Sunteți pe pagina 1din 10

Obiectivele: Tipurile de acizi nucleici, funciile i repartizarea lor n celul. nucleici, func i n celul.

Constituienii acizilor nucleici; bazele azotate, pentozele, acidul fosforic. Nucleozidele i nucleotidele. 3 , 5 - cAMP dezoxiribonucleici. 3 5 Structura primar, secundar i teriar a acizilor dezoxiribonucleici Cromatina. Nucleosomul. Structura acizilor ribonucleici (tRNA, mRNA, rRNA). Denaturarea i hibridizarea acizilor nucleici. Acizii nucleici sunt produi de policondensare ai mononucleotidelor, deci sunt polinucleotide. Nucleotidele - sunt esteri ai nucleozidelor cu un rest, dou sau trei resturi fosfat dou Rolul nucleotidelor: 1. Nucleozid monofosfaii reprezint elementul structural al acizilor nucleici. elementul nucleici. Nucleozid trifosfaii sunt precursori macroergici la sinteza DNA i RNA. n aceste reacii cednd grupa pirofosfat se transform n resturi de nucleozidmonofosfat, baza structurala a laniului polinucleotidic. 2. ATP - purttorul energiei chimice n celul, servete la transferul grupelor fosfat macroergice i e cheia ce leag procesele ce decurg cu eliminarea, degajarea energiei i cele ce utilizeaz energia. ADP i AMP, ce se formeaza n rezultatul defosforilrii ATP, se vor fosforila pn la ATP n procesul respiratiei tisulare.. 3. iau parte la transferul unor blocuri de constructie (acidul acetic, glucoza, colina) transformndu-le n substane / substan biologice active uridindifosfatglucoz, citindifosfatcolin a etc. citindifosfatcolin 4. 5.Unele mononucleotide premordiale conin i alte baze azotate - nicotinamida n nicotinamid mononucleotid, precursorul NAD, flavinmononucleotida i FAD. 6. In organiusme snt prezente 2 feluri de esteri fosforici ai nucleotidelor, (AMP, ADP, ATP), n alte cazuri fosfatul leaga 2 atomi de 02 ai pentozei n acelai nucleotid. Se formeaz nucleotide ciclice - 2',3' i 3',5'. Produsul 2',3' se formeaz ca intermediat la degradarea ribornucleotidelor, pe cnd cAMP 3',5' - este un ribonucleotid natural ce poseda proprietti unicale i o activitate biologic deosebit, reglnd metabolismul ca mesager n efectul hormonal. Nucleozidul Bazele pirimidinice Bazele purinice Structura ADN Structura primar- reprezint succesiunea dezoxiribonucleotidelor (formate de BA: A,G,C,; ; Pentoza- dezoxiriboza, Pe rest fosfat) i este stabilizat de legturile 3'5' fosfodiesterice (format la interaciunea 3'hidroxigrupei din pentoza (format interac 3'hidroxigrupei unui nucleotid i 5'-hidroxigrupa pentozei altui nucleotid. Catena de DNA are dou capete 3' i 5'. Captul 5' este trifosforilat iar 3 conine hidoxilul liber. Deci catenele sunt polare con Structura secundar - reprezint o spiral dubl (bicatenar) n care bazele azotate ocup interiorul structurii (sunt hidrofobe) interacioneaz ocup interac prin legturile de H, care asigur mperecherea specific (complimentar) a BA. C-G i A-T- planurile BA sunt leg orientate perpendicular pe axul unic - planul resturilor glucidice are pozitia de unghi drept fa de cel al BA catenele sunt antiparalele. Exist diferite forme de DNA care sunt determinate de gradul de dehidratare a acizilor nucleici: A,B i Z. Modificrile n dublul helix sunt Modific dependente de anturajul extern ai moleculei de DNA. DNA. Dublul helix posed dinamism. forma A: A: conine 11 resturi la o spir, con spir este rsucit spre dreapta. forma clasica B: conine 10 mononucleotide la o spir. con mononucleotide este rsucit spre dreapta. - 10 nucleotide ocup 34 Angstremi (3,4 nm). - o nucleotid cuprinde 3,4A (0,34 nm). conformatia Z spre deosebire de A i B este rsucit spre stnga. Chargaff (1949) studiind componena DNA a stabilit urmtoarele legiti componen legit la aceeai specie de organisme DNA are o componen nucleotidic identic aceea componen nucleotidic identic componenta DNA la diverse specii de organisme difer difer - DNA la aceeai specie nu este dependent de: vrst, raie alimentar, condiiile mediului ambiant aceea ra condi - n DNA, A=T i G=C, deci A/T=1 i G/C=1 - suma BA purinice este egal cu suma BA pirmidinice dac A+T este mai mare dect G+T avem DNA de tip AT

dac G+T este mai mare dect A+T avem DNA de tip GT t C de topire este mai mica cnd predomin perechile A-T t C de topire este mai mare cnd predomin perechile G-C perechile la eucariote DNA mitocondrial este circular DNA conine secvene structurale i reglatoare con secven Structura teriar a DNA ter se conine n cromozomi, care au diferite forme n dependent de strangulaie, care sunt la om n numr de 46. con strangula Un cromozom prezint o molecul gigant de DNA superspiralizat (predomin superspiralizarea negativ), deci este unitatea structural repetabil a cromatinei DNA este asociat n nucleozom cu proteinele bazice histonele, care formeaz bucle proteice octamerul (set dublu de H4,H3,H2A,H2B) este nfurat de DNA dublu inelar cu lungimea de 146 nucleotide formnd o structur discoidal. - solenoid. solenoid. Legturile dintre DNA i histone sunt ionice Leg ARN Structura primar- secvena de ribonucleotide (baze: A,G,C,U; pentoza- riboza i rest fosfat) stabilizat de legturi secven fosfodiesterice. Este monocatenar. Structura secundar a t-RNA are infiarea unei "frunze de trifoi" Ea se formeaz n urma imperecherii complementare intracatenare a nucleotidelor infiarea n anumitor sectoare. Sectoarele, care nu sunt ncadrate n formarea legturilor de H formeaz lanuri sau bucle n lan Sectorul de acceptare CCA cu hidroxilul 3 liber la care se fixeaz grupa COOH al AA. Bucla anticodonic este format din apte nucleotide. Ea conine un triplet nucleotidic specific pentru fiecare t-RNA con numit anticodon. Anticodonul t-RNA dup principiul complementarittii se mperecheaz cu codonul respectiv din RNAr. Interaciunea codon-anticodon determin ordinea aranjrii aminoacizilor n catena polipeptidic. RNAr. Interac determin aranj - Bucla pseudouridilic const din apte nucleotide n care restul acidului pseudouridilic este obligatoriu i particip la interaciunea cu ribozomii. - Bucla dihidrouridinic const din 8-12 resturi nucleotidice, printre care prezena ctorva resturi de dihidrouridin este obligatorie i interactiuneaz cu enzima aminoacil-RNAsintetaza, care contribuie la recunoaterea de ctre aminoacid a ARN-t specific. are de acum Structura teriar a tRNA ter iar nu forma frunzei de trifoi dar amintete forma ncheieturii cotului (Van-derWaals) (Van-derWaals)

Proprietile fizico-chimice ale acizilor nucleici Proprietile - Propritile fizico-chimice ale acizilor nucleici sunt: Propritile - masa molecular mare. proprietile coloidale i osmotice, tipice pentru toi compuii macromoleculari. proprietile osmotic to compu Proprietile lor hidrofile depind de fosfai. ile Propriet fosfa viscozitatea i densitatea nalt a soluiilor, solu capacitatea de denaturare. la pH fiziologic toti AN sunt polianioni (-) Denaturarea fi renaturarea - proprietate caracteristic pentru moleculele cu organizare spaial e provocat de nclzire, aciunea substanelor, care rup legturile de hidrogen, forele Van-der-Waals, ce stabilizeaz structura secundar i teriar a acizilor nucleici. Ex. nclzirea DNA-duce la desfacerea spiralei duble n dou catene, adic are loc transformarea spiral - ghem". La rcirea treptat catenele din nou se reunesc dup principiul complementarittii, formnd spirala dubl nativ. Acest fenomen se numete renaturare. La racirea brusc renaturarea nu are loc. Denaturarea i renaturarea acizilor nucieici este nsoit de schimbarea activittii lor optice. Toti acizii nucleici posed activitate optic maxim la lungimea undei de 260 nm, ceea ce corespunde cu absorbia maximal a bazelor azotate. Hibridizarea AN Pe capacitatea de renaturare a AN este bazat metoda de determinare a gradului de nrudire a acizilor nucleici, care bazat poart denumirea de hibridizare molecular. La baza metodei st mperecherea complementar a sectoarelor unicatenare ale acizilor nucleici. Aceast metod a complementar permis descoperirea particularitilor structurii primare a DNA. S-a stabilit, c n componena DNA a animalelor se particularit DNA. n componen afl sectoare cu o succesiune nucleotidic identic, care de multe ori se repet. Hibridizarea decurge foarte repede. nucleotidic identic Restul DNA este prezentat printr-o succesiune unical a nucleotidelor, care nu se dubleaz. unical dubleaz.

Obiectivele: Replicarea ADN- mecanismul, substratele, matricea, enzimele i factori proteici, etapele biosintezei ADN. Telomeraza. Rolul i structura.. Reparaia ADN. Transcripia sau biosinteza ARN: matricea, substratele, enzimele, mecanismul Biosinteza ARN pe matrice de ARN Modificrile posttranscripionale (processing) Dogma central a geneticii moleculare. Concepia: o gen - un polipeptid. Inhibitorii sintezei acizilor nucleici. Ingeneria genetic i semnificaia ei practic. Sinteza anticorpilor Trsanscripia invers. Structura genelor - dimensiunile lor, intronii i exonii, genele structurale i reglatoare. Codul genetic i proprietile lui. Mutaiile moleculare: prin substituie, suprimare i inseriile de nucleotide. Rolul mutaiilor Ribozomii - sediul sintezei proteinelor, structura lor. Procesul de translare (sinteza proteinelor). Modificrile posttranslaionare ale proteinelor. Asamblarea proteinelorproteinelor). Modific foldingul Reglarea biosintezei proteinelor. Inducia i represia enzimelor. proteinelor. Induc Inhibitorii sintezei proteice. proteice. Polimorfismul proteinelor (variantele hemoglobinei, enzimelor, grupelor sanguine). Bolile ereditare i diagnosticul lor biochimic. Dogma central a geneticei moleculare Postulatul de baz a geneticei moleculare a fost formulat de Watson i Krick: este transmiterea informaiei genetice de la ADN la protein care se realizeaz prin urmtoarele trei procese: realizeaz replicarea; au loc n nucleu transcripia; translaia. au loc n citozol Procesul de transcripie este reversibil. Enzima care catalizeaz transcripia invers se numete revertaza (reverstranscriptaza) i a fost descoperit la oncovirui. Sinteza ARN-ului pe baza ARN se numete replicarea ARN, ea are loc la virui, care nu au ADN. Procesul de translaie este ireversibil i se numete biosinteza proteinei. Replicarea (sinteza unei noi molecule de AND pe matrice de ADN) Componentele necesare pentru replicarea sunt: sunt: - DNA matriceal bicatenar dezoxinucleozidtrifosfaeii respectivi A TP, CTP. GTP, TTP ionii de Mg++, Mn++, Zn++ ribonucleozidtrifosfaeii respectivi: A TP, GTP, CTP, UTP Enzimele i proteinele specifice stabilizante . Helicaza - desfacerea dublului helix, treptat, pe poriuni mici. Cele 2 catene rmn separate ca urmare a interveniei proteinelor de stabilizare Topoizomeraza I i II nltur supertorsiunile ADN, (I introduce supertorsiuni negative; II scindeaz o leg. fosfodiesteric pe una din catene i permite celor 2 catene s se roteasc una fa de alta) DNA-polimerazele I, II, III sinteza catenei fiice n direcia 5'3' . DNA-polimerazele I- posed activitate 5'- 3 exonucleazic, nltur primerul i-l nlocuiete cu fragmente de ADN IDNA-polimerazele II rol neclar DNA-polimerazele III aciune polimerazic (5'- 3) - sintetizeaz n direcia 5- 3' lanul polidezoxiribonucleotidic, prelund instrucii de la ADN-matri, - A ciune exonucleazic (3'- 5) RNA-polimeraza, primaz - sintetizeaz primerul n direcia 5'- 3 . DNA -ligazele unete fragmentele Okasaki de pe catena ntrziat -ligazel Procesul biosintezei DNA se caracterizeaz prin : - sediul sintezei DNA este nucleul - replicarea este un proces semiconservativ proces - se desfoar n trei etape : iniiere, elongare, terminare ini - prezena praimerului este obligatorie prezen

replicarea este cuplat cu desfurarea DNA parental (necesit energie) desf (necesit energie) replicarea decurge n ambele direcii cu aceeai vitez. Pe catena direc vitez. ntrziat se sintetizeaz fragmentele Okazaki. Okazaki. - este bazat pe mpachetarea complimentar a bazelor azotate compli azotate - catena-fiic este antiparalel cu catena parental dar nu identic dup secvena nucleotidic - forta motric a procesului este hidroliza pirofosfatului motric - angajeaza simultan intregul cromozom. cromozom. DNA-polimerazele (III):. (III):. prezint un complex multienzimatic ce posed cteva situsuri - pentru DNA, pentru amors, dRTP, exonucleazic i prezint catalitic. are activitate polimetazic, preia instrucia de la matri i necesit prezena amorsei cu OH n 3'liber ct i dezoxinucleozidtrifosfailor nu poate iniia sinteza catenelor de DNA-deaceia este necesar praimerul. ini posed activitate 3'-5'-exonucleazic i exercit o funcie de autocorecie este ncadrat n repararea DNA DNA-polimerazele (I): ndeprteaz praimerii prin activitatea sa 5'R3' exonucleazicadaug dRN prin activitatea sa polimerazic ireversibilitatea procesului e asigurat de aciunea ei pirofosfotazic posed aciune de sudare cu consum de ATP posed funcie de autocontrol catalizeaz o copiere a DNA complimentar cu cea matriceal. Mecanismul replicrii 3 etape: iniierea, elongarea, terminarea Iniierea parcurge dou etape: Formarea furcii de replicaie - sub aciunea helicazelor are loc desfacerea duplexului parental pe anumite poriuni replicatori (la scindarea leg. de H dintre BA - se utilizeaz min 2 mol. de ATP). Topoizomeraza efectueaz rupturi monocatenare apoi sudeaz legtura fosfodiesteric i favorizeaz relaxarea structurii DNA Sinteza primerului - sub aciunea primazei se sintetizeaz o poriune mic de ARN n direcia 5'- 3'. Primerul este format din 5-10 ribonucleotide. Gruparea 3OH e un iniiator al sintezei de ADN. Elongarea ADN polimeraza III unindu-se la captul 3' OH al primerului ncepe sinteza ADN fiic. Reacia decurge prin atacul nucleofil al grupei 3' OH al primerului asupra unui dRNTP complementar catenei de ADN matri. Se formeaz legtura fosfodiesteric i se elibereaz PP; hidroliza PP determin polimerizarea propriu zis. Elongarea decurge n direcia 5' 3, i parcurge cu aceeai vitez pe ambele catene 5' 3, Catena de baz se va sintetiza continuu, iar cea ntrziat va fi format din fragmente Okasaki. (dimensiuni de 1000 2000 nucleotide la procariote i 150-200 la eucariote). ADN polimeraza I exclude primerii i sintetizeaz complementar ADN. Fragmentele snt unite cu enzima ADN ligaza (necesit ATP la eucariote i NAD la procariote). Terminarea Terminarea replicrii are loc atunci, cnd cele dou bifurcaii de replicare se ntlnesc ntr-o regiune opus regiunii "ori". Proteinele speciale semnalizeaz oprirea repilcrii prevenind aciunea helicazelor. Replicarea la eucariote Particulariti: ADN polimerazele: - implicat n replicarea ADN nuclear- responsabil de sinteza catenei ntrziat rspunde de sinteza catenei lider. Ea manifest aciune exonucleazic implicat n reparaia ADN - implicat n replicarea ADN mitocondrial Bifurcaia replicii este de 3000 baze pe minut comparativ cu 16.000 la procariote Pe o molecul de ADN exist mai multe origini de replicare (3X104 - 3X105 separate prin perechi de baze). n aceste (3X104 origini multiple de replicare se organizeaz bifurcaii- ce se deplaseaz biderecional pe cromosomul eucariot n curs de replicare. Telomer Telomeraza Replicarea capetelor 5 ale catenelor este incomplet (teoria lui Olovnicov, 1971), deoarece dup nlturarea primerilor ADN p nu e e capabil s completeze aceste goluri. Astfel la fiecare replicare, capetele ADN se scurteaz. Aceasta nu afecteaz informaia genetic deoarece catenele conin fragmente repetitive neinformative telomere. Telomerele sunt replicate de o E specific telomeraza

Telomeraza reprezint o ribonucleoproteid: ARN i protein Subunitatea proteic TRT (telomeraze revers transcriptase) posed activitate catalitic. Telomeraza fiind o revertaz (ADN polimeraza ARN dependent) folosete ca matri propria coenzim un fragment de ARN. Structura i funcia RNA telomerazice. Structura primar: la majoritatea RNA telomerice, regiunea matricial se afl la deprtarea de 50 nucleotide de la captul 5, i are urmtoarea succesiune de nucleotide 5-CUAACCCUA-3. Structura secundar e compus din 4 bucle i un fragment unicatenar, ce conine matria pentru sinteza DNA telomerice. Mecanismul elongrii capetelor cromozomului la eucariote Inhibitorii telomerazei oligonucleotidele modificate, complementare regiunii matrice a RNA telomerazice. Aa nucleotide specific se fixeaz de matria RNA telo a omului, inhibnd activitatea telomerazic in vitro. In vivo apare problema transportului inhibitorilor prin membrana celular i micarea dirijat n nucleul celular. Ca inhibitori au fost testai i inhibitorii reverstranscriptazelor azidotimidina, didezoxiguanozina. Numrul telomerilor determin durata vieii fiecrei celule i condiioneaz reducerea critic a numrului lor, induce moartea programat a celulei deci pierderea motivelor telomerice este cauza imbtrnirii (telomera conine mii de motive TTAGGG). lungimea telomerei este marcherul biologic al mbtrnirii. mbtrnirii. Reparaia ADN Erorile n timpul replicrii sunt reduse la minimum datorit DNA polimerazei ce posed funcie endonucleazic imum min Tipuri de deteriorri: Formarea de bree Modificarea BA Pierderea de BA Formarea dimerilor de pirimidin sub aciunea razelor ultraviolete Reparaia prin excizia dimerului Reparaie prin fotoreactivare Reparaie prin recombinare Transcrierea (transcripia)-biosinteza ARN pe matrice de ADN (transcrip

Componentele necesare: 1. DNA dublu helicoidal (anumite poriuni) (catena+), por 2. Substrat - ribonucleozidtrifosfatii, (ATP, GTP, CTP, UTP) ribonucleozidtrifosfatii, 3. RNA polimeraza: posed aciune polimerazic, nu posed aciune exonucleazic, conine ionii de Zn i necesit prezena ionilor de Mg++, Mn++ n mediu. la procariote prezint un pentamer compus din 5 protomeri sigma , 2, i 1; posed centre catalitice(a) , de fixate a DNA i a substratelor. la eucariote: RNApI sintetizeaza RNA ribozomal (28S si 18S) RNApII sintetizeaza RNAm RNAm RNApIII sintetizeaza RNAt, RNAr 5S i molecule mai mici Etapele transcripiei Sinteza decurge n 3 etape: iniierea, elongarea, terminarea. Iniierea ncepe n anumite secvene de ADN numite promotor (P 40 nucleotide). ARN polimeraza recunoate cu ajutorul sigma Toi P bacterieni au 2 secvene consens situate pe catena codifictoare: Caseta Pribnow 5 TATAAT 3 Caseta 35 5 TTGACA 3 P la eucariote: GC casete GGGCG CAAT casete CCAAT Caseta Hogness TATAT/AT Primele 2 sunt responsabile de frecvena transcripiei (cnd ncepe), a 3 - - implicat n iniiere semnal (unde). Toate sunt responsabile de exacitatea iniierii Pe P deosebim 2 locusuri: de recunoatere (depistat cu ajutorul sigmei) i locusul de legare lax a ARN polimerazei. polimerazei. Locusul de recunoatere e situat la o distan de 25 nucleotide de locusul de legare i 10 nucleotide de la punctul de iniiere (+1) Sigma subunitatea gsete punctul de iniiere i: Sigma

Activeaz identificarea secvenelor de RNA polimeraz Ia parte la desfacerea dublului helix de ADN Ia parte la formarea primei legturi fosfosiesterice Astfel complexul de iniiere este format, sigma subunitatea e disociat de la holoenzim i ia parte la iniierea unui alt ciclu de transcriere. Elongarea i Terminarea Elongarea - alunecarea ARN polimerazei pe matra de ADN sinteza transcriptului (50 nucleotide pe secund) . RNAp nu controleaz catena sintetizat erorile sunt mai multe fa de Terminarea RNAp recunoate secvenele nucleotidice specifice de pe ADN, ce conin un numr mare de G, C i T.. Proteina - se asociaz la E i se mic mpreun cu ea, ns la identificarea semnalelor de terminare coboar de pe matri i ncetinete aciunea E,producnd transcriptul cu folosirea energiei ATP Procesingul Toi precursorii de ARN n nucleu trec etapa de maturizare posttranscripional. Pe parcursul procesingului - pre-ARN se transform n ARN matur. Procesingul nclude trei operaii: Modificarea fragmentelor terminale 5 i 3 ale ARN: ARN: a. Cap-area: la captul 5 -este adiionat guanozina metilat (protejarea mARN de atacul 5-exonucleazelor); b. la captul 3 se adaug o secven mare de poli A (200 A -coad). Ea servete la exportul moleculelor de ARN din nucleu n citoplasm. Excizia intronilor i sudarea exonilor. Aa numitul splising are loc n nucleul celulei: enzime specifice identific secvenele de baze la jonciunea intron exon. Un rol important n excizie le revine ARN nuclear (ARN U), care are o secven de baze complementar cu secvenele de la fiecare intron.ARN nuclear scoate intronii, capetele exonilor sunt juxtapuse, apoi sudate de RNA ligazele Metilarea bazelor t-ARN mpedic distrugerea ARNt de ctre nucleaze. Transcripia invers sinteza ADN pe catena de ARN Matria ARN Substrat dRNTP:dATP, dGTP, dCTP, TTP Enzima revers transcriptaza Caracteristic viruilor oncogeni Mecanismul: a. Revers transcriptaza sintetizeaz pe ARN viral catena de ADN- hibrid ADN_ARN b. Scindarea ARN viral de o nucleaz c. Autoreplicarea ADN cu formarea unui duplex de ADN Structura genelor- dimensiuni, GS; GR Gene- poriunile ADN ce conin informaia genetic cu privire la sinteza unei proteine Fiecrei gene i corespunde un lan polipeptidic- de aici i conceptul: o gen un lan polipeptidic cores GS- genele ce codeaz polipeptide i ARN. Poriunile GS ce conin informaie (transductibile) exoni; iar secvenele ce nu sunt traduse n ARNm introni GR segmente de ADN, repetabile, relativ mici ce au un rol reglator. Rolul lor: Pot fi semnale ce ne arat nceputul i sfritul GS Particip n iniierea i terminarea transcripiei GS Dimensiunile genelor f. variabile. Ex. Proteina ce conine 350 AA--- 350X3=1050 nucleotide. tiind c BA sunt localizate la 0,34 nm_---0,34 nmX 1050=357 nm =0,36mcm Codul genetic Informaia genetic referitor la biosinteza proteinelor se transmite cu ajutorul codului genetic, ce reprezinta forma de Informa genetic genetic, exprimare a relaiei dintre secvena de nucleotide din DNA i succesiunea de AA din LP. rela secven i LP. Cele 4 nucleotide, grupate cte 3, pot oferi 64 de posibilitti pentru cei 20 AA. Un AA este specificat de 3 nucleotide i fiecare triplet se numete codon. Codonii se citesc consecutiv de moleculele de tRNA, care ndeplinesc rolul de adaptor n sinteza proteinelor. Propriettile codului genetic este triplet 61 codoni codific aminoacizii corespunztori, 3-codific terminatia sintezei proteice; codul este degenerat unui aminoacid poate s-i corespunda mai multe codoane: arg, leu, ser, fiecare este codificat de cte 6 codoni, ns met- i trp sunt specificati de ctre un singur codon. Codonii unui aminoacid sint sinonime.

Specificitatea codonului e determinat de primele dou litere. Degenerarea se refer la nivelul nucleotidului 3 din codon sau 1 din anticodon care oscileaza, (o baz ovielnic) i e dispus s incalce regulile (efectul Wobble). Codul nu are virgule, semne de punctuatie, ce ar indica nceputul i sfritul fiecarui codon. Citirea mesajului genetic se virgule, face nentrerupt de la codonul start pn la cel terminator. Codul genetic este universal - toate vietuitoarele utilizeaz acela mecanizm de traducere (abaterea prezint codul genetic al mitocondriei); -Codul genetic nu este ambiguu (acelai triplet nu semnific 2 aminoacizi diferiti. Nu se suprapune cu exceptie la virusuri; Codul genetic este liniar (este coliniar adic exist o concordant liniara ntre gen i proteina codificat). (AUG) este tripletul de initiere iar UAG, UAA,UGA de terminare (non sens) uracilul n pozitia 1 prezint codoanele nonsens codoanele cu U (n pozitia 2) codifica AA hidrofobi cei cu A n pozitia -2 codific AA polari sau cu sarcin dac n anticodon n directia (5'->3') prima baz nucleotidic e: a) Citozina sau Adenina, el va citi un singur codon; b) Uracilul sau Guanina el va citi 2 codoane; c) inozina - respectiv va citi 3 codoane;
Obiectivele: Ribozomii - sediul sintezei proteinelor, structura lor. Procesul de translare (sinteza proteinelor). proteinelor). Modificrile posttranslaionare ale proteinelor. Modific Reglarea biosintezei proteinelor. Inducia i represia enzimelor. Induc Inhibitorii sintezei proteice. proteice. Polimorfismul proteinelor (variantele hemoglobinei, enzimelor, grupelor sanguine). Ingeneria genetic i semnificaia ei practic. Sinteza anticorpilor Mutaiile moleculare: prin substituie, suprimare i inseriile de nucleotide. Rolul mutaiilor

Ribozomii Reprezint sediul de traducere a ARNm i sinteza proteinelor. Structura- complexe ribonucleoproteice i sunt formai din dou subuniti de mrime inegal (mare i mic) Structura ribozomilor procariotici: subunitatea 30 S conine ARNr 16S i 21 proteine. subunitatea 50S ARN r 5S, 23S i 31 proteine. Sinteza ARNr i formarea subunitilor are loc n citoplasm. Structura ribosomilor eucariotici: subunitatea 40S ARNr 18S i 33 proteine. subunitatea 60S ARN r 5S, 5,8S, 28S i 49 proteine. ARNr se formeaz n nucleol. Ribozomul va avea constanta de sedimentare 70S la procariote si 80S la eucariote. S este coeficientul de sedimentare Svedberg, care depinde de forma, densitatea i dimensiunea particulelor. Centrele catalitice ale ribosomilor Situsul A - aminoacil responsabil de unirea complexului aminoacil- ARNt Situsul P peptidil gzduiete ARNt legat de un lan polipeptidic deja sintetizat zduie lan Situsul E e responsabil de eliminarea ARNt Procesul de sintez proteic poate fi schiat sumar prin interaciunea celor 3 tipuri de ARN - informaia din ARNm este citit n ribozom si transpus n proteine, AA necesari fiind adui de ARNt. n starea sa nedisociat ribozomii sunt activi. Deplasarea liber a ribozomilor n diferite sectoare ale celulei, sau combinarea lor n diferite locuri cu membranele reticulului endoplasmatic ofer posibilitatea de asamblare a proteinei n celul. Mai muli ribozomi pot citi simultan acela ARN mesager pe care il parcurg in acela sens. Se constituie astfel un mul acela acela poliribozom, structur ce permite accelerarea sintezei proteice. structur Translarea (traducerea, biosinteza proteinelor) se realizeaz n urmtoarele etape: realizeaz I. Activarea AA. II. Translarea propriozis: propriozis: 1.Iniierea lanului polipeptidic.(LP) 2. Elongarea LP. 3. Terminarea LP i eliberarea acestuia i

III. Prelucrri posttraducere ale proteinei sintetizate. Prelucr Activarea aminoacizlor, aminoaciz are ioc n citozolul celulei - AA se leag de gr. OH din pozitia 2' sau 3' al cap CCA din RNAt cu consum de energie (2 leg. Macroergice). - activarea tuturor AA e catalizat de 20 de AA RNAt - sintetaze care asigur specificitate. - Enzima are 4 centre de fixare: pentru tRNA, ATP, AA i H20. - necesit prezena ionilor de Mg2+, K, pentru a-i exercit funcia. aciunea pirofosfatazei cauzeaz ireversibilitatea reaciei aciunea reac Se desfoar n dou etape: ATP PPi 1. NH2-CH-COOH
I

NH2-CH-CO O-AMP R Aminoacil Adenilat NH2-CH-CO O-RNAt +AMP


Aminoacil RNAt

R 2. NH2-CH-CO O-AMP+ARNt O-AMP+ARNt


I

Biosinteza decurge n 3 etape: Iniierea, elongarea, terminarea Ini Iniierea: Iniierea: - subunitatea 30S formeaz complex cu FI-3- apoi se leag ARNm cu codonul AUG plasat n situsul P - se agaug FI-1- fmet-ARNt i GTP se leag de FI-2 i se unete la complexul format de subunitatea 30S. FI-3 i 30S ARNm formnd complexul de iniiere. ini - Complexul de iniiere se combin cu subunitatea 50S formnd ribozomul integru, funcional activ 70S . ini func - Are loc hidroliza GTP la GDP i P i eliberarea factorilor de iniiere. ini Elongarea Decurge n 3 etape : 1 fixarea noului Aminoacil ARNt complexul: aminoacil-ARNt, factorul de elongare T (FE-T) i GTP. aminoacil-ARNt, se fixeaz pe situsul A, dup ce are loc hidroliza GTP la GDP care se elibereaz mpreun cu FE-T. 2. formarea legturii peptidice. Enzima peptidil-transferaza catalizeaz formarea legturii peptidice ntre doi AA din situsul A i P.Peptida rmne ataat de RNAt de pe situsul A. 3. translocaia transloca ribozomul se deplaseaz la urmtorul codon de pe ARNm i peptidilARNt trece de pe situsul A pe P peptidilARNt aceast etap necesit factorul de elongare G (FE-G) i GTP (necesar pentru realizarea modificrilor conformaionale (necesar conforma care deplaseaz ribozomul). ) ribozomul Terminarea este semnalat de unul din cei trei codoni stop. dup ce ultimul rest de aminoacid (C terminal) a fost adugat la lantul polipeptidic, el este covalent ataat cu grupa sa ad COOH de ARNt n situsul A. desprinderea necesit prezena factorilor de desprindere RI ,R2, R3, care transfer peptide pe situsul P. transfer rup legtura esteric dintre ARNt i polipeptid desprind ARNm, ARNt i disociaz ribozoma n dou subunitti. Necesarul energetic la formarea fiecrei legturi proteice - dou legturi macroergice se folosesc la activarea fiecrui AA - o legtur macroergic- la fixarea AA ARNt la situsul A - o legtur- la translocare Modificrile posttraducere includ: - ndeprtarea restului formil la procariote i a metioninei la eucariote; - formarea hidroxiprolinei i hidroxilizinei - acetilarea capatului N - terminal- metilarea lizinei, argininei

- fosforilarea hidroxiaminoacizilor - carboxilarea glutamatului - iodurarea resturilor de tirozin - glicolizarea resturilor de lizin - excizia unor secvente polipeptidice - formarea puntilor disulfidice - ataarea unor substitueni neproteici (hemul)

Anticorpii sunt. Sinteza Anticorpilor Fiecare dintre milioanele de anticorpi produi leag unul dintre milioanele de antigene posibile. Este greu de crezut c produi organismul are n patrimoniul su genetic cte o gen pentru fiecare anticorp pe care-l produce ntruct aceasta ar organismul n care-l presupune o supradimensionare a genomului eucariot. Gradul de diversificare n obinerea lanurilor H" i L" este crescut prin faptul c o poriune variabil este rezultatul ob lan asamblrii a 3 regiuni. Deci ADN ce determin poriunea variabil a anticorpului este constituit din: din: Poriunea variabil (V) constituit din - 400 de gene. Por Poriunea de diversitate (D) ce cuprinde -12 gene Portiunea de articulare sau jonciune (J) - 4 gene Asamblarea acestor gene n diferite combinaii permite construirea a 20000 de sectoare V - fapt ce asigur extrema combina varietate a anticorpilor. anticorpilor. Inhibitorii sintezei proteice: - la nivelul replicrii: replicrii: - Mitomicina c - mpiedica separarea catenelor de ADN mpiedica - Acidul Nalidixic - inhiba ADN giraza inhiba - la nivelul transcriptiei: - Actinomicina D - se fixeaza pe ADN se Rifampicina - inhiba ARN polimeraza inhiba la nivelul translatiei:, Tetracicilina - inhiba legarea ARNt la ribozomi inhiba Puromicina - blocheaza elongarea inhibnd competitiv ARNt blocheaza inhib Kanamicina translatie -inhiba citirea codului genetic ranslatie -inhiba t Toxina difteric - inhib translocaza Reglarea sintezei proteinei - asigur cantitatea optim de protein necesar organismului. optim - se realizeaz la nivelul sintezei de ARNm ct i la cel al etapelor citoplasmatice de sintez. realizeaz - celulele dispun de dou tipuri de enzime: dou a) Inductibile, a cror concentraie depinde de prezena sau absena din mediu a unui compus - inductor. De obicei aceste enzime sunt implicate n ci catabolice. b) Represibile, a cror concentraie depinde de prezena sau absena din mediu a unui compus corepresor c) Constitutibile care sunt n cantitate constant indeferent de starea metabolic a organismului Modelul lui Jacob-Manod de reglare a biosintezei proteinelor poart numele deTeoria operonului. deTeoria Bacteria are ca surs glucoza.Bacteria are ca surs lactoza glucoza. Reglarea sintezei la eucariote Att la nivelul transcripiei ct i la nivelul translaiei Reglarea hormonal (cortizol- sinteza E gluconeogenezei; estrogenii, androgenii, vitamina D sintez de proteine specifice) Reglarea exspresiei genetice prin moleculele proteice legate de ADN (histonele) sinteza ARN pe ADN e inhibat prin adaosul de histone Reglarea proteinei la nivelul translaiei e posibil prin aciunea factorilor proteici, care contribuie iniierea, elongarea, terminarea. Ingineria genetic tiinta, preocupat de crearea noilor fenotipuri prin transplantarea genei unui organism n genomul altuia n scop de a tiinta, preocupat lichida defectele ereditare ale genomului, adic tratarea afectiunilor ereditare (gena ntrodus nu gureaz n genomului, adic (gena ntrodus gureaz n patrimoniul ereditar al genomului -gazd) -gazd Se obtin molecule hibride (himerice) n linii marl procedura include etapele: 1. Cptarea genei 2. Cptarea ADN-ului recombinat

3.Clonarea ADN-ului recombinat Cptarea genei: genei: Stiind structura primar a proteinei n laborator se poate obine gena respectiv (se obin gene pn la 250 codoane)- mai codoane)greu e obinerea genei din genomul celulei (genele se despart prin introni)- mai uor e cptarea genelor din virusuri cu ob enzima revertaza. Cptarea ADN-ului recombinatgena necesar se ntroduce n celul pentru a se integra cu genomul acestuia. Pentru aceasta n vitro gena se unete cu n une ADN-vector (plasmide ce conin ADN inelar (cteva gene). ADNcon (c gene). De regul se folosete E Coli, ce contine un cromozom i plasmide, ce plutesc n citozol (plasmida este de 1000 ori mai pl mica dect cromozomul). Plasmidele se replic independent de replicarea materialului genetic. Unele replic plasmide se pot include n cromozom i apoi din nou s-l prseasc. Plasmidele pot trece dintr-o celul n alta n s-l procesul de conjugare. Plasmidele se separ din E.Coli i li se nltur o parte de ADN inelar cu ajutorul enzimelor conj restrictaze, care recunosc i taie diferite sectoare. Folosind restrictaze diferite se poate de tiat ADN n locusurile necesare. In rezultat se formeaz capete lipicioase (sectoare monocatenare, capabile de a uni nucleotide complimentare. La fel se procedeaz i cu gena,care trebuie ntrodus (se formeaz capete lipicioase complimentare capetelor plasmidei). Dac se amestec gena i plasmida ele se vor uni cu capetele lipicioase. Enzima ligaza va uni capetele i se va cpta molecula ADN inelara, care conine gena menit pentru transplantare. con Clonarea ADN-ului recombinat- obinerea cantitilor dorite de protein codificat de gena eucariot ntrodus n plasmid. Dac ob n cultura E.Coli se ntroduc plasmide recombinate, se formeaz bacterii recombinate. In celul plasmidele se replic. Bacteriile nmulindu-se formeaz celule, care conin aceste plasmide. Acum din masa bacterian se poate de capatat con cantitti sufuciente de ADN recombinat. at. recombin Ranadamentul sintezei bacteriene este impresionabil: Ex- 100 celule E.Coli produc prin clonare 5 mg somatostatin (cantitate, ce se obine prin prelucrarea a 100 tone de creier de bovine). Prin tehnica engineriei genetice s-au obtinut cantiti mari de insulin (Humulun), Interferon, vaccine. insulin Diversitatea formelor n Iimita uneia i aceai specie se datorete mutaiilor i ntr-o msura mai mare recombinrii genetice. Mutaiile. Muta Modificrile genomului orgnismului, care se pstreaz i se transmit prin ereditate poart numele de mutaii. Mutaiile muta Muta sunt modificri ale informaiei genetice, care se transmit apoi de la o generaie la alta. Modificrile pot interesa o informa genera pereche de baze (mutatii punctiforme) sau un grup de baze pe una sau pe ambele catene ale unei molecule de DNA. Mutatiile punctiforme: pot decurge prin: l. substitutie (misens mutatii, unde deosebim 2 tipuri): a. Tranzitie - o BA purinic este nlocuit tot cu una purinc, una pirimidinic -tot cu una pirimidinic. b.Transversie - o pereche de baze purinice este nlocuit cu una pirimidinic sau invers. 2. Inserie - acest mecanism const n ntroducerea unei perechi de baze suplimentare n catena de DNA. Inser 3. Deleia const n excluderea unei perechi de baze n aa mod ca ea nu mai poate f complementar i la replicare Dele apare "golul" n ambele catene. Unele modificri n secventa nucleotidic pot duce la formarea codonului sinonim i succesiunea aminoacizilor nu se va schimba (mutatii benigne). La afectarea segmentelor mari de gen apar mutatii ntinse. In dependent de consecinele modificrilor deosebim consecin modific mutaie benign, neutr, nociv. muta Agenii mutageni pot provoca mutaiile spontane ct i mutaiile induse. Agen muta muta

10