas molculas el compuesto hidrocarbonado es semejante o idntico. Otros componentes glucidicos de las membranas celulares son los glucosaminoglucanos( GAGs) unidos a las protenas( proteoglucanos). Los GAGs son polmeros lineales de subunidades de disacridos, de los cuales uno por los menos es un aminosacarido. Los distintos disacridos determinan la existencia de diversos tipos de GAGs, algunos de los cuales son acidos o sulfatados. Contribuyendo significativamente a la asimetra de las membranas, los glcidos se ubican casi en forma exclusiva en la hoja superficial de la membrana plasmtica y en su equivalente topolgico, que es la monocapa interior del sistema de endomembranas. La abundancia de glucolipidos es, con todo, mucho mayor en la membrana plasmtica que en los componentes endomembranosos, y lo mismo puede decirse para las glucoproteinas. Los proteoglucanos son casi exclusivos de las membranas plasmticas.

La mayor parte de los glucolipidos de las clulas animales, o glucoesfingolipidos, poseen dos cadenas hidrofobicas: una de acido graso y otra de esfingosina. Como en el caso de la esfingomielina, la molecula resultante se denomina ceramida. Esta permanece confinada en el interior hidrofobico de la hoja externa de la bicapa, y hacia el exterior hidrofilico se ubica un componente glucidico variable, unido covalentemente a la esfingosina. Tanto la ceramida como los carbohidratos presentan gran variedad estructural, en especial estos ltimos. En los cerebrosidos, que son los glucolipidos mas simples, el glcido puede ser un solo monosacarido como la glucosa o la galactosa, pero en forma caracterstica los glucolipidos poseen una enorme variedad de oligosacaridos que difieren en longitud, ramificaciones, clases de monosacridos y tipos de uniones entre estos. En el caso de los glangliosidos, se son los glucolipidos ms complejos, uno de los componentes constantes de los oligosacaridos que se proyectan hacia el espacio extracelular es el acido silico o N- acetilneuraminico(NANA), lo que imparte a la cubierta celular de la que forman parte una carga negativa que tiende a atraer cationes del medio hacia la superficie de la membrana. En la siguiente figura son dibujados en azul en el siguiente dibujo, son grupos de azcar, que se proyectan al espacio extracelular.

Estos componentes de la membrana pueden ser protectores, aisladores y sitios de unin entre las molculas. 2.3 PROTENAS Son los componentes de la membrana que desempean las funciones especficas (transporte, comunicacin, etc). Al igual que en el caso de los lpidos, las protenas pueden girar alrededor de su eje y muchas de ellas pueden desplazarse lateralmente (difusin lateral) por la membrana, no cambian de posicin dentro de la bicapa. Cada clase de membrana, segn su localizacin en la clula y el tipo celular, posee una dotacin proteica especfica. As la membrana plasmtica de una neurona, de un

fibroblasto o de un eritrocito ostentan sustanciales diferencias, la diferencia es ms marcado entre el componente proteico de una membrana plasmtica y una interna (las mitocondriales o las de los discos fotorreceptores de la retina. Las protenas de membrana se clasifican en: Protenas integrales (intrnsecas): Estn unidas a los lpidos ntimamente, suelen atravesar la bicapa lipdica una o varias veces, por esta razn se les llama protenas de transmembrana. Casi invariablemente las protenas transmembranosas son glucoprotenas. Son molculas antipticas, por poseer dominio hidrofbico e hidroflico. En algunos casos las protenas integrales no son membranosas, pero estn unidas de forma covalente a los lpidos de membrana del lado citoslico o del extracelular, en especial al glucosil fosfatidil inositol o grupos isoprenoides. En las protenas transmembranosas, como resultado del plegamiento proteico, los aminocidos hidrofbicos estn ms expuestos en la superficie de la molcula, por lo que deben permanecer en el interior de la bicapa fosfolipdica, donde las interacciones hidrofbicas con los cidos grasos los mantienen en su sitio, mientras que slo las partes hidroflicas asoman al medio acuoso de ambas superficies de la membrana. Existen protenas transmembranosas de paso nico y de paso mltiple; en este ltimo caso la cadena polipeptdica cruza las bicapa varias veces. Adems, las protenas transmembranosas pueden desarrollar enlaces inicos con las cabezas polares de fosfolpidos y quizs ambos mecanismo contribuyan a la estabilidad de su posicin Protenas perifricas (extrnsecas): Se localizan a un lado u otro de la bicapa lipdica y estn unidas dbilmente a las cabezas polares de los lpidos de la membrana u a otras protenas integrales por enlaces de hidrgeno. No penetran en el interior hidrofbico de la bicapa lipdica (no son transmembranosas) y se asocian con la membrana mediante interacciones dbiles, del tipo de las uniones inicas u otras, tanto con las protenas integrales como con las cabezas hidroflicas de los fosfolpidos, del lado citoslico o del extracelular. Cumplen con sus funciones en la membrana o cerca de de sta, y algunas pueden disociarse de la membrana en ciertas condiciones de la actividad celular. Esto se refleja en que para su aislamiento bioqumico son fcilmente separables con procedimientos suaves, como soluciones salinas concentradas, pH elevado

2.2.1. Asimetra de las protenas Cada protena de membrana posee una determinada orientacin en dicha estructura. Esta asimetra otorga caractersticas diferentes a ambas superficies de las membranas El caso que ms evidencia este hecho lo constituyen las glucoprotenas; en la inmensa mayora de stas, los oligosacridos, estn orientados hacia el medio extracelular. Existen pocas excepciones, como ciertas glucoprotenas de los complejos de poros nucleares, cuyos glcidos se proyecta hacia la superficie citoslica. En las membranas plasmticas se han descrito decenas de enzimas, y para cada una de ellas su sitio activo reside constantemente en una determinada cara de la membrana. Por ejemplo, en la cara extracelular se halla la actividad de acetilcolinesterasa, la disacaridasa en los entericitos, y los sitios de unin al potasio y al digitlico para el caso de la bomba de sodio-potasio. En la superficie membranosa citoslica se puede encontrar el dominio ATPsico de la bomba de sodio-potasio, la adenilato ciclasa y la actividad quinsica de los receptores transmembranosos. Para el caso de las protenas de las membranas internas, tales como la glucosa 6fosfatasa del retculo endoplasmtico, la ATP sintetasa de la mitocondria o la bomba protnica de los endosomas, la orientacin asimtrica tambin es un requerimiento absoluto.

3. ASIMETRA EN LA MEMBRANA La membrana plasmtica es una estructura asimtrica. Las dos monocapas que forman la bicapa lipdica, la monocapa o cara externa que mira al medio extracelular y la otra que mira al citosol (el medio interno de la clula), la cara citoslica tienen distinta composicin, y distribucin de fosofolpidos, as como de colesterol como tambin en la organizacin de las protenas embebidas o asociadas a la membrana. La cara externa de la membrana plasmtica est compuesta principalmente de fosfatidilcolina y esfingomielina, mientras que la fosfatidietalonamina y fosfatidilserina son los fosfolpidos predominantes de la cara interna o citoslica. Otro fosfolpido, el fosfatidilinositol, tambin se encuentra en la cara interna de la membrana Los oligosacridos unidos a lpidos (gicolpidos) y a las protenas integrales de membrana (glicoprotenas) miran siempre hacia el exterior celular. Todas las biomembranas conocidas muestran una asimetra en la disposicin y distribucin de los componentes lipdicos y proteicos en ambas monocapas u hojas que componen la bicapa lipdica, la cara citoslica (que mira al citosol) y la cara extracelular (que mira hacia el exterior). Tal asimetra en la distribucin confiere distintas propiedades funcionales a las dos caras de la membrana. Esta asimetra es tanto una asimetra lateral como transversal. En la asimetra lateral los lpidos o protenas de un tipo particular se agrupan en un plano o zona concreto de la membrana, mientras que la asimetra transversal es la que existe a travs de la membrana desde el lado exterior al lado citoslico. Los lpidos se distribuyen asimtricamente tanto lateral como transversalmente, su asimetra transversal se observa claramente en la membrana de los eritrocitos (glbulos rojos) donde la fosfatidilcolina comprende el 30% de los fosfolipidos totales, pero de este porcentaje el 30 % se encuentra en la monocapa exterior y el 70% en la hoja que mira hacia el interior. La asimetra lateral de los lpidos es requerida en formacin de ciertas estructuras especializadas de la membrana, por ejemplo para llevar a cabo

diferentes mecanismos de endocitosis, y tambin es importante para el correcto funcionamiento de protenas integrales de membrana (e.g. canales inicos). Por otra parte, las protenas embebidas integralmente en la membrana tienen una orientacin definida asimtrica dentro de la bicapa mostrando una nica orientacin polarizada debido a que se sintetizan y se insertan en la membrana de una manera asimtrica. Adems los restos oligosacridos de los glicolpidos y las glicoprotenas de la membrana plasmtica slo se orientan hacia el medio extracelular donde participan en los fenmenos de reconocimiento celular. Entre las propiedades funcionales de la membrana que son una consecuencia de la asimetra de orientacin y composicin de su componente proteico se incluye el transporte vectorial de membrana, el cual est dirigido en una sola direccin, la unin a receptores situados en la superficie de las clulas (con su consiguiente efecto fisiolgico) de multitud de hormonas (u otras molculas de sealizacin qumica), diversos tipos de procesos de reconocimiento molecular entre clulas que necesariamente involucra ciertas estructuras de la superficie exterior de las clulas (e.g. oligosacridos), y otro largo etctera de procesos.

Las protenas integrales de membrana (PIM) tienen diferentes modos de anclarse a la membrana plasmtica: a travs de uno o varios segmentos -helicoidales hidrofbicos con distinta orientacin topolgica [amino N- Carboxilo terminal] (a,b,c). Existen tambin PIM que se anclas por medio de lminas (e.g. porinas, protenas con estructura en forma de barril construido de 8 a 22 lminas que forman un poro, presentes en la membrana exterior de las bacterias Gram negativas y en la membrana exterior de las mitocondrias). Por otra parte, existen protenas que se encuentran ancladas exclusivamente a una de las hojas de la bicapa (monocapa) por un larga cadena lipdica hidrofbica de diferente composicin de cido graso (e.g. cido mirstico, cido palmtico) o de grupos prenilo (d) . Otras protenas se anclan exclusivamente a la monocapa exterior de la memebrana plasmtica travs de un anclaje de glicosilfosfatidilinositol (un glicolpido abreviadamente GPI), llamadas por ello protenas GPI (e)

4. CUBIERTA CELULAR O GLUCOCLIZ. Las clulas proyectan hacia su superficie externa el componente oligosacrido de sus glucolpidos y glucoprotenas intrnsecos, junto con las cadenas de glucosaminoglucanos de los proteoglucanos integrales. En algunos tipos celulares tambin se pueden adsorber glucoprotenas y proteoglucanos que fueron secretados hacia el espacio extracelular. El conjunto de todas estas molculas forma una cubierta celular denominada glucocliz, de espesor variable pero presente en todas las clulas. En la mayor parte de stas su grosor, de 10 a 20 nm, se halla por debajo del lmite resolutivo del microscopio ptico. Su naturaleza polianimica le permite unirse vidamente a componentes como la ferritina cationizada o el rojo rutenio, que son visualizables con el micrioscopio electnico por su alta capacidad. Su afinidad selectiva por diversos tipos de lectinas marcadas con fluorocromos o con peroxidasa permite tambin la identificacin de sus componentes con el microscopio de fluorescencia o de campo claro. En unos pocos tipos celulares, como los entericitos, el glucocliz posee un espesor excepcionalmente grande. Funciones Microambiente: puede modificar la concentracin de diferentes sustancias a nivel de la superficie celular, no slo como una posible barrera de difusin, sino tambin porque su naturaleza polianinica es susceptible de afectar el ambiente catinico extracelular en la vecindad de la clula. Enzimas: Las tcnicas histoqumicas demuestran la presencia de fosfatasa alcalina en la cubierta celular, relacionada con fenmenos de permeabilidad. En el grueso glucocliz de las microvellosidades de los entericitos reside la actividad enzimtica digestiva terminal de hidratos de carbono y de protenas (disacaridasas y oligopeptidasas) Proteccin celular: puede proteger a la membrana contra el dao qumico o mecnico, y contribuir a mantener a distancia a ciertas molculas o clulas. Reconocimiento celular particularmente importantes durante el desarrollo embrionario, participa en los procesos de adhesin entre vulo y espermatozoide. Confiere viscosidad a las superficies celulares permitiendo el deslizamiento de clulas en movimiento, como, por ejemplo, las sanguneas Presenta propiedades inmunitarias, por ejemplo los glcidos del glucoclix de los glbulos rojos representan los antgenos propios de los grupos sanguneos del sistema sanguneo ABO.

5. MODELOS DE MEMBRANAS 5.1 Gorter y Grendell (1925): Establecen que la membrana esta formada por una simple bicapa de lpidos.

5.2 Danielli y Davson (1935): Incluyen una cubierta externa de protenas. El interior es una capa lipoide no especificada.

5.3 Unidad de membrana de Robertson (1950) :Explicaba la apariencia trilaminar de muchas membranas al microscopio electrnico.

5.4 Mosaico Fluido (Jonathan Singer y Garth L. Nicolson, (1972) : Es el modelo aceptado actualmente. La estructura de la bicapa es bastante fluida. Las molculas de protenas pueden desplazarse lateralmente por la bicapa, tomando unas disposiciones (mosaico) que cambian en el tiempo y en lugar. Con los datos ofrecidos por la microscopa electrnica y los anlisis bioqumicos se han elaborado varios modelos de membrana.

En la actualidad el modelo ms aceptado es el propuesto por Singer y Nicholson (1972), denominado modelo del mosaico fluido , que presenta las siguientes caractersticas: Considera que la membrana es como un mosaico fluido en el que la bicapa lipdica es la red cemetantey las proteinas embebidas en ella, interaccionando unas con otras y con los lpidos. Tanto las proteinas como los lpidos pueden desplazarse lateralmente. Los lpidos y las protenas integrales se hallan dispuestos en mosaico. Las membranas son estructuras asimtricas en cuanto a la distribucin fundamentalmente de los glcidos, que slo se encuentran en la cara externa. Las funciones de la membrana podran resumirse en : 1. TRANSPORTE El intercambio de materia entre el interior de la clula y su ambiente externo. Haz clic para ampliar este tema 2. RECONOCIMIENTO Y COMUNICACIN Gracias a molculas situadas en la parte externa de la membrana, que actan como receptoras de sustancias.

Gracias a molculas situadas en la parte externa de la membrana, que actan como receptoras de sustancias.

La estructura bsica de una membrana es una bicapa de fosfolpidos. Por lo general presenta una proporcin de 0-10% de carbohidratos, 40% de lpidos y 60% de protenas. En glbulos rojos la relacin lpidos/protenas es de 1:15 y en el sistema nervioso es de 4:1. Cada membrana tiene una composicin qumica lpidica caracterstica. Por ejemplo el tejido cerebral es rico en fosfatidilserinas mientras que el corazn y los pulmones son ricos en fosfatidilglicerol y esfingomielina. Los glbulos rojos tienen 50% de fosfatidilserina, 18% de esfingomielina y 23% de colesterol. La bacteria Escherichia coli tiene un 70% de fosfatidilestaolamida de los lpidos de su membrana celular. En los eucariotas, todas las membranas de las clulas (incluyendo los orgnelos) tienen el mismo patrn general de la membrana plasmtica. Existen cambios en el tipo de lpidos y, en particular, en la cantidad de protenas y glcidos, que varan segn el tipo de membrana y el lugar que esta ocupa. 6. DIFERENCIACIONES Y ESPECIALIZACIONES DE LA MEMBRANA: A) DIFERENCIACIONES: son todas aquellas estructuras que aparecen entre las membranas de clulas adyacentes para permitir la comunicacin entre los citoplasmas. - uniones hermticas estrechas: unen a las clulas epiteliales e impiden el libre paso de sustancias por lo que actan como una barrera altamente selectiva. - uniones intermedias o desmosomas en banda: conectan mecnicamente a las clulas haciendo que el tejido funcione como una unidad estructural. Permiten el paso libre de sustancias de unas clulas a otras. Cuando estas uniones se encuentran dispersas por las superficies laterales de las clulas se forman los desmosomas puntiformes. - desmosomas puntiformes: conectan dos citoplasmas entre si por medio de una especie de filamentos llamados tono filamentos, los cuales se anclan a unas placas densas que aparecen en la parte interna de la membrana, son las capas plasmticas, las que permiten la apertura o el cierre del espacio que deja esta estructura permitiendo o no el paso de sustancias a su travs. - unin de hendidura, de comunicacin o tipo gap: estas uniones permiten el paso de sustancias y de impulsos elctricos de unas clulas a otras, de modo que sincronizan las contracciones musculares cardiacas o el acoplamiento elctrico entre neuronas.

B) ESPECIALIZACIONES: son adaptaciones estructurales de la membrana que le sirven para realizar sus funciones mejor o ms rpidamente. La especializacin ms caracterstica son loas microvellosidades. Estas son digitaciones de la membrana hacia el exterior. Aparecen en las clulas del tubo digestivo hacia la luz del tubo (interior). Aumentan hasta 20 veces la superficie de la clula, permitiendo la funcin de absorber las molculas procedentes de la digestin, de esta manera el organismo aumenta la superficie de absorcin, realizando este proceso en el menor tiempo posible. FUNCIONES: Favorecer la flexibilidad y la fluidez de la estructura. Esto lo realizan los fosfolpidos y el colesterol. Mantener estable el medio intracelular regulando el paso de H2O, iones, molculas pequeas y macromolculas por medio de la permeabilidad. En el caso de la membrana la permeabilidad es altamente selectiva. Estas sustancias pasan a travs de la membrana de distintas maneras. 7. MEMBRANAS DE SECRECIN: a) ESTRUCTURA: EN ANIMALES:

Glucoclix: estructura de la membrana plasmtica. EN VEGETALES:

Pared celular: es una capa externa y rgida que rodea a las clulas vegetales, es un elemento de proteccin y sostn. Estructuralmente est formada por varias capas que van apareciendo por depsito o aposicin de sustancias del interior al exterior. Son sustancias sintetizadas por el citoplasma y expulsadas al medio extracelular, siendo la capa ms externa la ms antigua. La lmina media es la capa ms externa, se forma a partir de la membrana plasmtica y est compuesta por peptina y es comn a todas las clulas adyacentes. La pared primaria es la segunda capa, se deposita entre la lmina media y la membrana, puede estar formada por tres capas y est compuesta de celulosa. La pared secundaria es la ms interna. Aparece cuando la clula deja de crecer y la pared primaria deja de engrosar. Est formada por tres capas, pero puede llegar a tener veinte

capas. Est formada por celulosa impregnada de distintos tipos de sustancias que pueden ser sales minerales de Ca o Si. Cuando es as se dice que la pared secundaria est mineralizada. Tambin puede ser lignina, a lo que se le llama lignificacin de la pared secundaria. De esta forma se crea el leo. Cuando se deposita el suber se habla de la suberificacin de la pared secundaria, formndose el corcho. Cuando existe comunicacin slo de lquidos de una clula a otra se llama punteadura. Cuando la comunicacin es debida a un poro mayor se llama plasmodesmo, estos plasmodesmos estn formados por otros poros ms pequeos que contienen una membrana del retculo endoplasmtico que traspasa de un lado a otro de la lmina media. A esta estructura se le llama desmotbulo. b) FUNCIONES: - Constituye el exoesqueleto que protege y soporta mecnicamente la planta. Este exoesqueleto lo que permite es la cohesin de estas estructuras. - Mantiene la integridad celular a pesar de las diferencias de presin osmtica que existen entre el exterior y el citoplasma, ya que generalmente el medio en el que se desenvuelve la clula es hipotnico. - La pared vegetal es muy importantes en la industria de la madera, del papel, en la textil y en la alimentacin.

8. FLUIDEZ DE MEMBRANAS: Como ya hemos visto, los lpidos forman una doble capa y las protenas se disponen de una forma irregular y asimtrica entre ellos. El concepto de fluidez de las membranas hace referencia al hecho que tanto los lpidos como las protenas pueden tener una libertad de movimiento lateral dentro de la membrana. En qu consiste? Es la capacidad de una molcula que forma parte de una membrana para desplazarse por ella. Las membranas son fluidas, prcticamente son lminas de grasa, donde las molculas se encuentran en un estado de lquido viscoso. Esto implica que, en teora, las molculas podran difundir y desplazarse por ella sin restricciones. Consideremos un glicerofosfolpido que est situado en la membrana plasmtica en su monocapa externa. Tendra dos posibilidades de movimiento: uno lateral donde se desplazara entre las molculas contiguas, y otro en el que saltara a la monocapa interna, movimiento denominado "flip-flop". Los dos tipos de movimientos se han demostrado experimentalmente en membranas artificiales pero uno es ms frecuente que el otro. Una molcula lipdica puede recorrer 30 micras en unos 20 segundos por difusin pasiva lateral, es decir podra dar la vuelta a una clula de tamao medio en aproximadamente un minuto. Sin embargo, los saltos entre monocapas son muy infrecuentes, se estima que la posibilidad de que le ocurra a un lpido es de una vez al mes debido a que las cabezas polares de los lpidos se encuentran con la barrera de las cadenas de cidos grasos. El

colesterol posee, sin embargo, la capacidad de hacer movimientos "flip-flop" con relativa facilidad.

Movimientos que pueden sufrir los lpidos en las membranas gracias a su fluidez. Los movimientos flip-flop son muy raros para los lpidos y no se han documentado para las protenas.

A qu se debe la fluidez en la membrana? Esta propiedad depende de su composicin y de la temperatura. En su composicin podemos encontrar dos tipos de cidos grasos: saturados e insaturados. Los primeros poseen en su estructura carbono con sus cuatro enlaces ocupados: unido a 3 hidrgenos y su otro enlace al carbono siguiente; en cambio, los insaturados poseen sus carbonos unidos a dos H y forman un doble enlace con el C siguiente, por lo tanto podran convertirse en saturados al agregar un H ms. Estas estructuras les confieren caractersticas solidas a los cidos grasos saturados, y liquidas a los insaturados. La fluidez de la membrana tambin se puede ver afectado por las protenas o colesterol incrustados en ella.(el colesterol hace a la bicapa ms rgida). La fluidez de la membrana est controlada por la composicin de sus cidos grasos y su contenido en esteroles. Las cadenas de cido graso de los lpidos pueden encontrarse en bicapas, en forma ordenada y rgida o bien en forma relativamente desordenada, es decir, en estado fluido. En el estado ordenado, todos los enlaces C-C, tienen conformacin trans o anti, mientras que, en estado desordenado, algunos estn en conformacin gauche. La transicin de estado rgido (todo trans) a estado fluido (parcialmente gauche) se presenta bruscamente cuando la temperatura supera la temperatura de fusin. Esta temperatura de transicin depende de la longitud de las cadenas de cido graso y de su grado de instauracin. El estado rgido viene favorecido por la presencia de residuos de cidos grasos saturados porque sus cadenas hidrocarbonadas rectas interaccionan muy favorablemente unas con otras. Por otro lado,

un doble enlace cis produce un acodamiento en la cadena hidrocarbonada. Este codo interfiere con un empaquetamiento muy ordenado de los cidos grasos, y, en consecuencia, la temperatura de fusin disminuye. La longitud de la cadena de los cidos grasos afecta tambin a la temperatura de transicin. Las cadenas hidrocarbonadas largas interaccionan mutuamente con ms fuerza que las cortas. En concreto, cada grupo CH2- adicional contribuye favorablemente con unas -0,5 kcal/mol a la energa libre de interaccin de dos cadenas hidrocarbonadas adyacentes. Los procariotas regulan la fluidez de la membrana variando el nmero de enlaces dobles y la longitud de las cadenas de sus cidos grasos. Por ejemplo, en la membrana de E.coli la relacin de los cidos grasos saturados a los insaturados desciende de 1,6 a 1,0 cuando la temperatura del cultivo pasa de 42 a 27 C. Esta disminucin en la proporcin de cidos grasos saturados evita que la membrana de vuelva demasiado rgida a la temperatura inferior.

En clulas animales, el colesterol es el principal regulador de la fluidez de las membranas. El colesterol consta de un voluminoso ncleo esteroideo con un grupo hidroxilo en un extremo y una cadena hidrocarbonada flexible en el otro.(fig. 3b) El colesterol se inserta en la membrana con su eje longitudinal perpendicular al plano de la membrana. El grupo hidroxilo del colesterol est unido por un puente de hidrgeno a un tomo de oxgeno del carbonilo de la cabeza del fosfolpido, mientras que la cadena hidrocarbonada del colesterol se coloca entre las cadenas apolares. El colesterol evita la cristalizacin de las cadenas de cidos grasos acomodndose entre ellas. De hecho, las concentraciones levadas de colesterol suprimen la transicin de fase de las bicapas. Un efecto opuesto del colesterol es bloquear estricamente los grandes movimientos de los cidos grasos y hacer as a la membrana menos fluida. As pues, el colesterol modera o modula la fluidez de la membrana .Las membranas plasmticas de la mayor parte de las clulas vegetales y de todas las clulas bacterianas carecen de colesterol. En la mayora de los hongos, el ergosterol reemplaza al componente colesterol que se encuentra en las membranas celulares de los eucariotas superiores.

8.1. LOS LPIDOS Y LAS PROTENAS SE PUEDEN MOVER EN LA MEMBRANA La fluidez es absolutamente necesaria para que se produzcan los mecanismos de transporte y el reacomodamiento permanente de los componentes de la membrana. Por otra parte, es necesaria cierta estabilidad que mantenga una estructuracin de la membrana. Esta estabilidad proviene de las interacciones hidrofbicas y de las fuerzas de van der Waals entre las cadenas de los lpidos, y por otra parte, de las fuerzas electrostticas y las uniones puente hidrgeno entre las cabezas polares de los fosfolpidos y el agua con sus solutos. En conjunto estas interacciones no covalentes dan origen a las "soluciones bidimensionales" de lpidos en lpidos en los cuales todos los compuestos estn confinados al plano de la bicapa, donde los lpidos y protenas se pueden mover. Se ha demostrado la migracin espontnea de los lpidos de uno a otro lado de la membrana (difusin transversal) es un proceso muy lento, con una frecuencia de ocurrencia muy baja, de una vez cada varias horas. En cambio, los movimientos paralelos al plano de la bicapa- la llamada difusin lateral - son mucho ms frecuente y alcanza altas velocidades de desplazamiento. Se ha demostrado que los lpidos intercambian lugares con sus vecinos aproximadamente 107 veces por segundo. Con respecto a las molculas proteicas, nunca se observ difusin de una capa a otra, pero s que se difunden dentro de una misma.

Los movimientos que pueden realizar los lpidos son:

De rotacin: es como si girara la molcula en torno a su eje. Es muy frecuente y el responsable en parte de los otros movimientos. De difusin lateral: las molculas se difunden de manera lateral dentro de la misma capa. Es el movimiento ms frecuente.

Flip-flop: es el movimiento de la molcula lipdica de una monocapa a la otra gracias a unas enzimas llamadas flipasas. Es el movimiento menos frecuente, por ser energticamente ms desfavorable. De flexin: son los movimientos producidos por las colas hidrfobas de los fosfolpidos.

8.2. LAS PROTENAS Y LOS LPIDOS DIFUNDEN EN LAS MEMBRANAS Las interacciones entre los diferentes lpidos y protenas son muy complejas y dinmicas. En los liposomas preparados a partir de un nico tipo de fosfolpido, la temperatura de cambio de fase es bastante precisa; por el contrario, en liposomas constituidos por una mezcla de lpidos, la temperatura de cambio de fase es menos precisa, porque ciertas agrupaciones individuales de lpidos pueden encontrarse tanto en estado de gel cristalino como de lquido cristalino. Debido a la composicin qumica heterognea de las membranas biolgicas, la temperatura de cambio de fase, no es precisa.

Interacciones entre lpidos y protenas provocan alteraciones en los estados de lquido y de gel por toda la membrana, apareciendo as reas de diferente fluidez. La presencia de glicerofosfolpidos con cidos grasos de cadena corta, as como el aumento en la instauracin en los grupos cido grasos, incrementan la fluidez. Los dobles enlaces en cis de los cidos grasos insaturados de los fosfolpidos producen una curvatura en la cadena hidrocarbonada que impide el empaquetamiento compacto de las cadenas y crea bolsas en las reas hidrofbicas. Se considera que estos espacios, que son mviles a causa del movimiento de las cadenas hidrocarbonadas, estn ocupados por molculas de agua y pequeos iones. El colesterol, con su estructura anular plana y rgida, reduce el enrollamiento de la cadena de cido graso y disminuye la fluidez. Se considera que un nivel elevado de colesterol sanguneo tiene una importancia clnica en la fluidez de las membranas celulares. El Ca+2 disminuye la fluidez de las membranas, debido a su interaccin con los fosfolpidos cargados negativamente, lo que reduce la repulsin entre los grupos polares e incrementa el empaquetamiento de las molculas lipdicas. El Ca+2 provoca la formacin de agregados de lpidos que reducen la fluidez de la membrana. Tambin vara la fluidez a distintos niveles de la membrana. Las cadenas hidrocarbonadas de los lpidos se mueven produciendo una fluidez dentro del ncleo hidrofbico. El rea central de la bicapa ocupada por los extremos de las cadenas hidrocarbonadas es ms fluida que las reas prximas a las dos superficies, en donde hay ms impedimentos debido a las proporciones ms rgidas de las cadenas hidrocarbonadas. El colesterol hace que la membrana sea ms rgida hacia la periferia, que no alcanza el ncleo central de la membrana. Los lpidos y protenas individuales pueden desplazarse rpidamente en un movimiento lateral por todo lo ancho de la superficie de la membrana. Sin embargo, las interacciones electrostticas con las cabezas polares, las interacciones hidrofbicas del colesterol con determinados fosfolpidos y glucolpidos y las interacciones lpido-protena, restringen este movimiento. Existen dominios en los que los lpidos se mueven de manera conjunta. Los glicerofosfolpidos (G) y el colesterol (C) se agrupan conjuntamente en microdominios concretos, las balsas lipdicas G,C y se mueven como una unidad. En algunas clulas estas balsas G,C junto con protenas especficas ancladas con glucosifosfatidilinositol estn implicadas en la formacin de cavidades, invaginaciones en forma de frasco de la membrana plasmtica. Estas estructuras interviene en la sealizacin celular y podran

ser responsables`de la separacin hacia los polos distintos de protenas especficas en las clulas epiteliales. Las protenas integrales de membrana se mueven en el entorno lipdico, tal como se demostr al fusionar clulas humanas y de rata. Cuando se marcaron las protenas antignicas de membrana ambas especies con diferentes anticuerpos, los marcadores indicaron la localizacin de las protenas sobre la membrana. Inmediatamente despus de la fusin de las clulas, las protenas de la membrana de la clula humana y las de la rata estaban segregadas en diferentes semiesferas de la nueva clula, pero al cabo de 40 minutos los dos grupos de protenas se haban distribuido uniformemente sobre la nueva membrana celular. Estos movimientos pueden ser slo vlidos para algunas protenas ya que en la mayora de las clulas los movimientos de las protenas estn restringidos por otras protenas de la membrana o de la matriz, as como por elementos estructurales celulares tales como microtbulos o microfilamentos a los que puedan estar adheridas. Existen pruebas de que la fluidez de las membranas celulares puede cambiar en respuesta a cambios en la dieta o en el estado fisiolgico. Su contenido en cidos grasos y colesterol es modificable por diversos factores. As mismo, ciertos agentes farmacolgicos pueden tener un efecto directo sobre la fluidez de la membrana. Los anestsicos, que inducen sueo y relajacin muscular, podran deber su accin al efecto sobre la fluidez de la membrana de clulas especficas. Compuestos sin relacin estructural y que inducen anestesia tiene como caracterstica en comn su solubilidad en los lpidos. In Vitro, los anestsicos aumentan la fluidez de la membrana. De este modo, las membranas celulares se encuentran en un estado constantemente cambiante, no slo mediante movimientos laterales de protenas y lpidos sobre la membrana, sino tambin a causa de las molculas que entran y salen de la membrana. La membrana crea una variedad de microambientes, que van desde la porcin hidrofbica del ncleo interior de la membrana a la interface con los entornos circundantes.

Anormalidades en la fluidez de las membranas celulares en estados patolgicos La fluidez de la membrana puede controlar la actividad de enzimas ligados a ella, y la de las funciones como la fagocitosis y el crecimiento celular. Un factor importante en el control de la fluidez de la membrana plasmtica en organismos superiores y manifiestos es la presencia de colesterol. Al aumentar el contenido de colesterol, las bicapas lipdicas se hacen menos fluidas en su superficie exterior, pero ms fluidas en el interior hidrofbico. Las membranas eritrocitarias de los individuos con anemia por cantositosis tienen un contenido de colesterol elevado y una forma espinosa al tiempo que las clulas se destruyen de manera prematura en el bazo. Esto se da, por ejemplo, en una enfermedad heptica grave como la cirrosis del hgado en los alcohlicos. El contenido de colesterol se halla incrementado en un 25 a 65 %, y la fluidez de la membrana disminuida. La membrana eritrocitaria requiere un grado elevado de fluidez para su funcionamiento, y cualquier descenso puede tener efectos graves en la capacidad de las clulas de pasar por los capilares. En otras clulas, el incremento de colesterol en la membrana plasmtica conduce a un incremento en el colesterol de las membranas intracelulares, lo cual tambin afecta su fluidez. El efecto txico del etanol sobre el sistema nervioso se debe probablemente a la modificacin de la fluidez de la membrana y a la alteracin de los receptores y canales inicos de la misma. Los individuos con abetalipoproteinemia presentan un incremento en el contenido de esfingomielina y una disminucin de fosfatidilcolina en las membranas celulares, lo que provoca una disminucin de la fluidez.

Las ramificaciones de estos cambios en la fluidez no se conocen an, pero se espera que, a medida que mejoren las tcnicas para la medida y la evaluacin de la fluidez de la membrana celular, algunas de las manifestaciones patolgicas en estados de enfermedad puedan explicarse sobre la base de cambios en la estructura y la funcin de las membranas.

8.3 ESTUDIOS EXPERIMENTALES DE LA FLUIDEZ Existen experimentos clsicos, demostrativos de la naturaleza fluida de las membranas plasmticas. Uno de los ms resaltantes es:

8.3.1Dinamismo de las membranas biolgicas Frye y Edidin (1970) analizaron el comportamiento de ciertas protenas de membrana plasmtica cuando se fusionaban dos clulas provenientes de distintas especies (ratn y hombre). Emplearon el virus Sendai como agente fusgeno. Estas clulas previo a la fusin y por separado se incubaron con anticuerpos dirigidos contra protenas de membrana plasmtica propias de cada tipo celular. Las clulas de ratn de incubaron con un segundo anticuerpo marcado con un colorante que emite fluorescencia verde cuando es excitado con luz UV, mientras que para las clulas humanas se emple uno que emite fluorescencia roja. Se fue observando a travs del tiempo la distribucin de la fluorescencia en la superficie de las clulas. Tambin se analiz el efecto de la temperatura y del ATP sobre la distribucin de la fluorescencia en los heterocaiontes.Para producir una disminucin de ATP endgeno las clulas se incubaron con inhibidores metablicos de la cadena respiratoria y de a glicolisis (dinitrofenol y fluoruro de sodio). Se muestran los resultados de los experimentos:

As descubrieron que las protenas pueden moverse en el plano de la membrana. Al aplicar una descarga elctrica las protenas tambin se movieron en la membrana plasmtica. Sin embargo, la nocin de que la membrana es un mar de lpidos en el que navegan protenas es muy simple. La clula tiene mecanismos para decidir donde colocar cada protena y ordenar la estructura de la membrana.

Demostracin experimental de la fluidez de la membrana

8.3.2 Datos del Virus Sendai El virus Sendai (Paramyxovirus) tiene la propiedad de que puede fusionar clulas animales de distinto origen emplendose en la obtencin de clulas hbridas somticas ratn-humanas. Dichas clulas hbridas eliminan cromosomas humanos al azar y es posible establecer a partir de ellas lneas celulares que contienen todos los cromosomas de ratn y algunos cromosomas humanos. Estas lneas celulares hbridas ratn-humanas se utilizan para averiguar en qu cromosoma humano se localiza un determinado gen, o en qu cromosoma se localiza un determinado fragmento de ADN humano.

Esquema virus Sendai (paramyxovirus)

Partculas del virus Sendai

Otros mtodos para demostrar la fluidez: 8.3.3 Mtodo del capuchn: Consiste en que los linfocitos B son puestos en contacto con anticuerpos fluorescentes capaces de unirse especficamente a molculas receptoras de su superficie. Las molculas se desplazan visiblemente en la membrana para formar placas que luego se aglomeran en un polo de la clula (capping) y originan un capuchn intensamente fluorescente. En este punto la porcin de la membrana que contiene el marcador se internaliza por endocitosis. Este proceso, que hace que la membrana del linfocito se vea desprovista de receptores durante varias horas, ocurre probablemente en el organismo cuando un linfocito B se une a un exceso de antgeno. Todo el proceso puede ser inhibido haciendo descender la temperatura, lo cual ocasiona que la membrana se solidifique.

8.3.4 Fotoblanqueado (FRAP-Fluorescence Recovery After Photobleaching) La Recuperacin de la Fluorescencia Despus de Fotoblanqueamiento (RFDF) es una tcnica experimental utilizada para observar y cuantificar el movimiento de molculas en un medio especfico. La tcnica RFDF se ha aplicado en diversas ocasiones para cuantificar la difusin de glicoprotenas en membranas celulares. Debido a que este tipo de protenas no cuentan con grupos qumicos en su estructura que sean fcilmente identificables, la

implementacin de RFDF para la medicin de su movilidad se realiza a travs de los siguientes pasos (Karp, 1996): 1) Se etiqueta selectivamente el tipo de glicoprotena de inters de forma homognea en toda la membrana celular, unindole qumicamente una molcula fluorescente (por ejemplo, un anticuerpo fluorescente). 2) Se irradia la superficie celular empleando un rayo lser, el cual blanquea de forma irreversible las molculas fluorescentes que encuentra en su trayectoria, dejando una rea de la superficie celular desprovista de fluorescencia o reducida a un valor mnimo. Tpicamente, el rea irradiada corresponde a un disco circular (aproximadamente de una micra de dimetro) aunque se dan casos de reas fotoblanqueadas con forma cuadrada, rectangular, etc. 3) Si las glicoprotenas marcadas en el Paso # 1 son mviles (es decir, no se encuentran unidas qumicamente a alguna molcula de la membrana celular), sus movimientos aleatorios provocarn una transferencia neta de masa por difusin desde el exterior del disco blanqueado hacia su interior, reapareciendo gradualmente la fluorescencia en el disco circular.

Figura 2.2. Procedimiento de la tcnica RFDF para cuantificar la difusin de glicoprotenas en membranas celulares. .

8.4 IMPORTANCIA DE LA FLUIDEZ DE LA MEMBRANA La fluidez determina el funcionamiento de la membrana. Los cambios de temperatura en el medio influyen en ella: A menor temperatura, menor fluidez (mayor viscosidad). El descenso de fluidez de la membrana puede detener procesos de transporte y enzimticos.

Permite interacciones dentro de la propia membrana, por otro lado interviene en el movimiento celular en el crecimiento y divisin celular. Es importante a nivel de las uniones intercelulares en el proceso de secrecin y en el proceso de endocitosis. La fluidez de la membrana es importante para permitir cambios de conformacin de las protenas incluidas, la continuidad gentica de unas membranas con otras, la fusin de membranas (exo y endocitosis, fecundacin) y la citocinesis (en animales). Finalmente, podemos agregar que de la fluidez de las membranas dependen importantes funciones, como el transporte, la adhesin celular, reconocimiento de antgenos. Debido a esto, las membranas tienen mecanismos de adaptacin homeoviscosa responsable de mantener la fluidez adecuada en cada momento.

Colesterol: Las molculas de colesterol se encuentran intercaladas entre los fosfolpidos, y su funcin principal es la de regular la fluidez de la bicapa inmovilizando las colas hidrofbicas prximas a las regiones polares.

A manera de un esquema de resumen podemos establecer que: Temperatura Insaturaciones Longitud de cadena Colesterol 9. ESQUELETO MEMBRANOSO: El esqueleto de la membrana es un sistema interconectado de protenas integrales y del citoesqueleto que conforma la forma celular, la estabilidad de la membrana, la organizacin de dominios membranosos y la adhesin celular. La clula mejor utilizada para estudiar el esqueleto de la membrana es el eritrocito. Por debajo de la membrana de ste subyace una malla filamentosa de espectrina, cono cortos filamentos de actinatropomiosina y otras protenas asociadas. Esta red continua se adhiere a protenas por medio de la protena de banda 4.1 y la acrina, las que se unen a la protena transmembranosa banda 3, que adems es un canal de intercambio aninico. Existen numerosas protenas que no se unen directamente a la membrana del eritrocito que contribuyen a la estabilidad de su esqueleto. El trmino banda 3 se refiere a un grupo de intercambiadores aninicos (AE 0-3), que estn presentes en la membrana de todas las clulas y organelos celulares, y que participan en diversas actividades fisiolgicas, entre las que se destacan el intercambio bicarbonato/ cloruro, unin de IgG y remocin celular y el mantenimiento de la integridad celular. a > temperatura - > fluidez a > N de insaturaciones - > fluidez a > longitud - < fluidez a > concentracin - < fluidez

El intercambiador aninico de banda 3 (AE 1) es la protena integral principal de la membrana del eritrocito; tiene un peso molecular aproximado de 95 kDa y es el prototipo de todos los AEs, constituido por 911 aminocidos y presenta alrededor de 1,2 X 106 copias por clula. Esta protena multifuncional tiene 3 dominios: un dominio de membrana transversal donde ocurre el intercambio cloruro/ bicarbonato, un dominio citoplasmtico corto C-terminal, y un dominio citoplasmtico largo N-terminal. El dominio C- terminal citoplasmtico de la banda 3 une la anhidrasa carbnica II (CA II), formando un complejo metablico que permite el paso de bicarbonato en la fase citoplsmica de la banda 3. El dominio citoplsmico N-terminal de la banda 3 une enzimas glicolticas, hemoglobina y hemicrones, que pueden inducir la agregacin de la banda 3 y el recambio celular. Una funcin fundamental del dominio N-terminal de la banda 3 es el anclaje de la membrana eritrocitaria al citoesqueleto subyacente. Por lo tanto, la banda 3 constituye el elemento

central de un macrocomplejo de protenas integrales y perifricas en la membrana del eritrocito. 9.1 COMPONENTES 1. Tropomiosina: Componente proteico de los filamentos del sarcmero. Regula, junto con la tropina, las interacciones de la actina y miosina en la contraccin muscular. 2. Glicoforina: Protena transmembrana, altamente glicosilada, presente en los eritrocitos. Forma una envoltura hidroflica alrededor del eritrocito, impidiendo que este se adhiera a otras clulas o a las paredes de los vasos.

3. Espectrina: Protena filamentosa que forma parte de la red del citoesqueleto de los eritrocitos, situada en la parte interna de su membrana. Se piensa que la interaccin entre la espectrina y otras protenas es responsable del mantenimiento de la forma bicncava del eritrocito y del mantenimiento de la asimetra de fosfolpidos entre las

caras interna y externa de la membrana plasmtica, y le confiere la propiedad de deformarse. 4. Actina: es una protena globular que forma los microfilamentos, uno de los tres componentes fundamentales del citoesqueleto de las clulas eucariotas. Se expresa en todas las clulas del cuerpo y especialmente en las musculares ya que est implicada en la contraccin muscular, por interaccin con la miosina. Puede encontrarse en forma libre o polimerizarse en microfilamentos, que son esenciales para funciones celulares tan importantes como la movilidad y la contraccin de la clula durante la divisin celular. Filamentos de actina Los filamentos de actina constituyen uno de los componentes del citoesqueleto, normalmente localizados cerca de la membrana plasmtica. Estn formados por la polimerizacin de dos tipos de protenas globulares: alfa y beta actina. La beta actina es la ms frecuente y aparece en la mayora de las clulas animales. Su secuencia de aminocidos difiere ligeramente de la alfa actina, la cual abunda en el msculo. La actina es una protena citoslica muy abundante, aproximadamente el 10 % del total de las protenas citoslicas. Una proporcin de las molculas de actina se encuentra formando parte de los filamentos (F-actina) y el resto son protenas globulares no polimerizadas (G-actina), disueltas en el citosol. Esta proporcin vara segn las necesidades celulares. Sin la actina una clula no podra dividirse, moverse o realizar fagocitosis. Un avance en el conocimiento de la funcionalidad de la actina se ha basado en la utilizacin que hacen de ella ciertos patgenos para llevar a cabo las infecciones. La manipulacin de estos patgenos y la obtencin de mutantes han ayudado a comprender muchos de los aspectos funcionales de los filamentos de actina. Estructura Los filamentos de actina poseen unos 7 nm de dimetro. Es el valor ms pequeo dentro de los filamentos que componen el citoesqueleto, por ello tambin se denominan microfilamentos. Poseen un extremo ms y otro menos, es decir, son filamentos polarizados. Ello es consecuencia de la disposicin ordenada de las subunidades de actina en el filamento, simpre se ensamblan con la misma orientacin. El extremo ms se denomina as porque en l predomina la polimerizacin, adicin de nuevos monmeros, respecto a la despolimerizacin, mientras que en el extremo menos predomina la despolimerizacin. El mecanismo de crecimiento y acortamiento de la longitud de los filamentos de actina es por polimerizacin y despolimerizacin, respectivamente, de los monmeros que los componen. En la clula se crean y se destruyen filamentos de actina continuamente. La formacin de nuevos filamentos es posible porque existen complejos proteicos denominados Arp2/3 que actan como centros nucleadores. Esto es tremendamente til para la clula puesto que permite crear nuevos filamentos all donde se necesitan. Las condiciones y la concentracin de actina en el citosol impiden que los monmeros se asocien espontneamente para formar filamentos.

Esquema de un filamento de actina donde se muestra como los monmeros de actina se disponen de forma helicoidal. Es una estructura polarizada donde las constantes de asociacin y disociacin de los monmeros son diferentes en los dos extremos (flechas verdes), aunque en ambos siempre es mayor la constante de asociacin para el monmero unido a ATP. Una vez polimerizado, el monmero hidroliza el ATP liberando Pi y quedando por tanto el monmero unido a ADP. Los filamentos de actina son ms abundantes, ms cortos y ms flexibles que los microtbulos, que veremos en el siguiente apartado. Una de sus grandes ventajas es que se organizan de muy diferente manera gracias a las denominadas protenas moduladoras de la actina, las cuales afectan a la velocidad de polimerizacin de los monmeros de actina, as como a la organizacin tridimensional de los filamentos. Estas protenas moduladoras se pueden clasificar en diferentes tipos: a) Afectan a la polimerizacin. Algunas protenas, como la profilina, se unen a los monmeros de actina libres e impiden su unin a filamentos preexistentes, mientras otras, como la timosina, favorecen su unin. b) Hay protenas moduladoras, como las fimbrina y la -actinina, que permiten la formacin de haces de filamentos de actina mediante el establecimiento de puentes cruzados entre filamentos, mientras otras, como la filamina, permiten la formacin de estructuras reticulares. c) Ciertas protenas moduladoras, como la cofilina, la katanina o la gesolina, provocan la rotura y remodelacin de los filamentos de actina; d) Tambin hay protenas que median en la interaccin de los filamentos de actina con otras protenas relacionadas, como es el caso de la tropomiosina, que media la interaccin entre actina y miosina. e) Las protenas de anclaje permiten la unin de los filamentos de actina a estructuras celulares como las membranas o a otros componentes del citoesqueleto. Existen ciertos factores que condicionan la accin de estas protenas moduladoras, como la variacin en la concentracin de calcio, protenas como las Rho-GTPasas, la presencia de lpidos o la mayor o menor expresin gnica de sus ARN mensajeros. Tambin hay drogas que afectan a la polimerizacin de los filamentos de actina. Por ejemplo, las citocalasinas impiden la polimerizacin y las faloidinas impiden la despolimerizacin.

La polimerizacin y polimerizacin de los filamentos de actina se ve afectada por numerosas protenas denominadas moduladoras. En este esquema se muestran algunas de las disposiciones de los filamentos de actina en la clula, as como ejemplos de las molculas moduladoras que los provocan. Funciones de los filamentos de la Actina Movimiento: Las clulas no nadan, se desplazan arrastrndose por el medio que las rodea y ello se hace por un mecanismo de reptacin, como ocurre en las clulas embrionarias durante el desarrollo, en el desplazamiento de las amebas, en la invasin de los linfocitos de los tejidos infectados o en los conos de crecimiento de los axones cuando buscan sus dianas. Se sabe que para los desplazamientos celulares se necesitan una serie de pasos: extensin de protusiones citoplasmticas hacia la direccin del movimiento, adhesin de stas al sustrato y arrastre del resto de la clula mediante traccin hacia esos puntos de anclaje. A estas protusiones se les denomina lamelipodios cuando son de forma aplanada, filopodios cuando son finas y delgadas o lobopodios cuando son gruesas y cilndricas. Cuando a las clulas en movimiento se las trata con citocalasinas, inhibidor de la polimerizacin de los filamentos de actina, las protusiones desaparecen y el desplazamiento se detiene, luego indica que la actina tiene un papel importante en su formacin. De hecho es la polimerizacin de los filamentos de actina lo que empuja y forma estas protusiones. Cuando estas expansiones contactan con algn lugar del medio extracelular donde se pueden unir, matriz extracelular o la supercie de otras clulas, lo hacen gracias a protenas de adhesin como las integrinas. Una vez anclada, la clula arrastra sus componentes intracelulares hacia el lugar de adhesin gracias a la actina y a protenas motoras como la miosina.

Las protenas motoras que se asocian con al actina para producir movimiento son del tipo de las miosinas. La energa es aportada por el ATP. En las clulas se encuentran bsicamente dos tipos de miosinas: tipos I y II. Las molculas de miosina I tienen una cabeza con la que se unen a los filamentos de actina y una cola para unir otros elementos, los cuales son arrastrados por el filamento de actina. Aparecen en la mayora de las clulas y sirven para el desplazamiento de ciertos orgnulos o para deformar la propia superficie celular. La familia de la miosina II se encuentra fundamentalmente en el msculo, aunque tambin aparece en otras clulas. stas tienen dos cabezas con actividad motora y capacidad de hidrlisis de ATP. Se suelen asociar en parejas, unidas a travs de sus colas. Muchos dmeros se asocian para formar los filamentos de miosina II, los cuales tienen una polaridad como una flecha de doble cabeza. En el msculo cada una de estas cabezas arrastra a filamentos de actina hacia el punto intermedio entre ellas, que se traduce en una contraccin celular. En el msculo liso acta otro mecanismo mediante el cual el calcio produce una fosforilacin de la miosina II permitindole la interaccin con la actina. Este proceso es mucho ms lento porque se necesita que las protenas quinasas lleguen a sus lugares de accin. o Endocitosis, fagocitosis: Los filamentos de actina se encuentran normalmente en los alrededores de la membrana plasmtica, en la denominada corteza celular, aunque en menor proporcin tambin aparecen en zonas ms internas de la clula. sta es una disposicin ideal para participar en procesos de endocitosis y exocitosis, o para formar parte de las microvellosidades de las clulas epiteliales. Citocinesis: El estrangulamiento final del citoplasma durante el proceso de divisin celular se produce gracias a un anillo de actina, que, ayudado por la miosinas, va estrechando su dimetro progresivamente hasta la separacin completa de los dos citoplasmas de las clulas hijas.

Establecen dominios de membrana: Los filamentos de actina tambin afectan a la movilidad lateral de las protenas de membrana creando barreras a modo de cercas en la cara citoslica de la membrana plasmtica que delimitan reas. Esto impide largos desplazamientos laterales por difusin de las protenas de la membrana. o Formacin de microvellosidades: Las microvellosidades son estructuras estables que permiten a la clula aumentar enormemente la superficie de su membrana plasmtica y aparecen en las clulas epiteliales como las del tubo digestivo. Cada microvellosidad tiene de 1 a 2 m de longitud y 0.1 m de dimetro, y contiene varias docenas de filamentos de actina orientados paralelos al eje longitudinal. Estos filamentos estn interconectados por protenas como la miosina, fimbrina y vilina, por lo que se cree que tienen cierta capacidad de movimiento. Adems, se encuentran unidos a la mebrana celular por otras protenas de enlace. En la base de las microvellosidades aparece un entramado llamado red terminal, formado fundamentalmente por actina, espectrina, miosina II y tropomiosina, el cual est conectado a la base de los haces de actina que forman las microvellosidades.

10. PERMEABILIDAD DE LA MENBRANA La permeabilidad de las membranas es fundamental para el funcionamiento de la clula viva y para el mantenimiento de condiciones fisiolgicas intracelulares adecuadas. Esta

funcin determina que sustancias pueden ingresar a la clula, muchas de las cuales son necesarias para mantener los procesos vitales y la sntesis de sustancias. Tambin regula el pasaje de agua y la salida de productos de desecho que deben ser eliminados de la clula. La presencia de membrana establece una neta diferencia entre el lquido intracelular y el extracelular en que est inmersa la clula. En los organismos unicelulares que crecen en los ros o en los mares, el lquido extracelular es el agua dulce o salada, respectivamente. En los organismos multicelulares el lquido interno, en especial el denominado liquido intersticial, es el que est en contacto con la superficie externa de la membrana celular. Una de las funciones de la membrana celular consiste en mantener la constancia de su medio intracelular, incluido el equilibrio osmtico con el lquido intersticial. La funcin reguladora del equilibrio hidroelectrolitico de la membrana plasmtica normal se aprecia mejor considerando ciertos defectos de la permeabilidad que ocurre por deplecin de ATP o por activacin de fosfolipasas como consecuencia de una serie de situaciones patolgicas. La membrana plasmtica tambin puede daarse directamente por el ataque de linfocitos citotxicos (con insercin de perforinas), por activacin del sistema del complemento, por toxinas bacterianas o por una multitud de agentes qumicos o fsicos. En todos estos casos la lesin celular inicial caracterstica es la tumefaccin o edema celular agudo, con aumento del volumen celular por ganancia de agua, dilatacin de los componentes del sistema de endomembranas y de mitocondrias, junto con alteraciones ms complejas que llevan con el tiempo a la muerte celular. Existen dos tipos muy diferentes de pasaje de sustancias a travs de las membranas celulares. En uno de ellos, que analizamos inicialmente, los iones o las molculas relativamente pequeas son transportados por diferentes mecanismos a travs de las membranas sin que estas experimenten deformaciones evidentes. En el segundo caso, denominado transporte en masa, las macromolculas o partculas mayores son incorporadas a la clula por mecanismos que incluyen cambios visibles en las membranas; como es de caso de la fagocitosis, la pinocitosis y la exocitosis. La permeabilidad depende de los siguientes factores:

Solubilidad en los lpidos: Las sustancias que se disuelven en los lpidos (molculas hidrfobas, no polares) penetran con facilidad en la membrana dado que est compuesta en su mayor parte por fosfolpidos. Tamao: la mayor parte de las molculas de gran tamao no pasan a travs de la membrana. Slo un pequeo nmero de molculas no polares de pequeo tamao pueden atravesar la capa de fosfolpidos. Carga: Las molculas cargadas y los iones no pueden pasar, en condiciones normales, a travs de la membrana. Sin embargo, algunas sustancias cargadas pueden pasar por los canales proteicos o con la ayuda de una protena transportadora.

Tambin depende de las protenas de membrana de tipo:

Canales: algunas protenas forman canales llenos de agua por donde pueden pasar sustancias polares o cargadas elctricamente que no atraviesan la capa de fosfolpidos. Transportadoras: otras protenas se unen a la sustancia de un lado de la membrana y la llevan al otro lado donde la liberan. Permeabilidad de las membranas a molculas pequeas. La permeabilidad es pasiva si slo obedece a las leyes de la fsica, como en el caso de la difusin simple. Es conocimiento comn que si se coloca en un recipiente con agua una solucin concentrada de una sustancia soluble (por ejemplo, azcar), se produce un movimiento de difusin del soluto siguiendo el gradiente de concentracin. Sin embargo, si se interpone una membrana lipoprotica del tipo de las membranas biolgicas, el movimiento de difusin se modifica considerablemente y la membrana acta como una barrera para el paso de ciertas sustancias. El pasaje de iones o molculas pequeas a travs de las membranas biolgicas puede ocurrir a favor o en contra de su gradiente de concentracin qumico o electroqumico.

10.1 PERMEABILIDAD DE LAS MEMBRANAS A MOLECULAS PEQUEAS La permeabilidad es pasiva si solo obedece a las leyes fsicas, como en el caso de la difusin simple. Es conocimiento comn que si se coloca en un recipiente con agua una solucin concentrada de una sustancia soluble (azcar), se producir un movimiento de difusin del soluto siguiendo el gradiente de concentracin. Sin embargo, si se interpone una membrana lipoproteica del tipo de membranas biolgicas, el movimiento de difusin se modifica considerablemente y la membrana actua como una barrera para el paso de ciertas sustancias. El pasaje de iones o molculas pequeas a travs de las membranas biolgicas puede ocurrir a favor o en contra de su gradiente de concentracin qumico o electroqumico. En el caso del transporte a favor de gradiente, ste se puede realizar sin gasto de energa (permeabilidad pasiva). En ocasiones, esta permeabilidad pasiva ocurre por difusin simple a travs de la bicapa lipdica, mientras que para todos los iones y para una gran cantidad de molculas son necesarias, en la membrana, protenas transportadoras especiales (canales inicos y permeasas). Se habla en este ltimo caso de difusin facilitada. Cuando el transporte debe hacerse en contra del gradiente de concentracin, es necesario emplear energa. Esta energa puede provenir de la utilizacin directa de ATP por medio de las protenas transportadoras, como es el caso del transporte activo primario (mediado por diversas categoras de bombas). Un ejemplo lo constituye la bomba de sodio-potasio. 10.1.1 Permeabilidad de una capa bilipdica. Difusin simple. Es posible construir en el laboratorio una bicapa que cierre la comunicacin entre dos compartimientos acuosos (membranas artificiales). En un sistema como ste se puede

estudiar el pasaje de diversas sustancias en membranas lipdicas con ausencia de protenas transportadoras. La figura anterior esquematiza el comportamiento de diferentes sustancias frente a una bicapa, en condiciones de gradiente favorable. Las pequeas molculas no polares (vale decir, hidrofbicas) difunden rpidamente a travs de las membranas. En general penetran ms rpidamente cuanto menor es la molcula y mayor su liposolubilidad. Pasan por difusin simple a travs de la bicapa los gases, el benceno y ciertos medicamentos liposolubles. Las molculas hidroflicas tambin pueden difundir, con la condicin de que no estn cargadas y de que posean pequeo tamao. De esa manera pasan rpidamente el metanol, el etanol y el glicerol. Tambin el agua puede atravesar la bicapa, aunque en la clula esto representa menos del 10% del total del pasaje acuoso a travs de la membrana. Las molculas hidroflicas mayores, del tamao de los monosacridos en adelante, no atraviesan las bicapas en ausencia de protenas. Es importante destacar que todas las partculas cargadas, por pequeo que sea su tamao (como el caso de un protn), son incapaces de atravesar la bicapa lipdica, dado que atraen molculas de agua (que son dipolares) y se rodean constantemente de una capa acuosa, y esta capa de hidratacin o nube acuosa es de considerables dimensiones. 10.1.2. Permeabilidad de las membranas celulares. Como en el caso de las membranas bilipdicas artificiales, las membranas biolgicas permiten la difusin simple del mismo tipo de molculas que aqullas. Sin embargo, en las membranas celulares tambin ocurre el pasaje de iones, aminocidos, monosacridos y aun molculas hidroflicas mayores. Esto se debe a la presencia, en todas las membranas biolgicas, de protenas transportadoras especiales. En general son protenas de paso mltiple, vale decir que la cadena polipeptdica recorre el espesor de la membrana varias veces, lo cual determina un interior acuoso en su estructura que asla del interior hidrofbico de la membrana a la sustancia transportada. Cada una de las protenas transportadoras es especfica, en el sentido de que transporta solamente un tipo de molcula y es capaz de discriminar incluso diferentes tipos de aminocidos o de monosacridos entre s. Transporte pasivo o difusin facilitada. Este tipo de transporte se hace siempre a favor del gradiente electroqumico, y las protenas transportadoras pueden ser de dos clases: canales inicos o permeasas. Una diferencia fisiolgica fundamental entre la difusin simple y el transporte pasivo lo constituye su cintica. En la difusin simple la velocidad de pasaje es siempre proporcional a la diferencia entre las concentraciones a ambos lados de la membrana, mientras que en el transporte pasivo (o difusin facilitada) la velocidad de transporte aumenta rpidamente con la diferencia de concentraciones, pero se llega a un tope (Vmax) cuando todas las protenas transportadoras de la membrana estn funcionando al mximo de su velocidad. Se dice

entonces que el sistema est saturado. Esto vale tanto para las permeasas como para los canales inicos. Canales inicos. El primer grupo de protenas transportadoras que consideraremos est constituido por los llamados canales inicos. Estos forman poros o conductos hidroflicos que recorren el espesor de todas las membranas celulares y permiten el flujo pasivo de iones a travs de stas. Son altamente selectivos, por lo que en general facultan el paso de un solo tipo de ion. Los canales inicos son tericamente saturables, aunque no en condiciones fisiolgicas. Existen canales que permanecen siempre abiertos, mientras que otros se abren y cierran regulados por seales qumicas, elctricas o mecnicas que provocan cambios conformacionales en las protenas del canal. Los canales regulados, de importancia fundamental en clulas musculares, secretorias, neuronas y otras, comprenden mltiples isoformas con diferentes tipos de regulacin, selectividad inica o velocidades de apertura o cierre, que se expresan de manera diferencial en distintos tipos celulares a lo largo del desarrollo. Canales regulados por voltaje. Existen canales regulados para sodio, potasio y calcio. Los canales de sodio de las clulas musculares, por ejemplo, permanecen cerrados cuando la membrana plasmtica mantiene su potencial de reposo que es negativo para el interior celular con una diferencia de voltaje de unos90 mv, cuando se despolariza un punto de la membrana de estas clulas, el campo elctrico modificado de la membrana influye sobre regiones cargadas de las protenas del canal, provoca su apertura. El sodio, ms concentrado en el exterior de la clula que en el interior, penetra por diferencia de gradiente electroqumico y contribuye an ms al cambio de potencial, pues hace que se abran canales de sodio ms alejados y causa as la propagacin de la despolarizacin a lo largo de la membrana.

 Canales regulados por ligando. Se trata de canales-receptores que, al unirse con su ligando especfico experimentan un cambio conformacional que determina su apertura. Un ejemplo lo constituye el receptor de acetilcolina, canal de sodio regulado que en la sinapsis se encarga de iniciar la despolarizacin de la membrana postsinptica. Los ligandos pueden unirse al lado extracelular del canal como, por ejemplo, los neurotransmisores o, en algunos casos, al dominio citoslico, como ocurre con el AMPc u otros mensajeros intracelulares. Canales regulados mecnicamente. Se abren regulados por el estiramiento de las membranas. Se piensa que la tensin es transmitida a las protenas del canal por elementos del citoesqueleto. En el caso de las clulas neuroepiteliales del odo interno las fuerzas que actan sobre estos canales se transmiten a travs de fibrillas insertadas en la cara extracelular Permeasas. El segundo tipo de protenas para el transporte pasivo lo constituyen las permeasas o transportadores (a veces denominadas carriers segn su nombre en ingls). Tambin son muy especficas, ya que discriminan incluso entre ismeros, como es el caso de la glucosa y la galactosa, que si bien difieren solamente en la posicin de un oxhidrilo en el carbono 4, requieren dos permeasas diferentes. En todos los casos la molcula transportada debe unirse a un sitio especfico de la permeasa la que sufre una serie de cambios conformacionales para finalmente trasladar al soluto a la cara opuesta de la membrana sin gasto de energa. Estos procesos limitan la velocidad del transporte, que es ms lento que para el caso de los canales inicos. En la figura anterior se representa el mecanismo propuesto para el transporte selectivo por medio de permeasas. Otro de los mecanismos postulados para la difusin facilitada, el del translocador mvil, es muy improbable desde el punto de vista termodinmico. El nico caso de transportadores mviles conocido es el de ciertos ionforos de uso experimental, como la valinomicina o el A23187. Otros ionforos utilizados, como el antibitico gramicidina, forman canales convencionales. Transporte activo. En algunos casos las protenas transportadoras deben mediar el pasaje de iones o de molculas en contra del gradiente electroqumico. En estas circunstancias se requiere el uso de energa y se habla de transporte activo. Existen dos tipos de transporte activo: el primario (mediado por ATPasas) y el secundario (media- do por protenas cotransportadoras). En ambos casos, directa o indirectamente debe consumirse energa, y sta proviene sobre todo de la fosforilacin oxidativa en las mitocondrias. Como consecuencia de ello, el transporte activo est acoplado a la respiracin celular. Transporte activo primario. Las permeasas especiales que utilizan ATP directamente como fuente de energa para el transporte activo se denominan bombas o ATPasas. Las

bombas (o ATPasas de membrana) comprenden varias familias de protenas. Algunas estn formadas por mltiples cadenas polipeptdicas asociadas, y todas tienen en comn la caracterstica de que transportan (y a veces cotransportan) un determinado tipo de ion en contra del gradiente electroqumico con utilizacin de ATP En algunos casos, como el de la P-170, la molcula transportada no es un ion. Analizaremos varios ejemplos de bombas o ATPasas de membrana. Bombas de protones. Existen varias clases, algunas de ellas asociadas a las membranas plasmticas y otras a organoides membranosos, como lisosomas, endosomas, grnulos secretorios y vacuolas de clulas vegetales y de eucariotas inferiores. En el interior de los endolisosomas determinan una concentracin de iones hidrgeno que lleva el pH a valores inferiores a 5. Las ATPasas de clase F de los procariotas, cloroplastos y mitocondrias tambin son bombas protnicas, pero en el caso de las mitocondrias suelen funcionar en reversa sintetizando ATP. Bombas de calcio. Existen en las membranas plasmticas y en las membranas internas como del retculo sarcoplasmtico. En ambos casos el calcio es removido del citosol hacia el exterior de la clula o hacia el interior del compartimiento citoplasmtico secuestrador de calcio. Ambos mecanismos, junto con un sistema de antiporte sodio-calcio, que analizaremos ms adelante, son responsables de que el calcio se mantenga unas 4.000 veces menos concentrado en el citosol que en el medio extracelular. Glucoprotena P (P-170). Comprende una variedad de isoformas de protenas transmembranosas que se expresan en las membranas plasmtica de los hepatocitos, enterocitos y clulas del epitelio renal. Intervienen en la excrecin hacia la bilis, el intestino y la orina de una serie de toxinas hidrofbicas del metabolismo normal, a las que transportan contra gradiente al exterior de las clulas con consumo de ATP. A este tipo de molcula tambin se la llama ATPasa de resistencia a multidrogas, dado que ciertas clulas tumorales sobreexpresan esta protena, que extrae rpidamente del citoplasma a las drogas citostticas y torna inefectiva la quimioterapia antitumoral. Bomba de sodio-potasio. Es de fundamental importancia para el metabolismo celular. Est constituida por un tetrmero de dos subunidades transmembranosas y dos . En el dominio citoslico de la subunidad reside el sitio cataltico para a hidrlisis del ATP y el sitio para la unin de tres iones sodio. En el dominio extracelular existe el sitio de unin de dos iones potasio; este sitio puede ser ocupado por la ouabana, que es un glucsido digitlico que inhibe el funcionamiento de la bomba. La concentracin de sodio es caractersticamente unas 15 veces mayor en el lquido extracelular que dentro de la clula, mientras que la situacin inversa se da para el

potasio, que es preferentemente intracelular. Estas concentraciones son mantenidas por la actividad de la bomba de sodio-potasio, que cotransporta ambos iones en contra de sus gradientes. Dado que se debe Como consecuencia de la actividad de la bomba de sodio-potasio, la clula puede mantener su balance osmtico y estabilizar as su volumen. En algunos casos de anoxia o lesin celular, la produccin de ATP est disminuida y la energa disponible no es suficiente para el funcionamiento normal de la bomba de sodio-potasio. Como ya vimos, en estas circunstancias la lesin celular inicial caracterstica es la tumefaccin o edema celular agudo con aumento del volumen celular por ganancia de agua, junto con alteraciones ms complejas que culminan en la muerte celular. Se dice que la bomba de sodio-potasio es electrognica, vale decir que tiende a crear un potencial elctrico de membrana, con el interior negativo, dado que por cada tres cationes que extrae de la clula introduce solamente dos. Las propiedades elctricas de la membrana se considerarn en detalle ms adelante. Transporte activo secundario. Utiliza la energa potencial contenida en el gradiente favorable de la sustancia cotransportada. El elemento ms importante que motoriza el cotransporte a travs de la membrana plasmtica es el sodio, cuyo gradiente favorable, a su vez, debe mantenerse con gran gasto de energa. En algunas ocasiones la sustancia cotransportada es introducida contra gradiente junto con el sodio (simporte), como en uno de los tipos de transportadores de glucosa de los enterocitos o del epitelio renal. En otras clulas la entrada de sodio se utiliza para extraer al otro elemento (antiporte), como el intercambiador de sodio-calcio de los cardiocitos. A propsito de este ltimo ejemplo, recordemos que los glucsidos digitlicos, como la ouabana, inhiben la bomba de sodiopotasio. Este es justamente el mecanismo de accin de los digitlicos en la terapia de la insuficiencia cardiaca congestiva: alterar el gradiente de sodio, de modo de interferir en su cotransporte con el calcio; el consiguiente aumento de la concentracin de ste en los cardiocitos incrementa su contractilidad. 10.2 PERMEABILIDAD DE LAS MEMBRANAS A MACROMOLCULAS Y PARTCULAS. Las macromolculas y las partculas de nivel supramolecular, algunas de ellas de gran tamao, pueden ser introducidas en la clula (o extradas de ella) por un mecanismo completamente diferente de los que acabamos de analizar. En sentido estricto, estas partculas nunca atraviesan las membranas, sino que por un proceso de deformacin y fusin de membranas se produce el llamado transporte en masa, que incluye las diversas formas de endocitosis (pinocitosis y fagocitosis) si el material se incorpora a la clula; si el material es eliminado al exterior se habla de exocitosis.

11. RECEPTORES DE MEMBRANA Las hormonas polipeptdicas se unen generalmente a sus receptores especficos en la membrana celular. El receptor reconoce caractersticas estructurales de la hormona que generan un alto grado de especificidad y afinidad. La unin de la hormona al receptor puede provocar cambios conformacionales en la molcula de receptor que permiten la asociacin con el transductor, en el que pueden tener lugar cambios adicionales para permitir la interaccin con una enzima en el lado citoplasmtico de la membrana celular. Los cambios conformacionales en la enzima, a su vez, hacen que se active su sitio cataltico. Es ms, en algunos casos, el complejo receptor "activado" podra, fsicamente, abrir un canal inico en la membrana o tener otros impactos profundos sobre su estruc-

tura. Este proceso se conoce como TRANSDUCCIN DE LA SEAL y a las molculas participantes en las interacciones se los llama genricamente transductores o molculas transductoras. Muchas de las hormonas que se unen a receptores de membranas transmiten sus seales mediante: 1) aumento del AMPC y la activacin de la ruta de la protena quinasa A 2) el aumento del GMPC y la activacin de la ruta de la protena quinasa G 3) activacin de la hidrlisis del fosfatidilinositl 4,5 bifosfato y la estimulacin de la ruta de la protena quinasa C. La protena quinasa A y la protena quinasa C fosforilan residuos de treonina o serina, modificando la actividad enzimtica de manera especfica en cada tipo celular ejerciendo as efectos sobre el metabolismo. Existen adems otros mecanismos menos frecuentes de transferencia de seal que, por ejemplo, afectan a molculas de membranas tales como la fosfatidilcolina. Otro mecanismo de transduccin, a travs de la activacin de cascadas de quinasas, implica la fosforilacin de residuos de tirosina, serina o treonina y tiene lugar en los dominios citoplasmticos de algunos receptores de membrana; especialmente, en receptores para factores de crecimiento. Este sistema es importante en el caso del receptor de insulina, el receptor del IGF (insulin grow factor), Hormona de crecimiento (GH) y Prolactina (PRL) as como de Factores de crecimiento, productos de ciertos oncogenes (PDGF; EGF; FDGF).

11.1 TRANSDUCCIN DE LA SEAL: ACTIVACIN DE LA ADENILCICLASA. PROTENAS G. La mayora de los transductores de receptores en la membrana celular son protenas G. Las protenas G constan de tres tipos de subunidades: a, b y g. La subunidad a es el componente de fijacin del nucletido de guanina y se cree que interacciona indirectamente con el receptor a travs de las subunidades b y g , a continuacin, directamente con un enzima, lo que da como resultado la activacin del enzima. El caso ms conocido es el de la activacin de la enzima Adenilato Ciclasa por ligado de H-R y activacin de protenas G, mecanismo que describimos a continuacin. En realidad existen dos formas de la subunidad a, designadas as la subunidad a estimuladora y ai para la subunidad a inhibidora. Dos tipos de receptores, y por tanto de hormonas, controlan la reaccin de la adenilato ciclasa: hormona-receptores que dan lugar a una estimulacin de la adenilato ciclasa, y aquellos que dan lugar a una inhibicin de la ciclasa.

La hormona se une al receptor en la membrana (Paso 1); esto produce un cambio conformacional en el receptor que deja expuesto un sitio para la fijacin de protena G subunidad b g (Paso 2); la protena G puede ser tanto estimuladora, Gs, como inhibidora, Gi, en relacin con el efecto final sobre la actividad de la adenilato ciclasa; el receptor interacciona con la subunidad b g de la protena G permitiendo que la subunidad a intercambie el GDP unido por GTP (Paso 3); la disociacin de GDP provoca la separacin entre la subunidad a y la subunidad b g de la protena G con lo que en la superficie de la subunidad a de la protena G se origina un sitio de unin para la interaccin con la adenilato ciclasa (Paso 4); la subunidad a se une a la adenilato ciclasa y activa el centro cataltico, de modo que el ATP es convertido en cAMP (Paso 5); el GTP se hidroliza a GDP por la actividad GTPasa de la subunidad a, devolvindola a su conformacin original y permitiendo de nuevo su interaccin con la subunidad b g (Paso 6); el GDP se asocia con la subunidad a y el sistema retorna al estado no estimulado en espera de otro ciclo de actividad. Es importante destacar las pruebas que sugieren que los complejos b, g pueden desempear funciones importantes en la regulacin de determinados factores, includa la adenilato ciclasa.(figura 7)

En el caso en que una protena G inhibidora se acople al receptor, los fenmenos son similares, pero la inhibicin de la actividad adenilato ciclasa puede producirse aqu por interaccin directa de la subunidad a inhibidora con la adenilato ciclasa o, alternativamente, la subunidad a inhibidora puede interaccionar directamente con la subunidad a estimuladora del otro lado y evitar as indirectamente la estimulacin de la actividad adenilato ciclasa. Diversos experimentos han permitido identificar al menos 15 genes distintos que codifican las subunidades a en mamferos. Tambin parece existir diversidad entre las formas b y g de mamferos. Se han descripto al menos 4 DNAc de subunidades b y probablemente un nmero igual en las g. Un mecanismo similar de activacin de protenas G se propone para la activacin de la guanilatociclasa, enzima que cataliza la sntesis de GMPc a partir de GTP.

11.2 SEGUNDOS MENSAJEROS AMP cclico.

La formacin de cAMP en la clula normalmente activa la protena quinasa A, lo que se denomina ruta de la protena quinasa A. La ruta completa utiliza cuatro molculas de cAMP en la reaccin que forma un complejo entre dos subunidades reguladoras (R), liberndose dos subunidades catalticas (C) de la protena quinasa. Las subunidades catalticas de proteinquinasa A liberadas son capaces de fosforilar protenas para producir un efecto celular. En muchos casos, el efecto celular provoca la liberacin de hormonas preformadas,. Por ejemplo, la ACTH se une a receptores de membrana, eleva el nivel de AMPc intracelular, y libera cortisol desde las clulas de la zona fasciculata de la glndula adrenal mediante este mecanismo general. La ruta del AMPc interviene en una parte del mecanismo de liberacin de hormonas tiroideas desde la glndula tiroidea. Se ha demostrado que la TSH (tirotrofina) estimula numerosos pasos clave en este proceso de secrecin, entre ellos la captacin de yodo y la endocitosis de tiroglobulina. La ruta de la protena quinasa A es tambin responsable de la liberacin de testosterona por las clulas de Leydig

testiculares. En otros casos se modifica la actividad de enzimas del metabolismo como en el caso de glucagon y adrenalina sobre enzimas de la gluclisis. Por tlimo, puede tambin activarse una protena llamada CBP que migrando al ncleo reconocen enhancers especficos llamados sitios CREB, elementos de respuesta a cAMP, con lo que se puede modificar actividades enzimticas por induccin o represin de genes. Son muchas las hormonas que actan a travs de este mecanismo.

IP3, DAG, Calcio-calmodulina

El descubrimiento del regulador de la actividad de la fosfodiesterasa dependiente de calcio proporcion la base para comprender la manera en que el Ca2+ y el AMPc interactan dentro de la clula. El trmino con el que se conoce ahora a la protena reguladora dependiente del calcio es calmodulina, una protena de 17 KDa homloga a la protena muscular troponina C en estructura y funcin. La calmodulina tiene cuatro sitios para fijacin del calcio y la ocupacin total de estos sitios conduce a un cambio notable de la conformacin, de modo que la mayor parte de la molcula asume una estructura de hlice alfa. Se presume que este cambio de conformacin confiere a la calmodulina la propiedad para activa o inactivar enzimas (por ejemplo, adenil ciclasa, fosfolipasa A2, glicerol-3 fosfato deshidrogenasa, piruvato carboxilasa, piruvato dashidrogenasa, protena cinasa dependiente Ca2+/fosfolpido entre otras). La interaccin de calcio con la calmodulina (con el cambio resultante de actividad de la ltima) es conceptualmente anloga a la fijacin del AMPc a la protena cinasa y la activacin subsiguiente de esta molcula. Con frecuencia, la calmodulina es una de las subunidades reguladoras de protenas oligmeras, entre ellas varias cinasas y enzimas, participando en el metabolismo de combustibles como en la generacin y degradacin de nucletidos cclicos y el transporte de iones. Adems de estos efectos, el complejo calcio/calmodulina

regula la actividad de numerosos elementos estructurales en las clulas. Entre otros el complejo actina-miosina del msculo liso, que est bajo control beta adrenrgico, y varios procesos mediados por microfilamentos en las clulas no contrctiles inclusive la movilidad de la propia clula, los cambios conformacionales, la mitosis, la liberacin de grnulos y la endocitosis. Los niveles de calcio citoslicos pueden modificarse tanto por ingreso del calcio extracelular como por la liberacin desde su principal depsito intracelular: el retculo endoplsmico. La variacin de los niveles de calcio puede controlarse directamente por ligado de la hormona al receptor (ej: neurotransmisores) tanto como a travs de las modificaciones en los niveles de IP3- DAG por accin de la fosfoilpasa C (ej: insulina). Una hormona que opera a travs de este sistema se une a un receptor especfico de la membrana celular, que interacciona con una protena G segn un mecanismo similar al de la ruta de la protena quinasa A y transduce la seal, lo que da como resultado la estimulacin de fosfolipasa C. Esta enzima cataliza la hidrlisis de fosfatidilinositol 4,5bifosfato (PIP2) para formar dos segundos mensajeros, diacilglicerol (DAG) e inositol1,4,5-trisfosfato (IP3). El inositol 1,4,5-trisfosfato difunde hacia el citoplasma y se une a un receptor de IP3 en la membrana de un depsito de calcio, que puede estar separado del retculo endoplasmtico, o bien formar parte del mismo. Esta unin da como resultado la liberacin de iones calcio, que contribuye a un gran incremento del calcio citoplasmtico. Por otro lado, el IP3 se metaboliza por eliminacin progresiva de grupos fosfato hasta formar inositol. Este se combina con cido fosfatdico (PA) para formar fosfatidilinositol (PI) en la membrana celular. Este ltimo es fosforilado doblemente por una quinasa para formar PIP2, que bajo estmulo hormonal ya puede entrar en otra ronda de hidrlisis y formacin de segundos mensajeros (DAG e IP3). Si el receptor todava est ocupado por una hormona, pueden producirse varias rondas del ciclo antes de que se disocie el complejo hormona-receptor. Por ltimo, es importante destacar que no todo el IP3 es desfosforilado durante la estimulacin hormonal. Parte del IP3 es fosforilado mediante la IP3 quinasa para dar lugar a inositol 1,3,4,5-tetrafosfato (IP4), que puede mediar en algunas de las respuestas hormonales ms lentas o prolongadas -a travs de la activacin de cascadas de quinasas/fosfatasas -con la modifiacin final de la expresin gentica.

El DAG activa la ruta de la protena quinasa C. Simultneamente al aumento de Ca2+ citoplasmtico inducido por el IP3, el cual procede de la hidrlisis de PIP2, el DAG produce diversos efectos. El DAG activa una importante protena quinasa de serna/treonna denominada protena quinasa C por su dependencia de calcio. El aumento inicial del calcio citoplasmtico inducido por IP3 parece alterar de algn modo la protena quinasa C, de modo que sta es translocada desde el citoplasma hacia la cara citoplasmtica de la membrana plasmtca. Una vez translocada, es activada por una combinacin de calcio, DAG y el fosfolpido negativo de la membrana, fosfatidilserina. Tras su activacin, la protena quinasa C fosforila protenas especficas en el citosol o, en ocasiones, en la membrana plasmtica. Estas protenas fosforiladas llevan a cabo funciones especficas que no pueden realizar en el estado desfosforilado. Por ejemplo, una protena fosforilada podra migrar hasta el ncleo e incrementar la mitosis y el crecimiento. Adems, el sitema IP3-DAG puede modificar la actividad de una familia de enzimas llamadas genricamente fosfodiesterasas, de las cuales es ms abundante la fosfodiesterasa 1 (FD1), cuya activacin permite la destruccin de molculas de cAMP. De este modo hormonas cuyo segundo mensajero es el IP3 pueden reducir los niveles de cAMP en forma indirecta. GMP cclico. Ruta de la protena quinasa G.

El tercer sistema es el sistema de la protena quinasa G, que se estimula por el aumento de cGMP citoplasmtico. El GMP cclico es sintetizado por la guanilato ciclasa a partir de GTP. Al igual que la adenilato ciclasa, la guanilato ciclasa est vinculada a una seal biolgica especfica a travs de un receptor de membrana. El dominio extracelular de la guanilato ciclasa puede ejercer la funcin de receptor hormonal. Est directamente acoplado al dominio citoplasmtico mediante un dominio que abarca la membrana, que puede tambin aplicarse al receptor del factor atrionatriurtico (ANF) tambin

denominado sistema de la guanilato ciclasa-receptor. As, una sola cadena polipeptdica proporciona el sitio de unin de hormona, el dominio transmembrana y la actividad guanilato ciclasa. El cGMP producido activa una protena quinasa G, que posteriormente fosforila protenas celulares para que se expresen muchas de las acciones de esta ruta. Es necesario conocer ms datos acerca de la protena quinasa G. Otra molcula capaz de activar la ruta de la proteinquinasa G es el xido Nitrico, producido por ejemplo, por las clulas endoteliales. El cGMP tambin es el mediador de la respuesta a la luz en los procesos de la visin. Aunque en estos casos no se trata de seales del sistema endocrino Mediante el uso de anlogos del ANF se ha mostrado que la mayora de receptores expresados en el rin son "silenciosos" desde el punto de vista biolgico, dado que no pueden desencadenar una respuesta fisiolgica. Esta nueva clase de receptores puede servir como un sistema perifrico de almacenaje y eliminacin, y de este modo actuar como tamponador hormonal que module los niveles plasmticos de ANF.

11.3 TRANSDUCCIN A TRAVS DE TIROSINA QUINASA: EL RECEPTOR DE INSULINA Las subunidades a del receptor de insulina se localizan fuera de la membrana celular y aparentemente constituyen el sitio de unin de la insulina. El complejo insulina-receptor experimenta una secuencia de activacin que probablemente incluye cambios conformacionales y fosforilaciones (autofosforilaciones) de residuos de tirosina localizados en la porcin citoplasmtica del receptor (subunidades b). Esto da como resultado la

activacin de la actividad tirosina quinasa ubicada en la subunidad b , que ahora es capaz de fosforilar protenas citoplasmticas que pueden transmitir la seal de insulina al interior de la clula. El resultado neto de estas fosforilaciones incluye una serie de efectos metablicos a corto plazo, por ejemplo un aumento en la captacin de glucosa, as como tambin efectos a largo plazo de la insulina en la diferenciacin celular y el crecimiento. Aunque, como ya se ha mencionado anteriormente, el propio receptor de la insulina es una tirosina quinasa que se activa por la unin de la hormona, las fosforilaciones que ocurren a continuacin se dan predominantemente en residuos de serina y treonina. Tambin se muestra que la insulina puede estimular simultneamente la fosforilacin de algunas protenas y la desfosforilacin de otras. Ambos sucesos bioqumicos pueden conducir a la activacin o la inhibicin de enzimas especficas implicados en la mediacin de los efectos de la insulina. Estos procesos opuestos (fosforilacin y desfosforilacin) mediados por la insulina pueden sugerir que estas acciones pleiotrpicas se deban a rutas separadas de transduccin de seal originadas a partir del receptor de la insulina. Los sustratos de la tirosina quinasa del complejo insulina-receptor constituyen en la actualidad un importante campo de investigacin; ya que las protenas fosforiladas podran ser las responsables de los efectos de la insulina a largo plazo. La actividad directa de fosforilacin de la tirosina quinasa del receptor, podra explicar tambin el movimiento de receptores de glucosa (transportadores) desde el interior de la clula hasta la superficie para dar cuenta del aumento en la utilizacin de glucosa celular en clulas que usan este mecanismo para controlar la incorporacin de glucosa. Se plantea como esquema hipottico de la transduccin de la seal en la accin de la insulina, lo siguiente: Tras la unin de la hormona, el receptor de la insulina es autofosforilado en las tirosinas y se activa la quinasa. El receptor fosforila sustratos intracelulares, incluidas las protenas IRS-1 y Shc, las cuales, despus de ser fosforiladas, se asocian con protenas que contienen dominios SH2, como p85, SYP o Grb2. La formacin del complejo IRS1-p85 activa la PI 3-quinasa; el complejo IRS-l-SYP activa la SYP lo cual conduce a la activacin del MEK. El complejo Shc-Grb2 hace de mediador en la estimulacin de la unin de GTP a la P2l Ras, lo cual desencadena una cascada de fosforilaciones. Estas fosforilaciones probablemente se dan de forma secuencial, y en ellas interviene el protooncogn raf, la MEK, la quinasa de MAP y la quinasa II de S6. Es probable que el receptor se acople por separado a la activacin de una fosfolipasa C especfica que cataliza la hidrlisis de las molculas de glucosil-PI en la membrana plasmtica. El inositol fosfato glucano (IPG), producto de la reaccin anterior puede actuar como segundo mensajero, especialmente en lo que se refiere a la activacin de fosfatasas de serina/treonina y la posterior regulacin del metabolismo de la glucosa y los lpidos. (Abreviaturas: IRS-1, sustrato-1 del receptor de la insulina; SH, homologa src, quinasa de MAP quinasa de la protena activada por mitgenos; MEK, quinasa de MAP; GPI, glucosil fosfatidil inositol; PLC; fosfolipasa C; SOS, "son of sevenless").

Considerando los mecanismos conocidos hasta el momento, la siguiente tabla muestra los ejemplos ms importantes de transduccin de la seal a travs de receptores de membrana. Aunque hay que tener en cuenta que existen hormonas como la insulina que utilizan dos mecanismos de transduccin (quinasas e IP3) a partir de un mismo receptor y tambin hormonas que en los diferentes tejidos poseen receptores que activan seales de transduccin diferente (ej: ADH, su receptor V1 activa IP3-DAG y su receptor V2 activa cAMP). 11.4 ENSAMBLAJE DE UNA MEMBRANA La formacin de una bicapa lipdica es un proceso espontneo en el que fuerzas intermoleculares como interacciones de van der Waals, e interacciones hidrofobicas (mediada por el efecto hidrofbico) favorecen que las colas de los lpidos se autoasocien y autoensamblen espontneamente en una bicapa lipdica con las capaces polares orientadas hacia el agua, y las colas hidrofbicas hacia el interior. As, cuando los fosfolpidos se disuelven en agua forman espontneamente una micela o una bicapa lipdica en forma de liposomas.

11.4.1 Estructura qumica de un fosfolpido

Estructura de la fosfatidilcolina unos de los fosfolpidos (fosfoglicerido) ms comunes en las membranas biolgicas. Estructura qumica y representacin de modelos de bolas de su estructura atmica, que da una idea aproximada de la forma de la molcula.

11.4.2 Sealizacin molecular Ciertas protenas integrales de membrana sirven tambin como receptores para recibir y transducir seales qumicas o fsicas del ambiente externo al interior celular. Permiten por ello la comunicacin de la clula con su entorno exterior. Protenas receptores de membrana sirven para sentir estmulos externos (generalmente una pequea molculas sealizadora, e.g. hormona o un estmulo fsico, luz por ejemplo) y poner en marcha una cascada de sealizacin interna que conduce a la generacin finalmente una respuesta fisiolgica adecuada. En muchos casos los receptores tienen tambin actividad enzimtica.

Por ejemplo, el receptor de insulina, una hormona pptidica que controla los niveles de glucosa en sangre es una protena integral de membrana que tiene tambin actividad enzimtica (quinasa).

Unin intercelular. Las protenas de membranas adyacentes pueden actuar como puentes de unin entre clulas. Permiten la comunicacin intercelular. Las uniones comunicantes (gap junctions en ingls) un ejemplo de estructuras para la comunicacin intercelular construidas con protenas integrales de membrana llamadas conexinas. 12. ANEMIAS HEMOLITICAS HEREDITARIAS Las anemias hemolticas heredadas se deben a defectos congnitos de alguno de los tres componentes de los hemates: la membrana, las enzimas o la hemoglobina. Trastornos de la membrana de los hemates Estos suelen descubrrse por las alteraciones morfolgicas de los hemates observadas en los frotis de sangre perifrica. 12.1 ESFEROCTOSIS HEREDITARIA Se caracteriza por la presencia de hemates esfricos debidos a un defecto molecular que afecta a una de las protenas del citoesqueleto de la membrana eritrocitaria. Este proceso suele tener una herencia autosmica dominante y una incidencia aproximada de 1:1000 a 1:4500. A veces, el proceso se manifiesta en la primera infancia, pero es frecuente que su diagnstico no se haga hasta la vida adulta. Patogenia. La alteracin molecular afecta principalmente a la espectrina que es responsable de anclar la doble capa de lpidos a la red del citoesqueleto bsico. Alrededor del 50 % de los pacientes tiene tambin un defecto de anquirina, una protena que forma un puente entre la protena 3 y la espectrna. Los pacientes con herencia recesiva del

dficit de anquirina tienen una anemia ms intensa que aquellos que heredan el defecto de forma dominante. Cuando estas protenas son defectuosas, la doble capa de lpidos no est bien sujeta y parte de ella desaparece dando lugar a una clula ms redonda y menos deformable. Debido a su forma y su rigidez, los esferocitos no pueden atravesar los intersticios esplnicos, especialmente los que limitan con los senos venosos del bazo, y quedan expuestos a un ambiente donde no puede mantenerse su elevado metabolismo basal, lo que provoca nuevas prdidas de la superficie de la membrana. Clnica: Anemia, esplenomegalia e ictericia (ictericia hemoltica congnita) que obedece al aumento de la concentracin de bilirrubina no conjugada (de reaccin indirecta) en el plasma. Es frecuente la litiasis por clculos pigmentarios, incluso en la niez. En los huesos largos se observa hiperplasia eritroide compensadora de la mdula sea acompaada de expansin de la mdula hacia el centro de la difisis y, en ocasiones, de eritropoyesis extramedular, lo que a veces da lugar a la formacin de masas paravertebrales visibles en la radiografa de trax. Como la capacidad de la mdula sea para aumentar la eritropoyesis es de seis a ocho veces lo normal y esto supera habitualmente la intensidad de la hemlisis en esta enfermedad, la anemia suele ser leve o moderada y puede incluso faltar. La compensacin puede quedar interrumpida por episodios de hipoplasia eritroide desencadenados por las infecciones (ejemplo: parvovirus). En ocasiones aparecen lceras crnicas de las piernas parecidas a las que se observan en la anemia de clulas falciformes. La alteracin eritrocitaria caracterstica es el esferocito. El volumen corpuscular medio (VCM) suele ser normal o algo bajo. Diagnstico: Prueba de solucin isotnica salina: mide la fragilidad osmtica de los hemates expuestos a soluciones hipotnicas, las cuales provocan la entrada de agua en el hemate (los eritrocitos se lisan). Los esferocitos tienen un cociente superficie/volumen disminuido y no tienen mucha capacidad para captar agua y por tanto se usan en una concentracin de solucin salina ms elevada que los hemates normales. Microscpico: los esferocitos son clulas pequeas sin palidez central. Tratamiento: Esplenectoma. 12.2 ELIPTOCITOSIS HEREDITARIA Trastorno que se hereda como un rasgo autosmico dominante y que afecta a 1 por 4000 5000 habitantes. La forma ovalada se adquiere cuando los hemates se deforman al atravesar la microcirculacin y ya no recuperan su forma bicncava inicial. En la mayora de los afectados esto se debe a una alteracin estructural de la espectrina eritrocitaria que da lugar a un ensamblaje deficiente del citoesqueleto. Algunos tienen dficit de la protena 4.1 de la membrana eritrocitaria, que es importante para estabilizar la unin de la espectrina con la actina del citoesqueleto; los homocigotos con ausencia total de esta protena tienen una hemlisis ms intensa. La inmensa mayora de los pacientes slo tiene una hemlisis leve, con cifras de hemoglobina de ms de 12 mg/L, menos del 4 % de reticulocitos, niveles bajos de haptoglobina y supervivencia de los hemates justo por debajo de los lmites normales. En un 10 a 15 % de pacientes las alteraciones de hemlisis es considerablemente mayor, la supervivencia media de los hemates es tan breve como 5 das y los reticulocitos se elevan hasta el 20 %. Los niveles de hemoglobina

rara vez descienden por debajo de 9 a 10 mg/L. Los hemates se destruyen preferentemente en el bazo, que es de gran tamao en los pacientes con hemlisis franca. La esplenectoma corrige la hemlisis. Diagnstico: Haya o no anemia, se observa hemates elpticos, con un cociente axial (anchura/longitud) menor de 0.78. La intensidad de la hemlisis no guarda correlacin con el porcentaje de eliptocitos. La fragilidad osmtica suele ser normal, pero puede estar aumentada en los pacientes con hemlisis franca. Tratamiento: La mayora de los pacientes tiene esplenomegalia. La esplenectoma disminuye pero no corrige del todo el proceso hemoltico. 12.3 DEFECTOS ENZIMTICOS DE LOS HEMATES El hemate tiene que obtener el ATP por la va de Embden-Meyerhof para poder manejar la bomba de cationes que mantiene el medio inico intraeritrocitario. Tambin se necesita para manatener al hierro de la hemoglobina en estado ferroso (Fe2+) y quiz para renovar los lpidos de la membrana eritrocitaria. Un 10 % aproximadamente de la glucosa que consumen los hemates se metaboliza a travs de la va de la hexosa-monofosfato.

CONCLUSIONES
Las teoras de cmo estaba compuesta la membrana se han ido aclarando conforme el paso del tiempo y los avances tecnolgicos. Los fosfolpidos son molculas antipticas, al igual que las protenas. Cada tipo de protena de membrana posee una determinada orientacin en dicha estructura. Las protenas pueden ser de tipo: protenas integrales y protenas perifricas. Los hidratos de carbono representan un 10 % en la composicin de la membrana a veces puede ser menor ese porcentaje, hasta pueden llegar a estar ausentes.

Es la membrana la que permite a que la clula pueda desarrollarse ya que es la que interacta con el medio extracelular.

BIBLIOGRAFA
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