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CCLC/hlz
Procedimiento: Material necesario para cada equipo: Gradilla con 12 tubos; 2 pipetas de 1 ml, 2 de 5 ml y 2 de 10 ml; Espectrofotmetros y cubetas. Agua destilada 100 ml Solucin madre: Dicromato de potasio 530 mg/dL, preparar 12 diluciones mezclando con agua hasta un volumen de 5 ml las siguientes cantidades de Dicromato: (30 ml Dicromato/equipo; 35 ml agua) Tubo # Dicromato (ml) Agua (ml) Factor de dilucin Abs. obtenida Abs. calculada 1 0.1 4.9 50 2 0.2 4.8 3 0.5 4.5 4 1 4 5 1.5 3.5 3.33 6 2 3 2.5 7 2.5 2.5 2.0 8 3 2 9 3.5 1.5 10 4 1 11 4.5 0.5 12 5 0
0.05 0.09 0.21 0.40 0.54 0.71 0.83 0.94 1.03 1.03 1.15 1.26 0.03 0.05 0.13 0.25 0.37 0.50 0.63 0.75 0.88 1.00 1.13 1.26 53 106 159 146 212 192 265 224 318 253 371 277 424 278 477 530 308 339
27% 10% 6% 0% -8% -9% -15% -20% -25% -34% -35% -36% % Error relativo Leer a 500 nm ajustando a cero con blanco de agua destilada
CCLC/hlz
1. Construya una grfica de correlacin concentracin de Dicromato (terica) en eje x vs Absorbancia obtenida en eje y. Calcule coeficiente de correlacin r, pendiente e interseccin. Coeficiente de correlacin r 0.98 Pendiente 0.62 Interseccin 32.8
y = 0.6183x + 32.829 R = 0.9648
400 350 300 [ ] K2Cr2O7 Obtenida 250 200 150 100 50 0 0 100
Grfic a1
200
400
500
600
2. Calcule la absorbancia ideal dividiendo la absorbancia de la solucin sin diluir (tubo 12) entre el factor de dilucin (para cada tubo) y trcela en la grfica anterior. Compare la diferencia entre la absorbancia experimental y la ideal.
1.6
Grfic a2
0.8 0.6 0.4 0.2 0 0 0.2 0.4 0.6 Abs. 0.8 1 1.2 1.4
Ideal CCLC/hlz
3. Calcule un factor de calibracin dividiendo la concentracin del tubo 4 entre su Absorbancia. 4. Calcule la concentracin de K2Cr2O7 obtenida multiplicando la lectura de Absorbancia de cada tubo por el factor de calibracin.
40% 30% 20%
10%
% Error relativo
-10%
[ ] K2Cr2O7 Terica
5.
Compare las concentraciones de K2Cr2O7 reales con las obtenidas y calcule el porcentaje de error relativo. Mediante una grfica represente el error relativo (% de error + o -, en eje Y) del fotmetro relacionndolo con la concentracin terica (eje X).
6. Comente los resultados de la prctica. Hay que tener en cuenta que la LINEALIDAD es el intervalo de concentraciones del cromgeno entre las cuales existe una relacin lineal entre Absorbancia y Concentracin. De acuerdo a las graficas anteriores, cuando la concentracin del cromgeno sobrepasa los lmites de linealidad se deja de cumplir la Ley de Beer, convirtindose la recta en una curva. La lectura de la Absorbancia fuera de los lmites de linealidad se traduce en una concentracin falsamente baja de cromgeno, por lo que hay que diluir la muestra para que su concentracin entre en los lmites de la linealidad. El % de error fue mayor fue grande en el extremo de muy baja concentracin y en los ltimos 3 de ms alta concentracin. Este tipo de anlisis nos permiti evaluar el funcionamiento de los espectros habindose observado que es necesario realizar el mantenimiento permanente de los mismos para garantizar la confiabilidad de los equipos, pues la falta de linealidad fotomtrica es el error ms frecuente.
CCLC/hlz
BIBLIOGRAFA CONSULTADA: 1. Control de calidad de instrumentos y equipamientos de laboratorio: Control de Calidad en los 2. 3. 4. 5.
Laboratorios Clnicos, Cap. 11. Murali Dharan. Control de calidad en espectrofotometra UV-Vis: Fernandez Spina, .,Candau Garca, R. Practical Spectrophotometric Standards: Rand, R.N. Clin. Chem. 1969; 15(9); 839-63. Calibration and Monitoring of Spectrometers and Spectrophotometers: Clin. Chem. 25/6, 1013-1017 (1979) Some Sources of Errors and Artifacts in Spectrophotometric Measurements: Ellis, K., Morrison, J. Clin. Chem. 21/6, 776-777 (1976).