Universitatea Babe Bolyai Cluj Napoca Faculatatea de Chimie i

Inginerie Chimic
Catedra de Chimie-Fizic



Metode cinetice i electrochimice de analiz a unor medicamente
bazate pe reacii catalizate enzimatic i eterogen



Rezumatul tezei de doctorat

Florina Fgdar (Pogcean)



Conductor tiinific:
Prof. Univ. Dr. Ioan Bldea






CLUJ-NAPOCA
2011








2




























































3






Universitatea Babe Bolyai Cluj Napoca Faculatatea de Chimie i
Inginerie Chimic
Catedra de Chimie-Fizic



Florina Fgdar (Pogcean)


Metode cinetice i electrochimice de analiz a unor medicamente bazate pe
reacii catalizate enzimatic i eterogen



Rezumatul tezei de doctorat



Comisia:

Preedinte:

Prof. Univ. Dr. Cornelia Majdik - decan al Facultii de Chimie i Inginerie Chimic, Cluj-Napoca

Conductor tiinific:

Prof. Univ. Dr. Ioan Bldea

Refereni:

Prof. Univ. Dr. Elena Maria Pic-Universitatea Tehnic, Cluj-Napoca, Facultatea de Ingineria
materialelor i a mediului
Conf. Dr. Graziella LianaTurdean- Universitatea Babe Bolyai Cluj Napoca, Faculatatea de
Chimie i Inginerie Chimic
C. P. II, Dr. Stela Pruneanu Institutul Naional de Cercetare-Dezvoltare pentru Tehnologii Izotopice i
moleculare Cluj-Napoca, (INCDTIM).











4

CUPRINS
INTRODUCERE
Capitolul 1. Consideraii generale ale reaciilor catalizate enzimatic i modul
de urmrire al acestora.
1.1. Cinetica reaciilor enzimatice........................................
1.2. Modele de liniarizri......................................................................
1.3. Inhibarea reaciilor enzimatice.......................................................
1.4. Fracia de inhibiie.
1.5. Modele de inhibiie reversibil.......................................................
1.6. Determinarea grafic a tipului de inhibitor....................................
1.7. Noiuni generale despre senzorul de Oxigen de tip Clark
1.8. Noiuni generale despre metodele spectrofotometrice..........................
1.9. Noiuni generale despre metodele voltametrice....................................
1.10. Noiuni generale despre spectroscopia de impedan...........................
Capitolul 2. Cinetica i mecanismul reaciei de descompunere a H
2
O
2

catalizate de peroxidaz prin inhibare cu fenol
2.1. Peroxidaza: prezentare general........................................................
2.2. Clasificarea peroxidazelor.................................................................
2.3. Structura enzimei...............................................................................
2.4. Mecanismul reaciei peroxidazice.....................................................
2.5. Procedee de extracie i purificare a peroxidazei din hrean..............
2.6. Cinetica reaciei.................................................................................
Contribuii originale
2.7. Reactivi i soluii..............................................................................
2.8. Principiul metodei de extragere a peroxidazei din hrean..................
2.9. Principiul metodei amperometrice..........................................................
Concluzii
Capitolul 3 Descompunerea apei oxigenate catalizate de catalaz utiliznd
medicamente ca i inhibitori
3.1. Catalaza: prezentare general............................................................
3.2. Mecanismul reaciei catalitice...........................................................
3.3. Medicamente utilizate ca i inhibitori ai reaciei de descompunere a apei
oxigenate.......................................................................................
3.4. Medicamente -blocante- caracteristici generale.............................
3.5. Atenolol, Metoprolol. Prezentaregeneral...........................................................
3.6. Farmacocinetic................................................................................
3.7. Efectul atenolului.i metoprololului.......................................................
Contribuii originale
3.8. Reactivi i soluii.............................................................................
A) Metoda spectrofotometric de determinare a atenololului.......
3.9. Rezultate i discuii...........................................................................
B). Metoda amperometric de determinare a atenololului.............
3.10. Rezultate i discuii.........................................................................
A) Metoda spectrofotometric de determinare a metoprololului...
3.11. Rezultate i discuii.........................................................................
B). Metoda amperometric de determinare a metoprololului.......
3.12. Rezultate i discuii..........................................................................
3.13. Influena factorilor de mediu asupra activitii enzimatice............
Concluzii
1
4

4
7
10
18
24
26
32
34
36
40
44

44
46
48
50
52
53

54
55
55
64
65

65
66
67

70
74
74
74

75
76
76
76
80
83
83
85
85
89
92
5























Capitolul 4 Studiul oxidrii atenololului utiliznd un electrod de crbune
sticlos modificat cu nanoparticule de Aur
Contribuii originale
Parte experimental.................................................................................
4.1 Reactivi i soluii...............................................................................
4.2.Prepararea soluiei de nanoparticule de aur (AuNPs).......................
4.3.Preprarea electrodului de grafit (GCE) pentru depunerea de nanoparticule de
aur ( AuNPs) pe suprafaa sa.
4.4.Aparatura utilizat..............................................................................
4.5.Rezultate i discuii.............................................................................
4.6. Caracterizarea electrochimic a electrodului nanostructurat, GCE-AuNPs
Concluzii...................................................................................................
Capitolul 5. Studiul oxidrii carbamazepinei utiliznd un electrod de aur
modificat cu grafene i nanoparticule de aur
5.1. Caracteristici generale ale moleculei de carbamazepin...................
5.2. Reactivi i soluii................................................................................
5.3. Prepararea electrodului de aur modificat cu grafene i nanoparticule de aur
(Au-GR-AuNPs)
5.4. Aparatura utilizat..............................................................................
5.5. Rezultate i discutii............................................................................
5.6. Caracterizarea electrochimic a electrodului modificat cu nanoparticule de aur
i grafene
Concluzii...................................................................................................
Concluzii generale
Bibliografie...............................................................................................
94


96
96
97
97

98
99
106
123


124
128
128

129
130
132

144
145
147

6


Introducere

Scopul acestei lucrri este de a studia metodele cinetice i electrochimice de analiz a
unor medicamente bazate pe reacii catalizate enzimatic i eterogen.
Lucrarea este alctuit din 5 capitole principale:
In primul capitol sunt prezentate aspecte teoretice legate de reaciile catalizate enzimatic
i modul de urmrire al acestora. Tot aici sunt prezentate aspectele generale ale cineticii
reaciilor enzimatice, modelele de liniarizri utilizate, inhibarea reaciilor enzimatice i tipurile
de inhibitori, fracia de inhibiie. De asemenea se face referire la metodele analitice utilizate:
metode spectrofotometrice, amperometrice, voltametrice, spectroscopie de impedan.
Al doilea capitol este consacrat studiului procesului de inhibiie a fenolului asupra
reaciei de descompunere a H
2
O
2
catalizate de peroxidaz. S-au realizat msurtori att cu
peroxidaz pur, ct i cu peroxidaz extras din hrean.
n cadrul acestui capitol, s-au determinat parametrii cinetici, constantele de inhibiie, s-a
stabilit mecanismul de inhibiie pentru fenol i s-a pus la punct o metod de extragere a
peroxidazei din hrean.
Al treilea capitol prezint descompunerea apei oxigenate catalizate de catalaz utiliznd
diverse medicamente ca i inhibitori (atenolol, metoprolol).
i n acest capitol s-au determinat parametrii cinetici, constantele de inhibiie, pentru
atenolol i metoprolol att prin metoda spectrofotometric, ct i prin metoda amperometric. S-
a stabilit mecanismul de inhibiie pentru atenolol i metoprolol.
S-a ncercat punerea la punct a unor metode de determinare a acestor medicamente.
Capitolul 4 prezint studiul oxidrii atenololului utiliznd un electrod de crbune
sticlos, GCE, a crui suprafa a fost modificat cu aminoacizi i nanoparticule de aur, prin
voltametrie liniar i spectroscopie de impedan.
Oxidarea atenololului s-a realizat pe dou decade de concentraii (10
-6
-10
-4
M) cu o
limit de detecie de 3,9x10
-7
M
Din msurtorile de spectroscopie de impedan s-a realizat un circuit electric
echivalent n bun concordan cu datele experimentale i care permite determinarea
parametrilor electrici.
In capitolul 5 al acestei lucrri se prezint studiul oxidrii carbamazepinei utiliznd un
electrod de aur modificat cu grafene prin voltametrie liniar i spectroscopie de impedan. i n
cazul acestui capitol s-a realizat un circuit electric echivalent, n bun concordan cu datele
experimentale i care permite determinarea parametrilor electrici.
7

Capitolul 1. Consideraii generale ale reaciilor catalizate enzimatic i modul
de urmrire al acestora.

1.1. Cinetica reaciilor enzimatice
n cele mai multe cazuri, enzimele sunt catalizatori att de eficieni nct au o aciune
important chiar la concentraii extrem de mici. [1]. Se va discuta aici mecanismul cel mai
simplu cu putin, implicnd doar un singur substrat. Cercetarea cineticii pentru procesele
enzimatice se face de regul urmrind viteza de reacie la diferite concentraii cresctoare de
substrat i meninnd concentraia de enzim constant. Fcnd astfel de msurtori de vitez, se
obine o dependen a vitezei de concentraia substratului prezentat calitativ n figura 1.1.1. La
concentraii destul de mari de substrat se atinge o valoare maxim (r
max
), care este direct
proporional cu concentraia total de enzim [E]
o
.

Figura 1.1.1. Reprezentarea schematic a vitezelor iniiale n funcie de concentraia de substrat la
concentraie constant de enzim.

Aceast dependen a fost descris de cte Michaelis i Menten, printr-un mecanism
simplu [2]. Ecuaiile cinetice pentru reaciile catalizate de enzime au fost analizate pentru un
singur substrat, pentru care mecanismul propus este urmtorul:
P E ES E S
k
k
k
k
+ : : +

2
2
1
1
(1.1.1)
S i P reprezint substratul i respectiv produsul, iar ES este un intermediar sau complex
enzim-substrat.. Ecuaia de vitez are urmtoarea form:
] [
] [
] [
] [
] [
max
1
2 1
0 2
S
K S
r
k
k k
S
E k
S r
M
+
=
+
+
=

(1.1.8)
Aceast ecuaie, prezentnd dependena vitezei de concentraia substratului, este
concordant cu experiena i explic figura 1.1.1. Raportul ce cuprinde cele trei constante de
vitez (k
-1
+ k
2
)/k
1
= K
M
se numete constanta Michaelis pentru substrat. Cu toate c se
obinuiete s se noteze cu K
M
, aceasta nu este o constant de echilibru. Constanta Michaelis
8
definete concentraia de stare staionar [E][S]/[ES], ea se poate determina din figura 1.1.1., ca
fiind egal cu concentraia de substrat corespunztoare jumtii vitezei maxime.
1.3. Inhibarea reaciilor enzimatice
n studiul inhibitorilor parametri cei mai comuni care descriu inhibiia, sunt: constanta de
disociere a speciilor enzimatice, fracia de inhibiie (potenialul relativ de inhibiie) i
concentraia de inhibitori pentru a reduce activitatea enzimatic la jumtate;
Inhibitorii totali sunt clasificai conform Nomenclaturii Committee of International Union
of Biochemistry (IUB), [15] n diferite tipuri dup efectul pe care l prezint asupra parametrilor
Michaelis-Menten: competitive; noncompetitive; mixte; necompetitive;
Diferenele ntre tipurile de inhibiie sunt reflectate n graficele Lineweaver-Burk.
Mecanismul general de inhibiie este descris de interaciunea substratului S i a
inhibitorului I cu enzima E, dup cum se observ n figura1.3.1.
E S ES E P
k
1
k
-1
k
p
I
I
EI S ESI EI P
k'
p
k
4
k
-4
(K'
S
)
k
-2 k
2 (K
I
) k
-3
k
3 (K'
I
)
(K
S
)

Figura. 1.3.1. Mecanismul general de inhibiie

Capitolul 2. Cinetica i mecanismul reaciei de descompunere a H
2
O
2

catalizate de peroxidaz prin inhibare cu fenol

Acest capitol este consacrat studiului procesului de inhibare de ctre fenol a reaciei de
descompunere a H
2
O
2
catalizate de peroxidaz. S-au fcut msurtori att cu peroxidaz pur,
ct i cu peroxidaz extras din hrean.
2.1. Peroxidaza: prezentare general
Cea mai demult cunoscut i bine studiat peroxidaz este cea izolat din rdcinile de
hrean (Armoracea rustica) [24].
Din punct de vedere structural peroxidaza este considerat o enzim heminic, fiind
alctuit dintr-o parte proteic numit apo-enzim i o parte neproteic ce poart denumirea de
grupare prostetic
2.9. Principiul metodei amperometrice
Principiul metodei const n monitorizarea consumului de O
2
rezultat din reacia de
descompunere a H
2
O
2
, utiliznd un senzor de oxigen de tip Clark.
9
Determinarea constantelor Michaelis-Menten K
M
i a vitezelor maxime r
max
s-a fcut prin
liniarizrile Lineweaver-Burk.
Pentru determinarea tipului de inhibiie i calculul constantelor de disociere K
I
(pentru
disocierea complexului enzima inhibitor) i K
I

(pentru disocierea complexului enzim

substrat inhibitor) a fost necesar trasarea linearizrilor ) ] ([
1
0 2 2
0
O H f
r
= la concentraii
diferite de fenol. Figura 2.9.2. prezint acest grafic.
0 1x10
3
2x10
3
3x10
3
0.0
2.0x10
6
4.0x10
6
6.0x10
6
8.0x10
6
1.0x10
7
1.2x10
7 0 M
2 x 10
-5
M
4 x 10
-5
M
6 x 10
-5
M
8 x 10
-5
M
1
/
r
0

(
m
o
l
/
L
x
s
)
1/[H
2
O
2
] (L/mol)

Figura 2.9.2. Linearizrile Lineweaver-Burk pentru diverse concentraii de fenol
Se observ c odat cu creterea concentraiei de fenol viteza reaciei scade, ceea ce
confirm inhibarea reaciei de ctre fenol.
Din regresiile liniare obinute s-au putut calcula vitezele maxime i constantele Michaelis
aparente n cazul diferitelor concentraii de inhibitori:
Tabel 2.9.2. Vitezele maxime i constantele Michaelis aparente n cazul diferitelor concentraii
de inhibitori
10
5
x[fenol]
0

(mol/L)

panta
10
6
x r
max(I)

(mol/Ls)
Ordonata
la origine
10
3
x K
M(I)


(mol/L)

R/n
0,0 1476 2,88 346166 4,25 0,1424
2,0 1958 2,80 356482 5,48 0,1245
4,0 2671 2,65 376526 7,07 0,1991
6,0 3241 2,59 386030 8,39 0,1248
8,0 3724 2,39 417863 8,90 0,1424

Valorile constantelor de disociere K
I
i K

I,
prezentate n tabelul 2.9.3, s-au determinat cu
ajutorul ecuaiilor (1.3.15) i (1.3.16.), considernd | = 0, i utiliznd valorile constantelor
Michaelis aparente
Tabel 2.9.3. Valorile constantelor de inhibiie K
I
, K
I

[fenol]
0
x 10
5
(mol/L)
K
I
x 10
5

(mol/L)
K

I
x 10
4
(mol/L)
I
K x 10
5

(mol/L)
I
' K x 10
4

(mol/L)
2,0 6,11 6,82
4,0 5,00 4,94
6,0 5,11 5,79
8,0 5,50 4,65
5,43 5,55

10
Din tabelul 2.9.3 se observ c nu exist o valoare constant pentru valorile constantelor
de inhibiie K
I
i K

I
. Aceasta nseamn c coeficientul | nu este 0, deci inhibiia nu e total.
Valorile medii obinute din aceste calcule sunt: K
I
=5,410
-5
mol/L i K

I
=5.5510
-4
mol/L.
Valorile constantelor de inhibiie se pot determina i prin metoda grafic.
Cu ajutorul ecuaiilor (2.11) i (2.12) s-a calculat K
I
=(4,77 97 . 0 )10
-5
mol/L i
K

I
=(3,35 0.97) 10
-4
mol/L n bun concordan cu valoarea medie obinut din calcule (tabelul
2.9.3).
Revenind la figura (2.9.1) prelungirile dreptelor obinute pentru diferite concentraii de
fenol se ntlnesc ntr-un punct de coordonate x = -3528, y = -777673. Graficul se aseamn cu
cel din figura 1.4.1 sugernd un mecanism de inhibiie de tip mixt total. Valoarea raportului K
I
/
K

I
este ~ 10
-1
deci innd cont de tabelele prezentate de J.L. Gelpi i colaboratori, mecanismul
pentru inhibiie ar fi urmtorul:[49]
K
S
K'
S
E S ES
I
I
EI S ESI
E P
K
I K'
I
k

Figura. 2.9.4. Mecanismul propus pentru inhibarea peroxidazei de ctre fenol.

S-au fcut aceleai msuratori i cu peroxidaza extras din hrean. .
n figura 2.9.9 sunt prezentate curbele cinetice la aceeai concentraie de H
2
O
2
cu
peroxidaz pur (curba albastr),i cu peroxidaz extras din hren (curba mov).
7.8
8
8.2
8.4
8.6
8.8
0 25 50 75 100 125 150
t(s)
[
O
]

(
m
g
/
L
)

Figura 2.9.9 Curbele cinetice pentru descompunerea apei oxigenate fr inhibitor cu peroxidaz pur
(albastru) i perozidaz extras din hrean (mov).

Determinarea parametrilor cinetici K
M
i r
max
pentru msuratorile cu peroxidaz din hrean
este mai dificil deoarece msurtorile nu sunt reproductibile i nu se cunoate concentraia de
enzima. Un al inconvenient este acela c enzima nu este stabil dect un timp relativ scurt, n
care nu se pot face dect puine msurtori.
11

Capitolul 3. Descompunerea apei oxigenate catalizate de catalaz utiliznd
medicamente ca i inhibitori

Catalaza joac un rol important n descompunerea apei oxigenate rezultate din diverse
reacii biochimice care au loc n organism. Aceast reacie este cunoscut sub denumirea de
activitate catalitic:

2 2 2 2
2
1
O O H O H
catalaza
+ (3.1)
i a fost subiectul a numeroase studii privitoare la elucidarea cineticii i mecanismului [55].
3.3. Medicamente utilizate ca i inhibitori ai reaciei de descompunere a apei
oxigenate
Unul din cele mai ncnttoare domenii ale enzimologiei moderne este aplicarea inhibitorilor
enzimatici, ca i medicamente n medicina uman i veterinar. De exemplu, aspirina, unul din
cele mai populare medicamente folosite n lume, ca i antiinflamator acionez ca un inhibitor al
enzimei prostaglandin sintetaz [59].

3.5. Atenolol, Metoprolol. Prezentare general
Atenololul (C
14
H
22
N
2
O
3
) este conform cu farmacopeea european, ()-2-[4-[2-hidroxi-3-
izopropilaminopropoxil)]-fenil]-acetamid [110]. Formula spaial este prezentat n figura
3.5.1.
C
O
OH
N
H
CH
3
CH
3
O
NH
2
H

Figura. 3.5.1 Structura atenololului
Masa relativ este 266,3g/mol. Atenololul se prezint sub form de pudr alb sau cristale
incolore foarte solubile n ap, solubile n etanol, puin solubile n clorur de metilen i practic
insolubil n eter.
Metoprolul este prezent n formele farmaceutice sub form de metoprolol tartrat, metoprolol
succinat i metoprolol fumarat.
12
Metoprolul tartrat (C
34
H
56
N
2
O
12
) este conform cu farmacopeea european [110] ()-1-
izopropil-amino-3-p-(2-metoxietil)fenoxipropan-2-ol(2R, 3R)-tartrat cu numrul 56392-17-7.
Formula spaial este prezentat n figura 3.5.2.
OCH
3
O
OH
N
H
CH
3
CH
3
H
COOH
H
OH
OH
H
HOOC
2

Fig. 3.5.2 Structura metoprolului tartrat

Masa relativ este 684,82 g/mol. Metoprolul tartrat se prezint sub form de pudr alb
foarte solubil n ap, solubil n cloroform i diclormetan, puin solubil n aceton i practic
insolubil n eter .

A) Metoda spectrofotometric de determinare a atenololului
3.9. Rezultate i discuii
Reacia este urmrit spectrofotometric prin scderea absorbanei la 240 nm. Att
atenololul ct i metoprololul nu au efecte interferente asupra reaciei deoarece prezint picuri de
oxidare la 270 nm, respectiv 273nm [127].
150 200 250 300 350 400 450
0.00
0.25
0.50
0.75
1.00
1.25
1.50
A
b
s
o
r
b
a
n
c
e

(
a
.
u
.
)
(nm)
atenolol
metoprolol
H
2
O
2

Figura 3.9.1.Spectrul electronic al H
2
O
2
, atenololului i metoprololului
n figura 3.9.1. sunt prezentate spectrele electronice ale apei oxigenate i ale celor dou
medicamente -blocante utilizate de noi ca i inhibitori (atenolol i metoprolol).
Descompunerea apei oxigenate de ctre catalaz decurge dup o lege cinetic de ordinul I

Valoarea vitezei iniiale, r
0
s-a calculat din panta dreptei obinute din reprezentarea
absorbanei funcie de timp. Valorile medii ale vitezelor iniiale s-au calculat din trei msurtori
independente respectnd aceleai condiii experimentale.
13
n figura 3.9.2. sunt prezentate liniarizrile Lineweaver-Burk i prelungirile acestora, la
dou concentraii diferite de atenolol
-4.0x10
2
-2.0x10
2
0.0
2.0x10
2
-6.0x10
3
-3.0x10
3
0.0
3.0x10
3
6.0x10
3
9.0x10
3
1
/
r
o

(
m
o
l
/
L
s
)
1/[H
2
O
2
] (L/mol)
0 M
2x10
-6
M
4x10
-6
M

Figura 3.9.2. Liniarizrile Lineweaver-Burk pentru diferite concentraii cresctoare de atenolol
n tabelul 3.9.1 sunt prezentate att valorile parametrilor cinetici: vitez maxim r
max
,
respectiv constant Michaelis K
M,
ct i valorile pantei respectiv ordonatei la origine pentru toate
concentraiile de atenolol utilizate.
Tabel 3.9.1 Valorile parametrilor cinetici obinui din Liniarizrile Lineweaver-Burk pentru atenolol
10
6
x[atenolol]
0

mol/L)

Panta
10
4
x r
max(I)

(mol/Ls)
Ordonata
la origine
10
2
x K
M(I)


(mol/L)

R/n
0,0 29,795 9,70 1030,3 2,89 0,165
2,0 24,768 9,48 1054,2 2,34 0,1653
4,0 16,984 7,14 1399,5 1,21 0,1655
6,0 29,653 6,82 1464,3 2,02 0.1662
8,0 23,266 6,53 1531 1,51 0,1653
Din acest tabel se poate observa c odat cu creterea concentraiei de atenolol viteza de
reacie scade, ceea ce confirm inhibarea reaciei de ctre atenolol.
Valorile vitezelor maxime, r
max,
se obin din panta liniarizrilor Lineweaver-Burk, iar
constantele Michaelis, K
M
, se obin din ordonatele la origine ale acestor liniarizri. Pentru
determinarea mecanismului de inhibiie i a constantelor de inhibiie se reprezint panta
liniarizrilor Lineweaver-Burk n funcie de concentraia de atenolol, i se obine K
I
= 5,3510
-5

mol/L, (figura 3.9.3a), respectiv ordonata la origine a reprezentrilor Lineweaver-Burk funcie de
concentraia de atenolol i se obine K
I
= 2,5810
-5
mol/L, (figura 3.9.3b)..
2.0x10
-6
4.0x10
-6
6.0x10
-6
8.0x10
-6
23
24
25
26
27
28
29
30
s
l
o
p
e
=
K
M
(
I
)
/
r
m
a
x
(
I
)
(
s
)
[atenolol] (mol/L)
slope=1.112x10
6
[atenolol] +20.752
R
2
=0.99
a
4.0x10
-6
5.0x10
-6
6.0x10
-6
7.0x10
-6
8.0x10
-6
1.4x10
3
1.4x10
3
1.5x10
3
1.5x10
3
i
n
t
e
r
c
e
p
t
=
1
/
r
m
a
x

(
L
x
s
/
m
o
l
)
[atenololo] (mol/L)
intercept =3.28x10
7
[atenolol] +1267.68
R
2
=0.99
b

Figura 3.9.3 Panta liniarizrii Lineweaver-Burk funcie de concentraia de atenolol(a), Ordonata la
origine a liniarizrii Lineweaver-Burk funcie de concentraia de atenolol (b)

14

B). Metoda amperometric de determinare a atenololului

3.10. Rezultate i discuii

Reacia este studiat prin monitorizarea amperometric a consumul de oxigen, rezultat
din reacia de descompunere a apei oxigenate [132].
Determinarea parametrilor cinetici i a tipului de inhibiie se face, n acelai mod,
respectnd aceleai condiii experimentale ca i n cazul metodei spectrofotometrice, doar
volumul de reacie este diferit.
Tabel 3.10.2. Vitezele maxime i constantele Michaelis aparente n cazul diferitelor concentraii de
atenolol prin metoda amperometric

[atenolol]
0
x 10
6

(mol/l)

Panta
r
max
x10
4

(mol/ls)
Ordonata
la origine
K
M(I)
x10
2
(mol/l)
R/n
0,0 18,281 4,64 2155,1 3,94 0,124
2,0 7,986 2,98

3355,7 2,68 0,166
4,0 5,945 2,53 3952,5 2,35 0,166
6,0 6,382 1,94 5154,6 3,29 0,142
8,0 3,104 1,87 5347,7 1,66 0,166

Se observ c odat cu creterea concentraiei de atenolol, aa cum era de ateptat, viteza
reaciei scade, ceea ce confirm inhibarea reaciei de ctre acest medicament.
Aceste rezultate, arat faptul c valorile vitezei maxime obinute prin metoda
spectrofotometric (tabel 3.9.1) sunt duble fa de valorile vitezei maxime obinute prin metoda
amperometric, (tabel 3.10.2), n aceleai condiii experimentale. Acest lucru poate fi explicat
prin stoechiometria reaciei de descompunere a apei oxigenate: din dou molecule de ap
oxigent rezult dou molecule de ap i o molecul de oxigen
De asemenea, n msurtorile amperometrice se msoar cantitatea de oxigen molecular
eliberat, n timp ce prin metoda spectrofotometric se msoar consumul de ap oxigenat care
se descompune [127].








15

Capitolul 4. Studiul oxidrii atenololului utiliznd un electrod de crbune
sticlos modificat cu nanoparticule de Aur

Utilizarea electrozilor modificai ii gsete diverse aplicaii ntr-o larg varietate de domenii
de analiz: medicin, farmacie, protecia mediului, prelucrarea produselor alimentare, tehnic
militar.
Nanoparticulele de aur (AuNPs) sunt des folosite pentru modificarea suprafeei diverilor
electrozi, avnd multiple aplicaii electrocatalitice printre care i construcia de biosenzori [137-
139].
Recent mai multe studii s-au axat pe detecia atenololului datorit utilizrii sale terapeutice n
tratamentul diferitelor boli cardiace ( angin pectoral, infarct miocardic, hipertensiune arterial,
aritmie cardiac [145,147].

Contribuii originale

4.2. Prepararea soluiei de nanoparticule de aur (AuNPs)

Soluia de nanoparticule de aur, AuNPs s-a obinut astfel: 50 mL de HAuCl
4
(0,01%) se
aduc la fierbere sub agitare continu, apoi se adaug 1 mL de citrat de sodiu 1% i se las n
continuare s fiarb alte 15 minute. Apoi soluia se las s se rceasc sub agitare continu timp
de 45 de minute. Soluia astfel obinut este de culoare roz. Din imaginile TEM diametrul
nanoparticulelor de aur, este de aproximativ 40 nm.

4.3.Preprarea electrodului de crbune sticlos (GCE) pentru depunerea de
nanoparticule de aur ( AuNPs) pe suprafaa sa.

n schema 4.4 este reprezentat modificarea chimic a suprafeei electrodului de GCE cu
nanoparticule de aur i modul n care are loc formarea diverselor legturi la suprafaa
electrodului modificat.

16

Schema 4.4. Reprezentarea schematic a legrii nanoparticulelor de aur pe suprafaa electrodului de
GCE-AuNPs
Se obin astfel structuri GCE/PGA/cistein/AuNPs, care vor fi simbolizate GCE-AuNPs.
4.4. Aparatura utilizat
Pentru vizualizarea nanoparticulelor de aur i pentru caracterizarea suprafeei
nanostructurate a electrodului s-au utilizat diferite tehnici de microscopie TEM(Transmission
Electron Microscopy), AFM( Atomic Force Microscopy).
Pentru a caracteriza efectele care au loc la suprafaa electrodului s-au folosit metode
electrochimice: voltametrie ciclic i: spectroscopie de impedan
4.5.Rezultate i discuii
Modificarea electrodului de crbune sticlos GCE cu amine au fost studiate att n scop
electrocatalitic, ct i pentru obinerea de senzori electrochimici.[150-155]
In figura 4.5.3 sunt prezentate imaginile TEM, ale nanoparticulelor de aur stabilizate. Se observ
c nanoparticulele de aur sunt dispersate, datorit interaciunii electrostatice de repulsie ntre
moleculele de citrat i au dimensiuni cuprinse ntre 40 i 70 nm.


Figura 4.5.3 Imagini TEM ale nanoparticule de aur stabilizate cu citrat



17
n figura 4.5.3 sunt prezentate imagini AFM obinute n contact mode. Se observ c
exist o densitate mare de nanoparticule ataate pe suprafaa electrodului, ceea ce ii confer
acesteia caracterul nanostructurat.

Figura.4.5.4. Imagini AFM (contact mode) ale electrodului de crbune sticlos (GCE) acoperit cu
nanoparticule de aur.
Imagini mult mai clare cu fost obinute atunci cand s-a folosit metoda tapping mode.
Aa cum se vede din figura 4.5.4, suprafaa electrodului a fost acoperit cu un monostrat de
nanoparticule metalice. Nanoparticulele i-au pstrat
n general dimensiunea iniial (cea din soluia coloidal) i doar n puine cazuri au
format aglomerate mai mari (dimensiunea > 100 nm).

Figura 4.5.5. Imagini AFM (tapping mode) ale electrodului de crbune sticlos (GCE) acoperit cu
nanoparticule de aur


4.6. Caracterizarea electrochimic a electrodului nanostructurat, GCE-AuNPs


S-au nregistrat voltamogramele liniare n intervalul de potenial +0,31V/ESC, att n
tampon Britton Robinson, ct i n soluii de diferite concentraii de atenolol (10
-7
-10
-2
M), n
tampon Britton Robinson.(figura 4.5.6 a)
Ulterior electrodul a fost transferat n soluiile tampon care conin concentratii diferite de
atenolol (10
-7
-10
-2
M).
La concentraii mai ridicate (10
-6
-10
-3
M) de atenolol se observ apariia unui pic de
oxidare la o valoare de potenial de aproximativ +0.65V/ESC. Acest potenial este semnificativ
mai mic dect cel obinut cu un electrod de crbune sticlos modificat cu fulerene, C
60
-GCE
(+1.04 V vs Ag/AgCl), sau cu un electrod past de carbon modificat cu nanoparticule de Aur (
0,85 V/Ag/AgCl) [145-147].
18
Din voltamograma liniar prezentat n figura 4.5.6a se poate observa c exist o cretere
a intensitii picului de oxidare a atenololului ntre concentraiile 10
-6
-10
-4
M. Acest lucru a
permis trasarea curbei de calibrare prezentat n figura 4.5.6b.
0.2 0.4 0.6 0.8
0.0
2.0x10
-6
4.0x10
-6 10
-4
M
10
-5
M
10
-6
M
10
-7
M
10
-3
M
I

(
A
)

E (V/SCE)
Electrolit
a.
10
-6
10
-5
10
-4
2.0x10
-6
2.5x10
-6
3.0x10
-6
3.5x10
-6
4.0x10
-6
I
p

(
A
)
C
atenolol
(M)
b.
y = 5.77*10
-6
+ 5.09*10
-7
*X
R = 0.988

Figura 4.5.6. Voltamogramele liniare pentru diferite concentraii de atenolol (10
-7
-10
-3
M) pe electrod
GCE-AuNPs (a), Curba de calibrare pentru detecia atenololului cu electrod GCE-AuNPs(b).
Condiii experimentale: viteza de baleiaj50 mV/s, potenial de start: +0,35V/ESC, tampon BR, pH=10.

Este interesant s subliniem c la concentraii mai mari de atenolol 10
-3
-10
-2
M, picul de
oxidare are o scdere semnificativ. Acest lucru se poate explica prin adsorbia produsului de
oxidare pe suprafaa electrodului, ceea ce duce la micorarea suprafeei active a electrodului.
Practic are loc blocarea suprafeei electrodului.[157]
Tot din voltamograma liniar se poate vedea c la concentraii foarte mici de atenolol 10
-
7
nu apare nici un pic de oxidare la fel ca i n soluia de tampon Britton-Robinson.
Figura 4.5.12 prezint voltametriile liniare n tampon Britton Robinson la variaia de pH
utiliznd o concentraie de 6x10
-4
M atenolol.(la o vitez de scanare 100mVs
-1
).
0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2
0.0
3.0x10
-6
6.0x10
-6
9.0x10
-6
1.2x10
-5
1.5x10
-5
pH 5
pH 7
pH 10
I

(
A
)
E (V/SCE)



Figura 4.5.12. Voltamogramele liniare ale soluiei de 6x10
-4
M atenolol, pe electrod GCE/AuNPs la
diferite valori de pH.
Condiii experimentale: electrolit tampon BR, viteza de baleaj 100mV/s, potenial de start +0,35V/ESC


Din figura 4.5.12, se observ apariia picului de oxidare, la un potenial de +0,65 V/ESC,
a gruprii amino prezente n molecula de atenolol, numai n mediu bazic la pH=10.
19
0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
0.0
5.0x10
-6
1.0x10
-5
1.5x10
-5
2.0x10
-5
BR Electrolit
10
-7
M
10
-6
M
10
-5
M
10
-4
M
10
-3
M
I

(
A
)
E (V/SCE)


Figura 4.5.13. Voltamogramele liniare ale atenololului pe electrod GCE nemodoficat.
Condiii experimentale: electrolit tampon BR,pH=10, viteza de baleaj: 100mV/s, potenial de pornire
+0,35V/SCE.

Din figura 4.5.13 se observ c la concentraii sczute de atenolol (10
-7
-10
-5
M)
voltamogramele liniare se suprapun cu nregistrarea dat de soluia tampon, evideniind faptul c
compusul nu prezint activitate redox.
La concentraie mai mare (10
-4
M) curentul crete i apare un pic de oxidare foarte larg, n
jur de +0,65V/ESC, acesta sugernd ca apare un transfer cinetic lent de echilibru.
Comparnd voltamogramele din figura 4.5.13, cu cele obinute pe electrodul modificat
din figura 4.5.6 se observ c prezena nanoparticulelor de aur induc electrooxidarea gruprii
amino a atenololului, la valoarea de potenial de +0,65V/ESC, conform mecanismului prezentat
n schema 4.6.



Schema4.6. Mecanismul propus pentru electro-oxidarea atenololului pe electrod de GCE-AuNPs [147].

Oxidarea are loc prin transferul a 2 electroni i 2 protoni. Transferul celor 2 protoni se
face de la gruparea NH i nu de la gruparea OH [147].

In figura 4.5.14(a,b) sunt prezentate diagrama Nyquist i schema circuitului echivalent
corespunztoare spectrelor de impedan cu electrod GCE-AuNPs, n prezen de atenolol.

Circuitul echivalent conine rezistena soluiei (R
s
) n serie cu dou circuite RC paralel:
R
b
C
g
(care caracterizeaz ansamblul nanostructurat), respectiv R
ct
C
dl
.( care cracterizeaz
interfaa) Spectrele de impedan de la concentraiile mari de atenolol (10
-3
-10
-2
M) s-au
suprapus cu spectrul de impedan de la concentraia de 10
-4
M atenolol i de aceea nu s-a
reprezentat n figura 4.5.14 b

20
0 1x10
4
2x10
4
3x10
4
4x10
4
5x10
4
6x10
4
0
1x10
4
2x10
4
3x10
4
4x10
4
5x10
4
6x10
4
10
-7
10
-6
10
-5
10
-4
3.6x10
4
3.8x10
4
4.0x10
4
4.2x10
4
4.4x10
4
4.6x10
4
R
c
t

(
O
h
m
)
C
atenolol
(M)
10
-6
M
10
-5
M
10
-4
M -

Z
im

(
O
h
m
)
Z
re
(Ohm)
b.


Figura 4.5.14. Circuitul electric echivalent obinut prin fitarea datelor experimentale de spectroscopie de
impedan(a), Diagrama Nyquist obinut la concentraii diferite de atenolol(10
-6
-10
-4
M) n tampon
Britton-Robinson i variaia R
ct
cu concentraia de atenolol.( b)


Din figura 4.5.14b se observ c toate spectrele obinute se caracterizeaz prin 2
semicercuri: unul mic care apare la frecvene foarte mari i unul mare care apare la frecvene
medii-joase. Regiunea caracteristic difuziei Warburg (linia dreapt sub un unghi de 45
0
) nu este
bine definit n aceste spectre i de aceea nu a fost luat n calcul.
Dup fitarea datelor experimentale s-au obinut valorile rezistenei (R
b
= 5k ) i a
capacitii (C
g
= 2,9 x 10
-9
F) care sunt constante indiferent de concentraiile de atenolol.
Rezistena de transfer de sarcin (R
ct
) este semnificativ mai mare dect R
b
, ea variaz cu
concentraia de atenolol i este cuprins ntre 37 i 45 k.


Capitolul 5. Studiul oxidrii carbamazepinei utiliznd un electrod de aur
modificat cu grafene i nanoparticule de aur

Acest capitol este consacrat studiului oxidrii moleculei de carbamazepin cu ajutorul
unui electrod de aur modificat cu nanoparticule de aur i grafene, lund n considerare
proprietile electrocatalitice ale grafenelor.
5.1. Caracteristici generale ale moleculei de carbamazepin

Figura 5.1.1.Structura moleculei de carbamazepin

21
Carbamazepina este considerat ca fiind unul din poluaii emergeni din sol i din apele de
suprafa, din preajma sanatorilor, prin urmare este de dorit determinarea ei exact prin metode
rapide i sigure.

5.3. Prepararea electrodului de aur modificat cu grafene i nanoparticule de aur
(Au-GR-AuNPs)

n schema 5.1 este prezentat modul i etapele n s-a realizat modificarea electrodului de aur
cu grafene i nanoparticule de aur [180].

Schema 5.1 Reprezentarea schematic a modificrii suprafeei electrodului de aur cu grafene i
nanoparticule
5.5. Rezultate i discutii

Figura 5.5.1. prezint grafene cu forme i dimensiuni variate.
Toate imaginile AFM arat faptul c stratul de grafene depus pe suprafaa de aur nu are
morfologia unui singur strat. Cu toate acestea masurtorile electrochimice dovedesc faptul c
proprietile electrocatalitice se pstreaz i n acest caz.

aa
bb
cc
dd
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0
0
100
200
300
400
500
600
H
e
i
g
h
t

(
n
m
)
Length (m)
(1) (2)
(3)
f
0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5
0
20
40
60
80
100
H
e
i
g
h
t

(
n
m
)
Length (m)
(1)
(2)
g


Figura 5.5.1. Imaginea optic a suprafeei de aur modificat cu grafene Au-GR (a); imagini
reprezentative ale grafenelor pe suprafa de aur (tapping
TM
mode) (b-d); seciunea transversal a
grafenelor utilizate (f,g).

22

5.6. Caracterizarea electrochimic a electrodului modificat cu nanoparticule de aur
i grafene.


Voltamograma ciclic a carbamazepinei (figura 5.6.1), permite identificarea unei perechi
de picuri la potenialele de +1,49 V/ESC (oxidare, I
a
) i +1,16V/ESC (reducere,I
c
). Peste picul de
oxidare I
a
se suprapune un pic de oxidare I
a
de intensitate mult mai mic, poziionat la un
potenial de aproximativ +1,6V/ESC.
Diferena de potenial (calculat ca diferena dintre potenialele
a
i
c
are o valoare
de 0,33V/ESC, ceea ce sugereaz c molecula de carbamazepin sufer la electrod un proces
redox cvasi-reversibil
0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 1.8
-2.0x10
-5
0.0
2.0x10
-5
4.0x10
-5
6.0x10
-5
8.0x10
-5
1 2 3 4 5 6 7
0
10
20
30
40
I
p
e
a
k
(

A
)

(mV
1/2
s
-1/2
)
I

(
A
)
E(V/SCE)
background

Figura 5.6.1. Voltamogramele ciclice succesive nregistrate cu un electrod de Au-GR-AuNPs n soluie de
electrolit (linia neagr) i soluie de electrolit i carbamazepin 10
-2
M (linia albastr), variaia
intensitii curentului de pic cu viteza de scanare la .
Condiii experimentale: electrolit acetonitril +0,05M TBAP, viteza de baleaj 25 mV/s, potenial de
pornire +0,6V/ESC, numr de cicluri 3.
Din studiile de voltametrie ciclic, (figura 5.6.1), respectiv voltametrie liniar (figura
5.6.2), aceste picuri de oxidare se pot observa doar la concetraii ridicate de carbamazepin (10
-2

M), la concentraii mai mici aceste picuri se suprapun genernd un palier larg de oxidare.
Din voltamogramele cu baleaj liniar de potenial se observ c picul de oxidare crete
odat cu creterea concentraiei de carbamazepin. La concentraii sczute (10
-6
M), dispare acest
pic de oxidare, iar semnalul se suprapune cu semnalul electrolitului O cretere clar a picului de
oxidare a fost obinut la concentraii mai mari dect 5x10
-6
M, i acest lucru a permis trasarea
unei curbe de calibrare cuprins ntre 10
-5
-10
-2
M carbamazepin. (Fig 5.6.2b)
23
0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6
0.0
2.0x10
-5
4.0x10
-5
6.0x10
-5
8.0x10
-5
electrolit
10
-5
M
4 x 10
-5
M
10
-4
M
4 x 10
-4
M
10
-3
M
4 x 10
-3
M
10
-2
M
I

(
A
)
E (V/SCE)
a
0
3x10
-3
5x10
-3
8x10
-3
1x10
-2
0
2x10
-5
4x10
-5
6x10
-5
8x10
-5
1x10
-4
I
p
e
a
k

(
A
)
C (M)
b

Figura 5.6.2 Voltamograma cu baleaj liniar de potenial a carbamazepinei pe electrod de
Au-GR-AuNPs(a),Curba de calibrare pentru carbamazepin (b).
Condiii experimentale: electrolit acetonitril +0,05M TBAP, viteza de baleaj 25mV/s, potenial de start
+0,6V/ESC.

Pentru a dovedi activitatea electrocatalitic a electrodului de aur modificat cu grafene i
nanoparticule de aur, s-au trasat voltamogramele liniare, pentru un electrod de aur nemodificat i
modificat cu grafene i nanoparticule de aur la aceleai concentraii de carbamazepin i n
aceleai condiii experimentale


Rezultatele obinute cu cele dou tipuri de electrozi sunt prezentate n figura 5.6.3
0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 1.8
0
2x10
-5
4x10
-5
6x10
-5
8x10
-5
1x10
-4
10
-4
M
10
-3
M
Au
Au-GR-AuNPs
I

(
A
)
E(V/SCE)
10
-2
M

Figura 5.6.3. Voltamogramele cu baleaj liniar de potenial a diferitelor concentraii de carbamazepin
obinute cu un electrod de aur (linia albastr), respectiv Au-GR-AuNPs, (linia roie), Condiii
experimentale: electrolit acetonitril+0,05M TBAP, viteza de baleaj 25mV/s, potenial de pornire
+0,65V/ESC.


Din figura 5.6.3 se observ c n cazul electrodului de aur modificat, exist o cretere
semnificativ a intensitii picului de oxidare, mpreun cu o deplasare a valorii potenialului de
oxidare la toate concentraiile de carbamazepin cu aproximativ 90 mV spre valori mai negative.
Pentru a avea o caracterizare suplimentar a electrodului nanostructurat, s-au efectuat i
spectrele de impedan electrochimic la un potenial de +1,49V/ESC. In figura 5.6.4 s-au
reprezentat circuitul echivalent, Diagrama Nyquist i rezistena de transfer de sarcin funcie de
concentraia de carbamazepin.
24
aa


Figura 5.6.4. Circuitul electric echivalent obinut prin fitarea datelor experimentale de spectroscopie de
impedan(a), Diagrama Nyquist obinut la concentraii diferite de carbamazepin(10
-5
-10
-2
M) n
soluie de electrolit (acetonitril si TBAP)(b) variaia R
ct
cu concentraia de carbamazepin.( c)
Condiii experimentale:electrolit acetonitril+0,05M TBAP, potenial +1,49V/ESC

Din diagrama Nyquist se poate vedea c spectrele de impedan de la concentraiile mici
de carbamazepin (10
-6
M) se suprapun cu spectrul de impedan al electrolitul.
Spectrele de impedan sunt caracterizate de un singur semicerc n intervalul de frecven
ridicat i mediu, urmat de o linie dreapt, sub un unghi de 45
0
C n intervalul de frecven joas.
(figura inserata 5.6.4b) Linia dreapt care corespunde zonei de difuzie Warburg, apare numai la
concentraii mai mari de 10
-4
M.
Circuitul electric echivalent ales n concordan cu datele experimentale este prezentat n
figura 5.6.4 a. El conine rezistena soluiei R
S
, rezistena de transfer de sarcin R
ct
, impedana
Warburg Z
Wt
, i capacitatea stratului dublu electric C
dl
.
Rezistena de transfer de sarcin R
ct
este influenat de starea suprafaei electrodului
nanostructurat. In acest caz se observ c R
ct
are o variaie liniar cu concentraia de
carbamazepin n intervalul, 10
-5
-10
-3
M, valoarea sa scznd de la 127 la 5,8 K i prezint o
tendin de saturaie la aproximativ 2,5 K (figura 5.6.4b). Aceast saturaie poate fi atribuit
acumulrii moleculelor de carbamazepin ntre straturile de grafene, care n timp duce la o
interaciune slab ntre grafene i suprafaa electrodului de aur.





25

Concluzii generale

Enzimele sunt catalizatori deosebit de eficieni la concentraii foarte mici. ntocmai ca i
catalizatorii clasici, enzimele ofer o cale de reacie nou, cu o energie de activare mult mai
mic, fr modificarea ns a echilibrului reaciilor reversibile.
Pe baza mecanismului de cinetic enzimatic se pot stabili interaciunile dintre enzim i
substrat.
S-a realizat studiul procesului de inhibiie a fenolului asupra reaciei de descompunere a
apei oxigenate, catalizate de peroxidaz.
S-au fcut msurtori amperometrice att cu peroxidaz pur, ct i cu peroxidaz extras
din hrean. Pentru ambele tipuri de peroxidaz s-au calculat valorile parametrilor cinetici i s-a
stabilit mecanismul de inhibiie al fenolulului.
S-a realizat studiul procesului de inhibiie a atenololului i metoprololului asupra reaciei
de descompunere a apei oxigenate, catalizate de catalaz.
Pentru ambele medicamente -blocante s-au determinat parametrii cinetici, att din
msurtori amperometrice ct i spectrofotometrice.
S-a stabilit mecanismul de inhibiie pentru aceste medicamente -blocante utilizate ca i
inhibitori pentru reacia de descompunere a apei oxigente.
S-a realizat studiul oxidrii atenololului cu ajutorul unui electrod de crbune sticlos, GCE
a crui suprafa a fost modificat cu ansamble de aminoacizi i nanoparticule de aur (AuNPs),
prin voltametrie liniar i spectroscopie de impedan.
Suprafaa electrodului modificat, permite determinarea unui pic de oxidare a
atenololului la un potenial considerabil mai mic (0.65V/SCE), n comparaie cu datele de
literatur existente.
Din msurtorile de spectroscopie de impedan s-a realizat un circuit electric echivalent
n bun concordan cu datele experimentale i care permite determinarea parametrilor electrici
cum sunt: Rezistena de transfer de sarcin (R
ct
), i rezistena ansamblului nanostructurat (R
b
).
S-a realizat studiul oxidrii carbamazepinei cu ajutorul unui electrod de aur, a crui
suprafa a fost modificat cu grafene. prin voltametrie liniar i spectroscopie de impedan.
Modelul ales de noi a evideniat oxidarea carbamazepinei la un potenial de +1,49V/SCE,
i a unui pic de reducere mai mic, la un potenial de +1,16V/ESC.
Din msurtorile de spectroscopie de impedan s-a realizat un circuit electric echivalent
n bun concordan cu datele experimentale i care permite determinarea parametrilor electrici.
26
Din msurtorile electrochimice s-a constatat c n cazul electrodului de aur modificat,
exist o cretere semnificativ a intensitii picului de oxidare, mpreun cu o deplasare spre
valori negative a potenialului de oxidare, la toate concentraiile de carbamazepin.
Rezultatul cercetrilor personale contribuie la mbogirea cunotiinelor referitoare la
metodele cinetice i electrochimice de analiz a unor medicamente bazate pe reaciile catalizate
enzimatic.

























27


Bibliografie selectiv


1. I. Bldea, Some Advanced Topics in Chemical Kinetics, 2000, Cluj-Napoca University Press
2. L. Michaelis, M. L. Menten, Die Kinetik der Invertinwirkung, Biochem. Z., 1913, 49, 333-
369
15.Symbolism and Terminology in Enzyme Kinetic.Recommendation(1981)of the Nomenclature
Committee of the International Union of Biochemistry Reprinted in Eur .J.Biochem.,
1982,128, 281-291
24. K.R. Barber, M.J. Rodrigues-Maron, G.S. Shaw, Journal Biochemical, 1991, 232,
49. R.J. Leatherbarrow, Use of nonlinear regression to analyze enzyme kinetic data: Application
to situations of substrate contamination and background subtraction, Anal. Biochem., 1990,
184(2), 274-278.
55. B. Chance, An Intermediate Compound in the Catalase-hydrogen peroxide Reaction, Acta
Chem. Scand, 1947, 1 , 236-267
59. I. Claiken, S. Rose, R. Karlsson, Anal Biochem., 1991, 201, 197
110. ***Pharmacopee Europeene, 3
e
edition, 1997
127. F.Pogacean, I.Baldea, L.Olenic, S. Pruneanu, Kinetic determination of drug concentration
via enzyme-catalyzed decomposition of hydrogen peroxide, Particles scince and
technology, 2011, in press, Doi 10.1080/02726351.2010.521234
132. F. Pogacean, I Baldea, F. Turbat, The inhibitory effect of the atenolol upon the enzyme
catalyzed hydrogen peroxide decomposition, 2006, Studia Universitatis Babes-Bolyai
Chemia LI, 1
137. M.C. Daniel, D.Astruc, Gold nanoparticles: assembly, supramolecular chemistry, quantum-
size-related properties, and applications toward biology, catalysis, and nanotechnology,
Chem.Rev., 2004, 104, 293
138. S. El-Deab, T. Ohsaka, An Extraordinary Electrocatalytic Reduction of Oxygen on Gold
Nanoparticles-electrodeposited Gold Electrodes, Electrochem. Commun., 2002, 4, 288-292
139. R Willner, Baron, B. Willner, Growing metal nanoparticles by enzymes, Adv. Mater., 2006,
18, 1109-1120
145. R.N.Goyal, V.K. Gupta, M. Oyama, N. Bachheti, Differential pulse voltammetric
determination of atenolol in pharmaceutical formulations and urine using
nanogoldmodified indium tin oxide electrode, Electrochem.Commun., 2006, 8, 65-70
28
146. N.Goyal, S.P. Singh, Voltammetric determination of atenolol at C60-modified glassy
carbon electrodes, Talanta, 2006, 69, 932-937.
147. M. Behpour, E. Honarmand, S.M. Ghoreishi, Nanogold-modified Carbon Paste Electrode
for the Determination of Atenolol in Pharmaceutical Formulations and Urine by
Voltammetric Methods, Bull.KoreanChem.Soc. 2010, 31, 4, 845-849
150. A.M.Yu, H.Y.Chen, Electrocatalytic oxidation of hydrazine at the poly(glutamic acid)
chemically modified electrode and its amperometric determination, Anal.Lett., 1997, 30,
599-607
151. L.Zhang, Y.Sun, X.Lin, Separation of anodic peaks of ascorbic acid and dopamine at an -
alanine covalently modified glassy carbon electrode, Analyst, 2001, 126, 1760-1763
152. D.P.Santos, M.F.Bergamini, A.G.Fogg, M.V.B.Zanoni, Application of a glassy carbon
electrode modified with poly(glutamic acid) in caffeic acid determination, Microchim.Acta,
2005, 151, 1-2, 127-134
153. G.Hu, Y.Liu, J.Zhao, S.Cui, Z.Yang, Y. Zhang, Selective response of dopamine in the
presence of ascorbic acid on L-cysteine self-assembled gold electrode,
Bioelectrochemistry,2006, 69, 254-257
154. D.P.Santos, M.V.B.Zanoni, M.F.Bergamini, A-M. Chiorcea-Paquim, V.C. Diculescu, A-M.
Oliveira Brett, Poly(glutamic acid) nanofibre modified glassy carbon electrode:
Characterization by atomic force microscopy, voltammetry and electrochemical impedance,
Electrochim. Acta, 2008, 53, 3991-4000
155. R.S. Deinhammer, M.Ho, J.W. Anderegg, M.D.Porter, Electrochemical oxidation of amine-
containing compounds: a route to the surface modification of glassy carbon electrodes,
Langmuir, 1994, 10, 1306-1313
157. R.N. Hegde, B.E. Kumara Swamy, B.S. Sherigara, S.T. Nandibewoor, Electro-oxidation of
Atenolol at a Glassy Carbon Electrode, Int. J. Electrochem. Sci., 2008, 3, 302-314
180. Du Meng, Tao Yang, Kui Jiao, J. Mater. Chem., Immobilization-free direct electrochemical
detection for DNA specific sequences based on electrochemically converted gold
nanoparticles/graphene composite film, 2010, 20, 9253-9260







29

List de lucrri publicate:

1. C. Muresanu, L.Copolovici, F. Pogacean, A kinetic method for para-nitrophenol
determination based on its inhibitory effect on the catalatic reaction of catalase, Central
European Journal of Chemistry, 2005, 3(4), 592-604.
2. A. Orza, L. Olenic, S. Pruneanu, F. Pogacean, A.S. Biris, Morphological and electrical
characteristics of amino acid-AuNP nanostructured two-dimensional ensembles, Chem. Phys.,
2010, 373, 295
3. D. Vlascici, S.Pruneanu, L. Olenic, . Pogacean et all, Manganese(III) Porphyrin-based
Potentiometric Sensors for Diclofenac Assay in Pharmaceutical Preparetion, 2010, Sensors,
10(10), 8850-8864
4. S. Pruneanu, F. Pogacean, C. Grosan, E.M.Pica, L.V. Bolundut, A.S. Biris, Electrochemical
investigation of atenolol oxidation and detection by using a multicomponent nanostructures
assembly of amino acids and gold nanoparticles, Chem. Phys. Lett., 2011, 504, 1-3, 56-61
5. F. Pogacean, I.Baldea, L.Olenic, S. Pruneanu, Kinetic determination of drug concentration via
enzyme-catalyzed decomposition of hydrogen peroxide, Particulates science and technology,
2011, in press, Doi 10.1080/02726351.2010.521234.
6. F. Pogacean, I Baldea, F. Turbat, The inhibitory effect of the atenolol upon the enzyme
catalyzed hydrogen peroxide decomposition, 2006, Studia Universitatis Babes-Bolyai Chemia
LI, 1
7. F. Pogacean, I. Baldea, F. Turbat, Inhibitory effect of metoprolol upon catalase-H
2
O
2

decomposition , used as potential kinetic method to determine the drug concentration, 2007,
Studia Universitatis Babes-Bolyai, LI, 2, 125-134



Brevete de invenie



1. S. Pruneanu, F Pogacean, L. Olenic, Procedeu de realizare a unui electrod de crbune sticlos
modificat cu un ansamblu nanostructurat pe baz de nanoparticule de aur i L-cistein( cerere de
brevet-Nr. OSIM A/00635 / 04.07.2011)