INFLAMACIN PEDRO GARCA BARRENO * * Real Academia de Ciencias Exactas, Fsicas y Naturales.

Departamento de Ciruga, Facultad de Medicina, Universidad Complutense. Hospital General Universitario Gregorio Maran. La inflamacin es la respuesta, del sistema inmunolgico de un organismo, al dao causado a sus clulas y tejidos vascularizados por patgenos bacterianos y por cualquier otro agresor de naturaleza biolgica, qumica, fsica o mecnica. Aunque dolorosa, la inflamacin es, normalmente, una respuesta reparadora; un proceso que implica un enorme gasto de energa metablica. En ocasiones, transcurre hacia una situacin crnica que suele dar lugar a una enfermedad degenerativa como artritis, arteriosclerosis o, incluso, cncer. Aunque suele acompaarse de una respuesta generalizada respuesta de fase aguda caracterizada por un cuadro clnico pasajero de sensacin de malestar, fiebre y modificacin del perfil de las protenas y leucocitos circulantes, en ocasiones, la inflamacin aguda local provoca una reaccin orgnica generalizada sndrome de respuesta inflamatoria sistmica que, en una secuencia de reacciones a modo de espiral sin control inflamacin maligna, conduce al fracaso funcional de los diferentes rganos y sistemas fracaso multiorgnico y, tras ello, a la muerte del individuo (Figura 1)

Figura 1. La inflamacin, aunque en principio representa un proceso universal e inespecfico encaminado a restaurar la homeostasis disturbada, puede elegir, segn la causa desencadenante, diferentes escenarios de actuacin para conseguir resultados determinados. 92 Pedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102

En cualquier caso, la respuesta inflamatoria est coordinada por un copioso dispositivo de mediadores que se organizan en complejas redes reguladoras. Para

disecar tal entramado, es til agrupar esas seales en categoras funcionales y distinguir entre inductores y mediadores de la respuesta inflamatoria. Los primeros son seales que inician el proceso; activan sensores especializados que suscitan la produccin de lotes especficos de mediadores. Estos, a su vez, alteran los estados funcionales de clulas, tejidos y rganos que son los efectores de la inflamacin, de manera que permitan su adaptacin primero y reparacin despus, del dao infringido por el inductor (Figura 2).

Figura 2. Una va inflamatoria genrica incluye, secuencialmente, inductores, sensores, mediadores y efectores. Los inductores pueden clasificarse en exgenos y endgenos, y ellos, a su vez, en clases diferentes. Los diferentes inductores operan a travs de vas distintivas. AGE: Advanced-glycation end products, C: Sistema del complemento srico, IgE: Inmunoglobulina E, IL: Interleuquina, NALP: Miembro de la familia NLR (ver: Tabla III), PAMP: Pathogen-Associated Molecular-Pattern, PGE: Prostaglandina E, TLR: Toll-like receptor, TNF: Tumor necrosis factor.

I. BOSQUEJO HISTRICO Para comprender la respuesta inflamatoria, tal como hoy se entiende, es oportuno repasar las races de nuestro conocimiento sobre tal fenmeno. La perspectiva histrica indica que el progreso cientfico no es continuo, y que la ciencia est influida por la personalidad de quienes la hacen avanzar. La historia de la investigacin sobre la inflamacin se extiende ms all de dos mil aos; de ellos, doscientos de investigacin en el contexto celular y, los veinte ltimos, en el entorno molecular.

Los signos y sntomas inflamatorios se conocen desde antiguo. Los egipcios describieron abscesos y lceras, y el Cdigo de Hammurabi contiene instrucciones para tratar abscesos oculares. Sin embargo, fue el mdico griego Hipcrates de Cos quin introdujo las palabras edema y erisipela para describir la inflamacin. Hipcrates consider la inflamacin como el inicio de un proceso de resolucin o de curacin. La primera descripcin comprensiva de la inflamacin se encuentra en los escritos de Aulo C. Celso, quin no fue mdico ni cientfico. En su De Medicina introdujo los que consideran los sntomas cardinales de la inflamacin: rubor, tumor, color y dolor. Galeno de Prgamo aadi un quinto signo: functio laesa. Galeno, que introdujo el concepto de los cuatro humores vitales (sanguis, pituita, chole y melaine chole), consider la inflamacin como un desajuste en la relacin de esos humores. No consider que el pus fuera perjudicial (pus laudable), aunque deba facilitarse su evacuacin mediante puncin. Galeno advirti del efecto perjudicial del fro sobre un edema inflamatorio, porque el fro tornaba la lividez del tejido en una scirros (cicatriz patolgica), y pens que la sangre percollaba a travs de las paredes de las arterias hacia el tejido. Con todo, la investigacin del proceso inflamatorio no comenz hasta la invencin del microscopio compuesto por el cientfico holands Zacharias Janssen (1580-1638), alrededor del ao 1595. Antoni van Leeuwenhoek (1632-1723) construy, en 1719, el primer microscopio con la suficiente resolucin ptica para observar hemates individuales movindose a travs de los pequeos vasos sanguneos, aunque los leucocitos no fueron objeto de su inters. El mdico Hermann Boerhaave (1668-1738) utiliz el microscopio para observar vasos sanguneos en tejidos inflamados; concluy que los vasos sanguneos ms pequeos eran demasiado angostos para facilitar el flujo de sangre en el rea inflamada, con lo se generaba calor debido a la friccin. Un discpulo de Boerhave, Hieronymus D. Gaubius (1705-1780), encontr que la inflamacin promova las condiciones para que coagulara la sangre, y en 1796 apareci el texto Treatise of the blood, inflammation, and gun-shot wounds, obra pstuma del ingls John Hunter (17281793). La primera descripcin de las clulas inflamatorias se debe a Rene Dutrochet (1776-1847) quin seal, en el ao 1824, que corpsculos sanguneos individuales podan escapar a travs de la pared de los vasos y moverse con lentitud en la porcin clara (de la preparacin), donde la velocidad de movimiento era muy lenta; ello en marcado contraste con el torrente sanguneo del que proceda la clula. Especul sobre la naturaleza de la trasmigracin de los leucocitos, y sugiri que las paredes de los vasos presentaban orificios que permitan a los elementos formes de la sangre entrarenlos tejidos. RudolfWagner (1805-1864) tiene la primicia de la descripcin, en el ao 1839, del rodamiento leucocitario: En el espacio claro y brillante entre el torrente sanguneo y la pared del vaso, que est rodeada por varias fibras paralelas, puede observarse como los leucocitos se mueven lentamente . Esta observacin fue confirmada por Rudolf L. C. Virchow (1821-1902) quin, en el ao 1871 hizo notar que los leucocitos rodantes podan adherirse transitoriamente a la pared del vaso y, en ocasiones, reentrar en el torrente circulatorio. Observ la trasmigracin leucocitaria, pero atribuy un papel nutritivo ms que una funcin inflamatoria a este fenmeno.

Observaciones similares fueron hechas por William Addison (1802-1881) y por Augustus V. Waller (1814-1870), quienes ofrecieron, en la dcada de los aos 1840, una clara descripcin de la trasmigracin de los leucocitos y de la diapdesis de los eritrocitos en la inflamacin secundaria a traumatismos, y descubrieron que el pus estaba formado por leucocitos. Avanzado el siglo XIX, las contribuciones ms importantes a la investigacin de la inflamacin fueron realizadas por Ilya I. Metchnikoff (1845-1916) y por Julius Cohnheim (1839-1884). El primero seal que la acumulacin de clulas en la vecindad de la lesin constituye una clase de defensa natural para el organismo; y Cohnheim dio, en el ao 1877, una detallada descripcin de la cascada leucocitaria, incluida la trasmigracin: Primero, en una vena con marginacin tpica de las clulas blancas, uno ve un borde punteado en la pared externa del vaso. Estas se mueven ms all, hacia el exterior del vaso al que se conectan mediante un fino tallo. Finalmente, este tallo se desvanece y, ahora, la clula blanca aparece como un corpsculo brillante apenas coloreado, contrctil, situado completamente fuera del vaso. Max J. S. Schultze (1825-1874) fue el primero en percatarse de que los leucocitos no eran una clase homognea de clulas. Metchnikoff ampli tales observaciones y Pedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 93 defini los linfocitos, los monocitos-macrfagos y los granulocitos; distingui los neutrfilos de los eosinfilos, y reconoci que las clulas plasmticas y los mastocitos eran clulas inflamatorias. Metchnikoff escribi que el elemento esencial y primario en la inflamacin tpica consiste en una reaccin de los fagotitos contra el agente lesivo. Por su innovador trabajo, Metchnikoff, el fundador de la teora celular de la inflamacin, comparti el Premio Nobel de Fisiologa o Medicina 1908 (por sus trabajos sobre inmunidad) con Paul Ehrlich (1854-1915), quin haba trabajado sobre el sistema del complemento srico y los anticuerpos y a quin se atribuye la fundacin de la escuela humoral de la inmunidad. Con tales desarrollos, los conceptos de activacin endotelial, adhesin leucoctica, actividad fagoctica e inmunidad, haban sido introducidos. Luego llegaron los modelos in vivo encabezados, en el ao 1903, por el de Nicolas M. Arthus (1862-1945) mediante la inyeccin intradrmica de antgenos (reaccin de Arthus). Eliot R. Clark (1881-1963) desarroll, en el ao 1935, una cmara que visualizaba la adhesin y trasmigracin de los leucocitos in vivo. Henry H. Dale (1875-1968), quin haba trabajado en transmisin sinptica, reconoci (1929) la implicacin de mediadores qumicos en el proceso inflamatorio, identificando el primero de ellos: la histamina; descubrimiento al que siguieron los de la serotonina y la bradiquinina. Dale comparti con Otto Loewi (1873-1961) el Premio Nobel de Fisiologa o Medicina del ao 1936 por sus descubrimientos relativos a la transmisin qumica de los impulsos nerviosos. Con todo, Luis Urtubey (1892-1962) titulaba una conferencia desarrollada en Valencia, en 1937, Concepto filosfico de la inflamacin: He insistido en el trmino filosofa porque, precisamente en una ciencia tan de observacin como la Patologa, apenas hay otro problema inquietante de esta ndole que el que se refiere a la inflamacin. Por otra parte, Heilmeyer y Khler escriben: Para el mdico, es de importancia fundamental el problema de la significacin biolgica de la inflamacin. La respuesta que se d a esta cuestin influir decisivamente en su

conducta junto a la cabecera del enfermo. Antao, la consideracin teleolgica de la inflamacin, en el sentido de que sta constituira un proceso conveniente para el organismo, dominaba por completo el planteamiento del problema. Bchner, en 1950, haba sealado: As, pues, lo lgico y necesario es hablar, no de finalidad sino de significacin biolgica de la inflamacin. El fenmeno, peculiar de la materia viva, de lo que en ella sucede por necesidad, es decir, con carcter forzoso, con mucha frecuencia es al mismo tiempo lo ms conveniente desde el punto de vista biolgico, se pone de manifiesto precisamente en el proceso inflamatorio. El estmulo floggeno perturba el equilibrio del organismo, pero la reaccin de ste logra restablecer por lo regular el equilibrio perturbado. Y Lewis Thomas ha sugerido que quiz la reaccin inflamatoria deba ser considerada como una defensa del individuo contra el resto de la naturaleza, simbolizando su individualidad y anunciando su existencia como entidad. Como resumen de la situacin valga lo escrito por Gerald Weissmann en 1974: Cualquier descripcin o teora general de la inflamacin es probablemente tan prematuro como una teora general del comportamiento. La serie de mediadores inflamatorios culmin con el estudio de las prostaglandinas (el Premio Nobel de Fisiologa o Medicina del ao 1982 fue compartido por Sune K. Bergstrm, Bengt I. Samuelson y John R. Vane por sus descubrimientos referentes a las prostaglandinas y sustancias relacionadas biolgicamente activas, y, luego, del xido ntrico (Robert Furchgott, Louis Ignarro y Ferid Murad recibieron el Premio Nobel Fisiologa o Medicina 1998 por sus trabajos sobre este ltimo mediador). Por otro lado, el papel de las citoquinas inflamatorias interleuquina-1 (IL-1) y factor de necrosis tumoral (Tumor necrosis factor, TNF), su papel activador del endotelio vascular potenciando la adhesin de los leucocitos y la identificacin de las molculas de adhesin (selectinas e integrinas), quedaron establecidos en la dcada de los aos 1980. Vejlens estudi (1938) el rodamiento y la adhesin leucocitarias en los vasos mesentricos, y V. T. Marchesi, H. W. Florey y J. L. Gowans establecieron (1960-4) las interrelaciones entre leucocitos y clulas endoteliales durante la trasmigracin. Por ltimo, A. J. Goldman y A. Atherton y G. V. R. Born, se ocuparon (1967-73) del comportamiento hidrodinmico de la inflamacin. Tras los trabajos pioneros de Harold A. Abrahamson en el ao 1927, sobre los cambios infla-94 Pedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 matorios en las propiedades biofsicas de las membranas de los leucocitos, un mojn distintivo son los trabajos de Eric A. Jaffe y colaboradores (1973) que establecieron las bases para el descubrimiento de las molculas de adhesin entre los leucocitos y las clulas endoteliales. Por su parte, H. B. Stamper y J. J. Woodruff desarrollaron, en el ao 1976, el primer ensayo in vitro para el estudio de la adhesin leucocitaria en presencia de estrs por cizallamiento circulatorio. II. FISIOPATOLOGA El proceso inflamatorio representa una reaccin tisular imprevista ante una agresin, que incluye: decisiones de puesta en marcha o de cese, basadas en la integracin de secuencias moleculares incitadas por el dao tisular causado por la penetracin de microbios o por la presencia de material extrao exgeno o

endgeno; reclutamiento, instruccin y envo de clulas; eliminacin de microbios, cuerpos extraos y de clulas infectadas y/o daadas; creacin de barreras para evitar las metstasis microbianas, y la reparacin del tejido lesionado por la agresin o por la respuesta del husped. Si diferentes causas alteran o bloquean cualquiera de las etapas de este ordenado proceso, la inflamacin puede derivar hacia soluciones no deseadas, como la infiltracin tisular por agregados de linfocitos y leucocitos (granulomas) que, en ocasiones en las articulaciones, son embebidos en una masa de fibroblastos sinoviales hiperproliferativos (pannus), o la distorsin tisular mediante la biosntesis incontrolado de colgeno (fibrosis o cirrosis). La inflamacin persistente puede provocar depsitos de protenas amieloides, en principio protectoras pero que, a la larga, pueden inducir enfermedades crnicas degenerativas, y, tambin, lesiones oxidativas en el cido desoxirribonucleico (ADN) que, con el tiempo, favorezcan transformaciones neoplsicas. Lo que Celso defini como rubor, calor, dolor y tumor sigue siendo un problema intelectual de primer orden en el terreno de la transduccin de seales y de la comunicacin intercelular, en los sistemas biolgicos; un problema sociolaboral importante por su incidencia en el trabajo y en las relaciones personales, y un mercado milmillonario para la industria farmacutica. Cuando los acontecimientos patognicos primarios se desconocen, la fisiopatologa y el control de la inflamacin son las mejores opciones, aunque el nmero de enfermedades consideradas de origen inflamatorio disminuye a la par que se identifican las causas patognicas iniciales. Sin embargo, en esta y en otras enfermedades infecciosas importantes, la respuesta inflamatoria puede causar ms dao que el microbio (Tabla I).

La inflamacin es, ante todo, una respuesta a favor de la supervivencia, tal como queda reflejado por el elevado riesgo de infecciones graves en individuos con deficiencias genticas de los componentes principales del proceso inflamatorio; por ejemplo, la incapacidad para movilizar leucocitos al foco lesionado en los dficit de adhesin leucocitaria puede conducir a la muerte por infeccin; la incapacidad de producir diferentes componentes del sistema del complemento srico predispone a infecciones meningoccicas, o la incompetencia de la maquinaria NADPHoxidasa leucoctica, que incapacita al fagocito para producir especies reactivas de oxgeno bactericidas, conlleva la enfermedad granulomatosa crnica. Por ello, el objetivo mdico de inhibir la inflamacin se acompaa, paradjicamente, por un esfuerzo de comparable importancia para lograr inducir inflamacin de manera eficaz en, al menos, dos situaciones. En primer lugar, causar y mantener inflamacin se encuentran entre las funciones esenciales de los adyuvantes en las vacunas; y en segundo, provocar inflamacin es uno de los objetivos primarios de la inmunologa tumoral, en inmunizacin teraputica y en inmunoestimulacin inespecfica, como cuando se instila bacilo de Calmette-Gurin en una vejiga urinaria para prevenir la recurrencia tumoral. La evolucin no previno que la ciruga sera una tcnica asptica. As, el organismo reacciona al trauma como si la emergencia fuera una infeccin, y hasta que se demuestre lo contrario. La secuencia inflamatoria suele ejemplificarse con un sencillo experimento: descubrir uno de nuestros antebrazos y colocarlo en supinacin sobre una superficie de apoyo. Poner las yemas de los tres dedos medios de la otra mano sobre el antebrazo desnudo, a la altura de la mueca y arrastrarlos hacia la flexura del brazo mientras mantenemos una fuerte presin. Tras, ms o menos, quince segundos aparecer un bajorrelieve enrojecido en la piel agredida de nuestro antebrazo, que desa- Pedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 95 parecer transcurrida una hora. En cambio, si la piel ha sido lesionada un corte y/o las bacterias han logrado acceder a los tejidos contaminacin, el enrojecimiento y el edema persistirn, mostrando que se han puesto en marcha una serie de mecanismos, sincronizados con el proceso de reparacin o con tiempo de replicacin bacteriana y su potencial expansivo. El episodio probablemente culminar con el confinamiento y muerte de las bacterias que contaminaron la herida, y con la eliminacin y reparacin del tejido daado. Si la respuesta inflamatoria no fue adecuada por diferentes causas de origen congnito o adquirido, la infeccin y sus efectos se generalizarn sepsis pudiendo, incluso, provocar la muerte del enfermo. IIA. La respuesta celular a la agresin Cualquier agresin local a un organismo desencadena respuestas en tres niveles de la organizacin: celular, tisular y orgnico (Figura 3). La respuesta celular es individual y aislada, y tiene por objetivos defender su acervo gnico y mantener la conformacin nativa de sus protenas. Para sobrevivir, los organismos deben enfrentarse con los efectos adversos del estrs genotxico o agresiones que, constantemente, amenazan la integridad y funcin de sus genes y que pueden afectar a los exones o a las regiones no codificantes como los promotores. Tales ataques provienen de agentes ambientales como las radiaciones y los

xenobiticos, y tambin endgenos: productos metablicos de las clulas propias que causan lesiones diversas en el ADN. En este contexto, la exposicin repetida a la radiacin ultravioleta provoca a corto plazo inflamacin cutnea eritemas y quemaduras solares y, a la larga, cncer de piel. Tambin la inflamacin crnica mantenida por la presencia bacteriana Helicobacter pylori en la lcera gstrica se ha asociado al desarrollo de cncer gstrico. En el mbito de la inflamacin aguda tienen mayor inters las lesiones inducidas, en las regiones promotoras de los genes, por diferentes especies reactivas de oxgeno liberadas por las clulas fagocticas activadas. Su presencia puede interferir la interaccin con factores de 96 Pedro Garca Barreno Rev. R. Acad.Cienc. Exact. Fs. Nat. (Esp), 2008; 102 Tabla I. Ejemplos de enfermedades inflamatorias. transcripcin, especficamente con los involucrados directamente en la respuesta inflamatoria. Para hacer frente a los daos infligidos por los elementos genotxicos, internos y externos, los organismos han desarrollado mecanismos que enlentecen o bloquean la proliferacin mediante su actuacin en los puntos crticos del ciclo celular, que promueven la reparacin del ADN o que eliminan las clulas agredidas poniendo en marcha programas de suicidio celular o apoptosis. Cmo la clula decide, entre vivir o morir, en respuesta a la lesin en su ADN es crtico no slo para el destino celular, sino para evitar consecuencias desastrosas para el organismo como el cncer36, 37 (Figura 4). Las protenas de choque trmino (Heat shock protein, HSP), tambin denominadas protenas de estrs, son un grupo de macromolculas muy conservadas, con diferentes pesos moleculares que guan una de sus clasificaciones HSP de gran masa molecular: 100 kDa; HSP90: 99-81; HSP70: 80-65; HSP60: 64-55; HSP40: 54-35, y HSP de masa molecular pequea: 34, presentes en todas las clulas de todas las formas de vida. Expresadas en condiciones normales, diversos tipos de estrs ambiental o endgeno por ej. hipertermia, hipotermia, hipoxia, especies reactivas de oxgeno, desviaciones del pH, infeccin, metales, compresin o cizallamiento inducen su produccin. Actan como caperonas o carabinas moleculares asegurando que cada protena alcance su conformacin funcional en el lugar y en el momento adecuados. Para ello, intervienen en el proceso de plegamiento peptdico, en su distribucin intracelular y en su degradacin. En condiciones adversas se ocupan de que protenas desnaturalizadas recuperen su conformacin operativa

y de que otras, que han formado agregados, recuperen su individualidad. Tambin acompaan a los fragmentos peptdicos, producidos en la degradacin de las protenas, hasta el lugar de su presentacin, en la superficie celular, por las molculas del complejo principal de histocompatibilidad (Major histocompatibility complex, MHC) (Figura 5). Frente a sus funciones fisiolgicas protectoras, las HSP exhiben potencial patolgico. Las HSP pueden abandonar su espacio natural intracelular en situa- Pedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 97 Figura 3. La respuesta del organismo a la agresin se realiza a tres niveles: celular, tisular y sistmico. Cada uno de ellos exhibe peculiaridades distintivas. ADN: cido desoxirribonucleico, APR: Acute phase response, HS-R: Heat-shock response, R-ADN: Respuesta de reparacin del ADN, RG-NEI: Respuesta general neuro-endocrino-inmunolgica. ciones de lesin/necrosis celular inducidas por la activacin del inflamasoma piroptosis, en cuyo caso suelen ir acompaadas de otras molculas como la protena HMGB1 (High mobility group box-1); ubicadas en espacio extrao actan como citoquinas proinflamatorias. Por su parte, las HSP son responsables, al menos en parte y hasta donde se conoce, de la denominada respuesta a protenas desplegadas (unfoldedprotein response, UPR). En condiciones de normalidad, las HPS excedentes el pul principal de HSP garantiza el correcto plegamiento de las protenas nativas ceban receptores especficos en el retculo endoplsmico a los que silencian. Las condiciones de estrs o agresin celular que inducen el desplegamiento de las protenas, reclaman la movilizacin del pul de HSP acoplado a aquellos receptores a efectos de reforzar al que garantiza la conformacin nativa de las protenas intracelulares. El desacoplamiento activa los receptores que disparan una cascada de seales intracelulares que provocan la expresin de genes proinflamatorios38. IIB. La respuesta tisular La figura 6 esquematiza el flujo de informacin desencadenado por una herida contaminada, comn, de pronstico leve (Tabla II). La respuesta tisular a la agresin, o inflamacin en stricto sensu, contempla, en esquema, cuatro acontecimientos interrelacionados: a) la estimulacin de las terminaciones nerviosas libres provoca dolor y liberacin de pptidos bioactivos: neuropptidos; b) las clulas daadas piroptosis liberan protenas constitutivas intracelulares: HSP, factor

nuclear HMGB1 y N-formil-pptidos (FP) mitocondriales; c) los microorganismos y sus diferentes productos incitan, en colaboracin con los anteriores, una respuesta inmunolgica innata, y d) seales emanadas del foco inflamatorio reclutan leucocitos en el lugar de la lesin. Las terminaciones nerviosas libres, sensitivas, liberan tras la lesin o el estmulo neuropptidos pertenecientes a la clase taquininas sustancia P y neuro98 Pedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 Figura 4. Panormica de la va de transduccin de seales correspondiente a la respuesta al dao del ADN. Dicha va, que consta de sensores, transductores y efectores, es activada por una serie de seales que corresponden a las diferentes lesiones causadas en el ADN: roturas monocatenarias o bicatenarias, y dimerizaciones de las bases. Los sensores no se conocen bien; un sensor candidato es la protena BRCA1 (Breast Cancer 1). Los transductores de la seal son mejor conocidos. Dos protena quinasas relacionadas y evolutivamente bien conservadas ATM (producto del gen Ataxia Telangiectasia Mutated) y ATR (ATM-Rad3-related) son componentes centrales de la respuesta al dao del ADN. Las quinasas Chk1 y Chk2 son elementos efectores responsables de decidir entre reparar el dao, detener el ciclo celular o inducir apoptosis. Modificada de: Bing-Bing S. Zhou et al.36; fig. 1, pg. 433. quininas que representan el estmulo inicial de los mastocitos, que exponen sobre su membrana receptores especficos para tales mediadores proinflamatorios. Una vez iniciada la secuencia inflamatoria, triptasas liberadas por esas mismas clulas y por otras participantes en el proceso y actuando sobre receptores activados por proteasas (Protease-activated receptor, PAR) de los tipos PAR2 y EPR1 (Effector cell protease receptor) [ver pg. 13 y figuras nm. 9 y 10], refuerzan la respuesta inicial de las terminaciones nerviosas, que incrementan la produccin y liberacin de CGRP (Calcitonin gene related product) y de sustancia P. El primero acta sobre receptores arteriolares provocando vasodilatacin, responsable de los signos inflamaPedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 99 Figura 5. Esquema de la vida de una protena. La traduccin del ARN mensajero (mARN) ocurre sobre el ribosoma (1). A la vez, comienza, asistido por caperonas, el plegamiento de la cadena polipeptdica naciente (2); operacin que contina postraduccionalmente (3) hasta su complitud (4). Algunas protenas, antes de lograr su conformacin final son translocadas a diferentes orgnulos (ej. mitocondria, 5). En ocasiones, como consecuencia de la historia natural de la protena o inducido por factores desestabilizadores

(ej. estresores), las protenas se desnaturalizan, agregan (6) y precipitan en un cuerpo de inclusin (7) que ser procesado y digerido por la maquinaria lisosmica. Algunas protenas desnaturalizadas o parcialmente desplegadas son recuperadas por caperonas (8), que bien las repliegan en su conformacin funcional (4) o, bien, las conducen al proteosoma (9) para ser degradadas. En las clulas presentadoras de antgenos, las caperonas acompaan (10) a los pptidos antgenos digeridos o degradados hasta las molculas del complejo principal de histocompatibilidad (MHC), que los presentarn, sobre la superficie celular, a los receptores de las clulas T. En condiciones basales, las caperonas excedentarias del proceso normal de plegamiento permanecen acopladas a receptores especficos sobre la superficie el retculo endoplsmico (RE) (en la figura no diferenciado de la membrana nuclear); esta interaccin silencia al receptor. En condiciones de estrs la proteccin de las protenas funcionales requiere la totalidad de caperonas disponibles, por lo que aquellas acopladas a sus receptores RE los abandonan. Esta disociacin activa los receptores, que inician una cadena de seales conducente a una respuesta a protenas desplegadas (unfolded-protein response, UPR); un componente ms de la respuesta al estrs celular. Modificada de: Alberto J. L. Macario et al.38; fig. 1, pg. 1491. 100 Pedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 Figura 6. Flujo de informacin desencadenado por una herida contaminada, comn, de pronstico leve. Los microorganismos liberan productos que actan, de manera directa, sobre mastocitos, macrfagos/APC y neutrfilos. APC: clulas presentadoras de antgenos; C: sistema del complemento srico; f-pptidos: formil-pptidos; HMGB1: high mobility group box 1; Hsps: protenas de choque trmico; ILs: interleuquinas. Produccin de: . Actuacin sobre: . *: doble accin=destruye microorganismos y provoca autoagresin. Tabla II. Clasificacin y tasa de infeccin de las heridas operatorias. torios rubor y calor, y el segundo sobre receptores venulares, provocando un incremento de la permeabilidad venular y extravasacin responsable del edema o tumor inflamatorio. Se ha demostrado que las HSP liberadas al compartimiento extracelular tienen una serie de efectos inmunolgicos, que incluyen la induccin de secrecin de citoquinas proinflamatorias y de expresin de molculas de adhesin por diversos tipos celulares. La HSP60 activa, en humanos, las clulas endoteliales vasculares para expresar selectina-E, ICAM-1 (Intercellular adhesion molecule-1) y VCAM-1 (Vascular cell adhesion molecule-1). La misma protena de estrs induce la secrecin de interleuquina-6 (IL-6) por clulas endoteliales, clulas musculares lisas y macrfagos.

De manera similar al lipopolisacrido (LPS) de las bacterias gram negativas, la HSP60 induce la rpiPedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 101 Figura 7. La HSP60 como una molcula proinflamatoria de sealizacin intercelular. ICAM: intercellular adhesion molecule. IL: interleukin. TNF: tumor necrosis factor. VCAM: vascular cell adhesion molecule. Modificada de: A. Graham Pockley38; fig. 2, pg. 8. Figura 8. Las protenas HSP60 y HSP70 inducen la secrecin de citoquinas proinflamatorias por monocitos/macrfagos. La HSP60 estimula la secrecin de interleuquina 6 (IL-6) a travs del receptor CD14, y se une al complejo del receptor tipo Toll 4 (TLR4), del que CD14 es un co-receptor, para provocar la expresin de factor de necrosis tumoral alfa (TNFresponsable de incrementar la produccin de xido ntrico (NO). La HSP60 tambin induce la expresin de las citoquinas IL-12 e IL15, a travs de vas no identificadas. La HSP70 acta a travs de una va dependiente de CD14 para estimular la produccin de ILIL-6 y TNFModificada de: A. Graham Pockely38; fig. 3, pg. 9. da liberacin de TNFNitric oxide, NO) por los macrfagos, as como la expresin de IL-12 e IL-15. Las HSP, en su funcin extracelular como citoquinas caperoquinas, activan a los monocitos y macrfagos a travs de los mismos correceptores CD14 (CD: Cluster designation o cluster of differentiation. Nomenclatura propuesta en 1982, en el First International Workshop and Conference on Human Leukocyte Differentiation Antigens) que utilizan los LPS bacterianos para incitar una respuesta inmunolgica innata (Figuras 7 y 8). La HMGB1 es una abundante protena no histona, miembro de la superfamilia que agrupa protenas nucleares que presentan una movilidad electrofortica muy alta. Este grupo de protenas incluye tres familias. Los miembros de la familia HMGB se encuentran entre las protenas ms ubicuas, abundantes y evolutivamente ms conservadas entre las especies eucariticas; todos ellos comparten un dominio box que media el acoplamiento de la protena al ADN. La HMGB1, como factor nuclear, acta como un elemento estabilizador de la arquitectura del ADN, e interacciona con varios factores de transcripcin, protenas virales de replicacin y receptores esterodicos; juega, por todo ello, un papel relevante en la transcripcin. Cuando abandona su ubicacin normal y alcanza el medio extracelular, bien pasivamente por ruptura celular o secretada por clulas inflamatorias activadas por

citoquinas, acta como un potente mediador inflamatorio con caractersticas citoqunicas y quimioqunicas. Su receptor RAGE (Receptor for advanced glycation end products), que pertenece a la superfamilia de las inmunoglobulinas, se localiza en los endoteliocitos y los miocitos vasculares y en los fagocitos, entre otras clulas. Su actuacin sobre estas clulas potencia el proceso inflamatorio: provoca disrupcin de la pared vascular favoreciendo la extravasacin de lquido y de clulas intravasculares, y es una potente citoquina sobre los fagocitos39. Los fagocitos profesionales polimorfonucleares neutrfilos y clulas mononucleadas (monocitos y macrofgos) juegan un papel clave en la defensa del husped contra las bacterias invasoras. Las seales atractoras quimioatractores clsicas de los fagocitos son los FP bacterianos y mitocondriales, el factor 5a del complemento (C5a), la interleuquina 8 (IL-8), el factor activador de plaquetas (Platelet-activating factor, PAF) y el leucotrieno B4 (LTB4). El trmino quimioatractor deriva del hecho de que los fagocitos migran a lo largo de un gradiente de concentracin gradiente haptoquimiotctico de tales sustancias. Cuando los quimioatractores estn presentes a altas concentraciones activan las funciones citotxicas de los fagocitos; especficamente, los fagocitos activados completan la cascada adherente, generan diferentes especies de radicales de oxgeno (Radical oxygen species, ROS) y liberan enzimas lisosmicas y otros mediadores inflamatorios. Al contrario que los procariotes, la sntesis de protenas codificadas por el ADN nuclear eucaritico se inicia con un aminocido metionina no formilado. Sin embargo, el aparato de sntesis proteica mitocondrial utiliza N-formilmetionina para iniciar la sntesis peptdica, de manera anloga a los procariotes; adems, el resto formil (-CHO) se retiene en el extremo aminoterminal de las protenas mitocondriales. Por ello, FP liberados por las mitocondrias en cuyo interior y en condiciones normales permanecen confinadas e ignoradas por el sistema de vigilancia inmunolgico daadas juegan un papel proinflamatorio similar al de los pptidos bacterianos. Los receptores quimiotcticos clsicos de los fagocitos incluyen los de FP (FP Receptor, FPR), C5a (C5aR), PAF-R e IL-8R. Todos ellos, como los receptores de eicosanoides y de quimioquinas, son miembros de la superfamilia de

receptores acoplados a protena G (G protein-coupled receptor, GPCR), y cuya interaccin con el ligando agonista resulta en la activacin de la clula40. IIC. Mediadores inflamatorios Numerosos estudios sealan la importancia del reclutamiento de leucocitos en el foco inflamatorio a partir del pul circulante. Sin embargo, una rpida respuesta requiere clulas centinelas estacionadas en los tejidos. Los macrfagos y especialmente los mastocitos, cumplen tal funcin41. Los mastocitos perivasculares responden a los neuropptidos liberados por las terminaciones nerviosas daadas y estimuladas liberando histamina42, triptasa y otras proteasas y TNFprostaglandinas inflamatorias, tromboxanos y leucotrienos43, citoquinas y quimioquinas neoformadas. Histamina, eicosanoides y triptasas causan vasodilatacin 102 Pedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 responsable del calor y rubor inflamatorios y extravasacin responsable del tumor o edema inflamatorio. Las triptasas mastocticas siegan el extremo N-terminal exocelular de receptores activados por proteasas, desenmascarando secuencias, previamente crpticas, que autoactivan el receptor44. Un receptor que pertenece a la clase GPCR45 y que est presente en mastocitos, terminaciones nerviosas libres sensitivas, endotelio vascular, plaquetas y neutrfilos (Figura 9). Ello potencia la estimulacin de los mastocitos y de las terminaciones nerviosas; hace al endotelio adherente para los leucocitos, permeable al fluido intravascular y procoagulante; induce la adhesividad y agregacin de las plaquetas e insta a los leucocitos a producir factor activador plaquetario (Figura 10). PAF es el nombre trivial de un fosfolpido [1-Oalquil2-acetil-sn-glicero-3-fosfocolina] que tiene diversas y potentes acciones fisiolgicas. Muchos mediadores lipdicos (ej., eicosanoides) derivan de fosfolpidos, pero el PAF es un fosfolpido intacto que se acopla a un receptor especfico46. El PAF refuerza la adhesividad endotelial que conduce a la migracin leucocitaria desde el vaso al foco inflamatorio (Figura 11), e induce en aquellos la expresin de receptores de quininas. La interaccin del quiningeno de peso molecular elevado (High-molecular weight kininogen, HK) con su receptor sobre la superficie celular endotelial es clave para la activacin de la precalicrena (Prekallikrein,

PK), que circula en el plasma formando un complejo con HK. Como se muestra en la figura 12, la calicrena activa sobre la membrana endotelial digiere al HK para liberar bradiquinina (Bradikinin, BK). El ensamblaje del complejo HK PK sobre la clula endotelial es, por tanto, un prerrequisito para la formacin de BK, que puede interactuar con el receptor de BK de tipo 2 (B2). La activacin de B2 induce la produccin de xido ntrico y prostaciclina (PGI2), vasodilatadores, y de activador tisular del plasmingeno (Tissue plasminogen activator, tPA), antitrmbico. El activador de la PK es una serina proteasa (Prolylcarboxypeptidase, PRCP o angiotensinasa C). La PRCP tambin digiere la inerte angiotensina I y la vasoconstrictora angiotensina II, dando lugar en ambos casos a angiotensina II(1-7), un pptido bioactivo que induce vasodilatacin por estimular la produccin de NO. La angiotensinasa produce dos pptidos bioactivos vasodilatadores, BK y angiotensina II(1-7), que se oponen a la potente accin vasoconstrictora de la angiotensina II. Se conoce la capacidad de la angiotensina II para inducir la secrecin de inhibidor del activador del plasmingeno 1 (Plasminogen-activator inhibitor, PAI1), lo que involucra al sistema renina-angiotensina (Renin-angiotensin system, RAS) en favorecer la trombosis. La doble accin de la PRCP activa PK e inactiva angiotensina II indica una importante interaccin entre el sistema calicrenaquinina (Kalikrein-kinin system, KKS) y el RAS, y sugiere que amabas vas, conjuntamente, no solo regulan la presin arterial sino que influyen en la produccin de trombosis. Existen otras dos interacciones entre KKS y RAS (Figura 13): la calicrena puede convertir prorrenina (inactiva) en renina (activa); y la enzima conversora de angiotensina (Angiotensin-converting enzyme, ACE o quininasa II) puede convertir angiotensina I (inactiva) en angiotensina II (activa), y BK en BK(1-5), un pptido inhibidor de trombina. El sistema KKS plasmtico es, por tanto, anticoagulante y profibrinoltico. Adems, BK, como se ha sealado, induce la formacin de NO, de PGI2 y de tPA. En resumen, parece que el KKS plasmtico sirve de contrapeso fisiolgico al hipertensivo y protrombtico RAS47. Las citoquinas48 son pequeas protenas o glicoprotenas49, que actan como autacoides o como hormonas, producidas generalmente como formas precursoras

por clulas activadas que median el proceso Pedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 103 Figura 9. Mecanismo de autoactivacin de los receptores activados por proteasas (PAR). Tras la escisin proteoltica del extremo N-terminal (NH3 +) del PAR por trombina, tripsina o triptasa (dependiendo del subtipo del receptor), se expone un nuevo resto N-terminal (*NH3 +) y se desenmascara la secuencia [ ] que autoactiva [ ] el receptor acoplado a protena G. TM1: primer domino transmembranar. TM7: sptimo domino transmembranar. COO-: grupo carboxiterminal. inflamatorio. El trmino citoquina o inmunocitoquina se utiliz inicialmente para separar un grupo de protenas inmunomoduladoras, denominadas inmunotransmisores, de otros factores de crecimiento o factores peptdicos reguladores que modulan la proliferacin y bioactividad de clulas que no pertenecen, en principio, al sistema inmunolgico. El trmino citoquina se utiliza como un nombre genrico para un grupo diverso de protenas solubles que actan como reguladores humorales a concentraciones nano- o picomolares y que, en condiciones normales y patolgicas, modulan las actividades de clulas y tejidos; y algunas de ellas se comportan como factores de supervivencia al prevenir la apoptosis. Las citoquinas tambin median, de manera directa, interacciones intercelulares. En muchos aspectos, las actividades biolgicas de las citoquinas semejan las de las hormonas clsicas producidas en tejidos glandulares especializados. Algunas citoquinas tambin se comportan como hormonas, al actuar a distancia. En general, las citoquinas actan sobre una mayor variedad de clulas diana que las hormonas; y, quizs, la principal diferencia entre stas y las primeras es que stas no son producidas por clulas especializadas. Diferentes citoquinas son producidas por clulas diferentes, y virtualmente todas las clulas del organismo son capaces de producir una u otra de aquellas. En el sentido ms restrictivo, las citoquinas comprenden las interleuquinas se pens, en un principio, que eran producidas exclusivamente por leucocitos , linfoquinas, monoquinas, interferones (IFN), quimio104 Pedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 Figura 10. La activacin del receptor activado por proteasa del subtipo 1 (PAR1) por trombina, representa un vnculo de unin entre

las vas inflamatoria y de la coagulacin. PAR1 se expresa en la superficie de las plaquetas (p), neutrfilos (n) y endoteliocitos (e). La activacin de PAR1e por trombina conduce a la liberacin de mediadores proinflamatorios prostaglandinas (PGs) y xido ntrico (NO) por las clulas endoteliales vasculares; mientras que la activacin de PAR1n induce la migracin de los leucocitos polimorfonucleares neutrfilos y la liberacin de factor activador plaquetario (PAF), que actuando sobre el endotelio potencia su adhesividad para las plaquetas. La activacin de PAR1p provoca la adhesin de las plaquetas al endotelio y la agregacin plaquetaria, que activan la va intrnseca de la coagulacin. Previamente, el endotelio lesionado ha liberado factor tisular (factor VII de la coagulacin) que, tras ser activado por micropartculas, pone en marcha la va extrnseca de la coagulacin e inicia la produccin de trombina. La adhesin plaquetaria y el depsito de fibrina sobre el endotelio vascular potencian la produccin de PGs y NO. Por su parte, el factor X de la coagulacin, activado por ambas vas de la coagulacin, acta directamente sobre las clulas endoteliales mediante la activacin de otro receptor de la clase PAR receptor EPR1 (effector cell protease receptor 1), tambin presente en la terminaciones nerviosas libres en las que se expresa junto con el subtipo PAR2, induciendo la produccin de NO y de interleuquina 6 (IL-6). Al complejo [IXa-VIIIa] activador del factor X se denomina tenasa. Modificada de: Giuseppe Cirino et al.44; fig. 1, pg. 171. quinas, factores estimulantes de colonias (Colony stimulating factor, CSF) y factores de crecimiento (Growth factor, GF). El trmino citoquinas de tipo 1 se refiere a aquellas producidas por clulas Th1 (clulas T helper1 o asistentes): IL-2, IFN-12 o TNFpor Th2: IL-4, IL-5, IL-6, IL-10 o IL-13. La mayora de las citoquinas no se relacionan en trminos de secuencias, aunque algunas pueden agruparse en familias (por ej. familias de receptores50), o clasificadas en categoras de acuerdo con el tipo de las estructura secundaria o terciaria. Tras la expresin gnica, la mayora de las citoquinas son secretadas por las clulas utilizando las vas secretoras clsicas, existiendo formas que se asocian a las membranas y, otras, a la matriz extracelular. Se denomina entramado citoqunico a las interacciones, extraordinariamente complejas, de las citoquinas por las que inducen o suprimen su propia sntesis o la de otras citoquinas o sus receptores, y antagonizan o sinergizan entre ellas de maneras diferentes y, a menudo, redundantes. Tales interacciones involucran, en ocasiones, cascadas citoqunicas en las que una citoquina inicial desencadena

la expresin de ella y de muchas otras, creando complejos circuitos de retroalimentacin. Se denominan citoquinas proinflamatorias aquellas que favorecen la inflamacin, siendo prototpicas IL-1, IL-6 y TNFActan como pirgenos endgenos, inducen la sntesis de mediadores secundarios y de citoquinas proinflamatorias por macrfagos y por clulas mesenquimales, estimulan la produccin de protenas de fase aguda y atraen clulas inflamatorias. El efecto neto de una respuesta inflamatoria est determinada por el balance entre citoquinas pro- y antiinflamatorias (IL-4, IL-10 o IL-13). Macrfagos activados producen, en respuesta a patgenos y otros estmulos dainos, TNF, una citoquina con una masa molecular relativa de 17 kDa que se comporta como mediador necesario y suficiente de la inflamacin local y generalizada. El incremento de la concentracin local de TNF provoca los signos clnicos cardinales de la inflamacin: calor, rubor, tumor y dolor. El aumento sistmico de TNF media la lesin tisular deprimiendo el volumen sistlico cardiaco, induciendo trombosis microvascular y mediando en el sndrome vasculopljico con vasoparlisis y extravasacin masiva de lquido intravascular. El TNF amplifica y prolonga la respuesta inflamatoria al activar otras clulas que, como respuesta, liberan citoquinas tales como IL-1 y HMGB1, y otros mediadores como eicosanoides, xido ntrico y especies reactivas Pedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 105 Figura 11. La seal incitada por el factor activador de plaquetas (Platelet-activated factor, PAF) prepara y activa a los leucocitos en las superficies de las clulas endoteliales vasculares inflamadas: un sistema yuxtacrino de control espacial del proceso inflamatorio. El PAF y una molcula de adhesin P-selectina se coordinan sobre la membrana celular endotelioctica. La P-selectina ata al leucocito a la clula endotelial, lo que permite al PAF de la clula endotelial acceder a su receptor en el leucocito polimorfonuclear. Ello constituye una especie de seal yuxtacrina pleotrpica. Modificada de: Stephen M. Prescott et al.46; fig. 1, pg. 421. de oxgeno, que potencian la inflamacin y provocan lesiones tisulares. El TNF es esencial para la completa expresin inflamatoria; por el contrario, la autolimitacin del proceso inflamatorio se caracteriza por una atenuacin de la actividad del TNF. Las quimioquinas, constituyen una familia de pequeas protenas proinflamatorias caracterizadas por contener en su molcula cuatro restos de cistena

(Cys) que forman cuatro enlaces disulfuro intracatenarios. Las quimioquinas juegan un papel fundamental en la inflamacin por atraer y activar clases especficas de leucocitos, participando en tres de las cinco etapas de la cadena de adherencia leucoctica. En primer lugar, favorecen el rodamiento lento y la adherencia de los leucocitos al activar las integrinas leucocitarias. Segundo, son potentes quimioatractores que guan a los leucocitos hacia el foco inflamatorio; y por ltimo, activan las funciones efectoras de los leucocitos, incluyendo la produccin de productos intermedios reactivos durante el metabolismo del oxgeno y la exocitosis de enzimas hidrolticas. Las quimioquinas se unen a glicosaminoglicanos y heparina, formando complejos que se creen de gran importancia en su capacidad para atraer localmente a los leucocitos. Hay dos subfamilias estructurales principales, designadas Cys-XLinfotactina (C) y fractalquina (CX3C) representan otras dos familias (Figura 14). Los receptores de quimioquinas son 106 Pedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 Figura 12. Ensamblaje y activacin del sistema calicreina-quinina (KKS) plasmtico. La precalicrena (PK: prekallikrein) circula formando un complejo con quiningeno de elevado peso molecular (HK: high molecularweight kininogen) [HK PK]. HK PK interacciona con un receptor multiproteico formado por citoqueratina 1 (CK1: cytokeratin 1), receptor de activador de plasmingeno-uroquinasa (uPAR: urokinase plasminogen activator receptor) y gC1qR. Las protenas del receptor de HK PK colocalizan sobre la membrana de las clulas endoteliales vasculares. Cuando HK PK se une a su receptor, PK es rpidamente convertida a calicrena (K) por la enzima prolil-carboxipeptidasa (PRCP), que es un componente constitutivo, activo, de la membrana del endoteliocito. La calicrena resultante autodigiere a su receptor, HK, liberando bradiquinina (BK). La bradiquinina interacciona con receptores especficos cuya seal induce la produccin y liberacin de activador tisular de plasmingeno (tPA: tissue plasminogen activator) xido ntrico (NO) y prostaciclina (PGI2). La calicrena tambin activa al factor XII de la coagulacin, que se une al mismo receptor de HK PK, potenciando la va intrnseca de la coagulacin. ScuPA (single chain urokinase plasminogen activator) es un adaptador de uPAR. Modificada de: Alvin H. Schmaier47; fig. 1, pg. 1007. miembros de la superfamilia de receptores transmembranares acoplados a protena G. IID. La cascada de adhesin leucocitaria La mayor parte de lo anterior tiene por objetivo

reclutar y activar fagocitos en el foco inflamatorio51. La cascada de adhesin leucoctica es una secuencia de acontecimientos de adhesin y activacin que concluye con la extravasacin de los leucocitos; ello con la finalidad de que tales clulas ejerzan sus efectos en el foco inflamatorio. En dicha cascada pueden distinguirse, al menos, cinco etapas bien definidas: captura, rodamiento, rodamiento lento, anclaje y migracin (Figura 15). Cada una de ellas es necesaria para el reclutamiento efectivo de los leucocitos, y el bloqueo de cualquiera de ellas disminuye significativamente la acumulacin de leucocitos en el tejido lesionado. Tales etapas no representan fases de la inflamacin, sino la secuencia de acontecimientos desde la perspectiva de cada leucocito. En cualquier momento determinado las cinco etapas suceden en paralelo, involucrado a diferentes clulas en el mismo microvaso y al mismo tiemPedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 107 Figura 13. Interaccin entre los sistemas calicrena-quinina (KKS) y reninaangiotensina (RAS) plasmticos. La calicrena convierte prorrenina en renina, y la renina tiene la capacidad de convertir angiotensingeno en angiotensina I. La enzima conversora de angiotensina (ACE: angiotensin-converting enzyme) convierte a la inerte angiotensina I en la vasoconstrictora angiotensina II. La angiotensina II estimula al inhibidor del activador de plasmingeno 1 (PAI1: plasminogen activator inhibitor 1) liberado por las clulas endoteliales. A la vez, ACE degrada la bradiquinina (BK) a bradiquinina (1-5), un pptido con actividad antitrombina. La prolilcarboxipeptidasa (PRCP) es la enzima que degrada la angiotensina II o la angiotensina I, en el pptido vasodilatador angiotensina II (17). La angiotensina II (1-7) estimula la produccin de xido ntrico (NO) y de prostaciclina (PGI2), que potencian los efectos de la BK. PRCP tambin tiene la capacidad de convertir PK en calicrena. La calicrena formada digiere los quiningenos para liberar BK y un fragmento (HKa: kinin-free kininogen) que tiene propiedades antiproliferativas y antiangiognicas. As, PRCP, la misma enzima que degrada la vasoconstrictora angiotensina II, conduce a un incremento en la formacin de las vasodilatadoras BK y angiotensina II (17). Por ltimo, la BK estimula la produccin de activador tisular de plasmingeno (tPA), NO y PGI2, lo que supone un contrapeso al efecto protrombnico de la angiotensina II. Modificada de: Alvin H. Schmaier47; fig. 2, pg. 1008. po. La comprensin del escenario microvascular tiene una proyeccin teraputica inmediata: el desarrollo de frmacos antiinflamatorios orientados a interferir con todas y cada una de las etapas sealadas. El endotelio vascular proporciona una barrera

impecable que previene la interaccin entre las clulas circulantes y la pared de vaso. El endotelio est formado por un epitelio escamoso simple que recubre la luz vascular. Juega un papel clave en la mecnica del flujo sanguneo, en la regulacin de la coagulacin de la sangre, la adhesin de los leucocitos y el crecimiento de los miocitos, y tambin sirve de barrera a la difusin transvascular de los lquidos y solutos circulantes. El endotelio, lejos de ser una pared pasiva, es un tejido dinmico que lleva a cobo variadas funciones activas, como la produccin, secrecin o expresin de sustancia vasoactivas involucradas en la cascada adhesiva, en la hemostasia o en el tono vascular. La marginacin es el proceso en el que los leucocitos circulantes abandonan el eje del flujo, lo que permite iniciar una serie de interacciones contacto mecnico entre las clulas circulantes y el endotelio. Los mecanismos subyacentes de la marginacin involucran interacciones entre los leucocitos y los eritrocitos que fluyen por el mismo vaso, de tal manera que los eritrocitos deformados empujan y desplazan a los leucocitos a una posicin marginal; ello debido a la menor seccin transversal y a la mayor velocidad de flujo de los eritrocitos. La agregacin eritroctica tambin promueve la marginacin leucoctica en los microvasos mayores, dado que los agregados ocupan el centro de la vnula. La marginacin reolgica no es 108 Pedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 Figura 14. Se han identificado cerca de 50 quimioquinas, protenas homlogas de 8-10 kDa, que se agrupan en familias sobre la base de la posicin relativa de sus cistenas (Cys o C) en la protena nativa. En las quimioquinasseparados por un solo aminocido (CXC), mientras que en la quimioquinasprimeras dos Cys estn adyacentes (CC). Las quimioquinas-leucina-arginina inmediatamente antes de CXC son quimiotcticas para neutrfilos, mientras que las que no contienen esta secuencia actan sobre linfocitos. La s aminocidos separando las dos primeras cistenas. Los receptores de quimioquinas son protenas transmembranares acopladas a protena G, que se expresan sobre los diferentes subgrupos de leucocitos. Se han identificado, en humanos, cuatro CXCR, ocho CCR y un CX3CR. crtica para el rodamiento de los leucocitos, dado que los leucocitos abandonan aquellos capilares cuyo dimetro es menor que el de ellos, y el contacto con el

endotelio est asegurado. El proceso de captura o atamiento representa el primer contacto de un leucocito con el endotelio activado. La captura ocurre tras la marginacin, que permite moverse al leucocito hacia una posicin prxima al endotelio, lejos del eje del flujo. La respuesta inflamatoria requiere una activacin endotelial previa al inicio de la captura. La P-selectina sobre las clulas endoteliales es la molcula de adhesin primaria para la captura en inicio del rodamiento. El principal ligando del leucocito para la P-selectina es PSGL-1 (P-selectin glycoprotein ligand-1). Adems, diferentes estudios sugieren que la L-selectina tambin juega un papel importante en la captura, aunque su ligando en la clula endotelial no est bien definido. Anticuerpos que bloquean la funcin de la L-selectina inhiben el rodamiento en muchos modelos en los que ste es dependiente de la P-selectina. Una vez que el leucocito ha sido capturado, se mantiene transitoriamente adherido al endotelio venular y comienza a rodar. El rodamiento ocurre a una velocidad similar o menor a la de las clulas, como los eritrocitos, que circulan libremente en el mismo vaso y en la misma posicin radial. La velocidad que separa el rodamiento del flujo celular libre se denomina velocidad crtica o velocidad hidrodinmica. La familia selectina de receptores tansmembranares de adhesin media este proceso de rodamiento. La P-selectina es el miembro ms importante de la familia en esta etapa. La P-selectina puede soportar la captura y el rodamiento en ausencia de L-selectina. Aunque la Pselectina se identific inicialmente en las plaquetas, tambin se encuentra en los cuerpos de Weibel-Palade Pedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 109 Figura 15. La cascada de adhesin leucocitaria es una secuencia de acontecimientos de adhesin y activacin que termina con la extravasacin del leucocito que, en el espacio intersticial donde tienen lugar la inflamacin, ejercer sus efectos. La cascada de acontecimientos se ha disecado en cinco pasos: captura, rodamiento, rodamiento lento, anclaje y transmigracin. Cada uno de ellos es necesario para que el reclutamiento leucocitario en el foco inflamatorio sea efectivo. Los tres primeros pasos dependen, en principio, de selectinas, siendo integrinas las responsables de la conclusin de la secuencia. En resumen, la iniciacin del proceso exige la activacin del endotelio que, por accin de quimioquinas expone, sobre su superficie, selectinas. Ligandos constitutivamente expresados sobre los leucocitos establecen ligaduras, cada vez ms fuertes segn avanza la secuencia, con selectinas. La conclusin de la cascada

de adhesin depende de las interacciones de integrinas leucocitarias con sus ligandos endoteliales. Completa la captura, el leucocito migra transendotelialmente siguiendo un gradiente haptotctico de nuevas quimioquinas. Modificada de: Klaus Ley et al.51 de los endoteliocitos humanos. Tras la agresin tisular, la P-selectina es rpidamente expresada sobre la superficie del endotelio venular, al que le confiere cierta pegajosidad para los leucocitos. PSGL-1 se expresa constitutivamente sobre la superficie de los linfocitos, monocitos y neutrfilos, por lo que todas estas clulas ruedan sobre el endotelio. Durante el rodamiento, se forman ataduras entre el endotelio y el borde frontal del leucocito y se rompen las existentes entre la cola del leucocito y su soporte. Mientras tanto, las integrinas leucocitarias mantienen su estado de reposo y sus ligandos inmunoglobulnicos endoteliales mantienen sus niveles de control. Las selectinas de los tipos L y E toman tambin parte en el proceso de rodamiento. La L-selectina es menos eficaz que la P-selectina, pero en el proceso inflamatorio normal es necesaria para la captura e inicio del rodamiento. Por su parte, la Eselectina es responsable de las interacciones que dictan la transicin hacia la etapa de rodamiento lento, que -1 y, posiblemente, en la iniciacin de la etapa de anclaje o de adhesin firme. La velocidad circulatoria de los leucocitos en el territorio venular es, aproximadamente, -1; y la velocidad de rodamiento en ese territorio es de, aproximadamente, 20-1 52. El rodamiento lento requiere la expresin de Eselectina sobre las clulas endoteliales y de integrinas CD18 sobre los leucocitos rodantes, y se ha denominado etapa de rodamiento lento o de frenazo para distinguirla del rodamiento rpido que no exige la presencia de citoquinas. El tiempo de trnsito a travs del lecho microvascular y, ms especficamente, el tiempo de contacto durante el que el leucocito est en ntima relacin con el endotelio, parece ser un parmetro clave en la consecucin del xito del proceso de reclutamiento que culmina con la adhesin firme o anclaje. El tiempo de trnsito del leucocito parece que se relaciona con las citoquinas presentes en la superficie endotelial y que son accesibles al leucocito mientras que est rodando. Los leucocitos rodantes son activados por los quimioatractores expuestos sobre la superficie endotelial y a travs de seales incitadas por molculas de adhesin. Tambin es posible que la

velocidad de rodamiento pueda tener un efecto independiente del tiempo de trnsito, porque acontecimientos secundarios de acoplamiento (por ej. mediados por los leucocitos permanezcan cierto tiempo en una posicin favorable para establecer contactos. Aunque el rodamiento lento hace mucho ms eficiente el reclutamiento leucocitario, no es estrictamente requerido, porque altas concentraciones de quimioatractores pueden detener leucocitos en rodamiento rpido. 110 Pedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 Figura 16. Las selectinas son una familia de molculas transmembranares, expresadas sobre la superficie de los leucocitos y de las clulas endoteliales vasculares activadas. Las selectinas contienen un dominio N-terminal extracelular con homologa estructural con las lectinas dependientes de calcio; luego, un dominio homlogo al factor de crecimiento epidrmico (Epidermal growth factor, EGF), seguido de dos a nueve dominios repetitivos, similares a secuencias encontradas en protenas reguladoras del complemento. La selectina atraviesa la membrana mediante un dominio hidrofbico, al que sigue el extremo C-terminal citoslico. El contacto inicial del leucocito con el endotelio activado se realiza a travs de selectinas, lo que acta a modo de freno; ello enlentece la marcha del leucocito, lo que proporciona el tiempo suficiente para que se establezcan nuevos contactos, cada vez ms eficaces aunque todava reversibles y transitorios, que prcticamente detienen el leucocito sobre el endotelio. L-selectina, la ms pequea de la familia, se encuentra en la mayora de los leucocitos. Pselectina, la mayor de las selectinas, se expresa sobre clulas endoteliales y plaquetas activadas. E-selectina se expresa sobre endotelio activado. Durante la respuesta inflamatoria, la adhesin de los leucocitos al endotelio est controlada por la interaccin de selectinas vasculares a ligandos glicoproteicos complementarios, especialmente PSGL-1, que presentan estructuras oligosacridas para los dominios lectina de las selectinas. Enlaces transitorios entre receptores (selectinas) y sus ligandos median los pasos iniciales de la cascada de adhesin. Modificada de: Klaus Ley et al.51 Se piensa que la mayora, si no todos, los leucocitos se adhieren nicamente tras haber rodado; la adhesin directa desde el pul de leucocitos en flujo libre es excepcional. El factor principal, aunque no suficiente, lo representan las integrinas de la familia CD18, aunque otras integrinas pueden ser importantes para poner en marcha vas alternativas. La integrina ms importante es la LFA-1 (Lymphocyte function-associated

antigen-1), mientras que otro miembro de la familia, la integrina Mac-1, se requiere en los procesos de activacin y de fagocitosis de los leucocitos. Los leucocitos en rodamiento lento no se detienen abruptamente sino que frenan de manera gradual reduciendo progresivamente su velocidad hasta que se detienen y adhieren de manera estable. Esta desaceleracin es estrictamente dependiente de integrinas CD18, aunque requieren ser activados, al menos parcialmente, antes de detenerse. Este proceso tiene lugar en, aproximadamente, un minuto, y aunque se conoce que est involucrado el receptor IL-8, parece que seales iniciadas por receptores de adhesin tambin contribuyen a este proceso de reclutamiento leucocitario. Las integrinas CD18 leucocitarias, LFA-1 y Mac-1 (Macrophage antigen-1), pueden acoplarse a las inmunoglobulinas endoteliales ICAM-1 e ICAM-2. Una vez adherido, el leucocito migra a travs de uniones interendoteliales si existe un gradiente exgeno de quimioatractores, siendo IL-8 y FP los ms eficaces. Las selectinas son una familia de molculas transmembranares, expresadas sobre la superficie de los leucocitos y de las clulas endoteliales activadas (Figura 16). Las selectinas contienen un dominio extracelular N-terminal con homologa estructural con las lectinas calciodependientes; a continuacin muestran un dominio homlogo al factor de crecimiento Pedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 111 Figura 17. Selectinas e integrinas se disponen estratgicamente sobre la superficie del leucocito. Aquellas molculas que intervienen en las primeras fases de la cascada de adhesin ligandos para P-selectina y Eselectina endoteliales; L-selectina leucocitaria que interaccionar con ligandos endoteliales, e integrina leuc -4) que lo har con ligandos endoteliales de la familia inmunoglobulnica se sitan en la cspide de los microvilli de la membrana leucocitaria. Las molculas que participan en las fases tardas -1, p150-95 y LFA-1) se ubican en los fondos de las interdigitaciones de los microvilli. Para que este segundo frente alcance sus dianas ligandos inmunoglobnicos (ICAM1) sobre el endotelio, los actores iniciales deben ser desplazados; ello lo realizan citoquinas quimiotcticas, que siegan las interacciones entre las selectinas y sus ligandos. Modificada de: Klaus Ley et al. 51 epidrmico y, luego, dos a nueve repeticiones de consenso cuyas secuencias son similares a las encontradas en las protenas reguladoras del sistema del complemento srico. Cada uno de estos receptores de adhesin

se insertan mediante un dominio hidrofbico transmembranar que se prolonga mediante una corta cola que representa el extremo C-terminal, citoplasmtico, de la molcula. El anclaje inicial de los leucocitos durante la inflamacin es abordado por la familia selectina, que logran frenar el movimiento de los leucocitos, a lo largo del endotelio, mediante interacciones adhesivas transitorias y reversibles que, en conjunto, se denomina rodamiento leucocitario. Cada una de las tres selectinas L, P y E pueden mediar en el rodamiento si se dan las condiciones apropiadas. La L-selectina es la ms pequea de las selectinas vasculares y se encuentra en la prctica totalidad de los leucocitos. La P-selectina es la mayor de la familia y se expresa en plaquetas y endoteliecitos activados. La Eselectina se expresa sobre clulas endoteliales activadas por citoquinas. La ms pequea de las selectinas vasculares Lselectina, LECAM-1 (Leukocyte-endothelial cell adhesion molecule-1), LAM-1 (Leukocyte adhesion molecule-1), Mel-14 (Melanome antigen-14), gp90mel (Glycoprotein 90mel) o Leu8/TQ-1) es una molcula de 74-100 kDa que se expresa constitutivamente en los extremos de las microprotusiones (microvillis) de las membranas de los granulocitos, monocitos y linfocitos (Figura 17). La L-selectina juega un papel primordial en la captura de los leucocitos por el endotelio vascular en las fases iniciales de la cascada de adhesin. Tras la captura, la L-selectina es eliminada de la superficie de los leucocitos tras el estmulo quimioqunico. La Lselectina interacta con tres contrarreceptores o ligandos: MAdCAM-1 (Mucosal addressin cell adhesin molecule-1), GlyCAM-1 (Glycosilation-dependent cell adhesin molecule-1) y CD34. La P-selectina es la mayor de las selectinas, con un peso molecular de 140 kDa. Contiene nueve repeticiones de consenso que extienden la molcula hasta 40 nm ms all de la superficie del endotelio. La P-selectina, tambin denominada CD62P, GMP-140 (Granule membrana protein-140), LECAM-3 y PADGEM (Platelet-activationdependent granule to external membrane protein), grnulos de las plaquetas activadas y en los grnulos de las clulas endoteliales. A los pocos minutos del estmulo de las clulas endoteliales por los mediadores inflamatorios como histamina o trombina, la P-selectina es expuesta en la superficie celular, teniendo una vida corta, aproximadamente

diez minutos. IL-1 y TNFsegunda respuesta biosinttica de novo diferida, aproximadamente, dos horas. El ligando primario de la Pselectina es PSGL-1 que se encuentra constitutivamente en los leucocitos. Otros ligandos para la Pselectina son CD24 y otras molculas no bien caracterizadas. Las interacciones transitorias entre la P-selectina y PSGL-1 permiten el rodamiento leucocitario a todo lo largo del endotelio venular. La P-selectina es responsable, en gran parte, de la fase de rodamiento de la cascada de adhesin leucocitaria. La P-selectina puede tambin mediar en la captura cuando no hay L-selectina. La E-selectina ELAM-1 (Endotelial-leukocyte adhesin molecule-1), LECAM2 se expresa sobre la superficie de las clulas endoteliales en respuesta a la accin de las citoquinas. Los ligandos para la E-selectina no se conocen bien, dudndose de que PSGL-1 y ESL-1 (E-selectin ligand1) participen como tales, y ni siquiera est claro el que el ligando sea una glicoprotena, pues algunos glicolpidos pueden asumir el rodamiento dependiente de 112 Pedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 Figura 18. Las integrinas son una gran familia de glicoprotenas heterodimricas transmembranares, que anclan las clulas a las protenas de la matriz extracelular de los basamentos membranares o a ligandos sobre otras clulas. Las integrinas integrinas forman varias subfamilias que comparten una subunidad Mac-1, p150-95 y LFA-1 se expresan, exclusivamente, sobre leucocitos. El miembro ms importante de la -4. Las integrinas interaccionan con ligandos de la superfamilia de las inmunoglobulinas. ICAM-1 es el principal ligando para las integrinas leucocitarias de la subfamilia Ley et al.51 E-selectina. Aunque las selectinas P y E tienen funciones redundantes, diversos estudios indican que la Pselectina es responsable del inicio del rodamiento, mientras que la E-selectina frena al leucocito y lo adhiere. Durante la respuesta inflamatoria, la adhesin de los leucocitos a las clulas endoteliales se controla merced al ligamiento de las selectinas vasculares a glicoligandos complementarios. La formacin de ligaduras lbiles, transitorias, entre ambos participantes, median los pasos iniciales de la cascada de adhesin.

Las tres selectinas pueden reconocer glicoprotenas y/o glicolpidos que contienen el tetrasacrido sialilLewis (sialil-CD14). Este tetrasacrido se encuentra en la superficie de todas las clulas mieloides circulantes y est compuesto por cido silico, galactosa, mucosa y N-acetil-glalactosamina. No est claro como las selectinas logran interacciones especficas con sus ligandos, dado la estructura hidrocarbonada comn. PSGL-1 y CD24 han sido caracterizados como posibles ligandos de la P-selectina. Para la L-selectina se han identificado cuatro posibles ligandos: GlyCAM-1, MAdCAM-1, CD34 y PSGL-1. Se desconocen ligandos especficos de la E-selectina. PSGL-1 es un homodmero formado por dos cadenas polipeptdicas de 120 kDa, constitutivamente expresado en todos los leucocitos y que se encuentra sobre las cimas de sus microvilli. PSGL-1 se liga a la P-selectina para garantizar la fase de rodamiento de la cascada de adhesin. Las integrinas son una gran familia de glicoprotenas heterodimricas transmembranares que ligan las clulas a las protenas de la matriz extracelular de los basamentos membranares o a ligandos en otras clulas (Figura 18). Las integrinas contienen subunidades 170 kDa y de 90-100 kDa, respectivamente. Algunas integrinas median el reconocimiento y las interacciones celulares directas. Las integrinas contienen sitios de acoplamiento para cationes divalentes (Mg2+ y Ca2+) que son necesarios para su funcin adhesiva. Las integrinas de los mamferos forman varias subfamilias asocian con diferentes subunidades de los leucocitos, y sufren un cambio conformacional tras la activacin leucoctica por citoquinas. Las integrinas incluyen cuatro heterodmeros diferentes: la -1) es crtica en la transmigracin de los neutrfilos e importante en la transmigracin de otros subtipos de leucocitos; CD11b/CD18 (Mac-1), exclusiva de granulocitos y de monocitos, comparte las funciones de LFA-1 y se almacena en grnulos especficos que son transportados a la superficie del granulocitos tras su activacin por molculas quimioatractoras; CD11c/CD18 (p150, 95) y CD11d/CD18. ICAM-1 (CD54), un miembro de la superfamilia inmunoglobulina de molculas de

adhesin, son los principales ligandos de LFA-1 y de Mac-1. Una mutacin en el gen que codifica la CD18 resulta en un trastorno gentico: deficiencia en la adhesin leucoctica (Leukocyte adhesin deficiency, LAD), en la que los pacientes padecen infecciones bacterianas recurrentes debido a la incapacidad para reclutar eficazmente granulocitos en el foco inflamatorio. El miembro ms importante de VLA-4 (Very late antigen, tambin denominado -4 se acopla a su ligando VCAM-1, y es el principal responsable para la adhesin de los linfocitos al endotelio vascular y del reclutamiento de los leucocitos en el foco inflamatorio. VLA-4 se liga a fibronectina y a VCAM-1 (CD106), un miembro de la superfamilia de las inmunoglobulinas que se expresa en la superficie de las clulas endoteliales tras su activacin citoqunica. En resumen, los leucocitos neutrfilos, que han contactado con los edoteliocitos a travs del sistema de selectinas, son activados inicialmente por el TNFlos leucotrienos producidos por los mastocitos y por otros neutrfilos, lo que conduce a la liberacin de pequeas cantidades de elastasa. La elastasa desprende la cubierta antiadhesiva de leucosialina (CD43) que recubre los neutrfilos, lo que permite que sus integrinas se expongan y completen la adhesin y extravasacin leucocitaria al formar puentes estables con las protenas de la matriz extracelular (Extra-cellular matrix, ECM). La seal binaria del engarce de las integrinas a la ECM junto con el estmulo producido por el TNFy el estallido respiratorio masivo de los leucocitos, lo que resulta en la liberacin de proteinasas elastasa, catepsina G y proteasa, protenas antimicrobianas BPIP (Bacterial permeability-increasing protein), defensinas, serprocidinas y azuricidina y Pedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 113 oxidantes perxido de hidrgeno, hipohaluros y cloraminas. Los oxidantes activan metaloproteinasas de la matriz (Matrix metalloproteinase, MMP) e inactivan los inhibidores de las proteasas, que provocan la destruccin tisular (Figura 19). Las MMP activadas inducen la liberacin de TNF por los macrfagos y por los monocitos atrados desde la sangre al tejido por la azuridina liberada por los neutrfilos. El TNF y las quimioquinas liberadas por los macrfagos y monocitos

atraen y activan ms neutrfilos. Por otro lado, el TNF y las quimioquinas macrofgicas se combinan con prostaglandina E2 (PGE2) y defensinas liberadas por neutrfilos, para reclutar linfocitos; mientras que los leucotrienos ayudan a atrapar clulas dendrticas presentadoras de antgenos. Y los linfocitos, con la ayuda de productos bacterianos, mantienen y potencian la activacin de los macrfagos que secretan proteasas, eicosanoides, citoquinas, especies reactivas de oxgeno y NO53. Existe un canon de la inmunologa para la activacin celular: las clulas B necesitan el emparejamiento receptor-antgeno ms seales facilitadoras de las clulas T; las clulas T necesitan el emparejamiento receptor-antgeno ms seales facilitadoras de las clulas presentadoras de antgenos (Antigen presenting cell, APC), y las APC, incluidos los macrfagos, necesitan citoquinas ms productos microbianos, o citoquinas ms ligamiento de CD14, o productos microbianos ms productos de las clulas husped necrticas. La cadena de seales comienza con la activacin de mastocitos y neutrfilos, y su activacin mantenida condiciona la activacin de APC, clulas T y clulas B en el proceso de transicin durante el que 114 Pedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 Figura 19. Los fagocitos activados engullen material extrao previamente opsonizado. Una vez formado el fagolisosoma, el leucocito vierte en l productos fuertemente oxidantes ROS, pptidos microbicidas e hidrolasas, que destruyen al microorganismo en el confinamiento vacuolar. Sin embargo, tales productos, en principio defensivos, pueden escapar al medio extracelular provocando autolesiones. la respuesta inflamatoria innata evoluciona a respuesta inmunolgica adaptativa. La combinacin de dao celular e infeccin mantiene la respuesta inflamatoria que provoca la aparicin en escena de la inmunidad adaptativa54. IIE. La respuesta del organismo La respuesta de fase aguda (Acute phase response, APR)55 se refiere a una amplia serie de acontecimientos fisiolgicos, que se inician inmediatamente despus de que haya tenido lugar una infeccin o cualquier otro tipo de agresin al organismo. La APR se caracteriza por fiebre, cambios en la permeabilidad vascular y cambios en los perfiles metablicos de varios rganos. La respuesta se inicia y coordina por diversos mediadores inflamatorios, especialmente

citoquinas, y hormonas, fundamentalmente glucocorticoides. Las primeras son liberadas precozmente desde el foco inflamatorio por fagocitos mononucleares, linfocitos y otros tipos clulas diferenciados activadas, y tienen potentes efectos locales y sistmicos. La cascada de mediadores induce la activacin, proliferacin, cambios del comportamiento y cambios metablicos de una serie de clulas y de tejidos. Todo ello con el objetivo de neutralizar el agente agresor, controlar el proceso inflamatorio y promover el proceso de reparacin y, as, iniciar el retorno a la normalidad fisiolgica. Es importante considerar la inflamacin y la consiguiente respuesta de fase aguda como un proceso homeosttico dinmico que involucra a todos los principales sistemas del organismo, a parte de los sistemas inmunolgico, cardiovascular y nervioso central (SNC). Normalmente, la APR perdura no ms all de unos pocos das; sin embargo, en casos de inflamacin recurrente o crnica, la permanencia aberrante de algunos de los ingredientes de la APR contribuye a erosionar el tejido conduciendo, a la larga, al establecimiento de una patologa definida en un determinado tejido, como arteriosclerosis o patologas secundarias a amiloidosis reactiva como en algunas enfermedades neurodegenerativas56. Un aspecto importante de la APR es que altera radicalmente el perfil biosinttico heptico. En condiciones normales el hgado produce, de manera estable, un espectro caracterstico de protenas plasmticas. Muchas de ellas tienen importantes funciones, requirindose elevadas concentraciones de tales protenas ante situaciones de un estmulo inflamatorio. Aunque la mayora de las protenas o reactantes de fase aguda son sintetizadas por los hepatocitos, algunas de ellas lo son por otros tipos celulares, que incluyen monocitos, clulas endoteliales, fibroblastos y adipositos. Se denominan protenas negativas de fase aguda aquellas cuya concentracin plasmtica decrece durante la APR; ello para incrementar la capacidad heptica para sintetizar protenas inducidas de fase aguda. De los muchos factores solubles que inician y mantienen una respuesta inflamatoria, varios de ellos regulan especficamente la transcripcin de protenas APR. Entre aquellos, IL-1, IL-6, IL-11, TNFinhibidor leucmico (Leukemia inhibitory factor, LIF), Transforming growth factor-

(Ciliary neurotrophic factor, CNTF), interfern (IFNretinoico o glucocorticoides, como factores positivos, y cido okadaico o insulina, como factores negativos. Un hecho importante de la APR es que IL-1 y TNFSNC, la sntesis de glucocorticoides por las glndulas suprarrenales; lo que resulta en una potenciacin cooperativa con IL-1 y TNFla sntesis de protenas APR por el hgado. Este efecto es coincidente con la atenuacin de la sntesis de IL-1 por los macrfagos, crendose una mecanismo de retroalimentacin entre el sistema inmunolgico y el SNC para reducir la sntesis de novo de citoquinas proinflamatorias. La expresin de los genes APR est regulada por factores nucleares (NF) de transcripcin: NF- B, C/EBP (CCAAT/enhancer binding protein beta), AP-1 y factor APR, as como por el receptor de glucocorticoides y factores de transcripcin hepatoespecficos como los factores nucleares hepatocticos (Hepatic nuclear factor, HNF). Existe, adems, una regulacin postranscripcional: acortamiento de la vida media de los mARNs (ARN mensajeros) de ApoAI (Apolipoprotena A1) y de albmina, mediada por TGF- 57, en el caso de las protenas APR negativas, y una estabilizacin de los mARNs de las protenas APR inducidas, por citoquinas y glucocorticoides. Las protenas APR desempean un amplio abanico de actividades que contribuyen a la defensa del husped: neutralizan a los agentes inflamatorios, ayudan a minimizar la extensin del dao tisular y particiPedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 115 pan en la reparacin y regeneracin tisular. El incremento en la concentracin plasmtica de muchos de los componentes del sistema del complemento srico y su posterior activacin son esenciales para la acumulacin local de fagocitos y de protenas plasmticas, y participan en la destruccin de los agentes infecciosos, en la eliminacin de cuerpos extraos y de restos celulares, y en la reparacin del tejido lesionado58. Los componentes del sistema de la coagulacin, como el fibringeno, juegan un papel esencial en la promocin de la cicatrizacin. Los inhibidores de las proteinasas neutralizan a las hidrolasas lisosmicas liberadas tras la infiltracin de monocitos y de neutrfilos activados, controlando as la cascada proinflamatoria dependiente de hidrolasas. Protenas acopladoras de metales quelan el hierro perdido durante la inflamacin impidiendo

su captacin por las bacterias, y actan como exclusas de radicales libres de oxgeno. En general, las protenas APR son inducidas entre el 50% y varias veces sus niveles normales, pero las denominadas protenas APR principales multiplican x1000 su produccin. Este grupo incluye el componente amiloide srico A (Serum amyloid A protein, SAA) y protena C reactiva (C-reactive protein, CRP), en humanos, o su homlogo componente amiloide srico P (Serum amyloid P component, SAP) en el ratn. Las protenas APR principales en los mamferos incluyen SAA y CRP o SAP, dependiendo de la especie animal. CRP y SAP son pentraxinas, protenas con una organizacin homopentamrica caracterstica (Figura 20). Generalmente solo una de esas protenas es una protena APR en una especie determinada: en humanos, la concentracin plasmtica de SAP, en ml-1, sin que se modifique en situaciones inflamatorias; no es, por tanto, una protena APR en humanos. ml-1) puede incrementar ms de mil veces en situaciones inflamatorias y dependiendo de la gravedad del cuadro; un comportamiento que la identifica como una verdadera protena APR en humanos. La induccin especfica de especie de CRP o de SAP durante la APR, sugiere que la exigencia de una pentraxina debe tener responder a alguna actividad fisiolgica comn, tal vez su capacidad de acoplarse a la cromatina. La protena C-reactiva, que debe su nombre a su capacidad de ligar el polisacrido C del Pneumococcus, presenta una estructura anular (donuts) pentamrica y acta como una opsonina para las bacterias, parsitos y complejos inmunolgicos, y puede activar la va clsica del complemento srico; tambin puede modular el comportamiento de neutrfilos, monocitos y plaquetas; adems, se une a histonas y a pequeas partculas de ribonucleoprotenas nucleares (Small nuclear ribonucleoprotein particle, snRNPs). SAP, que presen116 Pedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 Figura 20. A. Las pentraxinas son una familia de protenas caracterizadas por la dependencia del calcio para atrapar ligandos. El nombre se refiere a la simetra radial de la molcula formada por cinco monmeros que conforman un anillo de 95 de dimetro y 35 de profundidad. Divididas en dos grupos, cortas y largas, a las primeras pertenecen la protena C reactiva y el componente amiloide P srico dos protenas de fase

aguda, y a las segundas la pentraxina 3 (una molcula inducida por IL-1, reguladora del complemento y buen ndice plasmtico del infarto del miocardio (Tomada de: Emsley J, White HE, OHara BP, Olivia G, Srinivasan N, Tickle IJ, Blundell TL, Pepys MB, Wood SP (1994) Structure of pentameric human serum amyloid P component. Nature 367: 338-45. B. El proteosoma es otra estructura en donut, en este caso formada por cuatro heptmeros que conforman un espacio para el procesamiento de protenas (Tomada de: Rechsteiner M, Hill CP (2005) Trends in Cell Biology 15: 2733). ta una estructura similar a un par de donuts apilados, es la forma circulante del componente amiloide P, que es un componente de todos los depsitos amiloides. Es un componente normal de los basamentos membranares y comparte las funciones de la CRP. IL-6 sola o en combinacin con ILe inmediato de mARN-CRP en hepatocitos humanos en cultivo. Protena amiloide A srica es el nombre colectivo dado a una familia de protenas polimrficas codificadas por multitud de genes en diversas especies de mamferos. Las SAA son pequeas apolipoprotenas que se asocian rpidamente durante la APR con lipoprotenas de densidad elevada (High-density lipoprotein 3, HDL3). Aunque no est bien establecida la significacin funcional de la asociacin entre SAA y HDL3, el desplazamiento o reemplazamiento de la ApoAI por SAA puede interferir el metabolismo del colesterol. SAA puede representar una seal por la que HDL3 se reconduce hacia los macrfagos en vez de a los hepatocitos (la seal prohepatoctica sera ApoAI), lo que favorecera el engullimiento y retirada de restos lipdicos procedentes de clulas daadas en el proceso inflamatorio. Aunque no est bien comprendido su papel en la APR, el SAA inhibe la fiebre y la sntesis de PGE2 en el hipotlamo, inducidas por ILinducida por trombina y la explosin respiratoria de los fagocitos activados. Por otro lado, la presencia mantenida de las protenas APR causada por un proceso inflamatorio crnico puede acarrear consecuencias desastrosas: los depsitos amiloides que se acumulan en bazo, rin o hgado amiloidosis reactiva o secundaria-, producidos en enfermedades crnicas o recurrentes como tuberculosis, lupus eritematoso o artritis reumatoide, estn compuestos, principalmente, de amiloide A derivado, probablemente por proteolisis,

del precursor SSA. El componente amiloide P, derivado de SAP, est asociado con placas de amiloide A y otras formas de depsitos amiloides, incluidas las presentes en la enfermedad de Alzheimer. Y la asociacin de SSA con HDL3 sugiere la participacin de las protenas APR en la arteriosclerosis. Otra protena APR es la fosfolipasa A2 (PLA2). PLA2 hidroliza fosfolpidos generando cido araquidnico, y cataliza el paso limitante en la formacin de eicosanoides. En humanos se han identificado diferentes formas de PLA2: varias formas citoslicas, y dos formas secretadas (PLA2 soluble: sPLA2), los tipos I secretado por el pncreas y II producido por diferentes tipos celulares, especialmente los hepatocitos. La forma soluble heptica es estimulada por IL6 y TNFLos fosfolpidos (Phospholipid, PL) estn asimtricamente distribuidos entre las lminas interna y externa de las membranas biolgicas: la lmina externa contiene primariamente esfingomielina (Sphingomyeline, SM) y fosfatidilcolina (Phosphatidyl choline, PC), mientras que la lmina interna incluye fosfatidilserina (Phosphatidyl serine, PS) y fosfatidiletanolamina (Phosphatidyl ethanolamine, PE). El mantenimiento de esta asimetra es dependiente de energa y requiere trifosfato de adenosina (Adenosine triphosphate, ATP). En ausencia de ATP, se produce un intercambio entre los fosfolpidos de las lminas interna y externa (flip-flop). La PLA2 (Phospholipase A2) pancretica, soluble, estrechamente relacionada con la sPLA2 II en trminos de estructura y de funcin, es capaz de hidrolizar los PL de la lmina interna pero no los de la externa; por su parte, la sPLA2 II es capaz de interaccionar con los PL situados en la lmina externa cuando la membrana est sometida al fenmeno de flip-flop. Es posible que esta capacidad de la sPLA2 II de discernir entre membranas normales y membranas con flip-flop sea aprovechado por protenas APR para atacar clulas daadas. Tras la interaccin con sPLA2 II, las clulas incrementan el contenido de liso-PL (PL que han perdido un cido graso), especialmente lisoPC, en la lmina membranar externa. Esta modificacin, junto con la presencia de PS y de PE, distorsiona el empaquetamiento de los PL en la estructura membranar externa y expone sitios, hasta entonces crpticos, que permiten el atracamiento de la CRP sobre la superficie externa de la membrana celular.

Una vez anclada, la CRP induce, a travs de la va clsica, la activacin del complemento que, a su vez, potencia el influjo de fagocitos al foco inflamatorio (por generar C5a) y favorece la fagocitosis de las clulas que incorporan sobre su superficie CRP y complemento59 (Figura 21). CRP y sPLA2 han permanecido muy conservadas durante la evolucin de los vertebrados y pueden actuar conjuntamente para favorecer la fagocitosis de clulas comprometidas metablicamente. PresumiblePedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 117 mente este mecanismo ha evolucionado para retirar clulas isqumicas y detritus tisulares de las heridas a efectos de permitir una rpida reparacin del tejido lesionado. Sin embargo, la inhibicin de la activacin del complemento parece que reduce la necrosis tisular, por ejemplo tras un infarto del miocardio. Es posible que la accin combinada de sPLA2, CPR, complemento y fagocitosis, en los tejidos daados, no haya conseguido la suficiente fineza para discriminar entre clulas daadas reversible o irreversiblemente. Por ello, las correlaciones clnicas entre la activacin de sPLA2, CPR y complemento e IL6, observadas en varias enfermedades, incluidas sepsis, artritis o infarto del miocardio, pueden reflejar un mecanismo patognico de base que contribuye a la inflamacin y, a la postre, al dao tisular. Con todo, un nmero de protenas APR son capaces de inhibir la accin de los anteriores actores. Adems, componentes destacados de la APR son protenas microbicidas60. Durante la situacin de sepsis se produce una marcada elevacin de adrenomedulina (AM) en el plasma de los pacientes. AM se produce como prohormona cuyo procesamiento origina dos pptidos: AM y PAMP (Pathogen-associated molecular pattern). AM comparte homologa con CGRP y amilina, y circula preferentemente vehiculado por una protena (AMbinding protein, AMBP-1) identificada como el factor H del sistema del complemento, un inhibidor de las vas clsica y alternativa de la cascada del complemento. AM y PAMP inducen la produccin de MIF (Macrophage migration Inhibitory factor) y de IL-6, dos factores moduladores, y deprimen la expresin de TNFmolculas antimicrobianas, cuyo precursor, producido en epitelios, mucosas y neutrfilos, est bajo control de IL-1 y activacin de NF-

capacidad microbicida los pptidos antibiticos de los eucariotes superiores. La diversidad de pptidos antimicrobianos descubiertos es tan grande cerca de 500, que es difcil categorizarlos excepto sobre la base de sus estructuras secundarias. El principio estructural primario es la 118 Pedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 Figura 21. Papel hipottico de la fosfolipasa A2 secretada tipo II (sPLA2) y de la protena C reactiva (CRP) en la promocin de la fagocitosis de las clulas lesionadas durante la fase inicial del proceso inflamatorio. (a) Fosfatidilserina (PS) y fosfatidiletanolamina (PE) solo se localizan en la lmina interna de la bicapa fosfolipdica que conforma la membrana celular. Esta asimetra es un proceso dependiente de energa que consume ATP y est controlada por transportadores especficos flipasas que gobierna la translocacin hacia el interior (flip) o hacia el exterior (flop). (b) Los fosfolpidos (PLs) de las membranas daadas pierden dicha simetra (flipflop ) como consecuencia de la baja concentracin de ATP intracelular. (c ) Las membranas flipflopeadas, pero no las membranas normales, son susceptibles a la hidrlisis por sPLA2, que genera lisofosfolpidos (LPLs) en la membrana externa. (d) La presencia de LPLs en tal localizacin crea lugares de acoplamiento para la CRP, que activa, sobre la superficie celular y a travs de la va clsica, al complemento (C). Por su parte, el exceso de aminofosfolpidos acumulado en la capa externa se resuelve mediante su eliminacin en forma de micropartculas (MPs) procoagulantes. La participacin de las MPs en la coagulacin viene respaldada por el fenotipo del sndrome de Scott, un raro trastorno de la coagulacin en el que la exposicin de PS y la extrusin de esos fragmentos de membrana son deficientes (Modificada de: Erik Hack et al.55; fig. 1, pg. 112). capacidad de la molcula para adoptar una forma en la que grupos de aminocidos catinicos e hidrofbicos se organicen espacialmente en sectores discretos de la molcula (diseo anfiptico). Para actuar aprovechan el taln de Aquiles de las membranas procariticas. Las membranas de las bacterias se organizan de tal manera que la zona ms externa de la bicapa, la superficie expuesta al medio ambiente, est ampliamente poblada de lpidos con cabezas fosfolipdicas polares (cargadas negativamente). Por el contrario, la lmina externa de los eucariotes est compuesta, principalmente, de lpidos sin carga neta (en los mamferos, colesterol); la prctica totalidad de las cabezas polares se congregan en la lmina interna, cara al citoplasma. El modelo que explica la accin de la mayora de los pptidos antimicrobianos es el de Shai-MatsuzakiHuang61 (SMH) o modelo de envoltura las molculas

peptdicas acaban por envolver y asfixiar al microorganismo y/o poro tipo donut las molculas perforan la pared bacteriana, que prePedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 119 Figura 22. Las prostaglandinas (PG) son pequeas molculas lipdicas que regulan numerosos procesos orgnicos. La produccin de PG comienza con la liberacin de cido araquidnico o eicosanoico de los fosfolpidos (PL) de las membranas celulares, por accin de la fosfolipasa A2 en respuesta a estmulos inflamatorios. El cido araquidnico es convertido a PGH2 por las enzimas ciclo-oxigenasas COX-1 y COX-2 (sintasa de prostaglandina-endoperxido H). Se considera que COX-1 se expresa constitutivamente en la mayora de los tejidos y acta para mantener procesos homeostticos (ej. secrecin de moco o funcin renal). COX-2, por el contrario, es una enzima inducible y est involucrada, primariamente, en la regulacin de la inflamacin. Est en discusin una tercera forma (COX3). La va COX da lugar a prostaglandinas, tromboxanos y prostaciclinas. Prostaciclinas y derivados ciclopentanona-PG (cyPG) PGD2 y su metabolito PGJ2 son eficaces antiinflamatorios, mientras que las PG clsicas y tromboxanos son proinflamatorias. El cido araquidnico puede ser metabolizado a travs de otras dos vas enzimticas: lipoxigenasas dan lugar a los hidroperxidos leucotrienos y lipoxinas; y citocromo P450 forma derivados epxidos. Mientras que los leucotrienos son potentes proinflamatorios, las lipoxinas frenan el proceso inflamatorio. Durante el desarrollo del proceso inflamatorio se produce un desplazamiento hacia lipoxinas; ello mediante la reorientacin del metabolismo hidroperxido hacia intereses antiinflamatorios bajo la direccin de los productos de la va COX. Existe una cuarta va metablica del cido araquidnico, no enzimtica, dependiente de la produccin de radicales libres de oxgeno [O*] por los fagocitos activados, que da lugar a isoprostanos. ltimamente se ha descubierto que resolvinas cido eicosapentanoico (EPA) y cido docosahexanoico (DHA) son potentes agonistas de las lipoxinas como antiinflamatorios. supone la interaccin del pptido con la membrana, seguido del desplazamiento de los lpidos membranares, alteracin de la estructura membranar y, en ciertos casos, entrada del pptido en el interior celular. En general, los pptidos que operan segn el modelo SMH destruyen microbios a concentraciones micromolares. Epitelios, mucosas y fagocitos humanos producen defensinas tanto constitutivamente como inducidas por citoquinas, y como otros pptidos microbicidas no inducen resistencia bacteriana, son poderosos adyuvantes y solapan acciones con las citoquinas. Por otro lado, el hgado es el principal rgano de

aclaramiento de frmacos de la circulacin y expresa numerosas enzimas metabolizadoras de frmacos (Drug-metabolizing enzymes, DMEs), incluido el citocromo P450 (CYP), flavina-monooxigenasa (FMO) y muchas otras que trabajan como captadores y extrusores que influyen de manera importante en la disposicin y catabolismo de frmacos. La regulacin de enzimas de la familia CYP han sido estudiadas desde hace dcadas en modelos animales de enfermedad infecto/inflamatoria; la mayor parte de las enzimas y sus actividades son reprimidas, lo que puede conducir a una disminucin del aclaramiento de frmacos y, ello, a incrementos en los niveles de los compuestos en plasma y a la subsecuente toxicidad. Por el contrario, la represin de CYP puede proteger de la toxicidad de aquellos compuestos que son bioactivados por esas enzimas. Ello hace que este nuevo aspecto de la incidencia de la inflamacin sobre el sistema CYP deba incluirse en el estudio de la respuesta de fase aguda, siendo las CYP protenas negativas de fase aguda62. IIF. Autorregulacin del proceso Poco despus de iniciarse los ciclos proinflamatorios descritos, se accionan una serie de frenos en los que las lipoxigenasas son piezas importantes. El araquidonato liberado de los neutrfilos sirve de sustrato a la 5-lipoxigenasa de los propios neutrfilos para generar el proinflamatorio leucotrieno B4. Sin embargo, cuando los neutrfilos infiltran los tejidos, tambin ceden araquidonato a estos, donde las clulas expresan 15-lipoxigenasa. La 15-lipoxigenasa produce lipoxinas a partir del araquidonato. Las lipoxinas son una clase de eicosanoides oxidados que se acoplan a receptores cuya seal bloquea el influjo de neutrfilos. Los neutrfilos tambin pasan a otras clulas un metabolito intermedio de la 5-lipoxigenasa: leucotrieno A4, al que la 15-lipoxigenasa convierte tambin en lipoxina. De esta manera, interacciones intercelulares favorecen una transicin en el perfil de los productos del araquidonato: desde los proinflamatorios leucotrienos a los derivados antiinflamatorios de la clase ciclopentanonas (Cyclopentanone prostaglandin, CyPGs: PGF2g, PGA1 y PGD2), que inhiben la actividad, no la produccin, de los factores de transcripcin AP-1, STAT (Signal transducer and activator of transcription) y NFFigura 22). Por su parte, nuevas familias de mediadores qumicos resolvinas y protectinas derivados del cido eicosapentanoico

(EPA, 20:5) y del docosahexanoico (DHA, 22:6) ambos cidos grasos poliinsaturados -3 emergen, junto con las lipoxinas, como potentes reguladores del proceso inflamatorio. Tambin, fosfolpidos de las membranas de las clulas endoteliales vasculares, oxidados por los ROS producidos tras la activacin de los fagocitos, atemperan la expresin de molculas de adhesin63. A la vez, productos microbianos y citoquinas inducen la produccin de ciclooxigenasa 2 (COX2) por los macrfagos64. La COX2 convierte araquidonato a prostaglandina E2 (PGE2), que incrementa la permeabilidad vascular y, con ello, el escape del lquido intravascular hacia el intersticio tisular (edema). Sin embargo, cuando la concentracin local de PGE2 incrementa consigue un efecto inhibidor de la COX2 y de la 5-lipoxigenasa, a la vez que induce la expresin de 15-lipoxigenasa en los neutrfilos. Tal efecto, diferido, desplaza el metabolismo del araquidonato hacia la formacin de lipoxinas en los propios neutrfilos. De esta manera, tras varias horas de acciones la seal proinflamatoria inicial de la PGE2 se torna en una seal antiinflamatoria65. Despus del potasio, ATP es la molcula intracelular ms abundante. Se conocen bien sus funciones como fuente de energa, como cofactor y como sustrato de un vasto nmero de reacciones, incluso de su papel como neutransmisor. Por su parte, ADP (Adenosine diphosphate), AMP (Adenosine monophosphate) y adenosina, subproductos del metabolismo de ATP, tambin muestran una serie de efectos bioqumicos y fisiolgicos, primariamente como men120 Pedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 sajeros intercelulares. La adenosina puede generarse a partir de nucletidos de adenina, bien intracelularmente como producto de la desfosforilizacin de AMP o en el medio extracelular como resultado de la desfosforilizacin de AMP por ectonucleotidas. Ratones privados de ectonucleotidasa CD39 hiperreaccionan a diferentes agresiones cutneas, y los que carecen de receptores purinrgicos A2a sucumben a dosis subletales de microbios. Tales observaciones sugieren que CD39 degrada ATP extracelular y ADP secretado por clulas activadas o liberado desde clulas daadas, generando adenosina que acta suprimiendo la respuesta inflamatoria de las clulas vecinas66. Mecanismos contrarreguladores, evolutivamente

muy conservados, limitan normalmente la respuesta inflamatoria aguda y previenen la difusin de los mediadores inflamatorios al torrente circulatorio. Clulas inmunocompetentes activadas liberan receptores truncados receptores solubles de TNF (sTNFR), que captan TNF libre circulante y neutralizan sus acciones proinflamatorias y potencialmente txicas. Otros factores contrarreceptores son el antagonista del receptor de IL-1 y el receptor seuelo IL-1R tipo 2. Por su parte, se producen inactivadores del complemento srico y citoquinas antiinflamatorias, como la prototpica IL-10 y el TGFespecficamente la liberacin de TNF y de otros mediadores proinflamatorios. Glucocorticoides adrenales, adrenalina, hormona estimulante melanoctica(Melanocyte stimulating hormone, -MSH) y otras clsicas hormonas de estrs (ej. espermina) inhiben la sntesis de citoquinas; ello, dentro de las interacciones o interfaz inmunoneuroendocrina67. Las citoquinas de la familia IL-6 actan va de complejos receptores que contienen, al menos, una subunidad de la protena de transduccin de seales gp130. La familia comprende IL-6, IL-11, CNTF, cardiotrofina1 (CT-1), LIF, neuropoyetina (NPN), oncostatina M (OSM), IL-27 e IL-31. Sobre las clulas diana, IL6-se asocian con un dmero de gp130 e, inmediatamente, se inicia la cascada de seales intracelulares (Figura 23). Gp130 se expresa en prcticamente todas las clulas del organismo; sin embargo, IL-6R (IL-receptor) se expresa principalmente en hepatocitos induce la seal APR, neutrfilos, monocitos/macrfagos y algunos linfocitos. Adems, existe una forma soluble de IL-6R (sIL-6R) que se produce por dos mecanismos: procesamiento alternativo del mARN correspondiente, o por proteolisis parcial del IL-6R transmembranar. Lo interesante de sIL-6R es que es capaz, unido con su ligando IL-6, de estimular clulas que slo expresan gp130; un proceso denominado transealizacin. IL-6 desempea una serie de actividades que son crticas para resolver la inmunidad innata y/o promover la adquirida. La transicin entre inmunidad innata y adquirida es un acontecimiento central en la resolucin de cualquier situacin inflamatoria, y la alteracin de la capacidad reguladora de la IL-6 puede distorsionar la respuesta inmune y condicionar el comienzo de trastornos crnicos o autoinmunes. La IL-6, a travs de su capacidad de

transealizacin, orquesta el reclutamiento leucocitario, su activacin y su eliminacin apopttica, y a la vez, mediante la regulacin de la secrecin de citoquinas, abre el camino a la fase inmunoadquirida68. Por otro lado, la inflamacin en los tejidos perifricos altera la sealizacin neuronal en el hipotlamo, habindose identificado bases moleculares comunes para la comunicacin en neuronas y en clulas inmunocompetentes. Por ejemplo, las neuronas cerebrales pueden sintetizar y expresar TNF e IL-1, y esas citoquinas pueden participar en la comunicacin neuronal. Esta comunicacin es bidireccional, porque las citoquinas pueden inducir la liberacin de glucocorticoides y, a su vez, los glucocorticoides suprimen la sntesis continuada de citoquinas. Adems, las clulas inmunocompetentes pueden producir neuropptidos, acetilcolina y otros neurotransmisores (Figura 24). Pedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 121 Figura 23. Transealizacin. Va clsica de interaccin IL-6/IL6R/gp130, y generacin de sIL-6R que, tras acoplarse con su ligando, activa clulas que solo expresan una cadena gp130. Modificada de: Stefan Rose-John et al.68; fig. 1, pg. 228. La mejor comprensin de los mecanismos bsicos que regulan la inflamacin ha permitido identificar un mecanismo neural que inhibe la activacin de los macrfagos a travs de la seal parasimptica. Se denomina va o reflejo antiinflamatorio colinrgico 69; ello porque la acetilcolina, principal neurotransmisor parasimptico, desactiva a los macrfagos a ella expuestos (Figura 25). El nervio vago inerva los principales rganos, incluyendo aquellos que albergan al sistema reticuloendotelial (hgado, pulmones, bazo, riones e intestino). La activacin experimental de la va antiinflamatoria colinrgica, mediante la estimulacin elctrica directa de las fibras vagales eferentes, inhibe la produccin de TNF en hgado, bazo y corazn, y atena la concentracin srica de TNF durante la endotoxemia. Por su parte, la vagotoma exacerba la respuesta del TNF al estmulo inflamatorio y sensibiliza a los efectos letales de la endotoxina. El encaje entre el sistema nervioso colinrgico y el sistema inmunolgico innato es un receptor presente en la superficie de los macrfagos: receptor nicotnico de acetilco bungarotoxina. La exposicin de macrfagos humanos pero no de monocitos circulantes a nicotina o a acetilcolina inhibe la liberacin de TNF, IL-1 e IL-18 en respuesta a endotoxina.

Los macrfagos tisulares, pero no los monocitos circulantes, producen la mayora del TNF que aparece en la circulacin sistmica durante una respuesta inflamatoria excesiva. La interaccin entre el receptor colinrgico en los macrfagos y su ligando, inhibe la sntesis de citoquinas proinflamatorias (TNF, IL-1 e IL-18), pero no las citoquinas antiinflamatorias (IL-10) (Figura 26). La acetilcolina inhibe la expresin de la protena TNF en macrfagos, pero no la produccin del mARN correspondiente, lo que indica que la activacin del receptor colinrgico transduce seales intracelulares 122 Pedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 Figura 24. Descripcin de los lazos de retroalimentacin negativa que pueden operar durante la inflamacin. (a) Citoquinas (IL-1 y TNF) producidas por monocitos/macrfagos activados estimulan el cerebro, que responde produciendo ACTH que, subsiguientemente, induce la liberacin de glucocorticoides (GC) desde la glndula adrenal. GC e IL-6 suprimen la produccin de IL-1 y de TNF. (b) IL-6 producida por macrfagos y otras clulas activadas, induce la sntesis heptica de protenas APR (APP). Las APP, en cooperacin con IL-6, inducen la produccin de antagonista del receptor de IL-1 (IL-1ra), y la liberacin, por siega de la secuencia epimembranar, de receptores de TNF solubles (sTNF-R). IL-1ra y sTNF-R bloquean el efecto de los respectivos ligandos. que inhiben la sntesis de citoquinas en un estadio postranscripcional. Desde una perspectiva simple existen razones por las que una va antiinflamatoria con base neural es ventajosa. La trama antiinflamatoria difusible, que incluye glucocorticoides, citoquinas antiinflamatorias y otros mediadores humorales es lenta, difusa, no integrada y dependiente de gradientes de concentracin. Por el contrario, el reflejo antiinflamatorio colinrgico es discreto y localizado en los tejidos donde la invasin y la lesin se produjeron (Figura 27). El sistema nervioso central recibe seales sensoriales desde el sistema inmunolgico a travs de rutas humorales y neurales. El sistema inmunolgico funciona como un sexto sentido que detecta la invasin microbiana y produce molculas que trasladan esta informacin al cerebro. TNF y otros mediadores inmunolgicos pueden acceder a los centros cerebrales carentes de la barrera hematoenceflica, lo que ocurre en la regin circunventricular cerebral. Esta ruta humoral de comunicacin entre los sistema inmunolgico y nervioso ha sido involucrada en el desarrollo de la fiebre, de la anorexia y de la activacin de la

respuesta hipotlamo-hipofisaria a la infeccin y al estrs. La liberacin de citoquinas en el foco inflamatorio activa fibras sensitivas que ascienden en el vago hasta sinapsar en el ncleo del tracto solitario, y un incremento de las seales vagales eferentes suprime, como se ha indicado, la liberacin de citoquinas en la periferia a travs de la va antiinflamatoria colinrgica que activa receptores nicotnicos en los macrfagos. El reflejo antiinflamatorio se describe como localizado, rpido y discreto; pero puede igualmente inducir respuestas antiinflamatorias humorales sistmicas. Ello ocurre porque la activacin del nervio vago puede ser transferida a la formacin reticular medular, al locus caeruleus y al hipotlamo, lo que conduce a una liberacin incrementada de ACTH (Adrenocorticotropic hormone) por la hipfisis anterior. Pero la produccin de citoquinas en los tejidos causa dolor, lo que proporciona otro mecanismo para transferir informacin desde el sistema inmunolgico al cerebro. Pedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 123 Figura 25. La va antiinflamatoria colinrgica. La activacin eferente en el nervio vago conduce a la liberacin de acetilcolina (ACh) en el tejido reticuloendotelial, que incluye hgado, corazn, bazo y tracto gastrointestinal. ACh interacta con bungarotoxina sobre los macrfagos; interaccin que inhibe la liberacin de TNF1 HMGB1 y otras citoquinas. Modificada de: Kevin J. Tracey69; fig. 1, pg. 855. Figura 26. Circuitera del reflejo inflamatorio. Sustancias inflamatorias producidas en el foco inflamatorio activan seales aferentes que son conducidas al ncleo del tracto solitario; subsiguientemente, la activacin vagal eferente inhibe la sntesis de citoquinas a travs de la va colinrgica antiinflamatoria: reflejo inflamatorio. La informacin puede llegar tambin al hipotlamo y al complejo dorsal del vago, lo que estimula la liberacin de ACTH, que activa la va humoral antiinflamatoria. La activacin del sistema nervioso simptico por respuestas de ansiedad o al dolor o a travs de seales directas desde los ncleos cerebrales indicados, pueden incrementar las concentraciones locales de catecolaminas que ayudan a suprimir la inflamacin. Modificada de: Kevin J. Tracey69; fig. 3, pg. 857. Dolor y estrs resultan en un incremento de adrenalina y noradrenalina que puede inhibir tambin la activacin macrofgica y suprimir la sntesis de TNF y otras citoquinas. La elevada actividad simptica y el incremento resultante de las catecolaminas estimulan

-adrenrgicos, de IL-10, una potente citoquina antiinflamatoria. As, los efectos antiinflamatorios de los sistemas nerviosos simptico y parasimptico se comprometen sinrgicamente para asegurar este objetivo. IIG. Microorganismos e inmunidad innata* La palabra alemana toll tiene una traduccin poco fiable: fantstico, disparatado o asombroso. Christiane Nsslein-Volhard y Kathryn Anderson utilizaron por vez primera esa palabra, en un contexto cientfico, para nominar a un gen que descubrieron en un barrido analtico del genoma de Drosophila; el gen responsable de un fenotipo que pas a denominarse Toll. Aquel trabajo pionero, publicado en 198470, identificaba un grupo de diez genes; todos ellos producan fenotipos similares, denominados grupo dorsal. Las mutaciones por defecto de cualquiera de tales genes resultan en el fracaso en la diferenciacin en elementos que conforman el patrn axial dorsoventral, lo que conduce a una casi total letalidad embrionaria. Durante los diez aos siguientes todos los genes del grupo dorsal fueron clonados, lo que permiti completar el esquema de cmo se organiza el proceso morfogentico en la mosca. Poco despus de la fertilizacin, una seal restringida al polo ventral activa una cascada de proteasas en la que el miembro terminal Easter procesa al precursor inactivo de Sptzle, un ligando de Toll, un receptor transmembranar de la clase I (receptores con un sencillo dominio transmembranar). Mediante este mecanismo se activa Toll en posicin ventral en el embrin; ello causa la relocalizacin de un factor de transcripcin factor Dorsal desde posicin ventral a otra dorsal. El gradiente ventrodorsal formado de este factor de transcripcin y la informacin contenida en este gradiente morfogentico se utilizan para dirigir, subsecuentemente, la diferenciacin del citado eje corporal71. 124 Pedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 Figura 27. Vas antiinflamatorias difusibles versus neurales. (a) Vas difusibles. La circulacin vehicula clulas inflamatorias (monocitos y neutrfilos) y citoquinas a y desde el foco inflamatorio. Las respuestas dependen del gradiente de concentracin, son lentas y no estn integradas. Las sustancias inflamatorias producidas en el foco inflamatorio (TNF-1, HMGB1) difunden hacia el torrente MSH, IL-10, espermina) difunden a la zona lesionada.

(b) Vas neurales. La regulacin antiinflamatoria de los macrfagos tisulares es local, rpida e integrada a travs del CNS. La ACh inhibe la liberacin de TNFpredominantemente inhiben la liberacin de TNFpero pueden, en determinadas circunstancias, liberar TNFLa sustancia P, un neuropptido, puede estimular la sntesis de citoquinas y amplificar la respuesta inflamatoria local a la vez de mediar en la sensacin dolorosa. Modificada de: Kevin J. Tracey69; fig. 2, pg. 856. * La diseccin de los mecanismos involucrados en la inmunidad innata ha dado lugar a una sopa de letras que se resume en la Tabla III. La secuencia de Toll, determinada en el ao 198872, revel una estructura tripartita: una regin N-terminal extracelular que contiene series en tndem de un corto motivo rico en leucina repeticin rica en leucina (LRR); una estructura helicoidal monocatenaria transmembranar, y un dominio C-terminal citoslico ntimamente emparentado con el dominio C-terminal del receptor de interleuquina-1 (IL-1R) de los vertebrados73 (Figura 2874). Ello sugiri que tal dominio endocelular regin homloga del receptor Toll y del receptor de IL-1 (TIR) debera estar involucrado no solo en el contexto restringido del desarrollo de los insectos sino tambin en la generacin de la respuesta inicial a la infeccin por los inmunocitos humanos. La hiptesis propuesta recibi confirmacin en el ao 1995, cuando el grupo de Hoffmann75, en Estrasburgo, descubri que Toll y algunos otros miembros gnicos del grupo dorsal estaban involucrados no solo en la morfognesis sino tambin en la respuesta inmunolgica innata a microorganismos patgenos, en la Pedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 125 Tabla III. Sopa de letras. mosca76. Poco despus, se identificaron, en vertebrados, una docena de receptores homlogos a Toll: receptores tipo Toll (TLR)77. Hasta ese momento, los inmunlogos haban enfocado su inters sobre la respuesta inmunolgica adaptativa o adquirida y, por ello, a la generacin de la inmensa diversidad en los repertorios de anticuerpos78. Por el contrario, pensaron que la respuesta innata era una parte menos importante de la respuesta inmunolgica y, en este escenario, solo se ocuparon del contexto del complemento. Dos acontecimientos dados a conocer en el ao 1988 dieron un vuelco a la situacin: demostraron el papel importante jugado por TLR en el reconocimiento de productos microbianos,

y en el acoplamiento de la inmunidad innata a la adquirida. Primero79, la seal inducida por un potente componente inmunoestimulador de las bacterias gramnegativas lipopolisacrido, LPS exige TLR. Segundo80, la activacin del TLR induce la expresin de molculas coestimuladoras requeridas para la activacin de las clulas T en la respuesta adaptativa. Tales hallazgos condujeron a la rpida expansin de la investigacin en el campo de la respuesta inmunolgica innata en general y en los TLR en particular. El principal desencadenante de la inflamacin es el reconocimiento de productos microbianos por receptores del sistema inmunolgico innato. Este acontecimiento de reconocimiento molecular es, conceptualmente, bastante distinto del reconocimiento de aquellos compuestos por los receptores antignicos de los linfocitos T y B81. La poblacin total de linfocitos expresa miles de millones de receptores especializados cada uno de ellos generados aleatoriamente en la lnea somtica y que, en conjunto, son capaces de reconocer cualquier diana microbiana. En el ao 1989, Janeway propuso que los mecanismos efectores innatos se inician va de la deteccin especfica de microbios por receptores no clonales, codificados en la lnea germinal, que son esenciales para la deteccin inmediata y control de la infeccin en los mamferos82. Los receptores innatos estn prefijados; ello significa que sus dianas microbianas han sido evolutivamente 126 Pedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 Figura 28. Los receptores tipo Toll (TLR) y los receptores de interleuquina 1 (IL1R) comparten un dominio citoplasmtico muy conservado: dominio Toll / IL-1R (TIR). El dominio TIR se caracteriza por la presencia de tres regiones homlogas (1, 2 , 3). A pesar de la similitud de los dominios C-terminales, sus regiones extracelulares son completamente diferentes. IL-1R tiene tres dominios tipo inmunoglobulina (Ig); TIR tiene repeticiones en tndem de regiones ricas en leucina (LRR). seleccionadas y, por definicin, estn delimitadas. Esta restriccin83, conseguida evolutivamente, permite que unos pocos receptores innatos detecten el amplio rango de la diversidad microbiana. Esta estrategia ha sido denominada reconocimiento de patrones moleculares asociados a patgenos (PAMP), y los receptores innatos involucrados receptores de reconocimiento de patrones (PRR)84. As como el receptor morfognico Toll en Drosophila liga Sptzle, los diferentes receptores TLR en vertebrados en general

y en humanos en particular, acoplan determinados ligandos. El lipopolisacrido (LPS)85 de las bacterias gram negativas y el correspondiente TLR de reconocimiento (TRL4) son los representantes genuinos de PAMP y de PRR, respectivamente. Sin embargo, el espectro PAMP / PRR se extiende ms all de los componentes prototpicos (Figura 29). La incapacidad para identificar un receptor de LPS fue una barrera para comprender como las bacterias gram-negativas iniciaban la reaccin proinflamatoria. La activacin de las clulas del organismo infectado depende de la presencia de una protena libre, circulante, denominada protena acopladora de LPS (LBP) y del receptor opsnico CD14. La LBP compite con lipoprotenas respecto al LPS; LPS ligado a lipoprotenas forma micelas inertes desde el punto de vista inflamatorio, pues no liberan citoquinas86. La forma estable de CD14, acoplado en la membrana (mCD14), asegura su anclaje a la superficie celular mediante glicosilfosfatidilinositol. Tambin se encuentra en la circulacin en forma libre, como CD soluble (soluble CD, sCD14). Muchas clulas que son constitutivamente CD14 negativas, como las clulas dendrticas, fibroblastos, clulas musculares lisas o el endotelio Pedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 127 Figura 29. Esquema del sistema PAMP / PRRs. dsDNA/RNA: cidos nucleicos de doble banda; LPS: lipopolisacrido; NALP / NAIP (componentes del inflamasoma); NOD (protenas [receptores] que contienen un dominio de oligomerizacin nucleosdico); PAMP: patrones moleculares asociados a patgenos; PRR: receptores de reconocimiento de PAMP; RLRs: receptores tipo RIG (gen inducible por cido retinoico); ssRNA: cido ribonucleico monocatenario; TLR (receptores tipo Toll). vascular, pueden responder al complejo [LBP-LPSsCD14]. sCD14 se encuentra en el suero de individuos sanos, pero su concentracin incrementa drsticamente en pacientes con procesos inflamatorios. Ni sCD14 ni mCD14 incorporan un endodominio intracitoplasmtico; es necesario un eslabn que conecte [LBP-LPSCD14] con el interior celular. Los TLRs, que aseguran tal exigencia, reconocen los diferentes patrones moleculares ; pero para que este reconocimiento e interaccin resulte en la activacin del receptor que inicia la va de seales proinflamatoria, se requiere una nueva molcula accesoria: el correceptor MD-2, que asegura la correcta posicin del receptor. Con ello queda completado el complejo inicial: [(LBP)-LPS-(CD14)] [TLR-MD-2]. La misin de LBP es llevar, con sCD14

o sin l, LPS hasta el complejo receptor, y la de CD14 es presentar LPS a TLR. El dominio extracelular de los TLR consta de, aproximadamente, 20 copias en tndem del motivo LRR. Las LRR conforman una estructura en herradura cuya topologa est involucrada en el reconocimiento del correspondiente ligando. A pesar de la conservacin entre los dominios LRR, diferentes TLR pueden reconocer varios ligandos sin relacin estructural alguna. La localizacin subcelular de los diferentes TLR se correlaciona de alguna manera con el patrn molecular de sus ligandos. Por ejemplo, TLR1, 128 Pedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 Figura 30. Dilogo en la va TLR4. Dependiendo de la estimulacin recibida la seal deber elegir entre la va Mal / MyD88 y la va TRAM / TRIF; cada una de ellas conducir a la formacin de perfiles de respuesta diferentes. La primera va de respuesta rpida origina una serie de complejos moleculares que concluye con la activacin de los -1. Por su parte, la seal dirigida por TRAM / TRIF va de respuesta lenta favorece el dilogo hacia la muerte celular a travs de RIP1 / RIP3 (adaptadores en la va de seales del factor de necrosis tumoral (TNF) a la vez que desencadena una segunda fase de produccin de molculas proinflamatorias. AP-1: protena activadora; CD14: protena extramembranar del complejo TLR4; FADD: dominio asociada al receptor de interleuquina; IRF3: factor de respuesta a interfern; JNK: quinasa Jun N-terminal; LPS: lipopolisacrido; Mal: adaptador de MyD88; MD-2: glicoprotena secretada; molculas adaptadoras; TAK1: quinasa activada por TGF; TLR4: receptor tipo Toll; TIR: regin homloga de los receptores tipo Toll y de IL1; TNFR: receptor de factor de necrosis tumoral; TRAF6: factor asociado al receptor TNF; TRAM: molcula adaptadora asociada a TRIF; TRIF: dominio TIR que contiene una protena adaptadora que induce interfern (Modificada de: Nicholas Gay et al.87; fig. 5, pg. 157). Pedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 129 Figura 31. Los factores de transcripcin son protenas involucradas en el control y regulacin de la expresin gnica que, acoplndose a los elementos promotores aguas arriba de los genes, facilitan o inhiben su transcripcin. Los factores de transcripcin estn compuestos por dos regiones principales: un dominio de acoplamiento a ADN y un dominio activador. El primero esta formado por una serie de aminocidos que reconoce secuencias especficas de bases en el ADN, cercanas al inicio de la transcripcin. Los factores

de transcripcin se clasifican de acuerdo a la estructura del dominio de acoplamiento a ADN y caractersticas electroforticas: dedos de zinc, hlice-vuelta-hlice, cremallera de leucina, hlice-asa-hlice y grupos de alta movilidad. Los dominios activadores de los factores de transcripcin interaccionan con los componentes de la maquinaria de transcripcin (ARN polimerasa) y con otras protenas reguladoras que afectan la eficiencia del acoplamiento al promotor. Los factores de transcripcin pueden ser activados o inhibidos (Rel/NFy la protena activadora-1 (AP-1) son factores tpicamente involucrados en el proceso inflamatorio. (A) Las protenas Rel/ NFson una familia de factores de transcripcin, que acoge homo- y heterodmeros caracterizados porque el dominio de dimerizacin y acoplamiento a ADN regin de homologa Rel est muy conservado. Los miembros de la familia incluyen p50, p52, p65, cRel y Rel. Los miembros mejor caracterizados son los complejos heterodimrico p50/p65 y homodimrico p50/p50. En la mayora de las clulas, NFdominio de acoplamiento nuclear de NFun enlace de asociacin no-covalente. Un gran variedad de molculas endgenas y exgenas, como citoquinas, virus o xenobiticos, -quinasa por los inductores del factor de transcripcin, lo que provoca una rpida fosforilacin de la sigue de su marcaje por ubiquitina, lo que permite su reconocimiento por el vez liberado, transloca al ncleo, donde se une a secuencias ADN especficas que provocan la transcripcin de los genes cuyos productos est involucrados en la respuesta mediada por NFinflamatorio, incluyen pro-TNFde adhesin, COX2 o iNOS. (B) Los factores de transcripcin de la familia de la protena activante-1 (AP-1) son homo- y heterodmeros de protenas que presentan regiones de cremallera de leucina. Esta familia incluye las subfamilias: Jun (c-Jun, v-Jun, JunB, JunD), Fos (c-Fos, v-Fos, FosB, Fra1, Fra2), Fos (c-Fos, v-Fos, FosB, Fra1, Fra2) y factores de transcripcin relacionados (ATF2, ATF3/LRF1, B-ATF). El control de la activacin de AP-1 descansa en procesos de fosforilacin/desfosforilacin que regulan la formacin de homodmeros o heterodmeros, que reconocen las secuencias correspondientes en ADN. TLR2 y TLR4 se localizan en la membrana celular y reconocen productos bacterianos que, en principio, actan sobre la superficie celular. Por su parte, TLR3, TLR7 y TLR9, involucrados en reconocer estructuras nucleotdicas (mono y bicatenarias, de ARN o de ADN), se expresan en sistemas membranares

intracelulares sistema reticuloendoplsmico y son reclutados por los compartimientos endosoma/lisosoma tras su activacin. Tras acoplar al ligando, TLR / IL-1R dimerizan y sufren un cambio conformacional requerido para poder reclutar las molculas que inician la cadena de seales hasta el ncleo celular87. El alistamiento de tales molculas adaptadoras es secuencial y ordenado, dependiendo la seal encauzada del primer eslabn de la cadena. En trminos generales88 y eligiendo el TLR4 como referencia, tras acoplamiento del LPS, el TLR activado puede elegir entre dos opciones: vas de seales dependiente o independiente de MyD88. El interruptor TIRAP / Mal pone en marcha la va dependiente de MyD88; el interruptor TRAM, la seal independiente. En trminos generales, la primera es una va rpida; la seal independiente representa una respuesta lenta (Figura 30). La activacin del adaptador MyD88 recluta quinasas especficas (IRAKs) que ligan TRAF, un mediador de la seal. De esta manera, [MyD88IRAK4-IRAK1-TRAF6] forman un primer complejo 130 Pedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 Figura 32. Esquema general del resultado de la estimulacin de receptores tipo Toll (TLR). Los factores de transcripcin involucrados NF-1 inducen la expresin de genes proinflamatorios (pro-IL-1, 8 y 18, pro-TNF, molculas de adhesin, COX2, iNOS) y de otros involucrados en la proliferacin y diferenciacin de inmunocitos invlucrados en la respuesta innata. de adaptacin, en el que TRAF6 es responsable de continuar la secuencia mediante la formacin de un segundo complejo heteromrico. TRAF6, activado, se libera del complejo I; tras ello, acopla dos ubiquitinas UEV y UBC que le permiten unirse a tres nuevos componentes: una quinasa efectora de la familia MAPKKK TAK1 y dos protenas adaptadoras TAB1 y TAB2 que acompaan a la quinasa. La ubiquitinacin de TRAF6 permite activar TAK1 en el complejo II: [TRAF6-UEV1A-UBC13-TAK1*-TAB1-TAB2]. TAK1 est en condiciones de completar la sealizacin aguas abajo. TAK1 tiene dos opciones: actuar sobre el complejo IKK, o elegir la va JNK/ p38. La primera culmina con la activacin de NFcon la de AP-1; dos factores nucleares proinflamatorios (Figura 31). El complejo IKK comprende dos subunidades catalticas IKK-

IKK-1 e IKK2) y una subunidad reguladora IKKpor las seales procedentes aguas arriba, IKK fosforila degradacin proteosmica. La eliminacin de los inhibidores deja las manos libres al factor de transcripcin NFde NFNIK activa IKKpone en marcha el mecanismo de conversin de un precursor inactivo de NFp100, en la forma transcripcionalmente activa p52. Por otro lado, TAK1 puede elegir la va MAPK JUN y p38 con el resultado antes indicado (Figura 32). La eleccin del interruptor TRAM por el TIR activado, pone en marcha la va independiente de MyD88. Esta va inicia su camino de la mano de TRIF que, en trminos generales, ocupa el papel de MyD88 en la va rpida. La misin de TRIF es activar el factor nuclear Pedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 131 Figura 33. Los lipopolisacridos (LPS) de las bacterias gram-negativas constan, tpicamente, de un dominio hidrofbico denominado lpido A (o endotoxina) formado por colas de cidos grasos acilados por disacridos bifosfato. A esta estructura sigue un oligosacrido central (core) no repetitivo, a la que sigue distalmente un polisacrido (antgeno O). Aunque los LPS de la pared de las bacterias gram negativas representan el prototipo de las endotoxinas bacterianas, otros componentes son tambin ligandos de los TLRs. La pared de las bacterias gram positivas contiene peptidoglicanos y cido lipoteicoico, dos potentes agonistas; al igual que la flagelina de los apndices bacterianos. Los denominados factores de virulencia, tambin detectados por algunos receptores intraceluares, son molculas microbianas responsables de la enfermedad especfica atribuida al patgeno. IRF3, que induce la expresin del gen que codifica interfern beta (INFinducibles por interfern requieren IRF3. TRIF lo consigue en dos pasos. En el primero complejo Ia, TRIF se une a TRAF6 y a RIP1. En el segundo paso, dos protenas relacionadas con IKK son las quinasas que fosforilan y activan IRF3. Etas protenas que conforman el complejo IIa de la va lenta son: IKKconocida como IKK inducible, IKKi), y TBK1 (tambin conocida como NAK). 132 Pedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 Figura 34. Modelo de sealizacin y control de TLR. La activacin del receptor por PAMP induce ologomerizacin de los TLRs, que

reclutan protenas TIRAP, MyD88 e IRAK. El agrupamiento de las protena quinasas (IRAK) induce su autofosforilacin y formacin de un complejo (IRAK-4/IRAK-1). La formacin de este complejo provoca su liberacin de la protena adaptadora MyD88. Liberado el complejo IRAK-4/IRAK-1, inicia una serie de activaciones de molculas situadas aguas abajo de la cascada. De este modo se activan las protenas transductoras TRAF6 (factor-6 asociado al receptor de TNF), TAK1 (quinasa-1 activada por el factor de transformacin del crecimiento) y TAB2 (TAK1-bindig protein: protena-2 ligada a TAK1Transforming growth factor- -activated kinase-1), que, finalmente activan los correspondientes factores de transcripcin (NFsMyD88 (una forma alternativa, soluble, de MyD88), que estabiliza el complejo TIRAP/MyD88/IRAK-4 impidiendo que prosiga la cascada de seales; SOCS 1 (supresor-1 de la sealizacin de inducida por citoquinas), Tollip (protena de interaccin con Toll) y Monarch-1, que inhiben directamente la seal de TLR-4; IRAK-M , que bloquea la activacin de las molculas transductoras por IRAK-4/IRAK-1, y A20, que bloquea el paso ms distal de la cascada impidiendo la activacin de los factores de transcripcin por las molculas transductoras. La seal inicial pone en marcha, por tanto, respuestas inflamatoria y antiinflamatoria; la primera dependiente de la activacin de NF-B, y la segunda de vas dependientes de MAPK (Mitogen-activated protein kinase: quinasa activada por mitgenos) que incidiran sobre factores de transcripcin moderadores. Adems de estas molculas citoslicas, otras transmembranares que contienen un dominio TIR SIGIRR: single immunoglobulin IL-1R-related molecule, y ST2: actan como reguladores hurfanos que se activan tras la estimulacin de los TLRs y cercenan la va de seales pretendida al bloquear las molculas adaptadoras TIRAP y MyD88. Ratones carentes de SIGIRR o ST2 son extremadamente susceptibles a sucumbir por shock endotxico (Modificada de: Koichi S. Kobayashi et al.84; fig. 1, pg. 429). TLR4 es el receptor para LPS, uno de los inmunoestimuladores ms potentes conocidos (Figura 33). Los humanos albergan una impresionante cantidad de flora bacteriana comensal en el tracto intestinal, cuyos epiteliocitos no expresan TLR4. Ello es, probablemente, la consecuencia evolutiva de una cohabitacin milenaria con bacterias gram-negativas en el intestino, que proporcionan una vasta cantidad de LPS. El mecanismo de regulacin negativa ha coevolucionado con la cascada de sealizacin inmunitaria innata. Adems de en el intestino, tampoco hay expresin de TLR4 sobre los epiteliocitos del cervix y vagina, que contienen flora bacteriana del tipo Lactobacillus. Por el contrario, en la trquea y en la vejiga urinaria, donde no residen bacterias comensales, el epitelio est provisto

de TLR4 y puede responder al estmulo LPS. Uno de los mecanismos que causan tolerancia bacteriana es, probablemente, la represin de la expresin en la superficie celular de TLR4, aunque existen otros mecanismos. Se han propuesto varias molculas que inhiben la sealizacin TLR4. Una de ellas es IRAK-M, cuyo dficit provoca una mayor produccin de citoquinas proinflamatorias tras la estimulacin de TLR4 e IL1R. IRAK-M bloquea la disociacin de IRAK-1 e IRAK-4 de MyD88, interrumpiendo la va de seales. La activacin de TLR en macrfagos induce la expresin de IRAK-M; es decir, la seal proinflamatoria activa la va inflamatoria y, a la vez, una va de retroalimentacin inhibidora que contribuye a estabilizar la homeostasis del sistema inmunitario innato. Otros mecanismos de control de la seal inflamatoria son la protena supresora de las seales citoqunicas (SOCS) y la protena interactiva con Toll (Tollip), que regulan negativamente la cascada de seales que conduce a la -4, IL-6 y LIF. SOCS y Tollip se unen a IRAK-1 interrumpiendo, como IRAK-M, la cascada de seales. Otros dos mecanismos de seguridad operan en los extremos proximal y distal de la cascada. Proximalmente, MyD88s, generado por procesamiento alternativo de MyD88, compite con el producto estndar interrumpiendo la va de seales; y aguas abajo, la protena A20 estorba directamente a NFespecial en el control de la respuesta a la flora comensal. Adems, Monarch-1, bloquea la va no cannica, lenta o independiente de MyD88 de activacin de NFPedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 133 Figura 35. Esquema de las dos superfamilias de receptores de reconocimiento de patrones. Los receptores de tipo Toll (TLR) son glicoprotenas transmembranares de tipo I, ubicados en la membrana celular o en estructuras membranares citoslicas como los endosomas. Pueden actuar como estructuras monomricas o, en el caso del TLR4, especializado en reconocer lipopolisacrido (LPS) bacteriano, pueden dimerizar con ayuda de protenas acopladoras (CD14, MD2). Los dominios TIR son citoflicos. Los receptores de tipo NOD (NLR) se presentan como sensores citoslicos, independientes de membranas, cuya oligomerizacin es condicin indispensable para actuar. La superfamilia TIR puede agruparse en tres subfamilias de acuerdo con las particularidades estructurales (Ver: figura 36). -R89 (Figura 34).

Hasta este momento, la revisin de las molculas de reconocimiento de patrones se ha centrado, exclusivamente, en la familia TLR; todos sus miembros son protenas transmembranares ubicadas en la membrana celular o en las estructuras endosmicas. Sin embargo, una segunda gran familia de PRR citoslicos participan en la deteccin de microorganismos patgenos capaces de penetrar en la clula o de sus productos inyectados en ella, y tambin de material derivado de aberraciones metablicas celulares, en especial cristales de cido rico. Estos nuevos receptores intracelulares90 se conocen como protenas NBDLRR. Estas protenas, a diferencia de los TLR, carecen del dominio TIR. Sin embargo, presentan una estructura igualmente modular en la que se identifican tres dominios caractersticos (Figura 35). Dos de ellos son compartidos por toda esta gran familia de receptores, y de ah el nombre de referencia: un dominio de acoplamiento nucleotdico (NBD) muy conservado, 134 Pedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 Figura 36. Esquema detallado de los diferentes receptores de reconocimiento de patrones (PRR). Los PRR pueden agruparse en tres grandes familias: TLR (receptores tipo Toll), NLR (receptores tipo NOD) y RLR (receptores tipo RIG). Los diez TLR identificados muestran una estructura bastante homognea, diferencindose por las distintas topologas de su dominio N-terminal (LRR). La familia NLR puede distribuirse en tres subconjuntos: NALP, NOD y NAIP / IPAF. Todos los miembros de esta superfamilia muestran tres dominios estructurales, dos similares dominio N-terminal LRR y dominio de oligomerizacin (NAD) y un dominio C-terminal distintivo (PYD, CARD o BIR). A pesar de que estructuralmente NALP e IPAF son similares, los estudios evolutivos relacionan IPAF con NAIP. Los receptores de la familia RIG presentan una estructura bastante diferente, pues aunque algunos miembros conservan un dominio CARD, presentan un dominio helicasa en vez del dominio NAP y carecen del dominio Nterminal LRR. denominado NACHT, esencial para la oligomerizacin de la molcula, seguido de un dominio C-terminal que incluye varias repeticiones de secuencias ricas en leucina (LRR) similares a las de los TLR y encargadas del reconocimiento del ligando. El tercer dominio, Nterminal, es variable CARD, PYD o BIR para cada una de las clases de la familia NOD e IPAF, NALP o NAIP, respectivamente y es responsable de desencadenar la correspondiente seal que ha de provocar la respuesta esperada (Figura 36). Dado que la mayora de los miembros de esta familia tienen una

estructura similar a las primeras estructuras identificadas del grupo protenas Nod 1 y Nod 2, las protenas NBD-LRR tambin se conocen y es prcticamente su alias, como receptores tipo NOD o NLR (de la misma manera que los TLRs deben su nombre a la homologa del grupo con el primer miembro identificado: protena Toll). Para complicar la sopa de letras, Pedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 135 Figura 37. Se necesita la combinacin de dos estmulos extracelulares distintos para inducir una activacin plena del inflamasoma caspasa-1 y la liberacin subsecuente de ILlas clulas involucradas en la respuesta innata (por ej. macrfagos) con cualquiera de los agonistas lipopolisacrido bacteriano (LPS), dinucletidos (CpG) o lipopptido (LP) de los receptores de tipo Toll (TLR), induce la sntesis de prointerleuquina-IL(ej. caspasa-11). Esta primera seal ceba las clulas y las prepara para un posible segundo estmulo que provocar la activacin de caspasa-1, pro-IL-IL-18, y la secrecin subsiguiente de citoquinas maduras. Segn este esquema la simple actuacin del TLR no es suficiente para activar la caspasa-1. La seal secundaria a travs, por ejemplo, de receptores purinrgicos (PXR) activados por ATP (por ej. liberado por plaquetas y otras clulas activadas), nigericina (un ionforo de potasio), maitotoxina (potente txico marino derivado de dinoflagelados) o aerolisina (toxina formadora de poros producida por Aeromonas) provoca perturbaciones inicas transmembranares, especficamente eflujo de potasio. La merma de potasio intracelular media el procesamiento de pro-ILa travs de la activacin de fosfolipasa A2 independiente de calcio (iPLA2). El estmulo incial de TLR (por ej. prestimulacin por LPS) acelera el procesamiento de caspasa-1. Adems, el cebo del LPS resulta en la liberacin de ILde novo del pro-ILapoptosis-associated speck-like protein containing a CARD), procaspasa-1 y propresentes en grandes cantidades en los macrfagos, y no requieren la estimulacin por LPS (Modificada de: Sanjeev Mariathasan et al.92; fig. 1, pg. 33). los NLR tambin se conocen como protenas CATERPILLER. Nod 1 y Nod 2 (NOD), que reconocen pptidos derivados de la degradacin del peptidoglicano (PGN) constituyente de las paredes bacterianas se expresan en clulas fagocticas (macrfagos y clulas presentadoras de antgenos). La interaccin de NOD con sus ligandos concluye con la activacin de NFello, el dominio CARD interacciona, a travs de interacciones homotpicas protena-protena, con un adaptador (RICK) que contiene ese mismo dominio y que

asegura la viabilidad de la cadena aguas abajo. Tambin y de manera similar a lo que ocurre tras la activacin de TLR, NOD habilitan una va alternativa que, a travs de MAPK/JUN, consiguen la activacin del factor nuclear AP-1. La similitud funcional entre TLRs y NOD queda reforzada con probables interacciones potenciadoras entre los dos sistemas91 (Figura 37). Los otros miembros de la familia NLR ofrecen un panorama distinto al de NOD. Las protenas inhibidoras de apoptosis de la familia NLR (NAIPS), las protenas que contienen dominios NACHT (y asociados, NAD), LRR y pirina (NALPS) y la protena que contiene factor activador de la proteasa que procesa procaspasa (IPAF), estn involucradas en el proceso de activacin de caspasa-1; ello a travs del ensamblaje de un complejo proteico citoslico conocido como inflamasoma92. Se requiere caspasa-1, conocida como enzima conversora de IL-1 (ICE), para procesar y luego secretar citoquinas proinflamatorias activas como IL-1 o IL-18. La IL-33, una citoquina involucrada en generar una respuesta de tipo 2 por las clulas T helper, requiere tambin caspasa-1 para su activacin. Adems, la activacin del inflamasoma puede conducir a la muerte celular en ciertos tipos celulares, mediante un mecanismo denominado piroptosis93. Tan rpida induccin de muerte celular puede representar un mecanismo de prevencin de replicacin del patgeno. Caspasa-1 es la protena efectora central del inflamasoma, y este acta como un armazn molecular para la activacin de aquella. La caspasa-1, la primera caspasa identificada en mamferos, se sintetiza como un zimgeno inactivo (procaspasa-1) que, tras su activacin, se ocupa de procesar otros dos precursores: pro-IL-1 e IL-18. Como ocurre con sus congneres las caspasas 8 y 9, la procaspasa-1 recluta adaptadores oligomerizados en complejos multiproteicos94. In vitro, el complejo est formado por la protena adaptadora ASC y un NLR, junto con la procaspasa-1; ello conforma el inflamasoma. Se han identificado diversos inflamasomas segn el componente NLR. El ms representativo es el denominado NALP-3 o inflamasoma crioprina. ASC codifica una protena que contiene pirina (PYD) como dominio N-terminal y CARD en el Cterminal. Como protena adaptadora para el reclutamiento de otras protenas que tambin contienen

ambos dominios, ASC tiene un papel central en el inflamasoma. A travs de interacciones homotpicas protena-protena con sus propios dominios PYD y CARD, ACS acta como un engarce directo en ocasiones es necesaria la presencia de un adaptador accesorio entre el sensor NALP y la caspasa efectora (Figura 38). En relacin con la fisiopatologa del sistema, debe recordarse que varios miembros de la familia CATERPILLER estn ligados genticamente a conocidos trastornos inmunolgicos95 (Tabla IV). El gen CARD15 codifica Nod2 fue identificado como el primer gen de susceptibilidad para la enfermedad de Crohn; enfermedad inflamatoria granulomatosa crnica intestinal que pudiera deberse a una hiperrespuesta inapropiada a los organismos comensales que forman la microflora de la mucosa intestinal, ms que a la respuesta a un microorganismo patgeno especfico. El mismo gen ha sido involucrado en la enfermedad de Blau raro trastorno autosmico dominante caracterizado por artritis granulomatosa, uvetis, rash cutneo y neuropata craneal o en la enfermedad de injertocontrahusped; y Nod1 se ha asociado con la infeccin por Helicobacter pylori. Por lo que respecta a los miembros de la familia NLR relacionados con el inflamasoma, la investigacin de pacientes con sndromes febriles peridicos hereditarios sndrome de Muckle-Wells, sndrome autoinflamatorio familiar inducido por fro y enfermedad inflamatoria multisistmica de comienzo neonatal o sndrome neurocutneoarticular infantil crnico dio como resultado la identificacin de mutaciones en el gen CIAS1 (Cold-induced auto-inflammatory sndrome), que codifica criopirina o marenostrina fiebre familiar mediterrnea, y mutaciones en NAIP se asocian con distrofia muscular espinal. Sirva de cierre a esta sec136 Pedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 cin el hecho que el fundador de la familia CATERPILLER sea el gen del activador transcripcional de las molculas tipo II del complejo principal de histocompatibilidad (CIITA). Junto a las familias TLR y NLR existe un grupo final hasta ahora de PRR citoslicos ocupados en verificar cidos nucleicos. El primero de esos receptores fue el gen inducible por cido retinoico-I (RIG1). Tales receptores se denominan, colectivamente, receptores tipo RIG I (RLR). RIG-I y una protena

relacionada con la diferenciacin del melanoma (MDA-5) son PRR con dominios ARN-helicasa que detectan ARN extrao en el citosol. El sistema inmunolgico innato tambin es capaz de reconocer ADN extrao; aunque esta actividad es peor conocida, se ha identificado una protena (DAI) comprometida con ello. Las vas sensoras de ADN y ARN inducen la Pedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 137 Figura 38. A-B. Inflamasoma criopirina. Criopirina o NALP3 es el componente central del inflamasoma. Criopirina tiene tres dominios: un dominio pirina (PYD o marenostrina, producto del gen responsable de la fiebre mediterrnea familiar); un segundo de oligomerizacin nucleosdico (NOD), y un tercer dominio de repeticiones ricas en leucina (LRR). Los otros componentes del inflamasoma son las molculas adaptadoras ASC (apoptosis-associated speck-like protein containing a caspase recruitment domain (CARD)) y cardinal, y procaspasa-1. Los respectivos dominios pueden ensamblarse, exclusivamente, una vez que la criopirina ha sido activada mediante la interaccin de su dominio LRR con un cristal (urato o pirofosfato clcico deshidratado) o con ciertas especies microbianas. El ensamblaje de los diferentes dominios conduce a la liberacin de caspasa-1 que escinde la molcula de prointerleuquinaILlas vas TLR (receptores tipo Toll) y NLR (receptores tipo NOD). Ambas familias de receptores reconocen ligandos microbianos en distintos compartimientos celulares. Los NLR son activados por la presencia de microbios citoslicos o por la accin de factores de virulencia bacterianos. Tales seales revierten sobre la respuesta transcripcional de los TLR al convertir pro-IL-1 en IL-1 activa. IL-1 interacciona con su receptor para potenciar el trabajo de los TLR (Modificada de: A-B. Joost P. H. Drenth et al.92; fig. 1, pg. 731; y C. de Gregory M Barton81; fig. 1, pg. 414). expresin de interferones tipo I y contribuyen a la induccin de un estado antiviral96. La participacin de cidos nucleicos bacterianos est menos clara. IIH. Generalizacin del proceso inflamatorio La teora prevalente ha sido que la sepsis en principio, la situacin generalizada grave que puede complicar una infeccin representa una respuesta inflamatoria descontrolada. Lewis Thomas populariz este punto de vista cuando escribi que los microorganismos que nos invaden son meros espectadores[] Es nuestra respuesta a su presencia lo que desencadena la enfermedad. Nuestro arsenal para combatir a las bacterias es tan poderoso y dispone de tantos mecanismos de defensa, que estamos ms expuestos a sus efectos devastadores que a los propios microbios97.

La escena descrita por Thomas parece corroborarse, en parte, cuando tal resultado puede desencadenarse por causas ajenas a la infeccin. Agresiones infectivas (internas: peritonitis fecal; o externas: herida contaminada) y no infectivas (internas: pancreatitis; o externas: quemaduras externas o traumatismos graves) provocan una reaccin inflamatoria similar, cuya fisiopatologa y clnica son idnticas: sndrome de respuesta inflamatoria sistmica (SIRS: Systemic Inflammatory Response Syndrome). Esta respuesta inflamatoria est determinada, cualitativa y cuantitativamente, por factores genticos y ambientales. En 1991, el American College of Chest Physicians (ACCP) y la Society of Critical Care Medicine (SCCM) convinieron una Conferencia de consenso en un intento de acordar una base conceptual y un criterio clnico para definir la respuesta inflamatoria sistmica a la infeccin; una situacin de deterioro progresivo conocida con el trmino generalizado de sepsis y que, en su estadio avanzado incluye la disfuncin o el fracaso de diversos rganos y sistemas. La Declaracin de la Conferencia ACCP/SCCM introdujo, en trminos de igualdad, el sndrome de respuesta inflamatoria sistmica: una situacin que hace referencia a los complejos hallazgos que resultan de la activacin de una respuesta inmunolgica innata, independientemente de la causa que la provoque, y aunque se discute si los ligandos endgenos utilizan los mismos TLR que los ligandos bacterianos (Figura 39, Tabla V)98. La Declaracin asuma que SIRS puede ser desencadena138 Pedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 Tabla IV. Enfermedades asociadas con mutaciones en protenas NBS-LRR. do por una infeccin local o generalizada, trauma, quemadura o por un proceso inflamatorio estril como una pancreatitis. Se considera el diagnstico de SIRS cuando el paciente tiene dos o ms de los hallazgos clnicos siguientes: temperatura corporal >38 C o <36 C; frecuencia cardiaca >90 m-1; hiperventilacin evidenciada por una frecuencia respiratoria >20 min-1 o una PaCO2 <32 mm Hg, y un recuento leucocitario perifrico -1. El concepto SIRS ha sido adoptado globalmente por clnicos e investigadores, siendo su patogenia, en principio, una inundacin generalizada y descontrolada de mediadores qumicos proinflamatorios, inducida por factores bacterianos va TLR, o por cualquier otro tipo de agresin que induce inflamacin. Sepsis/ SIRS es un

problema de primer orden, que significa la mayor causa de mortalidad en las unidades de cuidados intensivos no coronarias99. La revisin realizada en 2001100 de la Conferencia ACCP/SCCM de 1991, insisti en la robustez de las definiciones consensuadas hace diez aos, aunque seal que no existe un estndar de oro con el que calibrar los criterios diagnsticos, y apunt que, en el futuro, parmetros bioqumicos y genticos sern ms consistentes que los clnicos actualmente manejados (Tabla VI). Utilizando una variante del sistema TNM (Tumor, Ndulos o ganglios linfticos y Metstasis) aplicado en oncologa, propuso una clasificacin para sepsis/SIRS denominada PIRO: predisposicin (gentica y epigentica), infeccin (caractersticas), respuesta (grado) y (disfuncin) orgnica. Una intensa vasoconstriccin en la vascularizacin perifrica es la respuesta normal en aquellas condiciones en las que la presin arterial presin de perfusin es demasiado baja para perfundir adecuadaPedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 139 Figura 39. Sepsis (induccin por seales proinflamatorias exgenas) y SIRS (induccin por seales proinflamatorias endgenas), comparten un camino comn, de gravedad progresiva, que conduce a una situacin de shock vasopljico. El desenlace final, si la enfermedad no logra controlarse, es un sndrome de fracaso multiorgnico, la causa ms recuente de muerte en las unidades de cuidados intensivos no coronarias. mente los tejidos; tal ocurre en los estados de shock hemorrgico o cardiognico. En otras condiciones, principalmente en las situaciones de shock sptico o inflamatorio, la hipotensin est causada por una vasodilatacin perifrica resistente, incluso, a frmacos vasoconstrictores. 140 Pedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 Tabla VI. Marcadores genticos en SEPSIS / SIRS. Tabla V. Conferencia de consenso ACCP / SCCM: Definiciones. Sepsis/SIRS es la casusa ms frecuente de shock vasodilatador, y es la va final comn de las situaciones de shock hipovolmico o cardiognico cuando las causas originales no son solucionadas con prontitud. Cuando ocurre esto ltimo, se denomina fase de shock irreversible. En todas las formas de shock vasodilatador se detectan concentraciones plasmticas marcadamente elevadas de catecolaminas y activado el sistema renina-angiotensina; ello indica que la causa de la vasodilatacin e hipotensin arterial se deben a la

incapacidad del msculo liso arteriolar para contraerse. Para explicar este fallo se han apuntado varias hiptesis; entre ellas, la muerte de las clulas vasculares debido a la hipotensin prolongada, inadecuada extraccin de oxgeno por los tejidos o una produccin incrementada de prostaglandinas vasodilatadoras. Respecto al papel de las prostaglandinas debe indicarse que la vasoparlisis no es activa sino pasiva; incluso la situacin de shock sptico/inflamatorio se denomina vasopljico. Tres mecanismos han sido involucrados en este sndrome: activacin de los canales de potasio dependientes de ATP (canales KATP) en la membrana plasmtica de los miocitos de la pared vascular; activacin de la forma inducible de la xido ntrico sintasa (iNOS, inducible NO synthase), y dficit de vasopresina (Figura 40)101. La vasoconstriccin adecuada requiere que ligandos hormonales (por ej. angiotensina II) o neurales (por ej. norepinefrina) interaccionen y activen recepPedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 141 Figura 40. El shock sptico/SIRS vasodilatador se debe a la activacin inapropiada de mecanismos vasodilatadores y al fallo concomitante de los mecanismos vasoconstrictores. La sntesis incontrolada de xido ntrico (NO), al activar a la guanilato ciclasa soluble y generar cGMP, causa desfosforilacin de la miosina y vasodilatacin subsecuente. Adems, el NO y la acidosis metablica hiperlactacidmica activan los canales de potasio (KATP y KCa) en la membrana plasmtica de los miocitos vasculares. La hiperpolarizacin resultante de la membrana impide que el calcio, que media la vasoconstriccin inducida por norepinefrina y angiotensina II, entre en la clula. De ah que persista la marcada vasodilatacin e hipotensin a pesar de las altas concentraciones de esas hormonas en el plasma. Por el contrario, los niveles plasmticos de vasopresina son bajos a pesar de la persistente presencia de hipotensin. Ello se debe a que aunque en la fase inicial del proceso se produce una liberacin masiva de la hormona, la reserva se agota, con lo que las concentraciones plasmticas de la hormona son insuficientes para mantener la presin arterial. Modificada de: Donald W. Landry et al.101 ; fig. 4, pg. 593. tores en la superficie de los miocitos y, va de segundos mensajeros, incrementen la concentracin de calcio citoslico. Este incremento resulta de la liberacin de calcio por los almacenes intracelulares del catin y de la entrada de calcio extracelular al citosol a travs de los canales de calcio dependientes de voltaje. A concentraciones citoslicas adecuadas, el calcio forma un complejo con calmodulina, y este complejo activa una

quinasa que fosforila la cadena ligera, reguladora, de miosina. La fosforilacin de miosina permite la activacin de miosina-ATPasa por actina y, con ello, el establecimiento de puentes entre miosina y filamentos de actina, un proceso que contrae el msculo. De manera opuesta, vasodilatadores como el pptido natriurtico atrial y el xido ntrico activan una quinasa que, interaccionando con miosina fosfatasa, desfosforilan miosina y previenen la contraccin muscular. Adems, la vasodilatacin patolgica y la resistencia a vasoconstrictores que caracteriza al shock sptico/ SIRS, vasodilatador y vasopljico, no puede comprenderse sin entender el papel del potencial de membrana en la regulacin del tono vascular. El potencial de reposo de la membrana de las clulas musculares lisas vasculares oscila entre -30 y -60 mV. La positivacin del potencial (despolarizacin) abre los canales de calcio dependientes de voltaje, incrementando la concentracin de calcio citoslico e induciendo vasoconstriccin. Al contrario, la hiperpolarizacin cierra esos canales e induce relajacin. Tambin, dado que la vasoconstriccin mantenida requiere la entrada de calcio extracelular, la hiperpolarizacin impide la vasoconstriccin aun en presencia de ligandos vasoconstrictores. Una variedad de canales y de transportadores inicos, en especial canales de potasio, contribuyen al potencial de membrana de los miocitos vasculares. De los cuatro tipos conocidos de canales de potasio en la membrana plasmtica de estas clulas, el canal KATP es el mejor conocido por tener un papel crtico en la patognesis del shock vasopljico. La apertura de los canales KATP permite un eflujo de potasio, lo que hiperpolariza la membrana e impide la entrada de calcio a la clula: la activacin farmacolgica (por ej. diazxido) de los canales KATP inhibe la vasoconstriccin inducida por catecolaminas o por angiotensina II. Los canales son activados fisiolgicamente por la disminucin de la concentracin intracelular de ATP, y por el incremento de las concentraciones citoslicas de hidrogeniones o de lactato, un mecanismo que liga el metabolismo celular con el tono vascular y con el flujo de sangre arteriolo-capilar. En condiciones fisiolgicas de reposo los canales KATP permanecen cerrados, y sus inhibidores (por ej. sulfonilurea, un antidiabetgeno) no causan vasodilatacin. Sin embargo, en condiciones hipermetablicas o de hipoxia, la activacin de estos canales causa vasodilatacin

que puede ser revertida con los frmacos indicados. Activadores neurohormonales de canales KATP tambin pueden estar implicados en algunas formas de shock vasopljico. Pptido natriurtico atrial, pptido relacionado con el gen calcitonina y adenosina pueden activar canales KATP. Las concentraciones plasmticas de esos tres compuestos estn incrementadas en el shock vasopljico y en las fases avanzadas shock irreversible de shock hipovolmico. El canal KATP tambin es activado por iNOS. Un incremento de la sntesis de xido ntrico contribuye a la hipotensin y a la resistencia a los frmacos vasopresores que ocurren en el shock vasopljico102. La produccin incrementada de NO, resultado de la expresin de la iNOS, es un hecho constante en el shock vasopljico y en la fase irreversible del shock hipovolmico. Ello ocurre en varios tipos celulares; entre otros, en los miocitos y en los endoteliocitos vasculares. La induccin de la expresin de iNOS se debe a la activacin de NF-6, TNFde NO est mediada por la activacin de la fosfatasa de la cadena ligera de miosina y, tambin, por activar canales de potasio dependientes de calcio (canales KCa); activacin, en ambos casos, en los miocitos vasculares. En condiciones normales, una de las funciones de este canal es mitigar el efecto de vasoconstrictores por hiperpolarizacin de la membrana, y tal efecto es caracterstico de los tipos de shock que, ahora, nos ocupa. NO activa canales KCa por dos mecanismos: por nitrosilacin directa del canal, y a travs de la activacin de una protena quinasa dependiente de cGMP. Los inhibidores de la sntesis de NO y los bloqueantes de canales KCa revierten, al menos parcialmente, la hiporrespuesta vascular a los vasoconstrictores en el shock vasopljico. La conservacin de agua es la principal accin de la vasopresina, una hormona secretada bajo control osmtico que regula la permeabilidad de los tubos 142 Pedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 colectores renales al agua. Sin embargo, la vasopresina est tambin involucrada en la homeostasis cardiovascular, secretndose bajo control barorreflejo y provocando vasoconstriccin. Mientras que su efecto renal lo consigue con concentraciones plasmticas del orden de 1-7 pg ml-1, el efecto vasoconstrictor ocurre a concentraciones plasmticas bastante superiores, del

orden de 10-200 pg ml-1. En condiciones normales la contribucin de la vasopresina al tono vascular es mnima, pero en situaciones de hipotensin, de cualquier causa, se produce una liberacin masiva de la neurohormona; por ello, su participacin es importante para mantener la homeostasis circulatoria en las primeras fases de shock; de hecho, individuos con diabetes inspida toleran muy mal la situacin de shock. Sin embargo, cuando el shock progresa, la concentracin plasmtica de vasopresina disminuye paulatinamente, provocando un cuadro opuesto al de secrecin inapropiada de vasopresina. Tal agotamiento se debe a la deplecin de los depsitos de la neurohormona en el hipotlamo tras el doble estmulo, osmtico y barorreflejo, mantenido y a una produccin poco eficaz. La accin de la vasopresina en pacientes con shock vasopljico es interesante no slo porque no tiene efecto en individuos normales, sino porque el shock es resistente a los efectos vasopresores de otras sustancias como norepinefrina, angiotensina II y endotelina. Entre otros efectos, la vasopresina inactiva canales KATP en los miocitos vasculares; amortigua el incremento, en esas mismas clulas, del cGMP inducido por NO, y disminuye la sntesis de iNOS estimulada por citoquinas. Aunque las citoquinas se consideran las principales culpables tormenta citoqunica del shock sptiPedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 143 Figura 41. El equilibrio entre las respuesta proinflamatoria y antiinflamatoria depende de un complejo entramado de seales citoqunicas. Los macrfagos responden a seales activadoras segn patrones bien establecidos pero mal comprendidos. Un determinado estmulo activa los macrfagos que responden produciendo y liberando citoquinas inflamatorias IL-1 y TNF- y, adems, seales que condicionan el futuro de clulas CD4 ThO. Si el macrfago libera IL12, CD4 ThO compromete su destino hacia un fenotipo tipo 1 (CD4 Th1), que define una respuesta proinflamatoria que se traduce en la produccin de IL-2, TNFlos macrfagos responden al estmulo inicial liberando IL-15, CD4 ThO compromete su destino hacia un fenotipo tipo 2 (CD4 Th2), que define una respuesta antiinflamatoria que se traduce en la produccin de IL-4, IL-5, IL-6 e IL-10. Adems, cada tipo de respuesta bloquea la contraria, lo que potencia el efecto final. El resultado final de una respuesta tipo 1 ser un cuadro, en principio, de defensa del organismo, y la de una respuesta de tipo 2 condicionar, a la postre, una situacin de anergia. co/SIRS, la compleja problemtica de la situacin deja abiertas innumerables preguntas. En primer lugar, no

es aplicable el paradigma bench-to-bed; en este caso, lo que es vlido en el ratn no lo es en el humano. Los protocolos de tratamiento basados en el bloqueo farmacolgico de los mediadores qumicos fracasan en la clnica humana103. Ello ha obligado a buscar nuevas dianas, aunque la estrategia no ha variado104. El conocimiento actual de las vas de seales celulares que median la respuesta a los microbios ha demostrado que el concepto del bloqueo de la endotoxina, a efectos de prevenir las complicaciones spticas, es simplista. El ejemplo paradigmtico son los ratones C3H/HeJ, que son resistentes a endotoxina sobre la base de una mutacin en el gen TLR4, y sin embargo presentan mayor mortalidad a la inyeccin de bacterias completas. Otro es la ineficacia, en clnica humana, del tratamiento con anticuerpos antiendotoxina en pacientes con shock sptico. Los pacientes con sepsis/SIRS presentan manifestaciones consistentes con inmunosupresin, incluyendo una prdida de hipersensibilidad diferida, incapacidad de acabar con la infeccin desencadenante y una predisposicin a infecciones nosocomiales. Una razn para el fracaso de la estrategia antiinflamatoria en pacientes con sepsis/SIRS puede ser el cambio del sndrome con el tiempo. Inicialmente, el cuadro puede caracterizarse por una tormenta citoqunica proinflamatoria; pero si la situacin persiste, se produce un desplazamiento hacia una situacin inmunosupresora antiinflamatoria105. Las clulas CD4 T estn programadas para secretar citoquinas con dos perfiles distintos y antagnicos. Pueden secretar citoquinas con propiedades inflamatorias (Th1) como TNF-2 o INFcon propiedades antiinflamatorias (Th2) como IL-4 o IL-10. Los factores que determinan si las clulas CD4 144 Pedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 Figura 42. El sndrome de disfuncin o fracaso orgnico mltiple (MODS) afecta a diferentes rganos y sistemas. El sndrome respiratorio perifrico se refiere a un incremento de la afinidad de la hemoglobina por el oxgeno; ello dificulta su extraccin por los tejidos, contribuyendo a la distorsin metablica celular. La causa del incremento de la afinidad por el O2, que se traduce en una disminucin de la p50 presin parcial de oxgeno arterial (27 mm Hg), a la que la hemoglobina presenta una saturacin de O2 del 50%, es una perturbacin del metabolismo del eritrocito que compromete la produccin de 2,3-bifosfoglicerato, un modulador

alostrico de la hemoglobina que facilita la cesin de oxgeno. A ello se une un trastorno respiratorio central (sndrome de distrs respiratorio agudo) y progresivamente la claudicacin del resto de la economa. T tendrn un comportamiento Th1 o Th2 se desconocen con precisin, pero entre ellos destacan el tipo del patgeno, el tamao del inculo o el sitio de infeccin106. Por su parte, las clulas mononucleares de pacientes con quemaduras extensas o con trauma grave tienen reducidos los niveles de citoquinas Th1, pero incrementados los niveles de citoquinas Th2, y la reversin de la respuesta Th2 mejora la supervivencia entre los pacientes con sepsis/SIRS. Se ha sealado que el incremento progresivo de IL-10 indicador de respuesta Th2 predice un desenlace fatal (Figura 41). Anergia es un estado de indiferencia al antgeno. Las clulas T son anrgicas cuando no son capaces de proliferar o de secretar citoquinas en respuesta a sus antgenos especficos. Pacientes en shock sptico/ SIRS tienen niveles reducidos de clulas T circulantes, y sus clulas T remanentes son hipo o anrgicas. Por su parte, clulas apoptticas gran nmero de clulas epiteliales intestinales y linfocitos mueren por apoptosis en tal situacin pueden provocar, al menos en parte, anergia o respuesta Th2 inducidas por sepsis/ SIRS. En el extremo opuesto a la anergia se sita el denominado sndrome de shock txico (Toxic shock syndrome, TSS)107. El TSS es una enfermedad de comienzo hiperagudo el shock sptico se instaura progresivamente, caracterizada por fiebre, erupcin cutnea e hipotensin, que puede desembocar, tambin rpidamente, en una situacin letal de fracaso orgnico mltiple. La enfermedad est causada por superantgenos (SAG) bacterianos secretados por Staphylococus aureus y estreptococos del grupo A. Los SAG puentean la presentacin antignica normal; ello, al acoplarse a las molculas del MHC de la clase II sobre la superficie de las clulas presentadoras de antgenos, y a regiones variables especficas de la cadena beta del receptor antignico de las clulas T. A travs de esta interaccin, los SAG activan las clulas T que trasmiten rdenes de una magnitud muy superior a las incitadas por la presentacin antignica normal, y que resultan en una liberacin masiva de citoquinas que, se cree, es responsable de la espectacularidad del TSS. Un mecanismo potencial de apoptosis linfoctica

puede deberse a la liberacin de glucocorticoides inducida por la situacin de estrs inflamatorio, aunque tales hormonas son un frmaco bien asumido108. La autopsia de pacientes fallecidos por sepsis/SIRS descubre una prdida masiva, por apoptosis109, de clulas inmunocompetentes, en especial de clulas B, clulas T CD4 y clulas dendrticas foliculares, que disminuyeron la produccin de anticuerpos, la activacin de macrfagos y la presentacin antignica, respectivamente. Otros dos hallazgos constantes en las autopsias son necrosis centrolobulillar heptica junto con necrosis focales cerebrales y miocrdicas, y la discordancia entre los hallazgos histopatolgicos y el sndrome responsable de la muerte de estos pacientes. El hallazgo patognomnico es una situacin generalizada de hibernacin celular o de aturdimiento celular como ocurre durante la fase de preinfarto del miocardio. Presumiblemente la sepsis/SIRS activa mecanismos de defensa que inducen a las clulas a mantener, exclusivamente, las funciones bsicas. En resumen, la autopsia no revela porqu mueren los pacientes con sepsis/SIRS. La causa ltima de la muerte en pacientes con sepsis/ SIRS es el fracaso orgnico mltiple110. Tpicamente, los pacientes desarrollan, en la fase inicial, problemas funcionales en un solo rgano por ej. fracaso respiratorio que exige respiracin mecnica; si la enfermedad persiste, irn apareciendo problemas en otros rganos y sistemas, hasta abocar en un fracaso multiorgnico que acarrea, sin son ms de tres los afectados, la muerte del paciente (Figura 42). La patognesis del sndrome de fracaso multiorgnico (Mltiple organ disfunction syndrome, MODS) es multifactorial y no bien comprendida. La hipoperfusin e hipoxia tisular son los factores dominantes. Por otro lado, los factores involucrados provocan un depsito generalizado de fibrina que causa oclusin microvascular y extravasacin, que comprometen an ms la oxigenacin tisular, y trastornos en la homeostasis microvascular que resultan de la produccin de sustancias vasoactivas como PAF, histamina y prostanoides. Los infiltrados celulares, especialmente neutrfilos, daan directamente los tejidos al liberar enzimas lisosmicas y especies reactivas radicales libres derivadas del metabolismo del oxgeno. TNFincrementan la expresin de iNOS y la de su producto NO, que causa mayor inestabilidad vascular y que

puede contribuir a deprimir, de manera directa, el miocardio. A parte de la hipoxia, las clulas pueden ser disxicas incapacidad de utilizar el oxgeno dispoPedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 145 nible, otra consecuencia del exceso de la produccin de NO, que interfiere la respiracin mitocondrial. En la situacin de sepsis/SIRS se produce una liberacin de factor tisular por monocitos y clulas endoteliales que, tras activarse por micropartculas circulantes111, dispara la produccin de trombina a travs de la va extrnseca de la coagulacin. La activacin de PAR1 por trombina puede representar el engarce entre coagulacin e inflamacin (ver Figura 10). PAR1 es expresado sobre la superficie de plaquetas, clulas endoteliales y neutrfilos. La activacin de PAR1 sobre las clulas endoteliales por trombina conduce a la liberacin de mediadores inflamatorios como PG y NO, mientras que la activacin de PAR1 en neutrfilos conduce a la transmigracin de estas clulas hacia el espacio extracelular. Por ltimo, la activacin de PAR1 en plaquetas conduce a su adhesin al endotelio y agregacin subsiguiente, que potencia el sistema de coagulacin y favorece los depsitos de fibrina. Independientemente de la activacin de PAR1, la trombina est directamente involucrada en la coagulacin al convertir fibringeno en fibrina. Por otro lado, el Factor X activado puede actuar directamente sobre las clulas endoteliales activando una va no hemosttica que utiliza EPR-1, que sinergia su efecto con la activacin de PAR1 endotelial por trombina, para forzar al endotelio a producir masivamente IL-6 y NO. El Factor Xa utiliza la va clsica de la coagulacin para incrementar la concentracin de trombina al estimular la conversin de protrombina a trombina. Una causa adicional del estado procoagulante en sepsis/SIRS es el incremento en la produccin del procoagulante PAI-1, y la depresin expresiva de tres factores anticoagulantes: antitrombina, inhibidor del factor tisular y protena C112. Tales anticoagulantes naturales tienen particular importancia porque, adems de su efecto amortiguador sobre la generacin de trombina, ejercen propiedades antiinflamatorias al impedir la activacin de los factores de transcripcin NFAP-1. La protena C (PC) es una serina-proteasa, dependiente de vitamina K que, tras ser activada (activatedProtein C, aPC) por trombina complejada con trombomodulina, detiene el proceso de coagulacin

inactivando los factores V y VIII activados. Por otro lado, aPC utiliza el receptor EPCR como un correceptor de APR1 que, tras esta interaccin, induce seales antiinflamatorias que incitan la expresin de la inmunomoduladora MCP-1 (Monocyte chemoattractant protein). La interaccin entre EPCR y APR1 impide a este ltimo responder a trombina. Adems, aPC inhibe PAI-1. El factor V Leyden una variante del factor V de la coagulacin causa un cuadro de hiper146 Pedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 Figura 43. La prdida de la homeostasis en sepsis/SIRS se debe a un predominio de los factores proinflamatorios y procoagulantes, sobre los antiinflamatorios y fibrinolticos. PAI-1: inhibidor del activador de plasmingeno-1; TAFI: inhibidor de fibrinolisis activada por trombina (Thrombin-activable fibrinolysis inhibitor). coagulabilidad por ser resistente a la aPC; por su parte, la administracin de protena C en sepsis/SIRS ha demostrado resultados optimistas. El cuadro referido de hipercoagulabilidad e hipofibrinolisis (Figura 43) se traduce en el denominado sndrome de coagulacin intravascular diseminada (Disseminated intravascular coagulation, DIC), que expresa el fracaso orgnico ms precoz del MODS, y cuya traduccin clnica es un sndrome paradjicamente hemorrgico que justifica la denominacin de coagulopata por consumo con la que tambin se conoce al sndrome113. El hecho distintivo de DIC es la formacin intravascular diseminada de fibrina que provoca la oclusin trombtica de los pequeos vasos (Figura 44). La coagulacin intravascular compromete el aporte de sangre a tejidos y a rganos y, junto con las alteraciones hemodinmicas y metablicas, Pedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 147 Figura 44. Sepsis/SIRS alteran el equilibrio homeosttico normal entre mecanismos procoagulantes y anticoagulantes. Se produce una secrecin incrementada de factor tisular que es activado por micropartculas. El factor tisular activado activa, a su vez, al factor VII. Los factores tisular y VII activados inician la va extrnseca de la coagulacin que provoca un aumento significativo de produccin de trombina, que genera fibrina a partir de fibringeno. Simultneamente, incrementa la produccin de inhibidor del activador de plasmingeno-1 (PAI-1), que resulta en una disminucin de la produccin de plasmina y, con ello, un fracaso de los mecanismos fibrinolticos; la fibrina es convertida en productos de degradacin (Fibrin degration products, FDP), de especial significado en diagnstico clnico del sndrome de coagulacin intravascular diseminada. Sepsis/SRIS tambin causa una disminucin de la produccin del

anticoagulante natural protena C, cuya activacin (aPC) inhibe las vas extrnseca (inhibe al factor VII activado) e intrnseca (inhibe al factor V activado), de la coagulacin. La aPC tambin es un potente antitrmbico, a la vez que inhibe PAI-1 y TAFI. Todo ello hace que la disminucin de aPC tenga un importante efecto procoagulante, cuyo resultado neto es la formacin de depsitos de fibrina en el territorio microvascular, que provoca una alteracin de la oxigenacin tisular y, finalmente, dao celular. Modificada de: Jonathan Cohen113; fig. 2, pg. 887. contribuye al MODS. A la vez, la utilizacin masiva y la subsiguiente deplecin de factores de coagulacin y de plaquetas resultantes de la coagulacin progresiva y mantenida inducen hemorragia masiva que, en ocasiones, puede ser el primer sntoma del sndrome. El sndrome DIC tiene un efecto domin, al que siguen, secuencialmente o en paralelo, el fracaso de otros rganos sndrome de distrs respiratorio agudo114; fracaso renal agudo115; disfuncin gastrointestinal acompaada de hemorragia digestiva y translocacin bacteriana116, o insuficiencia cardiaca117 que agravan, progresivamente, el pronstico de la situacin. Por su repercusin sobre todo el panorama descrito, junto con DIC, los disturbios endocrinos y metablicos en la sepsis tienen especial relevancia118. La respuesta metablica inicial a la sepsis est estrechamente regulada por cambios endocrinos especficos, que inactivan vas anablicas e incrementan la actividad hipofisaria anterior. Durante la sepsis, no solo vara la cantidad de hormonas sino tambin el patrn de secrecin. La resistencia a la insulina es una de las caractersticas del paciente sptico, y parece que, en la respuesta metablica a la sepsis, se perturba el equilibrio entre insulina y sus hormonas contrarreguladoras cortisol, glucagn, hormona del crecimiento y catecolaminas, que estimulan la gluconeognesis y la glicogenolisis hepticas e inhiben la captacin de glucosa mediada por insulina. En la situacin sptica, el conjunto de respuestas endocrinas se torna hacia el catabolismo (Figura 45). En condiciones basales, el nivel de glucosa est regulado por la oferta heptica, siendo el sustrato metablico principal los cidos grasos libres (Free-fatty acid, FFA). Parece que durante la sepsis, uno de los problemas metablicos principales es la incapacidad de utilizar FFA como sustrato metablico. Normalmente, la oferta heptica 148 Pedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102

Figura 45. Sepsis/SIRS induce cambios en el perfil hormonal y metablico. Modificada de: Soren Andersen et al.118; fig. 1, pg. 415. de glucosa depende de la glicogenolisis y resntesis a partir de carbonos reciclados (por ej. lactato y glicerol), y en mucho menor grado por gluconeognesis a partir de aminocidos (AA) como alanina y glutamina; todo ello est marcadamente alterado en la sepsis. La resistencia perifrica a la insulina resulta en una disponibilidad incrementada de FFA y de AA como resultado de un desplazamiento hacia lipolisis y proteolisis. La funcin heptica como reguladora de la glucemia tambin se ve afectada como resultado de la resistencia heptica a la insulina, lo que se traduce en un incremento de la oferta heptica de glucosa, primero resultante de glicogenolisis y, luego, de gluconeognesis. La prdida de masa muscular resultante de la postracin y de la respuesta catablica es significativa en sepsis, que se caracteriza por una inhibicin de la sntesis y un incremento de la degradacin proteicas. Los AA liberados al torrente circulatorio son captados por el hgado, que los utiliza para sintetizar protenas APR y como sustrato gluconeognico, en competencia con enterocitos y polimorfonucleares neutrfilos, que tambin utilizan glutamina como sustrato energtico. Los responsables del cuadro metablico son IL-1, que induce un incremento indirecto de la produccin de cortisol tras provocar la liberacin hipofisaria de ACTH, y TNFde cortisol por las glndulas suprarrenales. El msculo sptico, aunque capta glucosa mediante un transportador independiente de insulina, es resistencia al efecto anablico de esta y, tambin, a IGF-1 (Insulin-like growth factor-1) que media la accin de la hormona de crecimiento. La concentracin plasmtica de FFA se eleva significativamente, en parte como resultado de la resistencia heptica a la insulina y, en parte, por la resistencia del tejido adiposo a esta misma hormona. La glucosa es metabolizada en el hepatocito a malonil-CoA, que inhibe la carnitina-palmitoil transferasa, la enzima de la membrana mitocondrial responsable del transporte de los FFA de cadena larga al interior mitocondrial para su oxidacin. El acumulo de malonil-CoA tambin incrementa la sntesis heptica de FFA, triglicridos y VLDL (Very low-density lipoproteins). Se conoce que existen receptores de FFA entre otros, en las clulas del sistema inmunolgico.

La hiperglicemia incrementa la cascada de adhesin leucocitaria; efecto que no es dependiente de cambios en la osmolaridad sino de un incremento en la expresin de molculas de adhesin (Figura 46). Glucosa y FFA, en concentraciones elevadas, incrementan la concentracin celular de especies reactivas de oxgeno que, tras interaccionar con NO, dan lugar a nuevos radicales que activa NFexpresin de aquellas molculas. Por otro lado, la hiperglicemia y la resistencia a la insulina afectan las funciones bsicas de los fagocitos, lo que podra acarrear consecuencias negativas sobre la funcin fagoctica en la sepsis. El MIF es una citoquina reguladora que regula la funcin de los macrfagos y contrarresta los efectos de los glucocorticoides sobre estas clulas. MIF es secretado constitutivamente por la hipfisis anterior, por las clulas inmunocompetentes en respuesta a los estmulos proinflamatorios y por las por glucosa actuando de manera autocrina para estimular la secrecin de insulina. MBL (Mannose-binding lectin) juega un papel importante en la inmunidad innata; un dficit de MBL, que depende de insulina, se asocia con una susceptibilidad incrementada a las infecciones. Por ltimo, la insulina tiene un efecto anticitoqunico, en especial respecto a TNF-6, y TNFstn involucrados en el desarrollo de la resistencia a la insulina caracterstica de la sepsis. Pedro Garca Barreno Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fs.Nat. (Esp), 2008; 102 149 Figura 46. Efectos de la insulina y de glucosa, cidos grasos libres (FFA) y citoquinas proinflamatorias, sobre la expresin de molculas de adhesin celular (Cell adhesion molecule, CAM) y de las interacciones entre leucocitos y endotelio. Modificada de: Soren Andersen et al.118; fig. 2, pg. 417. Un nuevo ingrediente que se considera en el MODS son las consecuencias crnicas del shock sptico119. Pacientes que se han recuperado del MODS muestran, a los treinta das de dar por resuelta la situacin, una mortalidad del 30-50%; y algunos estudios sealan la persistencia de un riesgo significativo de morir, durante, al menos, los ocho aos siguientes del alta hospitalaria. Ello parece significar que la inflamacin generalizada y grave, que significa el cuadro de shock inflamatorio, pone en marcha una respuesta inflamatoria, disregulada, que tiene consecuencias a largo plazo respecto a la respuesta del husped a otros retos.

Retomando el sentir de Lewis Thomas un observador de la biologa, es la inflamacin desmedida cuando se produce fuego amigo, ms que la agresin, la causa principal de la enfermedad y su desenlace. Existe un amplio consenso sobre que la sepsis/SIRS es el resultado de la incapacidad de controlar la respuesta inflamatoria. Y desde el lado de las repercusiones a largo plazo de la inflamacin, son abundantes y vienen de lejos los datos que ligan hipercolesterinemia y aterognesis, pero solo recientemente se ha apreciado que son mecanismos inflamatorios los que acoplan ambos trminos. El reclutamiento leucocitario y la expresin de citoquinas proinflamatorias caracterizan las fases iniciales del ateroma, y vas inflamatorias promueven trombosis, una complicacin letal de la aterosclerosis. Por su parte, el espectro de enfermedades inflamatorias del sistema nervioso central se ha ido expandiendo desde las enfermedades autoinmunes clsicas, como la esclerosis mltiple, a aquellas en las que, como el Alzheimer, existe una respuesta inmune innata provocada por la produccin local de protenauna protena de la fase aguda de la respuesta inflamatoria. Y datos recientes apoyan el concepto de que la inflamacin es un componente crtico de la progresin tumoral. Muchos cnceres se desarrollan a partir de infeccin, irritacin e inflamacin, y se ha hecho evidente que el microambiente tumoral, que est orquestado en gran parte por clulas inflamatorias, es un participante indispensable en el proceso neoplsico, apoyando la proliferacin, la supervivencia y la migracin celular. La vida es breve; la ciencia, extensa; la ocasin, fugaz; la experiencia, insegura; el juicio, difcil. Es preciso no slo disponerse a hacer lo debido uno mismo, sino adems [que colaboren] el enfermo, los que le asisten, y las circunstancias externas, as comienzan los Aforismos hipocrticos. Aplquese a la inflamacin. BIBLIOGRAFA Y NOTAS 1. Weiss U (2002) Nature insight: Inflammation. Nature 420: 845. Medzhitov R (2008) Origin and physiological roles of inflammation. Nature 454: 428-35. 2. Ley K (2001) History of inflammation research. En: Klaus Ley, ed. Physiology of Inflammation. Oxford: Oxford University Press; pg. 1-10. El libro de K. Ley ofrece, en 24 cap. que ocupan 525 pg. escritas,

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