Sunteți pe pagina 1din 94

ENZIMELE

Natura chimic i rolul biologic al enzimelor. Dovezile naturii proteice a enzimelor. Diferena dintre aciunea enzimelor i catalizatorilor nebiologici. Structura enzimelor. Proenzimele (zimogenii). Noiune despre centrul activ i centrul alosteric al enzimelor. Izoenzimele i rolul lor. Cofactorii enzimelor. Coenzimele i ionii metalici. Funciile de coenzime a vitaminelor i microelementelor. Natura chimic (structura) vitaminelor B1, B2, B6, PP i rolul lor ca coenzime. Mecanismul de aciune al enzimelor. Centrul activ al enzimelor i rolul lui n formarea i transformarea complecilor intermediari dintre enzim i substrat. Rolul modificrilor conformaionale reciproce ale moleculei enzimei i substratului la favorizarea catalizei (reaciei). Nomenclatura (denumirea) i clasificarea enzimelor. Caracteristica general a claselor i subclaselor principale de enzime. Numrul de cod al enzimei.

OBIECTIVELE:

ENZIM de la grec.Eu ZYMOS- n drojdie

Enzime catalizatori biologici de natur proteic, ce mresc viteza reaciilor chimice E- acioneaz strict ntr-o anumit consecutivitate i cu o anumit specificitate

Enzimologietiina, ce se ocup cu studierea enzimelor

Enzimodiagnostica - este determinarea


activittii enzimelor, care se pot modifica n diferite patologii cu scop de diagnoz.

Enzimoterapia
- este utilizarea enzimelor,
extrase i purificate sau sintetizate n laborator, n tratamentul diferitor patologii.

Natura chimic a E

1.

2.
3. 4. 5. 6.

E- sunt proteine i posed toate proprietile fizico-chimice specifice acestor molecule (solubilitate, proprieti osmotice, sarcin electric net, denaturare termic) Dovezile experimentale: Sunt alctuite din AA Prezint macromolecule n ap formeaz sol. coloidale cu propriet. sale specifice Prezint electrolii amfolii Se supun denaturrii Au fost sintetizate n condiii de laborator din AA (ribonucleaza, lizozima)

Asemnrile E cu catalizatorii neorganici


1.

2. 3. 4.

catalizeaz numai reaciile posibile din punct de vedere energetic nu modific echilibrul reaciilor reversibile nu modific direcia reaciei nu se consum n procesul reaciilor.

Deosebirile E de catalizatorii neorganici


1.

2. 3. 4. 5.

6.

Viteza catalizei enzimatice este cu mult mai mare dect a celei nebiologice (1 mg de Fe n componena catalazei poate nlocui o ton de Fe metalic). Enzima posed specificitate nalt. Enzimele catalizeaz reaciile chimice n condiii blnde (presiunea obinuit, temperatura 37C, pH aproape neutru). E catalizeaz reaciile fr formarea produselor intermediare randamentul este de 100% Activitatea E, de aici i reaciile enzimatice se regleaz. Viteza reaciilor este direct proporional cu cantitatea enzimei.

Structura enzimelor

Masa molecular a E e de mii de ori mai mare dect masa molecular a substratului (S) S - substana asupra creia acioneaz E E acioneaz nu cu toat molecula dar cu un anumit sector denumit centrul activ (CA) CA - locul care asigur interaciunea E cu S i transformarea ulterioar a acestuia.

Particularitile CA
1. 2. 3.

4. 5. 6.

Este o combinare unical n spaiu i n timp a anumitor resturi de AA E o structur tridimensional (AA aflai n locuri diferite) Are form de adncitur sau cavitate, cptuit cu AA hidrofobi, unde nu-i acces de ap (ex. cnd apa este un reagent al reaciei) Ocup o parte relativ mic din volumul E i majoritatea resturilor de AA n molecula E nu contacteaz cu S S relativ slab se leag cu E CA este alctuit din 2 sectoare: Sectorul de contact (de legare) Sectorul catalitic

Centrul alosteric

Unele E posed i un alt centru (sau alte centre) dect cel activ centru alosteric (allo stereos alt loc) C alos - are o poziie spaial pentru fixarea metabolitului reglator, numit efector sau modulator Modulatorii se fixeaz necovalent i pot fi: activatori sau inhibitori E cu centrul alos se numesc E alosterice sau reglatoare La fixarea modulatorului, E alos i modific conformaia. Modulatorii accelereaz sau inhib utilizarea S de enzima respectiv.

Enzime alosterice

1.

2.

Moleculele enzimelor alosterice sunt mai mari, mai complexe i sunt oligomere pare Au cinetica lor viteza reaciilor n dependen de c% S are form sigmoidal, dar nu hiperbolic, cauzat de urmrile interaciunii ntre protomerii ce leag S n mod cooperativ Sunt 2 tipuri de E alosterice Homotrope - modulatorul i S constituie aceeai substan Acumularea S activeaz v reaciei catalizate de aceast E (ex: alcoolul activeaz alcoolDH, E ce l scindeaz) Heterotrope - modulatorul se deosebete dup structur de S.

Cofactorii enzimelor
Deosebim: 1. E simple alctuite numai din AA 2. E conjugate - snt formate din: a. partea proteic - apoenzim b. partea neproteic - cofactor. Cofactori molecule (sau ioni) mici, mai stabili la aciune dect apoenzimele Cofactorul strns legat n structura E grupare prostetic Cofactorul slab legat, uor disociabil coenzim n calitate de cofactori apar frecvent cationii unor metale i, foarte rar, unii anioni

Rolul Co
stabilizeaz conformaia activ a moleculei 2. Prezint veriga de legtur ntre S i CA prin leg. coordinative 3. Co pot ndeplini actul de cataliz Ex. transportul electronilor
1.

Clasificarea Co

1.
2. 3. 4.

Co vitaminice
Tiaminice Flavinice Nicotinamidice Piridoxinice Folice Cobamidice Biotinice lipoice

5.
6. 7. 8.

Co nevitaminice (nucleotidice; metaloporfirinice,peptidice)

Coenzimele tiaminice

1. 2.

3.

Derivaii vitaminei B1 TMP, TDP (TPP), TTP Rolul: Decarboxilarea oxidativ a piruvatului Decarboxilarea oxidativ a cetoglutaratului Reacii de transcetolare

Coenzimele flavinice
1. 2. 3. 4.

5.
6. 7.

Derivai ai vitaminei B2 FMN i FAD Rolul: Particip n reaciile de oxido-reducere: Dezaminarea AA (aminoacidoxidaza) Degradarea aldehidelor (aldehidDH) Degradarea purinelor (xantinoxidaza) Ciclul Krebs (succinatDH) Oxidarea AG DOP (dihidrolipoilDH)

Coenzimele nicotinamidice

Sunt derivai ai vitaminei PP niacina, niacinamida, B5 se include n structura a 2 Co- NAD i NADP Rolul Particip n reaciile de oxido-reducere (dehidrogenarea S transferul unui hibrid ion (H+ i 2 e). Alt proton rmne n soluie H+

Coenzimele nicotinamidice

Coenzimele piridoxinice

1.
2. 3.

Derivai a vitaminei B6 Co piridoxalfosfat i piridoxaminfosfat Rolul: Transaminarea AA Decarboxilarea AA Transsulfurarea

Ionii de metale cofactori ai E


1. 2. 3. 4.

E care n calitate de cofactori conin metale metaloenzime Metalele sunt fixate de apoenzim prin legturi electrostatice la care particip resturile de AA acizi (Asp, Glu) sau bazici (Arg, Lyz, His) Exemple: citocromii, catalaza (Fe) Citocromoxidaza (Cu) Amilaza salivar (Cl) alcoolDH (Zn)

1. 2. 3.

4.

Metalele ce intr n componena metaloenzimelor ndeplinesc urmtoarele funcii: Stabilizeaz structura E Particip la legarea S Particip nemijlocit la cataliz Fixarea cofactorului la apoE (ex: Zn leag NAD la alcoolDH)

Co pantotenice (B3)- HS-CoA


biosinteza AG 2. biosinteza Col 3. sinteza corpilor cetonici 4. Oxidarea AG 5. Ciclul Krebs 6. Sinteza aminolevulinatului 7. DOP 8. DO a alfa cetoglutaratului Transferul grupelor acil
1.

Co biotinice vitamina H

Gluconeogenez (I cale piruvatdecarboxilaza) Sinteza AG (formarea lui malonil CoA) Transformarea propionil-CoA n succinil CoA (oxidarea AG cu numr impar) Intervine n catabolismul Leu

Co cobamidice B12 ciancobalamina


1.

2.

Vitamin antipernicioas pentru om i factor de cretere pentru microorganisme n ficat sunt 3 compui cobalaminici: meti-; hidroxo- i deoxiadenozil-cobalamin Rolul: Co pentru unele transmetilaze (homocistein metionin) Co pentru anumite mutaze (izomeraze)metilmalonil Co A---- succinil CoA

Co folice sau pteridinice

Bc-acidul folic Forma activ- acidul tetrahidrofolic Rol: transferul gruprilor cu un C: metil (CH3), metilen(-CH2), formil (COH), formimino (CH=NH)

Mecanismul de aciune al enzimelor.

1.

Procesul catalizei enzimatice poate fi divizat convenional n trei stadii: Difuzia S spre E i legarea cu CA al E - formarea complexului ES. Prima etap de scurt durat depinde de concentraia substratului i de viteza lui de difuzie spre centrul activ al enzimei.

Mecanismul de aciune al E
2. Transformarea complexului primar ES n unul sau cteva complexe activate, indicate n ecuaie prin ES* i ES**. Aceast etap este cea mai lent i depinde de energia de activare a reaciei chimice respective. La aceast etap are loc dereglarea legturilor S, ruperea lor sau formarea noilor legturi n urma interaciunii grupelor catalitice ale enzimei. 3. Desprirea produselor reaciei de CA al E i difuzia lor n mediul ambiant (complexul EP disociaz n E i P).

Ipoteza lact-cheie (Fischer) i coincidena forat (Kochland)


Modelul clasic (Emil Fischer) consider c potrivirea substratului cu centrul activ al enzimei este analog cu potrivirea lact-cheie. Acest model presupune o rigiditate a structurii enzimei n zona centrului activ. modelul Kochland, numit centrul activ indus, presupune o flexibilitate a CA. n enzima liber CA este preformat ntr-o configuraie spaial uor diferit de cea necesar fixrii S. S induce o modificare conformaional a CA, care favorizeaz fixarea lui

Conceptul clasic "lact- cheie


- elaborat n 1890 de ctre Emil Fier - consider c potrivirea substratului cu centrul activ al enzimei este analog cu potrivirea lact-cheie. Acest model presupune o rigiditate a CA. la prima etap a formrii acestui complex n rezultat se modif structura S cptnd starea de tranziie dup care se transform n P E+S-- ES- E+P

Conceptul coencidenei inductive

coincidena forat (Kochland)

Mecanismul de aciune al E
1. 2.

3.

4.

La nivel molecular aciunea E poate fi lmurit prin urmtoarele efecte: Efectul de orientare a substratelor (CA al E fixeaz S i le orienteaz ntr-un mod convenabil pentru aciunea gr. catalitice) Efectul de deformare a S (dup unirea n CA molecula S se ntinde, se deformeaz favoriznd scindarea ei) Cataliza acido-bazic (n procesul fixrii S n CA asupra lui acioneaz grupele electrofile ale sectorului catalitic, are loc redistribuirea densitii electronice n S i ruperea legturilor din S Cataliza covalent formarea legturilor covalente ntre CA i S, complexul ES e foarte instabil, uor disociaz elibernd P reaciei

Mecanismul de aciune al E

Pentru decurgerea unei reacii este necesar ca molecula de S i E s contacteze ntre ele, pentru aceasta e necesar de contientizarea unei noiuni ca: Energia de activare este energia necesar tuturor moleculelor unui mol de substan, care la o anumit t pot s ating starea de tranziie corespunztoare apixului barierii energetice (KJ/mol; kcal/mol) E - micoreaz energia de activare ale reaciilor chimice. Cu ct mai mult scade energie de activare, cu att mai eficient acioneaz catalizatorul, i cu att mai mult se accelereaz reacia.

Enzymes Lower a Reactions Activation Energy

Clasificarea actual a enzimelor.

Toate enzimele se mpart n ase clase, clasele n subclase, subclasele n subsubclase, iar aici E i are numrul su de ordin. Clasele, subclasele, sub-subclasele i enzimele individuale se noteaz prin cifre desprite de puncte. Ex: LDH - 1.1.1.27 Clasa reprezint tipul de reacie, catalizat de enzime Subclasa precizeaz aciunea E, deoarece indic natura gruprii chimice a S, atacat de E Subsubclasa precizeaz natura legturii S atacat sau natura acceptorului care particip la reacii Denumirea E denumirea S +tipul reaciei catalizate +aza

Clasificarea actual a enzimelor


1.

2.
3.

4.
5.

6.

Oxidoreductaze, catalizeaz reaciii de oxido-reducere; Transferaze, catalizeaz transferuri grupelor funcionale de la un S la altul (metil, amino, acil,); Hidrolaze catalizeaz scindri de legturi covalente cu adiionarea apei ; Liaze, catalizeaz ruperea leg. C-C, C-S i C-N; fr adiionarea apei, adiia la legturi duble i reaciile inverse. Izomeraze, catalizeaz toate tipurile de transformri n cadrul uneia i aceleai molecul ; Ligaze (sintetaze), catalizeaz formarea de legturi ntre carbon i O, S, N, cuplate cu hidroliza legturilor macroergice (utilizarea ATP).

Clasificarea enzimelor.
- catalizeaz reaciii de oxidoreducere; -catalizeaz transferuri grupelor funcionale de la un S la altul (metil, amino, acil,); -catalizeaz scindri de legturi covalente cu adiionarea apei ;
-catalizeaz ruperea leg. C-C, C-S i C-N; fr adiionarea apei, adiia la legturi duble i reaciile inverse.

-catalizeaz toate tipurile de transformri n cadrul uneia i aceleai molecul ;


- catalizeaz formarea de legturi ntre carbon i O, S, N, cuplate cu hidroliza legturilor macroergice (utilizarea ATP).

Izoenzimele

1.

2.
3. 4. 5.

forme moleculare multiple ale E (la aceeai specie, n acelai esut, n aceeai celul), ce catalizeaz aceeai reacie chimic, dar se deosebesc prin structur, proprieti fizice, chimice i cinetice Diferite forme de izoenzime se pot gsi fie mpreun; fie n esuturi diferite (fosfotaza acid n prostat i hematii); sau chiar n diferite pri ale aceleiai celule (MDH mitocondrial i citoplasmatic) Sunt E cu structur cuaternar, alctuite din cel puin 2 protomeri diferii Ex. LDH (lactat piruvat) Prezint un tetramer, alctuit din 2 tipuri de subuniti (H inim; Mmuchi) n diferite raporturi; codificate de gene diferite. HHHH inim; HHHM;HHMM; HMMM; MMMM muchi Izoenzimele difer ntre ele prin: V max de cataliz, prin sensibilitatea fa de modulatorii alosterici, prin sarcina electric (ce permite separarea lor prin electroforez); pH-optim de aciune; termolabilitate, au afinitate diferit fa de S.

1.

2.

1. 2. 3. 4. 5.

Rolul: Rol nsemnat n controlul metabolic ( faciliteaza adaptarea metabolismului in diferite esuturi.) Ex: in miocard predomina HHHH aceasta izoenzima este inhibata de ctre piruvat deaceea orienteaz oxidarea piruvatului pe cale aeroba. Pe cind fracia M4 este activat de catre piruvat i orienteaz transformarea piruvatului pe cale anaerob spre lactat. Variaia diferitor forme de izoenzime are o semnificaie diagnostic deosebit n unele stri patologice. Exemple de izoenzime: creatinkinaza (2 tipuri de monomeri: M-Muscle i B brain MDH Aldolaza Fosfataza alcalin Fosfataza acid

Proprietile generale ale enzimelor

Obiectivele:
1.

Proprietile generale ale E (termolabilitatea, specificitatea), aciunea pH-ului asupra activitii enzimatice. 2. Activarea i inhibarea enzimelor: a) mecanismele de activare (proteoliza parial, activarea alosteric, autostructurarea cuaternar, fosforilarea i defosforilarea, reactivarea). b) mecanismele de inhibiie (specific i nespecific, reversibil i ireversibil, alosteric i competitiv). 3. Organizarea enzimelor n celul (ansamblurile enzimatice, compartimentalizarea). Reglarea activitii enzimatice n celul importana principiului de retroinhibitie. 4. Deosebirea privind componena enzimatic a organelor i esuturilor. Enzimele organospecifice. Modificarea activitii enzimatice n diferite afeciuni (enzimodiagnosticul). 5. Metodele de obinere i purificare ale enzimelor. Cromatografia de afinitate. 6. Utilizarea enzimelor n practica medical. ntrebuinarea enzimelor imobilizate n medicin. 7. Unitile de activitate ale enzimelor. 8. Metodele de determinare a activitii enzimelor.

Factorii care influieniaz activitatea E

Temperatura PH Concentraia S Concentraia E electroliii

Termolabilitatea (t)

E sunt termolabile t optim a majoritii E se afl n limitele 20 - 40 C odat cu creterea t cu 10C (dac lum punctul de plecare 0 ) - V reaciei enzimatice sporete de 1,5 ori, atingnd max la t 40C. Majorarea de mai departe duce la micorarea activitii enzimatice ceea ce mrturisete despre denaturarea proteinei. La 100C toate E organismului sunt inactive. Unele E a microorganismelor termofile sunt active la t de 80C La t joase E se inactiveaz (excepii: catalaza: activitate max la t=0 C)

Termolabilitatea (t)

Creterea vitezei reaciei odat cu creterea t este nterpretat prin prisma "energiei de activare". Pentru fiecare E se poate stabili o t optim la care V atinge valoarea max, mai departe V scade din cauza denaturrii.

Aciunea pH asupra activitii enzimatice

1.
2. 3.

4.

Fiecare E are un pH optim propriu la care i manifest activitatea maximal. Majoritatea E celulare au pHul optim- 7,4 (excepii: hidrolazele acide lizozomale pH= 5; MAO din membrana mitocondrial externa pH= 10). La E digestive pH-lui optim este cel al sediului lor de aciune: Pepsina pH 1,5 2, Amilaza pancreatic - pH 6,4-7,2, Tripsina - pH 7,8-8,0 Arginaza- pH 9,5-10 etc.

1. 2. 3.

Dependena activitii E de variaia pH-ului este deseori descris de o curb n forma de clopot. In CA al E se afl grupri ionizabile, acide sau bazice. Acestea interacioneaz direct cu ionii H+ si OH-, rezultatul fiind creterea sau scderea gradului lor de disociere Deci mrind sau micornd pH-ul mediului, se poate regla activitatea catalitic a E. pH optim e dependent de: gradul de ionizare a grupelor funcionale, afinitii E fa de S, stabilitii E.

[E]

n condiii standard 2 mol de E ntr-o anumit perioad de timp vor transforma de 2 ori mai multe molecule de S dect 1 mol de E (relaie direct proporional).

[S]

Grafic se reprezint sub form de o curb de tip hiperbolic. n perioada iniial a reaciei V crete pe msur ce crete [S]. La un moment dat cnd CA al E se ocup de S V nu mai crete. Ea rmne constant i corespunde V max a reaciei. n cazul E alosterice curba reprezint un aspect sigmoid

Analiza curbei hiperbolice arat c ea reprezint 3 zone: a. V de reacie crete proporional cu c% S b. Creterea este mai ncet c. V de reacie nu mai crete Aceast curb este numit curba lui Michaelis-Menten i se exprim prin ecuaia: [S] unde: V-Vreaciei la un moment
dat

V=Vmax x _________
Michaelis Menten

Vmax- viteza max Km-constanta lui

Km +[S]

[S] C% molar a S Km- este acea concentraie de S pentru care v de reacie este jumtate din Vmax. Km reflect afinitatea E pentru S i anume cu ct Km este mai mic cu att afinitatea este mai mare i invers.

Specificitatea

este capacitatea unei E de a selecta dintr-un numr de compui S particular. este o proprietate a E, care instituie eficien i ordine n metabolism, prevenind desfurarea lui haotic. este condiionata de complimentaritatea conformaional i electrostatic ntre CA al E i S.

Specificitatea
- este capacitatea unei enzime de a selecta dintr-un

numr mare de S unul particular, -

-este condiionat de complimentaritatea conformaional i electrostatic ntre CA al E i S.

E S4 S2

Deci fiecare E catalizeaz un anumit tip de reactii sau transformarea unui anumit S.

Specificitatea:

Specificitatea de reacie:
Specificitate

Ecatalizeaz un anumit tip de reacie ce st la baza clasificrii enzimelor: o hidroliza, o reacie redox, formarea unei legturi, etc.

de substrat: stereochimic, absolut i relativ : Specificitate stereochimic - E

catalizeaz transformarea numai a unuia din stereoizomerii posibili. Ex: Amilaza scindeaz legturile 1-4 glucozidice din amidon sau glicogen i nu influenteaz asupra legturilor din celuloza.

specificitate de S absolut specificitate de S relativ

E catalizeaz transformarea doar a unui S (anhidraza carbonica, ureaza). E acioneaz nu asupra unor grupe din mol S ci asupra anumitor legturi a anumitei grupe de S (proteazele: chimotripsina - legatura peptidica, formata de COOH a Phe, Tyr, Trp; tripsina - de COOH a Lyz si Arg). E catalizeaz transformarea grupei de substane asemntoare (alcoolDH) E catalizeaz transformarea substanelor care aparin diferitor grupe de compui organici (cit. P450)

Mecanismele de activare a E
Sunt : 1. nespecifice: temperatura , iradierea 2. specifice Se activeaz la: 1. majorarea concentraiei S cnd este insuficient 2. majorarea cantitii E 3. introducerea coenzimelor cnd sunt insuficiente 4. Introducerea ionilor metalelor Fe, Cu Se cunosc urmtoarele tipuri de reglare a activitii enzimatice: 1. proteoliza limitata 2. Reglare covalent fosforilare/ defosforilare 3. Autostructurarea cuaternar 4. Alosteric 5. Reactivare

Proteoliz limitat
Unele enzime (proteine) se sintetizeaz n forma neactiv de precursor proenzime (zimogeni) Exemplu: 1) enzimele digestiei: pepsinogenul, himotripsinogenul, tripsinogenul, proelastaza, procarboxipeptidaza - scindeaza proteinele in stomac i duoden. 2) coagularea singelui e determinat de cascada de reacii cu activitate proteolitic; 3) hormonii proteici (insulina); 4) proteinele fibrilare (colagenul). Mecanismele de activare a proenzimelor este proteoliza limitata. Proteoliza limitata - este scindarea (nlturarea) unui sector al catenei n rezultat enzima se restructureaz i se formeaz CA. H+ Pepsinogen ------pepsin -42AA

Importanla biologic a prezenei formelor neactive .


1. Protejaz de proteoliz proteinele celulelor productoare de E. 2. Este o forma de rezerv a E, care rapid pot fi activate i interven n reacie.

Reglarea covalent (fosforilare-defosforilare)


Activitatea unor E se modific prin fosforilare. Reaciile de fosforilare sunt catalizate de kinaze specifice. E-OH + ATP -------- E-O-P +ADP Defosforilarea are loc sub aciunea fosfotazei specifice E-OP +H2O------- E-OH +H3PO4

unele enzime snt active n forma fosforilat, iar altele n forma defosforilat. Ex.: glicogen fosforilaza activ n forma fosforilat; glicogen sintaza este activ n forma defosforilat

Autostructurarea cuaternar

Este caracteristic E ce posed structur cuaternar Fiecare protomer n parte nu posed activitate enzimatic La asamblarea lor se modific conformaia fiecrui protomer i corespunztor se modific i conformaia CA, devenind astfel favorabil pentru fixarea i transformarea S

CA

Inhibiia activitii enzimelor


1.

2.

1. 2.

3.
4.

Deosebim: inhibiie nespecific (T, pH, agenii denaturrii ) inhibiie specific Inhibiia poate fi reversibil i ireversibil. La inhibiiia ireversibil inhibitorul covalent se fixeaz de enzim sau se leag att de puternic nct disociaia are loc foarte incet. Exemple: cianurile se fixeaz cu Fe 3+ din citocromoxidaz ---se ntrerupe LR; ionii metalelor grele (mercur, plumb) inhib gruparea SH a multor E La o inhibiiie reversibil - inhibitori se fixeaza slab, necovalent de E Deosebim: Inhibiie competitiv Inhibiie necompetitiv Inhibiie prin exces de S Inhibiie alosteric

se aseamn dup structur cu S i se fixeaz n CA al E, mpedicnd fixarea i transformarea S. Nu e posibil fixarea simultan a S i a I. E va fixa pe acel competitor care se afla intr-o concentraie mai mare. inhibiia enzimei (SDH)cu malonat. SDH oxideaza succinatul in fumarat) Malonatul inhiba aceasta E datorita asemanarii cu S. Particularitatea principal a acestui tip de inhibiie este c poate fi nlturat cu adugarea n exes a S(succinat).

Inhibitorul

Inhibiia competitiv

I se aseamn dup structur cu S. Apare o competiie dintre I i S pentru CA. Nu e posibil simultan fixarea S i a I. E va fixa pe acel competitor care se afl intr-o concentraie mai mare. E+I ---- EI Inhibiia competitiv diminueaz v catalizei, micornd cota moleculelor de E fixatoare a S. Exemplu: inhibiia SDH cu malonat (SDH -oxideaza succinatul in fumarat). Malonatul inhib aceasta E datorit asemnrii cu S.

Inhibiia necompetitiv

inhibitorul nu se aseamn ca structura cu S


I i S se leag simultan cu E dar locusurile sint diferite E+S+I--------- ESI

Acest tip de inhibiie nu se nltur prin exces de substrat.


Activitatea I const n micorarea numrului turnover al E, dar nu i numrul de molecule de S. Cei mai de vaza inhibitori de acest tip n celulele vii sint produsele intermediare ale metabolismului, care reversibil se fixeaza cu locusuri specifice pe suprafata unor enzime reglatoare i modific activitatea lor. I poate fi nlturat de substane care l leag numite reactivatori

I i S se leag simultan cu E n locusuri diferite

Mrirea concentraiei de S nu micoreaza inhibiia.

Cei

mai de vaz inhibitori de acest tip n celulele vii sint produsele intermediare ale metabolismului, care reversibil se fixeaz la unele E reglatoare i modific activitatea lor.

complexul ES, inhib activitatea E E+S----ES +I-----ESI

Inhibiia noncompetetiv I se leag la inhibiia prin modificarea covalent a

moleculei enzimei - prin fosforilare pe baza ATP-ului. Unele enzime fosforilate pierd activitatea de exemplu enzima glicogensintetaza Inhibiia prin exces de S n CA se fixeaz simultan surplus de S ce nu poate fi transformat. Este o inhibiie reversibil nlturarea S. Retroinhibiie -

Inhibiie

alosteric - inhibitorul (efectorul) se leag n centrul alosteric al enzimei, modificnd conformaia moleculei (structura teriar) ce are ca consecin deformarea centrului activ.

CA CA

Retroinhibiie

Sistemele polienzimatice Tipurile de organizare a sistemelor polienzimatice


Fiecare celul a organismului conine setul su specific de E. Unele se gsesc n toate celulele, altele sunt prezente doar n anumite celule sau anumite compartimente celulare. Funcia fiecrei E, nu este izolat, ci strins legat de funcia altor enzime. Astiel din E aparte se formeaza sisteme polienzimatice sau conveiere. Funcia sistemelor polienzimatice depinde de particularitile de organizare a lor in celule. Se cunosc urmatoarele tipuri de organizare a sistemelor polienzimatice: 1. - funcional, 2. - structural-funcional 3. - mixt.

Organizarea funcional

enzimele sunt asociate n sistemul polienzimatic cu ajutorul metaboliilor, care difuzeaz de la o enzim la alta. produsul reaciei primei enzime servete drept substrat pentru enzima urmtoare etc. Ex.: glicoliza. Toate enzimele participante la glicoliza sunt n stare solubil, legtura se face doar prin intermediarii metabolici.
E1 E2 E3 E4 A---------------- B------------- C---------- D---------- P

Organizarea structural-funcional

E sunt fixate prin legturi slabe, ntr-o ordine corespunztoare ntrrii lor n aciune, pe o protein central, care poate fi chiar una din enzime. Proteina central dispune de un bra care fixeaz S i l duce la E1, care l transform n P1; P1devine n acest caz S2 , braul l preia i l duce la E2, care l transform n P2. La nivelul fiecrei E braul ndeplinete rol similar asigurnd formarea produsului unic al tuturor enzimelor complexului. Avantajul este c braul duce de fiecare dat S la E corespunztoare, potrivindu-l cu mare exactitate pe CA, ceea ce asigur n ansamblu o vitez mai mare dect cea corespunztoare aciunii enzimelor neasociate. Ex.- complexul polienzimatic piruvatdehidrogenazic, constituit din 3 E i 5 Co sau sintetaza acizilor grai constituit din apte enzime legate structural, care n ansamblu ndeplinesc funcia de sinteza a acizilor grasi. Afar de complexele multienzimatice e posibila i o alt varianta de organizare structural-funcional. Astfel E se pot aranja n lan, fixndu-se de membrana biologic. Ex.enzimele lanului respirator mitocondrial, care particip la transferul de electroni i protoni i la generarea de energie.

Tipul mixt de organizare

reprezint o mbinare a ambelor tipuri de organizare, adic o parte din sistemul polienzimatic are organizare structurala, iar cealalta parte - organizare funcional. Ex.- ciclul Krebs, unde o parte din enzime sunt asociate n complex structural (complexul 2oxoglutaratdehidrogenazic), ar alt parte se leag funcional prin metaboliii de legtur.

Unitile de activitate ale enzimelor

Unitatea Internaional (U.I.) cantitatea de E care catalizeaz transformarea 1mol de S ntr-un minut n condiii standard Katal (kat) cantitatea de E care asigur transformarea unui mol de S ntr-o secund n condiii standard (1U.I.=16,67 nkat)

Deosebirea privind componena enzimatic a organelor i esuturilor. Enzimele organospecifice. Modificarea activitii enzimatice n diferite afeciuni (enzimodiagnosticul).

Enzimele indicatorii sunt localizate intracelular: n citoplasm (lactatdehidrogenaza, aldolaza), n mitocondrii glutamatdehidrogenaza), n lizosomi (-glucoronidaza, fosfataza alcalin). Acestea enzime n norm n plasm se gsesc n concentraii foarte mici. La afeciunile celulare activitatea acestor enzime n plasm este brusc mrit.

Terapia cu enzime

Enzimele sunt ageni terapeutici unici ce produc efecte importante i specifice. Motivele care au limitat folosirea larg a enzimelor ca medicaie e natura protC:IC6:legat de natura proteic: - distribuie redus n organism dependena de dimensiuni, sarcina i de fenomenele de glicozilare (prin glicozilare proteinele sunt recunoscute de receptori i fixate n anumite locuri - posibilitate mic de dirijare extrahepatic, ficatul avnd tendin de a cptta i reine proteinele strine; - inactivarea lor sub aciunea proteazelor digestive n cazul administrarii orale, iar proteazele tisulare le scurteaza de asemeni actiunea; - potentialul lor antigenic, anticorpii formati pot genera reacii de hipersensibilizare adesea grave i pot inactiva enzima.

Tehnici propuse pentru optimizarea proprietilor terapeutice ale enzimelor.


- prin N-acilare a fost crescut semiviata asparaginazei, folosit n leucemie - S-au incercat de asemeni metode de obinere a enzimelor imobilizate. De ex. prin reticularea enzimei, ce conduce la agregate insolubile, prin adsorbie pe polimeri sintetici ori prin ataare covalent, sau prin incorporare ntr-un gel in cursul polimerizarii. Aceste preparate catiga rezistena la enzimele proteolitice i sunt mai putin imunoactive dar pot fi alterate proprietaisile farmacocinetice. Asemenea avantaje au dovedit conjugatii cu polietilenglicol (PEG) ai arginazei, ai glutaminasparaginazei sau ribonucleaza supusa reticularii, enzime cu efect antitumoral. Un succes n terapia defectelor genetice a fost imobilizarea enzimelor din ciclul ureogenetic pe un suport de fibrina. S-au propus noi forme farmaceutice prin incapsularea enzimelor in lipozomi microsfere cu membrana bistratificata lipido proteica, in hematii umane, in fantome eritrocitare sau in alti transportori celulari. Noile forme obinute prezint un potenial de ntire tisular. De ex. in cazul unor boli genetice cauzate de deficitul unor enzime lizozomale se impune o terape de substitutie, enzima trebuind tintita direct in lizozomi.

Tipurile de organizare a sistemelor polienzimatice:


Organizarea funcional - enzimele sunt asociate n sisteme polienzimatice, care ndeplinesc o anumit funcie. Produsul reaciei prirmei enzime a lanului servete drept substrat pentru enzima urmtoare etc. Ex.de organizare funcional - enzimele glicolizei, unde toate E participante se gsesc n stare solubil; Fiecare reacie este catalizat de enzime aparte. Drept verig de legtura aici servesc metaboliii. Organizarea structural-funcional consta n faptul ca enzimele formeaz sisteme structurale cu o anumit funcie. Ex.- complexul polienzimatic piruvatdehidrogenazic, constituit din cteva enzime, care particip la oxidarea acidului piruvic, sau sintetaza acizilor grai constituit din apte enzime legate structural, care n ansamblu ndeplinesc funcia de sinteza a acizilor grasi. Afar de complexele multienzimatice e posibila i o alt varianta de organizare structural-funcional. Astfel enzimele se pot aranja n lan, fixindu-se de membrana biologic. Ex.enzimele lanului respirator mitocondrial, care particip la transferul de electroni i protoni i la generarea de energie. Tipul mixt de organizare a sistemelor polienzimatice reprezint o mbinare a ambelor tipuri de organizare, adic o parte din sistemul polienzimatic are organizare structurala, iar cealalt parte - organizare funcional. Ex.- ciclul Krebs, unde o parte din enzime sunt asociate n complex structural (complexul 2oxoglutaratdehidrogenazic), ar alt parte se leag funcional prin metaboliii de legtur.

Deosebirea privind componena enzimatic a organelor i esuturilor. Enzimele organospecifice. Modificarea activitii enzimatice n diferite afeciuni (enzimodiagnosticul).

Enzimele indicatorii sunt localizate intracelular: n


citoplasm (lactatdehidrogenaza, aldolaza), n mitocondrii glutamatdehidrogenaza), n lizosomi (-glucoronidaza, fosfataza alcalin). Acestea enzime n norm n plasm se gsesc n concentraii foarte mici. La afeciunile celulare activitatea acestor enzime n plasm este brusc mrit.

Unitile de activitate ale enzimelor.

Unitatea Internaional (U.I.) cantitatea de E care catalizeaz transformarea 1mol de S ntr-un minut n condiii standard Katal (kat) cantitatea de E care asigur transformarea unui mol de S ntr-o secund n condiii standard (1U.I.=16,67 nkat)

Terapia cu enzime

Enzimele sunt ageni terapeutici unici ce produc efecte importante i specifice. Motivele care au limitat folosirea larg a enzimelor ca medicaie sunt legate de natura proteic: - distribuie redus n organism dependena de dimensiuni, sarcina i de fenomenele de glicozilare (prin glicozilare proteinele sunt recunoscute de receptori i fixate n anumite locuri - posibilitate mic de dirijare extrahepatic, ficatul avnd tendin de a cptta i reine proteinele strine; - inactivarea lor sub aciunea proteazelor digestive n cazul administrarii orale, iar proteazele tisulare le scurteaza de asemeni actiunea; - potentialul lor antigenic, anticorpii formati pot genera reacii de hipersensibilizare adesea grave i pot inactiva enzima.

Tehnici propuse pentru optimizarea proprietilor terapeutice ale enzimelor.


- prin N-acilare a fost crescut semiviata asparaginazei, folosit n leucemie - S-au incercat de asemeni metode de obinere a enzimelor imobilizate. De ex. prin reticularea enzimei, ce conduce la agregate insolubile, prin adsorbie pe polimeri sintetici ori prin ataare covalent, sau prin incorporare ntr-un gel in cursul polimerizarii. Aceste preparate catiga rezistena la enzimele proteolitice i sunt mai putin imunoactive dar pot fi alterate proprietaisile farmacocinetice. Asemenea avantaje au dovedit conjugatii cu polietilenglicol (PEG) ai arginazei, ai glutaminasparaginazei sau ribonucleaza supusa reticularii, enzime cu efect antitumoral. Un succes n terapia defectelor genetice a fost imobilizarea enzimelor din ciclul ureogenetic pe un suport de fibrina. S-au propus noi forme farmaceutice prin incapsularea enzimelor in lipozomi microsfere cu membrana bistratificata lipido proteica, in hematii umane, in fantome eritrocitare sau in alti transportori celulari. Noile forme obinute prezint un potenial de ntire tisular. De ex. in cazul unor boli genetice cauzate de deficitul unor enzime lizozomale se impune o terape de substitutie, enzima trebuind tintita direct in lizozomi.

Metodele de determinare a activitii enzimelor.

Metodele de determinare a activitii enzimelor.