Curs I Introducerea in studiul organismelor patogene- metode clasice si moderne de investigare. Ci de transmitere ale organismelor patogene.

Tipuri de infecii MICROBIOLOGIA se ocupa cu studiul microorganismelor. MICROORGANISM / MICROB: bacterie, ciupercile microscopice, levurile, unele alge, protozoare i virusuri. MICROBIOLOGIA MEDICAL se ocup cu studiul microorganismelor implicate n patologia uman i interaciunile dintre om i aceste microorganisme. Din punct de vedere biofizic, orice celul vie este un complex autoorganizat de molecule organice, care schimb energie i materie cu mediul inconjurator, capabil s creasc i are proprietatea de a se reproduce. INFECIA desemneaz procesul prin care agentul patogen ptrunde i se multiplic n esuturile organismului-gazd. BOALA INFECIOAS definete prezena microorganismlelor i modificrile induse de acestea ca rspuns la agresiune, cu sau fr manifestri clinice. Boala infecioas : este prezena microorganismlelor i a modificrilor induse induse de acesta ca rspuns la agresiune, cu sau fr manifestri clinice. Boala contagioas: este acea afeciune infecioas care se poate transmite pe diferite ci de la sursa de infecie, indiferent de forma sa de manifestare (aparent, subclinic, inaparent, purttor) la un individ receptiv. Deci procesul infecios nu este neaprat i contagios. Exemple: tetanos, botulism, septicemiile sunt boli infecioase, ns netransmisibile. VIRULENA = capacitatea unui agent patogen de a se nmuli n esuturile afectate. Procesul infecios este ptrunderea microorganismelor n organismul gazd, urmat de fixarea i multiplicarea lor n esuturile acestuia. Postulatele lui Koch-Henle definesc nc ntr-o form actual agentul patogen infecios: poate fi pus n eviden mereu ntr-o boal infecioas; agentul patogen poate fi cultivat (izolat) i n afara organismului bolnav; infectarea unui animal de laborator adecvat cu un agent microbian cultivat, trebuie s prezinte un tablou clinic tipic. Agentul microbian trebuie s poat fi din nou izolat din animalul infectat. Procesul infecios cuantific cel mai exact complexitatea fenomenuluiinfecios. Figura 1. Schema procesului infecios. Macroorganismul : aprare Bariere naturale anatomice i fiziologice Mijloace de aprare specifice i nespecifice Microorganismul (antigen, enzime, toxice) Se ataeaz Se multiplic Modificri metabolice, morfologice, funcionale i clinice Infeciile exogene sunt infeciile unde agentul infecios ptrunde n corp din exterior, penetrarea se realizeaz prin: piele, mucoase, oral, uretral, vaginal i anal. Pot exista infectii exogene excepionale i anume: - infecii intrauterine, - transplacentare - infecia intrapartum. n mod normal mucoasele i pielea posed mecanisme locale i sistemice de aprare: strat protector, mucus, efectori umorali sau celulari ai imunitii. Dac organismul este slbit datorit unor tulburri ale sistemului imun sau unor leziuni focale, ptrunderea agenilor infecioi este uurat. Zonele frecvente de penetrare ai agentilor infecioi sunt: foliculii piloi, glandele sudoripare i sebacee, minuscule leziuni ale pielii. Infeciile endogene Sunt generate de germenii care sunt deja existeni n organism.

 Acestea apar la persoanele care au un sistem imunitar slabit, sau la persoane n vrst. Att germenii virulenti ct i cei nevirulenti se pot multiplica n organismul uman, fr a determina apariia bolii. Atunci cnd sistemul imun i/ sau mecanismele de aprare local sunt deficitare, aceti germeni pot deveni infectioi. Infeciile emergente Sunt boli transmisibile, recent identificate i clasificate taxonomic i clinico-epidemiologic. La sfritul secolului XX erau peste 30 de astfel de boli care pot s declaneze epidemii periculoase i anume: - infecia cu HIV, - febra Ebola, - sindromul pulmonar cu Hanta virus, - febre virale hemoragice, - infecia cu Campylobacter, Helicobacter, - encefalopatiile spongiforme transmisibile, - boala legionarilor, - boala Lyme ( Borrelia burgdorferi). Unele sunt boli nou aprute, altele existau de secole i au fost recunoscute doar recent din cauza unor schimbri ecologice sau ambientale care au crescut riscul infeciilor umane. Infeciile reemergente Sunt boli infecioase vechi ca: tuberculoza i sifilisul, care au nregistrat o recrudescen semnificativ din cauza schimbrilor complexului de condiii gazd-agent, etiologie-mediu. Infeciile intraspitaliceti sunt afectiuni survenite n interiorul unui spital, afectnd bolnavii spitalizai. Ele se mai numesc i infectii nosocomiale sau iatrogene sau infecii ncruciate (cross infection). Aceste infecii apar n timpul spitalizrii, mai rar dup spitalizare, n conditiile create de spitalizare i de actul medical sau chirurgical Evolutiv infectia de spital a parcurs trei etape: - prepasteurian (prevalen crescut i predominanta etiologic a germenilor nat patogeni), - pasteurian (datorit implementrii asepsiei i antisepsiei a sczut semnificativ prevalena), - modern i contemporan cu prevalent n cretere i implicarea predominant a unor bacterii condiionat patogene. Caracteristicile tulpinilor care dau aceste infecii sunt: rezistenta multipl la antibiotice i antiseptice, capacitatea de colonizare i virulent crescut. Cele mai ntlnite bacterii care dau aceste infecii i care alctuiesc fondul microbian de spital sunt: - enterobacteriile ( E. coli, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter spp.), - Pseudomonas aeruginosa, - Staphylococcus aureus, stafilococi coagulazo-negativi; - virusuri cu tropism respirator (gripal, paragripal, adenovirusuri, rinovirusuri, rujeolic, varicelos mai rar); - enterovirusurile (polio, Coxsachie, ECHO); - fungi (Candida, Aspergillius); - protozoare Pneumocystis carinii, - Toxoplasma n cursul travaliului. Riscul infeciei intraspitaliceti este mrit prin investigatiile medicale sau chirurgicale agresive (puncii exploratorii sau endoscopia cavitilor) sau prin actele terapeutice moderne (respiraie asistat, intervenii chirurgicale agresive, perfuzii, cateterisme venoase prelungite, medicaie imunosupresiv). Metode de investigare Componentele structurale ale microorganismelor joac rol de antigen, provoac rspuns imun din partea organismului infectat, ceea ce rezult n producere de anticorpi. Reacia antigen anticorp este specific, antigenul poate fi legat numai de anticorpul ce s-a produs

ca rspuns la stimulul antigenic respectiv. Aceste reacii pot fi folosite pentru detectarea unui antigen necunoscut cu ajutorul unui anticorp cunoscut (metode de diagnostic directe) sau detectarea anticorpilor din serul bolnavilor cu antigene cunoscute (serodiagnostic, metode de diagnostic indirecte). n cazul n care antigenul corespunde anticorpului, se formeaz complexul imun antigenanticorp. n funcie de cum se vizualizeaz/detecteaz formarea complexului imun exist mai multe metode bazate pe reacii antigen-anticorp: se detecteaz consumarea complementului (acesta se leag de complexele imune) entul cunoscut este marcat se detecteaz elementul marcat din complexul imun format 1. Reacii de precipitare. Pot avea loc n medii lichide (metode folosite n bacteriologie) sau n medii solide. Antigenele: de natur coloidal (solubile), precipitinogene Anticorpii: precipitine Complexul imun: precipitat 2. Reacii de aglutinare Antigenele: de natur corpuscular, aglutinogene Anticorpii: aglutinine Antigenele corespund cu anticorpii i sunt prezente n cantiti echivalente: se formeaz aglutinatul (reea tridimensional de complexe imune), vizibil cu ochiul liber sub forma de grunji. Reacia de hemaglutinare, hemaglutino-inhibare (RHA-HAI) se folosete pentru detectarea virusurilor care prezint pe suprafa hemaglutinine (HA). Exemplu metoda Hirst: detectarea anticorpilor antihemaglutinin din serul bolnavilor de grip convalesceni Metode moderne metode care folosesc un reactant imunologic marcat 1. Reacia de imunofluorescen (RIF). Fluorocromii se leag covalent de proteine (imunoglobuline) = conjugat; emit fluorescen dac se expun la raze UV. Preparatul se examineaz la microscopul cu fluorescen. Puncte fluorescente pe fond ntunecat confirm rezultat pozitiv. 2. Metode imunoenzimatice (RIE, ELISA - enzyme-linked immunosorbent assay) Permit detectarea antigenelor libere i a anticorpilor. Este posibil determinare cantitativ. Reaciile au loc n aparate automate, semiautomate.La reacii particip: - un reactant imunologic cunoscut ataat de un suport solid (plci cu godeuri, lame, baghete - se pot folosi antigene, anticorpi, anticorpi monoclonali, proteina A - un reactant imunologic marcat enzimatic peroxidaza - substrat specific (cromogenic). Se produce o modificare de culoare detectabil spectrofotometric (determinare cantitativ) - substane pentru stoparea reaciei (baze sau acizi puternici). Identificarea microorganismelor prin detectarea acizilor nucleici . Genomul conine secvene specifice pentru fiecare microorganism, detectarea prezenei acestora ntr-un produs patologic sau n culturi celulare avnd valoare diagnostic. 1. Metode de hibridizare. Principiu: fragmente monocatenare de oligonucleotide marcate (sonde), avnd secven cunoscut (caracteristic unui virus) se vor atasa pe baza complementaritii de secvene complementare situate pe acizii nucleici ale microorganismului de identificat. Etape de lucru: - extragerea acizilor nucleici - denaturarea acizilor nucleici si fixarea acestora pe un suport - hibridizare: adugarea sondelor (marcate enzimatic, cu fluorocrom sau cu substante radioactive) si atasarea acestora de secvenele omoloage - eliminarea sondelor nefixate - vizualizarea hibridizrii. Vizualizarea se face n funcie de tipul marcajului folosit.

Ex.1 Metoda Southern blot detecteaz secvene specifice de nucleotizi de ADN. Etape: - extragerea ADN-ului - denaturarea ADN-ului se obtin lanturi monocatenare - fragmentarea lanturilor cu enzime de restrictie (acestea actioneaz n locusuri determinate, rezultnd fragmente de lungime diferit, caracteristice) denaturare - separarea electroforetic a fragmentelor n gel de agaroz (separarea se face n functie de mrimea fragmentelor) - transferarea pe membran de nitroceluloz - adugarea sondelor marcate cu substane radioactive atasarea de secventele omoloage - se ndeprteaz sondele n exces, nelegate - vizualizare prin autoradiografie EX. 2. Northern blot detecteaz ARN, este necesar revers-transcriptaza Ex. 3 Western blot detecteaz proteine. 2. Reacia n lan a polimerazei (PCR polimerase chain reaction) Se detecteaz secvene specifice de acid nucleic dup o prealabil amplificare. Etapele de lucru - detectarea ADN-ului - extragerea ADN-ului - amplificare: se realizeaz n aparatul PCR si const din mai multe cicluri identice - denaturare (900C) - alinierea primerilor (500C) 2 secvente de oligonucleotide care se leag prin complementaritate pe cele dou catene la o anumit distant ntre ele. - sinteza lanurilor complementare (700C ) elongatie; este necesar prezenta enzimei polimeraz (Taq) si a nucleotidelor se formeaz lanturile complementare astfel se dubleaz cantitatea de ADN - reluarea ciclului de n ori se obtin 2n copii ale secventei de identificat - vizualizarea produsilor de amplificare - produsii de amplificare obinui se separ electroforetic - colorare cu bromur de etidiu - vizualizare cu raze UV prelucrare computerizat Multiplex PCR se amplific mai multe gene odat Real time PCR RT-PCR - este necesar revers-transcriptaza Pentru studiul bacteriilor i al fungilor, afinitatea tinctorial este un criteriu important de clasificare. Se folosesc n mod obinuit dou coloraii principale i anume: coloraia albastru de metilen i coloratia Gram, la care se poate aduga (n funcie de diagnostic) coloraia ZiehlNeelsen. Realizat de Christian Gram, bacteriolog danez, n 1884, este o coloraie difereniat, folosete doi colorani de culori controstante (violet de genian, pentru colorarea iniial i fucsin bazic pentru recolorare), un mordant (soluia Lugol) i o soluie de difereniere, decolorare (alcool-aceton). Coloraia Gram mparte toate bacteriile n Grampozitive i Gramnegative n raport cu permeabilitatea diferit a peretelui dependent de structura lor diferit. Sursa de ageni patogeni este reprezentat de un organism care are capacitatea s gzduiasc, sa asigure supravieuirea i eventual multiplicarea i ntotdeauna diseminarea unui agent patogen, direct spre organismul receptiv sau indirect prin intermediul cilor de transmitere, prezentnd sau nu semne clinice de boala. Exemple de surse de agenti patogeni: - bolnavi cu forme tipice sau atipice de boal; - purttori de ageni patogeni care pot s nu prezinte semne clinice de boal, dar pot fi: - purttori preinfectioi, viitorii bolnavi aflai n perioada de incubaie a bolii; - purttori sntoi care au un anumit grad de imunitate i o rezistent general nespecific ridicat i acetia pot fi:

- temporari (cteva zile sau sptmni), - cronici (luni, ani sau toat viaa). - purttori foti bolnavi (dup vindecarea clinic nu se sterilizeaz) - cunoscui (cei care au fost spitalizai) sau - necunoscui (cei cu forme atipice care au fost tratai n ambulatoriu). - animale bolnave (inclusiv psrile) ele pot fi: - domestice, - peridomestice, - slbatice. Animalele pot transmite antropozoonozele (90 de maladii dintre care 20 intereseaz i populaia Europei). Bolile infecioase la majoritatea animalele purttoare de ageni patogeni au aceleai caracteristici ca i la oameni (stare febril, cahexie, modificarea constantelor sangvine etc.). Artropodele sunt vectori biologic activi care asigur n mod obligatoriu dezvoltarea cel puin pentru un stadiu biologic al agentului patogen (ntari, pduchele omului, cpuele, puricii oarecelui i obolanului etc.). Modul de transmitere al organismelor patogene poate fi: direct - se realizeaz ntre sursa de agent patogen i organismul receptiv (inhalarea, contact fizic, srutul, muctura, transferul transplacentar, transfuzia de snge). indirect - mai complex i implic una sau mai multe ci de transmitere (ap, aer, sol, alimente, obiecte, mini, insecte sau combinate). Ci de transmitere ale organismelor patogene Aerul Mecanismul de transmitere a agentului patogen prin aceast cale a fost descris de Pflgge in 1897. n timpul expirrii, aerul iese cu o presiune mare, produce picaturi septice care vor rmne suspendate n aer pe o durat variabil i vor fi dispersate n raport cu dimensiunile lor (dispersia va fi intens cand dimensiunile vor fi 10). Picturile septice sunt diseminate la o distant de 1,5-2 m, sau dac intervine tusea strnutul, vorbirea, cntarea, dispersia va fi la 5-10 m, datorit curentilor de aer. Dup un timp picturile septice pierd o parte din apa, devin mai uoare, persist mult in aer, sedimenteaz pe suprafee i apoi se rspndesc n aer Diseminnd agenti patogeni aflai n interiorul masei de substane organice vor genera nucleosoli septici. Ei se pot cupla cu particule minerale (praful din sol) i genereaz praful septic, care se combin cu cele provenite din triturarea spontan a altor componente septice. Organismele receptive se vor contamina i eventual infecta inhalnd: picturi, nucleosoli sau praf septic. - Aerul ncperilor poate fi contaminat cu intensitate variabil n funcie de: destinatia acestora, densitatea surselor de agenti patogeni, i calitatea decontaminrii periodice. - Prin aceast cale se pot transmite: difteria, gripa, scarlatina, tuberculoza etc. Solul Este o alt cale de transmitere a infeciei, 1 gram de sol poate conine 2-5x109 germeni. Solul nu este un mediu prielnic dezvoltrii agenilor patogeni. In afar de bacteriile care sporuleaz, ceilali agenti patogeni supravieuiesc o perioad limitat de timp zile sau luni). In sol se pot ntlni: fungi, ou i larve de geohelmini. Contaminarea i eventual infectarea omului se poate face prin: - cale digestiv, consum ap sau vegetale crude nesplate, - cale respiratorie prin inhalarea pulberilor din solul contaminat, - prin tegumente cu integritate pierdut. parazitozele. Apa 4/5 din bolile cunoscute n lume sunt legate de insalubritatea apei.

Transmiterea agentilor patogeni se poate face: direct - de la sursele de ageni patogeni: dejecte (umane, animale), adparea animalelor bolnave, scldarea (oamenilor sau animalelor), depunerea cadavrelor animalelor; indirect are loc prin: - aer, sol, alimente, recipiente Transmiterea indirect se produce n: inundaii, averse de ploaie, cutremure, cataclisme. n aceste momente apar defectiuni, avarii, cnd nu se face sau este insuficient decontaminarea apei sau utilizarea neigienic a surselor de ap. -paratifoidice. dizenteria, holera, hepatita A, poliomielita etc. Alimentele Atunci cnd nu sunt prelucrate igienic sau atunci cnd nu se respect circuitele. Contaminarea lor poate fi: - primar (de la origine) sau - secundar (prin dejecte, animale bolnave sau purttoare, aer, ap, sol, insecte sau mini murdare). etc. Obiectele Pot constitui o alt cale de transmitere. Ele pot transmite: - direct (de la sursa de ageni patogeni prin produsele eliminate: secreii, sput, urin, fecale, snge, puroi) sau - indirect (prin aer, sol, ap, mini). almoneloze, tuberculoza, hepatita A, parazitoze. Transmiterea prin mini murdare. Contaminarea poate fi - direct (de la agenjii patogeni) sau - indirect (prin germeni vehiculai prin: aer, ap, sol, alimente, obiecte, insecte). ebr tifoid, dizenterie, hepatita A, parazitoze. Insectele pot fi surse de ageni patogeni, gazde obligatorii cel puin pentru un stadiu de dezvoltare (pduchii omului, cpuele, narii, puricii i ali flebotomi). Altele sunt vectori pasivi, artropodele: mutele, gndacii de buctrie, furnicile, dup ce contamineaz asigura doar transmiterea pe distane i perioade variabile de timp. Receptivitatea (gazdei) Este starea organismului care nu-i confer acesteia posibilitatea de a nvinge o agresiune microbian. Gradul de receptivitate a unei populaii depinde de - rezistena specific (imunitatea) care este dependent de prezena anticorpilor sau a unor celule cu capacitate antiinfecioas. - rezistent nespecific (general) este dependent de: integritatea barierelor cutanate i a mucoaselor. Imunitatea natural care se realizeaz fr intervenia omului i este de: - specie omul i anumite animale fac anumite boli specifice; - pasiv - urmare a transferului transplacentar de anticorpi, - activ - imunitatea care apare dup trecerea prin boal. Imunitatea artificial Se realizeaz dup interventia omului, prin programe prevenionale. Se utilizeaz produse biologice care ofer protectie specific. Ea poate fi: - activ - dup administrarea vaccinurilor; - pasiv - dup administrarea de seruri imune sau de imunoglobuline (n acest caz organismul este doar consumator). Rezistena specific sau nespecific poate fi sporit prin utilizarea de: anticorpi monoclonali

cu aciune idiotipic i a sistemelor imunomodulatoare (imunostimulatoare ribozomale cu aciune de aprare antiinfectioas). Gradul de receptivitate depinde i de : vrst, alimentatie, profesie. Manifestarea infeciilor n colectivitile umane n funcie de: numrul, dispersia temporal i spaial a unor mbolnviri se disting patru forme: sporadic, endemic, epidemic i pandemic. 1. n manifestarea sporadic, procesele morbide apar sub forma unui numr mic de mbolnviri, distribuite pe un teritoriu ntins, la intervale mari de timp fr o legtur aparent ntre ele. 2. n manifestarea endemic, morbiditatea este redus, mbolnvirile nu au legtur aparent ntre ele, dar exist tendinta de concentrare spatial i temporal care pot duce la izbucnirea unor epidemii. Ele se pot ntlni n mod constant n anumite grupe de populatii, din unele zone geografice, sub forma de cazuri dispersate care periodic pot crete ca frecvent (hepatita,viral,dizenteria ,bacilara, gua endemic). Prin luarea unor msuri eficiente, o morbiditate endemic se poate transforma ntr-o morbiditate sporadic sau poate fi eradicat pe teritoriul respectiv. Sau cnd nu se iau msuri se poate transforma n morbiditate endemo-epidemic Sau cnd nu se iau msuri se poate transforma n morbiditate endemo-epidemic 3. Manifestarea epidemic se caracterizeaz prin: - natura debutului (exploziv, lent), - extensivitate, - severitate (complicatii i mortalitate), - durata de evolutie (scurt, medie sau lung), - modul de stingere (brusc, lent sau trenant) i - perioada interepidemic (scurt, medie sau lung). Ex. epidemii hidrice, aerogene, alimentare etc. 4. Manifestarea pandemic este o acumulare de epidemii cu caracter extensiv, intereseaz arii mari de pe glob sau continente ntregi i n toate cazurile de imbolnviri exist legturi evidente. Forme de exprimare : 1. Infecia inaparent : asimptomatic clinic, ns implic prezena agentului patogen i a moficrilor imunologice. Exemple: poliomielita, hepatita acut viral, rubeola, infecia meningococic. 2. Infecia subclinic : tulburri funcionale , modificri morfologice, biochimice. 3. Infecia latent : asimptomatic, determinat de starea de toleran a gazdei, fa de agentul patogen. Exemple : infecia herpetic, cu cu virus rubeolic, tuberculoz, bruceloz. 4. Infecia persistent : cu evoluie lent, este determinat de multiplicarea lent, nscontinu a virusurilor, mai ales imunologic. Exemple : encefalita spongiform, PESS ( panencefalita sclerozant subacut). 5. Infecia localizat: agentul patogen este la nivelul porii de intrare, cu modificri locale i facultativ generale (febr, frison), Exemple : foliculite, abcese, guturai. 6. Infecia de focar: infecie localizat, cu evoluie cronic, cu modificri locale minime asociate unor manifestri generale clinice (febr, stare general alterat, mialgii), sindrom inflamator paraclinic (VSH, fibrinogen). 7. Infecia cronic: rar n bolile infecioase (TBC, bruceloz), mai frecvent ca o posibilitate evolutiv (hepatita cronic postviral). Starea de purttor : - La persoanele sntoase (purttorii sntoi de hemolitic, meningococ, etc).streptococ - Poate finaliza o boal infecioas indiferent de forma clinic, realiznd purttorul convalescent de scurt durat ( infecia dizenteric, salmonelozic). - Purttorul cronic ( bacilul dizenteric, VHB). Boala infecios ciclic: este cea mai frecvent modalitate de manifestare a bolilor infeciose, cu evoluie etapizat :

- Perioada de incubaie : timpul de la momentul ptrunderii agentului patogen pn la apariia primului simptom clinic ; poate fi : o Scurt( 30 60 minute n toxinfecia stafilococic). o Medie (7 14 zile : rujeola, dizenteria, varicela, tusea convulsiv). o Lung ( >14 zile : hepatita viral B , C, rabie). sursa cea mai bogat de infecie ; debutul poate fi : o Scurt (cteva ore) grip , scarlatin, meningita bacterian, tetanosul supraacut. o Cteva zile ( rujeol, difteri, moninucleoz infecioas) - Perioada de stare : sindroame clinice particulare ( febril, digestiv, respirator, meningeal, icteric, ganglionar, hepatic, splenomegalic, eruptiv. - Perioada de convalescen :de scurt sau lung durat, consemneaz atenuarea simptomatologiei clinice pn la dispariie ; poate fi abrupt ( in crisis) sau lent (in lisis). - Imunitatea post infecioas : o Puternic si de durat : scarlatin, rubeol, rujeol, infecie urlian. o Slab i de scurt durat cu posibile recidive : febr tifoid, dizenterie bacterian, erizipel. o Fr imunitate dup boal : tetanos. - Ieirea din infecie se poate face cu : o Vindecare complet, cu restitutio ad integrum ( rujeol, varicel, scarlatin) i dup tratament complet i corect. o Vindecare clinic nsoit de stare de stare de purttor temporar sau cronic. o Cu sechele : poliomielita, hepatite. o Cronicizare : hepatitele B , C , D, bruceloz , dizenterie bacterian. - Evoluia : o Nefavorabil spre deces : diagnostic incorect, sau tardiv, consecin a unui tratament indecvat, forme severe. Letalitatea este 100% , neinfluenat de tratament : rabia, PESS, SIDA. - Infecia septicemic : septicemia o Focar primar la poarta de intrare, a prezenei continue sau intermitente a agenilor patogeni i a toxinelor lor n snge, precum i a focarelor metastatice secundare. - Bacteriemia: focar primar, prezena continu sau intermitenta agenilor patogeni i a toxinelor lor n snge. - Recidivele = reapariia tuturor semnelor de boal dup aparenta vindecare a unui episod. Exemplu : hepatite acute virale, meningite purulente, scarlatin. Chiar i flora normal a organismului poate deveni patogen, mai ales dac printr-u accident, sau o igien deficitar, ajunge n zone nespecifice (ex. E. coli din intestin dac ajunge n vezica urinar poate s genereze infectii urinare). O alt modalitate de infecie endogen este atunci cnd un germen i modific aspectul patogen prin cptarea unor caractere sporite de patogenitate (virulen sau toxicitate). Curs II. Infecia i rspunsul imun Imunitatea reprezint capacitatea organismului de a se apra n faa agresiunii agenilor externi (termenul i are originea n limba latin, unde immunitas nseamn "ferit de"). Pentru a putea ndeplini aceast proprietate, organismul trebuie s recunoasc structurile proprii, considerate "self" i s le deosebeasc de cele strine, denumite "nonself", reprezentate n principal de microorganisme, macromolecule, dar i de celule tumorale sau esuturi transplantate. Mecanismele de aprare ale organismului pot fi mprite n dou mari categorii: nnscute i dobndite, care interacioneaz ntre ele. Imunitatea nnscut (nespecific) este prezent la toi indivizii normali, fiind prima

barier n calea agresiunilor externe. Modul su de aciune este nespecific, acelai indiferent de natura agentului strin. Mecanismele imunitii nnscute se comport identic i n cazul unei reexpuneri, nefiind dotate cu memorie imunologic. n aceast categorie sunt incluse: barierele mecanice (reprezentate de tegumente i mucoase - gastrointestinal, a tractului respirator i a celui urogenital), produii de secreie (mucusul, secreia gastric acid, enzimele digestive, lizozimul din lacrimi i mucusul respirator, secreia glandelor sebacee, secreia acid vaginal, ph-ul urinar, etc.), unele proteine din snge (sistemul complementului, reactanii de faz acut, citokinele) i sistemul mononuclear fagocitic (care include neutrofilele i monocitele din snge i macrofagele din esuturi). La acestea se adaug alte mecanisme care contribuie la epurarea agenilor exogeni, cum ar fi: clearence-ul muco-ciliar, tusea, strnutul, vrsturile, peristaltice intestinal. Inflamaia reprezint, de asemenea, un mijloc important de aprare nespecific, macrofagele i limfocitele polimorfonucleare (PMN) fiind atrase la locul infeciei de produii eliberai de organismele infectante i esuturile necrozante. Cnd mijloacele de aprare nespecifice sunt depite, agentul ptrunde i se dezvolt n esuturile gazdei, producnd intrarea n aciune a unui sistem de aprare specific, mult mai eficace. Imunitatea dobndit (specific) se dezvolt pe msur ce organismul interacioneaz cu diferii ageni externi, interaciune ce poart numele de eveniment imunizant. La o nou expunere la agentul respectiv, organismul va reaciona cu mai mult promptitudine, celulele implicate n acest proces fiind dotate cu memorie imunologic. Imunitatea dobndit poate fi natural (ctigat n mod pasiv prin transfer transplacentar, sau n mod activ prin contactul cu antigenul) i artificial (care la rndul ei poate fi obinut pasiv prin seroterapie sau activ prin vaccinare). Totalitatea organelor, celulelor i moleculelor implicate n apariia imunitii dobndite alctuiesc sistemul imun. RSPUNSUL IMUN Rspunsul imun reprezint totalitatea fenomenelor prin care organismul recunoate i neutralizeaz structurile agresoare. Contactul dintre Ag i celula care-l recunoate este urmat de un proces de multiplicare i difereniere a acesteia, ce are drept rezultat sinteza de Ac specifici (rspuns imun umoral) sau apariia limfocitelot T sensibilizate (rspuns imun celular). Efectele acestui prim contact poart numele de rspuns imun primar. n desfurarea rspunsului imun (indiferent c este umoral sau celular) exist mai multe etape: prezentarea Ag

RSPUNSUL IMUN UMORAL Esena rspunsului imun de tip umoral este secreia de Ig (Ac) specifici ca urmare a stimulrii antigenice a liniei limfocitare B. Rspunsul imun care apare dup o prim expunere a unui organism la Ag se numete rspuns imun primar. Ac sunt iniial de tip IgM, iar apoi nivelul acestora scade i apar Ac din clasa IgG. Rspunsul imun secundar se produce cnd acelai Ag se administreaz dup un interval de timp. Aceast proprietate este posibil datorit faptului c n timpul desfurrii procesului de difereniere, se desprinde un grup de celule care nu continu maturarea i multiplicarea spre celule efectoare, ci rmn ntr-o etap timpurie de evoluie (n faza G1 a ciclului mitotic). Rolul lor este acela de a pstra amintirea Ag, chiar dup totala sa eliminare, de aceea poart numele de celule cu memorie. O nou stimulare antigenic produce

proliferarea i diferenierea n plasmocite a unora dintre celulele B cu memorie. Ac specifici apar mai precoce, au o mai mare afinitate pt. Ag, nivelul lor seric crete mai rapid, iar secreia este mai prelungit. Aparin clasei IgG. Acest rspuns imun presupune cooperarea intercelular ntre limfocitele T i B, fr ajutorul altor celule. Majoritatea Ag naturale, n special proteinele, necesit intervenia limfocitelor T pentru a determina un rspuns imun umoral, de aceea se numesc Ag timodependente. Exist i Ag timoindependente, Ag care nu necesit intervenia limfocitelor Th. n acest tip de proces nu se selecteaz celule cu memorie, nu exist rspuns imun secundar, secreia este exclusiv de tip IgM, i dureaz luni de zile. Acest efect prelungit se explic i prin faptul c odat format complexul Ag-Ac este fagocitat i digerat. Celulele fagocitare nu pot digera dect Ac, elibernd Ag odat cu moartea celulei. Ag se va reinsera ntr-un nou ciclu. Dup sinteza Ig, acestea se cupleaz cu Ag formnd complexele imune. n cazul n care Ag este solubil, molecular, se formeaz complexe imune circulante care sunt epurate de sistemul monocit/macrofag. n cazul n care Ag face parte dintr-o membran celular, Ac se fixeax pe celul. Cuplarea ulterioar a complementului duce la liza celulei sau la eliminarea celulei prin fagocitoz de ctre sistemul mononuclearfagocitic. RSPUNSUL IMUN CELULAR Rspunsul imun celular este implicat n: croorganisme cu habitat intracelular (virui, micobacterii, etc.) n funcie de natura receptorului implicat n recunoaterea Ag expus pe suprafaa celulei int, se pot distinge 2 categorii mari de celule implicate n acest tip de rspuns imun: limfocitele Tc i celulele citotoxice MHC-nespecifice (NK i K). Ag care declaneaz acest rspuns imun sunt timodependente. Dup aproximativ 5 zile de la primul contact cu Ag apar n snge celulele T cu memorie care sunt supuse unui proces de recirculaie continu. Ele nsmneaz continuu esutul limfatic, conferindu-i memorie imun specific. Un nou contact cu Ag induce proliferarea i diferenierea celulelor cu memorie spre celule efectoare, producnd un rspuns imun n cteva ore. REACIILE IMUNE n unele situaii ns, rspunsul imun este inadecvat, exagerat, pierzndu-i rolul protectiv i devenind nociv pentru organismul gazd. Ansamblul fenomenolor rezultate din perturbarea proceselor imune, cu apariia unui rspuns imun capabil s produc leziuni organismului gazd, poart denumirea de reacie imun. Pentru realizarea reaciei imune, organismul face apel la o serie de factori nespecifici celulari i/sau serici. Aciunea lor este complex i intricat, ei contribuind major la dezvoltarea inflamaiei locale, urmarea reaciei imune. Reaciile imune, prin caracterul lor sistemic, pot determina leziuni la nivelul tuturor aparatelor i sistemelor organismului, iar cnd reacia este foarte intens poate produce chiar moartea individului. n funcie de mecanismul lor de producere, reaciile imune au fost mprite de Gell i Coombs n patru tipuri principale: - tipul I sau reacia anafilactic - contactul Ag-Ac este urmat de eliberarea de substane biologic active ce acioneaz predominent pe muchuil neted i vase - tipul II sau reacia citotoxic - Ac lezeaz direct celula alterndu-i structura sau funcia i predispunnd-o la liz sau fagocitoz - tipul III sau reacia prin complexe imune - depunerea tisular a CI i fixarea complementului determin atragerea PMN i declanarea procesului inflamator - tipul IV sau hipersensibilitatea tardiv - apare prin exagerarea rspunsului imun celular. Roitt descrie i tipul V de reacie imun, asemntor cu tipul II, dar n care Ac fixai pe

celul nu o distrug ci i modific numai funcia. ORGANELE LIMFATICE A. ORGANELE LIMFATICE PRIMARE sunt organele n care are loc diferenierea i maturarea limfocitelor. Sunt considerate organe limfatice primare mduva osoas i ficatul, responsabile de diferenierea limfocitelor B i timusul, sediul de difereniere al limfocitelor T. 1. Mduva osoas i ficatul: Mduva osoas conine esutul hematopoetic i reprezint locul de origine al tuturor celulelorsanguine la adult. Ea include i precursorii celulelor limfatice, seria limfoid reprezentnd 5-15%. Diferenierea celulei stem n elemente limfoide se face n trepte succesive, fenomenul fiind independent de existena stimulrii antigenice, mduva osoas neavnd de altfel ci aferente i modaliti de captare i prelucrare a antigenului. Proliferarea i maturarea precursorilor celulari din mduva osoas se face sub influena unor citokine numite factori de stimulare ai coloniilor (colony-stimulating factors). Ei sunt sintetizai de celule medulare stromale i de macrofagele din mduv i creeaz un mediu local favorabil hematopoezei. Mduva osoas mai conine i un procent variabil (ntre 5 i 15%) de plasmocite, formate la nivelul organelor limfatice periferice ca o consecin a stimulrii limfocitelor B de ctre Ag. Mduva osoas reprezint locul unde se desfoar post-natal diferenierea limfocitelor numite B. La om, prenatal, acest proces se desfoar n ficat, n timp ce la psri el are loc ntr-un organ limfo-epitelial numit "bursa lui Fabricius". De aici a provenit de altfel iniial i denumirea acestor limfocite -B- bursodependente. Ulterior, cnd s-a vzut c procesul se desfoar la om n mduv "bone marrow", denumirea acestui tip de limfocite s-a consolidat. De menionat c limfocite provenind din mduv populeaz i timusul (mai ales corticala) unde se pot diferenia n limfocite T. Ficatul reprezint doar sediul primar, precoce de hematopoez, fiind locul prenatal de difereniere i maturare a limfocitelor B. La adult, doar n unele circumstane patologice (cum ar fi policitemia vera) ficatul i reia funcia hematoformatoare. 2. Timusul: Timusul este un organ limfoepitelial care apare devreme n embriogenez, crete n perioada intrauterin i atinge o dezvoltare complet la natere, pentru ca dup pubertate s sufere un proces de involuie, probabil indus hormonal prin corticoizi i androgeni. Situat n mediastinul anterior, timusul este format din 2 lobi, acoperii de o capsul fibroas, fiecare lob este organizat n lobuli, separai ntre ei prin trabecule de esut conjunctiv. Lobulii la rndul lor, prezint o zon periferic (corticala) i o zon central (medulara). n cortical se gsesc predominent celule limfocitare mari, imature care i au originea n mduva osoas (n perioada adult), caracterizate printr-o vie activitate de multiplicare. Pe msur ce migreaz spre medular prolifereaz i sufer un proces de maturaie. n medular se gsesc predominent celule epiteliale reticulare ce contin n citoplasm granulaii bogate n hormoni timici, unele celule fiind aglomerate n grupuri constituind corpii Hassall; tot n medular se gsesc limfocite mici, mature, asemntoare celor din sngele periferic. n esen, participare timusului la meninerea homeostaziei imune privete dou aspecte fundamentale: a. realizeaz maturaia precursorilor limfocitari T; b. asigur distribuia limfocitelor T ctre anumite arii ale organelor limfatice periferice, numite zone timodependente. Aceste zone sunt: zonele paracorticale ale ganglionilor limfatici i zonele periarteriolare din pulpa alb a splinei. Acest lucru este realizat graie unor receptori de tip "homing" pe care limfocitele T i achiziioneaz pe tot parcursul lor intratimic. Formarea limfocitelor T mature este rezultatul unui ir complex de etape de proliferare, difereniere i maturare, care implic exprimarea la suprafaa celulelor a unor receptori

eseniali n recunoaterea antigenelor (TCR, CD4, CD8), n activarea metabolic limfocitar (CD28, CD45) sau n adeziunea intercelular ca (CD2, LFA1 etc.). Proliferarea este controlat de citokinele eliberate local, iar diferenierea apare n urma contactului limfocitelor cu celulele stromei timusului, contact ce asigur generarea unor celule imunocompetente i departajarea funcional pe liniile helper, citotoxic, supresoare i contrasupresoare. ns, dup ce limfocitele T exprim pe suprafaa lor aceti receptori, marea majoritate mor in situ prin apoptoz = moarte celular programat. Acestea reprezint aa numitul contingent distrus, distrugerea lui mpiedicnd apariia procesului de autoimunitate. Puinele limfocite rmase viabile (contingentul posttimic), trec n circulaie dup un pasaj prin medular. Distrucia celular prin apoptoz i nu prin necroz nu las s ptrund n mediul extracelular diversele debriuri celulare care ar putea declana un rspuns local inflamator, protejnd astfel structura i funcia acestui organ. n plus, celulele apoptotice exprim pe suprafaa lor receptori care permit recunoaterea i ingestia lor de ctre macrofage i epurarea lor rapid. B. ORGANELE LIMFATICE PERIFERICE reprezint sediul unde se iniiaz i se desfoar rspunsul imun. n aceast categorie sunt incluse att organe capsulate ca splina i ganglionii limfatici, ct i esuturile limfoide difuze, asociate tubului digestiv (notat GALT -Gut Associated Lymphoid Tissue), cilor respiratorii (BALT - Branchial Associated Lymphoid Tissue) sau esutului cutanat (SALT - Skin Associated Lymphoid Tissue). 1. Splina este cel mai mare organ limfatic; ea este delimitat la exterior de o capsul ce conine fibre musculare netede, din care se desprind trabecule ce ptrund n parenchim i compartimenteaz organul. n parenchimul splenic se disting dou sectoare, diferite att ca structur ct i ca funcie: -pulpa roie situat la periferia lobulilor, alctuit predominent din macrofage cu rol n fagocitarea hematiilor senescente i care aparine sistemului mononuclear-fagocitic; -pulpa alb situat n jurul arteriolei centrale care conine esut limfoid numit PALS Peiarteriolar Lymphoid Sheath); acesta la rndul ei are 2 zone, una strinc periarteriolar, ce conine n special limfocite T i formeaz (cum spuneam mai devreme) zona timodependent a splinei i alta la periferia PALS ce conine aproape exclusiv limfocite B, organizate sub form de foliculi - zona timoindependent. Aceti foliculi pot fi primari sau secundari, formai din celule B activate antigenic, caz n care poart denumirea de centrii germinativi. ntre pulpa roie i cea alb, la periferia foliculilor limfatici, se gsesc sinusurile marginale, unde exist att limfocite T ct i B, precum i magrofage i celule dendritice, absolut necesare (cum vom vedea n continuare) pentru cooperarea celular din cadrul rspunsului imun. Funcia imunologic a splinei se exprim n special n generarea unor rspunsuri imune fa de Ag aflate n circulaia sistemic. Rolul important pe care l joac splina n aprarea antiinfecioas este demonstrat de faptul c la bolnavii splenectomizai apar infecii severe, mai ales cu germeni incapsulai (ca pneumococii i meningococci). 2. Ganglionul limfatic constituie un adevrat filtru situat pe traiectul cilor limfatice. El este de asemenea delimitat de o capsul fibroas ce trimite spre interior septuri fibroase incomplete. Histologic, la nivelul ganglionului limfatic se disting trei zone: - zona cortical - situat la periferie, alctuit din limfocite B aranjate sub form de foliculi primari sau secundari (centrii germinativi), cu o structur asemntoare omonimilor lor din PALS. Foliculii constituie zona timoindependent sau bursodependent. - zona paracortical - situat sub cea cortical conine predominant limfocite T (din acest motiv purtnd denumirea de zon timodependent), precum i un mare numr de macrofage. - zona medular - situat parahilar i alctuit din vase sanguine, sinusuri limfatice, limfocite B, T, plasmocite macrofage i celule dendritice. Dup stimularea antigenic, limfocitele T i B migreaz unele spre altele, pierzndu-i aceast repartiie anatomic. Limfocitele T activate prsesc ganglionul limfatic i ptrund n circulaia sistemic, iar limfocitele B activate migreaz spre centrii germinativi unde

sintetizeaz anticorpi. O atenie special este acordat segmentului vascular denumit venul postcapilar situat paracortical, ale crei celule endoteliale sunt cilindrice i nalte i poart denumirea de High Endothelial Venules - HEV. Aceast zon cu celule cilindrice este locul de trecere al limfocitelor din circulaia sanguin n ganglion. Ele au pe suprafaa lor molecule de adeziune numai pentru limfocite, fiind neutre fa de alte celule circulante. 3. Alte esuturi limfatice Zone de esut limfatic exist n submucoasa unor poriuni din tractul digestiv (GALT) sau respirator (BALT), precum i din tegument (SALT). n unele teritorii aceste colecii sunt suficient de mari pentru a fi individualizate. Astfel, la nivelul tubului digestiv exist n jurul faringelui inelul limfatic al lui Waldayer, compus din amigdalele faringiene, palatine, linguale, iar la nivelul ileonului se gsesc plcile Peyer. Acestor structuri li se asociaz apendicele. Colecii similare de esut limfatic se gsesc i la nivelul arborelui bronic (mai ales la bifurcaia bronhiilor mijloci sau la jonciunea bronho-alveolar) i n tegument. Importana acestui sistem imun rezid nu numai din faptul c el reprezint un mijloc eficient de aprare la nivelul principalelor pori de intrare ale organismului, controlnd contactul cu o multitudine de Ag cu poart de intrare digestiv, respiratorie i cutanat, ci i dinfaptul c ele sunt organe limfopoetice importante i pot fi, la adult, surse de limfocite B sau T. CELULELE SISTEMULUI IMUN Celulele sistemului imun sunt: limfocitele, celulele prezentatoare de Ag (CPA) i celulele efectoare A. LIMFOCITELE Limfocitele reprezint componentul celular major al sistemului imun. Ele constituie o categorie de celule ce grupeaz mai multe populaii celulare similare morfologic, dar diferite din punct de vedere funcional. Limfocitele provin din organele limfatice primare (timus, mduva osoas i, n perioada intrauterin, ficatul). O parte din aceste celule trec n circulaia periferic i migreaz ctre organele limfatice periferice. Restul rmn pentru o perioad n circulaia general ca limfocite circulante unde totalizeaz aproximativ 25% din elementele figurate albe. ntre cele dou sectoare exist o recirculaie permanet, asigurnd o supraveghere imun competent i continu folosind un numr relativ mic de celule. Recirculaia i migraia limfocitelor este reglat de moleculele de adeziune de pe suprafaa lor, ce corespund unor alte molecule de adeziune de pe suprafaa celulelor endoteliale sau matricei extracelulare, precum i de chemokinele secretate de la nivel tisular. Durata de via a limfocitelor n sngele periferic variaz ntre 1 i 300 de zile, existnd i populaii limfocitare care au o durat de via lung, de luni sau chiar ani, ele recirculnd n permanen ntre cele dou sectoare ca celule cu memorie. Limfocitele sunt singurele celule din organism capabile s recunoasc specific diferii determinani antigenici, fiind astfel responsabile de dou dintre proprietile fundamentale ale rspunsului imun, specificitate i memorie. Din punct de vedere morfologic, limfocitele naive, care nu au fost stimulate antigenic, au un diametru cuprins ntre 8 i 10 nm, un nucleu mare, cu heterocromatin dens i citoplasm puin, ce conine un numr redus de mitocondrii, lizozomi i ribozomi, aflate n stare de repaus sau n faza G0 a ciclului celular. Dup contactul cu Ag, celulele intr n faza G1 a ciclului celular i i schimb caracteristicile morfologice (cresc n dimensiune, ajungnd la un diametru de 10 -12 nm, citoplasma e mai bine reprezentat i conine mai multe organite celulare). Marea heterogenitate funcional a limfocitelor este legat de expresia anumitor receptori de suprafa. Unii dintre aceti receptori sunt exprimai numai n anumite stadii de difereniere sau activare, pe perioade scurte de timp, pe cnd alii sunt permaneni i caracteristici diverselor linii celulare limfocitare. Dup mai multe denumiri

utilizate pentru a desemna aceti receptori, s-a stabilit utilizarea indicativului CD (de la cluster of differentation), n prezent cunoscndu-se aproximativ 250 CD. 1. Limfocitele T La adultul sntos celulele T reprezint 60-80% din totalul limfocitelor, cea mai mare parte avnd o durat de via lung, fiind celule intens recirculate. La microscopia optic diferenierea dintre limfocitele T i B este practic imposibil. Prin prezena pe suprafaa lor a unor receptori caracteristici, este posibil ns identificarea lor. Care sunt acetia? 1. Receptorii limfocitului T, notai TCR (T cell receptor). Acetia au proprietatea fundamental de a recunoate i a lega Ag. Sunt transmembranari i au o structur asemntoare poriunii Fab a moleculei de Ig, fiind alctuii din 2 lanuri diferite de polipeptide, legate ntre ele prin puni disulfidice. Se cunosc 2 tipuri de TCR: TCR1, primul suprafaa a 95% din limfocitele T, a de receptori au un domeniu variabil, n poriunea NH2-terminal, i unele constante. Aceti receptori sunt legai de membrana limfocitelor T prin intermediul unui alt grup de 5 lanuri polipeptidice notate CD3 i care au rolul de a transmite semnalul activator n interiorul celulei, formndu-se astfel un complex TCR-CD3 care are proprietatea de a se lega att de Ag cu care vine n contact celula, ct i de moleculele Ag de histocompatibilitate. Astfel, limfocitele T nu recunosc Ag native solubile (recunoscute de limfocitele B i Ac) ci numai pe acelea cuplate cu MHC, fiind vorba de o recunoatere asociativ. 2. CD2 - unul dintre primii markeri de suprafa, prin care celula fixeaz n jurul ei un numr de eritrocite de oaie cu formarea unor rozete (metoda este nc folosit pentru pentru identificarea i separarea limfocitelor T). E prezent pe toate tipurile de limfocite T i pe NK. Are rol n aderarea limfocitelor T la APC sau celulele int (prin legarea de contraligandul su LFA3) i rol accesor n activarea celular. 3. CD4 glicoprotein de suprafa situat predominent pe suprafaa celulelor Thelper (definitorie pentru aceast clas de celule). CD4 reprezint receptorul T pentru moleculele MHC de tip II. Stabilirea legturii ntre limfocitul T CD4+ i APC prin intermediul moleculei de MHC II contribuie esenial la recunoaterea Ag. 4. CD8 tot de natur glicoproteic, distribuit pe membrana limfocitelor T supresoare, contrasupresoare i citotoxice. CD8 interacioneaz cu moleculele MHC I. 5. CD5 se gsesc pe toate limfocitele T i pe un subset de limfocite B. 6. CD28 prezent pe 95% dintre limfocitele T CD4+ i 50% din cele CD8+ are rol n activarea celular, precum i rol de molecul de adeziune. 7.MHC I i II 8. Receptori limfocitari T cu funcie n adeziunea celular Indiferent de particulariti, funciile efectorii ale diverselor celule imune implic n mod obligatoriu adeziunea intercelular, proces cruia i se acord n ultima vreme o atenie tot mai mare. Adeziunea celular este implicat att n funciile efectorii imune ct i n repartiia specific a diverselor tipuri de limfocite n anumite arii ale sistemului imun. Principalii receptori limfocitari implicai n aderarea intercelular LFA (Ag asociat funciei limfocitare), VLA , CD2 i CD4 pentru limfocitele Th i CD8 pentru limfocilele Tc. Astfel, moleculele de adeziune au rol n: -respingerea forelor electrostatice de respingere dintre 2 celule -realizarea unui contact prelungit ntre celulele care urmeaz s coopereze -favorizarea recunoaterii Ag -rol accesor n activarea celular. Clasificarea limfocitelor T se face dup funcia pe care o ndeplinesc, precum i dup tipul markerilor de suprafa. Se deosebesc aslfel mai multe tipuri de celule T, cele mai importante fiind: a. Limfocitele T ajuttoare sau helper - sunt CD4+ i recunosc Ag specifice asociate cu Ag HLA II.

- unele limfocite Th colaboreaz cu limfocitele B i macrofagele n inducerea rspunsului imun umoral, iar altele colaboreaz cu alte celule T la producerea limfocitelor Tc intervenind n rspunsul imun celular. - exist 5 subtipuri, 2 fiind mai bine cunoscute: Th1 care intervin n rspunsul imun celular prin stimularea dezvoltrii limfocitelor Tc, creterea activitii macrofagice. Limfocitele Th2 care intervin n procesele atopice, coordonnd secreia de IgE, IgA i IgG1, induc proliferarea eozinofilelor i a mastocitelor. Ele i exercit aciune prin sinteza unor proteine numite citokine. Astfel, diferenierea lor nu se face pe criterii fenotipice ci n funcie de setul de IL pe care l elaboreaz. De ex. LTh1 elaboreaz: IL-2, IL-3, IFNTNF-4, IL-5, IL-6. ntre cele 2 subtipuri exist inter-relaii stimulatoare i inhibitoare. IFNfuncionale. Th2 (prin IL-10) suprim producia de Th1 acionnd ca o celul supresoare. b. Limfocite T supresoare - sunt limfocite reglatoare care diminu att rspunsul imun umoral ct i pe cel celular - majoritatea sunt celule CD8+ - formarea lor din din precursori este urmarea contactului cu Ag, fr implicarea MHC. - recunosc determinanii Ag, elaboreaz factori supresori solubili cu funcie de contrareceptori blocani - la rndul lor sunt supuse controlului inhibitor al limfocitelor T contrasupresoare. - prin stimulare Ts de ctre Ag proprii (self) este prevenit procesul de autoimunitate. c. Limfocitele T citotoxice - sunt responsabile de citotoxicitatea mediat celular; ea este implicat n aprarea antiviral, antitumoral i respingerea grefelor. - provoac liza celulelor care poart pe suprafaa lor Ag - au determinani antigenici de tip CD8+ i mai puin CD4+ - pentru ca Ag s fie recunoscut de ctre limfocitele Tc, el trebuie s fie asociat cu Ag MHC I, similar celui al limfocitelor Tc. Acest fenomen poart numele de restricie HLA. d. Limfocite T inductoare - sunt CD4+, i recunosc Ag asociat cu MHC II - stimuleaz activitatea altor limfocite T (helper, suppresor, citotoxice) e. Limfocitele T cu memorie - sunt formate n timpul rspunsului imun primar, sunt CD4+ -au o via lung, de peste 40 ani, dar perioada lor activ este de numai 10-15 ani. Se poate astfel observa c limfocitele T joac un rol esenial n reglarea rspunsului imun, justificnd afirmaia potrivit creia "Limfocitul T este dirijorul orchestrei imunologice" 2. Limfocitele B Limfocitele B reprezint 5-15% din totalul limfocitelor circulante; au o durat de via scurt (cteva zile). Ele sunt precursorii celulelor care sintetizeaz Ac, plasmocitele. 3. Celule natural killer (NK) Celulele NK reprezint un subset de limfocite care au capacitatea de a omor celule infectate i celule care i-au pierdut moleculele MHC I. De asemenea, celulele NK stimuleaz macrofagele s distrug microbii fagocitai. Termenul de natural killer provine de la faptul c aceste celule i exercit funcia citotoxic fr a necesita o activarea prealabil. De asemenea, spre deosebire de limfocitele Tc, celulele NK nu i recunosc specific inta, similitudinea ntre Ag MHC de pe cele 2 tipuri de celule nefiind necesar. Activitate lor nu este deci supus fenomenului de restriciei HLA. -CD16). Acest lucru explic proprietatea lor fundamental de citotoxicitate fa de celule care au fixat pe suprafaa lor Ac specifici i de care se leag prin intermediul acestor receptori. Acest fenomen poart denumirea de citotoxicitate mediat de Ac, la realizarea lui nefiind necesar participarea complementului. Activitatea celulelor NK este stimulat de citokine ca: IL-15, IL-12, IFN. B. CELULE PREZENTATOARE DE AG Celulele prezentatoare de Ag (CPA) sunt celule specializate n capturarea Ag,

prezentarea lui limfocitelor i declanarea unor semnale care favorizeaz activarea limfocitelor. Exist 2 categorii de CPA: a. "profesionale": macrofagele, celulele dendritice i LB b. "ocazionale": PMN (m.a. neutrofilele), celulele endoteliale. 1. Macrofagele Sistemul mononuclear fagocitic sau sistemul monocit/macrofag sau reticulo-endotelial reunete celule (monocitul i macrofagul) care au origine medular comun, precum i caractere histologice (sunt celule mononucleare) funcionale (capacitate de fagocitoz) similare. Rolul lor fundamental este aprarea mpotriva bacteriilor intracelulare i a fungilor. Au origine n seria monocitar a sistemului hematopoetic; precursorii lor sunt monoblastulpromonocitul-monocitul. Monocitele reprezint 1-8% din leucocite, au un T1/2 de 8-72 ore, dup care prsesc torentul circulator i migreaz tisular, difereniindu-se n macrofage. Ele au un diametru de 10 15 nm, un nucleu mare i o citoplasm bogat n lizozomi, vacuole i filamente de citoschelet. Procesul de difereniere presupune: creterea dimensiunilor celulare, amplificarea aparatului mitocondrial i lizozomal, dezvoltarea proprietilor de fagocitoz i sintez, apariia unor receptori pe suprafaa celulei. Macrofagele tisulare sunt heterogene, avnd morfologie, funcii i capacitti metabolice diferite, n funcie de esutul cruia i aparin. Macrofagul este o celul cu diametru de 1025nm, cu nucleu mare, cu multe granule lizozomale i vacuole n citoplasm. Ele au cptat denumiri specifice, n funcie de locul de reziden: Mf din esutul conjunctiv se numesc histiocite, cele din ficat - celule Kupffer, cele din esutul nervos - celule microgliale, cele din plmn -macrofage alveolare, cele din os - osteoclaste, cele din articulaii - sinoviocite A,etc. Figura 2. Liniile de difereniere celular n cazul celulelor implicate n aprarea organismului Activarea macrofagelor nu este un proces specific, ca n cazul limfocitelor. El poate fi realizat sub influena multor stimuli nespecifici: citokine (IFN-ul este cel mai puternic activator al substane mitogene, etc. Durata de via a macrofagului este de cteva luni. Celulele sistemului monocit-macrofagic sunt implicate att n aprarea nespecific ct i n cea specific. n imunitatea nespecific aceste celule fagociteaz unele Ag i sintetizeaz unele citokine care stimuleaz alte celule. n rspunsul imun, celule monocit-macrofagice au un rol deosebit de important i complex, att n etapa iniial a rspunsului imun cnd au funcia de CPA ct i etapa final, ca celule efectorii. Ele au pe suprafaa lor numeroi receptori, dintre care cei mai importani sunt: 1.- receptorii pentru fragmentul Fc al moleculele de Ig 2.- receptori pentru complement 3. receptori de adeziune celulara (LFA- antigenul asociat funciei leucocitare) bacteriilor, fungilor, paraziilor) 1.- pentru glicoproteine din structura peretelui bacterian, 2.- pentru proteine denaturate 3.- pentru hidrocarburi i glicoproteine care se termin n fructoz i manoz 4.- pentru fibronectin 5.- pt. unii hormoni, 6.- pt. Ag tumorale. De asemenea, macrofagul are o capacitate secretorie mare, aceast celul putnd elabora peste 50-100 de produi, dintre care menionm: enzime litice (elastaze, colagenaze, etc.), componente ale complementului (C1,C5, properdina), pirogeni endogeni, factori care influeneaz diferenierea celular (de ex. colony-stimulating factor, factori de angiogenez), factori citotoxici, citokine (IFN, IL, TNFtromboplastina), radicali activi ai oxigenului.

2. Celulele dendritice Celulele dendritice reprezint o populaie leucocitar particular, caracterizat morfologic de prezena unor prelungiri citoplasmatice, iar funcional prin capacitatea de a prezenta antigenul (sunt celule prezentatoare de antigen profesioniste) i o extraordinar capacitate de a stimula limfocitele T native i de a iniia un rspuns imun. Celulele dendritice au origine i pot ndeplini rolul de CPA, datorit prezenei pe suprafa a moleculelor MHC II i a receptorilor pentru Ag. Ele au capacitatea de a capta Ag i de a-l transporta la nivelul organelor limfatice periferice. Dup sediul lor pot fi mprite astfel: a. cele din organele nelimfatice: -celulele Langerhans care se gsesc n special n tegument (formeaz o reea n stratul bazal i n epiteliul scuamos), dar i la nivelul mucoasei bucale, faringe, col uterin. Pe suprafaa lor au molecule HLA II, receptori pentru complement i pentru Fc. Ele pot fixa astfel complexele imune. Sunt implicate mai ales n hipersensibilitatea cutanat de contact. -celule interstiiale situate n plmn, tractul digestiv, cord, ficat, rinichi b. cele din organele limfatice: -celulele interdigitale - se gsesc n zonele limfatice bogate n limfocite T, cu care coopereaz (zonele paracorticale ale ggl. limfatic, pulpa alb a splinei). -celulele foliculare - se gsesc n foliculii limfatici din corticala ganglionilor limfatici i pulpa alb a splinei, adic zone bogate n limfocite B. Multitudinea de arborizaii le permite un contact intim cu limfocitele B, ele prezentnd acestora Ag ca atare, nedegradat sau n complexe imune, ntr-un proces independent de MHC. C. CELULELE EFECTOARE Limfocitele stimulate antigenic se transform n celule efectoare, al cror rol esenial este acela de a elimina Ag. n aceast categorie sunt incluse: limfocitele T helper, limfocitele T citotoxice i plasmocitele. Limfocitele T helper activate exprim receptori de suprafa i secret numeroi produi care le permit s interacioneze cu alte celule. Limfocitele T citotoxice activate dezvolt granule care conin proteine capabile s omoare celulele infectate viral sau celulele tumorale. Limfocitele B stimulate antigenic se transform n celule capabile s sintetizeze imunoglobuline, numite plasmocite. Morfologia acestora este diferit: nuclei deni, citoplasm abundent, cu reticul endoplamatic bine reprezentat (acesta fiind sediul de sintez al imunoglobulinelor) i complex Golgi perinuclear cu rolul de a converti imunoglubulinele n forma final sub care sunt sintetizate. IMUNOGLOBULINELE sau ANTICORPII Imunoglobulinele (Ig) reprezint o familie de glicoproteine care au proprietatea de a reaciona n mod specific cu Ag a crui recunoatere de ctre sistemul imun a condus la sinteza lor, motiv pentru care li s-a conferit denumirea de Ac. Ele sunt sintetizate de limfocitele B fie asociate membranei celulare unde joac rolul de receptori, fie sub form seric. Ig reprezint aprox. 20% din proteinele plasmatice i migraz n cea mai mare parte n zona electroforetic gamma. n afar de ser, o cantitate variabil de Ig se gsesc n lichidele extravasculare, secreiile exocrine i esutul limfatic, dar nu depesc bariera hemato-encefalic. Structura general a unei Ig n alctuirea Ig, proporia glucidic reprezint doar 4-18%, restul fiind polipeptide. Fiecare molecul de Ig este alctuit din cel puin o unitate monomeric de baz. O asemenea unitate monomeric conine 4 lanuri polipeptidice, a cror coeziune este realizat prin puni disulfidice. Aceste puni sunt dispuse att ntre lanuri (intercatenare) ct i n interiorul aceluiai lan polipeptidic (intracatenare) i sunt eseniale pentru configuraia tridimensional a moleculei. Forma este cea a unui Y. Cele 4 lanuri sunt reprezentate de 2 lanuri grele notate cu H (de la heavy=greu) cu o greutate molecular de 55 75 kD i 2 lanuri uoare notate L (de la light=uor) a cror greutate molecular este de aproximativ 24 kD. Aezarea lor este simetric. fiecare lan polipeptidic are o extremitate aminoterminal, denumit poriune variabil (V) i un capt carboxi-terminal denumit poriune constatnt. Prin apropierea regiunilor variabile se

realizeaz o structur tridimensional numit situs combinativ sau paratop, care interacioneaz cu epitopul Ag specific. n afara acestora se mai descriu i nite regiuni numite hipervariabile sau CDR (complementarity Determining Region), caracterizate printr-o compoziie foarte variabil de amino-acizi, situate att pe lanutile H ct i pe cele L. Numrul situsurilor combinative determin valena anticorpilor. de ex. el este 2 pentru IgG i 10 pentru IgM. Att lanurile H ct i cele L nu sunt liniare, ci au o dispoziie buclat, ca urmare a legturilor disulfidice intracatenare. Regiunile buclate astfel create poart denumirea de domenii. Lanurile L au 2 domenii (unul n zona variabil i unul n cea constant). Lanurile H au un domeniu n zona variabil i 4-5 n cea constant. Poriunea dintre primele 2 domenii ale regiunii constante ale lanurilor H poart denumirea de zona balamalei (hinge region) datorit frexibilitii moleculei la acest nivel, ceea ce i confer un rol important n angajarrea legturii dintre Ag i Ac. Tipurile de Ig Dup tipul de lan H, Ig se clasific n 5 tipuri, cu structuri i proprieti diferite, pe care, foarte pe scurt, le vom trece n revist n continuare: 1. IgG - reprezint clasa dominant din serul uman, adic 75% din totalul Ig - au cea mai mare durat de via (3 sptmni). - d.p.d.v. structura care pot fi de tip subtipuri de IgG: IgG1, IgG2, IgG3 i IgG4. - d.p.d.v. funcional IgG au o importan deosebit, Ac rspunsului imun secundar aparinnd n cea mai mare parte acestei clase. - au o distribuie egal n sectorul intra- i extravascular - IgG este singura Ig care poate traversa placenta, asigurnd protecia n primele luni dup natere - IgG1 i IgG3 se pot lega de componentul C1q al sistemului complementului, determinnd iniierea activrii acestuia pe calea clasic. Activarea complementului de ctre IgG impune participarea a minimum 2 molecule de Ac. - IgG au de asemenea funcii antitoxice i de opsonizare 2. IgA - structural se aseamn cu molecula de IgG, coninnd 2 lanuri grele, - se cunosc 2 tipuri de IgA: IgA1 (majoritar) i IgA2. - spre deosebire de cellalte tipuri de IgG, IgA sunt prezente att n ser ct i n diferite secreii. - din acest p.d.v se descriu: IgA serice cu o structur monomeric, (doar < de 10% fiind formate din asamblarea a 2, 3 sau 4 monomeri), predominant de tip IgA1 i IgA secretorie care este de tip IgA2. Acest tip se gsete n secreiile digestive, saliv, secreiile lacrimale, bronice, colostru, laptele matern. IgAs se prezint n general sub forma unui dimer, reunit cu ajutorul unui lan polipeptidic J i un nou polipeptid, numit component secretorie, ce se ataeaz de lanul H. Componenta secretorie este sintetizat de celulele epiteliale. Rolul su este acela de a conferi IgA rezisten fa de aciunea enzimelor proteolitice din secreii. Limitnd ptrunderea Ag n submucoase, IgA au rol n imunitatea local 3. IgM - este cea mai mare Ig, fiind alctuit din 5 monomeri identici unii ntre ei prin lanuri J i legturi disulfidice la nivelul fragmentelor Fc. - este principala Ig a rspunsului imun primar - are cea mai puternic aciune de activare a cii clasice a complementului, o singur molecul de Ig M fiind suficeint pentru a fixa C1q. -se poate sintetiza i local, forma secretorie posednd ca i IgA o component suplimentar. 4. IgD - reprezint < de 1% din Ig serice - semnificaia lor fiziologic nu este deplin elucidat, dar s-a dovedit c IgD, ca i IgM au

rolul de receptor pnetu Ag la suprafaa membranei limfocitului B. 4. IgE - se mai numesc i reagine - au cel mai scrut timp de mjumtire (2-3 zile) - Microbiologie 21 - se fixeaz prin fragmentul lor Fc de receptorii specifici de pe membrana bazofilelor circulante i mastocitelor tisulare, putnd declana astfel un rspuns de tip reaginic - concentraia lor plasmatic crete n caz de infecii parazitare, fungice, virale. SISTEMUL COMPLEMENTULUI Sistemul complementului reprezint un complex de proteine serice ce conine 25-30 de componente (aflate n mod normal n stare inactiv) care ndeplinesc un rol important n aprarea organismului i n procesul inflamator. El face parte din mijloacele de aprare nespecific ale organismului. Activarea componentelor sale se face succesiv, "n cascad". n urma activrii rezult o ntreag gam compui biologic activi, care au capacitatea de a activa celule cu rol efector att n imunitate ct i n inflamaie. Principalele funcii ale complementului sunt:

- n stadiile finale ale activrii sale celulele int sunt lizate. El este implicat n liza multor celule cum ar fi: hematii, limfocite, bacterii, virusuri cu capside lipoproteice. - complementul activat se leag de Ag sau complexe imune, favorizndu-le aderena i fagocitoza. Privind aceste funcii ne putem da seama c acest sistem particip att n aprarea specific ct i n cea nespecific, rolul lui fundamental fiind acela de a corobora cele dou tipuri de mecanisme, crescnd eficiena intrinsec a fiecruia dintre ele. Ficatul este principalul sediu al sintezei proteinelor ce alctuiesc acest sistem, dei macrofagele tisulare i fibroblatii pot sintetiza i ei unele componente. Activarea componentelor complementului se face pe trei ci: calea clasic, calea altern i calea lectinelor. Calea clasic Elementul iniial este complexul imun Ag-Ac sau un Ag situat pe membrana celular. Activarea se realizeaz prin legarea componentului C1 de fragmentul Fc al moleculei de Ig. Calea clasic mai poate fi activat direct de unele virusuri i endotoxine. C1 este un complex trimolecular ale crui componente sunt notate C1q, C1r i C1s, a cror activare se face n aceast ordine. C1s activeaz C4, o molecul de C1s putnd cliva mai multe molecule de C4, ceea ce duce la amplificarea procesului. C4 este descompus n 2 componente: C4a i C4b. C4a este o substan numit anafilatoxin care are urmtoarele proprieti: stimuleaz degranularea mastocitelor, elibereaz aminelor vasoactive din mastocit i bazofil, produce contracia muchiului neted, crete permeabilitatea vascular, elibereaz amine vasoactive din granulocite. C4b se leag de urmtorul component ce ntr n joc, C2. C2 este clivat sub aciune C1s n 2 componente: C2a (o proteaz) i C2b. C2b rmne legat de C4b formnd un complex enzimatic numit C3convertaza, care determin clivarea componentului C3.

C3 este clivat astfel n C3a (i ea o anafilatoxin) i C3b, un component major al sistemului complementului. El se leag de C4bC2b formnd un complex trimolecular numit C5-convertaza. Tot C3b are capacitatea de a declana calea altern de activare. n plus, C3b i C4b favorizeaz aderena imun i fagocitoza, pentru c pe suprafaa unor celule ca limfocitele, hematiile, celule fagocitare exist receptori specifici pentru aceste componente ale complementului. Calea altern sau properdinic Aceast cale poate fi declanat att imunologic (IgA, IgG) ct i neimunologic (componente bacteriene, parazitare, unele enzime). n acest proces intervin mai muli factori, cu origini variate notai B, D, H, I. C3b protejat de Ag declanant se leag de factorul B, care, sub aciunea factorului D este clivat n 2 componente: Ba (cu efect chemotactic pentru neutrofiele) i Bb care rmne legat de C3b, formnd complexul C3bBb, care reprezint pt. calea altern C3-convertaza. El are deci capacitatea de a cliva C3, genernd o cantitate sporit de C3b. Astfe, de o singur molecula de Bb se leag mai multe molecule de C3b, formnd un nou complex numit C5-convertaza cii alterne. Ultimele secvene de activare sunt comune pentru ambele ci. C5-convertaza cliveaz C5 n C5a (anafilatoxin, elibereaz SRS-A din mastocite i factor chemotactic) i C5b. C5b se leag succesiv de C6, C7, C8 i C9, formnd complexul C5b6789 numit complexul de atac al membranei (MAC). El are asemnri structurale cu perforina (molecul eliberat de celulele NK), avnd ca i aceasta, proprietatea de a leza membranele celulare, inducnd astfel liza celulei. Activitatea biologic a complementului este controlat de mai multe elemente: viaa efemer a unor componente activate, proteine serice cu rol de a modula i limita activarea unor componente. ANTIGENELE Antigenul este o substan, cel mai adesea strin organismului, capabil ca n momentul ptrunderii sale n organism, s declaneze un rspuns imun (umoral sau celular) i s reacioneze specific cu produii acestui rspuns imun (limfocite T sensibilizate sau Ig). Se impun ns cteva meniunii fa de aceast definiie: pot induce inhibiia, supresia rspunsului imun ateptat, prin stimularea mecanismelor supresoare. Acestea se numesc Ag tolerogene. proprii devenite non-self) sau Ag tumorale. Poriunea din Ag care interacioneaz cu Ac sau cu receptorii limfocitelor T poart denumirea de determinant antigenic sau epitop. El este de fapt un subcomponent al macromoleculei antigenice. Acesta poate avea o structur liniar (recunoscui numai de limfocitele T) sau aminoacizii pot veni n contact fr ca pe lanul polipeptidic s fie alturai epitop conformaional- (recunoscui de limfocitele B). Epitopul poate fi situat la suprafaa moleculei de Ag sau se poate gsi n interiorul acesteia, mai ales n structurile moleculare complexe, caz n care se poate exprima numai dup degradarea parial i deplisarea restului moleculei de Ag. O molecul de Ag poate avea mai muli determinani antigenici, fiecare dintre acetia putnd induce sinteza unui Ac, proprietate numit plurivalen. Caracteristicile fundamentale ale Ag sunt imunogenicitatea, specificitatea i adjuvanticitatea. A. Imunogenicitatea Pentru ca o substan s fie imunogen ea trebuie s ndeplineasc urmtoarele condiii: 1. s fie strin organismului - cu ct ntre organismul gazd i cel cu ale crui molecule nteracioneaz sunt mai diferite filogenetic, cu att acestea din urm sunt mai imunogene. Exist nsi excepii n care substane strine organismului nu sunt antigenice, iar altele proprii pot deveni antigenice n anumite condiii (aceast situaie este substratul bolilor autoimune).

2. s aib o greutate molecular mare - n general molecule < de 5-10 kdaltoni nu sunt imunogene. i n aceast privin exist ns excepii. 3. s aib o structur chimic complex - o molecul complex, cu un numr mare de determinani antigenici, este mai imunogen. Cu excepia lipidelor pure, toate macromoleculele sunt imunogene. Proteinele, mai ales cele bogate n aa aromatici, au cel mai puternic potenial imunogen. 4. s fie digerabile - pt. a induce un rspuns imun, Ag trebuie s fie prelucrate de unele celule (m.a. macrofagele). cele care nu pot fi digerate de echipamentul enzimatic al acestora nu sunt imunogene. 5. s fie accesibil spaial - pentru a putea permite contactul cu paratopul 6. s aib o remanen mare n organul gazd - remanen legat de starea de solubilitate. Cu ct o substan este mai insolubil, cu att este mai antigenic. B. Specificitatea Este calitatea de a induce un rspuns imun strict specific fa de stimulul declanator. C. Adjuvanticitatea Este capacitatea de alipire a moleculelor de Ag de celulele prelucrante. Ea este mai mare la Ag prezente sub form de particule dect la cele existente n soluie. Aceast proprietate poate fi amplificat prin folosirea adjuvanilor, care, n plus, protejeaz Ag de o degradare rapid, prelungindu-i astfel remanena. Clasificarea Ag Antigenele pot fi clasificate n funcie de criterii structurale, chimice sau de relaia gazd-Ag. A. Antigene complete i incomplete Pentru ca un Ag s fie considerat complet el trebuie s ndeplineas ntocmai cerinele impuse de definiie (s induc un rspuns imun i s reacioneze cu produii acestuia). Exist ns molecule care datorit dimensiunilor mici, nu pot induce un rspuns imun dect dac se asociaz cu un suport constituit din structuri proteice sau tisulare ce poart denimirea de carrier, dar pot interaciona cu produii rspunsului imun. Asemenea molecule se numesc haptene sau Ag incomplete. Ele nu au imunogenicitate (nu pot declana singure un rspuns imun), dar au specificitate (reacioneaz cu Ac specifici). Carrier-ul este responsabil de imunogenicitate, haptena este responsabil de specificitate. B. Clasificarea chimic Din acest p.d.v. Ag pot fi: 1. Proteine - cele mai antigenice structuri 2. Glucide - n general slab antigenice, moleculele ramificate (de ex. polizaharidele din structura unor bacterii) pot fi ns puternic antigenice 3. Lipide - de asemenea slab antigenice n general. Unele ns, cum ar fi cardiolipinele, pot fi antigenice i au semnificaie n unele boli. C. Relaia gazd-antigen Din acest p.d.v. se deosebesc mai multe situaii: 1. Antigene heretogene, heterologe sau xenoantigene sunt Ag care se gsesc la specii diferite. 2. Antigene heterogenetice sau heterofile sunt Ag prezente la specii diferite filogenetic, dar care au structuri analoage (au n comun unul sau mai muli epitopi). Din aceast cauz pot reaciona cu acelai Ac specific (corespunztor epitopului comun) dnd reacii ncruciate. Ac heterofili pot avea o importan mare n practic. De exemplu: treponema pallidum are un epitop numit cardiolipin, care se gsete i n miocard. Detectarea Ac anticardiolipin st la baza cunoscutei reacii numit VDRL de diagnosticare a infeciei cu Treponema pallidum. n unele boli autoimune, apare Ac anticardiolipin, ceea ce determin apariia unor reacii VDRL fals +. 3. Antigene alogeneice sau aloantigene sunt Ag caracteristice unei specii, dar care difer ntre indivizii din interiorul speciei respective. Ele confer specificitate de specie. Din aceast categorie fac parte antigenele de histocompatibilitate (HLA), cu rol decisiv

n rspunsul imun. Ele au cptat o deosebit importan odat cu dezvoltarea transplantelor. De asemenea, s-a observat c unele grupe HLA prezint o mare susceptibilitate la o anumit boal, de unde s-a nscut ideea unei predispoziii genetice. Destinul Ag odat ptruns n organism este influenat de mai muli factori: calea de ptrundere, solubilitatea sa, dimensiune, capacitatea organismului receptor de a-l elimina sau distruge. Primul contact este cel cu mecanismele imunitii nscute (bariere mecanice, produi de secreie, PMN, etc). Majoritatea substanelor exogene sunt astfel eliminate. limfocitele locale i declaneaz rspunsul imun. de pe cale cutanat sau subcutanat, este captat de celulele Langerhans i este transportat n ganglionul limfatic de drenaj. Aici se desfoar rspunsul imun, iar produii acestuia (Ac sau limfocitele sensibilizate) ajung n snge via canalul toracic, desfoar n esului limfatic local. Ac acioneaz local, iar limfocitele B i T migreaz spre alte locuri de reziden. n concluzie, Ag care reuesc s depeasc barierele nespecifice, activeaz sistemul imun declannd rspunsul imun. Curs III Bacteriile morfologie, fiziologie, patogenitate Bacteriile sunt celule procariote, cu un singur cromozom, saprofite, strict sau condiionat patogene. Dimensiuni: 0,1-300 m. Se vd doar la microscop. Produc bacterioze (de exemplu pneumonia, tuberculoza, meningita etc.). Bacteriile au o capacitate mare de sintez i multiplicare. Se nmultesc asexuat, prin diviziune direct, n 10-12 minute n condiii favorabile. Sunt sensibile la aciunea antibioticelor i chimioterapicelor. Sporul bacterian este forma de rezisten care apare la unele specii n condiii neprielnice de nmulire. Creterea bacteriilor este procesul biologic prin care bacteriile i mresc volumul, datorit sintetizrii de noi produi i acumulrii apei. Multiplicarea bacteriilor se realizeaz prin diviziune direct i rar prin nmugurire. Diviziunea bacterian are loc atunci cnd bacteriile se gsesc ntr-un mediu favorabil (lichid sau solid): - prin diviziune direct sau binar - amitoza, prin sciziparitate, care se produce la majoritatea bacteriilor; ritmul de diviziune este foarte rapid de 10-20 min; excepie face bacilul Koch care are un timp de 18-20 ore. - prin nmugurire sau ramificare (la un numr foarte redus de bacterii). III.1. Morfologie Pentru descrierea i identificarea bacteriilor exist mai multe criterii: morfologia, afinitatea tinctorial, sporogeneza, mobilitatea etc.. Morfologic, bacteriile prezint: lipopolizaharidic, puternic hidratat (99% ap). - stratul exterior al peretelui celular, este triplu stratificat. -cu componenta principal mureina sau peptidoglicanul, polimeri micti, din dou tipuri de hexoze: N-acetilglucozamina (G) i acidul N-acetilmuramic (M). citolplasmatic - delimiteaz citoplasma cu componentele sale structurate: o nucleoid- reprezentat de cromozomul bacterian,o ribozomi, etc. - flexibil(i)- cu rol n micare. imobili. Protoplatii sunt forme bacteriene lipsite de perete bacterian, create artificial, meninute n medii osmotice capabile s protejeze de liz bacterian. In medii hipotone aceste celule se sparg, iar la medii hipertone se ratatineaz. Protoplatii provin din bacterii Gram-pozitive.

Sferoplatii sunt forme bacteriene create artificial prin indeprtarea parial a peretelui. Peretele este lipsit de murein, ns conine lipide, motiv pentru care au aspect sferic. Sferoplatii provin bacterii Gram-negative. Grupe morfologice de bacterii: : cocii: stafilococi i streptococi;

-spiralat: vibrioni, spirochete. Au corpul format din una sau mai multe spire:

Leptospira. re n stadiul de culturi tinere formeaz filamente lungi i ramificate, asemntoare unor micelii; ulterior se produce fragmentarea filamentelor rezultnd forme bacilare cu lungimi diferite. Figura 3. Morfologia unei bacterii (Escherichia colli). Mobilitate: n funcie de prezena sau absena cililor sau flagelilor : - bacterii imobile, atriche (absena cililor), de obicei au capsul Ex. pneumococii, Clostridium perfringens, etc. - bacterii mobile care n functie de numrul i dispoziia cililor se mpart in: - monotriche (cu un singur cil), Ex: Vibrio; - amfitriche, cu cte un cil la fiecare pol al celulei; - lophotriche cu cte un smoc de cili la unul sau ambele capete ale celulei; - peritriche, cu cili dispui pe toat suprafaa celulei (Proteus). Afinitatea tinctorial (capacitatea bacteriilor de a reine sau nu diferii colorani n urma splrii cu diferite soluii decolorante) este un criteriu important de clasificare. Se folosesc n mod obinuit coloraia cu albastru de metilen i coloraia Gram, la care se poate aduga (n fincie de diagnostic) coloraia Ziehl-Neelsen. Cele menionate mai sus sunt uzuale. Exist i metode speciale de coloraie precum i tehnici de microscopie electronic sau cu imunofluorescen. n coloraia cu albastru de metilen capsula se coloreaz n roz-pal, sporul apare ca o vacuol. Coninutul celular apare albastru. Coloraia Gram mparte toate bacteriile n Gram-pozitive i Gram-negative n raport cu permeabilitatea diferit a peretelui dependent de structura lor diferit. cele care se coloreaz n albastru-violet sunt Gram pozitive(cu violet de genian), cele care se coloreaz n rou sunt Gram negative. Coloraiia Ziehl-Neelsen reflect structuri diferite ale peretelui: Acid-alcoolo-rezistente al cror perete foarte bogat n lipide devine permeabila) pentru colorant fucsina - numai prin nclzire i rezist apoi la decolorare cu acid i alcool, care se face la rece, ramnnd colorate n rou. Acid-alcoolo-nerezistente care pierd culoarea roie prin decolorare i se recoloreaz cu al doilea colorant, albastrul de metilen, n albastru. Staphylococcus aureus (ME) Leptospire (ME) Vibrio (ME) Bacilul Koch (MO) Figura 4. Ilustrarea tipurilor morfologice de bacterii (ME-microscop optic, MO-microscop electronic). Bacteriile Gram-pozitive au un perete gros (200 - 800) alctuit dintr-un strat rigid de peptidoglicani i din acid teichoic. Cantitatea mare de peptidoglicani (70-80%) ofer acestor bacterii sensibilitate la lizozim i penicilin. Lizozimul hidrolizeaz specific peptidoglicanii ntre N-acetil-glucozamin i acidul N-acetilmuramic. Penicilina inhib specific sinteza de

peptidoglicani. Bacteriile Gram-negative au un perete mai subtire de 100 cu un continut mult mai mic de peptidoglican (pn la 20%) i fr acid teichoic. III.2 Fiziologia bacteriilor Caracteristicile metabolismului bacterian - este un metabolism unicelular, se desfoar ntr-o singur celul; - este un metabolism necompartimentat, caracteristic procariotelor (lipsa unor organite citoplasmatice). - se caracterizeaz printr-o mare flexibilitate metabolic, o capacitate crescut de adaptare n condiii foarte variate de mediu; - este un metabolism de mare intensitate ceea ce asigur o multiplicare rapid cu timp de generaie de 20' (celulele de mamifere au timp de generaie de cel puin 24 ore). Metabolismul bacterian este reprezentat de totalitatea proceselor biochimice intracelulare prin care substratul nutritiv este transformat n energie i constitueni celulari. Este de dou tipuri: - energetic - prin care se asigur respiraia bacterian i este realizat prin reacii catabolice; - de sintez - prin care se asigur sinteza componentelor bacteriene i se realizeaz prin reacii anabolice i catabolice (reacii biochimice de oxido-reducere, n cazul bacteriilor chimiosintetizante). Respiraia bacterian este: ra acceptorului final de hidrogen- exist tipuri de respiratii: o aerob (oxibiotic) -acceptorul final este oxigenul atmosferic, 02, iar produsul rezultat este apa. o anaerob (anoxibiotic) - acceptorul final este orice substan anorganic diferit de oxigen, ex. CO2 sau o substant organic (fermentaie). mpart n patru tipuri respiratorii: o bacterii strict aerobe - cresc numai n prezena unei cantiti mari de oxigen; o bacterii strict anaerobe - cresc numai n absenta oxigenului, sunt lipsite de enzimele de mai sus ; o bacterii aerobe, facultativ anaerobe - au posibilitatea ambelor tipuri de respiratie, n funcie de existena oxigenului. o bacterii anaerobe microaerofile - tolereaz cantiti mici de oxigen, probabil prin achiziia unor enzime de tip catalazic. Metabolismul de sintez Este suma proceselor metabolice, ce concur la procurarea de materiale convertibile n energie i componente celulare, necesare creterii i multiplicrii bacteriene. n functie de modul de procurare a acestor elemente, bacteriile sunt de trei tipuri : NH3, NO2, NO3. terotrofe: utilizeaz pentru sinteze azot i carbon din substane organice diferite, produi de alte organisme, putndu-i sintetiza singure metaboliii eseniali (majoritatea) -i pot sintetiza singure metaboliii esentiali. Ele se dezvolt numai intracelular.Ex. Rickettsia prowazeki, agentul tifosului exantematic. Unele bacterii sunt capabile s sintetizeze vitamine n cantiti att de mari nct servesc ca materie prim pentru extragerea acestor vitamine. Biotina este sintetizat de specii ca: Proteus vulgaris, Mycobacterium tuberculosis, Escherichia coli. Tiamina (vitamina Bl) este sintetizat de: E. coli, B. subtilis, S. typhi, Shigella, C. diphteriae. Piridoxina (vitamina B6) este sintetizat de unii lactobacili. Pentru om, flora microbian intestinal constituie o important surs de vitamine (vitamine din grupul B, vitamina K). Mediile de cultur pentru bacterii Pentru identificarea unei specii bacteriene, examenul direct al produsului patologic recoltat de la bolnav este de cele mai multe ori insuficient. Precizarea cauzei care a produs boala necesit cultivarea agentului patogen pe un complex de substante nutritive adecvate care alctuiesc mediile de cultur.

Aceste medii de cultur trebuie s ndeplinease anumite conditii: - s contin substane plastice i energetice necesare cultivrii microbului nsmnat, adic s asigure surse de azot, hidrati de carbon, sruri minerale, ap, vitamine i factori de cretere necesare creterii, dezvoltrii i reproducerii celulei bacteriene. - s satisfac necesittile de aerobioz sau anaerobioz ale bacteriei, tiind c n timp ce bacteriile aerobe pot folosi oxigenul molecular, cele anaerobe nu se pot dezvolta n prezenta 02 liber. - s aib o concentraie de ioni de hidrogen (pH) optim. - s fie sterile, pentru a permite izolarea n cultur pur a germenului respectiv. Mediile de cultur sunt sub form lichid (bulion, ap peptonat, etc.) sau solid (medii n care se ncorporeaz agar). Cultura bacterian este rezultatul nmulirii germenilor ntr-un mediu favorabil. Aspectul culturii depinde de: specie, de varsta culturii i de mediul de cultur i are rol n identificare. Bacteriile pot fi cultivate pe: medii artificiale (acelulare), culturi celulare, ou embrionat de gin, animale receptive (sisteme biologice sensibile -SBS). Culturile bacteriene pe medii artificiale. n medii lichide - determin apariia unei turbiditti (tulburri a mediului apos) dup 18-20 ore n condiii de crestere specifice bacteriei. n funcie de aspectul turbiditii culturile pot fi: - turbiditate omogen, - germenii sunt tineri. - viruleni, care dispersez rapid i uniform. Dr. biolog D. Gheeu - Microbiologie 28 - mediul este limpede. - germenii se gsesc sub form de grunji (depui pe fundul vasului sau pe perei). - tulbur neomogen mediul. Sunt determinate fie de germeni aviruleni, nepatogeni, sau de germeni patogeni mbtrnite, care i-au pierdut virulenta. Uneori creterea n mediile lichide mai poate fi sub form de: vl la suprafa, n cazul germenilor aerobi (bacilul tuberculos) sau depozit gros pe fundul vasului n cazul germenilor anaerobi. Pe medii solide - produsul patologic se nsmneaz prin diverse procedee de dispersie. Cultura bacterian apare sub form de colonie dup 4 ore. Colonia bacterian reprezint totalitatea germenilor rezultai din multiplicarea unei singure celule bacteriene, ea este o cultur pur, sunt germeni identici genetic (monoclonali). Aspectul coloniilor drepte, de consisten untoas, cu un diametru de 1-2 mm, se pot detaa uor, sunt alctuite din germeni virulenti. ip "R", Rough = aspru. Coloniile au suprafat aspr, rugoas, cu margini neregulnte, crenelate, nu se pot detaa o parte din colonie cu ansa, ci doar colonia ntreag. Aceste colonii sunt formate din germeni cu structur antigenic afectat, batrni, aviruleii. n aceast form nu se mai pot face identificri. germenilor cu capsul (Klebsiella). Ele au tendina de a se confrunta intre ele. unt colonii pitice, ele rezult n urma aciunii antibioticelor asupra formelor "S" de germeni. Populaia care rezult prin diviziunea unei bacterii crete n progresie geometric cu raia 2. Timpul necesar pentru dublarea populatiei se numete timp de dedublare sau timp de generatie. Dinamica real este caracterizat printr-o curb cu patru faze. 1. Faza de lag - n primele 2 ore, numrul de indivizi este aproape constant (faza de laten), ea este o faz de acomodare a germenilor la noile condiii de mediu. 2. Faza de multiplicare exponential sau logaritmic

Este o faz de cretere rapidi a numrului bacteriilor. Bacteriile sunt virulente, antigenele sunt cele mai bine reprezentate. n aceast faz se recolteaz germenii pentru prepararea vaccinurilor. 3. Faza staionar. Prin consumarea substratului nutritiv, ritmul de diviziune scade, numrul germenilor care mor devine egal cu cel al germenilor care se divid, deci numrul total al bacteriilor rmne constant. Aceast faz dureaz 2-3 zile. n aceast faz se fac identificrile bacteriilor, coloniile sunt bine individualizate. Bacteriile din coleciile purulente (abcese) se afl n aceasta faz. 4. Faza de declin. Consumarea substratului nutritiv i acumularea de metabolii toxici duce la moartea majorittii bacteriilor. Celulele rmase vii sunt btrne, i pierd virulenlaa i patogenitatea. Faza dureaz 2-3 luni. n aceast faz apar sorii. III. 3 Patogenitate Aciunile agenilor patogeni se manifest prin: Particip adezinele bacteriene prin fimbrii; actiune obligatorie de penetrare n organism; flora bacteriana rezident se opune ca o "barier" proliferrii bacteriene exogene. Exist receptori corespunztori pe mucoase. - prin endocitoz. r nutritivi. - proteice: tetanos, difterie, botulism, scarlatina, gangrena, holera; - lipopolizaharidice, constituente ale peretelui BGN - antigen O somatic, eliberate prin liza bacterian, oc endotoxinic; Exemple de sintez de enzime: coagulaza - S. aureus, streptokinaza - S. pyogenes, betalactamaze - S. aureus. nsmnarea Medii de cultur Antibiograma Figura 5. Medii i tehnici utilizate n microbiologie. bacterii cu multiplicare extracelular; - (serotipuri), proteina M a peretelui S. pyogenes,- piogene - (septicemii, supuraii, abcese); : n macrofage; micobacterii, brucele, produc boli lente, cu recderi, hipersensibilizare de tip ntrziat.

Curs IV Coci i bacili patogeni patogeni Coci patogeni Stafilococii sunt coci gram-pozitivi, aerobi, imobili, nesporulai ce se dispun caracteristic n grmezi, ciorchini, att n produsele patologice ct i n culturile pe medii solide. Genul Staphylococcus este mprit n: Staphylococcus aureus, epidermidis i saprophyticus. Din punct de vedere clinic este mai important clasificarea patogen care creaz dou mari categorii: -negativi (mai puin patogeni, S. epidermidis, S. saprofiticus). Staphilococcus albus S. aureus Figura 6. Colonii de Staphilococcus. Speciile de important medical sunt: Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis (care face parte din flora indigen), Staphylococcus saprophyticus care poate da afeciuni n sfera uro-genital. Caractere morfologice. Sunt coci Gram pozitivi, cu de 0,8-1,5m, n diplo sau grmezi neregulate (staphylos = ciorchine), necapsulai (cei mai multi), imobili, aerobi, facultativ anaerobi, saprofii sau patogeni. Posed: catalaz, coagulaz, fosfataz, descompun glucoza prin fermentaie. Caractere de cultur. Cresc pe medii simple i n special pe mediile hiperclorurate (10-

15% NaCI). Pe mediile solide formeaz colonii de tip "S" (smooth = neted). Elaboreaz pigmeni endogeni: - S. aureus elaboreaz pigment auriu - S. epidermidis pigment alb - S. saprophyticus pigment galben. Streptococii fac parte din familia Streptococcaceae, genul Streptococcus, unele specii sunt patogene, altele fac parte din flora indigen a orofaringelui, tractului intestinal, pielii. Cele mai importante specii pentru patologia uman sunt: - Streptococcus pyogenes, - Streptacoccus agalactiae, - Enterococcus, - Streptococii viridans, - Streptococcus pneumoniae Morfologie: Sunt coci dispui n lanuri, Gram pozitivi, sunt saprofii, patogeni sau condiionat patogeni. Au dimensiuni de 0,5-1 m, au n peretele bacterian o concentratie de murein mare (80%), sunt imobili, nesporulai, uneori pot prezenta capsul, ce le confer o mare virulen. Habitat: sunt ubiquitari (ntlnii peste tot) i n special pe tegumente i mucoase. Caractere de hemoliz Dimensiunile coloniilor de streptococ sunt mult mai mici (cca. 0,5 mm) dect de stafilococ (care au un diametru de 0,5-2 mm), sunt incolore i dau hemoliz. n funcie de elaborarea hemolizinei streptococii se mpart n 4 categorii. Streptococii hemolitici (elaboreaz hemolizina ), dau hemoliz beta, care este complet, foarte ntins, coloniile avnd marginile are. Din aceast categorie fac parte serogrupurile: A (care este totdeauna patogen), C. G. Rezistena - au rezisten scazut sunt distrui de razele ultrviolete, dezinfectante i antiseptice la concentraii uzuale (sunt distrusi la 55C* timp de 20 min.); - streptococul din grupa A este sensibil la pencilina G, care se administreaz parenteral/oral - streptococul din grupa B este rezistent la concentntii mari de NaCI 6.5%, la variatii mari de temperetura, la aciunea bilei i a srurilor biliare i la actiunea multor antibiotice. Patogenitate Streptococii grup A pot da infecii acute ale: tractului respirator (forma eruptivscarlatina, forma neeruptiv: angina, faringita, etc); otita medie, sinuzita, meningita, pneumenie, bronhopneumonie, pleurezie, endocardita acut. Localizarea cutanat a infeciei streptococice este mai frecvent n zonele calde: intertrigo impetigo, zablu (infecia comisurii bucale), abcese. flegmoane. Erizipelul este o infecie streptococic cu localizare cutanat (atunci cnd exist o soluie de continuitate): la nivelul gambelor, feei, cu caracter recidivant. Virulena streptococilor piogeni este dat n special de proprietatea antifagocitar, care depinde de prezena componentelor celulare de suprafaa: acidul hialuronic capsular i proteina M. Streptococcus pneumoniae (pneumococul) Este o bacterie comensal, care colonizeaz n mod normal tractul respirator superior, dar i tractul intestinal i mucoasele uro-genitale. Procentajul de purttori oro-faringieni sntoi n populaie este estimat la 30-70%. Bacteria este condiionat patogen, putnd provoca mbolnviri n anumite condiii. Este unul din principalii ageni patogeni infecioi la vrsta copilriei, precum i la persoanele vrstnice i/sau care au boli cronice sau triesc n condiii speciale. Morfologie - Sunt coci lanceolati dispui n diplo cu dimensiuni de 1/1,5m, pneumococii virulenti au capsul care nconjur ambele celule, dispui cu capetele rotunjite fat in fat. - Sunt imobili, nesporulai, Gram pozitivi, majoritatea sunt saprofiti, dar sunt i tulpini patogene nu se gsesc n natur.

Caractere de cultur: Cresc numai pe medii ce conin snge, cei ncapsulati dau colonii de tip S'. Sunt hemolitici, coloniile sunt mici, transparente i nconjurate de o zon de hemoliz a, ca la streptococii viridans. Rezisten: Sunt sensibili n mediul extern, sunt distrui de razele solare, de dezinfectante la concentraii uzuale. Majoritatea tulpinilor sunt sensibile la penicilin. Structur antigenic. Are antigene somatice i solubile, cel mai important este Ag SSS (Substanta Solubil Specific), din constituia capsulei, avnd o structur polizaharidic. Ag SSS mparte pneumococii n 83 de serotipuri (serotipul 3 d cea mai mare capsul). Caractere de patogenitate. Pneumococii ncapsulai sunt patogeni prin multiplicare i invazivitate, nu au capacitate de toxigenez. Determin pneumonia franc lobar (localizat doar la nivelul unui singur lob). Figura 7. Streptococcus pneumoniae (pneumococul): imagine la microscopul electronic (stnga) i aspectul culturii (dreapta). Pneumococul poate provoca urmtoarele tipuri de mbolnviri: - infecii de vecintate, prin rspndire n regiunile anatomice nvecinate cilor respiratorii superioare: sinuzite, otit medie, otomastoidite. - infecii invazive, prin diseminare sanguin (bacteriemie), cu constituirea de focare infecioase la distan: septicemie i meningit, care pot duce la deces, dar i endocardit, pericardit, artrite septice etc. - pneumonie i alte infecii ale tractului respirator inferior, prin ambele mecanisme descrise anterior. Neisseria meningitidis (meningococul) Germenii din acest gen sunt coci de form reniform, cu prtile adiacente concave, n diplo, Gram negativi, uneori cu o tendint de a rezista decolorarii. Toate speciile sunt aerobe, imobile, nu au flageli, unele tulpini posed pili.Temperatura optim de dezvoltare este ntre 35-37 C (sunt stenotermi - rezist la variaii mici de temperatur). Neisseria meningitidis este reprezentat de coci ovalari, reniformi de dimensiuni de 0,6 1,0 m dispui n diplo, Gram negativi. n produsul patologic (LCR) sunt intra- i extracelulari. Se gasesc numai la oameni (bolnavi sau sntoi). Sunt localizai pe tegumente, dar mai ales n cavitatea nazal i bucal. Caractere morfologice: germenii n diplo sunt nconjurai de o microcapsul; n peretele lor predomin antigenul O, nu mureina, fiind Gram-negativi. Sunt germeni imobili, nesporulai.Unele tulpini prezint pili n momentul izolarii, acestia pot s dispar dupa 1-2 subcultivri, nu par s aiba prea mare important n virulena germenului. Meningococii sunt germeni patogeni, dar cu virulen sczut, 60-70% din infectiile meningococice sunt inaparente. Cea mai frecvent localizare este cea nazal, foarte rar infecia poate ajunge pe cale sanguin la meninge, unde va produce meningita (1 caz la 1000). Dau rinite meningococice (cel mai frecvent), sinuzite, faringite, meningita cerebro spinal meningococic (MCSM). Patogenitatea se datoreaz n special propriettilor sale antifagocitare date de ctre polizaharidul capsular i de lipopolizaharidul care se afl n peretele bacterian. Meningita fulminant (sindromul Waterhouse-Friederichsen): Este o form supraacut a infeciei sanguine cu meningococ. A fost considerat iniial ca o form fulgertoare de septicemie meningococic prin prbuirea funciilor suprarenale datorit leziunilor hemoragice care se produc n aceast gland. n aceast form fulminant, este caracteristic examenul LCR, este aproape clar, conine un numr mic le PMN i un numar mare de germeni. Decesul pacientului poate surveni n 24-36 ore, dac nu se face tratamentul corespunztor. Neisseria gonorrhoeae (gonococul) Neisseria-gonorrhoeae sau gonococul produce infecia gonococic. Aceast bacterie a

fost descris de ctre Albert Neisser n 1879 n uretrite acute la brbai i n conjunctivita nounscuilor. N. gonorrhoeae este un parazit strict pentru specia uman. Se grefeaz pe celulele mucoasei genitale i accidental pe alte mucoase: rectal, faringian, conjunctival. Conjunctivita care poate ajunge pn la oftalmia gonococic la nou-nscut este o infecie exogen Produs n timpul naterii atunci cnd mama are vaginit gonococic. La brbat principala form de boal este uretrita gonococic, la femei vaginita i metrita. Caractere morfo-tinctoriale. Sunt coci ovalari de 0,6-1,0 m, n diplo, cu prtile concave adiacente, asemntori boabelor de cafea. Sunt Gram negativi, imobili, nesporulai, nconjurati de o capsul comun. La suprafafaa celulei au pili cu rol determinant n ataarea bacteriei de celula gazdei, deci se gsesc la speciile virulente, lipsind la cele nevirulente sau la cele din colectiile vechi. Caractere de cultur. Gonococul nu se dezvolt pe medii simple, este germenul cel mai greu de cultivat dintre toate Neisseriile.

Figura 8 Neisseria gonorrhoeae (gonococul) n examen direct la microscopul optic. Bacilii patogeni Genul Escherichia face parte din familia Enterobacteriaceae1, sunt bacterii saprofite sau condiionat patogene. Cea mai important specie este Escherichia coli. n caz de boal aceasta poate fi pus n evident n: snge, urin, puroi, fecale, etc.. Sunt bacili Gram negativi, lungi de 2-3m i groi de 0,5m, ciliai, ceea ce face ca majoritatea s fie mobili; ei nu sunt sporulai. Cei mai multi colibacili nu sunt patogeni. Virulena i toxicitatea bacteriilor patogene sunt legate de prezena Ag K i a unor toxine (enterotoxina, neurotoxina etc.) precum i producerea hemolizinei i factorului citotoxic necrotizant. n anumite conditii E. coli poate s dea natere la diferite afeciuni locale sau generale: - afeciuni genito-urinare (85 % patotipuri uropatogene datorat unor adezine, hemolizine, aerobactinei, care au receptori pe tractul urinar), - infectii intestinale. Sunt 6 patotipuri diareigene:

1 Familia Enterobacteriaceae cuprinde 5 triburi, mprite pe baza caracterelor biochimice. Tribul 1 - genul ESCHERICHIA - genul SHIGELLA Tribul 2 - genul SALMONELLA - genul ARIZONA - genul CITROBACTER Tribul 3 - genul KLEBSIELLA - genul SERRATIA - genul ENTEROBACTER Tribul 4 - genul PROTEUS - genul PROVIDENCIA Tribul 5 - genul YERSINIA Genurile Shigella i Salmonella sunt ntotdeauna patogene. Celelalte genuri sunt saprofite, condiionat patogene, cu excepia speciei Yersinia pestis care este ntotdeauna patogen (produce ciuma sau pesta).

Mai poate genera: endocardite, meningite, septicemii. Rspunsul imun este slab.

Genul Salmonella. Este un grup al familiei Enterobacteriaceae, tribulul 2, format din bacili Gram negativi, mobili, nesporulai, ce au o structur antigenic complex i patogenitate ridicat pentru om. Clasificarea pe baza structurii antigenice a fost alctuit o schem de diagnostic n care genul Salmonella a fost mprtit n grupuri (cu antigene somatice comune) fiecare grup este format din specii care se diferentiaz prin antigenele flagelare specifice. Germenii din acest gen se ntlnesc la omul bolnav sau purttorii de germeni, la mamifere, reptile, n mediul extern: ape, sol, alimente. Caractere morfologice i tinctoriale. Sunt bacili cu lungime de 2-3 m i groi de 0,6 m, mobili, cu cili peritrichi bine dezvoltai, nu formeaz spori, majoritatea speciilor nu au capsule, sunt Gram negativi. Caractere de cultur ritiva). rotunde, lucioase pe medii solide; sau sub form R", care sedimenteaz n mediile lichide i dau natere la colonii zbrcite, cu margini neregulate, pe medii solide. Salmonella typhi este cea mai patogen specie, i sintetizeaz totdeauna un flagel din proteine specifice, de aceea poate identificat. Kauffman i White au stabilit c Salmonella cu Ag O" = 9 sau 12 i cu Ag"H" = d, este Salmonella typhi, iar cu Ag"H"= g sau m este Salmonella enteritidis. Acest fapt are mare importan practic deoarece cu ajutorul serurilor imune specifice se poate pune diagnosticul. Antigenul solubil este endotoxina, ea are un rol patogen mult mai important la salmonelele cu caracter invaziv, deoarece sunt puse n circulaie, ducnd la generalizare (febra tifoid). Produsele patologice care se examineaz sunt: sngele, mduva oaselor, materiile fecale, urina, bila, lichidul din petele lenticulare, n cazuri letale i sngele din mduv, fragmente din organe (ficat, splin, ganglioni mezenterici). Caractere de patogenitate. Toate salmonelele sunt patogene, prin multiplicare i endotoxinogenez, iar cele ce prezint i o pseudocapsul (Ag Vi") au i caracter de invazivitate. La om salmonelozele sunt sub dou forme principale: - Boli septicemice, cu evolutie grav i mortalitate ridicat, cum sunt febra tifoid (produs de bacilul tific) i febrele paratifoide A. B i C (produse de bacili parotidici A, B i C). - Boli localizate, mai ales la nivelul tubului digestiv (toxiinfectiile alimentare i enteritele), cu o durat mai scurt i de o gravitate mai redus. Imunitatea Fotii bolnavi de febr tifoid i parotifoid dobndesc o imunitate destul de solid, care poate dura toat viaa. Imunitatea n toxiinfeciile alimentare i a enteritelor este slab. Imunitatea antitifoparatifoidic se poate dobndi i in mod artificial, prin vaccinare. Diagnosticul de laborator n infeciile tifo-paratifoidice este bacteriologic i imunologic Dup boala sistemic apar anticorpi care protejeaz cel puin 5-10 ani. Bacilul dizenteric (Shigella dizenteriae) Germenii genului Shigella produc dizenteria bacilar. Bacilii dizenterici sunt gsii n materiile fecale ale bolnavilor de dizenterie i ale purttorilor. De asemenea se pot gsi n unele alimente contaminate, ape poluate. Caractere morfo-tinctoriale. Sunt bacili Gram negativi, imobili i nu sunt capsulai. Genul Shigella are 4 subgrupuri serologice: A, B, C, D. - Subgrupul A (Shigella dizenteriae) cuprinde 12 serotipuri. Acest grup este cel mai patogen. Shigella Shiga este cel mai patogen dintre toate tipurile, elaboreaz exotoxina neurotrop. - Subgrupul B (Shigella flexneri) cuprinde 6 tipuri, din care primele 4 au i subtipuri. - Subgrupul C (Shigella baydii) cuprinde 15 tipuri serologice. - Subgrupul D (Shigella sonnei) cuprinde dou faze: faza I (sau S) i faza II (sau R) Caractere de patogenitate. Se evideniaz prin multiplicare i toxigenez, actioneaza la nivelul sigmoidului provocnd ulceraii superficiale. n dizenteria dat de Shigella apar trei

simptome ce constituie sindromul dizenteric : scaune sangvinolente i mucoase, colici abdominale, tenesme (senzaie de defecare fr scaun). n general boala evolueaz cronic, uneori pe fondul unei rezistene sczute, dau recidive. La copii este cea mai grav dizenterie.Rspunsul imun este foarte slab. Vibrionul holeric (Vibrio cholerae) Holera este o boal infecioas acut din grupul infeciilor de carantin i intestinale, provocat de mai muli vibrioni (asiatic, El-tor, non O139), care ptrund n organismul uman prin tractul digestiv, caracterizndu-se clinic prin simptome de deshidratare i crampe sau convulsii musculare, manifestndu-se prin diaree i vome repetate, ce duc la dereglri circulatorii i a metabolismului hidrosalinic. Primele 6 pandemii de holer au fost provocate de vibrionul asiatic, iar acea de astzi de vibrionul El-tor. Ultimul este cu mult mai rezistent n mediul ambiant. El se pstreaz destul de ndelungat la temperaturi joase (n experimente pn la 127 zile), n bazinele acvatice cteva luni; n lapte i produse lactate 14-30 zile; pe suprafaa legumelor i a fructelor 5-7 zile; n intestinul mutelor 4-5 zile; n organismele hidrobionilor (peti, molute, broate, raci, crabi, stridii etc.) un timp mai ndelungat. De notat, c vibrionul El-tor dup structura antigenic se subdivizeaz n serotipurile: Ogava, Inaba i Higoima. n epidemia din 1995 n ara noastr preponderent (97%) s-a nregistrat serotipul Ogava. Sursa de infecie o constituie omul bolnav i purttorii de vibrioni. Ultimii n holera El-tor se ntlnesc mai frecvent dect n cea asiatic i sunt periculoi, deoarece pacientul nu are semne clinice. Holera, ca i celelalte infecii intestinale, se transmite prin intermediul apei, produselor alimentare, minilor murdare, obiectelor de uz casnic contaminate cu excreiile bolnavilor holerici i prin intermediul mutelor. Un pericol evident n privina molipsirii de holer El-tor l prezint contaminarea cu hidrobionii (animalele acvatice sus menionate) i chiar consumarea n hran a unor din ei. Genul Corynebacterim include mai multe specii de bacili Gram pozitivi (poate fixa colorantul neregulat i pot avea incluziuni de polimetafosfat), uor incurbai, maciucai, aezati n V. L mici grmezi neregulate, sau n palisade, nesporulai, necapsulari, imobili, aerobi, facultativ anaerobi, catalazo pozitivi. Dintre Corynebacteriile patogene pentru om, grupul Corynebacterium diphtheriae reunete trei specii: C. diphtheriae cu 4 biotipuri (gravis, mitis, intermedius i belfanti ), C. ulcerans, C. pseudotuberculosis. C. diphtheriae are capacitatea de a elabora exotoxin n urma conversiei genetice. Bacilul difteric - Corynebacterium diphtheriae este agentul cauzal al difteriei. Difteria este o boal infecioas grav, care n forma ei caracteristic se manifest printr-o leziune la poarta de intrare, cel mai frecvent la nivelul amigdalelor, unde produce un exudat fibrinos, aderent: "falsa membran" de culoare gri-maronie (diphthera = membran). Ea se formeaz local sau se extinde acoperind faringele, obstructionand arborele traheobronic producand crup laringian care poate provoca asfixie mecanic. La adpostul falsei membrane, bacilii i continu multiplicarea i sinteza de toxin. Tulpinile lizogene (infectate cu bacteriofag tox+) sintetizeaz toxina eliberat extracelular i difuzat n organism pe cale sanguin i limfatic produce leziuni importante la nivel cardiac (miocardit), nervos (demielinizare), renal (necroz tubular), suprarenalism, muscular i hepatic. Diagnosticul de laborator este bacteriologic.Este un diagnostic de mare urgent. Bacilul Koch 2 (Mycobacterium tuberculosis), bacilul tuberculos, manifest un parazitism strict, el este prezent n leziunile omului sau animalelor bolnave de tuberculoz, poate fi gsit n praful din ncperile n care a fost rspndit sputa bacilifer sau pe obiectele contaminate de bolnav. Sunt bacili subiri cu lungimea de 3-10 m i ltime de 0,1-0,2 m, uneori ramificati, drepi sau uor curbati sub formn literelor: X, Y, Z, cu granulaii puse n evident prin coloraii speciale, imobili, nesporulati, necapsulati. Rezistent. Bacilii rezist luni sau ani n praf, sunt sensibili la aciunea radiaiilor solare

i UV, sunt sensibili la aciunea antibioticelor: streptomicin, HIN, acidul para-amino salicilic, etambutol, rifampicin (sinerdol), dar pot ctiga uor rezistent. Diagnosticul de laborator este bacteriologic i se bazeaz prin punerea n eviden a bacilului Koch n produsele patologice, n acest scop se folosesc 3 metode: examenul direct, cultivarea i inocularea la cobai. n tuberculoza pleuro-pulmonar se recolteaz: sput, aspirat bronic sau cavitar, lichid de spalatura bronic, piese de exerez chirurgical, lichid de spltur gastric, fecale, piese necroptice, lichid pleural. n tuberculoza uro-genitala: urin, sange menstrual, biopsie de endometru, piese de exerez chirurgical. n tuberculoza ganglionar: material din biopsie sau punctie. n tuberculoza ostio-articular: lichid articular, ,puroi din abcese reci, fragmente osoase. In meningita tuberculoas: lichid cefalorahidian. Cel mai folositor produs este sputa, pentru c tuberculoza pulmonar este forma cea mai frecvent. Bacilul lepros (Mycobacterium leprae) este agentul etiologic al leprei umane. Lepra este o boal cu o evoluie cronic, semnele de boal variaz mult de la un pacient la altul; la congresul internaional de combatere a leprei din anul 1953 s-a fcut categorisirea formelor de boal: 1. lepra nedefinit (prima faz cutanat eritematoas) 2. lepra tuberculoas (cderea prului, apar inflamaii nodulare pe traiectul nervilor, descompuneri de esuturi) 3. lepra bordeline (form instabil, fiind definit de starea imun, care trece n forma grav) 4. forma de lepr grav (forma contagioas, apar pete roiatice, brune, cap de leu, inflamaii pe traiectul sistemul limfatic i nervos, descompunerea de esuturi cu tumefieri i ulceraii. Aceste procese se pot extinde n muchi, oase tendoane i organe, moartea fiind produs de infeciile secundare bacteriene. Bacilul carbunos 3 (Bacilus anthracis) este o bacterie gram pozitiv, care provoac antraxul. Denumirea vine de la o leziune des ntlnit antraxul cutanat (pielea afectat este de culoare neagr, cu aspect de crbune). Cele mai multe cazuri de imbolnavire la om sunt reprezentate de infectiile cutanate si cele respiratorii. Afectarea intestinal apare foarte rar, iar meningita se manifest doar n cazurile grave cu bacteriemie sever.

Genul MYCOBACTERIUM 2 Germenii din acest gen apartin familiei Mycobacteriaceae. Aceast familie cuprinde mai multe specii, fiind aproape toate saprofite cu excepia speciilor: Mycobacterium tuberculosis i Mycobocterium leprae. In anul 1882 Robert Koch descoper bacilul tuberculozei; tot n acelasi an Paul Ehrlich descoper acidorezistena bacilului tuberculozei. In anul 1884 Robert Koch obine cultura baciluli tuberculozei pe ser coagulat. In 1891 tot R. Koch semnaleaz fenomenul Koch i tuberculina. A. Calmette i C. Gurin in perioada 1908-1921 au cultivat prin treceri la 21 zile, n bulion cartof glicerinat i biliat o tulpin de Mycobocterium bovisvirulent izolat din lapte. In urma acestor treceri s-a obinut o tulpin fr patogenitate, dar capabil s determine rezistenta fa de infecia tuberculoas, caracterele morfologice,tinctoriale, nutriionale, de cultur au rmas cele iniiale. Aceast tulpin (tulpina BCG - bacilul Calmette i Guerin) a fost utilizat ca vaccin mpotriva tuberculozei ncepnd din 1921; n 1927 se organizeaz laboratoare de producie a vaccinului BCG n 26 de tri , inclusiv n Romnia. 3 Anthrakis (gr)= crbune

zonele expuse ale pielii: tegumentul feei i al membrelor superioare. La poarta de intrare apare o macula mica, rosie care ulterior va evolua catre forma de pustula si ulceratie, cu necroza si edem. Iniial apare prurit (mancarime) iar catre final leziunea nu doare. De obicei pacienii nu prezinta febr. Vindecarea spontan se produce in peste 90% din cazuri, dar exista si forme severe de boal, care netratate se vor finaliza prin deces. Contactul in antecedente cu animale sau produse de animale potential contaminate, orienteaza diagnosticul catre infectia cu bacilul antrax. inhalaie (boala lnarilor). Dupa cateva zile, simptomele se acutizeaza: febra crescuta, dispnee si hipotensiune arteriala. La examenul radiologic pulmonar, se observa largirea simetrica a mediastinului (mediastinita hemoragica). inal. Se constat o simptomatologie variabila: febra, greturi, varsaturi, dureri abdominale, scaune diareice cu sange sau chiar ascita (lichid in cavitatea peritoneala). Diareea severa determina deshidratare masiva si hemoconcentratie. Daca bacteria se localizeaza la nivelul faringelui va determina: febr, disfagie (nghiire dificil a alimentelor), durere n gt i adenopatie regional. 4 Bacilul tetanic (Clostridium tetani) Este un bacil Gram pozitiv anaerob, cu capete nerotunjite de 3-4/0.4 m, sporul terminal nu prinde colorani obinuii diametrul transversal depete de 2-4 ori pe cel al corpului bacterian, are un contur refringent, o form rotund, mai rar ovalar. Bacilul tetanic este foarte mobil, prezentnd fenomenul de "crare' pe supafaa gelozei, n condiii de anaerobioz, asemntor cu cel al proteusului n condiii aerobe. Patogenitatea este determinat de o exotoxin pe care orice tulpin de Cl. tetani dup 4872 ore, n mediul lichid, o produce i este suficient pentru a provoca o intoxicaie tetanic mortal la animalul de laborator. Aciunea biologic a toxinei tetanice se exercit prin fixarea exclusiv i ireversibil pe sistemul nervos mai ales central (SNC). 5 Bacilul botulinic (Clostridium botulinum). Este un bacil lung i gros 4-6/0,8-1,2 m, Gram pozitiv, mobil datorit cililor peritrichi, cu spor subterminal, deseori cultura poate pune n libertate muli spori. Este lipsit de virulen, incapabil de multiplicare n organism, produce n afara organismului cea puternic toxin cunoscut, a crei ingestie provoac boala. Este rspndit n sol i se gsete n intestinul omului i animalelor. Sunt apte serotipuri tipuri de Cl. botulinum (A, B, C, D, E, F, G) la noi este mai rspndit tipul B, foarte rar tipul A. Gangrena gazoas (Miozita clostridian). Infecie difuz necrozant deosebit de grav a esutului muscular, cu extensie rapid favorizat de prezena esuturilor devitalizate. Clostridiile gangrenei gazoase cele mai frecvente specii sunt: Cl. perfringens, Cl. histolyticum, Cl. oedematiens, Cl. septicum, Cl. sporogenes. Pot provoca la om tabloul clinic al gangrenei gazoase: - mai frecvent la muchii membrelor, - infecia uterin postabortum, - infecia post-operatorie, post-colecistectomie, - abces cerebral, infecie sinuzal, poate afecta orice esut sau organ. 4Genul Clostridium cuprinde numeroase specii, majoritatea sunt saprofite, dar un numr redus sunt patogene. Sunt bacili Gram pozitivi, mobili datorit unor cili peritrichi (n afar de CI. perfringens) cu dimensiuni mari, strict anaerobi, formeaz spori ovoizi sau sferici care au dimensiuni mai mari dect grosimea bacilului, deformndu-l, sunt rspndii n mediul exterior mai ales n sol (anaerobi telurici). Patogenitatea este dat de invazivitate dar i de toxigenez. Anaerobii patogeni se mpart n dou grupe: - anaerobi productori de toxine histotrope, clostridiiie gangrenei gazoase: Cl. perfringens, Cl. histolyticum, Cl. oedematiens, Cl. septicum, CI. sporogenes, etc.;

- anaerobi productori de toxine neurotrope: Cl. botulinum i Cl. tetani. 5 Botulus = crnat n limba latin. Clostridium botulinum a fost izolat n 1896 de Van Ermengem n cursul unei intoxicaii cu crnai. Curs 5 V.1 Leptospirele (Genul Brucella). Rickettsiile (Treponema pallidum) Leptospirozele sunt boli cu potential septic, produse de genul Leptospira, caracterizate prin: - febr - stare septic - afectare hepatic i renal ( icter + oligoanurie) Etiopatogenie: - Leptospira cu 280 de variante, gen Spirocetaceae (Treponema pallidum) - au forma spiralat - coloratie argentic; se vizualizeaz la microscopul cu fond ntunecat - se gsesc n apele stttoare: bli, lacuri , iazuri, mine inundate; n dejeciile de obolan - frecvent i la cabaline extrageri manuale de placent veterinari. Contaminare: - pielea cu excoriaii la oamenii desculi, n special n orezrii; - leptospirele au extremirile sub forma de crlig la un capt capilare sanguine ajung n circulaia general diverse organe ochi, rinichi, ficat, meninge, splin, plamni. Dupa fixare la nivelul organelor, leptospirele se multiplic intens determinnd leziuni morfologice i funcionale, determinnd i o serie de sindroame, astfel: - la nivel pulmonar determina pneumonite - la nivelul ficatului apar leziuni datorita corpului microbian; - la nivelul rinichiului sunt afectate : interstitiul si mb. Bazala - la nivelui meningelui: plexurile coroide meningee - la nivelul ochiului: umoarea apoasa - la nivelui pielii: sdr eruptiv ( congestie tegumentara) - Starea septica induce sdr. de CID sdr. hemoragic. - Leptospirele dau cele mai multe cazuri de IRA; netratate duc direct la dializ - Sdr. de insuficienta hepato-renal, cu: oc toxic, acidoz metabolic, transpiraii reci, hemoragii Tipuri de leptospiroze ntlnite: - leptospiroza cu L. pomona ( sursa de infectie porci i sobolani) - leptospiroza cu L. Grippo- Typhosa (oareci de camp, vite, cai) - leptospiroza cu L. canicola (cinele) - leptospiroza cu L. hyos (porc, soareci, vidr). Genul Brucella cuprinde ase specii dar trei sunt de interes uman producnd antropozoonoze: Brucella melitensis (capre, oi), Brucella abortus (vaci), Brucella suis (porci). Sunt cocobacili (bacili foarte mici) cu lungimea de 1 m i grosimea de 0,3m; sunt ncapsulai, imobili, nesporulai, aerobi, Gram negativi. Se gsesc n organismul infectat, animalele domestice care elimin bacteriile prin produsele de avort, secreii, lapte etc., urmate de contaminarea masiva a mediului extern (sol, ap, vegetaie) i de infectare a altor animale, omul fiind o gazd accidental, aprnd ca verig final n lantul de transmisie a infeciei. Brucella se multiplic intracelular, de aceea este rezistent la antibiotice. Calea de intrare este digestiv, prin alimentele contaminate, sau prin contaminarea tegumentelor (ns nu pe cele intacte). Animalul gestant bolnav prezint avort spontan. Bruceloza se mai numete febr ondulant. Dup intrarea n organism cocobacilul se multiplic intracelular n ganglionii limfatici i apoi ptrunde n circulatia sanguin. Boala are o evoluie cronic, apar leziuni de tip proliferativ numite granuloame.

Gronuloamele se observ la nivel cutanat, n ficat, splin,. sistem nervos, boala fiind o septicemie cu evoluie lent. Rickettsiile sunt microorganisme care se situeaz la grania dintre bacterii i virusuri. Se asemr cu bacteriile prin: dimensiuni, morfologie, organizare celular intern, compoziie chimic, multiplicare prin divziune direct. Se aseamn cu virusurile deoorece nu cresc pe medii acelulare, ele se multiplic numai in esuturi vii, ca virusurile. Familia cuprinde trei genuri: Rickettsia, Coxiella i Ehrlichia. Aceste microorganisme sunt transmise de artropode (pduche, purice, cpu) multiplicndu-se n corpul acestora. Specia tip al acestei familii este Rickettsia prowazeckii, care este specific omului, celelalte specii au ca surs animalele. Figura 9. Ci de infecie i transmitere a brucelozei. Rickettsia prowazeckii este agentul etiologic al tifosulul exantematic epidemic. Boala apare n urma nepturii de pduche, pduchele face infecia i elimin bacteriile prin dejecii pe pielea noii gazde, eliminnd i o substan pruriginoas care determin scrpinarea. Prin leziunile care apar, rickettsiile ptrund in organism i se multiplic n endoteliul vaselor mici. Este caracteristic lezarea endoteliului vascular cu formarea de infiltrate perivasculare (nodulii Fraenkel) cu limfocite, monocite, histocite i plasmocite, mai ales cutanat, sistemul nervos i mai rar in miocard i corticala renal. Dup 7-14 zile de la neptur apare febr de 40-41 0C care dureaz o sptmn. Dup a 5 a zi de febr apare erupia, pete roii. Aceast boal este o boal infectocontagioas foarte grav cu declarare obligatorie i face parte din grupul bolilor pestileniale. Treponema pallidum este agentul etiologic al sifilisului, cu transmitere n primul rnd sexual. Este un parazit exclusiv al omului i nu se ntlnete n mediul exterior, avnd o rezisten foarte sczut. Morfologie Se examineaz la microscopul cu fond ntunecat. Are o lungime de 10-15 m, o grosime de 0,2-0,3 m, form helicoidal, spirele sunt n numar de 10-15 strnse i regulate cu capetele efilate. ntre perete i membran are fibrile, care i confer mobilitate, prezint micri de rotaie i flexie. Se coloreaz Giemsa slab. Se coloreaz bine prin impregnare argentic, coloralia Fontana-Tribondeau. Patogenitate Treponema pallidum este patogen pentru om prin multiplicare intracelular i invazivitate. Boala se numete SIFILIS sau LUES. Boala se transmite prin contact sexual i mult mai rar nesexual (cel mult 57, din cazuri, in urmatoarek situaii: doic sntoas alptnd copil cu sifilis congenital sau doic bolnav alptnd copil sntos, transfuzie, medic consultnd sau tratnd fr masuri de protecie bolnavi de sifilis). Sifilisul este o boal cronic care n lipsa tratamentului (sau un tratament inadecvat) evolueaz in 3 perioade distincte: 1. Sifilisul primar apare dup inocularea in timpul actului sexual Bacteriile ptrund n organism prin leziuni fine ale pielii i mucoaselor datorit mobilitlii lor, treponemele ajung pe calea vaselor limfatice in ganglionii limfatici regionali i apare bacteriemia. La locul de inoculare apare dup 3 sptmni (ntre 10-60 zile ancrul "dur", care apare dup multiplicarea treponemelor la locul de inoculare, atunci cand ating o concentraie local de 7-10germeni/ml. De obicei ancrul este unic i este totdeauna nsoit de adenopatie regional, care este dur nesupurativ. Fenomenele locale caracteristice leziunii primare se vindec spontan dup patru-ase sptmni, fr a lsa i alte semne clinice de boal. Anticorpii devin evideniabili n a doua jumtate a perioadei primare.

2. Sifilisul secundar la 2-3 luni de la contactul infectant (45-50 zile de la producerea ancrului) apar leziuni maculo-papuloase, neulcerative la nivelul tegumentelor i mucoaselor. Apar papule umede i palide mai ales n regiunea ano-genital, axilar, gur. Se produc i alte manifestri ca: meningita sifilitic, carioretinit, nefrit, periostitii. n aceast faz se gsesc treponeme in tot organismul, bolnavul este foarte contagios. Dup cteva luni (mai rar 1-3 ani) leziunile secundare se vindec spontan, urmnd o ndelungat faz de sifilis latent care poate dura ani sau zeci de ani. - 25% din bolnavi se vindec definitiv - n aceast faz 25% dintre bolnavi rmn lateni toat viaa. - 50% dintre bolnavi progreseaz ctre sifilisul teriar. 3. Sifilisul teriar este rspunsul imun celular la prezena Tr. pallidum n organism i a produilor lor metabolici. Apare dup 5-40 ani de la contactul infectant, intervalul pn la debutul fazei teriare se numete perioada de laten aparent, fr simptome, dar cu un titru mare de anticorpi. se caracterizeaz prin: - leziunile granulomatoase (gome), tegumentare i osoase, - modificri degenerative n sistemul nervos central (paralizie general progresiv), - leziuni cardiovasculare (aortit, insuficien valvular aortic), hepatice. Tratament Se administreaz penicilin. Eficacitatea tratamentului se verific prin diagnosticul serologic. Dac tratamentul este eficace, dispar anticorpii din serul de cercetat. Figura 10.abc Agentul etiologic Treponema pallidum (a) i manifestarea sifilisului la nivel tegumentar (b, c) V.2 Micologie- noiuni generale. Dermatofiii Fungii sau ciupercile constituie astzi un regn aparte. Aparatul vegetativ este alctuit din filamente numite hife a cror totalitate alctuiete miceliul. Reproducerea la ciuperci se realizeaz prin spori. Dup felul nutriiei fungii pot fi parazii i fungi saprofii. Aproape toti fungii sunt aerobi. La fungi peretele celular conine chitina. nmulirea poate realiza vegetativ prin simpla fragmentare a miceliului sau prin intermediul unor formaiuni specializate numite spori. Sporii fungilor pot fi sexuati i asexuati. Sporii sexuati: iau natere direct sau indirect printr-un proces de ncruciare ntre 2 celule de sex opus. Se ntalnesc la fungii perfeci. Figura 11. Ciclul vital la fungi. -au format i poarta numele de ASC. Acest tip de spori se intlneste la clasa Ascomycetes. din clasa Bazidiomycetes. se numete oogonie. Sporii asexuai: se formeaz prin simpla derivare din celule vegetative prin fragmentarea unei hife specializate sau a hifei modificate caracteristic pentru a forma corpi reproducatori. ruperea peretelui sporangial. al unei hife denumite sporangiofor. Sporii se elibereaz prin ruperea peretelui. desprind usor. Sunt caracteristici fungilor din clasa Ascomycetes. diosporii iau natere prin dezvoltarea unui perete gros, rezistent, in jurul unei celule din interiorul unei hife; se intalnesc la toti fungii.

miceliene; nu sunt rezistenti la uscaciune. Sporii fungilor sunt n general colorai i dau coloniilor mature o culoare caracteristic; se desprin usor de pe miceliu. Sporii adaptai la mediu acvatic sunt mobili cu ajutorul unor flageli. Au via latent i o rezisten mare la uscciune, presiune osmotic, temperatur i radiaiiUV. Dermatofiii produc infecii care afecteaza zonele superficiale ale corpului: epiderma i fanere (pr, unghii). Principalii ageni etiologici implicai in producerea dermatomicozelor aparin genurilor Epidermophyton, Microsporum i Tricophyton. TRICOFIIA este caracterizat de leziuni supurative ale pielii i firelor de pr, cu caracter inflamator, cauzate de Tricophyton. Transmis de la animale, se numete i sicosis parazitar sau kerion celsi. Frecvent la copii, tricofiia capului apare sub form de placard rotund, bine delimitat, eritematoas sau eritemato-vezicular, de 2-4 cm pe msura extinderii. Apar: febr, dureri musculare, articulare, inflamarea ganglionilor limfatici. Pe pielea fr pr se localizeaz pe dosul mnii sau degetelor cu aspectul foliculitelor supurate. MICROSPORIA data de speciile genului Microsporium, poate fi transmis de la animale i determin apariia de plci mici, rotunde de 2-5 cm cu scvame asemntoare trei. Pe pielea glabr spectul este de herpes circinat nconjurat de reacie inflamtorie. FAVUSUL este o dermatomicoz a pielii capului i glabre caracterizat de leziuni tipuce sub form de godeuri galbene cu centrul deprimat n care se gsesc adevrate colonii. n jurul perilor parazitai. Cauzat de Achorion sp., adesea transmis de la animale (A. quinckeanum- la oareci). n toate cazurile, msurile profilactice i de combatere presupun igiena strict, localizarea i ndeprtarea sursei de infecie i tratamentul cu antimicotice. Fungii dermatofii se individualizeaz prin cel puin 2 caractere cu impact direct asupra identificrii lor n laboratorul clinic: - folosesc keratina ca element nutritiv (sursa de azot), ceea ce explica tropismul lor pentru epiderm, pr i unghii; sunt de obicei incapabile s penetreze esutul subcutanat; - prezint caractere morfologice particulare: hife n forma de candelabru, de coarne de cerb, uneori spiralate i macroconidii caracteristice, complet diferite de ale altor fungi. Genul Tricophyton este capabil s invadeze prul, epiderma i unghiile, n timp ce genul Microsporum doar prul i epiderma iar genul Epidermophyton afecteaza epiderma si unghiile. Principalele specii de dermatofii izolate din probe clinice sunt n ordinea frecvenei: Tricophyton rubrum, Tricophyton mentagrophytes, Epidermophyton flocossum, Tricophyton tonsurans, Microsporum canis i Tricophyton verrucosum. Micozele cutanate sunt probabil cele mai frecvente infecii fungice la om i sunt de obicei denumite cu termenul latin tinea ("vierme inelar"). Macroscopic, leziunea are un aspect inelar, marginea sa constituind zona de infecie activ, progresiv; vindecarea se produce n zona central a inelului. Pentru a indica zona corpului afectat se folosesc termeni latini: tinea corporis (corp), tinea cruris (zona inghinala), tinea capitis (scalp, pr), tinea barbae (barba), tinea unghium (unghii), etc. Deoarece tratamentul dermatomicozelor este ndelungat, costisitor i cu potenial toxic, este necesar ca mai inti s se stabileasc cu certitudine diagnosticul pe baza examenului micologic. Microscopia direct examineaz scuamele sau firele de pr n preparat umed montat ntre lam i lamel cu solutie KOH. Invazia prului este imparit n 3 tipuri. Locul formarii artroconidiilor (corpi formatori de spori) clasific speciile cauzatoare ale infeciei astfel: -speciile ectotrix: conidiile se formeaz la exteriorul inveliului prului. Cuticula este distrus iar zonele afectate arat fluorescen verde-galben la lampa Wood. Este cauzat de Microsporum canis, M. distortum, M. ferrugineum, M. audouinii. -speciile endotrix: conidiile se formeaz n nveliul prului, fiecare fiind plin de spori i hife;

cuticula nu este afectat iar prul nu prezint fluorescen la lampa Wood; este cauzat de speciile de Trichophyton. Microsporum canis M. audouini Tricophyton rubrum Figura 12. Aspect microscopic al unor ageni etilogici pentru tinea. Figura 13: Dermatofitoze- aspect microscopic. Figura 14: Epidermophyton floccosum: aspectul microscopic al ciupercii i aspectul macroscopic al infeciei Factorii de risc pentru tinea cuprind: -condiii de umezeal, bile comunale, -status imunocompromis, sindrom Cushing -atopie, predispoziie genetic, activiti care presupun contactul pielii. a b c d Figura 15. Aspecte structurale la fungi: a, b- conidii cu conidiofori; c- miceliu septat, dAspergillus fumigatus. Aspergillus flavus Aspergillus niger Aspergillus ochraceous Aspergilom Figura 14. Aspecte structurale diferite specii de fungi i infecie Genul Aspergillus este unul din cele mai bogate i mai raspndite genuri din natur. Unele specii sunt duntoare omului, animalelor i plantelor, altele sunt folositoare fiind utilizatela producerea unor enzime, acizi organici, pigmeni, antibiotice, diverse buturi din orez, brnzeturi i altele. Aspergillus prezint hife ramificate, incolore sau colorate n nuane deschise i numai la cateva specii hifele sunt colorate n brun sau de alta culoare. Conidioforii sunt lungi cu perete neted de culoare brun inchis. Sterigmele sunt uniseriate si sunt dispuse paralel cu axul conidioforului. Conidiile sunt sferice dispuse n lanuri. Aspergillus fumigatus este una din cele mai comune specii de Aspergillus care cauzeaza boli la oamenii cu un sistem imunitar slbit. Se poate gsi aproape oriunde n mediul nconjurator n special n materiile organice n descompunere. Are un genom stabil, fr cicluri sexuale cunoscute; se reproduce prin formarea sporilor care sunt eliberai n mediul nconjurtor. Se izoleaz pe medii uzuale, la temperatura de 25C i spre deosebire de alte specii de Aspergillus el este termofil (se dezolta bine la 48C ). Este capabil s se dezvolte la temperatura corpului uman; sporii sunt inhalai de aproape toata populaia i n mod normal eliminai rapid de catre sistemul imunitar. Este agentul cauzal al diverselor aspergiloze intalnite la om cu localizari diverse: pulmonare, nazale, oculare, cerebrale,osoase, cardiovasculare si viscerale. n aspergiloza pulmonar simptomele pot include: febra, slbiciune general, dureri de piept, pierderi de greutate, snge n urina, linii roii subiri sau vase de snge sparte sub unghii. Alternaria alternata este un mucegai de interior (se dezvolta n spaiile nchise), destul de comun. Intr-un studiu efectuat a fost gsit n 87% din casele examinate. Este considerat unul dintre cele mai importani alergeni; Alternaria alternata a fost implicat n cazurile de alergie la persoanele care au fost expuse la lemn, ori rumegu de lemn, de asemenea cauzeaz pete maronii pe plante. CURS VI Candidoza i actinomicoza Candidoza bucal este determinat cel mai frecvent de Candida albicans, dar pot fi implicate i alte genuri precum Candida tropicalis, Candida krusei, Candida parapsilosis sau Candida glabrata. Inmulirea acestei ciuperci este controlat de o serie de bacterii prezente la nivelul mucoasei bucale. Apariia unei noi bacterii la nivelul gurii ce rupe echilibrul dintre

microorganismele deja prezente aici, va permite ciupercii s se inmueasca n mod necontrolat. Candidoza bucal este mai frecvent la nou-nascui, sugari i batrni. Unele medicamente permit ciupercilor s se nmuleasca necontrolat: - antibioticele, n special cele cu spectru larg (de exemplu, tetraciclina); - contraceptive orale (pilulele); - medicamente ce scad capacitatea de aprare a organismului precum corticosteroizii. Modul de transmitere a ciupercii ce determina candidoza bucal difer n funcie de vrst. a b c Figura 16. Candida albicans: agent etiologic (a-MO, b-ME) i aspect al infeciei n candidoza bucal (c). Candidoza bucal, n forma sa uoar, poate ramne asimptomatic. In formele medii sau severe apar simptomele. La sugari - pete (depozite) de culoare alb localizate la nivelul gurii i pe limba cu aspect brnzos. Candidoza bucal poate fi confundata cu depozitele de lapte ce raman dupa alaptare. Aceste pete alb-branzoase sunt aderente la mucoasa si nu pot fi indepartate cu usurinta. Daca sunt frecate, pot sangera - limba si gura devin dureroase si pot apare dificultati la inghitire; - scderea apetitului: sugarul poate refuza masa, mama confundnd uor acest simptom cu starea de saietate (lipsa foamei) a copilului. In aceste conditii, sugarul poate deveni agitat; - eritemul fesier: apare atunci cand infecia micotic se extinde si la nivel intestinal, ciuperca fiind prezenta n scaunul sugarului; - mameloane dureroase i eritematoase (roii) la mam: candidoza bucal a sugarului poate trece neobservat pn n momentul n care mameloanele mamei devin roii i dureroase, n special n timpul sau dup alptare. La aduli - senzaie de arsur la nivelul gurii i a gtului (de obicei acestea sunt simptome incipiente); - pete albe aderente de mucoasa gurii i a limbii. esutul din jurul acestor depozite albicioase este rou i dureros. Daca este frecat (n timpul periajului dinilor, de exemplu) poate sngera; - apariia unui gust neplcut sau a dificultilor de a gusta alimentele. Dac infecia micotic nu este tratat sau nu se remite spontan exist riscul ca aceasta s afecteze i alte organe: la nivelul gatului (esofagului), a vaginului sau a pielii. Pentru a preveni apariia candidozei bucale ar trebui urmate recomandarile de mai jos: - meninerea unei igiene orale riguroase, aceasta implicnd perierea dinilor, curarea acestora cu a dentar i folosirea unei ape de gur antiseptice zilnic. Daca pacientul a prezentat n antecedente o infecie micotica a gurii, se recomanda schimbarea periuei de dinti; - splarea minilor; - dac se foloseste un antibiotic lichid se recomand cltirea gurii cu ap imediat dup administrarea acestuia; - tratarea afeciunilor medicale ce favorizeaza apariia candidozei, precum diabetul zaharat, neoplasmele sau HIV; - folosirea unui spacer pentru a administra corticosteroizii inhalatori, se recomanda cltirea gurii cu ap dup fiecare administrare; - la pacienii cu SIDA se recomand clatirea zilnic a gurii cu o soluie antiseptic. Figura 17. Mecanismul infeciei n aspergiloza pulmonar: Aerosoli cu conidii de Aspergillus fumigatus inhalai ajung n alveole unde, in mod normal sunt eleiminate de macrofagele alveolare i PMN. Imunitatea sczut perimte germinarea conidiei i invazia. A fost semnalat de asemenea invazia direct a epiteliului ciliat.

Figura 18. Mecanismul infeciei n candidoz: Candida albicans traverseaz microvilii direct sau prin germinaie i ajunge, prin intermediul circulaiei la organe unde se localizeaz de obicei n cortex unde formeaz pseudohife. Normal sunt atacate i eliminate de mononucleare i PMN. Factorii virulenei (adezinele, fenotipuri variabile, proteinele antioxidante sau enzimele invasive) favorizeaz invazia n organism. Candidoza genital este dat tot de Candida albicans. La femei: - vulvo-vaginita - inflamaie a vulvei i a vaginului (vezi anatomia feminina) - aparitia unei scurgeri (n cantitate mare) alb-cremoas, urt mirositoare. Ca la majoritatea infectiilor apare i o mancrime jenant, senzaii de durere sub forma de arsur fr o localizare precis. De obicei se asociaz i cu infecie la nivelul aparatului urinar determinnd dureri la miciune (urinare). - netratat - se poate extinde, de la o simpl vulvo-vaginit, pn la nivelul ntregului perineu (zona dintre picioare), la nivelul stinghiilor, coapselor, zona anusului. In timp mucoasa vaginal sufera un proces de atrofie determinnd dureri continui. La brbai - balanita sau balanopostita - inflamatia glandului i a antului dintre gland i prepu - se manifest mai sever cu aparitia unor bubie cu puroi care se pot sparge sau se usca; n unele cazuri apare i o pseudomembrana alb-glbuie. Apar senzaii intense de mncrime local, dureri sub forma de arsur.- netratat - se extinde ajungand pe scrot i zona stinghiilor. La ambele sexe se poate manifesta doar prin atingere urinar - la nivelul uretrei scurgere abundent / redus de puroi, cu urini tulburi, dureri la miciune, miciuni dese, prurit. Este definit i termenul de candidoza conjugal cnd cei doi parteneri sexuali au o candidoz genito-urinar care se manifest (uneori femeia poate purta fr nici o manifestare o infecie cu Candida). Tratament - dupa un examen la un medic specialist care a indicat i obinut rezultatele unui examen microscopic ce pune n eviden ciuperca, tratamentul se poate ncepe cu o gama foarte larga de antimicotice: Amfotericina B, Nistatin, Natamicina, Terbinafina, Itraconazol, Fluconazol, Butoconazol, Clotrimazol, Ketoconazol, Flucitozina, Ciclopiroxolamina, etc. Tratamentul se efectueaz concomitent la ambii parteneri sexuali. Tratamentul cu antimicotice trebuie susinut i de o foarte bun igien local prin splturi zilnice (chiar de mai multe ori pe zi) cu spunuri care sunt neutre sau bazice, splturi n care s-a dizolvat bicarbonat de sodiu (chiar din cel alimentar - 2 - 3 linguri la un lighena de ap), soluii antiseptice pentru splturi vaginale din comer. Actinomicoza este o boal parazitar cutanat (dermatomicoz) sau visceral (visceromicoz), provocat de microorganisme (Actinomyces ex. A. israelii, Actinobacillus), comun omului i animalelor (n special a bovinelor, dar care apare i la cai, porci, cini i pisici). Se manifest pe piele mai ales n regiunea capului, n jurul cavitii bucale i a gtului sau, mai rar, la nivelul organelor (plmni, creier, inim, intestin, amigdale, mucoase bucale, glande salivare, etc) prin apariia unor nodoziti subcutanate. Cel mai frecvent, infecia se localizeaz la nivelul maxilarului inferior. Nodozitile sunt dure la nceput, apoi se nmoaie i excret puroi cu granule galbene (puroiul conine filamentele i sporii microorganismului parazitar). Limba se umfl i se rigidizeaz (limb de lemn). Figura 19. Infecia cu actinomicete (Actinomyces naeslundii- stnga). Actinomicetele, agenii etiologi ai actinomicozei se gasesc n mod normal n flora bacterian a cavitii bucale i mult mai puin n cea a tractului gastrointestinal sau genital feminin. Aceste microorganisme nu sunt virulente i nu pot determina o boala clinic manifest

dac imunitatea gazdei este n parametri normali. Ins, dac n mucoasa bucal apar mici leziuni iar esutul i pierde integritatea i exist i fragmente tisulare devitalizate, bacteria devine capabil s invadeze structurile profunde i s disemineze n organism, producnd afeciunea cunoscut sub numele de actinomicoz. Dei actinomicetele sunt izolate frecvent din abcese, boala este considerat a fi plurimicrobian, deoarece n unele cazuri pot fi identificate pn la 10 tipuri diferite de bacteriidin produsele microbiologice recoltate. Acestea sunt considerate bacterii nsotioare, care nu pot determina singure boala dar care sporesc considerabil patogenitatea actinomicetelor, participand la stimularea secretiei de toxine si de enzime care pot inhiba raspunsul imun al gazdei. In plus, se pare ca ele cresc si capacitatea de invazie a actinomicetelor in sine. Unele actinomicete, considerate azi a fi bacterii gram-pozitive, care colonizeaz cavitatea bucal (Actinomyces naeslundii, Actinomyces radicidentis), produc afeciuni stomatologice i halen (miros urt al gurii). Infeciile sunt mai frecvente la persoanele care vin n contact cu animalele infestate. Este discutat i foarte probabil posibilitatea infestrii prin resturile celulozice agricole (paie). n ceea ce privete speciile de microflor, nmulirea lor masiv are loc mai ales atunci cnd imunitatea este sczut. Actinomicoza pulmonar este o infecie bacterian a plamnului, ce poate avea caracter subacut sau cronic. Afeciunea se extinde constant n esutul pulmonar, determinand o stare permanent de inflamaie granulomatoas, precum i formarea a numeroase abcese pulmonare. In unele cazuri, actinomicoza pulmonar poate fi insoita si de alte localizri ale infectiei, cum ar fi regiunea cervicofacial, abdominal sau chiar pelvin (n special la femei). O dat ce infecia incepe sa se produc, iar leziunea iniial a permis actinomicetelor s patrund profund in tesuturi, sistemul imun se activeaza i organismul ncearc s lupte mpotriva bacteriilor. Reacia inflamatorie are drept rezultat apariia supuraiilor, granuloamelor i n final a fibrozei. Infecia se rspndete prin contiguitate, nerespectnd planurile anatomice i invadnd din aproape n aproape esuturile pe care le ntalnete. Cele mai frecvente simptome pe care le acuz pacienii cu actinomicoz pulmonar sunt: - Durere toracic la inspir profund; - Tuse cu expectoraie sangvinolent sau franc hemoragic; - Febr, frisoane; - Alterarea starii generale; - Letargie, astenie, oboseal; - Anorexie; - Transpiraii nocturne; - Dispnee; - Scdere ponderal neintenional. Dac actinomicoza pulmonar are i alte complicaii infecioase (actinomicoza diseminat), pacienii pot prezenta: modificri ale tranzitului intestinal, disconfort abdominal difuz, greuri, vrsturi (n diseminrile abdominale); disconfort abdominal, scurgeri sau sngerari vaginale anormale (n cazul actinomicozei pelvine ). Actinomicoza este o afeciune ce poate sa apar oriunde, fiind mai frecvent n comunitile cu un statut socioeconomic mai precar sau n cazul pacienilor cu o igiena deficitar. Datorit tratamentului antibiotic, prognosticul bolii este favorabil, cu condiia ca acesta s fie instituit la timp.