FACULTAD DE CIENCIAS FARMACUTICAS Y BIOQUMICA

ASIGNATURA:

BIOQUIMICA II

PRCTICA N 3: REVELACIN DE ENZIMAS ALUMNA: CICLO: ROJAS RVOLO ROSARIO DIANA VII TURNO MAANA

DOCENTE:

Q.F. JAVIER JACK CALDERN GMEZ

LIMA PER 2012

PRCTICA N 2 CINETICA ENZIMATICA

UNIVERSIDAD INCA GARCILASO DE LA VEGA Facultad de Ciencias Farmacuticas y Bioqumica

OBJETIVO: Revelar las distintas clases de Enzimas (Antioxidantes) de los alimentos, que consumimos en nuestra dieta. Revelar la Enzima de La Leche (Aldehdoxidasa) Revelar la enzima Peroxidasa (acta sobre perxidos), los perxidos a la larga producen radicales libres (cncer)

REVELACIN DE ALDEHIDOXIDASA (EC 1.2.3.1): La Aldehidooxidasa es una Enzima Oxido Reductasa que trabaja con un FAD en primera instancia en su estado oxidado. Por Sistema de Aldehido Oxidasa en el organismo desdobla al aldehdo convirtindolo en Perxido (el cual produce radicales Libres), para que ste sea metabolizado dentro del organismo, ya que el aldehdo es muy txico dentro del cuerpo. La aldehdoxidasa metaboliza aldehdos, estos aldehdos se forman de alimentos que producen fermentos. ALIMENTO ------ FERMENTO ------ ALDEHDO ------ (El Aldehdo es ms txico que un Perxido) por eso cuando una persona bebe alcohol, su cuerpo produce Aldehdos, para desintoxicarse, debe tomar Leche ya que tiene la enzima (Aldehidooxidasa) que acelera el metabolismo del aldehdo.

FINALIDAD DE LA VASELINA Producir una Capa en el Sistema que impida el ingreso de O2 en la reaccin. La vaselina queda sobrenadando en la solucin acuosa ya que el agua es ms densa que la vaselina. Si el O2 ingresa de por medio no se observa la reaccin.

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PRCTICA N 2 CINETICA ENZIMATICA RESULTADOS: TUBO 1 5 mL Leche + 1 ml H20 Dest. + 1mL Azul Metileno + 1 mL Vaselina TUBO 2 5 mL Leche (Enzima Aldehdoxidasa + H2O) + 1 ml Aldehdo (Rvo.Benzaldehdo+H2O) + 1mL Azul Metileno (Desplaza al O2) + 1 mL Vaselina

BM 38 C hasta ver Reaccin

Reaccin (+) Decoloracin de Azul a Blanco

REACCIN QUMICA: VIVO Reaccin producida en Ausencia de O2 - El azul de Metileno ayuda al FADH2 a reoxidarse aceptando sus Hidrgenos, Azul de Metileno queda reducido. - A.M. Oxidado: Color Azul - A.M. Reducido: Color Blanco - Es decir se form A.M. en su forma Leico de color Blanco.
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VITRO

REVELACIN DE LA PEROXIDASA (EC1.1.1.1.7) RESULTADOS: TEST DE BENZIDINA: (Zumos) Reaccin (+) para BENZIDINA: Verde Azulado TUBO 1 1 mL papa + V gts. Benzidina + II gtas H2O2 TUBO 2 TUBO 3 TUBO 4 1 mL 1 mL 1 mL Betarraga Naranja Rabanito + + + V gts. V gts. V gts. Benzidina Benzidina Benzidina + + + II gtas H2O2 II gtas H2O2 II gtas H2O2 BM 38 C hasta ver Reaccin + ++
1 2 3

TUBO 5 1 mL Nabo + V gts. Benzidina + II gtas H2O2

+++

(-) +++
4 5

TUBO 6 1 mL Manzana + V gts. Benzidina + II gtas H2O2

TUBO 7 1 mL Yacn + V gts. Benzidina + II gtas H2O2

TUBO 9 1 mL Camote Amarillo + V gts. Benzidina + II gtas H2O2 BM 38 C hasta ver Reaccin +++ + +++ ++
8 9 1

TUBO 8 1 mL Tomate + V gts. Benzidina + II gtas H2O2

TUBO 10 1 mL Pepino + V gts. Benzidina + II gtas H2O2

++

++

TUBO 11 1 mL Camote Morado + V gts. Benzidina +

TUBO 12 1 mL Fresa + V gts. Benzidina +

TUBO 13 1 mL Kiwi + V gts. Benzidina + II gtas H2O2

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II gtas H2O2

II gtas H2O2

BM 38 C hasta ver Reaccin + (-) PRCTICA N 2 CINETICA ENZIMATICA REACCIN QUMICA: BENZIDINA: La Benzidina trabaja con los zumos de la muestra - La Benzidina en la reaccin se va a oxidar, es decir la enzima le va a arrancar H+ a la benzidina, producto de sta Oxidacin se va a formar el Difenoquinoidiimina responsable del producto color verde azulado. En tanto que, los H+ que pierde la Benzidina son aceptados por el Perxido (H2O2), convirtindose en molculas de H2O. Las Peroxidasas desdoblan constantemente en H20. perxidos, convirtindolos (-)

El H20 que es menos txica para el organismo se metaboliza, he ah el fundamento de consumo de Peroxidasas en nuestra dieta; porque los Peroxidos (H2O2) que a la larga forman radicales libres los cuales son dainos para el organismo son contrarrestados y convertidos constantemente en H20.

PIROGALOL: El Pirogalol trabaja con los trozos de la muestra. - En ste Sistema, ocurren simultneamente las siguientes reacciones: 1. Oxidacin 2. Reagrupacin y 3. Descarboxilacin. Debido a stas reacciones el Pirogalol producto de su oxidacin se convierte en Purpurogalina Trioxibenzol a-B-Tropalona responsable de la coloracin parduzco amarillento en el pp sobre los trozos de la muestra.

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Adems de la oxidacin, se libera una molcula de CO 2 (Descarboxilacin) y como el Pirogalol pierde sus H+ producto de la oxidacin, el Perxido (H2O2) los acepta y se desdobla para formar

H20.

PRCTICA N 2 CINETICA ENZIMATICA

REVELACIN DE UREASA: La Ureasa enzima presente en la Harina soya, pH de la Urea es cido, por que proviene del cido rico. La Ureasa rompe al sustrato producto de la hidrlisis, por sta hidrlisis se va a formar un producto en forma de gas con pH alcalino (Amoniaco), el cual interacciona con la fenolftalena produciendo un color rojo grosella.

Reaccin (+) para UREASA: Rojo Grosella

TUBO 1 2 mL Urea + II gts Fenolftalena + 0,25 gr. Harina Soya BM 38 C hasta ver Reaccin

Reaccin (+) Rojo Grosella

REACCIN QUMICA: UREASA: En la reaccin, la Urea producto de su Hidrlisis (por Ureasa y H 20), desdobla a la Urea formando Amoniaco y CO2 ; el gas amoniaco interacciona con la fenolftalena dando la coloracin rojo grosella caracterstico para los lcalis.

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PRCTICA N 2 CINETICA ENZIMATICA TEST PIROGALOL: Reaccin (+) para PIROGALOL: pp. Parduzco Amarillento TUBO 1 Trozos de papa + 2 mL Pirogalol + II gtas H2O2 TUBO 2 Trozos de Rbano + 2 mL Pirogalol + II gtas H2O2 TUBO 3 Trozos de Betarraga + 2 mL Pirogalol + II gtas H2O2 TUBO 4 Trozos de Nabo + 2 mL Pirogalol + II gtas H2O2 TUBO 5 Trozos de Yacn + 2 mL Pirogalol + II gtas H2O2

BM 38 C hasta ver Reaccin +++ +++

1 2

+++ +++
3 4

TUBO 6 Trozos de Camote Amarillo + 2 mL Pirogalol + II gtas H2O2

TUBO 7 Trozos de Kiwi + 2 mL Pirogalol + II gtas H2O2

TUBO 9 Trozos de Camote Morado + 2 mL Pirogalol + II gtas H2O2 BM 38 C hasta ver Reaccin (-) +++ ++
7 8 9 6

TUBO 8 Trozos de Pepino + 2 mL Pirogalol + II gtas H2O2

TUBO 10 Trozos de Tomate + 2 mL Pirogalol + II gtas H2O2

+++
5

+++
1

TUBO 11 Trozos de Fresa + 2 mL Pirogalol + II gtas H2O2

TUBO 12 Trozos de Manzana + 2 mL Pirogalol + II gtas H2O2

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BM 38 C hasta ver Reaccin (-) + PRCTICA N 2 CINETICA ENZIMATICA OBSERVACIONES: - Las reacciones saldrn (+) si las enzimas se encontraran intactas, es decir que los alimentos no se encuentren procesados crudos, ya que si estuvieran cocidos las enzimas se encontraran desnaturalizadas. CONCLUSIONES: Por Sistema de Aldehido Oxidasa en el organismo desdobla al aldehdo convirtindolo en Perxido (el cual produce radicales Libres), para que ste sea metabolizado dentro del organismo, ya que el aldehdo es muy txico dentro del cuerpo. Demostramos en el Laboratorio la actividad peroxidasa que presentan los alimentos de nuestra dieta. Las Peroxidasas desdoblan al Perxido si entra en agua. Tenemos 02 Sistemas para diferencias Peroxidasa: 1. Benzidina 2. Pirogalol Con el Pirogalol se puede diferenciar mejor que con benzidina por la proporcin de precipitado que hay en cada sistema. En objetivo en ambos sistemas (Pirogalol y Benzidina) es que las Peroxidasas desdoblen perxidos, convirtindolos constantemente en H20, ya que el Agua es menos txico que el perxido en el Organismo. En la Revelacin de Aldehidoxidasa el Azul de Metileno reemplaza a la actividad de O2. No todas las leches tienen ALDEHDOXIDASA.

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