1. 2. 3. 4.

ENZIME Planul temei: Caracteristica general a enzimelor. Apoenzime i cofactori enzimatici. Organizarea structural a enzimelor. Specificitatea enzimelor.

Particularitile catalizei enzimatice. 5. 6. Cinetica reaciilor enzimatice. Clasificarea i nomenclatura enzimelor. I. Caracteristica general a enzimelor

Definiia enzimei s-a conturat atunci, cnd s-a observat c n sistemele biologice au loc procese catalitice, survenite din extracte de orz germinal ce realizeaz hidroliza amidonului. Astfel, n 1833 a fost obinut diastaza (sub form de pulbere alb). I. Caracteristica general a enzimelor

Dac n 1920 erau estimate 10 15 enzime prin observarea efectului aciunii lor, astzi sunt caracterizate parial peste 2 000 enzime, dintre care circa 500 au fost obinute sub forma unor preparate perfect purificate i studiate din punct de vedere fizico-chimic i biologic. I. Caracteristica general a enzimelor

Enzimele sunt substane care catalizeaz reaciile biologice din organism. Ele au un rol esenial n biosinteza i degradarea substanelor din materia vie. Se gsesc n toate organismele vegetale, animale i microorganisme. Toate transformrile biochimice n esuturi i celule sunt posibile doar prin aciunea enzimelor, care se mai numesc i biocatalizatori. I. Caracteristica general a enzimelor

Enzimele sunt produse numai de organismele vii i i pot manifesta activitatea enzimatic att n interiorul, ct i n afara organismului. Substana asupra creia acioneaz enzimele poart numele de substrat. I. Caracteristica general a enzimelor

Exoenzimele, dup formarea lor n celule, sunt eliminate n lichidele din organism, unde i exercit activitatea catalitic. Astfel de enzime sunt ntlnite n lichidele interstiiale, din diferite caviti, din seva elaborat etc. Endoenzimele, numite i enzime intracelulare, i exercit aciunea n celulele n care s-au format. Ele sunt de dou feluri: lioenzime, legate mai slab n celul i desmoenzime, legate puternic. I. Caracteristica general a enzimelor

Formarea i degradarea enzimelor n organism se realizeaz cu o vitez mai mare dect se produce biosinteza i degradarea proteinelor cu rol structural. Enzimele nu s-au putut sintetiza pn n prezent n laborator, dar s-a reuit s se stabileasc succesiunea aminoacizilor din lanul polipeptidic al unor enzime. II. Apoenzime i cofactori enzimatici

Unele enzime, care reprezint proteine omogene (proteine simple) posed proprieti catalitice exercitate n exclusivitate numai de componenta proteic pe care este localizat situsul catalitic.

II. Apoenzime i cofactori enzimatici

La enzimele complexe, proprietile catalitice rezult din interaciunea i cooperarea dintre componenta proteic i anumite macromolecule sau ioni metalici denumii cofactori. Astfel, aceste enzime sunt constituite dintr-o component proteic purttoare a situsului catalitic, denumit apoenzim i o component neproteic denumit cofactor, care se localizeaz la nivelul centrului catalitic. II. Apoenzime i cofactori enzimatici

Apoenzima i cofactorul inactive catalitic ca entiti separate formeaz un complex molecular enzim cofactor denumit n terminologia clasic holoenzim. Inactiv Inactiv Complex activ

III. Organizarea structural a enzimelor

Enzimele reprezint un edificiu macromolecular complex determinat de nivelurile de organizare structural ale proteinelor.

Astfel, enzimele posed n structura lor anumite zone, denumite situsuri. III. Organizarea structural a enzimelor

Situsul catalitic o zon specific i delimitat, constituit dintr-un numr mic de radicali de aminoacizi, care formeaz o geometrie spaial perfect ordonat i structural asimetric, la nivelul creia se exercit proprietatea catalitic a enzimei prin capacitatea de a interaciona cu moleculele de substrat asupra crora acioneaz. E enzim SC situs catalitic S substrat [ES] complex enzim-substrat III. Organizarea structural a enzimelor III. Organizarea structural a enzimelor

Caracteristicile enzimelor allosterice: Au ca i toate enzimele, centru catalitic, unde se fixeaz i se modific substratul, dar mai posed un alt centru, care are o poziie spaial pentru fixarea metabolitului reglator, numit efector sau modulator. Acest centru e specific pentru fiecare modulator. Moleculele enzimelor allolosterice sunt mai mari, mai complexe i formate din dou subuniti identice i simetrice. III. Organizarea structural a enzimelor

Situsul allosteric existent pe lng situsul catalitic, la enzimele allosterice. Prin internediul situsului allosteric la enzimele reglatoare (allosterice) se leag un efector allosteric (inductor sau inhibitor). De obicei enzimele allosterice sunt constituite din 2 sau mai multe subuniti.

III. Organizarea structural a enzimelor

EA efector allosteric SA situs allosteric E enzim SC situs catalitic S - substrat III. Organizarea structural a enzimelor

Sunt dou tipuri de enzime allosterice: homotrope unde modulatorul i substratul constituie aceeai substan; heteroptrope enzimele sunt reglate de modulatori, care dup structur difer de substrat. III. Organizarea structural a enzimelor

n funcie de organizarea lor structural ca molecule proteice, enzimele se ncadreaz n urmtoarele grupe principale: enzime monomere, enzime oligomere, izoenzime, complexe (sisteme) enzimatice. III. Organizarea structural a enzimelor

Enzime monomere structuri enzimatice constituite dintr-un singur lan polipeptidic, n care este inclus situsul catalitic (ex.: ribonucleaza, tripsina, pepsina etc.). Ele au mase moleculare mici. III. Organizarea structural a enzimelor

Enzime oligomere sunt agregate moleculare constituite din dou sau mai multe subuniti (protomeri) asociate ntr-o structur compact. (Ex.: aldolaza, lactatdehidrogenaza etc.). III. Organizarea structural a enzimelor

Izoenzime configuraii spaiale diferite ale uneia i aceleiai enzime ce se deosebesc printr-o serie de proprieti fizico-chimice, dar cu aceeai specificitate de substrat. III. Organizarea structural a enzimelor

Sisteme (complexe) enzimatice edificiu polifuncional constituit dintr-un numr de molecule de enzime intim asociate prin interaciuni necovalente, care particip mpreun ntr-un ir de reacii nlnuite. ntr-o asemenea secven, produsul de reacie catalizat de prima enzim a sistemului multienzimatic devine substratul enzimei urmtoare . a. m. d. pn la obinerea produsului final de reacie. IV. Specificitatea enzimelor

Enzimele posed o specificitate de aciune foarte nalt. Astfel, datorit specificitii de substrat, o enzim are capacitatea de a selecta doar un substrat sau un numr limitat de substrate asupra crora acioneaz, condiionnd o reacie biochimic bine definit. IV. Specificitatea enzimelor

Specificitate de substrat>Specificitate de aciune IV. Specificitatea enzimelor

Specificitatea de substrat reprezint capacitatea enzimei de a alege substratul asupra cruia urmeaz s acioneze. IV. Specificitatea enzimelor

Specificitatea absolut enzima acioneaz numai asupra unui substrat. De exemplu, ureaza acioneaz numai asupra substratului ureea (o descompune n amoniac i bioxid de carbon), succinatdehidrogenaza asupra acidului succinic.

IV. Specificitatea enzimelor stereospecificitatea enzima acioneaz numai asupra unuia din izomerii substratului, ca de exemplu, izomerii optici dextrogiri sau levogiri (D sau L); specificitatea geometric enzima acioneaz asupra izomerilor cis-trans (exemplu, fumaraza catalizeaz adiia unei molecule de ap numai la izomerul trans al acidului fumaric). IV. Specificitatea enzimelor

Specificitatea relativ (se mai numete i specificitate relativ de grup) enzima acioneaz asupra unui grup de substrat, care au o constituie chimic asemntoare. Totui numrul de substrate este limitat. De exemplu, hexokinaza, catalizeaz fosforilarea n prezena ATP a unei serii de hexoze ca substrate. IV. Specificitatea enzimelor

Specificitatea de aciune Se mai numete i specificitatea de reacie, care reprezint proprietatea unor enzime de a cataliza un anumit tip de reacie ce st la baza clasificrii enzimelor. De exemplu, enzimele proteolitice catalizeaz hidroliza legturilor peptidice a mai multor substrate de natur proteic (polipeptidic). IV. Specificitatea enzimelor

Compatibilitatea dintre enzim (E) i substratul su de reacie (S) se realizeaz dup principiul lact - cheie. V. Particularitile catalizei enzimatice

n celulele organismelor vii decurg sute de reacii chimice n cadrul crora are loc transformarea substanelor organice cu participarea nemijlocit a catalizatorilor biologici enzimele. V. Particularitile catalizei enzimatice

1. Enzimele sunt catalizatori extrem de puternici: reacia enzimatic decurge de 10 6 1012 ori mai repede dect o reacie spontan necatalizat ce are loc n soluie apoas. n organismele vii, n prezena enzimelor timp de secunde, iar uneori i a prilor de secunde, au loc reacii succesive complicate, pentru efectuarea crora ntr-un laborator de chimie ar fi nevoie de un timp foarte ndelungat. V. Particularitile catalizei enzimatice

2. Reaciile catalizate de enzime, spre deosebire de cele chimice, efectuate n condiii de laborator, au loc fr formare de produse secundare i cu un randament de aproximativ 100%. V. Particularitile catalizei enzimatice

3. Majoritatea enzimele sunt n stare s acioneze n condiii relativ blnde: temperatur moderat (25 - 40C), presiune normal, pH = 7,0 7,5. V. Particularitile catalizei enzimatice

4. Enzimele posed o specificitate pronunat fa de reacia ce o catalizeaz i fa de substraturi. Datorit acestui fapt n celula vie pot avea loc concomitent o mulime de reacii chimice. Unele dintre ele duc la scindarea substanelor organice complexe i formarea unor substane mai simple nsoite de eliberarea de energie, altele (de exemplu, biosinteza polimerilor biologici), nsoite de consumare de energie. V. Particularitile catalizei enzimatice

5. Reaciile chimice catalizate de enzime, care decurg n celul, sunt organizate n sisteme enzimatice, alctuite din cteva reacii consecutive (de la 2 pn la 20 i mai multe). Multe sisteme enzimatice sunt legate cu anumite structuri celulare (de exemplu, enzimele oxidrii biologice funcioneaz n componena mitocondriilor). V. Particularitile catalizei enzimatice

6. Reaciile metabolice, catalizate de enzime au o reglare strict: se formeaz attea feluri de molecule simple de cte este necesar pentru biosinteza diferitor substane organice. Sistemele biologice sunt n stare s regleze sinteza catalizatorilor proprii enzimelor. Autoreglarea le permite celulelor vii s susin o anumit stare staionar chiar i la schimbarea considerabil a mediului ambiant i s modifice aparatul enzimatic, ca rspuns la schimbarea brusc a condiiilor mediului nconjurtor. VI. Cinetica reaciilor enzimatice

Cinetica chimic respectiv cinetica enzimatic, studiaz procesele chimice sub raportul vitezelor de reacie, respectiv al evoluiei n timp a transformrilor caracteristice unei reacii chimice. De asemenea, cinetica enzimatic include i factorii care influeneaz reaciile enzimatice. VI. Cinetica reaciilor enzimatice

Deci, reaciile catalizate de enzime se supun regulilor generale ale cineticii chimice, dar mai posed o particularitate saturarea de substrat. VI. Cinetica reaciilor enzimatice

Michaelis i Menten au elaborat o teorie general a cineticii pentru urmtoarea ecuaie de vitez: VI. Cinetica reaciilor enzimatice

Cinetica reaciilor enzimatice, respectiv viteza de reacie (V) este dependent de o serie de factori i anume: VI. Cinetica reaciilor enzimatice

2. Concentraia enzimei. n condiii n care concentraia substratului este constant, viteza de reacie iniial (V) este direct proporional cu concentraiile crescnde ale enzimei, ntre anumite limite. La concentraii crescute de enzim (E), viteza de reacie devine constant. VI. Cinetica reaciilor enzimatice

3. Temperatura. Datorit termolabilitii lor, activitatea enzimatic se manifest numai ntre anumite limite de temperatur. Temperatura la care enzima manifest activitate maxim n aceleai alte condiii se numete temperatur optim a activitii enzimatice. VI. Cinetica reaciilor enzimatice VI. Cinetica reaciilor enzimatice

n stare uscat enzimele sunt mai rezistente la temperaturi (de exemplu, enzimele seminelor). Temperatura acioneaz asupra: degradrii enzimelor; vitezei de disociere a complexului [ ES ], cu formare de produse (K+2); strii de ionizare a tuturor complexelor reaciei, inclusiv a enzimei; legrii enzimei cu cofactorii sau inhibitorii; afinitii enzimelor fa de substrat; legrii coenzimei i a altor cofactori. VI. Cinetica reaciilor enzimatice

Influena vitezei reaciei enzimatice poate fi caracterizat dup ecuaia empiric a lui Arrenius: VI. Cinetica reaciilor enzimatice

Pentru a caracteriza influena t asupra vitezei anumitei reacii chimice, se utilizeaz coeficientul termic Q10, care arat de cte ori se mrete viteza acestei reacii la majorarea temperaturii cu 10C: Un criteriu foarte caracteristic influenei temperaturii asupra enzimei, este termolabilitatea i termostabilitatea enzimei. VI. Cinetica reaciilor enzimatice

4. Efectul pH-ului. Activitatea enzimatic este dependent de pH-ul mediului n care se exercit aciunea. pH optim activitatea enzimatic maxim.

pH limit limita de aciune enzimatic. VI. Cinetica reaciilor enzimatice

pH-ul are influen asupra: sarcinii diferitor grupri funcionale ale Aa din apoenzim, iar de aici i a strii de ionizare a ntregii molecule enzimatice; stabilitatea enzimelor i a vitezei maxime de reacie etc.

pH-ul optim la reaciile reversibile poate fi diferit. De exemplu: VI. Cinetica reaciilor enzimatice

Influena efectorilor. Efectori enzimatici sunt substane de natur chimic diferit care acioneaz asupra enzimelor, modificnd cinetica reaciilor enzimatice. Dup modul de aciune a lor, efectorii enzimatici se clasific n: Activatorii influeneaz pozitiv activitatea enzimatic, pe care o favorizeaz sau stimuleaz. Activatorii enzimatici i pot exercita aciunea pe diferite ci, n funcie de natura lor, astfel: diferii ioni Mg2+ activeaz fosfatazele; activatori, inhibitori i allosterici. VI. Cinetica reaciilor enzimatice

Mn2+ i Co2+ peptidazele; Zn2+ dehidrogenazele; Cl amilaza; Etc. Inhibitori substane ce provoac diminuarea specific a activitii enzimei. Inhibitorii fixeaz gruprile funcionale ale poriunilor catalitice i de contact ale centrului activ al enzimei. Deci, n urma inhibiiei nu are loc formarea complexului [ ES ]. Din inhibitori fac parte medicamentele, toxinele, unele produse metabolice etc. Se deosebesc: 1. inhibitori nespecifici de exemplu, metalele grele, acidul tricloracetic, taninele etc. 2. inhibitori specifici de exemplu, cianurile sunt inhibitori specifici pentru enzimele ce conin Fe, Cu, Co. VI. Cinetica reaciilor enzimatice substane cu caracter reductor acioneaz prin protejarea gruprilor ( SH ) active de la situsul catalitic al enzimelor. De exemplu, cisteina, glutationul redus ( G SH ), etc. hormonii; coenzime; etc. VI. Cinetica reaciilor enzimatice

3. inhibitori ireversibili de exemplu, NaF inhib ireversibil fosfatazele (dar nu alte enzime). 4. inhibitori reversibili sunt metabolii intermediari sau analogii lor de structur. inhibitori competitivi se leag cu aceleai grupri funcionale din centrul activ al E cu care interacioneaz i substratul (amgete enzima). inhibitori necompetitivi se leag nu de gruprile funcionale ale E, deoarece ei nu se aseamn cu S. Deseori se leag de centrul allosteric. De exemplu, metalele grele sunt inhibitori nu de E, dar de [ ES ] i se formeaz [ ESI ].

Inhibiia poate fi indus i de produsele finale ale reaciei sau de excesul de substrat. VII. Clasificarea i nomenclatura enzimelor

Au fost adoptate 2 nomenclaturi paralele: sistematic include denumirile chimice raionale pentru substratul enzimei date. Indic caracterul precis al reaciei catalizate avnd denumirea substratului + sfritul az.

De exemplu, succinatdehidrogenaza, malathidrataza etc. recomandat (de lucru ) folosit n practic. De ex. pepsina, amilaza etc. VII. Clasificarea i nomenclatura enzimelor

Toate enzimele au fost mprite n 6 clase, i respectiv subclasele. Fiecare enzim are codul su format din 4 cifre: I clasa; II subclasa; III subsubclasa; IV numrul de ordine n subsubclas. VII. Clasificarea i nomenclatura enzimelor

Clasele de enzime sunt: Clasa I. Oxidoreductaze (14 subclase) catalizeaz reaciile de oxido-reducere. Acioneaz asupra urmtoarelor grupe: CH OH; CH CH3; CH NH2.

Exemple: alcooldehidrogenaza; ascorbatoxidaza; catalaza; peroxidaza etc. VII. Clasificarea i nomenclatura enzimelor ( COH ),

Clasa II. Transferaze (8 subclase) catalizeaz reaciile de transfer intermolecular al diferitor grupuri chimice i resturi. Ele transfer aa grupuri ca: gr. metilice ( CH3 ), formilice carboxilice ( COOH ); resturi de aldehide, cetone, acizi; grupri ce conin N2, P, S etc. Exemple: hexokinaze; aminotransferaze; carboxiltransferaze; aciltransferaze etc. VII. Clasificarea i nomenclatura enzimelor

Clasa III. Hidrolaze (9 subclase) scindeaz hidrolitic legturile intramoleculare. Hidrolazele scindeaz urmtoarele legturi: glicozidice, peptidice, C N, C C, P N etc. Exemple: amilaze; dipeptidaze; ATP-aza; pepsina etc. VII. Clasificarea i nomenclatura enzimelor

Clasa IV. Liaze (5 subclase) scindeaz hidrolitic i leag grupele la legturi duble, precum i reaciile de nlturare a acestor grupe. Ele pot scinda legturile: C C, C O, C N, C S. Exemple: decarboxilaza acidului piruvic; aspartaza; etc. VII. Clasificarea i nomenclatura enzimelor

Clasa V. Izomeraze ( 5 subclase) catalizeaz reaciile de izomerizare. Acioneaz asupra: aminoacizilor, derivailor aminoacizilor, hidroxiacizilor etc. Exemple: fosfopentozoizomeraze; fosfoglucoizomeraze etc. VII. Clasificarea i nomenclatura enzimelor

Clasa VI. Ligaze (sintetaze) (4 subclase) catalizeaz reacii de legare a 2 molecule nsoite de scindarea legturilor pirofosforice n molecula ATP-ului sau a unui nucleozidtrifosfat analogic. Ligazele formeaz urmtoarele legturi: C O; C S; C N; C C. Exemple: acetil CoA-sintetaza; peptidsintetaze; amidsintetaze etc.