Preparatul microscopic

n aceast lucrare se vor studia:

1.

Noiuni de tehnologia obinerii preparatului microscopic : recoltare, fixare, splare, includere, secionare, colorare, montare Tehnici de colorare uzuale (histologice)
1

2.

Preparatul microscopic permanent

Def. : Reprezint examinarea unor celule, fragmente de esuturi sau organe, crora li s-au oprit procesele vitale prin fixare Se folosete n : anatomia patologic, medicina legal, cercetare, scop didactic

Timpi de realizare:
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8.

RECOLTAREA FIXAREA SPLAREA INCLUDEREA SECIONAREA COLORAREA MONTAREA ETICHETAREA

3

RECOLTAREA ORIENTAREA

Rezecie chirurgical Rezecie endoscopic Biopsie de organ Puncie cu ac gros Puncie cu ac fin Recoltarea la necropsie
4

Fixarea i fixatorii

Definiie: proces fizic prin care se nghea procesele biochimice, pstrndu-se forma celulei; aceste condiii sunt ndeplinite de substane numite generic fixatori Mecanismul: coagularea proteinelor i parial polimerizarea lor (ex. formaldehida se combin cu molecule proteice) insolubilizare prin precipitare Scopul: oprirea evoluiei celulelor i esuturilor ntr-o stare ct mai apropiat de statusul lor funcional mrirea rezistenei esuturilor, blocarea reaciilor enzimatice i stoparea degenerrii autolitice, conservarea esutului mpotriva putrefaciei toate acestea fiind consecina coagulrii proteinelor creterea diferenei optice
5

Calitile fixatorului:

Stabilizeaz structurile ptrunznd n esuturi Penetrabilitatea - depinde att de compoziia chimic a fixatorului, ct i de structura esutului care fixeaz Nu deformeaz esutul i nu dizolv constituenii Distruge microorganismele i extrage enzimele autolitice Nu-i modific compoziia i confer consisten Durata fixrii variaz cu tipul de fixator utilizat Produce diferen optic
6

Regulile generale ale fixrii de bun calitate

se va evita uscarea piesei recoltate fixarea ct mai rapid, dup prelevarea biopsiilor pentru evitarea alterrilor autolitice fragmentele prelevate pentru examinri de rutin nu trebuie s depeasc 1 cm grosime volumul de fixator trebuie s fie suficient, depind de 20 de ori volumul fragmentului de esut
7

Practica fixrii

Fixarea uzual se realizeaz cu formaldehid la temperatura camerei Fixarea n formaldehid permite pstrarea pieselor pentru perioade ndelungate

Fixatori simpli
Formolul / formaldehida / formalina - cel mai utilizat fixator - este o soluie de 30-40% formaldehid; pentru fixarea curent se folosete formalina 10%, iar durata fixrii este de 24 -72 de ore - dezavantajul fixrii: precipit sub form de pigment (artefacte) cnd esuturile conin cantiti importante de eritrocite Etanolul - util n special pentru identificarea glicogenului i pentru demonstrarea mineralelor (care sunt insolubile n alcool; ex.: reacia Perls)
9

Fixatori compui
Fixatorul Bouin - se prepar din 1 parte formol i 3 pri soluie apoas saturat de acid picric; n momentul utilizrii se adug acidul acetic 5 % sau acidul tricloracetic 2% - permite efectuarea majoritii coloraiilor morfohistochimice - nu este recomandat pentru studiul organelor hematopoietice ac. picric are efect hemolitic Fixatorul Carnoy - cel mai bun fixator universal conine: 60 ml de alcool absolut, 30 ml cloroform i 10 ml acid acetic glacial - fixarea curent dureaz 1-3 ore fixarea > 12 ore determin induraii ireversibile ale pieselor
10

SPLAREA

Ap pentru fixatorii solubili n ap Alcool de 70 - 80 pentru cei solubili n alcool

12

INCLUDEREA
Scop: - crearea condiiilor pentru secionarea n seciuni subiri, plane, transparente Tipuri de mase de incluziune: Dup solubilitatea n ap:

Anhidre: parafina Apoase: gelatina

Etapele includerii: - Deshidratarea n concentraii crescute de alcool - Clarificarea n hidrocarburi aromate sau alcool amilic - Impregnarea = ptrunderea n profunzime a parafinei topite - Turnarea blocurilor (includerea propriu-zis)
13

SECIONAREA

Microtom: rotativ sau culisant, manual sau semi - automat Grosime: 5 -7 m (pentru IHC: 3 m) Elemente: - suport pentru cuite - port-obiectul - capul mobil - micrometru Aderarea: cu albumin Meyer
14

15

16

17

COLORAREA

Scop: - creterea contrastului dintre diferitele componente tisulare prin modificarea indicilor de refracie ai substratului morfologic cu ajutorul coloranilor, care se leag electrostatic de preparat Tehnica de colorare depinde de natura fixatorului utilizat i de esutul pe care dorim s l examinm Substanele folosite pentru colorare se numesc colorani Mecanism: - penetrarea celulei i ataarea de componentele celulare pentru diferenierea optic

18

ETAPELE COLORRII
1.

Deparafinare se realizeaz cu solveni de tipul hidrocarburilor benzenice. Preparatele se trec prin 3 bi succesive de 2-5 min. Hidratare eliminarea solvenilor parafinei fcnd posibil colorarea. Se trece seciunea prin 3 bi succesive, fiecare cu alcool etilic sau metilic, n concentraii descrescnde. Colorarea propriu-zis - se face cu soluii colorante apoase sau alcoolice Splare dac seciunile trebuie s fie montate ntr-un mediu anhidru, pentru ndeprtarea excesului de colorant. Se efectueaz cu ap distilat Deshidratare obligatorie pentru majoritatea coloranilor histologici deoarece acetia sunt diluai fie n ap, fie n alcool diluat. Se realizeaz cu alcool n concentraie crescnd. Clarificare - necesar pentru ndeprtarea alcoolului. Se realizeaz cu xilol.
19

2.

3.

4.

5.

5.

METODE DE COLORARE

1. Pot fi: a. Vitale - prin folosirea unui colorant vital care este incorporat de animal in timpul vietii. Substana colorat nclzit la temperatura corpului se injecteaza i.v. sau intraperitoneal b. Permanente pentru colorarea preparatelor permanente

2. Dup nr. de colorani utilizai : a. Simple folosete un singur colorant b. Combinate (policrom) se folosesc 2 sau mai muli colorani i. Succesiv ii. Simultan ex : hemalaun eozin, van Giesson, Azan

20

3. Dup mecanism a. direct rezult din simplul contact dintre colorant i substrat b. indirect necesit prezena unui mediator sau mordant, ntre colorant i substrat 4. Pot fi: a. progresive prin ncercri succesive sub control microscopic pn se ajunge la momentul optim de colorare, aceasta oprindu-se prin splare b. regresive - prin aciunea prelungit a colorantului pn la obinerea unei supracolorri, apoi se acioneaz cu un agent chimic decolorant numit difereniator a crui aciune este oprit prin splare n momentul n care au rmas colorate numai structurile pe care vrem s le evideniem 5. Poate fi: a. Ortocromatic substratul se coloreaz n aceeai culoare ca i cea a colorantului Rou de Congo evideniaz amiloidul n rou b. Metacromatic - substratul se coloreaz n alt culoare dect cea a colorantului Albastrul de toluidin evideniaz mastocitele, ale cror granulaii citoplasmice apar de culoare roie
21

IMPREGNRI METALICE

Sub aciunea unor reductori se produce un fin precipitat de metal care se depune pe diferitele elemente din esuturi putnd pune n eviden structuri care n mod obinuit nu se coloreaz cu colorani Metalele cele mai folosite sunt : Ag , Au , Os , Hg.

22

COLORANTUL HISTOLOGIC

Este o substan chimic colorat, de obicei de natur organic, care poate intra n celul atandu-se la nivelul componentelor celulare i permind astfel diferenierea lor optic Nu toate substanele colorate sunt colorani n molecula unui colorant se pot identifica una sau mai multe - grupri cromofore purttoare de culoare - grupri auxocrome capacitatea de a colora
23

CLASIFICAREA COLORANILOR
1. Dup natura lor

a. Naturali i. vegetali : hematoxilina, safranina, orceina, turnesolul ii. animali : carminul b. Sintetici : albastru de metil 2. Dup caracterele chimice a. Acizi de obicei sruri de acizi organici, unde gruparea auxocrom principal este ncrcat electric (-). b. Bazici gruparea auxocrom principal ncrcat electric (+), deci se va ataa pe un substrat morfologic negativ c. Neutri grupri auxocrome principale ncrcate electric pozitiv i negativ, ei fiind soluii apoase de colorani bazici i acizi ntr-o anumit proporie eozina - coloreaz citoplasma n roz-rou hematoxilina - coloreaz nucleul n albastru nchis- violet
24

Coloraia cu hematoxilin-eozin (HE) i metodele tricrome (van Gieson, Masson) se utilizeaz n examinarea primar a esuturilor, fiind adaptate pentru studiul nucleilor i citoplasmelor (coloraii morfologice) Afinitatea tinctorial a substraturilor din materiale biologice este caracterizat prin civa termeni cu semnificaie general: - acidofilie - substratul se coloreaz cu reactivi acizi (ex.eozina) - bazofilie - substratul se coloreaz cu reactivi bazici (ex. hematoxilina) - metacromazie - este caracteristic reactivilor tiazidici (ex. albastrul de toluidin) - ortocromazie

25

MONTAREA
Scop i mecanism: Protejarea de deteriorri Conservare i asigurarea unui mediu omogen Medii de montare: Naturale

Anhidre: balsam de Canada, colofoniu Apoase: glicerina

Sintetice: entelan, pertex

26

EXAMINAREA PREPARATULUI MICROSCOPIC

27

Tehnici de colorare uzuale (histologice) i speciale (histochimice)

COLORAIA CU HEMATOXILIN-EOZIN (HE) Coloraie uzual standard pentru esuturi
Principiu Presupune colorarea succesiv a seciunilor histologice: cu un colorant bazic - hematoxilina, care evideniaz structurile bazofile (cromatina nuclear, ribozomii citoplasmatici, granulele de secreie, etc.) n nuane de albastru cu un colorant acid eozina - evideniaz substraturile acidofile (citoplasmele celulelor mature, fibrele colagene, fibrele musculare), care se coloreaz n nuane de roz pal la roz viu rou

28

Timpii coloraiei hematoxilin-eozin

Deparafinare cu xilen, toluen, 3 bi - 2-3 minute fiecare Deshidratare n alcool etilic conc. descresctoare 96, 80, 70 % - 2-3 minute fiecare Hidratare cu ap distilat (AD) - 2 minute Colorarea nucleilor cu hematoxilin - 5 minute Splare n ap de robinet (AR) pn seciunile devin albastre (de obicei 1 min. este suficient). Colorare cu eozin - 1-2 minute Splare n AD - 1-2 minute Deshidratare: n alcool etilic conc. cresctoare (70, 80, 90%) - 2-3 minute fiecare Clarificare: 3 bi succesive de xilen, toluen - 2-3 minute fiecare Montare n balsam de Canada
29

Rezultate:

cromatina nuclear, ribozomii citoplasmatici, granulele de secreie - se coloreaz n nuane de albastru citoplasma celulelor mature, fibrele colagene, fibrele musculare - se coloreaz n nuane de roz pal la roz viu-rou

30

Coloraia van Gieson

Indicaie: Coloraie uzual tricrom pentru esuturi Folosete trei colorani : 1. hematoxilin feric 2. acidul picric 3. fuxin acid Rezultate: 1. Nuclei negri 2. Citoplasma galben 3. Fb. de colagen rou intens

31

Coloraia Masson
Indicaie: Coloraie special tricrom pentru esuturi Colorani: - Hematoxilin feric - Soluie colorant A fuxin acid - Soluie colorant B albastru de anilin Rezultate: - Nucleul negru - Citoplasma rou-violet deschis - Fb. colagen albastru intens

32

Alte coloraii pentru esuturi

Coloraia Giemsa
Colorani: sol. May Grnwald, sol. Giemsa, acid acetic Rezultate: - nuclei rou violet, citoplasme policrome (de la albastru pal la albastru nchis) - cartilaj albastru - mucina violet Util pentru detalii morfologice n esuturi limfoide: splin, ganglion limfatic, mduva osoas 33

Coloraia Mallory

Colorani: 1. fuxin acid 2. albastru Mallory Rezultate: 1. Nuclei rou intens 2. Citoplasma roie 3. Fb.de colagen i reticulin albastru 4. esut muscular neted violet 5. esut muscular striat rou / portocaliu

34

Coloraia Azan

Util pentru studiul glandelor endocrine Colorani: azocarmin C, albastru Heidenhein Rezultate: - nucleu rou viu, - citoplasma - albastru roiatic, - fb. colagen i reticulin albastru deschis - esut muscular striat rou, orange sau galben
35

TEHNICI SPECIALE DE EXAMINARE A ESUTULUI CONJUNCTIV

METODE PENTRU EXAMINAREA FIBRELOR CONJUNCTIVE: Pentru colagen: Coloraia van Gieson, coloraia Masson

Pentru fibrele de reticulin: Impregnare argentic Gmri - apar colorate n negru Pentru fibre elastice: Rezorcin fucsin bazic Weigert albastre Orcein cafeniu rocate
36

Fibre elastice Aorta col. RFW

37

Fibre elastice - Aorta, col. orcein

38 38

Impregnare argentic Gmri - fibrele de reticulin: apar colorate n negru

39

TEHNICI SPECIALE PENTRU EXAMINAREA ESUTULUI MUSCULAR

METODA HEIDENHEIN - fibra secionat longitudinal se evideniaz structura periodic a miofibrilelor - se remarc alternana de zone clare i ntunecate (discuri clare i ntunecate) Cnd fibra este secionat transversal apare ca o formaiune punctiform de culoare neagr

40

TEHNICI SPECIALE PENTRU EXAMINAREA ESUTULUI NERVOS

1. Metoda Nissl este o metoda regresiv, metacromatic i se folosete pentru evidenierea corpusculilor Nissl, care apar ca o reea punctiform violet n toat citoplasma, iar nucleul negru
Rezultate:

- imagine de ansamblu albastru deschis - nuclei albastru palid cu periferia intens colorat - nucleol albastru-violet 2. Impregnarea argentic este o metod folosit pentru evidenierea - neurofibrilelor IMPREGNAREA RAMON Y CAJAL - prelungirile nervoase IMPREGNAREA ARGENTICA GOLGI - microglia - IMPREGNAREA ARGENTICA RIO HORTEGA 3. Metoda cu acid osmic pentru evidenierea tecii de mielin care va apare impregnat n negru

41

Metoda Nissl

42

Impregnarea argentic

a. neurofibrile IMPREGNAREA RAMON Y CAJAL b. prelungiri nervoase IMPREGNAREA ARGENTIC GOLGI c. microglia - IMPREGNAREA ARGENTIC RIO HORTEGA
b c

43

Metoda cu acid osmic

evidenierea tecii de mielin - apare impregnat n negru

44

TEHNICI DE EXAMINARE A ESUTULUI EPITELIAL

IMPREGNAREA ARGENTIC RANVIER Folosit pentru evidenierea interstiiului dintre celulele epiteliului din seroase limitele intercelulare apar net n culoarea neagr

45

COLORAII CITOLOGICE
Sunt utilizate pentru evidenierea anumitor organite celulare METODA CAJAL DA FANO Utilizat pentru evidenierea complexului Golgi Rezultate: - Nuclei necolorai - Aparatul Golgi reea perinuclear de culoare neagr - Citoplasma aurie METODA HEMATOXILIN FERIC REGAUD Folosit pentru evidenierea mitocondriilor Rezultate: - Nucleu necolorat - Nucleol negru - Mitocondrii ca nite puncte negre METODA BRACHET: Colorani: verde metil pironin Rezultate: - ADN verde - ARN rou
46

Histochimia glucidelor, lipidelor i proteinelor

Histochimia glucidelor Coloraia PAS: Colorani: acid periodic, reactiv Schiff Rezultate: glucidele se coloreaz n rou viu Carmin amoniacal BEST: Glicogen rou Histochimia lipidelor Colorani: Sudan (III, IV, B), Scharlah Rezultate: - Lipide colorate n rou-portocaliu Observaie: Sunt coloraii la ghea, folosindu-se o soluie saturat alcoolic a colorantului
47

Histochimia lipidelor Colorani: Sudan III

48

Coloraia PAS

49

HISTOLOGIE

tiina care se ocup cu studiul structurii microscopice a celulelor, esuturilor i organelor

HISTOLOGIA

ESUTURILE

Structuri supracelulare alctuite din celule unite ntre ele printr-o substan intercelular.

4 categorii de esuturi: epitelial, conjunctiv, muscular, nervos

esuturile alctuiesc ORGANE

ESUTURILE EPITELIALE

Caracterele generale ale epiteliilor

Clasificarea epiteliilor
1.
2.

Epitelii de acoperire

Epitelii glandulare 3. Epitelii senzoriale

EPITELIILE DE ACOPERIRE

Clasificarea epiteliilor de acoperire

Epiteliul simplu pavimentos

Localizare

Epiteliul simplu pavimentosmezenterul- impregnare argentic

Epiteliul simplu cilindric

Localizare

Epiteliul simplu cilindricvilozitatea intestinal HE

Epiteliul stratificat pavimentos

Localizare

Epiteliul stratificat pavimentos nekeratinizat - mucoasa oral HE

Epiteliul stratificat pavimentos keratinizat - tegumentul HE

Tegumentul subire HE

Tegumentul gros HE

Epiteliul pseudostratificat cilindric

Localizare

Epiteliul pseudostratificat cilindric ciliat- epiteliul respirator HE

Epiteliul pseudostratificat cilindric ciliat- epiteliul respirator HE

Epiteliul de tranziie

Epiteliul de tranziie- uroteliul HE

Epiteliul simplu pavimentos impregnare argentic Mezoteliul din structura seroasei peritoneale 1-Substan de ciment ntre celule

Epiteliul simplu cilindric hematoxilin-eozin Pe suprafaa vilozitilor intestinale 1-Epiteliu simplu cilindric; 2-Ax conjunctivo-vascular; 3-Enterocit; 4-Celul caliciform; 5-Platou striat

Epiteliul stratificat pavimentos nekeratinizat hematoxilin-eozin Epiteliul mucoasei orale 1-Strat bazal; 2-Strat intermediar; 3-Strat superficial

Epiteliul stratificat pavimentos keratinizat hematoxilin-eozin Epidermul din structura tegumentului 1-Strat bazal; 2-Strat intermediar; 3-Strat superficial; 4-Keratina

Epiteliul pseudostratificat cilindric ciliat Epiteliul respirator col. HE 1- celule bazale 2- celule cilindrice ciliate 3- celule mucoase 4- cili

Epiteliul de tranziieUroteliul col. HE 1- celule bazale 2- celule n rachet 3- celule n umbrel

ESUTURILE EPITELIALE
1.

Epitelii de acoperire

2.
3.

Epitelii glandulare
Epitelii senzoriale

EPITELIILE GLANDULARE

Formate din celule nalt difereniate, specializate pentru funcia de secreie. Secreia implic:
1. 2. 3.

Sinteza unui anumit produs Stocarea (eventual) Eliminarea produsului n afara celulei

Secreie Elaborare

Dup locul unde este eliminat produsul de secreie: exocrine endocrine paracrine

Clasificarea epiteliilor glandulare

GLANDELE EXOCRINE
Formate din: - adenomer - ductul excretor Clasificare: a). Dup aspectul ductului excretor: simple i compuse b). Dup aspectul adenomerului: tubulare, acinoase i alveolare c). Dup modul de eliminare a secreiei: merocrine, apocrine i holocrine d). Dup natura produsului secretat: seroase, mucoase i mixte

a). Dup aspectul ductului excretor: simple i compuse

b). Dup aspectul adenomerului: tubulare, acinoase i alveolare

Tipuri de glande

c). Dup modul de eliminare a secreiei: merocrine, apocrine i holocrine

Glande merocrine, apocrine i holocrine

d). Dup natura produsului secretat: seroase, mucoase i mixte

Glanda simpl tubular

Glanda simpl tubular

Glanda Lieberkuhnjejun HE

Glanda simpl alveolar

Glanda sebacee HE

Glanda sebacee HE

Glanda tubulo-acinoas compus

Acinul seros

Acinul mucos

Acinul mixt

Glanda salivar seroas

Glanda salivar mixt

GLANDELE ENDOCRINE

Celulele endocrine pot fi dispuse: a). sub form de cordoane b). sub form de foliculi

Epiteliul glandular endocrin cu dispoziie sub form de cordoane: suprarenala

Suprarenala HE

Suprarenala - zona fasciculat HE

Epiteliul glandular endocrin cu dispoziie sub form de foliculi: tiroida

Foliculii tiroidieni HE

31

Glanda simpl tubular Glanda Lieberkuhn din intestinul subire col. HE 1- vilozitatea intestinal 2- glandele Lieberkuhn n seciune transversal i longitudinal 3- enterocite cu platou striat 4- celule mucoase

Glanda simpl alveolar Glanda sebacee din tegument col. HE I- adenomerul II- ductul excretor 1- celule bazale 2- sebocite: celule care conin vacuole lipidicesecret sebum 3- celule degenerate

Glanda tubulo-acinoas compus Glandele salivare col. HE A- acinul seros B- acinul mucos C- acinul mixt D- canalicul excretor 1- celule mioepiteliale 2- semiluna Gianuzzi

Glanda endocrin cu dispunere sub form de cordoane Zona fasciculat din corticosuprarenal col. HE 1- cordoane de celule endocrine 2- capilare sangvine 3- nuclei ai celulelor endoteliale

Gland endocrin cu dispunere sub form de foliculi Tiroida col. HE 1- celulele endocrine (epiteliul folicular) 2- cavitatea folicular cu coloid 3- capilare sangvine

ESUTURILE CONJUNCTIVE

esuturile conjunctive

Celule: a) fixate: fibroblaste, fibrocite, celule mezenchimale,

pericite, adipocite, mastocite b) tranzitorii: limfocite, plasmocite, PMN, macrofage

Substan fundamental Fibre: - de colagen: tip I : tegument, tendon, os

tip II : cartilaj tip III : de reticulin tip IV : lamina bazal

- elastice Substana fundamental i fibrele formeaz matricea

extracelular

Clasificarea esuturilor conjunctive

esuturi conjunctive embrionare (tranzitorii): 1. esutul mezenchimatos 2. esutul mucos esuturi conjunctive permanente: 1. esutul conjunctiv lax 2. esuturile conjunctive dense - neordonat - ordonat: a. colagen (tendonul, aponevroza, esutul fibro-lamelar) b. elastic esuturi conjunctive specializate: 1. esutul reticular; 2. esutul adipos; 3. Cartilajul; 4. Osul; 5. Sngele 6. esutul hematopoietic; 7. esutul limfatic;

Clasificarea esuturilor conjunctive

esuturi conjunctive embrionare (tranzitorii): 1. esutul mezenchimatos 2. esutul mucos esuturi conjunctive permanente: 1. esutul conjunctiv lax 2. esuturile conjunctive dense - neordonat - ordonat: a. colagen (tendonul, aponevroza, esutul fibro-lamelar) b. elastic

Clasificarea esuturilor conjunctive

esuturi conjunctive specializate: 1. esutul reticular 2. esutul adipos 3. Cartilajul 4. Osul 5. Sngele 6. esutul hematopoetic 7. esutul limfatic

esuturile conjunctive embrionare (tranzitorii): esutul mucos gelatina lui Wharton cordonul ombilical HE

esuturile conjunctive permanente : esutul conjunctiv lax (areolar)

esutul conjunctiv lax (areolar) HE

esutul conjunctiv dens neordonat dermul HE

esutul conjunctiv dens ordonat colagen esutul tendinos

Tendonul seciune longitudinal - HE

Tendonul seciune longitudinal - HE

Tenocite: nuclei gemeni

Tendonul ca organ

Tendonul seciune transversal - HE

Tendonul seciune transversal - HE

esutul conjunctiv dens ordonat colagen esutul fibro-lamelar

Structura corneei

esutul fibro-lamelar HE

esutul mucos - coloraie hematoxilin-eozin Seciune prin cordonul ombilical

1-Vas ombilical; 2-Celule tinere de tip mezenchimal cu prelungiri anastomozate 3- Substan fundamental

esut conjunctiv lax coloraie hematoxilineozin

1-Substan fundamental; 2-Fibre colagene; 3-Nuclei ai fibroblastelor 4-Nuclei ai fibrocitelor 5- Nuclei ai celulelor conjunctive migrate; 6-Capilar sanguin

esut conjunctiv dens neordonat - coloraie hematoxilin-eozin

1-Substan fundamental; 2-Fibre colagene dispuse n fascicule groase; 3-Nuclei ai celulelor conjunctive; 4-Capilar sanguin

esut conjunctiv dens ordonat colagen esutul tendinos- sec longit. - coloraie hematoxilineozin
1- Fascicule de fibre de colagen; 2- Epitenonium; 3- Peritenonium; 4- Nuclei gemeni ai tenocitelor

Tendonul ca organ sec transversal coloraie hematoxilin-eozin

1- Epitenonium; 2- Peritenonium; 3- Endotenonium; 4- Fascicul de fibre de colagen

esut conjunctiv dens ordonat esutul fibro-lamelar coloraie hematoxilin-eozin

1- Lamele conjunctive paralele; 2- Nucleii celulelor conjunctive (keratocite);

esutul dens ordonat elastic

esutul elastic ligamentul galben RFW sec. longitudinal

Lamelele elastice din structura aortei col RFW

Lamelele elastice din structura aortei col. orcein

esutul reticular

esutul reticular

Limfoganglionul

Limfoganglionul- zona medular HE

esutul adipos
n funcie de localizare, structur i culoare se disting dou tipuri de esut adipos:

esut adipos alb-galben, comun, unilocular esut adipos brun, multilocular.

esutul adipos alb, comun

esutul adipos alb - SEM

Celule adipoase uniloculare HE

esutul adipos alb- col HE

Celule adipoase uniloculare Sudan III i H

esutul adipos alb- col Sudan III i H

esutul adipos brun

Celule adipoase multiloculare HE

esutul adipos brun- col HE

esutul dens ordonat elastic Ligamentul galben Sec long Col. RFW 1- fascicule de fibre elastice 2- spaii ocupate de celule i subst fundamental

esutul dens ordonat elastic Media aortei Col orcein 1- lamele elastice fenestrate 2- spaii ocupate de esutul conj de legtur

esutul reticular Medulara limfoganglionului Col HE 1- celule reticulare 2- sinusuri limfatice medulare 3- cordoane de limfocite

esut adipos comun coloraie hematoxilineozin

1-Celule adipoase uniloculare dispuse n paniculi adipoi; 2-Capilar sanguin; 3-Sept conjunctiv

esut adipos comun coloraie Sudan III i hematoxilin 1-Celul adipoas unilocular: vacuola lipidic se coloreaz n portocaliu; 2-Nucleul celulei adipoase; 3-Sept conjunctiv

esutul adipos brun Col HE

1-Adipocite multiloculare dispuse n cordoane; 2-Capilare; 3- Sept conj

ESUTURILE CARTILAGINOASE

Clasificarea esuturilor conjunctive

esuturi conjunctive embrionare (tranzitorii): 1. esutul mezenchimatos 2. esutul mucos esuturi conjunctive permanente: 1. esutul conjunctiv lax 2. esuturile conjunctive dense - neordonat - ordonat: a. colagen (tendonul, aponevroza, esutul fibro-lamelar) b. elastic

Clasificarea esuturilor conjunctive

esuturi conjunctive specializate: 1. esutul reticular 2. esutul adipos 3. Cartilajul 4. Osul 5. Sngele 6. esutul hematopoetic 7. esutul limfatic

CARACTERE GENERALE ALE ESUTURILOR CARTILAGINOASE

Sunt esuturi conj specializate: conin cele 3 elemente: celule, SF, fibre Celulele : condrogenice condroblaste condrocite: se gsesc n caviti condroplaste; formeaz grupe izogene coronare sau axiale Substana fundamental este predominant, semidur i elastic rezistena i funcia de suport. SF bazofil n esuturile tinere; eozinofil n cele adulte Fibrele au caracter mascat: nu se disting n masa substanei fundamentale Ansamblul de substan fundamental i fibre formeaz matricea cartilaginoas Matricea cartilaginoas este omogen i are aspect de mozaic: a) matricea teritorial este bazofil b) matricea interteritorial este eozinofil Creterea se face prin apoziie i diviziune interstiial Nu sunt vascularizate Acoperite de pericondru

Clasificare: esuturi cartilaginoase de tranziie esuturi cartilaginoase permanente n funcie de natura fibrelor, se disting trei tipuri de cartilaj:
cartilajul cartilajul cartilajul

hialin, conine fibre de colagen tip II; elastic, conine fibre elastice; fibros, conine fibre de colagen tip I.

Tipurile de cartilaj

Celulele cartilaginoase

Matricea cartilaginoas

esutul cartilaginos hialin HE

esut cartilaginos hialincoloraie hematoxilineozin

1-Pericondru; 2-Nuclei ai fibroblastelor; 3-Vase sanguine; 4-Condroblaste; 5-Condrocite n condroplaste; 6-Matrice teritorial; 7-Matrice interteritorial

ESUTUL CARTILAGINOS ELASTIC col. RFW

ESUTUL CARTILAGINOS ELASTIC col. RFW

esut cartilaginos elastic Sec prin epiglot Col. RFW

1.

2.

Fibrele elastice din pericondru Fibrele elastice din matricea cartilaginoasa Condroplaste

3.

ESUTURILE OSOASE

CARACTERE GENERALE ALE ESUTURILOR OSOASE

Sunt esuturi conj specializate: conin cele 3 elemente: celule, SF, fibre Celulele : 2 tipuri: celule osteoformatoare : celula osteoprogenitoare, osteoblastul, osteocitul; celula osteodistrugtoare : osteoclastul Substana fundamental este predominant, mineralizat, ceea ce confer duritate i rigiditate; Fibrele: de colagen tip I, au caracter mascat: nu se disting n masa substanei fundamentale Ansamblul de substan fundamental i fibre formeaz matricea osoas Matricea osoas este omogen i are aspect eozinofil Prezint o structur lamelar Creterea se face prin apoziie Sunt vascularizate

Celulele osoase

Celulele osoase

Celulele osoase

Matricea osoas

Format din: componenta anorganic 65%: Ca i P formeaz cristale de hidroxiapatit bicarbonai, citrai, Mg, K, Na; componenta organic 35%: colagen tip I glicoproteine: osteocalcina, osteopontina, sialoproteina osoas

Exist dou modaliti de a studia esutul osos:

Componenta anorganic se studiaz pe preparatele de os lefuit.

Componenta organic se studiaz pe preparatele de os decalcificat.

Lamela osoas

Lamela osoas unitatea morfologic a esutului osos Este constituit din: matrice osoas i osteocite situate n osteoplaste, legate ntre ele prin sistemul canalicular

Caractere Celulele

es. cartilaginos Condrogenice Condroblaste Condrocite n condroplaste, n grupe izogene Colagen II, I sau elastice Omogen, Matricea teritorial bazofil Matricea interteritorial eozinofil Compact Pe seama pericondrului, nu este vascularizat

es. osos Celule osteoprogenitoare Osteoblaste Osteocite n osteoplaste, izolate Osteoclaste Colagen I Omogen, eozinofil

Fibrele Matricea

Structura Nutriia

Lamelar Este vascularizat

Creterea

Prin apoziie i diviziune interstiial

Prin apoziie

CLASIFICAREA TESUTURILOR OSOASE

esuturile osoase sunt : 1. esuturi osoase imature 2. esuturi osoase mature spongios compact

ESUTURILE OSOASE MATURE

SPONGIOS COMPACT

ESUTUL OSOS SPONGIOS

Macroscopic: aspect buretos, spongios Structural : trabecule osoase care delimiteaz caviti (areole)

ESUTUL OSOS SPONGIOS

Osul spongios decalcificat - col. HE

esut osos spongios decalcificat- coloraie hematoxilin-eozin

1-Nuclei ai osteoblastelor n repaus; 2-Nuclei ai osteoblastelor n activitate; 3-Matrice osoas; 4-Osteocite n osteoplaste; 5-Areole

ESUTUL OSOS COMPACT

ESUTUL OSOS COMPACT (seciune

transversal)

OSUL COMPACT lefuit, montat n balsam de Canada (seciune transversal)

OSUL COMPACT lefuit, montat n balsam de Canada (seciune transversal)

Canal Havers osteoplaste Sistem osteoplastocanalicular Canal Volkmann Sistem interhaversian

montat n balsam de Canada- sec transversal 1-Canal Havers; 2-Lamele osoase cu osteoplaste; 3-Sistem interhaversian; 4-Osteon sau sistem haversian

esut osos compact lefuit i

Osul compact decalcificat col. HE (seciune longitudinal)

Periostul

Periostul

esut osos compact

decalcificat- coloraie hematoxilin-eozin- sec longitudinal 1-Matrice osoas (fibre colagene i substan fundamental); 2-Osteocite n osteoplaste; 3-Canal Havers; 4-Canal Volkman

OSIFICAREA ENDOCARTILAGINOAS

OSIFICAREA ENDOCARTILAGINOAS

1.Zona cartilajului de rezerv

2.Zona cartilajului hiperplazic seriat

3.Zona cartilajului hipertrofic i calcificat

4.Zona de eroziune

5. Zona de osteoid 6. Zona de esut osos

I. II.

III.

IV. V. VI.

Zona de cartilaj de rezerv Zona de cartilaj hiperplazic seriat Zona de cartilaj hiperplazic i calcificat Zona de eroziune Zona de osteoid Zona de esut osos

1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10.

Condrocite n condroplaste Matricea cartilaginoas Condrocite n grupe izogene axiale Condrocite hipertrofiate Matrice cartilaginoas calcificat Lacune de eroziune Osteoid Nucleii osteoblastelor Travee osoas cu osteocite n osteoplaste Areole cu elemente medulare

1.

I.

II.

III.

IV. V. VI.

Zona de cartilaj de rezerv Zona de cartilaj hiperplazic seriat Zona de cartilaj hipertrofic i calcificat Zona de eroziune Zona de osteoid Zona de esut osos

2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10.

Condrocite n condroplaste Matricea cartilaginoas Condrocite n grupe izogene axiale Condrocite hipertrofiate Matrice cartilaginoas calcificat Lacune de eroziune Osteoid Nucleii osteoblastelor Travee osoas cu osteocite n osteoplaste Areole cu elemente medulare

ESUTURILE MUSCULARE

ESUTURILE MUSCULARE

Sunt formate din celule fibre musculare adaptate pentru funciile de contractilitate i conductibilitate. Fibrele musculare prezint organite specifice: miofibrilele, iar organitele comune i nucleii ocup poziii caracteristice. Elementele structurale au denumiri specifice:

sarcolem, sarcoplasm, sarcozomi, reticul sarcoplasmatic

Tipurile de esuturi musculare

esutul muscular striat cardiac esutul muscular striat scheletal i visceral esutul muscular neted

esutul muscular striat scheletal

MIOFIBRILELE: dispuse n fascicule longitudinale, formeaz coloanele Leydig i cmpurile Conheim

MIOFIBRILELE: alternan regulat de discuri clare , I - izotrope i monorefringente i discuri ntunecate , A - anizotrope i birefringente. Discurile se dispun la acelai nivel n toate miofibrilele unei fibre aspect striat caracteristic .

esutul muscular striat scheletal col. HE - seciune longit.

esutul muscular striat scheletal col. HFH- seciune longit.

esutul muscular striat scheletal col. HFH

Muchiul ca organ

Muchiul ca organ

Muchiul ca organ - seciune transversal

col. HE

esutul muscular striat cardiac

esutul muscular striat cardiac

esutul muscular striat cardiac col. HE

esutul muscular striat cardiac col. HE

esutul muscular striat cardiac col. HFH

esutul muscular neted

24

26

esutul muscular striat scheletal col. HE - seciune longit.

1 fibre musculare striate scheletale; 2 nuclei; 3 disc clar; 4 disc ntunecat; 5 endomisium

esut muscular striat scheletal - coloraie hematoxilin-feric Heidenheim

1-Nuclei ai fibrelor musculare; 2-Sarcoplasma cu striaii date de prezena miofibrilelor

Muchi striat scheletal, ca organ - coloraie HE sec. transversal

1-Epimisium; 2-Perimisium; 3-Fibre musculare striate n seciune transversal; 4-Endomisium

esutul muscular striat cardiac col. HE - seciune longit. i transv.

1 fibre musculare striate cardiace; 2 nucleu; 3 fus sarcoplasmic axial; 4 disc clar; 5 disc ntunecat 6 discuri intercalare; 7 endomisium; 8 capilar

esutul muscular striat cardiac col. HFH - seciune longit.

1 fibre musculare striate cardiace; 2 nucleu; 3 fus sarcoplasmic axial; 4 disc clar; 5 disc ntunecat 6 discuri intercalare; 7 endomisium

esut muscular neted HE

32

SISTEMUL HEMOIMUN

SISTEMUL HEMOIMUN
1.

2. 3.

Cuprinde 3 compartimente: Ccompartimentul central: mduva hematogen i organele n care se formeaz celulele imunocompetente (timus i echivalentele Bursei lui Fabricius) Compartimentul circulant: sngele Compartimentul periferic: esuturile unde celulele mieloide i imunocompetente i ndeplinesc funciile

SISTEMUL HEMOIMUN
1.

2.

3.

Cuprinde 3 populaii celulare: Celulele mieloide: hematii, granulocite i megacariocite- trombocite, cu originea n mduva hematogen Celulele imunocompetente: limfocitele T i B, cu originea n timus i echivalentele Bursei lui Fabricius Monocitele: devin macrofage la nivelul esuturilor

Organele hemato- i limfopoietice

Sunt organe parenchimatoase, formate din capsul, strom i parenchim. Capsula: esut conj dens, trimite septe, travee n interiorul organului Stroma: esut reticular, exc timusul Parenchimul este format din:
esut hematopoietic, mieloid: MRH esut limfopoietic, limfoid: organele limfoide centrale: timusul, echivalentele Bursei lui Fabricius i periferice: limfoganglionii, splina, amigdalele

Clasificarea esuturilor conjunctive

esuturi conjunctive embrionare (tranzitorii): 1. esutul mezenchimatos 2. esutul mucos esuturi conjunctive permanente: 1. esutul conjunctiv lax 2. esuturile conjunctive dense - neordonat - ordonat: a. colagen (tendonul, aponevroza, esutul fibro-lamelar) b. elastic esuturi conjunctive specializate: 1. esutul reticular; 2. esutul adipos; 3. Cartilajul; 4. Osul; 5. Sngele 6. esutul hematopoietic; 7. esutul limfopoietic;

MDUVA ROIE HEMATOGEN

Localizat la nivelul cavitilor osoase Organ parenchimatos, format din: 1. Capsul - endostul 2. Strom esutul conjunctiv reticular 3. Parenchim reprezentat de dou categorii de celule: I) nehematopoietice

II) hematopoietice

Capsula: endostul

Stroma: esut reticular

Capilarele sinusoide

Capilarele sinusoide

Parenchimul: celulele

nehematopoietice

Celulele reticulare nefagocitare Celulele reticulare fagocitare (macrofagele) Mastocitele Celulele adipoase

Parenchimul: celulele hematopoietice

Parenchimul: celulele hematopoietice

celulele hematopoietice

Parenchimul:

MDUVA ROIE HEMATOGEN col HE

Megakariocitul

 1. 2. 3.

Localizat la nivelul mediastinului Organ parenchimatos format din: Capsul: esut conjunctiv fibros septe Strom: celule reticulo-epiteliale Parenchim: limfocite T - este organizat sub form de lobuli timici, care prezint dou zone: 1). corticala 2). medulara

TIMUSUL

Capsula: esut conjunctiv fibros septe

Stroma: celulele reticulo-epiteliale

Parenchimul: limfocite T

Parenchimul: limfocite T

Lobulul timic

Corticala

Medulara

Timus- corpuscul Hassal

Timusul col. HE

Mduva hematogen Col. HE

1. 2.

3. 4. 5.

Endost Insule de celule hematopoietice Megakariocit Vase Celule adipoase (nehematopoietice)

Timusul col HE

1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8.

Capsula Septe conjunctive Lobul timic Corticala Medulara Vase Corpuscul Hassal Nuclei ai celulelor reticulo-epiteliale

SISTEMUL CARDIO-VASCULAR

SISTEMUL CARDIO-VASCULAR
Reprezentat de:

inim vasele sanguine vasele limfatice Vasele sanguine reprezint un sistem tubular nchis, format dintr-o serie de structuri adaptate funciei de vehiculare a sngelui: artere, vene, i capilare

CARACTERE GENERALE ALE VASELOR SANGUINE

- structuri tubulare - au peretele format din trei tunici (cu excepia capilarelor): INTIMA (ENDARTERA): endoteliu, MB, strat subendotelial, LEI MEDIA: lame elastice/ fibre musc. netede, LEE ADVENTIIA: tes. conj. lax cu vase i nervi

Capilarele

Arterele elastice
Ex. : Aorta, a. pulmonar, a. subclavie, a. carotida comun Peretele arterial este format din trei tunici: Intima - 10% Media - 80% Adventiia - 10%.

Aorta col. HE

Aorta col. RFW

Aorta, col. orcein

14

Arterele musculare
Au peretele alctuit din trei tunici: Intima - 5-10% Media - 50% Adventiia - 40-45%

Venele
Intima - 5% Media - 15% Adventiia - 80%.

Arter muscular Ven

Diagnostic diferenial

Arter muscular Ven

Diagnostic diferenial

Pachetul vasculo-nervos col. HE

Aorta - coloraie HE
I=10%; M=80%; A=10%
1-Nuclei ai celulelor endoteliale; 2-Fibre colagene din esutul de legtur dintre lamelele elastice; 3-Nuclei ai fibrocitelor; 4-Fibre musculare netede din esutul de legtur dintre lamelele elastice; 5-Adventiia, esut conjunctiv lax; 6-Vas sanguin (vasa vasorum)

Aorta - coloraie rezorcin-fuxin Weigert

1-Lamele elastice situate n tunica medie; 2-Fibre elastice din esutul conjunctiv lax al adventiiei

Pachetul vasculonervos Arter muscular coloraie HE

I=5-10%; M=50%; A=40-45%
1-Nuclei ai celulelor endoteliale; 2-Limitant elastic intern; 3-Fibre musculare netede; 4-Fibre colagene din esutul de legtur dintre fibrele musculare netede; 5-Adventiia, esut conjunctiv lax

Pachetul vasculonervos Vena - coloraie HE

I=5%; M=15%; A=80%
1-Intima, cu nuclei ai celulelor endoteliale; 2-Media, fibre musculare netede i esut conjunctiv de legtur; 3-Adventiia, esut conjunctiv lax

ESUTUL NERVOS

esutul nervos

Este alctuit din: neuroni - celule permanente, cu cel mai nalt grad de difereniere; celulele gliale (nevroglii) - rol auxiliar. Substana fundamental - absent, echivalentul S.F. neuropilul Alturi de esutul conjunctiv i vasele de snge intr n alctuirea organelor din sistemul nervos central i periferic

Neuronul

Definiie - unitatea morfo-funcional a esutului nervos Caracteristici:

Excitabilitatea Conductibilitatea Comunicabilitatea

Celula glial (nevroglia)

Dup origine, nevroglia se mparte n : 1. Macroglia (de origine neuroectodermic) : - macroglia central - astrocitul (glia) protoplasmatic

- astrocitul fibros (glia fibrilar) - oligodendrocit - celulele NG2+ - macroglia periferic cel Schwann - cel satelite
- glia ependimar 2. Microglia (de origine mezodermic), aparine sistemului macrofagic-mononuclear.

Neuronul
Structura: Pericarion (corpul celular) Prelungiri:
Dendritele Axonul

Pericarionul

Neurilem Nucleu Neuroplasm

Organitele comune Incluziuni Organitele specifice:
Corpusculii Nissl (substana tigroid) Neurofilamentele Neurotubulii 6

Corpusculii Nissl

Neurofibrilele

Neurotubulii

Prelungirile neuronale

Alctuite dintr-o prelungire neuronal: neuritul i tecile acesteia. Topografic, pot fi: - centrale - periferice Structural, pot fi: - amielinice - mielinice

Fibrele nervoase

Fibra nervoas mielinic periferic

Format din neurit i trei teci concentrice:
1. Teaca de mielin 2. Teaca glial Schwann 3. Teaca endoneural Henle

Teaca de mielin

Teaca Schwann

Teaca Henle endoneural

Neurofibrilele- impregnare argentic

Mduva spinrii- seciune transv. impregnare argentic

Mduva spinrii- seciune transv. impregnare argentic

Neurofibrile - coloraie impregnare argentic Reea de neurofibrile prezent att n pericarion, ct i n prelungiri

Fibre nervoase mielinice periferice col. cu acid osmic

Teaca de mielin a fibrelor nervoase periferice - coloraie acid osmic Seciune longitudinal i transversal

Nervul ca organ

Pachetul vasculo-nervos col. HE

Nerv ca organ coloraie hematoxilineozin 1-Epinerv; 2-Perinerv; 3-Fibre nervoase mielinice secionate transversal; 4-Fibre nervoase mielinice n seciune oblic