UNIVERSITATEA DE TIINE AGRICOLE I MEDICIN VETERINAR ION IONESCU DE LA BRAD IAI

FACULTATEA DE ZOOTEHNIE SPECIALIZAREA ZOOTEHNIE NVMNT LA DISTAN

DOINA LEONTE

MATERIAL DE STUDIU I.D.

BIOLOGIE CELULAR
ANUL I, SEMESTRUL I

IAI, 2006

CUPRINS Cap. I 1.1 1.2 1.3 II 2.1 2.1.1 2.1.2 2.1.3 2.1.4 2.1.5 2.1.6 2.1.7 2.2 2.2.1 2.2.2 2.2.2.1 2.2.2.1.1 2.2.2.1.2 2.2.2.1.3 2.2.2.1.4 2.2.2.1.5 2.2.2.1.6 2.2.2.1.7 2.2.2.1.8 2.2.2.1.9 2.2.3. 2.3 2.3.1. 2.3.2. 2.3.2.1 2.3.2.2 2.3.2.3 2.3.2.4 2.3.2.4.1 2.3.2.4.2 Citologie Celula-definiie, structur i morfologie Numrul, volumul i dimensiunile celulelor Forme de celule Structura celular Membrana celular Definiie, structur i organizare molecular Glicolema (glicocalixul) Plasmalema Citoscheletul membranei celulare Specializrile membranei celulare Jonciunile intercelulare Transportul prin membran Citoplasma celular Matricea citoplasmatic Organitele celulare Organitele de micare intracelular Microfilamentele de actin i de miozin Microfilamentele de miozin Funciile microfilamentelor de actin i de miozin i structura miofibrilelor striate; mecanismul de contracie muscular n muchiul scheletici Microtubulii Centrul celular (centriolii), fusul de diviziune Organite generatoare de energie Organitele sintezei i secreiei celularev Organitele digestiei celulare Organitele specifice Incluziunile citoplasmatice Nucleul celular Caractere morfologice generale Structura i ultrastructura nucleului celular Membrana nuclear Matricea nuclear Cromatina nuclear Cromozomii Morfologia, structura i clasificarea cromozomilor Ultrastructura i organizarea supramolecular a cromozomilor eucariotici
1

Pag 3 3 3 4 7 8 8 8 9 13 16 19 23 32 32 33 33 33 34 35 38 40 43 50 59 65 65 66 66 69 69 73 74 77 77 80

2.3.2.4.3 III 3.1 3.1.1 3.1.2 3.1.2.1 3.1.2.2 3.1.2.2.1 3.1.2.2.2

Nucleolul i funciile lui Reproducerea celular Ciclul celular Intercineza Diviziunea celular (cineza) Diviziunea celular direct (amitoza) Diviziunea celular indirect Mitoza Meioza Bibliografie

82 89 89 89 91 91 92 92 97 103

Capitolul I Noiuni generale despre celule

1.1. Celula-definiie, structur i morfologie Celula este unitatea de baz morfo-funcional a materiei vii, un produs al evoluiei cu o structur complex, aflat intr-o relaie de autonomie i echilibru dinamic cu mediul inconjurator. Firecare celul este capabil de cretere, dezvoltare, autoreglare i reproducere. O celul este alctuit din 3 componente principale: membran, citoplasm i nucleu. La microscopul optic, elementele celulare constitutive apar difereniat colorate. Astfel, prin coloraia clasic hematoxilin-eozin (HxE), membrana celular apare ca o linie de demarcaie fin ce delimiteaz la exterior celula, citoplasma (acidofil) se coloreaz in roz, iar nucleul (bazofil) se coloreaz in albastru violet. Membrana celular constituie nvelisul subire al celulelor, care limiteaz suprafaa periferic a citoplasmei la toate celulele animale, avnd o grosime de circa 0.1 m. Intervine n schimburile dintre celul i mediul ambiant, avnd i rol de protecie Citoplasma apare ca o reea complex din interiorul membranei, care nconjoar nucleul, umplnd spaiile dintre organite. Nucleul este o formaiune vezicular, rotund sau ovalar, aflat n centrul celulei. 1.2. Numrul, volumul i dimensiunile celulelor Numrul celulelor este variabil de la o specie la alta i relativ constant la indivizii din aceeai specie. La organismele superioare i inclusiv la om nu este o constant numeric absolut, numrul de celule care alctuiesc fiecare organ fiind deosebit de ridicat (de ordinul a 1014-1015) (150-300 miliarde de hepatocite, peste 1000 miliarde de neuroni i nevroglii, 250000 miliarde de celule sanguine). Volumul celulelor variaz intre 200 m3 i 5000 m3 (celula pancreatic are volumul de 1000 m3, hepatocitul de 5000 m3). Volumul celular variaz ca urmare a influenei unor factori, dar este constant pentru un anumit tip de celul, independent de talia i greutatea organismului; de asemeni variaz in funcie de starea funcional a celulei sau vrst (volumul este mai mic la celulele btrne). Tipul de celule nu se modific pe parcursul vieii unui organism, in timp ce, procesul de rennoire a celulelor este permanent. Majoritatea celulelor au o durat de via limitat, de exemplu:
3

- leucocitul (globula alb) triete doar cteva ore atunci cnd lupt impotriva agenilor patogeni din timpul unei boli; -hematia (globula roie) triete n medie 4 luni, dup care mbtrneste, i schimb forma, iar n final, este distrus i reciclat n splin i ficat; - celulele epidermei triesc cteva luni, iar dup ce mor sunt ndeprtate de pe suprafaa corpului. Unele celulele nervoase pot avea aceeai vrst cu a individului animal sau uman, dar nu se divid. Majoritatea celulele organismelor pluricelulare au dimensiuni sub limita de rezoluie a ochiului uman (cu diametrul de ordinul micrometrilor) i care variaz de la un tip celular la altul i de la o specie la alta. Pentru aprecierea dimensiunilor structurilor celulare se utilizeaz urmtoarele uniti de msur : - micronul () sau micrometrul (m) = 10 -3 mm sau 10 -6 m - nanometrul (nm) = 10 -3 = 10 -6 mm= 10-9 m - Angstrom-ul () = 10 -1 nm = 10 -4 = 10 -7 mm=10-10 m. n funcie de dimensini, celulele din organismul animal pot fi clasificate n urmtoarele tipuri: - mici (4-5 ): celulele din stratul granular extern al scoarei cerebrale i cerebelare i hematiile (5-7 nm); - mijlocii (10-30 ): majoritatea celulelor din organismul animal (leucocitele, hepatocitele, celulele epiteliale i conjunctive); - mari (30-200 ): celulele de la nivelul ovarului, celulele din esutul nervos, neuronii multipolari din coarnele ventrale ale mduvei rahidiene. - gigantice (>200 ): celulele esutului muscular striat de tip scheletic, ovulul de pasre . 1.3 Forme de celule Variabilitatea formei este determinat de funciile de mare diversitate, raporturile diferite dintre celule i caracterele fizicochimice ale mediului n care i desfoar activitatea. Se disting urmtoarele forme de celule (fig.1): - celul sferic , cu nucleu: - sferic (ovocitul; limfocitul); - reniform (monocitul); - polimorf (leucocite polimorfonucleare); - semilunar (adipocitul); - celul elipsoidal cu nucleu elipsoidal (eritrocitul de pasre); - celul pavimentoas (mezotelial, endotelial cu nucleu aplatizat); - celul cubic cu nucleu veziculos; - celul prismatic cu platou striat (enterocitul);
4

- celul prismatic ciliat (n epiteliul mucoasei respiratorii i a oviductului); - celul cu aspect de cup (caliciform); - celul poligonal (hepatocitul); - celul ramificat cu nucleu sferic sau elipsoidal: * celula conjunctiv *celula nervoas (piramidal, stelat,piriform) - celul fusiform -fibra muscular neted (leiocitul) cu nucleu alungit n form de bastona; - celula cilindric -fibra muscular striat de tip scheletic (rabdocitul) cu mai muli nuclei aplatizai; - celul cilindric ramificat - fibra muscular striat de tip cardiac; - celul flagelat (spermatozoidul); - celul cu aripi sau aliform (tenocitul); - celul in form de rachet de tenis (din epiteliul pavimentos stratificat de tip urinar).

Fig. 1 Diferite forme de celule (dup Margareta Confederat, 2002)

1-ovocit; 2-limfocit; 3-neutrofil; 4-monocit; 5-adipocit; 6-hematie; 7-eritrocit de pasre; 8-celule pavimentoase; 9-celule cubice; 10-celule prismatice cu platou striat; 11-celule prismatice ciliate; 12-celul caliciform; 13-fibroblast; 14-fibrocit; 15-neuron piramidal Betz; 16-neuron piriform Purkinje; 17 -neuron multipolar stelat; 18-celul fusiform-fibr muscular neted; 19-celul cilindric-fibr muscular striat de tip scheletic; 20-fibr muscular striat de tip cardiac; 21-spermatozoid; 22-celul aliform-tenocit; 23-celul fn rachet; 24-celul umbeliform
5

n organismul animal celulele se pot afla att sub form liber cnd circul in lichidele naturale: snge (hematii, leucocite i trombocite) i sperm (spermatozoizii)- ct i asociate n esuturi (ntre celule stabilindu-se raporturi de interdependen).

ntrebri 1.Ce uniti de msur se utilizeaz pentru apreciera dimensinilor celulelor ? 2.n funcie de mrime, celulele sunt de mai multe tipuri. Care sunt acestea ? 3. Care sunt factorii care determin forma celulelor ? 4. Ce forme de celule se cunosc ? 5.Ce grupe de organite citoplasmatice cunoatei ?

Tem de control Durata de via a celulelor Referat Alctui un referat cu tema Celula-unitatea morfo-funcional i fiziologic a materiei vii

Capitolul II Structura celular

La exterior, celula este delimitat de o membran, prin care se realizeaz schimbul de substane i semnale cu mediul exterior. n interiorul celulei se gsete citoplasma care este format din morfoplasm (ansamblul organitelor) i hialoplasm (plasma transparent) - i nucleul n care este nmagazinat informaia genetic, sub form de ADN. Organitele citoplasmatice sunt delimitate de membrane denumite endomembrane, care au structur similar cu plasmalema i diametrul de 6 nm. Excepie fac ribozomii care nu prezint endomembran. n funcie de rolul indeplinit in celul, organitele citoplasmatice pot fi grupate astfel (fig. 2):
vezicule de secre]ie centrul celular aparatul Golgi

membrana nuclear\

reticulul endoplasmatic

lizozomi nucleolul vacuol\ lipidic\ mitocondrie

Fig. 2 Reprezentarea schematic a celulei animale la microscopul electronic (dup M. Maillet, 1995)
7

 organitele micrii celulare, care sunt reprezentate de microfilamentele de actin i miozin (acestea se gsesc n att fibrele musculare ct i n celelalte celule, formnd sistemul motilactin-miozin) i microtubulii - (care intr n structura cililor i flagelilor formnd sistemul motil microtubul-dinein); organitele generatoare de energie - reprezentate de mitocondrii; organitele sintezei i secreiei celulare- care sunt reprezentate de: ribozomi, reticulul endoplasmatic neted, reticulul endoplasmatic rugos i complexul Golgi; organitele digestiei celulare- reprezentate de lizozomi i peroxizomi. 2.1 Membrana celular 2.1.1 Definiie, structur i organizare molecular Membrana celular (nveliul periferic) este structura morfofuncional complex care delimiteaz i compartimenteaz mediul intracelular de cel extracelular. Prin intermediul membranei, celula realizeaz schimburile de informaie cu mediul extracelular. n structura membranei celulare (care este foarte complex) intr: glicolema (sau glicocalixul), plasmalema (sau membrana plasmatic) i citoscheletul membranar (fig.3):

Fig. 3 Plasmalema i glicocalixul la microscopul electronic (dup Margareta Confederat, 2002) 2.1.2 Glicolema (glicocalixul) Glicolema este un nveli al celulei, cantonat doar la faa extern a membranei celulare i format din glucidele glicoproteinelor i glicolipidelor din plasmalem. Glicolema este format dintr-o component intern (lamina extern), mai puin dens i cu un diametru de 20 nm i o component extern (nveliul de suprafa), mai dens i cu un diametru de 30 nm. La limita dintre cele dou componente se evideniaz n mod frecvent molecule de fucoz i ioni de Ca+2 ce formeaz puni de legtur cu moleculele de fucoz, astfel c, glicolema reprezint locul de stocare a Ca+2.
8

- Fibronectina este o molecul glicoproteic extrinsec. Se gsete n fibroblaste, n plasma sanguin (unde are rol n cicatrizare, fagocitoz i coagulare) i n matricea extracelular (unde polimerizeaz i constituie fibrilele). Aceast molecul asigur coeziunea dintre celule i matrice prin adeziunea celulei la substrat . Moleculele de fibronectin se asociaz ntre ele prin intermediul proteoglicanilor i se fixeaz pe colagen. Moleculele de fibronectin sunt uor vizibile pe suprafaa celulelor normale, fiind marcate cu substane fluorescente. n cazul celulelor tumorale, fluorescena este mai intens., deoarece acestea nu rein mult timp fibronectina pe suprafaa lor; celulele devenind libere i independente n esutul conjunctiv, ulterior sunt distruse. - Glicoproteinele sunt substane formate prin asocierea polizaharidelor sau a heterozaharidelor la un lan polipeptidic. Pe protein se fixeaz glucide (glucoz, manoz, fructoz, glucozamin, hexozamin) cu dispunere n lanuri ramificate ce conin fiecare 12-15 glucide. Acidul N-neuraminidic este purttor de sarcini negative i ocup ntotdeauna extremitatea lanurilor glucidice (galactoza, fucoza este preterminal) i confer anumite proprieti acestei glicoproteine. Proteinele sunt glicozilate pe un amino-acid special denumit asparagin, iar legturile sunt de tipul N-glicolizate - Proteoglicanii (sau mucopolizaharidele) sunt polipeptide (5%) ce leag un polizaharid neramificat (format prin polimerizarea dizaharidelor-o secven repetitiv format din 2 glucide i glucozamino-glicani(95%). Glicocalixul are funcii multiple, precum: - Are rol n protecia membranei celulare. Glicolema previne rupturile membranei apicale ale celulelor, acionnd ca un filtru prin care sunt eliminate moleculele mari; - Intervine n schimbul celular de suprafa; - Are rol n absorbie. nveliul celular absoarbe sau fixeaz anticorpii citofili ce modific fagocitoza i antigenul solubil al grsimii ce se leag la limfocitele normale; - Intervine n activitatea unor enzime. 2.1.3 Plasmalema Plasmalema reprezint partea central a membranei celulare. Aceasta are o grosime de 7,5 nm i o structur trilaminar. Din punct de vedere chimic este de natur lipo-proteic, fiind format dintr-un dublu strat molecular fosfo-lipidic, care este alctuit din molecule amfipatice (molecule n form de cui, alctuite dintr-un cap hidrofil gruparea polar i o coad dubl hidrofob -gruparea apolar). Din punct de vedere chimic, capul hidrofil este reprezentat de ctre partea principal a moleculelor de fosfolipide (fosfatidilcolina,
9

fosfatidiletanolamina, fosfatidilserina, fosfatidilinozitol), iar coada hidrofob este reprezentat de cele dou resturi de acizi grai esterificai pe scheletul glicerinei. n ap, aceste molecule amfipatice, se asociaz formnd micelii (picturi). Cea mai stabil form de dispunere a moleculelor de fosfolipide i glicolipide, este cea a unui dublu strat ,n care gruprile polare sunt dispuse la exterior (n contact cu apa), iar cele nepolare (lanurile de acizi grai) se afl la interior (protejate de ap) . Din totalul lipidelor din plasmalem, fosfolipidele reprezint 70%, colesterolul 25%, iar glicolipidele 5% . Fosfolipidele sunt reprezentate prin fosfogliceride i sfingolipide. Fosfogliceridele sunt reprezentate de: fosfatidilcolin, fosfatidiletanolamin, fosfatidilserin i fosfatidilinozitol, n timp ce sfingolipidele sunt reprezentate mai ales prin sfingomielin. Mai frecvent ntlnite n structura membranelor biologice sunt fosfatidilcolina (lecitina) i fosfatidiletanolamina (cefalina), care au form de cui cu coada dubl, capul fiind reprezentat de ctre reziduurile de colin. Capul acestor molecule este hidrofil i poart sarcini electrice. Coada moleculelor n discuie (a cuiului) este alctuit din resturi de acizi grai esterificai care pot fi diferii pentru aceeai molecul, nu poart sarcini electrice i constituie gruparea apolar sau hidrofob (fig.4).

Fig.4 Modelul spaial-filiform al unor molecule de fosfolipide dispuse n bistrat fluid membranar(dup Teuan,V., 2000)
10

Colesterolul este intercalat printre moleculele de fosfolipide, gsindu-se cu precdere n stratul extern. Colesterolul reduce fluiditatea stratului lipidic membranar n care se dispune (fig.5).

Fig. 5 Reprezentarea moleculei de Colesterol (dup Teuan,V., 2000): A

formula chimic; B reprezentare simplificat; C intercalarea moleculei de colesterol printre moleculele de fosfolipide. B (1 grupare polar; 2 inel steroid; 3 coada hidrofob); C (a determinarea lungimii moleculelor de fosfolipide i de colesterol; b moleculele de fosfolipide; c- molecula de colesterol plasat printre moleculele de fosfolipide)

Glicolipidele reprezint doar 5% din totalul lipidelor membranare i sunt constituite din gangliozide care, conin ntre altele unul sau mai multe resturi de acid sialic ce le confer sarcin electric negativ. Glicolipidele sunt localizate exclusiv n stratul lipidic extern. Lipidele din plasmalem au o distribuie asimetric, determinat de faptul c fosfolipidele precum fosfatidilcolina i sfingomielina se gsesc ndeosebi n stratul lipidic extern, n timp ce fosfatidiletanolamina i fosfatidilserina sunt localizate mai ales n stratul lipidic intern. Asimetria se pstreaz i la nivelul componenei n acizi grai. Astfel, dac n stratul lipidic intern predomin acizii grai nesaturai (care confer o fluiditate mai mare acestui strat), n stratul lipidic extern sunt mai frecveni acizii grai saturai cu lanuri lungi de lipide din bistratul plasmalemei, care se pot misca fie n planul lateral al stratului de care aparin, fie c pot sridintr-un strat n altul (flip-flop). Prima micare se produce mai uor i mai rapid n timp ce al doilea fel de micare se produce mai lent (minute, ore). Proteinele din plasmalem sunt prezente att pe cele dou fee ale bistratului fosfolipidic, ct i incluse parial sau total, n cele dou straturi lipidice ale plasmalemei. Prima categorie, adic cele dispuse pe ambele fee ale bistratului fosfolipidic se numesc proteine extrinseci, iar cea de-a doua categorie poart denumirea de proteine intrinseci sau proteine integrale. Proteinele extrinseci sau periferice, reprezint 30% din totalul proteinelor membranare, sunt ataate de o parte i de alta a continuumului lipidic i realizeaz legturi electrostatice cu gruprile polare ale fosfolipidelor. Aceste proteine sunt mai numeroase pe faa intern a plasmalemei, unde contribuie la
11

constituirea citoscheletului membranar. Cele de pe faa extern a plasmalemei se combin cu oligozaharidele (galactoza, manoza, fructoza, galactozamina, glucozamina, acidul sialic, etc.) i contribuie la formarea glicolemei. Proteinele din plasmalem au urmtoarele funcii generale: au rol n transportul activ; sunt enzime de membran care controleaz cvasitotalitatea reaciilor biochimice membranare; au rol de receptori de membran. Funciile proteinelor din structura membranelor biologice confer acestora o deosebit specificitate, n timp ce fosfolipidele din membrane asigur acestora stabilitatea i funcia de barier selectiv. Grosimea fiecrui strat proteic al membranelor biologice este de 2,02,5 nm. Bistratul fosfolipidic este meninut fluid la temperatura corpului viu prin controlul asupra radicalilor de acizi grai din structura fosfolipidelor constituiente. Acizii grai cu lanuri scurte de atomi de carbon sau cei nesaturai accentueaz fluiditatea bistratului fosfolipidic iar colesterolul i acizii grai saturai determin creterea vscozitii acestuia (fig.6).

Fig. 6 Structura spaial a plasmalemei dup teoria Mozaicului fluid(dup Teuan,V.,2000)

1 Bistratul fosfolipidic; 2 proteine extrinseci interne; 3 proteine extrinseci externe; 4 proteine intrinseci externe; 5 proteine intrinseci interne; 6 proteine integrale; 7 tunel proteic; 8 strat fosfolipidic extern; 9 strat fosfolipidic intern; 10 glicoproteinele din structura glicolemei; 11 glicolipidele din structura glicolemei
12

Bistratul fosfolipidic este meninut fluid la temperatura corpului viu prin controlul asupra radicalilor de acizi grai din structura fosfolipidelor constituiente. Acizii grai cu lanuri scurte de atomi de carbon sau cei nesaturai accentuiaz fluiditatea bistratului fosfolipidic, iar colesterolul i acizii grai saturai determin creterea vscozitii acestuia. Plasmlema prezint o serie de caracteristici, de natur diferit: - mecanic: membrana celular este extensibil, elastic i plastic, prezentnd diferenieri morfologice de tipul zonelor de adezivitate intercelular; - antigenic: corespund fenomenelor de recunoatere a structurilor organismului (a self-ului) i de a le distinge de ,,nonself sau self ul alterat; fixarea unei substane strine induce modificri n activitatea celular; - de facilitare a schimburilor cu mediul extern : permeabilitatea permite trecerea particulelor prin fenomenul de citoz, traversnd membrana celular; - legate de existena sarcinii electrice; repartiia inegal a ionilor de o parte i de alta a membranei antreneaz polarizarea electric (potenialul de repaus), iar modificrile de polarizare dau natere curenilor de aciune de la suprafaa membranei. Proteinele membranare glicozilate. Partea glicozilat a unei proteine membranare nu intereseaz dect pentru regiunea orientat spre mediul extracelular care intr n structura glicolemei. 2.1.4 Citoscheletul membranei celulare Citoscheletul membranei celulare este format dintr-o reea de proteine extrinseci, situat pe frontul intern, plasmatic al membranei celulare. Rolul su const n stabilizarea infrastructurii membranei n micrile locale ale suprafeei celulei, conferind flexibilitate i rezisten membranei celulare. Citoscheletul membranei celulare are o grosime de circa 5-9 nm si este ancorat de plasmalem prin proteinele integrale ale aceasteia. A fost studiat cu precdere la hematie, la care reprezint circa 60 % din totalitatea proteinelor membranare. n structura sa se disting: - spectrina (protein cu aspect de bastona, prezent sub form de dimeri); - ankirina (protein sferic sau piramidal); - actina (are aspect fibrilar); - proteina benzii 4,1 (protein globular, cu diametrul de cca 6 nm, cu pondere redus n membrana celular). Nodurile reelei se ancoreaz de plasmalem i de citoscheletul citoplasmei prin cele dou complexe moleculare din care sunt alctuite: - complexul spectrin-ankirin i proteina integral, prin intermediul
13

cruia se leag de plasmalem; - complexul spectrina, actina i proteina benzii 4,1- care structureaz nodurile propriu-zise i reprezint complexul de legtur cu citoscheletul matricei citoplasmatice. Citoscheletul citoplasmei este alctuit dintr-o reea de microfilamente care strbat ntreaga hialoplasm, n structura creia intr: - microfilamente de actin (diametrul de 7 nm); - microtubuli (diametrul 24 nm); - microfilamente intermediare (diametrul de 10 nm); - proteine asociate. Citoscheletul ndeplinete o serie de funcii: - contureaz i menine forma celulelor i a prelungirilor celulare; - asigur micarea cililor i flagelilor precum i deplasarea celulelor i transportul intracelular; - are rol n diviziunea celular, n deplasarea cromozomilor n plan ecuatorial; - are rol n contracia muscular. Microtubulii se afl att izolai (microtubuli citoplasmatici), ct i fasciculai temporar (fibrele fusului de diviziune) sau permanent (centrioli, corpusculi bazali, cili, flageli). Fiecare microtubul este format din 13 protofilamente dispuse circular, echidistant. Protofilamentele sunt formate din dimeri i de tubulin. Orientarea dimerilor de tubulin n protofilamente confer microtubulilor un caracter polar (pozitiv sau negativ) (fig. 7).

Fig. 7 Modelul structurii tridimensionale a microtubulilor (dup Margareta Confederat, 2002)

14

Microfilamentele de actin sunt formate din polimeri de actin. Monomerul de actin este denumit i actin globular (AG) deoarece are form globular. Prin polimerizarea actinei globulare se formeaz filamentele de actin sau actina fibrilar (AF) (fig. 8).
nuclea]ie

actina F actina G

Fig. 8 Polimerizarea actinei (dup Margareta Confederat, 2002) Microfilamentele intermediare sunt formate din 5 tipuri de proteine: vinmentina, desmina, neurofilamentele, proteina glial, fibrilar, acid i citocheratinele . Filamentele intermediare au roluri diferite n funcie de tipul celular n care se gsesc (fig.9).

Fig.9 Nivelurile de asamblare al filamentelor intermediare (dup, Margareta Confederat, 2002)

15

2.1.5 Specializrile membranei celulare Membrana celular poate prezenta o difereniere structural sau o transformare morfologic complex, care confer celulei o anumit funcie. Aceste specializri (sau diferenieri) pot fi de dou tipuri: temporare i permanente. Specializrile temporare sunt reprezentate de pseudopode, vluri i membrane ondulate. Pseudopodele sunt prelungiri digitiforme, care impreun cu citoplasma i coninutul citoplasmatic (organitele intracitoplasmatice) ader i se sprijin pe suporturi i trag restul celulei in direcia de micare (fig. 10). Aceste micri - frontale i continue- sunt caracteristice leucocitelor cnd traverseaz pereii vaselor sanguine prin fenomenul de diapedez i se deplaseaz spre esuturi. Vlurile sunt emise de macrofage n timpul fagocitozei i nu au nevoie de suport.

Fig. 10 Diferenieri tranzitorii ale membranei celulare: A i B pseudopode; C i D valuri i membrane ondulante Specializrile permanente se afl la nivelul plasmalemei polului apical i bazal precum i la nivelul de contact a dou celule vecine. Specializrile plasmalemei polului apical sunt: microvilii, cilii vibratili, cilii imobili (stereocili), iar cele ale polului bazal sunt reprezentate de labirintul bazal. Zonele de cuplaj celular se numesc jonciuni celulare, i se pot clasifica n: jonciuni de adezivitate (desmozomi), desmozomi in band (sau liniari), desmozomi maculari, hemidesmozomi (sau desmozomii monocelulari), jonciuni impermeabile (etane), jonciuni de comunicare i interdigitaii Cilii pot fi mobili sau vibratili (kinocili) i fici (stereocilii). Cilii vibratili se gsesc la polul apical al celulelor din epiteliul mucoasei aparatului respirator si din oviduct. Acetia sunt formaiuni filiforme, cu lungimea de 5-15 si cu diametrul de 0,5-0,7 (50007000 ). La nivelul fiecrui cil se disting trei poriuni: tija, corpusculii bazali i rdcina. La exteriorul tijei se distinge plasmalema (dens la
16

fluxul de electroni i cu o grosime de circa 90 ), iar la interior, axonema (fig.11). Axonema este format din 10 perechi de tubuli dispui longitudinal: o pereche este plasat central, iar 9 perechi (dublete) sunt plasate periferic i concentric n jurul perechii centrale. Fiecare dublet periferic este format dintr-un microtubul complet numit "subfibra A" i un microtubul incomplet numit "subfibra B" (Teuan, V., 2000). Subfibra A este format din 13 protofilamente iar Subfibra B este format din 11 protofilamente. Cei doi microtubuli sunt ataai unul de altul. Subfibra A prezint doua brae n form de clete constituite dintr-o protein numit "Dineina"; brae sunt dispuse cu intermiten de-a lungul microtubulului la intervale egale de 240 - 24 nm. Diametrul microtubulilor din subfibra A i subfibra B este de 15- 18 nm; dubletul periferic are grosimea de circa 30 nm. Distana dintre dou dublete periferice este de circa 20 nm iar diametrul axonemei msoar 200 nm.

Fig. 11 Structura i ultrastructura cililor (dup Teuan, V., 2000):

A celula prismatic cu cili la polul apical; B polul apical cu cili; C structura cilului; D, E i F ultrastructura cilului seciune transversal; 1- membrana celular; 2 nucleul; 3 cili; 4 vezicule de condensare i transport; 5 axoneme; 6 corpusculi bazali;7 rdcina cilului; 8 brae externe de dyneina; 9 brae interne de dyneina; 10 puni proteice de nexina; 11 spie radiare (nexina); 12 buton terminal; 13 teaca intern; 14 pereche central de tubuli; 15 punte proteic ce leag perechea central de microtubuli

ntre dubletele periferice exist i nite puni alctuite dintr-o protein numit nexina, puni care se regsesc prezente i n dubletele periferice i teaca ce nconjoar perechea central de microtubuli. Perechea central de microtubuli este format din dou subunitai, fiecare cu un diametru de circa 20 nm i plasate la mic distana una de
17

alta. Fiecare microtubul din aceast pereche este complet, fiind format din 13 protofilamente. Punile de nexin sunt dispuse ca niste spie i se termin cu un buton globular. Dineina care intr n componenta braelor ce sunt ataate microtubulilor numii subfibra A, este o protein cu o intens activitate de descompunere a acidului adenozin trifosforic (ATP), deci este de fapt o enzim cu aciune ATP- azica. Corpusculii Bazali sunt elemente componente ale cililor cu o structur identic cu cea a centriolului, fiind formai din doi cilindri plasai perpendicular unul pe altul i au dimensiuni de 0,3-0,5 (300500 nm) lungime i de 0,10-0,15 (100-150 nm) diametru. Fiecare cilindru are pereii formai din 9 dublete sau triplete de microtubuli, fiecare dintre ei avnd un diametru de 15-20 nm i fiind orientai paralel cu axul lung al cilindrului. Perechea central de microtubuli lipsete, deci centrul cilindrului este gol. Corpusculul bazal se pare c ndeplinete funcia de coordonare a micarilor pe care le execut cilii (fig.12).

Fig. 12 Structura corpusculului bazal (dup Teuan, V., 2000):

A i B cei doi cilindri perpendiculari unul pe cellalt; C i D structura cilindrilor (de tipul 9+0); E micarea cililor, micare tip bici i F micarea tip surub a cililor

Rdcina cililor este format de asemeni din dublete sau triplete de microtubuli. Acetia se continu de la nivelul corpusculului bazal i ajung n citoplasma periferic apical a celulei ciliate. Rdcina ancoreaz cilul n citoplasm i conduce stimulii recepionai la nivelul tijei; are de asemeni i proprieti contractile. Stereocilii (cilii imobili) se afl la polul apical al celulelor epiteliale de la nivelul epididimului. Au structur similar cu cea a cililor vibratili, fr a prezenta perechea central de microtubuli n structura axonemei din tij (9+0).
18

Flagelii sunt prelungiri cu lungime mai mare (pn la 50-100); se afl la polul caudal al celulelor sexuale mascule, formnd coada spermatozoizilor. n structura lor intr o axonem plasat central, format de asemeni din 9 perechi de microtubuli (dublete) plasai periferic i o pereche plasat central (9+1). n jurul axonemei mitocondriile sunt dispuse sub forma unui triplu filament spiral. 2.1.6 Jonciunile intercelulare Jonciunile intercelulare se realizeaz ntre celulele vecine ca structuri stabile n care plasmalemele interacioneaz specific. Se disting trei categorii de jonciuni intercelulare: - jonciuni de adezivitate; - jonciuni impermiabile; - jonciuni de comunicare. Pe lng acestea se evideniaz i complexele joncionale speciale (sinapsele i discurile intercalare). Jonciunile de adezivitate (desmozomii) sunt legturi realizate ntre celulele care alctuiesc esuturile epiteliale. Se cunosc trei tipuri de desmozomi: desmozomi n pat (macula adherens); desmozomi n band (zonula adherens) i desmozomi n pat redui (semidesmozomi). Desmozomuln pat reprezint o form de legtur puternic ce se realizeaz ntre celulele din epiteliile de acoperire. Nu are rol n schimburile intercelulare. n structura sa intr cele dou plasmaleme ale celulelor vecine (care se dispun aproximativ paralel pe o distan de 25-30 nm) i un material dens la fluxul de electroni (de natur proteic), cu aspect filamentos, aflat n spaiul intercelular. De asemeni aici se mai afl: un strat bogat de glucide i calciu; dou discuri intracelulare de factur proteic cu dimensiuni de 190/400 nm, care dup forma lor dau i denumirea desmozomului (macula=pat, spot); elemente de legtur numite Linkeri; citoscheletul membranar (compus din microfilamente de actin sau de cheratin). Desmozomii n pat se gsesc n celulele din epiteliul mucoasei cervix-ului uterin, (celule supuse unor puternice friciuni mecanice) i n general n celulele epiteliilor de acoperire i protecie. Desmozomii n band se gsesc la polul apical al celulelor epiteliale prismatice i la nivelul segmentelor transversale ale discurilor intercalare din esutul cardiac muscular. Au structur asemntoare cu cea a desmozomilor n pat, dar densificrile de pe faa intern a plasmalemelor au form de band (zonula=band, panglic). Spaiul intercelular (dintre cele dou plasmaleme care se nvecineaz) este mai redus (15-25 nm) i este umplut cu un material mai puin dens dar de aceeai factur biochimic (fig. 13).

19

Semidesmozomii (hemidesmozomii) sunt variante ale desmozomilor n pat (jumti ale acestora), ntlnite ca legturi de adezivitate ntre celulele epiteliale pavimentoase i membranele bazale pe care sunt plasate aceste celule. n structur se evideniaz doar o densificare proteic intracelular (de form circular sau oval) plasat n celula care se leag de membrana bazal. De asemeni, exist linkerii respectivi, tonofilamentele si materialul proteic dens dispus ntre polul bazal al celulei n cauz si membrana bazal subiacent (fig.13). Jonctiunile impermeabile (strnse) au o dispoziie n band, care le d i denumirea de zonule. Se cunoate zonula ocludens, care este o structur de tip pentalaminat. n acest caz membranele celor dou celule vin n contact ferm i astup complet spaiul intercelular, mpiedicnd trecerea moleculelor printre celulele angajate n realizarea acestor dispozitive joncionale (fig.13). La formarea acestor jonciuni particip i proteine integrale (existente n structura membranelor celulare) care traverseaz cele dou membrane, se dispun n iruri gemene i paralele i structureaz dispozitive de nchidere de tip fermoar care se gsesc pe faa extern a membranelor celulare (Teuan, V., 2000). Pe faa intern a membranelor, proteinele integrale sunt ancorate cu ajutorul unor microfilamente de citoscheletul citoplasmatic. irurile gemene de proteine au un traiect neregulat (prezint i segmente de legtur ntre iruri) conferind aspectul de reea ansamblului dispozitivului de jonctiune (fig.14). Jonciunile de tip ocludens se gsesc la polul apical al enterocitului, unde glucoza trece din chimul
20

A celula prismatic cu macule adherens (MA) i zonule adherens (ZA); B macula adherens structurat (a i b sunt cele dou plasmaleme; 1 spaiul intercelular; 2 densificrile intracelulare; 3 materialul intercelular dens la fluxul de electroni; 4 linkeri; 5 tonofilamente); C celule epiteliale pavimentoase ce se leag de o membran bazal (MB) prin semidesmozomi (SD); E zonula adherens structura; F semidesmozomi structura (MC membrana celular; 2 densificare intracelular `n form de spot; 3 material intercelular; 4 linkeri; 5 tonofilamente)

Fig. 13 Jonciunile de adezivitate (dup Teuan,V., 2000):

intestinal n celul i apoi n sng, dar nu mai poate trece n sens invers. De asemeni, jonciunea de tip ocludens reprezint i bariera hematoencefalic realizat ntre celulele endoteliale ale vaselor sanguine din encefal i celule nervoase cu care vin n contact - ce protejeaz esutul nervos encefalic de unele substane toxice care circul odat cu sngele i concomitent permite trecerea glucozei din snge n celulele nervoase. Aceste jonciuni strnse de tip ocludens, se caracterizeaz prin: adezivitate intercelular puternic i flexibil; barier intercelular sigur (de natur fizic i biochimic); confer polaritate celulelor angajate; apar timpuriu sub form de macule i se transform apoi n zonule. n fibrocite se ntlnete o variant a acestui tip de jonciune i se numete jonciune focal (Teuan, V., 2000).

A vzut n jurul polului apical al unor celule epiteliale; B dispunerea spaial a irurilor de proteine integrale (joncionale); C structura pentalaminar rezultat n urma interacionrii celor dou membrane (a i b) angajate n cadrul Z.O. A i B (1 molecule proteice integrale; 2 spaiul intercelular); C (1 strat proteic intern; 2 stratul fosfolipidic al membranei a; 3 strat proteic comun; 4 stratul fosfolipidic al membranei b; 5 stratul proteic intern al Z.O.)
21

Fig. 14 Complexul joncional de tip zonula ocludem (Z.O.) (dup Teuan, V., 2000):

Jonciunile de comunicare sunt de dou tipuri: jonciunile permeabile i sinapsele. Jonciunile permeabile (GAP) permit schimbul de substane (molecule mici) ntre celule i se realizeaz prin intermediul unor structuri proteice numiteconexoni, care strbat plasmalema i proemin de o parte i de alta a bistratului lipidic. Aceste jonciuni permit schimburi rapide ntre celulele angajate n jonciune, spaiul intercelular fiind doar de 2-4 nm. Cnd se formeaz aceste jonciuni (GAP), conexonii se dispun cap la cap, asigurnd formarea unor tunele proteice de comunicare ntre citoplasmele celor dou celule angajate n comunicare. Conexonii sunt formai din proteine integrale cu form de bastona, diametrul de 2,5 nm i lungimea de 7,5 nm (aproximativ egal cu grosimea plasmalemei pe care o strbat). Un conexon este alctuit din 6 bastonae proteice dispuse hexagonal, lasnd n interior un spaiu (tunel proteic sau por proteic hidrofil) cu un diametru mediu de circa 1,0 nm. Acest diametru poate varia ntre 0,4 i 2,0 nm, n funcie de o serie de factori (dintre care, ionii de calciu se consider a fi un fel de cheie de reglare a nchiderii i deschiderii acestor tunele i a traficului de substane care se realizeaz prin ele) (fig. 15). Diametrul total al conexonilor este de 7-8 nm. Prin conexoni pot trece moleculele de glucide simple, aminoacizi, hormoni, vitamine i bineneles ionii minerali, dar nu pot trece moleculele mari, precum proteinele sau acizii nucleici ( ADN, ARN). Aceste jonciuni de tip GAP permit trecerea biocurentului electric (unda de depolarizare) de la o celul la alta, la celulele contractile care realizeaz sinapsele. Sinapsele sunt legturi speciale de comunicare ntre celulele nervoase, cu o structur complex.

Fig. 15 Diagrama i structura jonc]iunilor de tip GAP (dup Teuan, V., 2000):
Adispunerea conexonilor la suprafa]a membranelor celulare (ab bistratul fosfolipidic al celor dou membrane; cspaiul intercelular; 1conexoni secionai longitudinal; 2conexoni ce proemin la suprafaa membranelor; 3canal proteic hidrofil n interiorul conexonilor); Bstructura i dimensiunile unui conexon; TPtunel proteic hidrofil); 16sunt proteine integrale care compun conexonul
22

2.1.7 Transportul prin membran Celula poate prelua din exterior gaze, ap i substane dizolvate sub form de molecule sau ioni cu ajutorul unor sisteme de transport de la nivelul membranelor. Acest transport se poate realiza n diferite forme: - transport pasiv prin permeabilitate i difuzie (simpl i facilitat) - transport activ prin preluarea i eliminarea activ de substane Transportul pasiv prin membrana plasmatic se realizeaz fr consum de energie din partea celulei. Cu toate c membrana celular este hidrofob, constituind o barier pentru substanele hidrosolubile, unele molecule pot ptrunde n celul prin difuzie simpl sau prin modificarea hidrofobiei membranei plasmatice prin difuzie facilitat. Permeabilitatea reprezint difuzia moleculelor mici i/sau a celor lipofile. Premiza procesului de permeaie este semipermeabilitatea membranei celulare- direct legat de existena porilor membranei i responsabil pentru toate procesele osmotice. Fora motrice a permeabilitii este dat de diferena de concentraie dintre cele dou pri ale membranei plasmatice. Difuzia rezult din intreptrunderea reciproc a dou substane lichide sau gazoase datorit energiei cinetice a particulelor din care sunt constituite. Apare datorit diferenei de concentraie care determin stabilirea unui echilibru ntre concentraii. Viteza depinde de diferena de concentraie, temperatur i natura particulelor constituente. Difuzia simpl este condiionat de o serie de factori, precum: mrimea moleculei, polaritatea, sarcina electric, gradul de divizare, gradientul de concentraie. Difuzia facilitat este o modalitate de transport pasiv transmembranar a substanelor, fr consum de energie, n care intervin proteinele purttoare (proteine transportatoare, permeaze sau translocaze). Proteinele transportatoare sunt proteine membranare plasmatice care acioneaz ca transportatori pentru fixarea unui ligand determinat (de ex. o molecul extracelular) pe care-l transfer din mediul extracelular ctre mediul intracelular. n acest caz nu are loc modificarea structurii substanei transportate. Proteinele transportatoare sunt reprezentate de: -permeaze membranare ; -unipurttori, care vehiculeaz o soluie unic dintr-o parte a membranei in cealalt; - sistemele de co-transport. Transportatorul anionilor hematiilor umane este denumit banda 3 i funcioneaz ca un antipurttor pentru a schimba Cl- impotriva HCO-2. n timpul transportului membranar, proteinele transportatoare i modific conformaia structural. Este un proces reversibil pentru c sunt expuse alternativ locurile de legtur de pe o fa a membranei pe cealalt.
23

Transportul activ prin membrana plasmatic are loc mpotriva gradientului de concentraie, cu consum de energie (ATP) de origine celular. Depinde de tipul de molecule proteice transportatoare (transportatori, translocaze sau permeaze). Transportul activ se realizeaz mai rapid n comparaie cu difuzia liber. Pompa de ioni Na+ K+ reprezint mecanismul de transport activ prin membrana plasmatic a ionilor de Na+ i K+. n mediul extracelular concentraia de Na+ este mai mare dect cea de K+, iar n mediul intracelular este invers (fig. 16).

re`nc\lzire la 37C

Fig. 16 Permeabilitatea membranei hematiei fa de ionii de Na+ i K+ n funcie de temperatur (dup M. Maillet, 1970) La temperatura de 37C hematiile conin o cantitate mare de ioni de K+ n mediul intracelular i o cantitate mare de ioni de Na+ n mediul extracelular. n hematiile conservate la 0C, ionii de K+ trec din mediul intracelular n mediul extracelular iar ionii de Na+ trec din mediul extracelular n mediul intracelular, pn cnd concentraia ionilor de Na+ i K+ intracelular este egal cu concentraia ionilor de Na+ i K+ extracelular. Prin readucerea hematiilor la temperatura de 37C ionii de K+ trec din mediul extracelular n mediul intracelular iar ionii de Na+ trec din mediul intracelular n mediul extracelular. Procesul stagneaz prin inhibiia fenomenului de glicoliz care asigur energia celulei (Margareta Confederat, 2002). Transportul ionilor de K+ i de Na+ prin membrana plasmatic se efectueaz mpotriva gradientului de concentraie cu consum de energie provenit din degradarea glucozei. Este un transport activ i termosensibil, fiind condiionat de prezena factorului temperatur (scderea temperaturii sub 0C inhib procesul). Transferul activ al ionilor de Na+ i de K+ se desfoar permanent n toate celulele. Pompa ionic Na+-K+ este reprezentat de un oligomer tetrameric (-2--2) proteic transmembranar denumit
24

Na+-K+-adenozin-trifosfataza (Na+-K+-ATP-aza) i are o greutate molecular de 270 kdal (fig. 17). Subunitatea (mare) are o greutate de 95 kd, conine un loc de fixare i de hidroliz a ATP-ului pe faa intracelular i un loc de fixare pe faa extern a substanelor steroide cardiotonice. Subunitatea (mic) are o greutate de 40 kd i este legat la grupele hidrocarbonate. Aceste molecule extrag 3 ioni de Na+ din celul i determin ptrunderea a 2 ioni de K+.
Loc de fixare a celulelor cardiotonice

mediul extracelular

Locul de fixare a substantelor cardiotonice membrana plasmatic

Loc de fixare si hidroliza a ATP

Fig. 17 Pompa ionic Na+-K+ (Na+-K+-ATP-aza) (dup Margareta Confederat, 2002) Funcionarea pompei ionice Na+-K+ are loc n urmtoarele etape succesive: 1. Fosforilarea enzimei prin hidroliza ATP-ului n prezena ionilor de Mg+2 i a 3 ioni de Na+ , care se fixeaz la un receptor localizat pe faa intracelular a moleculei de Na+-K+-ATP-az; 2. Modificarea configuraiei enzimei fosforilate i transportul celor cei 3 ioni de Na+pe faa extern; 3. Defosforilarea enzimei i eliberarea celor 3 ioni de Na+ la exteriorul celulei i abordarea a 2 ioni K+; 4. Reluarea formei iniiale a moleculei de Na+-K+-ATP-az prin eliberarea ionilor K+n interiorul celulei. Funcionarea pompei ionice Na+-K+ este inhibat prin fixarea unor substane (de ex. digitalina) la locul receptorului steroizilor cardiotonici care determin creterea concentraiei ionilor de Na+ intracelular. Mrirea concentraiei ionilor de Na+ intracelular determin creterea concentraiei ionilor de Ca+2 intracelular ce este implicat n intensificarea contraciei muchiului cardiac.
25

Pompa ionic Na+-K+ prezint o importan deosebit, deoarece asigur homeostazia citosolului prin raportarea la plasma sanguin, meninerea compoziiei ionice celulare prin raportarea la snge, contribuie la meninerea ionilor osmotic activi n mediul intracelular, creaz un potenial electric denumit potenial electric di-membranar ntre suprafaa extern i intern a membranei, permite funcionarea canalelor voltaj-dependente. Pompa de ioni Ca+2-Mg+2 are acelai principiu de funcionare ca i pompa de ioni Na+-K+. Acest sistem asigur meninerea unei concentraii sczute de ioni de Ca+2 n mediul intracelular (citosolul citoplasmei) i a unei concentraii ridicate de ioni de Ca+2 n mediul extracelular (la nivelul glicocalixului). Pompa este n acest caz o protein-enzim cu aciune adenozin-trifosfatazic (Ca+2-ATP-aza), care transport n mod activ (impotriva gradientului de concentraie) ionii de Ca+2 la exteriorul celulei. Aceast pomp ionic este caracteristic plasmalemei celulei musculare sau sarcolemei. Din punct de vedere chimic, este un polipeptid alctuit din 1 000 resturi de aminoacizi. Aceast pomp ionic este capabil s transporte activ cte 2 ioni de Ca+2 la fiecare molecul de ATP hidrolizat i poate hidroliza 10 molecule de ATP ntr-o secund. Transportul activ al glucozei este dependent de prezena ATPului, ionilor de Na+ i a unei permeaze specifice. Transportul glucidelor i amino-acizilor are loc pe baza energiei furnizate prin hidrolizarea ATP-ului, dar fr cuplarea direct cu acesta. Acest proces are loc cu un aflux de ioni ce succede un gradient electrochimic: ionii de Na+ i glucoza se leag la o protein specific de transport i ptrund mpreun n celul. Aceast micare simultan a 2 substane reprezint un co-transport i se desfoar cu energia furnizat de ATP (fig.18 ). Un exemplu clasic de transport activ este procesul de resorbie a glucozei de la nivelul tubului contort al rinichiului.

Fig. 18 Transportul cuplat al moleculelor de glucoz i aminoacizi mpreun cu ionii de Na+ prin membrana celular (dup Teuan, V., 2000) (A transportul glucozei; B transportul aminoacizilor)
26

Transportul n mas O modalitate deosebit de transport prin celule i prin membranele celulare, este transportul n mas, realizat prin intermediul unor vezicule formate din i pe seama membranei celulare i care se deplaseaz n direcii diferite n masa de citoplasm. Se deosebesc trei procese specifice acestui tip de transport celular, n funcie de direcia n care se deplaseaz aceste vezicule, i anume: exocitoza, endocitoza, transcitoza. Endocitoza este procesul prin care celulele preiau din mediul extern molecule mari (cu greutate molecular mai mare dect 10 Kdal.), prin intermediul unor vezicule formate din membran- ca urmare a emiterii unor pseudopode, vluri sau membrane ondulate, sau prin invaginri. Endocitoza este important n desfurarea unor procese fiziologice celulare precum: nutriia, purificarea mediului extracelular sau procesul de aprare a organismului. Se disting dou tipuri de endocitoz i anume: endocitoza particulelor solide (fr fluid) i endocitoza particulelor cu fluid. Endocitoza particulelor fr fluid (Fagocitoza) este procesul prin care celulele preiau din mediul extracelular diverse particule solide de natur foarte diferit (agregate bacteriene sau virale, particule interne, macromolecule alterate, resturi celulare, celule i virusuri n ntregime). Preluarea din exterior a acestor particule, are loc numai la nivelul unor regiuni purttoare de receptori specifici. Celulele care realizeaz procesul de fagocitoz se numesc fagocite. n funcie de mrimea particulelor fagocitate, fagocitele pot fi microfage i macrofage. Microfagele sunt leucocitele sanguine de tipul neutrofilului, bazofilului i eozinofilului (cele mai active fagocite, care reprezint 60-70% din totalul leucocitelor). Macrofagele la rndul lor pot fi fixe i mobile. Cele fixe sunt reprezentate de histiocit (din esuturile conjunctive), celulele Kupffer din ficat, celulele sinusoidale din splin, etc. Macrofagele mobile sunt reprezentate, n special, de monocitele i limfocitele din esutul sanguin. Pentru nglobarea particulelor strine (din mediul extracelular), fagocitele dispun la suprafaa membranei lor de un sistem de receptori specifici cu ajutorul crora ele recunosc ceea ce este propriu organismului (self) de ceea ce este non-self, adic strin organismului (Teuan, V, 2000). Non-self-ul este definit cu termenul generic de antigeni. Mai mult dect att, fagocitele (prin intermediul receptorilor) recunosc ceea ce esteself-sntos de ceea ce este self-alterat (celule degenerate, mbtrnite, maligne, resturi de macromolecule alterate, etc.). Uneori, ns, celulele sistemului fagocitar pierd aceast abilitate de difereniere a self-ului de non-self i atunci acioneaz mpotriva celulelor propriului organism. n astfel de situaii iau natere reaciile autoimune care pot genera entiti neoplasmice (tumori) ce au cel mai adesea un final letal. (Exemplu-leucemia este situaia cnd
27

fagocitele i distrug propriile hematii). Deoarece antigenii sunt de natur foarte diferit, recunoaterea lor (de ctre receptorii de membran) este nlesnit de prezena n mediul extracelular, a unor proteine plasmatice numite opsonime sau anticorpi care sunt recunoscute de ctre receptorii de membran pe de o parte i respectiv se combin cu antigenii, formnd complexele antigen-opsonim, pe de alt parte. Opsonimele sunt deci anticorpi, dintre care cel mai des nlnii sunt imunoglobulinele G (Ig.G.) i mai ales fraciunea cristalizabil a imunoglobulinelor G. Receptorul de membran pentru imunoglobulinele G (Ig.G.) este de tipul Fc. Mai sunt cunoscui i ali receptori precum:-receptorul C3 (pentru a recunoate antigenii opsonizai cu cel de-al treilea component al complementului);- receptori nespecifici (pentru recunoaterea i fixarea self-ului alterat, etc.). Opsonizarea, care nseamn de fapt o modificare a suprafeei antigenului (o nvelire), este o operaie care pregtete antigenul n vederea fagocitrii lui (cuvntul opsonizare deriv din grecescul opsoneimcare s-ar traduce prin a pregti pentru mncare). n cele ce urmeaz vom descrie fagocitoza la neutrofil cci este celula cea mai activ din acest punct de vedere, fagocitoz care se produce n cinci etape dup cum urmeaz: a) chemotaxia i motilitatea; b) opsonizarea; c) nglobarea sau ingestia; d) degranularea (neutrofilului) i e) digestia intracelular (Teuan, V., 2000) (fig. 19). a) Ghemotaxia i motilitatea reprezint capacitatea fagocitei (neutrofilului) de a repera de la distan particula int i de a se deplasa la locul ei de staionare. Neutrofilul i alte fagocite din esutul sanguin au proprietatea de a trece prin porii capilarelor sanguine (prin diapedez) i de a migra prin esuturile conjunctive subdiacente, datorit unor semnale chemotactice (lipide i proteine bacteriene, proteine serice precum Kallicreina, sau o serie de factori eliberai de fagocitele n cauz. b) Opsonizarea este procesul de acoperire (nvelire) a particulei ce va fi fagocitat, de ctre anticorpi precum imunoglobulina G1 (I.g.G1) i imunoglobulina G5 (I.g.G5) sau de ctre componente ale complementului C3 i C5 ( n special C15a). Ca urmare a opsonizrii, particula respectiv va fi recunoscut de ctre receptorii din membrana neutrofilului i acetia vor fi astfel activai. Activarea receptorilor de membran determin emiterea de pseudopode la suprafaa celulei. c) nglobarea sau ingestia are loc atunci cnd pseudopodele emise de membrana celulei nconjur strns particula solid ce urmeaz a fi fagocitat, dup care se unesc, se contopesc i formeaz vezicula ce se va deplasa spre interiorul celulei. Aceast vezicul se numete fagozom i poart n ea particula ce va fi ulterior digerat. Digerarea este posibil doar dup ce fagozomul ntlnete un lizozom prim, ce conine un echipament enzimatic complex .
28

d) Degranularea neutrofilului este procesul n care lizozomii primari se unesc cu fagozomii i se formeaz fagolizozomii. e) Digestia intracelular este etapa n care particula nglobat este supus aciunii hidrolazelor acide coninute n lizozomi, hidrolaze care pot descompune practic toate substanele coninute n particula fagocitat. Aceast digestie se produce i datorit aciunii unei oxidaze, care catalizeaz reacii din care rezult n final radicalul liber OH i O2, acesta din urm fiind foarte toxic pentru microbi i deci va cauza moartea acestora. Ca urmare a producerii reaciilor catalizate de oxidaz n timpul fagocitozei, se nregistreaz o cretere brusc a consumului de oxigen de ctre fagocite.
29

a chemotaxia; b opsonizarea; c, d,e,f ingestia; g,h degranularea neutrofilului; i,j,k digestia intracelular\; k,l formarea corpilor reziduali [i exocitarea acestora; 1 membrana celular\; 2 nucleul multilobat; 3 Aparatul Golgi; 5 particulele ]int\; 5 particula ]int\ opsonizat\; 4 lizozomi; 6 pseudopode; 7 vacuole de transport formate pe seama pseudopodelor; 8 fagozom; 9 mitocondrii; 10 fagolizozom; 11 corp rezidual; 12 exocitoza materialelor inutilizabile `n celul\

Fig. 19 Procesul de fagocitoza la neutrofil (schema) (dup Teuan, V., 2000):

Endocitoza particulelor cu fluid (pinocitoza) Pinocitoza (pinos=a bea) este procesul de transport celular n mas a unei cantiti variabile de fluid tisular (nsoit i de particule solide), cu ajutorul unor vezicule formate din membrana celular. Pinocitoza o modalitate prin care celulele preiau din mediul extern o varietate de substane necesare metabolismului celular. n funcie de mecanismele care intervin n procesul de nglobare, se deosebesc dou forme de pinocitoz: - Pinocitoza independent de receptori - Pinocitoza mediat de receptori. Pinocitoza independent de receptori este forma pinocitozei, prin care particulele lichide sunt preluate din mediul extracelular (prin intermediul veziculelor) fr ca, n prealabil, acestea s fie fixate pe receptorii din membran. Aceast variant este frecvent ntlnit la celulele organismului animal, celulele putnd utiliza n acest scop suprafee mai mari din plasmalema lor (care nu trebuie s fie specializate pentru transport, n sensul c nu prezint receptori de membran). Acest tip de pinocitoz are urmtoarele etape: a) contactul particulelor fluide din mediul extracelular cu membrana celular; b) invaginarea membranei celulare; c) formarea pinozomilor; d) apariia pinolizozomilor i digestia intracelular. a) Contactul particulelor fluide din mediul extracelular cu membrana celular determin activarea unor situsuri anionice de suprafa (n membrana celular) care, la rndul lor vor determina nite procese de flexibilizare accentuat a membranei. b) Prin flexibilizarea membranei celulare se realizeaz invaginarea acesteia cu formarea unor cripte adnci sau chiar a unor canale intracelulare, n care sunt absorbite particulele fluide ce vor fi pinocitate. c) Din aceste cripte sau canale se vor forma vezicule (care au n interior particula nglobat), care se numesc pinozomi. Pinozomii vor fi antrenai spre interiorul celulei de ctre curentul intracitoplasmatic. d) n citoplasm pinozomii ntlnesc lizozomii ncrcai cu hidrolaze acide, se unesc cu acetia i formeaz pinolizozomii. Pinolizozomii conin "pictura" pinocitat i hidrolazele acide care vor realiza descompunerea (digestia) intracelular (fig. 20). n funcie de mrimea particulelor pinocitate se deosebesc macropinocitoza i micropinocitoza. Macropinocitoza const n nglobarea unor picturi mai mari n celule, iar micropinocitoza este calea de transport i de nglobare a moleculelor mici n interiorul unor vezicule mici.
30

Fig. 20 Pinocitoza independent de receptori (schem dup Teuan, V.,2000)

a, b contactul membranei celulare cu particulele de fluid intercelular; c,d invaginarea membranei i formarea pinozomului; e,f formarea pinolizozomului; g,h,i digestia intracelular; 1 membran; 2 nucleu; 3 mitocondrii; 4 RE; 5 aparat Golgi; 6 lizozomi primari; 7 pictura de lichid intercelular; 7 pinozom n formare i complet format; 8 pinolizozom; 9 exocitoza corpilor reziduali; 10 incluziune citoplasmatic

Pinocitoza mediat de receptori (pinocitoza adsorbtiv sau selectiv i concentrativ) const n nglobarea unor molecule lichide variate, prin invaginarea unor zone specializate ale membranei celulare. n aceste zone specializate membrana celular conine receptori speciali (liganzi), care determin formarea unor vezicule numite caveole acoperite (pe faa lor intern au un nveli proteic numit clatrin). Dup formarea lor, caveolele acoperite se ndreapt spre interiorul celulei, pierd inveliul de clatrin i se numesc receptozomi. Receptozomii, ntlnesc lizozomii primari i sunt degradai (digestie intracelular) de ctre hidrolazele acide coninute n lizozomi.
31

n unele situaii receptozomii traverseaz celula fr a ntlni lizozomii, caz n care sunt exocitai. Acest procedeu este folosit de ctre celulele endoteliale pentru a capta din mediul extracelular (snge) moleculele de lipide de mic densitate, precum moleculele de colesterol. Exocitoza i transcitoza Exocitoza este fenomenul prin care unele substane (proteinele, glicoproteinele sau lipoproteinele) produse n vederea eliminrii la exteriorul celulei, sunt nglobate n nite vezicule speciale (granule de secreie). Granulele de secreie se mic dinspre aparatul Golgi (unde aceste substane sunt maturate i mpachetate) spre plasmalema polului apical al celulei, micare care are loc fie spontan, fie la stimularea celulei de ctre un factor secretagog (hormoni, factori de eliberare, neurotransmitori). Transcitoza este fenomenul prin care veziculele rezultate din endocitoz i pinocitoz strbat citoplasma celulelor respective, fr a interaciona cu lizozomii primari, fiind exocitate la captul cellalt al celulei. Transcitoza poate fi distributiv sau conectiv. Transcitoza distributiv const n tranzitarea celulei prin intermediul unor mai multe vezicule care se dispun sub form de iraguri, iar aceste iraguri se ntind dintr-o parte n alta a celulei. Transcitoza conectiv const n faptul c veziculele ce s-au format se vor uni ntre ele i vor forma nite canale care vor tranzita citoplasma celulei respective. 2.2. Citoplasma celular Citoplasma este zona celulei cuprins ntre plasmalem i nucleolem (nveliul nucleului sau membrana nuclear); este constituit dintr-o matrice citoplasmatic (hialoplasm) n care sunt nglobate organitele celulare precum i dintr-o serie de incluziuni citoplasmatice (substane nutritive de rezerv, pigmeni, etc.). 2.2.1. Matricea citoplasmatic La microscopul optic (MO) matricea citoplasmatic apare ca o mas astructurat cu grade diferite de acidofilie sau bazofilie. Matricea citoplasmatic determin i menine forma celulelor, fiind o reea de microtrabecule care conine un numr mare de ansambluri moleculare proteice (structurale i enzime), care se comport ca nite structuri solide. Pe lng faza solid a matricei citoplasmatice (reeaua de microtrabecule) exist i o faz lichid a acesteia (citosol) care conine: ap, electrolii, molecule organice mici (proteine solubile, glucoz, aminoacizi), gaze dizolvate, etc. Masa principal a citoplasmei este constituit de ctre organele citoplasmatice care sunt de diferite dimensiuni i ndeplinesc roluri foarte diferite n celule.
32

2.2.2. Organitele celulare Organitele citoplasmatice au dimensiuni foarte reduse (microscopice), dar diferite unele fa de altele. Unele dintre ele care au dimensiuni de ordinul nanometrilor sau al zecilor i sutelor de nanometri- pot fi vzute cu microscopul optic (Aparatul Golgi, REN, RER, mitocondrii, centrul celular); altele,- cu dimensiuni de ordinul zecilor sau sutelor de Angstromi)- precum ribozomii, lizozomii, peroxizomii sau microtubulii se pot observa numai la microscopul electronic. Organitele citoplasmatice pot fi clasificate dup mai multe criterii: prezena sau absena lor n toate celulele animale; prezena sau absena unor membrane la suprafaa lor; funcia ndeplinit. n funcie de existena membranelor la suprafaa lor, se disting organite cu membran (Aparatul Golgi, Reticulul endoplasmatic, mitocondriile, lizozomii, peroxizomii) i organite fr membran (ribozomi, microtubuli, microfilamente de actin i miozin, centrul celular, etc.) n funcie de rolul ndeplinit, se deosebesc organite de micare (microfilamentele de actin i miozin, microtubulii, centriolii), organite generatoare de energie (mitocondriile), organite de sintez i secreie (ribozomii, Aparatul Golgi, Reticulul endoplasmatic neted i rugos), organite de digestie i dezintoxicare celular (lizozomii i peroxizomii). Exist i organite cu funcii speciale, precum miofilamentele n celulele musculare, tonofilamentele n celulele epiteliale, neurofilamentele n celulele nervoase. 2.2.2.1. Organitele de micare intracelular Organitele citoplasmatice de micare determin realizarea tuturor micrilor intracitoplasmatice i a celor celulare. n aceast categorie se disting: microfilamentele de actin; microfilamentele de miozin, microtubulii, centriolii, corpusculii bazali, fusul de diviziune. Aceste organite au dimensiuni foarte variate (de la cteva zeci sau sute de Angstromi la cteva zeci de microni) i sunt lipsite de membrane la suprafaa lor. 2.2.2.1.1. Microfilamentele de actin i de miozin Microfilamentele de miozin i de actin sunt organite citoplasmatice aflate n toate celulele organismului animal, cu precdere n cele de tip muscular, unde ndeplinesc funcii complexe n realizarea micrilor intracitoplasmatice. Microfilamentele de actin apar n urma polimerizrii unor molecule proteice mai mici cu forma globuloas numite actine. Aceste microfilamente au un diametru de cca 6 nm, se gsesc att n celulele nemusculare ("microfilamente"), ct i n celulele musculare
33

("filamente subiri"). Microfilamentele de actin rezult din polimerizarea actinelor globulare, care se leag unele de altele formnd un irag sau un lan de aciune. Dou astfel de lanuri de actine se vor nfura unul n jurul celuilalt (un dublu helix rsucit spre dreapta), pentru a forma un microfilament de actin. n celulele nemusculare, microfilamentele de actin sunt asociate cu cele de miozin, cu care vor interaciona. Microfilamentele de actin (AF) se afl n echilibru dinamic cu monomerii de actin (AG) din citosol, iar acest echilibru ntre procesul de polimerizare i cel de depolimerizare a actinelor globulare, joac un rol esenial n realizarea micrilor intracelulare bazate pe mecanismul de interaciune actin miozin. n celulele musculare, actina filamentoas (AF) este asociat cu o serie de proteine reglatoare mpreun cu care formeaz "filamentele subiri". n structura acestora intr dou lanuri de actine globulare nfurate unul n jurul celuilalt, apoi la exteriorul acestei formaiuni se dispun molecule alungite de tropomiozin care sunt i ele nfurate helicoidal n jurul filamentului de actin (Teuan, V., 2000). 2.2.2.1.2 Microfilamentele de miozin au diametrul de 10 20 nm i rezult din polimerizarea moleculelor de miozin. Moleculele de miozin au un aspect de "bastona lung i subire" cu unul din capete globulos (fig. 21). Captul globulos al moleculei a fost denumit "cap" iar partea alungit i mai subire a acesteia a fost numit "coad". Lungimea moleculei de miozin este de 1600 (160 nm), din care "capul" msoar 200 250 (20 25 nm), iar "coada" 1350 (135 nm). n ceea ce privete grosimea moleculei de miozin, aceasta este la nivelul cozii de 20 (2 nm) iar la nivelul capului de 40 50 (4 5 nm). Regiunea globuloas sau capul moleculei de miozin este alctuit din doi lobi distinci . Molecula de miozin este alctuit din 6 lanuri polipeptidice diferite ca greutate molecular. Dou dintre acestea sunt considerate ca fiind lanuri polipeptidice grele pentru c au fiecare o greutate molecular de 200 Kdal., iar celelalte 4 (dou perechi) sunt considerate ca fiind lanuri polipeptidice uoare pentru c au o greutate molecular de 15 20 Kdal. fiecare. Deci molecula de miozin are o greutate molecular de 470 Kdal. (2x200+2x15+2x20) (Teuan, V., 2000). Sub aciunea tripsinei molecula de miozin este descompus n dou fragmente numite: meromiozina uoar i meromiozina grea Meromiozina uoar (LMM) apare ca un bastona lung de 80 nm i gros de 2 nm, corespunznd unei poriuni a cozii moleculei de miozin. Greutatea molecular a acestui fragment (LMM) este de circa 170 Kdal .
34

Fig. 21 O grupare de molecule de miozin (dup Teuan, V., 2000) Meromiozina grea (HMM) are o lungime total de 80 nm, i se compune la rndul ei din dou fragmente: subfragmentul 1 (S1) i subfragmentul 2 (S2). Subfragmentul 1(S1) este o poriune globuloas, cu o lungime de 20 nm i o greutate molecular de 240 Kdal. Are dou proprieti fundamentale (care stau la baza mecanismului de contracie muscular): activitate adenozintrifosfatazic; - interacioneaz cu actina. Subfragmentul 2 (S2) este poriunea liniar a meromiozinei grele, cu o lungime de 60 nm i o greutate molecular de 60 Kdal; nu are cele dou proprieti caracteristice subfragmentului 1(S1). Aciunea ATP-azica a moleculei de miozin (a subfragmentului S1) este stimulat i accelerata de cca 300 de ori n prezena moleculei de actin., formnd nite puni caracteristice. n celulele musculare, polimerizeaz circa 200-500 molecule de miozin pentru a forma un filament miozinic gros (cu un diametru de 10- nm). 2.2.2.1.3. Funciile microfilamentelor de actin i de miozin i structura miofibrilelor striate; mecanismul de contracie muscular n muchiul scheletic Microfilamentelor de actin de miozin au funcii complexe i variate. Filamentele particip la realizarea unor micri intracitoplasmatice, ca: deplasarea organitelor celulare, micrile microvililor, micrile veziculelor formate n timpul fagocitozei i pinocitozei, micrile cromozomilor n timpul mitozei i a meiozei, micarea granulelor pigmentare n citosol. Filamentele de actin i de miozin particip i la producerea unor micri celulare mai ample, precum micarea ameboidal, motilitatea fibroblastelor sau emiterea de pseudopode, valuri i membrane ondulate. Cea mai bun form de organizare a moleculelor de actin i de miozin se gsete n celulele musculare de tip striat (rabdocit i celula muscular cardiac), unde aceste molecule polimerizeaz, formnd miofilamentele de actin i miofilamentele de miozin, care la rndul lor formeaz miofibrilele.
35

Miofilamentele de actin au lungimi de circa 2,0 i grosimi de 60 65 i pot conine circa 600 molecule de actin globular, precum i proteinele calmoduline asociate. Miofilamentele de miozin au lungimi de 1,5 i grosimi de 10 20 nm, putnd conine 200 500 molecule de miozin. Prin dispunerea lor orientat, aceste miofilamente formeaz miofibrilele care sunt organite specifice celulelor musculare . Miofibrilele au diametre de 1 2 , sunt organizate n pachete dispuse longitudinal n celule numite colonetele lui Leydig. n seciune transversal apar dispuse n mod grupat, formnd cmpurile hexagonale Cohnheim (fig.22).

a organizarea general a unui muchi scheletic; b rabdocit; b rabdocit secionat cu punere n eviden a miofibrilelor striate (rabdofibrile); c organizarea i dimensiunile unei rabdofibrile; d structura i dimensiunile sarcomerului; d structura microfilamentelor de actin; d - structura microfilamentelor de miozin. 1 sarcolema; 2 nuclei rabdocitului; 3 rabdofibrile; H zona Hensen; I banda (disc) izotrop (Clar); A banda anizotrop (ntunecat); M membrana de Mijloc (Mittellinie); Z membrana izotropic (Amici); T tendon muscular.
36

Fig. 22 Schema de organizare a miofibrilelor la nivelul rabdocitului (dup Teuan, V. 2000)

Unitatea fundamental morfo-funcional a miofibrilei este "sarcomerul. Sarcomerul este distana dintre dou membrane Z dispuse succesiv i cuprinde un disc ntunecat flancat de dou jumti de discuri clare. Lungimea sarcomerului este de 2,3 2,5 (1,5 + 0,4 + 0,4). n structura sarcomerului se gsesc i microfilamentele de actin de miozin. Microfilamentele de actin se prind cu un capt pe membrana Z (stria Amici) iar cellalt capt este liber i va culisa printre microfilamentele de miozin (n timpul contraciei musculare). n cuprinsul discului I (clar) se afl numai microfilamente de actin. Microfilamentele groase de miozin se prind cu un capt pe membrana M (din mijlocul zonei H) i se ntind pe toat lungimea discului ntunecat (A). n zona Hensen se gsesc numai microfilamentele de miozin n timp ce n restul discului (A) aceste microfilamente (actina i miozina) interdigiteaz n timpul procesului de contracie muscular. Pe toat suprafaa microfilamentelor groase de miozin (n tot lungul lor) se afl nite puni transversale care sunt capetele globuloase ale moleculelor de miozin. La un microfilament miozinic gros format din 200 de molecule de miozin exist 200 de puni transversale, care sunt dispuse helicoidal. Pasul spiralei este de 43 mm. Mecanismul contraciei musculare n muchiul scheletic este o scurtare a sarcomerului, suma acestor micri de scurtare a tuturor sarcomerilor dintr-o celul muscular, reprezintnd scurtarea (contracia) fibrei musculare i apoi a muchiului respectiv. Scurtarea sarcomerului de la lungimea de 2,5 la cea de 2,0 (deci cu 20%) i apoi nsumat pentru 20000 de sarcomere, cte exist la fiecare centimetru liniar de miofibril i deci de rabdocit, poate duce la scurtarea (contracia) celulei musculare cu un centimetru (de la 5 la 4 cm). n mecanismul de contracie muscular, are loc scurtarea numai a discului clar (I); lungimea discului ntunecat nu se modific (nu se scurteaz). Contracia muchiului scheletic are loc atunci cnd excitaia nervului motor care-l deservete, declaneaz un potenial de aciune n plasmalema rabdocitului (sarcolema), la nivelul plcii motorie. Semnalul bioelectric se transmite rapid printr-un sistem de tubuli transveri care se ntind de la sarcolema i pn la fiecare miofibril, la nivelul membranei Z. Semnalul bioelectric determin eliberarea ionilor de calciu (Ca++) din cisternele i tubulii reticulului sarcoplasmic n citosolul rabdocitului. Eliberarea masiv a Ca++ este fenomenul care realizeaz cuplarea excitaiei cu contracia muscular cci ionii de calciu acioneaz asupra Troponinei i a Tropomiozinei (din structura microfilamentului de actin) . Ionii de calciu, acioneaz mpreun (prin cuplare) cu Troponina C asupra Tropomiozinei, modificndu-i poziia (n cadrul moleculei i filamentului de actin).
37

Modificarea poziiei moleculei de Tropomiozin n cadrul microfilamentului de actin, face s rmn liber o poriune (un monomer) din lanul de actine, iar acest monomer de actin se va cupla imediat cu capul (globulos) unei molecule de miozin. Venind n contact, cele dou molecule (de actin i de miozin) vor interaciona, astfel c activitatea ATP-azic a capului miozinic (subfragmentul S1) se va amplifica de circa 300 de ori (n prezena actinei). Din descompunerea ATP-ului rezult energie care va determina modificarea conformaional a capului globulos al moleculei de miozin (acesta se ndoaie sub aciunea eliberrii de energie din ATP) (Teuan, V., 2000). Aceast modificare conformaional (ncovoiere) a capului miozinic, determin tragerea (glisarea) microfilamentului de actin printre cele de miozin. n continuare capul miozinic elibereaz ADPul i fosforul anorganic (P), dup care se cupleaz cu o alt molecul de ATP, se desprinde de monomerul actinic de care a fost fixat i i recapta conformaia iniial (normal). Revenirea capului miozinic la conformaia iniial este i ea determinat de eliberarea de energie din descompunerea celei de-a doua molecule de ATP. n derularea unui ciclu de interaciune actin-miozin se consum dou molecule de ATP. Contracia muscular se bazeaz pe interaciunea specific dintre cele dou proteine contractile actin i miozin, fiind de fapt o glisare (alunecare) a microfilamentelor de actin printre cele de miozin. n aceast micare de glisare sunt antrenate i membranele Z din structura sarcomerelor. 2.2.2.1.4. Microtubulii Microtubulii sunt organite citoplasmatice de form cilindric, fiind foarte subiri, rectilinii i flexibili, cu un diametru constant, de 25 nm i lungimi variabile (de la cteva fraciuni de micron la civa microni). Microtubulii pot s apar grupai sau izolai. Un microtubul este format dintr-un numr de 13 protofilamente (protofibrile), fiecare avnd un diametru de 5 nm. Fiecare protofibril rezult din polimerizarea unui mare numr de molecule proteice numite tubulinecu aspect globular, fiecare fiind compus din dou subuniti: alfa tubulina i beta tubulina (este deci un dimer). Greutatea molecular a celor dou subuniti (polipeptide) este de 50-60 Kdal, iar secvena de aminoacizi este asemntoare. La polimerizare, dimerii de alfa i beta tubuline se aranjeaz n rnduri helicoidale de aa manier nct alfa tubulina de la un dimer vine n contact (se leag) de beta tubulina din dimerul ce aparine rndului vecin. Diametrul celor dou subuniti tubulinice este de 3,5 4,0 nm, distana dintre dou rnduri consecutive de alfa sau de beta tubuline fiind de aproximativ 8 nm (fig.23). Asamblarea tubulinelor n
38

microtubuli prezinta o serie de asemnri cu procesul de polimerizare a monomerilor de actin (AG) n filamente (AF). i aici (la polimerizarea tubulinelor) exist un nucleotid ataat, dar acesta este Guanozintrifosfatul (GTP) i nu ATP-ul ca la polimerizarea actinelor. GTP-ul poate fi hidrolizat pn la guanozindi i monofosfat (GDP, GMP) cu eliberarea de energie.

Fig. 23 Structura microtubulilor (dup Teuan, V., 2000)

a celul prismatic cu microtubuli n citoplasm; b dimensiunile i structura microtubulilor; c sec]iune transversal printr-un microtubul; d structura protofibrilelor; 1 membrana celular; 2 microtubuli n citoplasm; 3 microvili; 4 nucleul celular;5 Aparatul Golgi; 6 nucleoli; 7 microtubul format din 13 protofibrile; 8 seciune transversal printr-un microtubul; 9 protofibrile i diametrul lor; 10 protofibrila cu structura ei; 11 rnd helicoidal de alfa tubuline; 12 - rnd helicoidal de beta tubuline; 13 polimerizarea la captul (+) i depolimerizarea la captul (-) al protofibrilelor i respectiv a microtubulilor.

i microtubulii au o polaritate: la unul din capete, tubulinele polimerizeaz (se autoasambleaz) astfel c microtubulul se alungete (acesta fiind polulpozitiv), iar la captul opus se produce fenomenul de depolimerizare a microtubulului, acesta scurtndu-se (aici fiind polul negativ). Procesul de cretere ntr-o direcie i de scdere n direcie opus, reprezint de fapt o micare a microtubulilor. n citoplasma celulelor exist un echilibru dinamic ntre procesul de polimerizare i cel de depolimerizare a tubulinelor (ntre microtubuli i dimerii de tubuline din citosol). Polimerizarea se produce n mod spontan la temperatura de + 37 C, iar la temperaturi de 0C are loc procesul de depolimerizare a microtubulilor. Pentru realizrea procesului de polimerizare, n afar de o temperatur corspunztoare, mai sunt necesari i ionii de calciu (Ca++) i de magneziu (Mg++) n concentraie mic (micromolar) precum i unele
39

proteine asociate (MAPs i tau), proteine cu greuti moleculare de 200 300 Kdal, care pot accelera mult acest proces. Procesul de asamblare i de dezasamblare a tubulinelor n microtubuli este controlat n mod permanent de ctre o serie de proteine reglatoare. Polimerizarea microtubulilor poate fi blocat i de alte substane, precum: vinblastina i vincristina, substane din categoria citostaticelor (care blocheaz i distrug fusul de diviziune i opresc proliferarea celulelor maligne). Microtubulii au rol dublu: structural i dinamic. Rolul structural rezid din faptul c microtubulii intr n structura citoscheletului i a expansiunilor citoplasmatice precum: cili, axoni, dendrite, flageli, etc., unde determin i menin forma celulelor; de asemeni, microtubulii contribuie la pstrarea geometriei spaiale a organitelor citoplasmatice i n organizarea citoscheletului citoplasmatic precum i n anumite momente (n cursul procesului de spermatogenez, cnd se formeaz coada spermatozoidului i cnd microtubulii vor fi dispui n spiral n jurul axonemei). Ulterior, ei vor disprea, locul lor fiind luat de ctre mitocondrii, care, n final vor structura filamentul spiral al axonemei flagelului. Rolul dinamic al microtubulilor, rezid din faptul c microtubulii asigur toate micrile celulare ce au la baz sistemul molecular mobil tubulin dinein, micrile cililor i flagelilor, apoi micrile intracitoplasmatice (micri de molecule); transportul axonal (flux rapid de 400 mm / 24 ore i flux lent de 2 mm / 24 ore) sau procesele de eliberare a proteinelor i lipoproteinelor sintetizate n hepatocite. Microtubulii se gsesc n citoplasm fie sub form de entiti libere, fie sub form de structuri stabile, cum sunt: centriolii, fusul de diviziune, cilii, flagelii, etc. 2.2.2.1.5 Centrul celular (centriolii), fusul de diviziune Centrul celular este un organit citoplasmatic dispus de cele mai multe ori n vecintatea nucleului (lateral sau desupra) i se mai numete centrozom. Centrozomul are n interiorul su doi centrioli dispui perpendicular unul pe altul. Centriolii au form cilindric, au o lungime de 5000 (0,5 ) i un diametru de 1500 (0,15 ). La periferia cilindrului centriolar sunt dispuse 9 triplete de microtubuli cu un diametru fiecare de 150-200 . Fiecare microtubul este format din 13 protofilamente iar acestea sunt formate din tubuline (vezi structura microtubulilor). La fiecare triplet, microtubulul central a fost notat cu litera A, microtubulul intermediar a fost notat cu litera B iar microtubulul extern (periferic) a fost notat cu litera C. Aceti microtubuli (din componena tripletelor) sunt nconjurai de o substan dens la fluxul de electroni. n centrul centriolilor nu se gasesc microtubuli, structura lor fiind de tipul 9+0 (ca i n structura corpuscului bazal).
40

n jurul centrozomului (centrului celular) se organizeaz citoplasma. n aceast zon citoplasma conine mai multe proteine i ARN i apare mai dens, mai clar. Zona aceasta circular n care se organizeaz citoplasma (n jurul centrozomului) se numete sfer atractiv sau centrosfer. Centrul celular este implicat n desfurarea procesului de diviziune celular, prin urmare acest organit va lipsi din celulele foarte specializate (care au pierdut capacitatea de nmulire) (neuron, eritrocit, etc.). n timpul diviziunii celulare, centrozomul reprezint centrul organizatoric al microtubulilor care se dispun radial n jurul i la periferia centrosferei i astfel se va structura asterul. Asterul mpreun cu centrosfera vor structura astrosfera care reprezint aparatul acromatic al celulei. Materialul proteic din centrosfer ntre altele, determin i controleaz procesul de polimerizare a tubulinelor i deci formarea microtubulilor. i aici microtubulii au un capt negativ adic locul unde se descompun protofilamentele i un capt pozitiv unde se produce polimerizarea tubulinelor. Captul negativ (-) al microtubulilor este ndreptat spre centrozom, iar captul pozitiv (+) al acestora este ndreptat n sens opus . Fusul de diviziune. n intercinez, centrozomul se afl situat n vecintatea nucleului, n jurul lui organizndu-se asterul. n timpul fazei sintetice a ciclului celular (S) (cnd are loc sinteza de proteine i replicarea ADN-ului), ncepe i procesul de diviziune a centrozomului. Diviziunea centrozomului ncepe cu separarea celor doi centrioli care se ndeprteaz unul de cellalt, dup care n vecintatea fiecruia (dintre cei vechi) se va asambla cte un centriol nou. Aceast asamblare se face prin polimerizarea tubulinelor existente n citoplasm. n felul acesta se vor forma doi centrozomi (dou perechi de centrioli), care treptat se vor ndrepta spre cei doi poli ai celulei i vor structura fusul de diviziune. Deci fusul de diviziune are n componena lui tot microtubuli de diferite lungimi, care se dispun ca un mnunchi n plan meridional i se asociaz cu diferite proteine reglatoare. Se apreciaz c n componena fusului de diviziune ar intra circa 100 microtubuli. Fibrele fusului de diviziune se pot mpri n fibre scurte, de care se leag cromozomii n timpul mitozei i meiozei i fibre lungi care se ntind ntre cei doi centrozomi (de la un pol la altul al celulei). De fibrele fusului de diviziune se pot alipi, n afar de proteinele reglatoare asociate i o serie de resturi de membrane din RER, REN, vezicule golgiene Centrul celular (centrozomul) este un organit citoplasmatic dispus n vecintatea nucleului (lateral sau desupra). n interiorul centrozomului se gsesc doi centrioli dispui perpendicular unul pe altul, cu form cilindric, lungime de 0,5 i un diametru de 0,15 . La periferia cilindrului centriolar sunt dispuse 9 triplete de microtubuli, fiecare avnd un diametru de 0,015-0,02 . Fiecare microtubul este format din 13 protofilamente, formate din tubuline. Microtubulii din componena tripletelor sunt nconjurai de o substan dens la fluxul de electroni. n jurul centrozomului se
41

organizeaz citoplasma. Citoplasma conine n aceast zon mai multe proteine i ARN. Zona circular n care se organizeaz citoplasma n jurul centrozomului se numete sfer atractiv sau centros Acest organit lipsete din celulele foarte specializate (care au pierdut capacitatea de nmulire) (neuron, eritrocit), centrul celular fiind implicat n desfurarea procesului de diviziune celular, Microtubulii se dispun radial n jurul i la periferia centrosferei n timpul diviziunii celulare, structurnd asterul. Asterul mpreun cu centrosfera vor forma astrosfera - aparatul acromatic al celulei (fig. 24).

a poziia centrozomului n celul; b structura centrozomului i imaginea lui la MO; c imaginea i dimensiunile centriolilor la ME; d structura electronooptic a centriolilor; e o tripletde microtubuli din structura centriolilor (ME); 1 membrana celular; 2 membrana nuclear; 3 nucleoli; 4 cromatina; 5 mitocondrii; 6 RER; 7 centrozom; 7 centrioli; 7 citoplasmpericentriolar; 7 microtubuli dispui radial (asterul); 8 lizozomii; 9 Aparatul Golgi; 10 ribozomi; 11 cei doi cilindri centriolari compui din cte 9 triplete de microtubuli; 12 triplete de microtubuli (ABC) fiecare fiind format din cte 13 protofibrile

Fig. 24 Structura centrozomului (dup Teuan, V., 2000):

Fusul de diviziune are n componena lui microtubuli de diferite lungimi, care se dispun ca un mnunchi n plan meridional i se asociaz cu diferite proteine reglatoare. n componena fusului de diviziune intr circa 100 microtubuli. Fibrele fusului de diviziune pot fi scurte (de care se leag cromozomii n timpul mitozei i meioze) i lungi (care se ntind ntre cei doi centrozomi). De fibrele fusului de diviziune se pot alipi i o serie de resturi de membrane din RER, REN, vezicule golgiene sau resturi din nucleolem (fig25).
42

a fusul de diviziune celular; b, c, d, e, - detalii de structur ale acestuia; 1 centrioli; 2 microtubulii care compun asterul; 3 fibrele lungi (polare) ale fusului de diviziune; 3 - fibre polare (detaliu); 3 fibra polar(fragment secionat transversal); 4 fibrele scurte (cinetocorice) ale fusului de diviziune; 5 microtubuli; 6 proteine asociate microtubulilor care compun fibrele fusului de diviziune.

Fig.25 Fusul nuclear de diviziune celular:

2.2.2.1.6 Organite generatoare de energie Organite generatoare de energie sunt mitocondriile, care sunt specializate n producerea energiei necesar pentru desfurarea proceselor metabolice din celula eucariot. Mitocondriile sunt adevrate "fabrici de energie", n care energia eliberat prin oxidarea unor substane organice (substraturi), este convertit n energie chimic de tip macroergic (de tip ATP) prin procesul de fosforilare oxidativ. Forma, dimensiunile, numrul mitocondriilor Forma mitocondriilor este variabil: alungit (condrioconi), sferic (mitocondrii), granule dispuse n irag (condriomite). Majoritatea mitocondriilor au forme sferice i oval (fig.26).

Fig. 26 Celula prismatic cu cili i mitocondrii ovoidale dispersate n citoplasm (dup Teuan, V., 2000):
1 membrana celular; 2 cili; 3 membrana nuclear; 4 nucleol; 5 RER; 6 REN; 7 Aparat Golgi; 8 mitocondrii.
43

Dimensiunile mitocondriilor sunt variabile: lungimea este de 3 10 , iar diametrul mitocondriilor poate varia ntre 0,3 - 1,0 . Forma i dimensiunile mitocondriilor sufer modificri n funcie de fazele ciclului fiziologic prin care trec (condensare-balonizare) (fig.27).

1 membrana celular;2 prelungiri ale membranei; 3 membrana nuclear; 4 nucleol; 5 cromatina; 6 RER; 7 REN; 8 Aparat Golgi; 9 mitocondrii filamentoase.

Fig. 27 Fibroplast cu multe prelungiri de tip filamentos: (vzut la MCF) (dup Teuan, V., 2000):

Numrul mitocondriilor difer de la o celula la alta, depinznd de gradul de intensitate a activitii funcionale a celulei (n hepatocit pot exista 1000 - 3000 mitocondrii, n nefrocit 3000 mitocondrii, n spermatozoid 20 - 24 mitocondrii, n celula muscular cardiac 5000 10000). Mitocondriile din celula muscular cardiac (sarcozomi) au dimensiuni mai mari (1 - 2 diametru i 5 - 7 lungime) i ocup aproximativ 40% din spaiul intern al celulei. Mitocondriile se mic n celul parcurgnd spaiul cuprins ntre membrana nuclear i celular, prin micri pasive (antrenate de curenii citoplasmatici) sau active (micri determinate de schimbarea formei proprii). n acelai timp mitocondriile sunt i plastice, adic au capacitatea de a reaciona la o multitudine de factori externi precum: anoxia, variaiile de temperatur, acizi, baze, etc. Mitocondriile sunt amplasate n citosol, n tot spaiul intern al celulei sau n acele locuri unde este nevoie de energie (ATP) (mitocondriile sunt rspndite printre miofibrile n rabdocit i n celula muscular cardiac; helicoidal n jurul axonemei flagelului n
44

spermatozoid; diseminate n toat celula n neuroni). Mitocondriile i pot schimba n permanen poziia n funcie de activitatea lor metabolic. Coninutul biochimic al mitocondriilor este de 60-70% proteine, 25 - 28% lipide, 0,5% ARN, 0,5% ADN, mici cantiti de glucide, ioni i ap. Din totalitatea proteinelor, 30% sunt proteine structurale iar 70% sunt enzime. Din totalitatea lipidelor, 95% sunt fosfolipide, iar restul de 5% sunt colesterol, trigliceride i cardiolipin. ntr-o mitocondrie toate proteinele ca i toate lipidele sunt nlocuite la aproximativ 20 de zile. Structura i ultrastructura mitocondriilor Mitocondriile prezint o membran extern i una intern (fig.28).

Fig. 28 Mitocondria morfologie i structur: a forme de mitocondrii (dup Teuan, V., 2000):
1 sferice; 2 reniforme; 3 ovale; 3 seciune transversalprintr-o mitocondrie oval; 4 mitocondrii dispuse`n irag; 5 mitocondrie filamentoas; b dimensiunile mitocondriilor; c structura mitocondriilor: 1 membrana extern; 2 membrana intern; 3 criste mitocondriale; 4 compartimentul extern;5 compartimentul intern; d, e, f, g, - ultrastructura mitocondriei; d i e reprezint structura i dimensiunile membranelor mitocondriale i a cristelor mitocondriale; f i g membrana intern (1 piesa bazal; 2 piesa intermediar; 3 piesa terminal).
45

Membrana extern este de natur lipoproteic (proteinele reprezint circa 60% iar fosfolipidele reprezint aproximativ 40%), avnd suprafaa neted, o grosime de 7-8 nm i o structur trilaminar tip mozaic fluid. Membrana mitocondrial extern conine o proporie ridicat de colesterol i una sczut de cardiolipin. Membrana extern a mitocondriilor este permeabil putnd fi traversat de ctre moleculele cu greutate molecular mai mic de 5000 Dal. n membrana extern exist enzime: monoaminoxidaza (MAO), care este i enzima marker a membranei mitocondriale externe; coenzima A (CoA); ligaze (care formeaz esteri cu acizii grai liberi i cu coenzima A (CoA)); sistemul enzimatic NADH2 citocrom C reductaz, etc. Membrana intern a mitocondriei este tot de natur lipo-proteic; are structur de mozaic fluid, i o grosime de 6-7 nm, dar cu o suprafa mult mai mare, prezentnd din loc n loc nite pliuri (criste mitocondriale). Rolul acestor pliuri este de a mri foarte mult suprafaa activ de contact, de desfurare a reaciilor enzimatice. Membrana mitocondrial intern (inclusiv la nivelul cristelor) conine 80% i 20% fosfolipide. Membrana mitocondrial intern conine mai puin colesterol i mai mult cardiolipin, dect membrana mitocondrial extern, fiind mai puin permeabil dect cea extern. Prin membrana intern trec spre interior ionii de calciu i magneziu necesari pentru activarea enzimelor din matricea mitocondrial, precum i moleculele de AMP, ADP, ATP, acizi grai, aminoacizi, etc. Aceste substane sunt transportate prin membrana mitocondrial intern de ctre proteinele crui (translocaze, permeaze). Numrul de criste mitocondriale, mrimea i forma lor, variaz n funcie de tipul i intensitatea activitii metabolice desfurate n celula respectiv: cristele mitocondriale pot fi lamelate sau septate, sau tubulare. ntre membrana extern i cea intern exist un spaiu intermembranar cu o grosime de 7 - 8 nm, activ din punct de vedere metabolic. Aici exist un mare numr de enzime precum: adenilatkinaza (enzima care menine echilibrul ntre ATP, ADP, AMP); nucleozidmonofosfokinaza; nucleoziddifosfokinaza; sulfitoxidaza (fig.29). Spaiul intern este cuprins ntre cristele mitocondriale i conine o multitudine de substane biochimice: proteine, vitamine, acizi nucleici, ioni de substane minerale, lipide, glicogen, riboproteine, etc.

46

Fig.29 Strucrura mitocondriilor (dup Teuan, V., 2000) Proteinele din matricea mitocondrial se clasific n proteine structurale i contractile (fig.30).

Grosime:

Fig. 30 Structura i compoziia chimic a mitocondriei (dup Teuan, V., 2000):

1 granule de glicogen; 2 AND mitocondrial; 3 ribozomi mitocondriali cuplai cu molecule de ARNm mitocondrial; 4 criste mitocondriale; ME membrana extern; MI membrana intern; CE compartiment extern; CI compartiment intern; MAO - monoaminooxidaza

47

Cele mai importante sisteme enzimatice dn matricea mitocondrial sunt: sistemul enzimatic al ciclului KREBS; sistemul enzimatic al beta-oxidrii acizilor grai; sistemul enzimatic de transaminare la care se adaug enzimele proteolitice i enzimele pentru sinteze specifice. Dintre vitamine, s-au evideniat vitaminele din complexul B, vitamina A, i vitamina C. n matricea mitocondrial se gsesc i cei doi acizi nucleici: ADN i ARN (de tip diferit fa de cei existeni n nucleul celulari care permit o independen genetic parial a mitocondriei), precum i ionii de Na+, K+, Ca++, Mg++ (care au rolul de a activa enzimele din sistemele enzimatice amintite mai sus), lipidele simple sau complexe, glucidele polimerizate (glicogen) precum i ribozomii mitocondriali (riboproteine) . Acizii nucleici mitocondriali sunt diferii de cei din nucleul celulei: ADN-ul mitocondrial are o lungime de 20 , molecula este dispus circular, replicarea lui nefiind sincron cu cea a ADN-ului nuclear, ci mai lent i independent. Acidul ribonucleic (ARN) mitocondrial se gsete sub trei forme: ARN mesager, ARN de transport i ARN ribozomal. n matricea mitocondriilor se gsesc i ribozomi (de cca 15 nm) de tipul 70 S, formai fiecare din dou subuniti: o subunitate mare de tipul 50 S i o subunitate mic de tipul 30 S. Mitocondria are autonomie genetic parial, fiind capabil si sintetizeze singur (fr aportul nucleului) o parte dintre enzimele de care are nevoie: citocrom oxidaze, elemente ale diferitelor sisteme enzimatice, ATP-aze, i s foloseasc un cod genetic parial diferit de codul genetic nuclear. Ultrastructura membranei interne mitocondriale prezint o succesiune de subuniti de membran (particule elementare sau oxizomi sau particule F1). Oxizomul este o proeminen sferic prins printr-un picioru la suprafaa membranei. Fiecare oxizom este format din trei elemente: piesa bazal, piesa intermediar i piesa terminal. Piesa bazal are o lungime de 11,5 nm i o grosime de 4,5 nm. Piesa intermediar (tija oxizomului) are lungimea de 5 nm i grosimea de 3,3 nm. Piesa teminala (butonul oxizomului) are un diametru de 10 nm. Metabolismul mitocondrial n mitocondrie are loc metabolismul celular aerob care se bazeaz pe trei procese biochimice eseniale: ciclul KREBS (ciclul acidului citric), beta-oxidarea acizilor grai i fosforilarea oxidativ, prin care, n mitocondrii se sintetizeaz ATP, care este folosit ca surs de energie n celul. n lipsa mitocondriilor, celulele animale ar depinde de procesul de glicoz anaerob. Din glicoliza anaerob fiecare molecul de glucoz este descompus n dou molecule de ATP. n urma degradrii complete a moleculei de glucoz, aceasta
48

este degradat complet i intermediul lanurilor enzimatice vor rezulta 36 molecule ATP precum i bioxid de carbon i ap. ATP-ul conine trei legturi macroergice i din hidroliza lui rezult o mare cantitate de energie disponibil pentru procesele metabolice din celul. Procesele metabolice localizate n mitocondrii pot fi ncadrate n doua mari clase: metabolismul energetic mitocondrial i biosinteza mitocondrial. Metabolismul energetic mitocondrial cuprinde totalitatea reaciilor biochimice prin care substanele potenial energetice (glucoz, acizi grai, aminoacizi), prin descompunerea lor pun la dispoziie energia necesar pentru sinteza ATP-ului. Prin procesul de beta-oxidare, din descompunerea acizilor grai cu lanuri scurte sau lungi va rezulta n final Acetil-coenzima A. n urma descompunerii glucozei prin glicoliz aerob rezult piruvatul i ulterior acetil - coenzima A. Acetil - coenzima A rezultat din descompunerea acizilor grai i a glucozei, va intra n ciclul KREBS, iar n urma parcurgerii tuturor reaciilor specifice acestui ciclu, vor rezulta dou molecule de bioxid de carbon (CO2), trei molecule de Nicotinamid - Adenin dinucleotid dehidrogenaza (NADH) i o molecul de Flavin Adenin - dinucleotid - dehidrogenaza (FADH) (proteine catalitice care intr n ansamblul reaciilor de oxidare ce au loc n membrana mitocondrial intern). Prin oxidarea NADH-ului i a FADH-ului se elibereaz o cantitate de energie liber de 52,6 Kcal, care este folosit n cea mai mare parte pentru sinteza ATP. Prin procesele biosintetice mitocondriile i sintetizeaz o parte dintre enzimele necesare reaciilor metabolice i pot controla unele etape ale sintezei hemului i a hormonilor steroizi. Aceste procese sunt facilitate de faptul c acest organit celular dispune de o anumit cantitate de informaie genetic (AND-mitocondrial) ca i de posibilitatea de a transfera aceast informaie (ARN-mitocondrial) la nivelul ribozomilor mitocondriali, unde au loc procesele de biosintez. n cadrul acestor reacii, mitocondriile sufer modificri structurale alternative i reversibile care formeaz ciclul de balonizare-contracie- pe baza unor modificri suferite de membrana intern. Sub aciunea proteinelor contractile pe care le conine, mitocondria se transform ntr-o stare condensat, n care volumul organitului se reduce mult, spaiul (compartimentul) extern se terge, cristele mitocondriale se taseaz i se alipesc de membrana extern, mitocondria aprnd ca un corp dens i ntunecat. n starea de umflare sau de balonizare, organitul i mrete volumul prin acumulare de ap, cristele mitocondriale se terg, iar cele dou membrane se altur. Aceste procese sunt fiziologice i reversibile, n cursul desfurrii ciclului mitocondrial, mitocondriile putnd suferi frecvente repetri ale etapelor respective.
49

2.2.2.1.7 Organitele sintezei i secreiei celulare n sinteza proteinelor structurale, enzimelor, lipidelor, glucidelor celula eucariot folosete organite specializate precum: ribozomii, reticulul endoplasmatic rugos, reticul endoplasmatic neted, iar pentru procesul de secreie dispune de aparatul Golgi. Ribozomii sunt prezeni n toate celulele procariote i eucariote, cu excepia hematiilor adulte la mamifere, unde care lipsesc. Deoarece au dimensiuni foarte mici (de ordinul zecilor de nanometri), sunt vizibili doar cu microscopul electronic . Ribozomii se afl liberi, izolai, grupai, sau ataai de membranele reticulului endoplasmatic sau pe faa extern a membranei nucleare externe (fig. 31 a). Au rol esenial n coordonarea procesului de traducere a codului genetic n sinteza de proteine, putnd fi socotii ca fiind veritabile "uzine de asamblare" a proteinelor din aminoacizi. Numrul ribozomilor variaz n funcie de intensitatea proceselor biosintetice din celule: n celulele care sintetizeaz proteine pentru eliminare la exterior exist un numr foarte mare de ribozomi ataai de membranele reticului endoplasmatic granular, iar n alte celule ribozomii se gsesc liberi i ntr-un numr mai mic. Grupai, poart denumirea de polizomi, poliribozomi. Ribozomii sunt formai din dou subuniti inegale ca mrime, compoziie chimic i nivel de sedimentare (fig.31 b,c). Ribozomii se formeaz n nucleol, de unde sunt transferai prin porii membranei nucleare n citoplasm, unde are loc procesul de maturare a lor. Din punct de vedere chimic, ribozomii conin 45% ARNr (toate cele patru tipuri), 50% proteine ribozomale, 4,5% fosfolipide i 0,5% ioni de Ca++ i de Mg++, precum i cantiti foarte mici de ap. ARN-ul ribozomal, se gsete la suprafaa celor dou subuniti ribozomale, iar proteinele ribozomale n profunzimea lor.

Fig.31 Ribosomii (dup Teuan, V., 2000):

a, a, b, b, b, - poziie i dispunere intracitoplasmatic; c, c, c, c, - agregarea ribosomilor cu formare de dimeri sau tetrameri;
50

ARN-ul ribozomal este dispus sub form de lanuri dublu helicoidale i sub form de lanuri nespiralate. Cele dou segmente de ARNr alterneaz. Proteinele ribozomale sunt aproximativ sferice i au dimensiuni de circa 3,0 nm. Biogeneza i funciile ribozomilor Ribozomii particip la sinteza tuturor tipurilor de proteine, cnd se ataeaz de moleculele de ARN mesager (ARNm) formnd poliribozomii sau polizomul. Numrul de ribozomi care se grupeaz ntr-un polizom, este n funcie de mrimea moleculei proteice ce urmeaz a fi sintetizat. Ataai de molecula de ARNm, ribozomii apar ca un irag de mrgele pe o a. Molecula de ARNm are aspect filamentos cu diametru de circa 2,0 nm i leag ribozomii dintr-un polizom, trecnd prin spaiul dintre subunitatea mare i mic a fiecrui ribozom component al lanului respectiv (fig.32).

Fig. 32 Structura unui polizom (dup Teuan, V., 2000)

(un numr variabil de ribosomi legai de molecula de ARNm: 1 subunitatea mare a ribosomilor; 2 subunitatea mica ribosomilor; 3 molecula de ARNm.

Biogeneza i asamblarea ribozomilor ncepe n nucleol i se termin n citoplasm. Asamblarea ribozomilor este precedat de sinteza, tot la nivelul nucleolului, a unui ARN precursor. Sinteza ARN-ului precursor se face pe baza informaiei genetice coninut n ADN-ul din nucleol (Teuan, V., 2000). La nivelul ribozomilor se sintetizeaz toate proteinele celulare (proteine structurale, enzime i proteine pentru export). Reticulul endoplasmatic este un organit nespecific, care la suprafa prezint un sistem de membrane biologice (fig.33 a.) el exist n toate celulele eucariote cu excepia hematiilor adulte (la mamifere) n care lipsete. Reticulul endoplasmatic (RE) este un sistem de membrane ce formeaz o reea (de saci, cisterne, tuburi i vezicule) care strbate ntreaga citoplasm. Este dispus tridimensional n spaiul intern al celulei, ntre nucleu i plasmalem, venind n contact morfologic i funcional cu nucleolema, dar rmnnd separat de plasmalem printr-o zon numit axoplasm. n axoplasm se gsesc structurile fibrilare ale citoscheletului membranar.

51

Fig. 33 Raporturile dintre nucleul celular i RE (dup Teuan, V., 2000):

A nucleul celular; B RER; C REN; 1 membrana nuclear extern; 2 - membrana nuclear intern; 3 cistern perinuclear; 4 ribosomi ataai de membrana nuclear extern; 5 pori n membrana nuclear; 6 cromatina nuclear; 7 nucleol; 8 nucleoplasma (sucul nuclear); 9 tubuli aparinnd REN; 10 tubuli aparinnd RER cu ribosomi ataai de membrane.

Numrul, forma i poziia RE n celule n celulele nervoase RE ia form de granule, pete, blocuri, bastonae, formaiuni denumite Corpii Tigroizi sau Corpi NISSL. n celulele pancreatice RE apare ca o reea de striaiuni longitudinale, plasate sub nucleu i denumite ergastoplasm. n celulele hepatice RE apare ca nite zone sferice i bazofile, numite Corpii lui BERG, iar n celulele glandei interstiiale (Leydig) sau n celulele glandei suprarenale, precum i n plasmocite RE apare ca fiind foarte dezvoltat, sub forma de reea complex de tubuli, cisterne sau vacuole. Lumenul formaiunilor care compun RE (tubuli, canale, cisterne, vacuole) este variaz ntre 5 500 nm. Membranele formaiunilor componente ale RE au grosimi de 67 nm, sunt de natur lipoproteic i au o structur de tip mozaic fluid; proteinele pe care le conin sunt glicoproteine integrale, iar majoritatea lipidelor din structura membranelor RE sunt fosfolipide. n aceste membrane exist puin colesterol iar acizii grai din structura fosfolipidelor sunt foarte nesaturai. Reticulul endoplasmatic este de dou tipuri: - Reticulul endoplasmatic neted (REN) sau Reticul endoplasmatic agranular (REA);
52

- Reticul endoplasmatic rugos (RER) sau Reticul endoplasmatic granular (REG). Reticulul endoplasmatic rugos (RER, REG) prezint pe suprafaa extern a membranelor sale foarte muli ribozomi ataai n izolat sau n grupuri, prin intermediul subunitii mari (60 S), subunitatea mic rmnnd liber. Astfel se structureaz aspectul de "om de zpad" - caracteristic membranelor reticulului endoplasmatic rugos. Subunitatea mare a ribozomului este strbtut de un canal foarte fin - deschis n lumenul formaiunilor componente ale RER (tubuli, cisterne, vacuole), prin care lanurile de polipeptide sintetizate pe ribozomi sunt introduse n cisterne, unde vor fi supuse unor procese de maturare. Reticulul endoplasmatic rugos (RER) are o mare putere de adaptare n raport cu vrsta sau starea funcional a celulei. Ribozomii care se ataeaz membranelor RER se aglomereaz n prealabil n lungul moleculei de ARNm dup care mpreun cu aceasta se vor cupleaz la membranele RER (fig. 34).

Fig. 34 Modul de ataare a unui polizom de membrana unui tubul RER (dup Teuan, V., 2000):
1 - membrana tubulului RER; 2 - riboforine sau receptori pentru ribozomi; 3 - receptori ai particulelor de recunoatere a semnalelor de inserie; 5 - subunitile mari ale ribosomilor; 6 subunitile mici ale ribosomilor; 7 - molecula de ARNm (purttoare de informaie genetic); 8 - lan polipeptidic dispus n canalul ribosomal; 9 - lanuri polipeptidice sintetizate pe ribosomi i adpostite n lumenul tubulului RER.

Reticulul endoplasmatic neted (REN, REA) reprezint un sistem de tubuli cu diametrul de 30 nm, foarte dezvoltat n celulele care sintetizeaz hormoni steroizi, glicogen, acid clorhidric sau n celule care acumuleaz pigmeni (fig. 35). n rabdocit i leiocit REN este foarte dezvoltat avnd un rol deosebit de important n cuplarea mecanismului de excitaie cu cel de contracie muscular. n celulele pigmentare ale retinei (celule cu conuri i bastonae), REN are att aspect tubular normal, ct i aspect de corpi mieloizi (formaiuni biconvexe).
53

Din punct de vedere chimic reticulul endoplasmatic conine 60% proteine structurale i enzime i 40% lipide.

Fig. 35 REN imagine tridimensional (dup Teuan, V., 2000) Funciile reticulului endoplasmatic sunt att comune ct i difereniale. Funciile comune ale reticulului endoplasmatic sunt multiple. Prin RE se vehiculeaz permanent substane n toat citoplasma, tranzitul de substane intracelulare extinzndu-se i la nivelul altor organite sau structuri celulare. De asemeni, RE mpreun cu alte organite citoplasmatice, contribuie la crearea i meninerea formei celulare precum i la compartimentarea celulei. O alt funcie comun a reticulului endoplasmatic const n faptul ca prin membranele acestui organit se realizeaz schimburi active i selective cu citosolul. Alte funcii comune ale reticulului endoplasmatic sunt sinteza fosfolipidelor i biogeneza membranelor i a organitelor citoplasmatice cu membran. Reticulul endoplasmatic este implicat n procesele de sintez a proteinelor i fosfolipidelor componente ale endomembranelor i plasmalemei precum i n sinteza enzimelor din lizozomi i peroxizomi sau a proteinelor enzime destinate exportului celular. Funciile difereniate reprezint funciile specifice pentru fiecare dintre cele dou forme ale reticulului endoplasmatic. Reticulul endoplasmatic rugos (RER) este implicat n procesul de sintez a proteinelor-enzime de export ca i a celor de membran. Reticulul endoplasmatic neted are rol specific n sinteza hormonilor steroizi, biosinteza lipidelor, metabolismul glucidic, n procesul de detoxifiere a celulei, n cuplarea procesului de excitaie cu cel de contracie muscular, n sinteza de acid clorhidric, precum i n sinteza pigmenilor vizuali iodopsina i rodopsina. Complexul Golgi (AG) (gama-citomembrane) este prezent n citoplasma tuturor celulelor eucariote (cu excepia hematiei adulte din sngele de mamifer, din care lipsete) sub forma unui sistem de "stive de cisterne aplatizate" (saci aplatizai) asociate cu numeroase
54

microvezicule i macrovezicule. Poziia i gradul de dezvoltare a aparatului Golgi difer n funcie de tipul i activitatea celulelor. n neuroni apare ca o reea dispus perinuclear, (fig.36 a,) n celulele secretorii exocrine din pancreas, se dispune supranuclear (n spaiul dintre nucleu i polul apical al celulei) (fig. 36 b, c,) iar n celulele foliculilor tiroideni oscileaz ntre cei doi poli -n funcie de activitatea metabolic preponderent a unuia sau altuia.

(a - neuron; b - celul pancreatic; c - celul caliciform)a - (1 - dendrite; 2 - axon 3 - Aparatul Golgi dispus perinuclear; 4 - Corpi Nissl (RER); 5 - neurofibrile; 6 - mitocondrii; 7 - nucleu bogat n eucromatin i cu nucleol; b - (1 - membrana celular;2 - nucleul celular; 3 - nucleol; 4 - Aparatul Golgi dispus supranuclear; 5 - RER; 6 - mitocondrii; 7 - vezicule de condensare; 8 REN; c - (1 - membrana celular;2 - nucleul; 3 - nucleolul; 4 - RER; 5 - mitocondriile; 6 - Aparatul Golgi dispus periferic; 7 - vacuole de condensare; 8 - microvili.

Fig. 36 Poziia Aparatului Golgi n trei tipuri de celule (dup Teuan, V., 2000)

n structura sa, Aparatul Golgi prezint trei elemente componente: "stivele de lame golgiene (pachetele de saci aplatizai), microveziculele i macroveziculele (fig. 37). Lamele golgiene au o fa convex (faa imatur sau faa "cis") (ndreptat fie spre nucleu fie spre RER) i o fa distal (faa "trans sau concav ) considerata matur (fig. 38). Microveziculele golgiene (vezicule de transfer), se gsesc pe feele "cis" ale lamelor golgiene i se formeaz prin pensarea (ciugulirea) capetelor mai dilatate ale cisternelor i tubulilor reticulului endoplasmatic rugos. La nivelul acestor formaiuni se acumuleaz proteinele sintetizate pe ribozomi . Microveziculele golgiene au diametre de 2080 nm, form eliptic sau sferoidal, iar la exterior prezint o membrana de natur lipo-proteic, trilaminar de tip mozaic fluid cu o grosime de 6 nm. Microveziculele odat formate se desprind de RER i se ndreapt spre faa "cis" a cisternelor golgiene i ulterior se vor uni cu sacii golgieni, vrsndu-i astfel coninutul n cisternele Aparatului Golgi.
55

Macroveziculele golgiene sunt formaiuni ovoidale sau sferoidale cu diametrul cuprins ntre 200-600 nm, care se dispun la faa "trans" a lamelor golgiene i n vecintatea polului apical al celulelor. La exterior prezint o membran de natur lipo-proteic, trilaminar de tip mozaic fluid cu o grosime de circa 80 8 nm iar la interior un coninut amorf sau granular heterogen ce apare mai condensat dect n restul Aparatului Golgi). Din punct de vedere chimic, Aparatul Golgi conine 60% proteine i 40% fosfolipide i colesterol. Dintre enzime, n membranele i lumenul Aparatului Golgi se gsesc: tiaminpirofosfataz, nucleoziddifosfataz i glicoziltransferaza, sulfotransferaza, fosfataza acid, NADH2 i NADPH2 citocrom C, reductaza, iar dintre vitamine, vitamina A i K.

a - seciune longitudinal prin aparatul Golgi (1 - lame golgiene; 2 - macrovezicule golgiene; 3 - microvezicule golgiene; 4 - lame golgiene n formare sau imature; 5 - extremitile bombate ale lamelor golgiene mature din care se vor desprinde macroveziculele). b - fragment din lamele golgiene (1 - faa transconcav i matur a lamelor golgiene; 1 faa cis convex i imatur a lamelor golgiene; 2 - spaiul dintre lamele golgiene; 3 - materialul granular fin din interiorul cisternelor golgiene)b - structura i grosimea membranelor transale lamelor golgiene b - structura i grosimea membranelor cis ale lamelor golgienec c - structura, dimensiunile i coninutul macroveziculelor golgiened - structura i dimensiunile microveziculelor golgiene ca i a membranelor care exist la exteriorul lor.
56

Fig. 37 Structura i ultrastructura Aparatului Golgi (dup Teuan, V., 2000):

1 - microvezicule golgiene ce aflueaz dinspre RER i REN;2 - microtubuli de aceeai origine;3 - microvezicule care se contopesc cu lamele golgiene i i descarc ncrctura lor, adus de la nivelul RER i REN; 4 - plci (lame) golgiene vzute de pe faa lor imatur (cis); 5 - pori cu diametrul de 60-600 care exist pe faa imatur a lamelor golgiene i prin care se realizeaz legtura cu microveziculele i microtubulii ce aflueaz dinspre RER i REN.

Fig. 38 Faa ventral sau imatur (cis) a lamelor golgiene (Placa fenestrat) (dup Teuan, V., 2000):

Funciile Aparatului Golgi sunt multiple: - are rol esenial n realizarea procesului de secreie intracelular; - are rol n procesele de concentrare i de condensare a produselor de sintez primite de la RER; - este implicat n procesul de reciclare a membranelor celulare; - particip la sinteza glicoproteinelor; - are rol n biogeneza lizozomilor primari; - este implicat n procesul de formare a acrozomului la spermatozoid, n cadrul procesului de spermiogenez Ciclul secretor este drumul parcurs de proteinele sintetizate pentru exportul de la locul de sintez (ribozomi i RER) i pn la exocitarea lor. Acest drum se realizeaz n 5 faze: sinteza i segregarea; transportul intracelular; condensarea i maturarea; depozitarea intracelular; exocitoza. Sinteza i segregarea proteinelor are loc pe polizomi la nivelul RER, conform informaiei genetice transmis de la ADN prin intermediul ARN-ului mesager. Transportul intracelular are loc prin tubulii i cisternele RER pn la Aparatul Golgi prin intermediul microveziculelor golgiene. Depozitarea intracelular se realizeaz sub form de vezicule secretorii, care rmn temporar n citoplasm, ulterior fiind eliminate la exterior prin exocitoz.
57

Exocitoza, depinde de o serie de factori printre care: concentraia intracelular a substanelor respective i a ionilor de Ca++, prezena ATP-ului i a AMP-ului ciclic. Prin exocitoz trec n mediul extracelular o serie de substane: hormonii, enzimele, imunoglobulinele, lipoproteinele, neurotransmitorii, diveri constituieni ai serului i ai laptelui, fragmente de membrane sau produi terminali ineri din punct de vedere metabolic (corpi reziduali) (fig. 39).

Fig. 39 Raportul dintre RER i Aparatul Golgi, ntr-o celul de tip secretor (dup Teuan, V., 2000) (reprezentarea schematic a ciclului secretor, n care este implicat RER, REN, AG i mitocondriile a crui ultim faz este exocitoza).
1 - membrana celular; 2 - mitocondrii ntregi de form oval sau sferic; 3 - mitocondri secionate transversal cu punere n eviden a cristelor mitocondriale; 4 - RER (cisterne, tubuli, vacuole cu ribosomi ataai); 4 - pensarea capetelor tubulilor i cisternelor RER, cu formarea de microvezicule golgiene de transport; 5 - nucleu; 6 - REN; 7 - nucleol; 8 - microtubuli; 9 - polizomi; 10 - Aparat Golgi (lame golgiene); 11 - microvezicule golgiene desprinse din RER i ncrcate cu proteinele sintetizate pe ribosomii RER; 12 - extremitile bombate ale AG; 13 - macrovezicule golgiene (vezicule de condensare sau secretorii); 14 - eliminarea la exterior a produselor de secreie (prin exocitoz); 15 - lizozomii primari ce provin din AG; 16 - microvili;17 - cromatina; 18 - filamente de actin i miozin.
58

2.2.2.1.8 Organitele digestiei celulare Digestia celular cuprinde totalitatea fenomenelor care conduc la degradarea moleculelor ptrunse n citoplasm prin endocitoz, degradarea organitelor celulare uzate sau a unor macromolecule celulare. n procesul de digestie celular sunt implicai lizozomii i peroxizomii. Lizozomii sunt organite citoplasmatice de form sferic sau ovoidal, prezeni n toate celulele eucariote, cu excepia eritrocitului adult de la mamifere, n care lipsesc. Aceste organite conin un echipament enzimatic deosebit de complex i de complet i un diametru de 200 nm 800 nm (fig. 40 a, b, d). Structura lizozomilor este complex i specific, prezentnd la exterior o membran lizozomal, iar la interior o matrice lizozomal. Membrana lizozomal este de natur lipo-proteic, avnd o structur trilaminar de tip mozaic fluid i o grosime de 6 nm (fig. 40 b, c). Membrana lizozomal acioneaz ca o barier de protecie ntre enzimele digestive coninute n lizozomi i citosol. Matricea lizozomal poate avea aspect diferit (omogen, fin granular, heterogen) (fig. 40 d) ceea ce poate determina un polimorfism lizozomal. Matricea lizozomal conine peste 50 de tipuri de enzime: proteaze, nucleaze, glicozidaze, lipaze, fosfolipaze, sulfataze, peptidaze, fosfataze, esteraze, etc, care se gsesc n interiorul lizozomilor, ntr-o stare latent (inactive) (aspect fiind specific lizozomilor).

a - celul caliciform cu lizozomi i alte organite comune; b - lizozomi primari; c - membran lizozomal; d - lizozomi secundari.1 - membrana celular; 2 - nucleu; 3 - cromatina nuclear; 4 - RER;5 - REN; 6 - mitocondrii; 7 - Aparat Golgi;8 - vezicule secretorii; 9 - cili;10 - lizozomii primari;10 - lizozomi primari cu matricea i membrana lizozomal; 10 - lizozomi secundari; 11 - bistratul fosfolipidic al membranei lizozomale; 12 - straturile proteice ale membranei lizozomale; 13 - matricea omogen i fin granular a lizozomilor primari; 14 - matricea heterogen granular a lizozomilor secundari.
59

Fig. 40 Morfologia i structura lizozomilor (dup Teuan, V., 2000):

Lizozomii pot degrada i descompune toi constituienii celulari i tisulari: proteine, peptide, acizi nucleici, lipide, glucide simple i complexe (glucoaminoglicani), etc. pn la acizi grai, aminoacizi sau monozaharide. n celula eucariot se ntlnesc dou tipuri de lizozomi: primari i secundari. Lizozomii primari se formeaz n Aparatul Golgi dup sintetiza enzimelor coninute la nivelul RER. Dimensiunile acestor lizozomi sunt reduse, diametrul fiind de 200-400 nm. Lizozomii primari sunt lizozomi tineri care nu au fost angajai n activitate i au o durata de via scurt ce nu depete 24-48 h. Lizozomii secundari sunt heterogeni ca matrice, au mrimi mai mari (diametrul lor variind ntre 500-1000 nm), iar durata lor de via i de activitate este mai lung (de la cteva zile la cteva sptmni). Lizozomii secundari se formeaz prin fuzionarea lizozomilor primari cu diferite vezicule rezultate din procesul de fagocitoz sau pinocitoz (fagozomi, pinozomi, receptozomi). Exist mai multe tipuri de lizozomii secundari: heterofagolizozomi, autofagolizozomi, crinofagolizozomi i corpii veziculari reziduali (fig.41).

Fig 41 Schema de formare a lizozomilor secundari (dup Teuan, V., 2000): Principala funcie a lizozomilor este de participare la digestia celular. Exist trei tipuri de digestie lizozomal n functie de natura i proveniena materialului "digerat": heterofagia, autofagia i crinofagia. Heterofagia se realizeaz prin introducerea n citoplasm prin endocitoz (fagocitoza, pinocitoza), a diverselor substane nutritive, bacterii, virusuri, macromolecule i nglobarea acestora n fagozomi i respectiv pinozomi. Aceste vezicule (fagozom, pinozom, receptozom) se contopesc n citoplasm cu lizozomii primari, formnd lizozomii secundari (fagolizozomi i pinolizozomi). n interiorul acestor lizozomi secundari se va produce procesul de digestie intracelular pe seama enzimelor specifice pe care le conin (hidrolaze acide) (fig. 42).
60

Fig. 42 Schema procesului de heterofagie (digestie lizozomal) (dup Teuan,V.,2000):

1 - membrana celular; 2 - nucleu;3 - nucleol; 4 - cromatina; 5 - RER; 6 - mitocondrii; 7 - Aparatul Golgi; 8 - Lizozomi primari; 9 - vezicule secretorii;10 - molecule de substane nutritive simple (aa, glucoza, acizi grai) rezultate din digestia lizozomal; 11 - incluziuni citoplasmatice; F - fagozom; FL - fagolizozom; P - pinozom; PL - pinolizozom; LS - lizozom secundar; CVM - corpi multiveziculari; LT - lizozom teriar (CR); CR - corpi reziduali.

Substanele rezultate n urma procesului de heterofagie, trec n citoplasm, de unde vor fi utilizate de celul. n unele situaii, aceste substane sunt ncrcate n nite microvezicule nglobate ulterior n lizozomii secundari. Autofagia se realizeaz prin "mpachetarea" materialului provenit din interiorul celulei (mitocondrii uzate, fragmente de RER, ribozomi, macromolecule alterate) n nite vezicule de izolare (vacuole autofagice sau autofagozomi). Cnd autofagozomii ntlnesc lizozomii primari, se contopesc cu acetia rezultnd autofagolizozomii, n interiorul crora se produce un proces de digestie intracelular similar heterofagiei (fig. 43). Autofagia asigur n celule rennoirea continu a componentelor i organitelor citoplasmatice. S-a evideniat faptul c mitocondriile triesc circa 12 zile, peroxizomii 2-3 zile, iar ribozomii 10 zile, dup care aceste organite sunt nlocuite prin mecanismele amintite mai sus i c n esutul hepatic se distrug ntr-o or prin autofagie peste 1.000.000.000 de mitocondrii la fiecare gram de esut, procesele de autofagie fiind accelerate n timpul perioadelor de inaniie.

61

Fig. 43 Schema procesului de autofagie (digestie lizozomal) (dup Teuan, V., 2000):
1 - membran celular; 2 - nucleu; 3 - RER; 4 - ribozomi izolai; 5 - Aparatul Golgi; 6 - REN; 7 - mitocondrii; 8 - vezicule secretorii; 9 - molecule de substane nutritive rezultate din digestia lizozomal; 10 - incluziuni citoplasmatice (CR); 11 - microviloziti; LP - lizozomi primari; AF - autofagozomi; AFL - autofagolizozomi; CVM - corpi multiveziculari;CR - corpi reziduali (LT); LT - lizozomi teriari.

Crinofagia este un mecanism de reglare a proceselor secretorii, caracteristic celulelor secretorii, exocrine i endocrine. n aceste celule, n caz de hiperactivitate, se acumuleaz un surplus de vezicule secretorii, care nu sunt exocitate, ci digerate. Acest surplus de vezicule secretorii (crinozomi) se contopesc cu lizozomii primari formnd crinofagolizozomii, n interiorul crora va avea loc digestia intracelular (fig. 44). Lizozomii care mai conin particule ce nu pot fi digerate dup terminarea digestiei se numesc lizozomi teriari sau corpi reziduali; de obicei acetia sunt eliminai prin exocitoz. n celulele care nu se divid (neuroni, rabdocit), corpii reziduali acumulai n timp, formeaz nite granule numite granule de lipofuscin.

62

Fig. 44 Schema procesului de crinofagie (digestie lizozomal) (dup Teuan, V., 2000):
1 - membrana celular; 2 - nucleu; 3 - nucleol; 4 - cromatina; 5 - REN; 6 - RER; 7 - mitocondrii; 8 - ribozomi; 9 - Aparatul Golgi; 10 - vezicule secretorii (surplus); 11 - lizozomi primari; 12 - cinofagolizozomi; 13 - CVM; 14 - CR (LT).

Peroxizomii se ntlnesc constant n toate celulele din organismul animal i vegetal i se caracterizeaz printr-un coninut bogat de peroxidaze (enzime care intervin n procesele de sintez i descompunere a peroxidului de hidrogen sau apa oxigenat). Numrul peroxizomilor n celule variaz funcie de tipul celular i de activitatea celulei, n hepatocit numrul peroxizomilor fiind mai mare dect al lizozomilor deoarece aceste organite sunt implicate i n procesele de detoxificare a organismului. Peroxizomii au form sferic sau ovoidal (uneori i forme neregulate), cu diametrul de 100-1500 nm (fig. 45 a, b). n funcie de mrime peroxizomii se mpart n microperoxizomi (cu diametrul de 100400 nm), i macroperoxizomi (cu diametrul de 5001500 nm. La exterior peroxizomii prezint o membran groas de 6,58,0 nm, de natur lipo-proteic cu structur trilaminar de tip mozaic fluid (fig. 45c, d), iar la interior, au o matrice cu aspect fin granular, care n unele celule exconine un cristaloid (fig. 458 e, f).
63

Fig. 45 Structura peroxizomilor (dup Teuan, V., 2000):

a - hepatocit cu un numr mare de peroxizomi; b - grup de micro i macroperoxizomi i dimensiunile lor; c i c - structura peroxizomilor la ME; d - membrana peroxizomal; e - matricea peroxizomal; f - structura cristaloidului; 1 - membrana hepatocitului; 2 membrana nuclear; 3 - nucleol; 4 - Aparat Golgi; 5 - REN; 6 - RER; 7 - cromatina nuclear; 8 - peroxizomi; 8 - microperoxizomi;8 - macroperoxizomi; 9 - mitocondrii; 10 - membrana peroxizomal; 10proteinele membranei; 10 - fosfolipidele membranei; 11 - cristaloid; 12 - matrice peroxizomal; 13 - tubuli paraleli de natur proteic.

Din punct de vedere chimic peroxizomii conin proteine astructurale, lipide i enzime speciale (catalaza, uratoxidaza, D-aminoacidoxidaza, enzimele ciclului glioxilat). Catalaza este enzima marker a peroxizomilor i reprezint cca 33% din totalitatea enzimelor peroxizomale. Peroxizomii au funcii multiple, cea mai important fiind funcia respiratorie, realizat prin intermediul oxidazelor. Acestea folosesc oxigenul molecular pentru oxidarea direct a unor substraturi variate, producnd peroxidul de hidrogen (H2O2)- toxic pentru celule, i care va fi descompus prin intermediul catalazelor pn la oxigen i ap. O alt funcie a peroxizomilor este cea de intervenie n metabolismul acizilor nucleici, prin intermediul uratoxidazei putnd descompune bazele purinice ca adenina i guanina. De asemeni peroxizomii intervin mpreun cu mitocondriile n procesul de beta-oxidare a acizilor grai- sub aciunea primei enzime, acetil-Co-A-oxidaza, rezultnd peroxidul de hidrogen (H2O2). O funcie important a peroxizomilor este cea de detoxificare a celulei i implicit a organismului- funcie se concretizat prin posibilitatea acestor organite de a neutraliza o serie de molecule toxice precum alcoolul, fenolii, acidul formic, formaldehidatele.
64

Peroxizomii produc acetil-Co-A i reduc NAD+ la NADH, molecule ulterior de mitocondrii pentru a genera ATP. Peroxizomii au rol i n procesul de termogenez (producerea de cldur), n celulele adipoase din esutul adipos de tip brun, existnd un numr mai mare de peroxizomi, comparativ cu alte celule. n celulele de tip vegetal peroxizomii au rol n realizarea ciclului glioxilat- - varianta vegetal a ciclului KREBS. 2.2.2.1.9 Organitele specifice Organitele specifice sunt diferenieri citoplasmatice existente n unele celule, unde reprezint suportul unor activiti specifice. Organitele specifice pot fi de tip fibrilar (miofibrilele- prezente n celulele musculare; neurofibrilele -prezente n celulele nervoase i tonofibrilele -prezente n celulele epiteliale) i de tip granular (corpii tigroizi sau corpusculii NISSL). Miofibrilele pot fi de tip omogen (n leiocit) sau de tip striat (n rabdocit i n celula muscular cardiac), fiind formate din microfilamente de actin i de miozin. Tonofibrilele sunt compuse din microfilamente cu grosime de circa 10 nm i intr n structura desmozomilor. Neurofibrilele sunt prezente n neuroni att la nivelul pericarionilor ct i la nivelul dendritelor i axonilor i sunt formate din neurofilamente iar acestea din microtubuli. Microtubulii constituieni sunt formai din polipeptide cu o greutate molecular de circa 68 Kdal, putnd fi dispuse att n jurul nucleului, n pericarion, ct i n interiorul prelungirilor neuronale, la nivelul sinapselor. Aceste organite au rol n susinerea formelor neuronale. Corpusculii NISSL, sunt fragmente de RER cu rol important n sinteza mediatorilor chimici. 2.2.3. Incluziunile citoplasmatice Incluziunile citoplasmatice sunt formaiuni care sunt depozitate temporar sau definitiv n citoplasma celular i sunt reprezentate de: substane de rezerv (proteine, lipide, glucide, vitamine, minerale); produi de elaborare (granule de zimogen, granule de pigment, hormoni, etc.); produi de desasimilaie (pigmentul lipofuscinic, etc.). Proteinele de rezerv se depoziteaz cu precdere n celulele musculare, n hepatocit, i n ovulul de mamifer i de pasre sub form de granule fine sau mase omogene. Lipidele de rezerv se gsesc frecvent n hepatocite, n celula elaboratoare de hormoni steroizi (celulele zonei reticulare din corticosuprarenal, ovar, corp luteal, testicul) i n adipocite, sub forma unor picturi sferice sau ovale de mrimi diferite.
65

Glucidele se gsesc sub form de glicogen (granule) cu precdere n hepatocite i n celulele musculare. Vitaminele sunt prezente n foarte multe tipuri de celule , iar mineralele sunt reprezentate de granule de Fe, Cu, K, Ca. Unele incluziuni citoplasmatice reprezint produi de elaborare ai celulelor, precum granulele de zimogen, granulele de mucigen, hormonii i pigmenii. Pigmenii pot fi de natur endogen sau exogen. n categoria pigmenilor endogeni amintim pigmenii carotenoizi, pigmenii cromolipoizi, pigmenii melanici i pigmenii cu nucleu tetrazolic. Pigmenii exogeni sunt reprezentai de o serie de substane colorate de diferite origini, care, acumulate n celule pot determina devierea esuturilor de la coloraia lor specific natural (de exemplu particulele de praf, de crbune, pulberi de fier, sau nisipuri foarte fine). 2.3. Nucleul celular Nucleul celular reprezint centrul de stocare a informaiei genetice precum i centrul de coordonare i control a tuturor activitilor celulare. Stocarea informaiei genetice este posibil datorit existenei n structura sa a cromatinei cromozomilor, respectiv a ADN-ului, care este depozitarul informaiei genetice. Cordonarea i controlul activitilor celulare se realizeaz prin controlul asupra sintezei de proteine structurale i enzime. 2.3.1. Caractere morfologice generale Nucleul se gsete n toate celulele organismului animal, cu excepia hematiilor i trobocitelor din sngele de mamifere precum i a celulelor din centrul cristalinului, care sunt anucleate. Forma nucleului celular este foarte variat: sferic (n celulele ovoide, sferice, poliedrice, cubice), alungit, de bastona (n celulele musculare netede sau n celulele prismatice i cilindrice), turtit sau aplatizat (n celulele pavimentoase, mezoteliale sau n cele care acumuleaz produse de sintez) (fig.46). n celulele care realizeaz diapedeza (neutrofilul, i alte leucocite) nucleul este lobat, prezentnd forme foarte variate. Nucleul prezint forme de litera Z,C,T,U n neutrofil, respectiv de bob de fasole, bolovan, litera D, pantof, sau litera C n monocit. Exist i forme de nuclei nmugurii n unele celule poliploide (megacariocitele din mduva osoas hematogen) sau n celulele maligne.

66

Fig. 46 Forma, poziia n celul i numrul nucleilor n diferite celule din organismul animal (dup Teuan, V., 2000):
1 - nuclei sferici n celula cubic, sferic, pancreatic i n neuron; 2 - nucleu ovoidal n celula cilindric, caliciform, prismatic, n hematia de pasre; 2 - nucleu ovoidal aplatizat i periferic n adipocit; 3 - nucleu n form de bastona unic i central n leiocit; 4 - nucleu discoidal aplatizat n celula pavimentoas; 5 - nuclei multipolari dispui periferic i n form de bastona n rabdocit; 6 - nuclei multilobai n neutrofil; 7 - nucleu bilobat (halter) n eozinofil; 8 - nucleu mare de form variat n monocit.

Nucleul celular prezint o anumit plasticitate, care i permite ca n anumite situaii sub aciunea unor factori mecanici intracelulari acesta s se deformeze i s aib forme foarte diferite fa de forma celulei n care se gsete (neutrofilele i monocitele sunt aproape sferice, dar au nuclei cu forme mult diferite i foarte variate). n general, nucleul celular ocup o poziie central n celul, aceasta fiind o poziie "strategic" n rolul de centru coordonator i de comand al acestuia. n celulele care sintetizeaz i acumuleaz produse de secreie sau de rezerv (celulele caliciforme, celulele adipoase) nucleul se poate gsi ntr-o poziie excentric. Apoi nucleul celular mai poate fi plasat ntr-o. n celulele acinilor seroi din pancresul exocrin sau din parotid i n enterocite nucleul are o poziie medio-bazal (la limita dintre treimea bazal i mijlocie a celulei). Nucleul poate fi plasat n poziie bazal -aproape de polul bazal al celulei n celula caliciform din epiteliul traheal i intestinal. n spermatozoid nucleul este plasat n interiorul capului celular. Privitor la numrul de nuclei n celule, regula general acceptat este "o celul un nucleu", cu unele excepii: exist celule anucleate (hematia din sngele de mamifer), dar exist i celule cu mai muli nuclei (unele hepatocite i condrocite sunt binucleate, osteoclastele pot avea 3-40 de nuclei, iar rabdocitul poate avea 120-500 de nuclei).
67

Se cunoate celula gigantic LANGHANS descris n tuberculoz, n care exist zeci de nuclei dispui la periferia citoplasmei n form de coroan sau de potcoav, precum i celulele maligne, n care sunt de asemenea muli nuclei. n celulele sntoase prezena mai multor nuclei denot o activitate metabolic mai intens, ns, n cele bolnave, acest lucru este legat desigur de aspectele patologice respective. Dimensiunile nucleului variaz ntre 4 i 50 : diametrul nucleului spermatozoidului este de 4-5 iar al nucleulului ovulului de 40-50 , lungimea nucleului leiocitului este de 5 25 iar grosimea de 1 3. Variabilitatea mai mare a dimensiunilor celulare se explic pe baza proprietilor citoplasmei, dar i pe acela c n toate celulele, nucleul ndeplinete aceeai funcie de baz i conine aceeai cantitate de ADN. Nucleul este mai mare n celulele tinere dect n celulele senescente. O anumit variaie a dimensiunilor i a volumelor nucleare este imprimat i de ritmul circadian i gradul de ploidie Raportul nucleo-plasmatic (N/P) este raportul volumetric dintre nucleu i citoplasm i se exprim prin relaia: NP=Vn/(Vc-Vn) unde Vn este volumul nucleului, Vc este volumul celular iar Vc Vn este volumul citoplasmei celulare. Raportul nucleoplasmatic (N/P) variaz ntre limite largi 1/3 1/20, avnd o valoare medie optim de 1/7 1/10. Raportul nucleoplasmatic este un parametru caracteristic fiecrui tip celular; el trebuie s fie meninut constant, perturbarea acestuia constituind un impuls care declaneaz, ntre altele i procesul de diviziune celular. Prin diviziune celular sau prin mrirea volumului nuclear se restabilete raportul nucleo-plasmatic (N/P). n condiii patologice raportul nucleoplasmatic (N/P) este complet modificat, cci dac raportul N/P nu poate s fie refcut funcia celulei nceteaz (Teuan, V., 2000). Volumul nucleului celular depinde de dimensiunile pe care le prezint acesta, variind ntre civa zeci de microni cubi i circa 2000 3. Greutatea specific a nucleului celular este mare i este influenat de coninutul de ap i de starea fiziologic a celulei. Cel mai dens i mai greu este nucleolul, apoi urmeaz cromatina i membrana nuclear i la urm sucul nuclear . pH-ul nucleului este slab alcalin, avnd valori de 7,4 7,5 uniti de pH: Vscozitatea sucului nuclear este mai redus dect a citoplasmei (cu excepia ovocitului), iar membrana nuclear este ncarcat cu sarcini electrice pozitive, n timp ce nucleolul i cromatina au sarcini electrice negative (Teuan, V., 2000). Din punct de vedere chimic nucleul celular conine acizi nucleici (ADN i ARN), proteine, lipide, fosfolipide, substane minerale i ap. ADN-ul este o macromolecul format dintr-un numr foarte mare de mononucleotide (104 106) unde este stocat ntreaga cantitate de informaie genetic necesar funcionrii celulei. ADN-ul reprezint aproximativ 10% din substana uscat a nucleului celular.
68

ARN-ul este de trei tipuri: ARNm; ARNt; ARNr i este localizat n nucleol i n carioplasm . Proteinele reprezint 80% din substana uscat a nucleului celular i sunt de dou tipuri: proteine histonice i proteine nonhistonice. Lipidele sunt reprezentate prin fosfolipide i colesterol, reprezentnd cca 5% din substana uscat a nucleului celular. Substanele minerale sunt reprezentate prin cationi metalici bivaleni precum Ca++, Mg++ (necesari pentru activarea enzimelor ce guverneaz metabolismul nucleotidic i cantiti mici de ioni de K+, Na+, Zn++, Cu++, Co++, i P-anorganic. Apa reprezint 50-80% din greutatea total a nucleului celular, fiind legat n cea mai mare parte de nucleoproteine. 2.3.2. Structura i ultrastructura nucleului celular Cele dou elemente componente principale ale nucleului celular sunt membrana nuclear (nucleolema) i matricea nuclear (carioplasma). Carioplasma conine cromatina (cromozomii), nucleolul, ribozomii nucleari, incluziunile nucleare i sucul nuclear. 2.3.2.1 Membrana nuclear (nucleolema) este o pelicul fin cu o structur caracteristic celulelor eucariote, format din dou foie paralele de natur lipo-proteic i o grosime de 7-10 nm fiecare. Cele dou foie sunt separate de un spaiu perinuclear (cisterna perinuclear) larg de 15-30 nm), care are legturi morfologice i funcionale cu RER i cu REN i este umplut cu un material amorf (fig.47 a,b).

a - celul sferic cu nucleu sferic dispus puin excentric: 1 - membrana celular; 2 - nucleu; 3 - RER; 4 - nucleol; 5 - REN; 6 - Aparatul Golgi; 7 - mitocondrii; b - 1 - membran nuclear extern; 2 - membran nuclear intern; 3 - cistern perinuclear; 4 - elemente RER; 5 - REN; 6 - porii din membrana nuclear; 7 - ribosomii legai de membrana nuclear extern i de elementele RER; 8 - cromatina; 9 - nucleolul.
69

Fig. 47 Structura i raporturile dintre nucleu i unele organite citoplasmatice (dup Teuan, V., 2000):

Membrana extern a nucleolemei are ataai pe faa ei citoplasmatic o mulime de ribozomi i prezint continuiti cu reticulul endoplasmatic neted i rugos (RER, REN). Grosimea acestei membrane este de circa 10 nm. Membrana intern a nucleolemei are o grosime de 60 - 100 (6-10 nm), este lipsit de ribozomi i este n contact strns cu cromatima sau cu lamina densa. Cele dou foie ale nucleolemei conin proteine n proporie de circa 70% din masa lor i lipide n proportie de 20% (dintre care 80% fosfolipide i 20% colesterol i acizi grai liberi). Cele dou membrane nucleare se unesc din loc n loc, formnd "porii nucleari" (orificii aproximativ circulare sau octogonale, cu o structur complex i un material anular). Porul nuclear mpreun cu materialul anular structureaz "complexul por". Porii din membrana nuclear au diametrul interior de 50-90 nm i diametrul exterior de 100-120 nm (fig. 48).

Fig.48 Modul de dispunere i dimensiunile porului nuclear cu anuli i diafragm (dup Teuan, V., 2000):
1 - membrana nuclear extern (trilaminar, de natur lipo-proteic., cu structur de mozaic fluid); 2 - membrana nuclear intern (trilaminar, de natur lipo-proteic, cu structur de mozaic fluid); 3 - cisterna perinuclear larg de 200-250 ; 4 - legtura membranei nucleare externe cu elemente ale RE; 5 - tubul aparinnd RE; 6 - por cu anul (lumenul central); 7 - subanuli; 8 - ribosomi ataai de membrana nuclear extern; 9 - proteinele (extrinseci i intrinseci ale celor dou membrane nucleare); 10 - bistratul fosfolipidic al celor dou membrane nucleare.

Porii din membrana nuclear sunt plasai relativ uniform pe suprafaa acesteia, la distane de aproximativ 150 nm unul de altul. Numrul i frecvena porilor nucleari este variabil i direct proporional cu intensitatea sintezei de proteine din celul. Numrul porilor din membrana nuclear i diametrul lor este mai mare n celulele n care se produce o intens sintez proteic. Unii pori pot s dispar sau s-i micoreze lumenul atunci cnd celula intr n repaus fiziologic Porii au rol n mijlocirea schimburilor dintre nucleu i citoplasm, prin intermediul lor fcndu-se transferul de informaie genetic de la ADN la ribozomii din citoplasm.
70

Prin porii nucleari trec att molecule mici, cu greuti moleculare mici (sub 5 Kdal.), molecule mari precum : aminoacizii, monozaharidele, proteinele ribozomale i, binenteles, ribozomii nematurai (neosomii), precum i ionii de Na+, K+, Ca++, Mg++, etc. Porii nucleari permit trecerea unor particule cu diametre de peste 30 nm i cu greuti moleculare de peste 100 Kdal, datorit lumenului lor apreciabil. Porii din structura nveliului nuclear sunt de trei tipuri pori simpli, pori cu diafragm i pori cu anuli (pori compleci) (fig. 49). Porii cu anuli sau porii compleci au o structur complex i specific, coninnd o subunitate structural cilindric (anul), care traverseaz ambele membrane ale nucleolemei i se ntinde n citoplasm pe o distan de 20 nm. Pereii cilindrului anulului au o grosime de cca 24 25 nm. Anulul cilindric este format din dou inele - unul plasat la captul citoplasmatic, iar cellalt la captul nucleoplasmatic al porului nuclear. Cele dou inele sunt formate fiecare din cte 8 granule sferice (subanuli) de natur proteic, cu un diametru de 15 nm i dispuse n form de octagon perfect simetric.

Fig. 49 Structura membranei nucleare (dup Teuan, V., 2000):

1 - membrana nuclear extern; 2 - elemente tubulare ale RE; 3 - membrana nuclear intern; 4 - pori nucleari simpli; 5 - pori nucleari cu diafragm; 6 - pori nucleari cu anuli i diafragm (compleci); 7 - pori compleci secionai longitudinal; 8 - cisterna perinuclear.

Fiecare pereche de granule (extern i intern) este unit printro formaiune conic, orientat dinspre peretele porului ctre lumenul su. Exist 8 astfel de formaiuni conice care prin poziia pe care o ocup structureaz diafragma porului nuclear (fig.50). n centrul lumenului porului se gsete uneori o granul central de natur proteic. n complexul por se mai gsesc i 8 pachete de
71

filamente nucleoplasmatice cu o grosime de 4-8 nm, care se prind cu un capt de granulele din inelul intern i cu cellalt se ancoreaz de elemente intranucleare (nucleolul cromatina, elemente fibrilare din lamina dens).

Fig.50 Structura i ultrastructura membranei nucleare (dup Teuan, V., 2000):

1 - membrana nuclear extern; 2 - membrana nuclear intern; 3 - cisterna perinuclear; 4 - elemente ale RE (cisterne, tubuli); 5 - ribosomi ataai de membrana nuclear extern; 5 - subunitatea mare a ribosomilor ataai; 5 - subunitatea mic a ribosomilor ata[ai; 6 - por cu diafragm secionat longitudinal; 7 - por cu diafragm ntreg amplasat n membranele nucleare i liber (n medalion); 8 - lumenul porului (500-550 ); 9 - inelul proteic exterior format din 8 granule proteice sferice cu diametrul de 150 ; 10 - inel proteic interior cu structur identic cu cel exterior; 11 - pachete de filamente proteice cu diametrul variabil 40-80 ; 12 - granul ribo-nucleo-proteic surprins n momentul tranzitrii porului nuclear; 13 - piese conice proteice vzute din exterior; 14 - piese conice secionate longitudinal.

Porii din membrana nuclear sunt ntr-un numr foarte mare i foarte variabil (2x102 5x107), iar suprafaa porilor din membrana nuclear reprezint circa 10% din suprafaa total a membranei nucleare (fig. 51).

72

Fig. 51 Microfotografie electrono-optic ce reprezint o poriune din membrana nuclear pe care se pot observa numeroi pori (dup W W FRANKE, n J. Cell Biol. 32, 1967, citat de Teuan, V., 2000). Membrana nuclear separ coninutul nucleului de cel al citoplasmei, regleaz schimburile dintre nucleu i citoplasm, fiind implicat n procesele de formare a endomembranelor RE i considerat rezerva de endomembrane n celulele care se divid rapid. Nucleolema are i un rol important n procesul de meninere a stabilitii cromatinei ataat pe faa ei intern i n susinerea organitelor celulare (RER, REN, microtubuli, etc), cu care menine raporturi morfologice i funcionale prin faa ei extern. 2.3.2.2. Matricea nuclear (carioplasma) Cuprinde materialul nuclear aflat n limitele membranei nucleare din celula vie. Matricea nuclear este un schelet proteic sprijinit pe faa intern a membranei interne a nucleolemei i are rol esenial n organizarea i funcionarea nucleului; este implicat n procesul de sintez a ADN-ului i ARN-ului. Matricea nuclear cuprinde dou pri: matricea nuclear propriuzis i fraciunea labil a matricei nucleare. Matricea nuclear propriuzis este o fraciune solid, format dintr-o reea de proteine stabile cu greutate molecular mare; aceast fraciune este echivalentul nuclear al citoscheletului citoplasmatic. Matricea nuclear propriu-zis este format din trei componente- componenta membranoas, reeua fibrilar (matricea fibrilar) i componenta fibrilar nucleolar. Componenta membranoas conine lamina dens i complexul por cu care are raporturi morfologice si funcionale intime. Lamina dens este o zon de material fibrilar, groas de 150-800 (15-80 nm), plasat pe faa intern a membranei interne a nucleolemei (i care este n conexiune cu elementele fibrilare ale complexului por). Proteinele pe care le conine aceast component (lamina dens),
73

reprezint 2- 3% din totalul proteinelor din nucleu i sunt reprezentate n proporie de 95% de proteinele nehistonice. Acestea sunt proteine acide foarte heterogene ca greutate molecular (10-300 Kdal.) i conin triptofan. n lamina dens exist i proteine histonice dar n proporie mult mai redus (3%), acestea fiind bazice i nu conin triptofan (Teuan, V., 2000). Matricea (componenta) fibrilar este format din granule cu diametrul de 200 (15-20 nm) i din pachete dense de fibrile proteice. Fiecare fibril are un diametru de circa 50 (5 nm). Aceste fibrile poart denumirea de "matrixin". Matricea fibrilar conine proteine n proporie de 20% (din totalul proteinelor din nucleu); ADN n proporie de 1,2 %; ARN n proporie de 0,5% i fosfolipide n cantitate foarte redus. Dintre proteine 98,2% sunt nehistonice, majoritatea fiind acide. n componenta fibrilar a matricei nucleare nu exist proteine histonice (Teuan, V., 2000). Componenta fibrilar nucleolar este o reea de filamente care se ntinde pn la nivelul prii granulare i fibrilare din nucleol. Este format din polipeptide i se crede c ar avea rol de suport pentru depozitarea granulelor ribozomale. Fraciunea labil a matricei nucleare este legat n mod lax de matricea propriu-zis, ca i de nucleol i de cromatin. Aceast fraciune este compus din proteine solubile, cu greutate molecular mic, enzime, ATP, ioni de Na+, K+, Ca++, Mg++ i ap. Aceasta din urm ocup o proportie de circa 89%, imprimnd acestei fraciuni un aspect lichid (componenta lichid a matricei nucleare). Matricea nuclear este o structur dinamic, prezentnd contractilitate, care este dependent de prezenta ionilor de Ca++i de Mg++, dar nu i de prezena ATP-ului. Datorit acestui fapt, volumul nuclear se poate modifica prin variaiile de concentrare ale cationilor bivaleni amintii mai sus dar i ale celor monovaleni ( Na+, K+) (Teuan, V., 2000). 2.3.2.3 Cromatina nuclear Cromatina nuclear reprezint forma de existen interfazic (desfurat, relaxat) a ADN-ului, respectiv a cromozomilor. Din punct de vedere chimic cromatina este alctuit din ADN i proteine histonice i nehistonice. Cantitatea de ADN pe care o conine genomul unei specii (valoarea C) este caracteristic, la fiecare specie se nregistreaz un anumit numr de cromozomi, respectiv o anumit cantitate de ADN. Cromatima conine: 30% ADN, 40% proteine histonice, 25% proteine nehistonice acide i 5% ARN (care nu face parte din structura cromatinei sau a cromozomilor, el aprnd n componena cromatinei datorit metodelor de separare insuficient de bine puse la punct pn n prezent) . Cantitatea de ADN din celule este constant i specific, spre exemplu, n celula bacterian, E.Coli exist 0,01 picograme (pg) de ADN.
74

n celulele de la musculia de oet (Drosophyla Melanogaster) exist de zece ori mai mult ADN, adic 0,1 pg; n celulele din organismul mamiferelor de ferm (taurine, ovine, cabaline, porcine, bubaline) exist 4-8 pg de ADN, iar n celula uman cantitatea de ADN este apreciat la 6,5 pg. Cea mai mare cantitate de AND s-a constatat c exist la salamandr, i anume 168 pg (Teuan, V., 2000). Histonele sunt proteine bazice existente numai n celulele de tip eucariot (fig. 52).

Fig. 52 Cromatina nuclear - structur i ultrastructur (structura nucleozomului) (dup Teuan, V., 2000).:
a - celul sferic (1 - membrana celular; 2 - REN; 2 - Aparatul Golgi; 2 - RER; 3 - membrana nuclear 4 - nucleol; 5 - cromatin); b - nucleul celulei sferice (1 membran nuclear; 2 - pori nucleari; 3 - RER; 4 - cromatina nuclear; 5 - REN; 6 - nucleol); c - fragment din cromatina nuclear (4bucle de cromatinformate din firul solenoid gros); d - fibra goas de cromatin (bobina sau solenoidul) (1 - firul subire de cromatin; 2 - spirele bobinei; 3 - nucleozomii dispui cap la cap); e - firul subire de cromatin (1 - molecula de AND; 2 - nucleozomi); f - nucleozomi nlnuii (1 - ADN-linker; 2 - spire de AND ce aparin nucleozomilor; 3 - cilindri histonici; 4 - proteine histonice H1); g - nucleozom separat (1 - octomer histonic; 2 - cele dou spire de ADN ce nfoar cilindrul histonic; 3 - ADN-linker; 4 - proteine histonice de tip H2A; 5 - protein histonic de tip H1); h - proteinele histonice (1 - H1; 2 - H2A; 3 - H2B; 4 - H3; 5 - H4); toate sunt dimeri cu excepia H1.
75

Lizina i arginina coninute sunt purttori de sarcini electrice pozitive, ceea ce explic legarea histonelor de sarcinile electrice negative ale gruprilor fosfat din structura ADN-ului. Principala funcie a proteinelor histonice const n contribuia lor la procesul de "mpachetare" a ADN-ului n nucleu, concretizat n organizarea supramolecular a ADN-ului sub form de nucleozomi. n cursul desfurrii ciclului celular proteinele histonice sunt supuse unor aciuni i modificri chimice care constau n acetilri, metilri sau fosforilari (Teuan, V., 2000). n spermatozoid histonele sunt nlocuite cu protamine - proteine foarte bazice, foarte bogate n arginin, cu o greutate molecular foarte mic (4 Kdal) i o lungime de numai 33 de aminoacizi i care apar n nucleul spermatozoidului n cursul spermiogenezei. Cromatina este de dou tipuri: eucromatina (cromatina adevrat) i heterocromatina (alt cromatin). Eucromatina permite enzimei ARN polimeraza II s sintetizeze ARNm (s copie informaia genetic de pe genele coninute). Eucromatina se poate mpri n eucromatin activ i eucromatin permisiv. Eucromatina activ este fraciunea de cromatin de pe care se face n mod continuu transcripie de informaie genetic i deci sinteza de proteine. Aceast fraciune asigur viaa normal a celulei. Eucromatina permisiv este fraciunea de cromatin potenial activ, deci poate deveni activ ca urmare a aciunii unor semnale modulatoare specifice (hormoni), dar care, n condiii normale, este blocat de ctre agenii represori i depresori. Aceti ageni represori i depresori sunt, n principal, reprezentai prin proteinele nehistonice, acestea reglnd transcriptibilitatea informaiei genetice active (Teuan, V., 2000). Heterocromatina este o cromatin puternic spiralizat, puternic condensat i care se coloreaz intens cu colorani bazici. Datorit faptului c este puternic condensat, accesul ARN-polimerazei II nu este asigurat, deci aceast cromatin nu este transcriptibil sau altfel spus, ea este inactiv din punct de vedere metabolic. Din punct de vedere biochimic ntre eucromatin i heterocromatin nu exist nici o deosebire, ceea ce difer, fiind gradul de spiralizare sau de condensare. Heterocromatina poate fi de dou feluri: heterocromatina constitutiv i heterocromatina facultativ. Heterocromatina constitutiv este cromatina constant condensat n interfaz, genetic inactiv; este localizat n imediata vecintate a centromerului pe ambii cromozomi omologi i conine gene structurale i de pe ea nu se face niciodat transcripie de informaie genetic. Heterocromatin constitutiv conine ADN-ul repetitiv sau satelit. ADN-ul repetitiv este un ADN n care scurte secvene nucleotidice se repet de foarte multe ori (Teuan, V., 2000). ADN-ul nalt repetitiv este cel n care secvenele nucleotidice se repet de sute de mii de ori i reprezint 10% din cantitatea total de ADN din celul (nucleu). ADN-ul mediu repetitiv este cel n care
76

nucleotidice se repet de sute sau de zeci de mii de ori, i reprezint 5% din cantitatea total de AND (Teuan, V., 2000). Heterocromatina facultativ este o cromatin condensat care conine gene structurale dar inactivate (de pe ele nu se face transcripie de informaie genetic). Se cunosc dou tipuri de heterocromatin facultativ: heterocromatina facultativ autozomal i heterocromatina facultativ gonozomic. Heterocromatina facultativ autozomal se gsete pe cromozomii somatici (autozomi) i este plasat la nivelul centromerului. Heterocromatina facultativ gonozomic se gsete pe cromozomii sexului (cromatina "X", la sexul femel sau cromatina "Y" la sexul mascul). Cromozomii sexului se mai numesc i heterocromozomi sau gonozomi. 2.3.2.4. Cromozomii 2.3.2.4.1. Morfologia, structura i clasificarea cromozomilor Cromozomii reprezint cromatina condensat, vizibil n timpul diviziunii celulare sub forma unor filamente mai lungi sau mai scurte. Ei pot fi clasificai n cromozomi interfazici (mai puin vizibili) i cromozomi mitotici. Cromozomii mitotici (metafazici) pot fi clasificai dup mai multe criterii. Cromozomii metafizici au lungimi cuprinse ntre 0,2 5,0 i diametre de 0,2 2,0 . Exist i excepii de la aceste limite i anume:- cromozomii pitici (microcromozomii) pui n eviden n celulele psrilor, i cromozomii gigani (politeni) pui n eviden n celulele glandelor salivare de la Drosophila Melanogaster. Cromozomii metafazici sunt alctuii din dou filamente longitudinale structurate identic, numite brae sau cromatide i unite printr-o zon mai ngust numit constricie primar. La nivelul constriciei primare (care structureaz centromerul), n matricea cromozomial se gsete un centriol. (fig. 53 a). La exteriorul fiecrei cromatide se gsete o membran cromozomial fin n interioriorul creia se afl matricea cromozomial i cte dou filamente dublu spiralate de ADN, complexat cu histone (cromoneme). Pe cromoneme din loc n loc sunt nite formaiuni granulare (cromomere). Cromonemele au grosimi de 0,3 0,5 i sunt rsucite n spiral, formnd un dublu helix. Extremitile terminale ale cromatidelor se numesc telomere i prezint proprieti indispensabile pentru structura i funciile normale ale cromozomilor (telomerele previn fuzionarea cromozomilor i menin o anumit ordine a cromozomilor interfazici n interiorul nucleului. Pe cromozomi poate exista, un singur centromer (cromozomii monocentrici sau, n cazuri de anomalii cromozomiale, pot exista doi sau mai muli centromeri ( vor fi cromozomii dicentrici, respectiv
77

policentrici). La nivelul fiecrui centromer, n structura acestuia, alturi de centriolul deja amintit, se gsesc doi cinetocori. Cinetocorii sunt formaiuni n form de discuri cu dimensiuni de 5 nm grosime i de 25 nm diametru, prin intermediul crora fiecare cromatid se leag de fibrele (microtubulii) fusului de diviziune. Pe cromozomi se afl i construcii secundare, care se deosebesc de cele primare prin faptul c la nivelul lor nu apar deviaii unghiulare ale segmentelor pe care le unesc i pot apare pe una, sau pe ambele cromatide ale cromozomilor, fiind mai superficiale sau mai adnci. Cnd sunt mai adnci separ a cromozomului mam de un alt fragment cromozomial, mai mic, numit cromozom satelit. Cromozomul satelit (un fragment de cromozom) poate fi rotund-,cu diametrul egal cu cel al cromozomului mam de care este legat prin filamentul subire de cromatin, sau poate avea un diametru mai mic dect acesta. Cromozomii pot participa la formarea nucleolilor, caz n care se numesc cromozomi nucleolari. Dup poziia centromerului, cromozomii se pot clasifica n: cromozomi metacentrici; cromozomi submetacentrici; cromozomi acrocentrici (subtelocentrici) i cromozomi telocentrici.

Fig.53 Structura cromozomilor la celulele eucariote (mamifere) (dup Teuan, V., 2000)
(a, a, b, c, d, e) 1 - cromatide; 2 - membran cromozomial; 3 - matrice cromozomial; 4 constricie primar cu centromer; 5 - centrioli; 6 - cinetocori; 7 - constricie secundar; 8 - satelit cromozomial; 9 - cromoneme; 10 - cromomere; 11 - bucle de cromatin (formate din bobina de cromatin, cu o grosime egal cu limea de 3000 ); 12 band cromozomial format din dispunerea n zig zag a mai multor bucle de cromatin; 11 - fibra groas(bobina) de cromatin, cu diametru de 300 ; 13 - fibra subire de cromatin groas 110 i compus din nucleosomi; 14 - nucleosomi; 15 - cilindru histonic lung de 55 ; 16 - cele dou spire de AND dublu catenar dispuse n jurul cilindrului histonic; 17 - ADN-linker; 18 - proteine histonice (H2A i H2B).
78

Cromozomii metacentrici sunt cei la care centromerul este localizat central sau n imediata apropiere a centrului. Astfel de cromozomi au braele egale sau aproape egale (fig. 54 a i b).

Fig. 54 Clasificarea cromozomilor monocentrici dup poziia centromerului: (dup Teuan, V., 2000):
a i b cromozomi metacentrici; c - cromozom submetacentric; d - cromozom acrocentric; e - cromozom telocentric; 1 - cromatide; 2 - centromer cu constricie primar; 3 - constricie secundar; 4 - satelit; 5 - cromoneme.

Cromozomii submetacentrici au centromerul localizat excentric (la distan mai mare de centru), i braele (cromatidele) inegale (fig. 54 c). Cromozomii acrocentrici au care centromerul este localizat aproape de extremitatea cromozomului, prezentnd cte o cromatid lung i una foarte scurt, slab vizibil (fig. 54 d). Cromozomii telocentrici au centromerul localizat la captul cromozomului,avnd doar brae lungi; aceti cromozomi au o form de bastona (fig. 54 c). Numrul cromozomilor variaz n raport cu specia, dar este constant la aceeai specie. Astfel, la cal exist un numr de 64 de cromozomi, la zebr 32 cromozomi, la catr 63 cromozomi, la taurine 60 cromozomi, la oaie 54 cromozomi, la capra domestic 60 cromozomi, la porc 38 cromozomi, la cine 78 cromozomi, la pisic 38 cromozomi, la iepure 44 cromozomi, la oarece 40 cromozomi, la obolan 40 cromozomi iar la om 46 cromozomi. Celulele sexuale sau gameii (ovulul i spermatozoidul) conin cte un singur set de cromozomi care este notat cu n, aceste celule fiind celule haploide (haplos=simplu). Celulele somatice (din corp) conin dou seturi identice de cromozomi, dintre care unul este de origine matern i altul de origine patern, cele dou seturi fiind notate cu 2n iar celulele respective sunt celule diploide (diplos=dublu). Deci fiecare cromozom dintr-un set i are un corespondent (identic ca morfologie i structur) n cellalt set. Cei doi cromozomi identici formeaz o pereche i se numesc cromozomi omologi sau autozomi (cromozomi somatici). Pe lng acetia, n fiecare celul somatic exist i cte o pereche de cromozomi ai sexului, care difer la femel i mascul,
79

respectiv sunt de tipul X la sexul femel (XX) i de tipul Y la sexul masculin (XY). Cromozomii de sex se mai numesc i heterocromozomi sau gonozomi. Spre exemplu la taurine, la vaci, vor exista 29 perechi (29x2=58) de autozomi i o pereche (1x2=2) de gonozomi, de tipul XX, deci formula cromozomial va fi 60 XX. La aceeai specie (taurine), dar la sexul mascul (taur) vor exista 29 perechi (29x2=58) de autozomi i o pereche (1x2=2) de gonozomi, formula cromozomial fiind deci 60 XY (Teuan, V., 2000). Fiecare pereche de cromozomi autozomi este format din 2 cromozomi omologi pe care genele sunt dispuse n aceeai loci. Cromozomii de sex nu sunt omologi, cei doi heterozomi fiind diferii unul de altul din punct de vedere morfologic. La sexul femel din cei doi gonozomi XX numai unul este activ iar cellalt este inactiv (blocat), constituind cromatina sexual sau cromatina BARR(Teuan, V., 2000). Totalitatea caracterelor morfologice (numr, mrime, form, poziia centromerului, numrul de constricii secundare, numrul de satelii, etc.) ale cromozomilor din celulele diploide alctuiesc cariotipul. Acesta poate fi reprezentat grafic constituindu-se idiograma. Precizarea locurilor pe care le ocup diferitele gene pe cromozomi (loci) poart denumirea de hart cromozomial. Fiecare cromozom poart un numr specific de gene, fiecare dintre acestea avnd funcii bine stabilite (V., 2000). 2.3.2.4.2 Ultrastructura i organizarea supramolecular a cromozomilor eucariotici n celulele eucariote, cromozomii sunt alctuii din ADN care este complexat cu proteine histonice, proteine nehistonice i puin ARN. Proteinele histonice se mpart n cinci clase: histone H1; histone H2A, histone H2B, histone H3 i histone H4. Proteinele nehistonice sunt legate de ADN i intervin n procesul de exprimare a genelor structurale. n structura cromozomilor se gsesc i o serie de enzime de sintez a ADN-ului i a ARN-ului, precum i enzime de scindare a celor doi acizi nucleici. AND-ul se mpacheteaz n cromozomi sub form de uniti supramoleculare numite nucleozomi; are o greutate molecular de 6 x 107 Kdal i o lungime a firului dispus n dublu helix de 3 cm (mpachetat ntr-un spaiu cu o lungime de 5 ). Nucleozomul este unitatea ultrastructural supramolecular de organizare a filamentului de cromatin, care se repet de un mare numr de ori. Nucleozomul este un octamer histonic de forma unui cilindru turtit care este nconjurat de dou spire de ADN dispus dublu
80

helicoidal. Cele dou spire de ADN dublu helicoidal conin 200 de perechi de baze azotate (sau perechi de nucleotide) i au o lungime de 680 . Cilindrul histonic al nucleozomului este format din patru proteine histonice: H2A; H2B; H3 i H4, fiecare cu cte dou molecule (2x4=8). Nucleozomul nu conine proteine nehistonice, iar histona H1 nu intr n alctuirea lui ci este ataat lateral la intrarea i la ieirea ADN-ului din nucleozom. Legtura dintre nucleozomi se realizeaz prin intermediul duplexului de ADN. Fragmentul care leag doi nucleozomi dispui succesiv se numete ADNlinker (ADN de legtur). Grosimea firului de ADN nfurat n jurul nucleozomului este de 20 nm. Nucleozomii se repet i se nir ca mrgelele pe a, structurnd n acest mod filamentul subire de cromatin, cu o grosime de 11 nm (fig. 55). Cromatina se gsete sub form de fibre de cromatin- rezultate din rsucirea filamentului subire de cromatin n spiral, ajungndu-se astfel la o bobin sau la un solenoid cu diametrul de 30 nm i pasul spiralei de 11 nm .

Fig. 55 Modul de mpachetare complexare i dispunere a ADN-ului i cromatinei n structura cromozomului (dup H. Gray 1973, citat de Teuan, V., 2000).
1 - cromozom submetacentric; 2 - cromatide; 3 - constricie primarcu centromer; 4 constricie secundar; 5 - satelit; 6 - cromomer 7 - extremitatea cromatidei; 8 - bucle de cromatin superspiralizat; 9 - fibra groas de cromatin (bobin sau solenoid) (diametrul de 300 ); 10 - fibr sub]ire de cromatin (diametrul de 110 );11 - molecula de ADN; 12 - baze azotate purinice i pirimidinice.

81

n centrul fibrei de cromatin se afl un spaiu gol cu un diametru de 11 nm, fiecare spir a bobinei cuprinznd cte 6 nucleozomi. Lungimea firului de ADN dintr-o spir a bobinei este de 68x0,66=408 nm. Pe fiecare bra cromozomial (cromatid) se dispun o serie de benzi, fiecare cu o lime de 700 nm i o lungime egal cu limea cromatidei respective. mpreun, cele dou cromatide pot avea o grosime de 1400 nm . Nucleozomul nu este o unitate de informaie genetic ci este o unitate de mpachetare a ADN-ului. ADN-ul care este nfurat pe un nucleozom (146 nucleotide) este prea scurt pentru a corespunde unei gene structurale. O gen structural este compus din aproximativ 1000 perechi de nucleotide, n timp ce ADN-ul nfurat pe un nucleozom conine 200 de perechi de baze azotate nucleotide. n celulele eucariote, genele structurale sunt discontinue (n structura lor alterneaz secvenele care codific aminoacizii cu cele care nu codific aminoacizii). Secvenele de gen care codific aminoacizii i care se exprim n structura unui lan polipeptidic se numesc "exoni", iar cele care nu codific aminoacizii i deci nu se exprim n structura unei proteine, se numesc "introni". 2.3.2.4.3 Nucleolul i funciile lui Nucleolul este o formaiune corpuscular intranuclear prezent numai n interfaz, a crei funcie principal const n biogeneza ribozomilor citoplasmatici (cu excepia celor mitocondriali). Nucleolul ocup o poziie deosebit de important n realizarea transferului de informaie genetic ntre nucleu i citoplasm, fiind sediul unui considerabil trafic molecular. n nucleol se rezum principalele procese ce au loc n nucleu (replicare, transcripie, transport), acest organit fiind un intermediar ntre cromozomi i citoplasm (Teuan, V., 2000). n toate celulele eucariote exist nucleol. Dimensiunile acestui organit sunt apreciate la 1-2 n diametru, nucleolul reprezentnd circa 30% din volumul nucleului. Mrimea nucleolului poate varia n funcie de tipul i activitatea celulei (fig. 56). n celulele n care se realizeaz o activitate intens de sintez proteic (care necesit un numr mare de ribozomi), nucleolul va fi mai mare i mai bine evideniat. n spermatozoid sau n celulele musculare, unde sinteza proteic este mai redus, nucleolul este mai mic. Exist, de altfel, un raport nucleo-nucleolar, strict corelat cu activitatea celulei care poate fi un criteriu de identificare a celulelor tinere de cele btrne. Numrul nucleolilor este n direct legtur cu gradul de ploidie al celulei, existnd cte un nucleol pentru fiecare set de cromozomi (fig. 57).
82

Fig. 56 Forma, poziia, numrul i mrimea nucleolului din nucleii ctorva tipuri de celule existente n organismul animal (dup Teuan, V., 2000):
a - celul prismatic din epiteliul mucoasei glandei Cowper cu nucleu oval binucleolat (2,4-2,8 ); b - celul cubic folicular tiroidian cu nucleu sferic i cu 5 nucleoli sferici dispui periferic apoape de sau n contact, cu membrana nuclear intern; c - neuron multipolar din structura retinei cu nucleu sferic central mononuclear, nucleolul este sferic dispus excentric i este de (2,13-2,37 ) mrime; d - nefrocit cu nucleu sferic mononucleat. Nucleolul este sferic dispus centralsau paracentral i are diametru de (2,13-2,37 ); e celul pancreatic cu nucleul mare, sferic, dispus central i binucleolat.; nucleolii sunt sferici, legai de membrana nuclear intern, cu diametru de (2,2-2,4 ); f - hepatocit ce prezint nucleul sferic sau oval mononucleolar de form oval (2,4-4,3 ) sau inelar (2,8-3,5 ) dispus central sau uor excentric; g - neuron Purkinje cu nucleu mare, sferic cu un singur nucleol sferic, dispus central i cu un diametru de 5 ; h neuron Betz, piramidal cu nucleu mare oval sau sferic i cu un nucleol de form triunghiular dispus excentric, cu diametru de 3,55 - 4,74 ; i - ovocit `nsoit de celule foliculare cu un nucleol mare de 6 diametru dispus uor excentric; 1 - membrana celular; 2 - nucleu; 3 - nucleol; 4 - dendrite; 5 - axon; 6 - microvili; 7 - corpi tigroizi; 8 - cromatin; 9 - ergastoplasma (RER) n celula pancreatic; 10 - granule de zinogen;11 - microvilii hepatocitelor; 12 - aparatul Golgi; 13 - neurofibrile; 14 - RER n celula hepatic; 15 - celule foliculare; 16 - vitelus nutritiv n citoplasma ovocitului.

83

Fig. 57 Nucleolul n hepatocit (poziie, mrime, form) (dup Teuan, V., 2000)
a - hepatocit cu membran, citoplasm, i nucleu mononucleolar mare (2 - 4 ), sferic, dispus paracentral (1 - membrana celular cu microvili; 2 - membrana nuclear; 3 - cromatina; 4 - nucleolul; 5 - RER; 6 - Aparatul Golgi; 7 - REN; 8 - mitocondrii); b - nucleul i nucleolul hepatocitului (1 - membrana nuclear extern; 2 - membrana nuclear intern; 3 - cistern perinuclear; 4 - pori cu anuli n membrana nuclear; 5 - cromatin sub form de bucle; 6 - nucleoplasma; 7 - nucleolul; 8 - bucle de cromatin nucleolar).

n nucleul celular nucleolul este plasat central sau paracentral.. Exist i alte poziii, iar n unele momente nucleolul se poate deplasa i poate s vin n contact cu membrana nuclear intern. Nucleolul este cea mai dens formaiune din celul, datorit faptului c el conine circa 90% substan uscat (SU) i numai 10% ap. Nucleolul conine patru pri: componenta fibrilar (pars fibrosa); componenta granular (pars granulosa); componenta cromozomial (pars cromozoma) i componenta astructurat (pars amorfa) (fig. 58). Pars fibrosa este format din filamente cu grosimea de 5 nm i lungimea de 30-40 nm, grupate n pachete i organizate ca o reea (fig. 58 d i e) i este reprezentat de ADN-ul care conine informaia genetic necesar pentru sinteza ARN-ului ribozomal i de produsul primar al acestei sinteze (ARNr-45 S). Pars granulosa este alctuit din granule, fiecare cu un diametru de 15-20 nm, care sunt similare dar nu identice ribozomilor constituind precursorii acestora (fig. 58 f). Componenta granular este dominant, n hepatocit ea reprezentnd circa 70%. Pars cromozoma este alctuit din filamente cu grosimea de 1011 nm, fiind repartizat la periferia nucleolului (de cromatina perinucleolar) i n interiorul acestuia ca nite benzi (cromatina intranucleolar). n hepatocit pars cromozoma reprezint 5% din volumul nucleolului.
84

Fig. 58 Structura nucleolului la hepatocit (dup Teuan, V., 2000)::

a - nucleolul vzut la ME cu elementele sale componente; b, c, d, e, f, - detalii ale componentelor nucleolare, descifrate la ME: (1 - partea cromozomic periferic (cromatina perinuclear); 1 - bucle de cromatincu grosimea de 300 - 330 ; 1 - filament de cromatin gros de110 ce con]ine genele necesare sintezei de ARNr; 2 - cromatina intranucleolar cu aceeai structur i rol i cea extranucleolar; 3 - partea fibrilar a nucleolului; 3 - pachete de filamente groase de 50 i lungi de 300 - 400 , constituite din molecule de ARNr-45S (precursor); 4 - partea granular a nucleolului, compus din granule cu diametrul de 150 - 200 , sferice sau ovale i care conin ARNr de diferite lungimi i greuti moleculare, precum i proteine ribosomale; 5 - partea amorf a nucleolului.

Pars amorfa este omogen i astructurat, cu o densitate medie i este de fapt un fel de matrice nucleolar. Nucleolul nu are membrane nici la periferie nici la interior. n funcie de existena simultan a celor patru componente nucleolare, nucleolii sunt de trei tipuri: nucleoli reticulari, nucleoli compaci si nucleoli inelari. Nucleolii reticulari sunt cei care prezint structura descris anterior, nucleolii compaci sunt cei la care nu se poate distinge ultrastructura (aa sunt cei din limfocite), iar cei inelari sunt cei la care pars fibrosa unit cu pars granulosa, se dispune periferic ca un inel i circumscrie o lacuna central n care se gsete partea amorf. Din punct de vedere chimic, nucleolul este format din 3%, ADN 7%, ARN 90% proteine, precum i urme de lipide i ioni minerali precum: Mg++, Ca++, Zn++, etc.. ADN-ul este reprezentat de pars cromozoma i de pars fibrosa i este format de prile cromozomilor unde se gsesc genele care poart informaia genetic necesar pentru sinteza ARN-ului ribozomal (fig.59).
85

Fig. 59 Biosinteza ARNr i biogeneza ribosomilor (dup Teuan, V., 2000):

A - celul; B - nucleul acestei celule; C - pocesele biosintetice care se petrec n nucleol; A - (1 - membrana celular); B - (2 - membrana nuclear; 3 - Aparat Golgi; 4-RER; 5-REN; 6 - nucleol; 7 - partea cromozomial a nucleolului; 8 - partea fibrilar a nucleolului; C-(1-ADN nucleolar; 2-ARN polimeraza I; 3-ARNr 45 S; 4-ARNr 41 S; 5-endonucleaza; 6-convertaza; 7 - ARNr 20 S; 8 - ARNr 28 S; 9 - metilaze; 10 - ARNr 18 S; 11 - ARNr 28 S; 12 - proteine ribosomale specifice Sm; 12 - proteine ribosomale specifice SM; 13 - subunitatea mic a ribosomilor; 14 - subunitatea mare a ribosomilor; 15 - ribosom matur de tip 80 S.
86

ARN-ul predomin n nucleol, fiind reprezentat de ctre ARNul ribosomal aflat n diferite faze de maturare. cromozomi i citoplasm. Proteinele nucleolare sunt reprezentate de enzime implicate n procesele metabolice nucleolare (metilaze, convertaze, endonucleaze, ARN-polimeraze, etc.). Nucleolul ndeplinete multiple funcii: sinteza ARN-ului ribosomal (ARNr) i biogeneza ribozomilor, reglarea biosintezei de ARNr, transferul ARN-ului mesager i a ARN-ului de transport n citoplasm, pregtirea mitozei. Cea mai important funcie a nucleolului este sinteza ARNr i biogeneza ribozomilor. ADN-ul din nucleol (pars fibrosa i pars cromozoma) joac rol de matri pentru ARN-ul ribosomal i reprezint organizatorul nucleolar. Molecula de ARNr-45S este apoi tiat de ctre o enzim (endonucleaza) i rezult o molecul mai mic i anume ARNr-41S. Acest ARN va fi supus ulterior aciunii unei convertaze i va rezulta ARNr-20S i ARNr-32S n continuare ARNr-20S este metilat (prin intervenia unei metilaze) i transformat (prin ndeprtarea unui fragment) n ARNr-18S. Acest ARN (ARNr-18S) va prsi nucleolul, se va combina n nucleu cu proteinele ribozomale specifice care au fost sintetizate n citoplasm (pe ali ribozomi) i dup ce se vor forma complexele ribonucleoproteice (CRNP), acestea vor trece prin porii membranei nucleare n citoplasm unde se va structura subunitatea ribozomal mica (Sm-40S) a ribozomului (Teuan, V., 2000). Cele dou subuniti ribozomale (mare i mic) se unesc n citoplasm formnd ribozomii maturi, care se pot dispune izolat sau se cupleaz cu ARNm, formnd astfel poliribozomii sau polizomii. Reglarea biosintezei de ARNr se realizeaz printr-un mecanism de conexiune invers (feed-back). n nucleolul celulei se vor forma doar atia ribozomi ci sunt necesari pentru satisfacerea procesului de sintez a proteinelor. Dac activitatea biosintetic a celulei diminueaz atunci biogeneza ribozomilor prin nucleol se va reduce sau se va opri. Cnd biosinteza proteic este reluat sau intensificat numrul de ribozomi va crete evident printr-o activitate sporit la nivelul nucleolului. Prezena unui nucleol funcional n nucleul celular este o condiie obligatorie pentru a se realiza transferul ARN-ului mesager (ARNm) i a ARN-ului de transport (ARNt) din nucleu n citoplasm. n interfaz (perioada dintre dou diviziuni succesive) prezena nucleolului n nucleu este indispensabil avnd n vedere rolul lui n pregtirea sintezei de proteine. Sinteza de proteine alturi de sinteza altor grupe de substane biochimice (lipide, glucide, enzime, etc.), care se regsete de fapt n procesul de acumulare din celul duce n final la ndeplinirea condiiilor care determin declanarea diviziunii celulare (Teuan, V., 2000).
87

ntrebri 1. Care sunt funciile membranei celulare ? 2. Ce nsuiri are matricea extracelular ? 3. Cte tipuri de specializrimale membranei celulare se disting ? 4. Ce este citoplasma i care este structura acesteia ? 5. Ce funcii ndeplinesc mitocondriile ? 6. Care sunt cele mai ntlnite forme ale nucleului celular ? 7. Ce poziie are nucleul n celul i care sunt factorii care o determin ? 8. Ce sunt cromozomii ? 9. Din ce este alctuit matricea nuclear ? 10. Sub ce form apare cromatina la microscop ? Tem de control Organitele generatoare de energie Referat Alctuii un referat cu tema Microfilamentele -organite ale micrii celulare

88

Capitolul III Reproducerea celular

Reproducerea celulelor se realizeaz prin diviziune, proces n urma cruia dintr-o celul rezult dou celule fiice, identice sau nu cu cea parental. Diviziunea celular este posibil doar dup reproducerea chimic sau molecular a tuturor componentelor celulare . Aceast reproducere necesit realizarea prealabil a unei faze de acumulare a materialelor nutritive precursoare, urmat de o faz de sintez enzimatic a tuturor substanelor nutritive mai simple (aminoacizi, monozaharide, etc.) sau mai complexe (proteine, glucide complexe, lipide i fosfolipide, etc.) culminnd cu o faz deosebit de important i anume sinteza de acid dezoxiribonucleic (ADN). Aceast ultim faz, replicarea AND-ului este esenial pentru a se putea declana diviziunea celular, n cursul reproducerii biochimice are loc dublarea masei celulare (Teuan, V., 2000). 3.1. Ciclul celular Ciclul celular este perioada de timp dintre apariia unei celule i ncheierea propriei sale diviziuni. n acest ciclu se disting dou mari perioade: intercineza sau interfaza i cineza sau faza (amitoza, mitoza i meioza9. 3.1.1. Intercineza Intercineza (interfaza) este cea mai lung perioad de timp a ciclului celular, caracterizat printr-o activitate metabolic foarte intens. n aceast perioad, n celule, se produc fenomene de acumulare a substanelor organice i anorganice (aminoacizi, monoglucide, acizi grai liberi, ioni minerali) ulterior, pe baza informaiei genetice, avnd loc sinteza substanelor organice complexe (lipide, fosfolipide, proteine, acizi nucleici, glucide). Intercineza cuprinde trei perioade distincte: perioada presintetic (G1); perioada sintetic (S) i perioada postsintetic (G2) (fig. 60). Aceste perioade se deosebesc ntre ele prin faptul c sinteza ARN-ului, sinteza proteinelor, lipidelor i glucidelor se deruleaz pe tot parcursul interfazei, iar sinteza ADN-ului se produce numai n perioada sintetic (S) a ciclului celular .
89

Fig. 60 Diagrama ciclului celular la eucariote (dup Teuan, V., 2000):G1 faza presintetic; G2 faza postsintetic; S faza sintetic; M mitoza. Durata ciclului celular este variabil n funcie de specie, tip celular, individ celular, fiind la celulele eucariote ciclul celular de 1025 ore, din care mitoza de o or. La speciile de mamifere, celulele lor au o durat a ciclului celular de 16 ore dintre care 15 ore pentru intercinez i o or pentru mitoz. Intercineza, la aceste celule este mprit astfel: 5 ore pentru perioada presintetic (G1); 7 ore pentru perioada sintetic i 3 ore pentru perioada postsintetic (G2). n organismul animal exist i celule care se divid foarte repede, ele parcurgnd tot ciclul celular n 8 ore, dar exist i celule care se divid mai rar, i care au un ciclu celular de 100 de zile sau chiar mai mult. n acelai timp n organism exist i celule care nu se mai divid deloc (neuronul, rabdocitul, hematia) (Teuan, V., 2000). Celulele se pot afla la un moment dat n condiii nefavorabile, care pot stopa sinteza de proteine n general i implicit i sinteza proteinei "U ; n acest caz faza "S nu se declaneaz, celula supravieuind sintetizndu-i minimul proteic de ntreinere. Al doilea moment de restricie, n derularea ciclului celular este cel de la trecerea din G2 la mitoza (M) i este legat de nceperea procesului de condensare a cromatinei care precede declanarea mitozei. n celule exist o protein special (proteinkinaza solubil), care catalizeaz fosforilarea histonelor H1 ncepnd astfel condensarea cromatinei i evidenierea cromozomilor. n funcie de modul n care celulele parcurg ciclul celular, pot fi clasificate n trei categorii: categoria I (celulele care i-au pierdut capacitatea de a se divide, ele fiind oprite n perioada G1: neuronii, rabdocitele i leiocitele, hematiile); categoria II (celulele cu o mare capacitate de diviziune: cele din mduva osoas hematogen, cele din straturile bazale ale epiteliilor, etc.) i categoria III (celulele cu o capacitate redus de diviziune, dar care atunci cnd sunt puse n condiii speciale se pot divide rapid: hepatocitele, celulele glandulare endocrine, etc.).
90

3.1.2. Diviziunea celular (cineza) Diviziunea celular reflect totalitatea proceselor biologice care conduc la formarea, dintr-o celul mam, a dou celule fiice, fiind etapa ciclului celular n care are loc distribuirea materialului biologic celular din celula parental, n cele dou celule fiice. Acest proces poate decurge n dou moduri: prin diviziune direct (amitoz) i prin diviziune indirect (mitoz i meioz). 3.1.2.1. Diviziunea celular direct (amitoza) Amitoza este caracteristic organismelor unicelulare, fiind o form inferioar de diviziune celular. La metazoare i la mamifere are loc n condiii patologice (n esuturile aflate ntr-un proces de regenerare i n procesele tumorale). Caracteristic amitozei este lipsa aparent a unui aparat mitotic, din amitoz rezultnd celule n care distribuia materialului genetic este inegal. Sunt dou tipuri de amitoz: amitoza prin strangulare i amitoza prin clivare (fig. 61). Amitoza prin strangulare const n producerea unei trangulri a nucleului i citoplasmei n regiunea ecuatorial. n unele situaii trangularea nucleului i a citoplasmei au loc simultan. n urma amitozei prin trangulare rezult dou celule, egale sau nu, din punct de vedere genetic i morfologic. Amitoza prin strangulare este caracteristic organismelor inferioare (fig. 61).

Fig. 61 Amitoza prin strangulare (dup Teuan, V., 2000):

a, b, c, d, strangularea nucleului celular; c, d, e, f, g, h, strangularea citoplasmei i a ntregii celule; 1 - membrana celular; 2 - nucleul; 3 - anul ecuatorial de strangulare a nucleului; 4 - fragmoplast; 5 - inel contractil de actin care taie celula mam n cele dou celule fiice.

Amitoza prin clivare const n fisurarea (clivarea) nucleului i citoplasmei dup o linie meridional. Amitoza prin clivare a fost observat la celulele Sertoli din glanda interstiiala a testiculului (fig.62).
91

Fig. 62 Amitoza prin clivare meridional (dup Teuan, V., 2000);

a, b, c, d, e, - clivarea nucleului; d, e, f, g, h, i, - clivarea meridional a citoplasmei i a ntregii celule; 1 - membrana celular; 2 - nucleu cu cromatin nuclear; 3 - nucleol; 4 - citoplasm cu organite; 5 - an de clivare meridional la nivelul nucleului; 6 - an de clivare meridional la nivelul citoplasmei i plasmalemei.

3.1.2.2. Diviziunea celular indirect Este un proces biologic mai complicat, caracterizat prin modificri sincrone citoplasmatice i nucleare, care determin mprirea absolut egal n cele dou celule fiice, a materialului genetic. Sunt dou tipuri de diviziune indirect: mitoza i meioza. Mitoza, se caracterizeaz prin faptul c cele dou celule fiice rezultate din diviziunea celulei parentale, au aceeai cantitate de ADN (acelai numr de cromozomi) ca i celula din care provin, fiind ntlnit la toate celulele somatice (cu excepia celor care nu se divid). Meioza este o diviziune de tip reducional, care presupune reducerea la jumtate a numrului de cromozomi n celulele fiice, comparativ cu celulele parentale, fiind specific procesului de gametogenez. 3.1.2.2.1. Mitoza Mitoza este tipul cel mai comun de diviziune celular diviziune ecuaional sau diploid, specific celulelor somatice; este precedat de un stadiu preparativ (interfaza sau intercineza), n timpul cruia celulele i sintetizeaz activ proteine, histone, fosfolipide, acizi nucleici. Mitoza se desfoar n 5 (cinci) faze: profaza, prometafaza, metafaza, anafaza i telofaza (fig. 63). Durata total a mitozei la celulele din corpul mamiferelor este de 60 minute din care profaza i prometafaza dureaz 30 minute (50%); metafaza dureaz 8 minute (13,4%); anafaza dureaz 4 minute (6,6%) i telofaza dureaz 18 minute (30%) (Teuan, V., 2000). Profaza se caracterizeaz prin producerea de fenomene citoplasmatice i nucleare. n citoplasm primul semn al intrrii
92

celulei n diviziunea mitotic este diviziunea centrului celular (a centrozomului), proces care ncepe cu ndeprtarea uoar a celor doi centrioli ce compun centrozomul, la o mic distan unul de cellalt, dup care, prin polimerizarea tubulinelor din citosol se sintetizeaz cte un centriol nou n vecintatea celui vechi. n acest fel are loc dublarea centrozomului.

Fig. 63 Mitoza (dup Teuan, V., 2000) (continuare)

93

Fig. 63 Mitoza (dup Teuan, V., 2000)

a, b, c, d, e, f, - profaza; g, h, - prometafaza; i, i,i,, - metafaza; j, k, l, m, anafaza; n, o, p, r, s, t, u, - telofaza; 1 - membran; 2 - nucleu; 3 - nucleol; 4 - centru celular; 5 - fus nuclear de diviziune; 6 - spirem; 7 - cromozomi n placa metafazic; 8 - placa metafazic; 9 - constricie primar; 10 - cromatide surori clivate longitudinal; 11 - fragmoplast; 12 - inel contractil de actin; 13 - citoplasm cu organite.

Apoi cei doi centrozomi sunt ndeprtai treptat spre cei doi poli ai celulei, iar ntre ei organizndu-se progresiv fusul nuclear de diviziune. Fusul de diviziune este format din filamente sau fibre, alctuite fiecare din circa 100 de microtubuli pe care se gsesc i proteine asociate acestora. Fibrele care alctuiesc fusul de diviziune sunt de dou feluri: fibre polare (mai lungi- leag cei doi centrozomi ntre ei i se ntind ntre cei doi poli ai celulei) i fibre scurte sau cinetocorice (care se prind cu un capt de cromatidele cromozomilor i cu cellalt de centrozom la polii celulelor). Fibrele cinetocorice servesc la aezarea n poziie a cromozomilor i la deplasarea lor ulterioar ctre cei doi poli. Fenomenele specifice profazei care se produc n nucleu sunt: dispariia nucleolului, condensarea i spiralizarea cromatinei nucleare sub forma unui ghem numit spirem i apariia treptat a cromozomilor (sub form de bastonae) din acest spirem (ntr-o faz mai avansat a procesului de condensare a cromatinei) (Teuan, V., 2000).
94

Dispariia nucleolului este cauzat de separarea celor patru componente a acestuia, cnd partea fibroas, granuloas i cromozomic se ataeaz la fragmentele SAT ale cromozomilor, iar partea amorf se amestec cu nucleoplasma. Prometafaza se caracterizeaz prin dispariia nucleolemei sub aciunea unei enzime (proteinkinaza solubil din lizozomi) care produce fosforilarea proteinelor componente ale membranei nucleare i implicit dezasamblarea nveliului nuclear. Totodat are loc i interaciunea cromozomilor (care ntre timp s-au individualizat complet) cu fibrele fusului de diviziune. Cromozomii se vor ndrepta spre zona ecuatorial a acestuia, cu vitez de deplasare diferit, ultimul care ajunge acolo fiind cromozomul "X. Metafaza se caracterizeaz prin faptul c cromozomii apar puternic spiralizai i condensai i se ataeaz (prin intermediul cinetocorilor) de fibrele scurte ale fusului de diviziune, plasndu-se n zona ecuatorial a acestuia i formnd placa ecuatorial sau placa metafazic. Aranjarea cromozomilor n placa metafazic se face prin dispunerea acestora perpendicular pe axa fusului nuclear de diviziune. Tot n aceast etap, la cromozomii dispui n placa metafazic se produce clivajul longitudinal a celor dou cromatide surori, iar n finalul metafazei se desvrete acest clivaj i la nivelul centromerului, care se divide i el rezultnd un numr dublu de cromozomi. Acest proces creeaz premisele pentru o repartizare absolut egal a materialului genetic n cele dou celule fiice (Teuan, V., 2000). Anafaza const n deplasarea cromozomilor spre cei doi poli ai celulei jumtate din numrul lor spre un pol i jumtate spre cellalt pol. Aceast deplasare a cromozomilor este rezultatul a dou evenimente independente: micarea spre cei doi poli celulari a fibrelor cinetocorice, care astfel trag dup ele cromatidele ataate i alungirea fbrelor polare care astfel mping cei doi centrozomi ndeprtndu-i unul de cellalt. Deplasarea fibrelor cinetocorice ca i alungirea celor polare se realizeaz prin procesul de polimerizare a tubulinelor la capatul pozitiv (+) al microtubulilor i prin procesul de depolimerizare a tubulinelor la captul negativ (-) al microtubulilor (Teuan, V., 2000). Telofaza are loc atunci cnd cele dou grupe de cromozomi ajung la cei doi poli ai celulei, producndu-se o fuzionare aparent a acestora i formnd cte un spirem, n jurul crora se va reface treptat membrana nuclear. Refacerea nucleolemei este consecina defosforilrii proteinelor membranare. Ulterior prile satelit ale cromozomilor (SAT) se vor grupa i vor induce reorganizarea nucleolului n interiorul nucleului. Treptat nucleul i recapat structura avut n interfaz. Ctre finalul telofazei se produce i citodiereza (separarea citoplasmei i desvrirea diviziunii celulare). Citodiereza debuteaz
95

prin apariia unui an de diviziune pe suprafaa celular, numit fragmoplast, care ulterior se adncete. Acest fragmoplast este legat de existena sub plasmalem a unui inel contractil de actin care interacioneaz cu miozina globular n prezena ionilor de calciu (Ca++), se contract, i micoreaz lumenul i astfel va "tia celula (membrana i citoplasma) n dou fragmente egale, pe linie ecuatorial. Astfel se vor forma cele dou celule fiice. ntruct suprafaa membranelor de la cele dou celule fiice este mai mare dect cea a celulei mame, aceasta i "pregtetedin timp o rezerv considerabil de membrane, de aceea celula aflat n momentele de dinaintea declanrii diviziunii, se caracterizeaz i prin prezena unui numr foarte mare de microvili, vluri i membrane ondulate. Aceste accesorii membranare lipsesc sau sunt foarte puine la celulele fiice, ceea ce este un argument n favoarea teoriei expuse mai sus (Teuan, V., 2000). Sunt 4 feluri ale acestui tip de diviziune ecuational: mitoza homoplastic (homotipic); mitoza heteroplastic (heterotipic); mitoza homoheteroplastic (asimetric) i mitoza de difereniere (ntinerire), care se difereniaz prin gradul de asemnare morfologic (mrime, form, aspect, etc.) ntre cele dou celule fiice i celula mam. Mitoza homoplastic este varianta n care din diviziune rezult dou celule fiice egale ntre ele i egale cu celula mam i se ntlnete numai la celulele foarte tinere, nedifereniate (celulele mezenchimale). Mitoza heteroplastic (mitoza de difereniere) este varianta n care rezult dou celule fiice similare ntre ele i similare cu celula mam, dar mai mature dect aceasta i se ntlnete la mai mature dect aceasta. Prin mitoza de difereniere (ntinerire) rezult dou celule fiice mai tinere dect celula mam (de exemplu la limfocite). Mitoza este o faz obligatorie n parcurgerea ciclului celular i este o consecin a fazei biochimice (de acumulare i de sintez). Mitoza este determinat i influenat de o serie de factori care pot fi clasificai n trei categorii i anume: factori generali, factori intracelulari i factori intercelulari. Factorii generali sunt reprezentai de: temperatur, lumin, o serie de vitamine sau unii hormoni (tiroidieni, hipofizari, corticosuprarenali). Factorii intracelulari sunt reprezentai prin: modificarea raportului nucleo-nucleolar i a raportului nucleo-plasmatic ca urmare a proceselor de sintez intracelular, ceea ce duce la mrirea volumului celular, volum care nu mai poate fi controlat de ctre nucleu. n acest caz este deci necesar diviziunea celulei. Factorii intercelulari se consider c sunt cei mai importani i se apreciaz c n fiecare esut exist un anumit raport optim ntre celulele mature care funcioneaz normal, celulele btrne (uzate) i celulele care se divid (Teuan, V., 2000). Modificarea acestui raport prin moartea unei celule sau a unui grup de celule determin, prin mecanismul de retroaciune (feed-back), declanarea diviziunii mitotice n alt grup de celule, astfel c raportul ntre cele trei grupe celulare rmne aproximativ constant .
96

3.1.2.2.2. Meioza Meioza (diviziunea reducional), este un tip special de diviziune indirect, ntlnit doar n faza de maturare a spermatogenezei i ovogenezei fiind diviziunea de formare a celor doi gamei: spermatozoidul i ovulul. n celulele fiice numrul de cromozomi se njumtete, astfel c ele vor fi haploide (vor avea doar un singur set de cromozomi -cte unul din fiecare pereche de omologi) i numai cte un cromozom de sex ("X la sexul femel i "Y la sexul mascul). Acest lucru este foarte important, deoarece n procesul de fecundaie (cnd se ntlnesc cei doi gamei) se reface zestrea total de cromozomi a speciei, zigotul redevenind diploid. n caz contrar, dac gameii ar fi celule diploide, atunci zigotul ar fi tetraploid ceea ce nu este compatibil cu viaa. Meioza are deci o semnificaie biologic profund. njumtirea numrului de cromozomi, are loc prin dou diviziuni indirecte succesive, respectiv meioza I i meioza II. i n meioz are loc dedublarea cromozomilor prin autoreplicarea ADN ului (n faza S a ciclului celular), numai c n acest caz ADN - ul se replic o singur dat i se mparte de dou ori. Meioza I este o diviziune indirect de tip reducional n timp ce meioza II este o mitoz homoplastic. Acest lucru face ca din fiecare celul diploid care intr n meioz, s rezulte 4 (patru) celule haploide (n-cromozomi), respectiv 4 spermatide la sexul mascul i trei globuli polari plus un ovul matur la sexul femel (Teuan, V., 2000). Meioza I are loc n 5 faze: profaza I; prometafaza I; metafaza I; anafaza I; telofaza I, iar profaza cuprinde la rndul ei 5 (cinci) subfaze: leptonem; zigonem; pachinem; diplonem; diachineza. Meioza II cuprinde 4-5 faze (identice cu cele de la mitoz: profaza II, metafaza II, anafaza II, telofaza II). Meioza I este un proces foarte complicat, n care fenomenele caracteristice acestui gen de diviziune se petrec n profaz, care de altfel este foarte lung deoarece meioza I poate dura cteva zile, luni sau civa ani (n funcie de specie), iar profaza reprezint 90% din durata total a acesteia. Fenomenele caracteristice profazei se petrec mai ales la nivelul nucleului. Profaza I este deosebit de complex i cuprinde cele 5 subfaze enumerate mai sus i n care se produc evenimente biologice de o importan deosebit. Leptonemul (leptotenul) reprezint prima subfaz, n care cromozomii au aspectul unor filamente foarte subiri (leptos = subire), sunt n numr diploid (dou seturi), neclivai longitudinal i ataai cu un capt de membrana nuclear. Spre finalul acestei perioade ncepe procesul de spiralizare i condensare a cromozomilor i ca urmare ei devin tot mai vizibili i prezint nite ngrori n lungul lor (fig. 64).

97

A profaza I; B - prometafaza I; C - metafaza I; D - anafaza I; E - telofaza I; a leptonem; b, c, d - zigonem; e, f, f, f pachinem; g, g, h - diplonem; i - deachinesa; m, m, n, n - fenomene anafazice; o, p, r, s - fenomene telofazice: 1 - membrana celular; 2 - membrana nuclear; 3 - centrul celular; 4 - Aparatul Golgi; 5 - RER; 6 - REN; 7 - nucleol; 8 - cromozomi; 8 - cromatide surori materne; 8 - cromatide surori paterne; 9 - sinapsele (complexe sinaptonemale); 10 producerea crossingower-lui; 11 - cromatide surori materne recombinate; 13 - centromeri; 14 - sinapse (chiasme); 15 - elemente proteice laterale ale complexului sinaptonemal; 16 element proteic central al complexului sinaptonemal; 17 - linkeri; 18 - bucle de cromatin de pe cromozomul matern; 19 - bucle de cromatin de pe cromozomul patern; 20 - nodul de recombinare, 21 - cromozomi bivaleni n timpul diplonem-ului care sunt unii prin chiasme; 22 - cromozomi bivaleni n timpul diachinesei (recondensai); 23 - fusul de diviziune; 24 - cromozomi recombinai dispui n placa metafazic i apoi n timpul anafazei; 25 - fragmoplast; 26 - spirem n formare; 27 nucleii noilor celule care apar n urma meiozei I.
98

Fig.64 Meioza I (dupTeuan, V., 2000).:

Zigonemul (zigotenul) se caracterizeaz prin faptul c, cromozomii omologi (din setul matern i patern) se apropie ntre ei i se alipesc dar fr a fuziona nc. Aceast apropiere i alipire se numete conjugarea cromozomilor sau "sinapsa. Conjugarea poate ncepe de la capete sau de la mijloc, fenomenul de alipire fiind asemuit cu "nchiderea unui fermoar. n aceast faz cromozomii sunt dedublai, n fiecare cromatid existnd o cantitate dubl de ADN (ce rezult n urma trecerii celulei prin faza S a ciclului celular). La mijlocul zigonem-ului cromozomii omologi sunt unii prin una sau mai multe sinapse care sunt de fapt nite "complexe sinaptonemale, i formeaz cromozomii bivaleni sau tetradele. Bivalena acestor cromozomi se refer la faptul c fiecare dintre dnii are o componen matern i una patern, iar denumirea de tetrad este legat de faptul c fiecare cromozom bivalent are (4) patru cromatide (cte dou de la fiecare cromozom omolog), iar fiecare cromatid are cte 4 (patru) cromoneme. Deci n total fiecare cromozom bivalent are cte 4x4=16 cromoneme, aceasta fiind premisa ca n fiecare din cele 4 celule haploide ce vor rezulta din meioz s existe cte patru cromoneme n fiecare cromozom din acestea (Teuan, V., 2000). Complexul sinaptonemal este o reea de proteine care realizeaz o aliniere perfect a genelor, astfel c genele alele vin fa n falucru necesar pentru realizarea fenomenului de "crossingower. Sinapsa (complexul sinaptonemal) se realizeaz ntre cromatidele omoloage (nesurori) din bivalent (tetrad). Fiecare cromozom bivalent are n lungul fiecrei cromatide omoloage, cte o ax proteic, care au fost denumite elemente laterale ale complexului sinaptonemal, avnd n vedere faptul c aceste formaiuni sunt plasate cte dou pe fiecare cromozom omolog, n lungul i la periferia cromatidelor care vin n contact. ntre cele dou axe proteice (elemente laterale) se gsete un spaiu larg de 1000 , iar n acest spaiu se dispune o reea de filamente proteice laterale i transversale. De o parte i de alta a celor dou axe proteice laterale se pot observa buclele de cromatin ale celor doi cromozomi omologi din bivalent (Teuan, V., 2000) . Pachinema (pachitenul) se caracterizeaz prin meninerea complexului sinaptonemal i perfectare fenomenului de conjugare a cromozomilor. n pachinem cromozomii bivaleni apar ca fiind foarte groi (pachis=gros), cci de fapt sunt dubli, iar fenomenul cel mai important care are loc n aceast subfaz este fenomenul de "crossing over. n esen procesul de "crossing ower nseamn ruperea unui segment dintr-o cromatid matern (de pe un cromozom "X); ruperea unui segment dintr-o cromatid patern (de pe un cromozom "Y) i unirea ncruciat a celor dou segmente dizlocate sau altfel spus se produce un schimb reciproc de gene ntre cromozomii angajai n conjugare. Ca urmare a producerii procesului de crossingower un grup de gene de pe un cromozom matern poate ajunge pe cromozomul
99

omolog patern i invers. Acest schimb de gene ntre cromozomii omologi are o importan deosebit n ereditate cci duce la formarea unor cromozomi i respectiv gamei recombinai genetic, adic duce la o variabilitate deosebit n populaiile de animale. n urma crossingower-ului, n fiecare bivalent, vor exista 4 cromatide din care una este pur matern alta este pur patern i dou sunt recombinate. Noua combinaie de gene se transmite ereditar n descenden, fcnd ca puii s nu semene ntre ei i nici cu prinii (din punct de vedere genetic). Crossingower-ul se produce ntotdeauna numai ntre cromatidele nesurori din tatrad i este mediat de nite structuri proteice de form sferic, cu diametrul de 90 nm i care au fost denumite "noduli de recombinare (Teuan, V., 2000). Locul n care se produce crossingower-ul se denumete chiasm, aceste formaiuni devenind vizibile abia n timpul diplonemului. Diplonema (diplotenul) are caracteristic faptul c se produce o desinapsare a cromozomilor bivaleni, acetia ncepnd s se despart rmnnd totui unii prin chiasme pentru un timp destul de lung. Chiasmele menin cromozomii omologi unii pn n timpul anafazei I, cnd acetia se vor despri definitiv, spre a migra ctre cei doi poli ai celulei. Tot n timpul diplonemei se produce o despiralizare a cromozomilor care face posibil sinteza de ARNm, deci copierea de informaie genetic de pe ADN i sinteza de proteine necesar vieii celulei (Teuan, V., 2000). Diachinesa este caracterizat prin ncetarea sintezei de ARNm i recondensarea cromozomilor, care se i detaeaz de membrana nuclear intern. n aceast faz fiecare cromozom bivalent conine 4 cromatide, din care dou sunt surori i dou sunt omoloage (nesurori). Cromatidele surori sunt unite prin centromeri, iar cele omoloage sunt unite nc prin chiasme. Numrul de chiasme este variabil (una sau pot fi mai multe la fiecare cromatid) (Teuan, V., 2000). Prometafaza I se caracterizeaz prin dispariia membranei nucleare i a nucleolului, n timp ce n citoplasm se produce diviziunea centrozomului i organizarea fusului nuclear de diviziune. n metafaza I cromozomii bivaleni (unii nc de la nivelul chiasmelor) se ndreapt spre fusul de diviziune i se ataeaz de fibrele acestuia, formndu-se placa metafazic sau placa acuatorial. n finalul metafazei se desfac chiasmele i cei doi cromozomi omologi din bivalent ncep s se deplaseze spre cei doi poli ai celulei. Anafaza I ncepe prin ndeprtarea cromozomilor omologi, care au fiecare cte dou cromatide surori, din care una este recombinat genetic, fiecare cromatid fiind n acelai timp i dedublat (conine 4 cromoneme). Ca urmare a fenomenelor din profaza I, numrul de cromozomi care ajung la fiecare din cei doi poli ai celulei este egal cu jumtate din numrul iniial de cromozomi ai celulei parentale. n telofaza I au loc aceleai fenomene ca la mitoz, (formarea spiremului la fiecare pol celular, asamblarea membranei nucleare, apariia nucleolului i n finalul ei se produce citodiereza, care se
100

concretizeaz cu formarea a dou celule haploide -n cromozomi). Dup terminarea meiozei I, urmeaz o scurt interfaz, n timpul creia nu se mai sintetizeaz ADN i care este urmat imediat de o mitoz homoplastic care este de fapt meioza II. Meioza II este o mitoz obinuit, n care intr ambele celule haploide rezultate din prima parte a diviziunii reducionale i deci n aceste celule se organizeaz (n profaza II) fusul de diviziune apoi dispar membranele nucleare, nucleolii, iar n metafaza II cromozomii dedublai i recombinai se dispun pe placa ecuatorial. n finalul metafazei II se produce clivajul longitudinal al cromatidelor, astfel c va rezulta un numr dublu de cromozomi, premisa pentru o repartiie egal a acestora n cele 4 celule ce vor aprea n final. n anafaza II, cromozomii se ndreapt spre cei doi poli, se organizeaz spiremul, se asambleaz din nou membrana nuclear i nucleolul. n telofaza II se desvresc procesele ncepute n anafaz i se produce i citodiereza, astfel c n finalul meiozei II rezult patru celule haploide (n cromozomi). La sexul femel vor rezulta un ovul matur i trei globuli polari, iar la sexul mascul, vor rezulta patru spermatide (Teuan, V., 2000 (fig. 65).

Fig. 65 Meioza II (mitoz homoplastic) (dup Teuan, V., 2000).:

E - telofaza I; F G - profaza II; H - metafaza II; I - anafaza II; J - telofaza II; diviziunea centrozomului; t, - formarea fusului de diviziune; u, v, v, v formarea plcii metafazice i structura cromozomilor metafazici; w, x - migrarea cromozomilor spre cei doi poli celulari; z, y, q - formarea fragmoplastului i citodiereza; 1 - membrana celular; 2 - nucleu (nucleoplasma); 3 - centrozom; 4 - Aparat Golgi; 5 - RER; 6 - REN; 7 - nucleol; 8 - cromozomi; 9 - fus nuclear de diviziune; 10 - cromozomi care se dispun n placa ecuatorial; 11 - placa metafazic; 12 - citoplasma; 13 - spirem; 14 - fragmoplast; 15 - cromatide dedublate; 16 - centromer; 17 - cinetocori; 18 - cromoneme.
101

ntrebri 1. 2. 3. 4. 5. Care sunt fazele ciclului celular ? Prin ce se caracterizeaz amitoza ? Ct timp dureaz mitoza ? Care sunt factorii care influeneaz mitoza ? Ce cantitate de AND rezult n urma meiozei ?

Tem de control Diviziunea celular indirect Referat Alctuii un referat cu tema Replicarea AND-ului-faz esenial pentru declanarea diviziunii celulare

102

Bibliografie 1. Confederat Margareta, Solcan Carmen, 2002 - Biologie celular, Ed. Terra Nostra 2. Cotea Corneliu, 2001 - Biologie celular, embriologie general, histologie general, Ed.Tehnopress, Iai 3. Teuan Vasile, 2000 - Biologie celular animal, Ed.Ion Ionescu de la Brad, Iai

103