Sunteți pe pagina 1din 43

HISTOLOGIE

Lucrare practic 1

HISTOLOGIA

tiina care se ocup cu studiul structurii microscopice a celulelor, esuturilor i organelor Compartimente:
Citologia Histologia general: studiul esuturilor Histologia special: studiul organelor: org. tubulo

cavitare, org. parenchimatoase

Legturi:
Biologia celular Histopatologia

HISTOLOGIA

Ramuri:
Histologia de diagnostic Obine continuu date privitoare la structura i funcia unui anumit esut sau organ

Histologia de cercetare Evideniaz i studiaz: - o categorie celular / tisular nedescoperit nc - modul de comportament al celulelor i esuturilor n condiii fiziologice i patologice neexplorate

HISTOLOGIA
ESUTURILE Structuri supracelulare alctuite din celule unite ntre ele printr-o substan intercelular Celulele ndeplinesc n organism aceeai funcie sau acelai grup de funcii. 4 categorii de esuturi: epitelial, conjunctiv, muscular, nervos esuturile alctuiesc ORGANE

Metode de studiere a celulelor i esuturilor

Metode utilizate n practica clinic Metode utilizate n cercetare

I. Metode utilizate n practica clinic

Coloraia uzual Hematoxilin-eozin Coloraiile speciale Examenul microscopic extemporaneu Coloraiile imunohistochimice

Preparatele microscopice

1. 2. 3.

Obiectele pregtite pentru a fi examinate la aparate optice mritoare n vederea studierii structurii lor. Componentele: Obiectul Suportul: lama Lamela Sunt de 2 tipuri: extemporanee i permanente

Preparatul microscopic I. Recoltarea

Biopsie Necropsie De la animale

Preparatul microscopic Recoltarea

Incizia Excizia Rezecia Puncia biopsie

Preparatul microscopic II. Fixarea


Piesa e introdus n fixatori care previn degradarea enzimatic (autoliza) i pstreaz intact structura tridimensional a esutului. Formaldehida

Fixatorii acioneaz asupra proteinelor din esuturi prin 3 mecanisme: denaturare, coagulare i precipitare

Preparatul microscopic Fixarea


Aspectul unui fragment de esut dup fixare

Preparatul microscopic III. Splarea

ndeprteaz excesul de fixator Se face cu ap sau alcool (deshidratarea)

Decalcificarea
Preparatele de os sau dinte Se face cu acizi i rini schimbtoare de ioni sau prin electroliz

Preparatul microscopic IV. Includerea n parafin

Piesa e mbibat i nglobat ntr-o substan solidificabil, denumit mas de includere. Piesa devine rigid i poate fi secionat n felii de ordinul m (5m).

Aceast secionare este necesar pentru a permite luminii s treac prin preparatul microscopic i apoi s ajung la ochiul obsevatorului, care va examina imaginea microscopic a esutului

Preparatul microscopic Includerea n parafin


Etape: 1. Deshidratarea- introducerea n bi de alcool de concentraii crescnde alcoolul va nlocui apa din esut; 2. Clarificarea cu solveni organici (xilen, toluen) miscibili att n alcool ct i n parafin, vor scoate alcoolul din esut 3. mbibarea cu parafin: parafina topit intr n celule esutul va fi complet inclus n parafina care se va ntri i va forma un bloc solid ce conine esutul; 4. Includerea propriu-zis

Preparatul microscopic Includerea n parafin

esuturi incluse n blocuri de parafin

Preparatul microscopic V. Secionarea

Preparatul microscopic Secionarea

Evideniaz elementele structurale Coloranii histologici se fixeaz pe anumite componente structurale Colorani artificiali: derivai din hidrocarburi aromatice i, n funcie de natura cromoforului, pot fi: 1. Bazici: albastrul de metilen, albastrul de toluidin, fuxina bazic 2. Acizi: eozina, fuxina acid, eritrozina, orange G 3. Neutri: eozinatul de azur de metilen 4. Indifereni: Sudan III, Sudan negru, Scharlach Roth Colorani naturali: carminul, hematoxilina, orceina

Preparatul microscopic VI. Colorarea

Preparatul microscopic Colorarea


Bazofilie Acidofilie Neutrofilie Termeni care se refer la afinitatea tinctorial (de coloraie) a diferitelor elemente structurale tisulare fa de baze, acizi sau substane neutre.

Preparatul microscopic Colorarea


Clasificarea coloraiilor 1. Dup electivitate: difuze i elective 2. Dup modul de aciune: directe i indirecte 3. Dup procedeul de executare: progresive i regresive 4. Dup numrul de colorani folosii: simple i combinate: succesive sau simultane Coloraia ortocromatic Coloraia metacromatic

Preparatul microscopic Coloraia HE


Coloraie uzual (95% din lame); e o metod direct, progresiv, combinat, succesiv, ortocromatic. Hematoxilina-colorant bazic- coloreaz n ALBASTRU structurile bazofile: acizii nucleici- ADN-nucleu; ARNribozomi Eozina colorant acid- coloreaz n ROU structurile acidofile sau eozinofile: proteinele n citoplasm i n matricea extracelular

Structurile cu coninut ridicat de substane lipidice (celule adipoase, mielina) rmn optic vide; Mucusul i glicogenul nu se evideniaz n coloraia HE

Preparatul microscopic Coloraia HE


Celulele: funcia biochimic i distribuia elementelor componente. Nucleii Celulele tinere sau/i active metabolic, prezint nucleii eucromi sau hipocromi (eucromatina este palid) i cu nucleolul bine vizibil. Celulele adulte sau mbtrnite, cu activitate metabolic redus, au nuclei hipercromi (heterocromatina inactiv se coloreaz intens bazofil)

Preparatul microscopic Coloraia HE


Citoplasma Celulele care sintetizeaz proteine conin numeroi ribozomi liberi i RER bine dezvoltat i prezint un aspect bazofil al citoplasmei (H coloreaz ARN din ribozomi n albastru) Celulele implicate n transportul de ioni conin numeroase mitocondrii i prezint un aspect eozinofil al citoplasmei (E coloreaz proteinele cationice: citocromii n rou). Fibrele musculare au aspect intens eozinofil datorit fixrii eozinei pe proteinele contractile din miofibrile.

Preparatul microscopic Coloraia HE

Preparatul microscopic Coloraia HE

Preparatul microscopic Coloraii speciale


Tricrom Masson, tricrom Mallory - pune n eviden es. conjuntiv Fibrele de colagen se coloreaz n verde, respectiv albastru

Preparatul microscopic Coloraii speciale


Rezorcin Fuxin Weigert: fibrele elastice sunt colorate n violet nchis Orcein: fibrele elastice sunt colorate n maro nchis

RFW

Orceina

Preparatul microscopic Coloraii speciale


Impregnarea argentic: pune n eviden fibrele de reticulin, neurofibrilele din neuroni i cimentul intercelular n epitelii (negru/maro)

Ficat-impregnare argentic

esut nervos- impregnare argentic

Preparatul microscopic Coloraii speciale


Sudan III, Sudan negru, Scharlach Rothfolosite pentru a pune n eviden lipidele n esuturi, pe care le coloreaz n galben, negru i respectiv rou. !!! Fragmentele de esut nu sunt preparate cu solveni organici, pentru a nu dizolva subst. lipidice.

Preparatul microscopic Coloraii speciale


Coloraia PAS (Periodic Acid Schiff) Coloreaz carbohidraii n roz intens. Evideniaz membrana bazal a epiteliilor.

Preparatul microscopic Coloraii speciale


Acidul osmic - coloreaz n brun/negru substanele lipidice Evideniaz teaca de mielin

Preparatul microscopic Coloraii speciale


Hematoxilina Feric Heidenheim- coloreaz n negru discurile ntunecate ale miofibrilelor i evideniaz aspectul striat al fibrelor musculare.

Preparatul microscopic Coloraii speciale


esutul osos compact lefuit, montat n balsam de Canada !!! Preparat necolorat

Preparatul microscopic VII. Montarea

VIII. Etichetarea

Preparatul microscopic Examenul extemporaneu (la ghea)


Permite un diagnostic rapid (15-20 min), care orienteaz decizia terapeutic chirurgical Frecvent utilizat n chirurgia oncologic Nu are precizia examenului histologic clasic

Preparatul microscopic -examenul extemporaneu-

Imunohistochimia -principiuUtilizeaz principiul antigen-anticorp (Ag-Ac) pentru a identifica prezena/absena unor proteine specifice la nivelul esuturilor.

anticorp secundar (brun) anticorp primar (invizibil) antigen cautat

Imunohistochimia -principiuMetoda direct Metoda indirect

Imunohistochimia -principiu

Metoda imunoperoxidazei: Ac este cuplat cu o enzim (ex. peroxidaza sau fosfataza alcalina) care poate cataliza o reacie chimic cu un substrat cromogenic (ex. DAB - diaminobenzidina) cu formarea unui produs colorat (maro). Distribuia culorii este examinat la MO Metoda imunofluorescenei: Ac este cuplat cu un fluorofor (ex. fluorescein). Preparatul este examinat la MO cu fluorescen.

Imunohistochimia -principiu-

Imunohistochimia
Imunoperoxidaz Imunofluorescen

II. Metode utilizate n cercetare SEM - scanning electron microscopy

TEM - transmision elecron microscopy