UNIVERSIDAD NACIONAL DE LUJN QUMICA ANALTICA II 2011

Trabajo Prctico N 2:
Objetivo

Fotometra ultravioleta - visible

Ilustrar sobre los principios de la fotometra, las formas de operacin prctica de los equipos, las caractersticas de absorcin de la luz por soluciones y sus aplicaciones cuantitativas.

Parte I Determinacin de las concentraciones de una mezcla de permanganato y dicromato en una solucin.
Reactivos Solucin de dicromato de potasio 0.01 M Solucin de permanganato de potasio 3. 10-3 M Solucin de cido sulfrico al 15% v/v. Parte experimental 1. Determinacin de espectros de absorcin Encienda el espectrofotmetro, automaticamente el equipo realizar una serie de controles o chequeos de inicializacin. Aguarde como mnimo 10 minutos para permitir la estabilizacin de la fuente de luz. Seleccione el modo ABSORBANCIA y luego una longitud de onda inicial de 340 nm. Coloque la cubeta con agua destilada o solucin blanco en el porta celda, cierre la tapa del compartimento de muestras y presione la tecla correspondiente para obtener el 0 de Absorbancia (usar siempre la misma cubeta y en la misma posicin). Coloque la solucin de K2Cr2O7 6.10-4 M en la cubeta hasta aproximadamente 4/5 partes de su volumen. Seque y limpie la superficie externa de la celda con papel absorbente libre de pelusas. Cuando la absorbancia indicada en la pantalla resulte estable, registre el valor. Seleccione las siguientes longitudes de onda y determine los valores de Absorbancia. Para cada nuevo valor de longitud de onda se debe ajustar el 0 de Absorbancia segn lo indicado anteriormente. 390 400 410 420 425 430 435 440 445 450 455 460 465 470 475 480 490 500 510 520 525 530 535 540 545 550 555 560 570 580 590 600 610 620 630 nm. Repita el mismo procedimiento para una solucin de KMnO4 1.8.10-4 M Represente en un mismo grfico, absorbancia vs. longitud de onda para las soluciones de KMnO4 y K2Cr2O7. Los equipos actuales pueden determinar los espectros de absorcin en forma automtica. Se debe indicar tipo de lectura (A o %T), rango de longitudes de onda donde se desea el equipo realice el barrido y solicitar una correccin de base con la solucin blanco en el compartimiento de la muestra. En caso de utilizar un equipo de doble haz, la correccin de la lnea de base se realiza conjuntamente con las lecturas de absorbancia de las muestras.

Fotometria uv- visible

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Seleccin de las longitudes de onda de trabajo Observe ambos espectros de absorcin y seleccione dos longitudes de onda con valores de absorbancia elevados para el permanganato o para el dicromato y con mnimas interferencias del otro compuesto. 2. Determinacin de las concentraciones de Cromato y Permanganato en una mezcla. Es posible determinar las concentraciones de dos componentes en una mezcla en forma simultnea realizando mediciones espectrofotomtricas a dos longitudes de onda. A partir de las soluciones estndar de MnO4- y Cr2O72- realice las siguientes diluciones: a) Cr2O72-. Tome respectivamente 3, 4 y 6 ml de solucin de dicromato de potasio 0.01 M y lleve a 50.0 ml con cido sulfrico al 15 % en un matraz aforado. b) MnO4-. Tome respectivamente 2, 3 y 4 ml de solucin de permanganato de potasio 3. 10-3 M y llevar a 50,0 ml con cido sulfrico al 15 % en un matraz aforado. Calcule en ambos casos las concentraciones finales de permanganato y dicromato para todas las diluciones, pues le resultarn imprescindibles para la construccin de las representaciones de la ley de Beer. Para cada una de las longitudes de onda anteriormente seleccionadas, obtenga las representaciones de la ley de Beer de la siguiente manera: a) Seleccione la primera longitud de onda. b) Ajuste el 0 de absorbancia utilizando la solucin de H2SO4 15% como blanco. c) Mida la Absorbancia de las soluciones correspondientes, comenzando por la de menor concentracin (incluya el blanco en la serie de soluciones a medir). d) Repita el procedimiento para la segunda longitud de onda. Finalmente usted obtendr cuatro series de datos para la realizacin de los 4 grficos de Absorbancias vs. concentracin. 3. Tratamiento de los resultados Represente grficamente absorbancia (en ordenadas) vs. concentracin. Estime la mejor recta de acuerdo a los valores medidos. Observe el intervalo dinmico lineal de trabajo. Si es necesario, descarte aquellos puntos que se alejen de la linealidad ocasionando desviaciones a la ley de Lambert Beer. Del grfico de A vs concentracin, calcule los valores de absortividad molar (a) de cada una de las especies a ambas longitudes de onda. Determine la concentracin de cada componente en la solucin incgnita segn la siguiente ecuacin: A 1= a xbxC + a x b xC
Cr2O72-1 Cr2O72 x Cr2O72-2 MnO4- 1 MnO4-

A 2= a

bxC
Cr2O72
-

+ a

C
MnO4-

MnO4- 2

4. Redaccin del informe 1. Investigue las caractersticas tcnicas del equipo utilizado como tipo de lmpara, rango til de longitudes de onda, tipo de selector de longitudes de onda, ancho de banda, detector, etc. 2. En un solo grfico represente los espectros de ambos compuestos. Seale las longitudes de onda elegidas. 3. Realice las 4 representaciones de Beer e indique los coeficientes de extincin para cada compuesto a cada longitud de onda. Indique si descart alguna lectura. 4. Indique las concentraciones de cada compuesto en su muestra (incluya los clculos) Fotometria uv- visible 2

UNIVERSIDAD NACIONAL DE LUJN QUMICA ANALTICA II 2011 Parte II

Determinacin colorimtrica de Fsforo en alimentos segn una modificacin del mtodo de Gomori. Fundamento El fsforo reacciona con el molibdato en medio sulfrico para generar un cido complejo como el heteropolifosfomolibdico, de color amarillo. En presencia de un reductor adecuado solo se reduce el molibdeno combinado con el fsforo, generndose azul de heteropolimolibdeno que es un producto intensamente coloreado de composicin muy poco definida pero cuya intensidad de color puede resultar directamente proporcional a la concentracin inicial de fsforo en la muestra. Reactivos Reactivo sulfomolbdico. Mezclar 2 partes de solucin de molibdato de sodio al 5 % (Na2MoO4.2H2O) con 1 parte de H2SO4 10 N y una parte de agua. Solucin reductora. Disolver 1 g de metil-para-aminofenolsulfato (eln) en 100 ml de solucin de bisulfito de sodio al 3% Solucin patrn de fsforo de 1000 ppm. Disolver cuantitativamente 11,0 g de KH2PO4 en agua destilada, agregar 1 ml de H2SO4 (c) y completar hasta 2,5 L con agua destilada. Solucin de Trabajo de fsforo. A partir del patrn de fsforo de 1000 ppm, realizar cuantitativamente 2 diluciones sucesivas 1/10 hasta llegar a una concentracin de 10 ppm. Tcnica 1. Construccin de la curva de calibracin a. En matraces aforados de 25 ml colocar respectivamente 0.00, 2.00, 4.00, 6.00 y 8.00 ml de la solucin patrn de fsforo de 10 ppm. b. Agregue a cada matraz 2.5 ml de solucin sulfomolbdica y 1 ml de solucin reductora. Finalmente complete los volmenes con agua destilada y homogeinice. c. Luego de 45 minutos de completado el enrase y antes de 90, lea las absorbancias a 670 nm. Comience por el blanco y contine en orden creciente de concentraciones de los estndares. Represente A vs C. Construya la mejor recta. Descarte aquellos puntos que se apartan notablemente de la linealidad. Calcule el del complejo coloreado.

d.

2.

Determinacin de la concentracin de Fsforo en leche en polvo. En un matraz de 25.00 mL coloque una alcuota de la muestra, previamente mineralizada. Estime el volumen de muestra a medir teniendo en cuenta que el contenido de fsforo en leche en polvo se encuentra cercano a 900 mg/ 100 gramos de leche, de forma tal que la intensidad de la seal generada se encuentre en el intervalo comprendido en la curva de calibracin. Agregue 2.5 mL se solucin sulfomolibidca, 1 mL de eln y enrase con H2O(d). Mida la absorbancia a 670 nm y calcule la concentracin por comparacin de sus datos con aquellos obtenidos con los estndares. A =

.b . C

RECOMENDACION El fsforo que contienen los detergentes caseros puede ser motivo de resultados elevados, por lo tanto se recomienda abstenerse de su uso durante la limpieza del material. Puede ser reemplazado por la mezcla sulfocrmica o detergentes no inicos. Fotometria uv- visible 3

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3. Redaccin del informe Calcule la concentracin de P en su muestra expresada en mg de P por cada 100 g de alimento. Incluya los datos utilizados como masa de muestra, volumen de la muestra en la reaccin, diluciones, lecturas, grficos de calibracin y clculos.

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Cuestionario
1. Defina la Ley de Lambert - Beer. Desviaciones instrumentales, reales y qumicas. 2. Convertir los siguientes valores de absorbancia en % de transmitancia a. 0.375 b. 1.325 c. 0.012 3. Convertir los siguientes valores de % de transmitancia en valores de absorbancias. a. 33.6 b. 92.1 c. 1.75 4. Una solucin de X 4,14 10-3 M tiene una transmitancia de 0.126 si se mide en una cubeta de 2 cm. Si se utilizara una cubeta de 1 cm Qu concentracin de X hara falta para que la T aumentara 3 veces?.

5. Dibuje un diagrama de los componentes necesarios en los instrumentos para realizar mediciones de absorcin molecular en el uv - visible. Defina: a. ancho de banda espectral b. radiacin monocromtica 6. Cul es la geometra mas adecuada y el material mas recomendado para la construccin de cubetas de lectura en el uv- visible?. 7. Una solucin de una especie absorbente presenta el siguiente espectro de absorcin molecular. De las sealadas en el espectro indique cul seleccionara para la cuantificacin espectrofotomtrica de la misma y cuales no utilizara. Justifique ordenando los puntos sealados en orden creciente, segn la sensibilidad. A 1 2 3 4 5 6

360 380 420

450

500

540

600

nm

Longitud de onda 8. Indique los pasos a seguir para determinar experimentalmente la concentracin de una mezcla de dos sustancias absorbentes. 9. Cul ser el efecto sobre la concentracin aparente (indique si aumenta, disminuye o no se modifica) si: a. Se detecta una huella digital sobre la celda mientras se lee la Absorbancia del estndar, y se limpia antes de tomar las lecturas para las muestras en la misma celda. b. No se ajusta el cero del instrumento con disolvente antes de tomar las mediciones de absorbancia para el estndar (A= 0.751) y para una muestra a la misma concentracin?. 10. Indique como procedera experimentalmente para determinar el Lmite de deteccin, Lmite de cuantificacin y el rango de trabajo en una determinacin espectrofotomtrica 11. En la determinacin de P, el alumno calcula errneamente el volumen de muestra a utilizar en la reaccin colorimtrica y obtiene una absorbancia superior al mximo del rango dinmico lineal de la curva de calibracin?. Cmo subsanara su error?

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Problemas
1. Se mide la transmitancia de la solucin resultante del siguiente tratamiento. Se disuelve la muestra que contiene el compuesto X, se desarrolla un complejo coloreado y se diluye a 250 ml. Porciones de 1 g de 4 patrones y una muestra dan los siguientes resultados: %T %X 1 64.5 0.200 2 47.4 0.400 3 37.6 0.600 4 25.0 1.00 M 30.2 ?

a) Construya una curva de trabajo y hallar el % X en la muestra desconocida. b) Usando slo el dato del patrn 4 y el de la incgnita, calcule el % X de la muestra, suponiendo que se cumple la Ley de Beer. c) Idem b) pero usando el patrn 3. d) Explique los resultados obtenidos en base de un anlisis de la curva de calibracin. 2. Una solucin de una muestra coloreada que responde a la ley de Beer, muestra una transmitancia de 80.0% cuando se mide en una celda de 1,00 cm de longitud. a) Calcule el % T para una solucin de doble concentracin en la misma celda. b) Cul debe ser la longitud de la celda para obtener la misma transmitancia (80%) en el caso de una solucin cuya concentracin es dos veces la original? c) Si la concentracin original era 0,005% (p/v), cul es el valor de la absortividad a? Rta.: a) 64% T b) 0.5 cm c) a = 1.938 L / g.cm El calciferol (vitamina D2) medido a 264 nm en alcohol como solvente, cumple la ley de Beer sobre un rango amplio de concentraciones con una absortividad molar de 18200. a) Si el peso molecular es 396, cul es el valor de a? b) Qu rango de concentraciones, expresado en %, puede ser usado para el anlisis si se desea mantener la absorbancia dentro de los lmites 0,4-0,9?. Suponga b = 1cm Rta.: a) a = 45.96 L / g.cm b) 8.7 10-4 a 1.96 10-3 g% 3. 4. En etanol, la acetona a 366 nm tiene una absortividad molar de 2,75 10-3 L / cm mol. Qu intervalo de concentracin de acetona podra determinarse si los tantos por ciento de transmitancia de las soluciones deben limitarse al intervalo del 10 % al 90% y se usan cubetas de 1.25 cm? Rta: 2.91 10-4 M a 1.33 10-5M

El sistema Fe (II)-o-fenantrolina obedece a la Ley de Beer en el mbito de 0 a 8 ppm de Fe(II). Una solucin que contiene 0,100 ppm de Fe(II) y un exceso de o-fenantrolina da una absorbancia de 0,200 en una celda de 1,00 cm. Una solucin desconocida da una absorbancia de 0,470 en las mismas condiciones. a) Calcule la concentracin de Fe(II) en ppm y mol/l. b) Calcule la absortividad del complejo. Rta.: a) 0.235ppm y 4.2 10-6M b) 1.17 105 L / M.cm 5. 6. Una alcuota de una sustancia S coloreada se diluye con un volumen igual de agua y se mide su absorbancia, siendo sta de 0.325. Otra alcuota se diluye con un volumen igual de una solucin patrn que contiene 3.00 10 4 M de S y la absorbancia es de 0.657. Calcule la Concentracin de S en la solucin original. Rta.: 2.94 10-4M La absortividad molar de una sustancia X es de 3500 a una longitud de onda determinada. Una solucin que contiene una concentracin desconocida de X y otra sustancia Y que tambin absorbe, tiene una transmitancia de 37.0 % a la longitud de onda determinada en una celda de 1.00 cm. Una solucin patrn de 2.00 10-4 M en X y la misma concentracin en Y que la muestra, tiene una transmitancia de 18.5 %. Cul es la concentracin de X en la muestra?. Rta.: 1.14 10-4M Una solucin de una muestra que contiene MnO 4- y Cr2O7= da una absorbancia de 0.688 a 500 nm en cierta celda. Luego de decolorar el MnO4- con KNO2, la absorbancia baj a Fotometria uv- visible 6

7.

8.

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0.306. Una solucin patrn de MnO4- (10.0 g/ ml de MnO4-) tiene una A: 0.310, mientras que una solucin patrn de Cr2O7=(200 g de Cr / ml) tiene una A: 0.492. Calcule las concentraciones de Mn y Cr en la muestra. Rta.: 124.4 g Cr / mL y 5.8 g Mn / mL 9. Una determinacin simultnea de cobalto y nquel se puede basar en la absorcin simultnea de sus respectivos complejos de 8- hidroxiquinolinol. La s absortividades molares correspondientes a sus mximos de absorcin son: Absortividad molar, 365 nm 700nm Co Ni 3529 3228 428.9 10.2

Calcular la concentracin molar de Ni y Co en cada una de las siguientes disoluciones basndose en los datos siguientes: Absorbancia , A (cubetas de 1 cm) 365 nm 700nm solucin I solucin II 0.598 0.902 0.039 0.072

Rta.: Solucin I. Co 8.9 10-5 M y Ni 8.8 10-5M Solucin II.Co 1.7 10-4 M y Ni 9.8 10-5M 10. Porciones de un milimol de un cido dbil AH y su sal NaA se disuelven en volmenes de un litro de diversos buffers. Las absorbancias de las soluciones resultantes a 650 nm y en una celda de 2.00 cm son: absorbancia 0.950 0.950 0.677 0.000 0.000 pH 12.00 10.00 7.00 2.00 1.00 Calcule las absortividades molares de HA y A- y la constante de disociacin del cido HA. Rta.: Kd 2.48 10-7 11. Se ha demostrado que la cafena (pf: 212.1) tiene una A: 0.510 para la concentracin de 1 mg/ 100 ml a 272 nm. Una mezcla de 2.5 g de una muestra de caf soluble se mezcl con agua hasta un volumen de 500 ml y se transfiri una alcuota de 25,00 ml a un matraz que contena 25 ml de H2SO4 0.1 N. Esto fue sometido a un tratamiento de clarificacin y se aforo a 500 ml. Una parte de esta solucin tratada mostr una absorbancia de 0.415 a 272 nm. a. Calcular la absortividad molar. b. Calcular el nmero de gramos de cafena por gramo de caf. Dato: b: 1.00cm Rta.: 3.25 10-2 g de cafena por g de caf 12. Se disuelven separadamente con HNO3 una muestra de 1.0 g de acero que contiene 0.41 % de Mn y otra muestra de una acero anlogo que pesa 1.1 g y cuyo % en Mn se desconoce. Se oxida el Mn de ambas muestras a MnO4- con IO4-, se diluyen ambas al mismo volumen y se comparan en un colormetro de espesor variable. Se comprueba que las intensidades de color se igualan cuando el espesor de la solucin patrn es un 10% menor que el de la otra solucin. Calcular el porcentaje de Mn en la muestra problema. Rta.: 0.369 g% de Mn 13. El quelato CuA22- presenta un mximo de absorcin a 480 nm. Cuando el reactivo complejante est presente en un exceso de al menos 10 veces, la absorbancia depende slo de la concentracin analtica del Cu(II) y cumple la ley de Beer en un largo intervalo. Una solucin en la que la concentracin analtica de Cu(II) es de 2.30 10 -4 M y que cuando A2- es 8.60 10-3 M tiene una absorbancia de 0.690 cuando se mide en una cubeta de 1 cm a 480 nm. Una solucin en la que la concentracin analtica de Cu(II) es 2.30 10 -4 M y la de Fotometria uv- visible 7

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A2- es 5.00 10-4 M tiene una absorbancia de 0.540 cuando se mide en las mismas condiciones. Utilizando esta informacin calcular la constante de formacin de la reaccin:

Cu2+ + 2 A2- CuA2214. Se realiza una determinacin de Gomori segn la tcnica obtenidas son las siguientes: Estandar Concentracin (ppm) 0 0.800 1.200 1.600 2.000 Masa (g) 2.306 1.8932 1.4192 1.3883

Rta.: Kf 1.8 108 del TP. Las absorbancias

Absorbancia 0.006 0.099 0.143 0.189 0.240 0.2280 0.1853 0.1672 0.1336

Muestras Dulce de leche 1 Dulce de leche 2

Calcule la concentracin de P en las muestras de dulce de leche si luego de la mineralizacin las cenizas se solubilizaron y se colocaron en matraces de 10.00 mL. Luego se realiz una dilucin 1 en 25 y se tomaron 5.00 mL para la reaccin de color que se desarroll en matraces de 50.00 mL.

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