Acs.

Monoclonales
1. Biotecnología e Inmunología
- Objetivo: Producción de moléculas
-Homogéneas
- En gran cantidad
- Nuevas
- Aplicaciones
- Investigación
- Prácticas
- Diagnóstico
- Seguimiento/pronóstico
- Profilaxis
- Terapia
 Acs monoclonales

- Características
- Producidos por una sola clona de células
- Mismo iso, alo e idiotipo
- Conjunto HOMOGÉNEO de moléculas de Ig
- Acs. monoclonales de especificidad pre-definida
- Métodos de producción
- Hibridización de células somáticas
- Hibridomas
- Ingeniería genética
- Anticuerpos recombinantes
 2. Acs monoclonales
Células
Producción por hibridomas producto-
ras de Ac

Ag
(IL-10) Ratón Bazo
+

Medio fusión
selectivo
(HAT) Mieloma no
secretor
(HGPRT-/-)
Hibridomas
2. Acs monoclonales
Producción por hibridomas

Ac. anti-IL-10
purificado

Ascitis

Ac anti-IL-10
3. Animales con eliminación (KO) funcional de genes
exones

5’ 1 2 3 3’ 5’ 1 neo 3 tk 3’

Gene de Transfección
la IL-10 a células
embrionarias
en cultivo
Inserción
aleatoria 5’ 1 neo 3 tk 3’

Recombinación
homóloga
1 neo 3 tk 1 2 3
Substitución
del gene
Inserción de los neo 3
genes neo y tk 1
3. Animales con eliminación (KO) funcional de genes
Inserción
aleatoria
Cultivo con
neomicina

Recombinación Cultivo con

homóloga ganciclovir
No inser-
ción

Blastocisto
Células con el
Ratona pseudo- gene de IL-10
embarazada mutado
4. Otras técnicas de silenciamiento de genes
- “Floxeo” de genes (floxed genes)
- K.O. condicional
- De tejido
- De tiempo
- Estrategia
- Clonación del gene
- Adición de secuencias flanqueantes loxP (Flox)
- Sustitución del gene normal en ratón (R1)
- Ratón transgénico para la recombinasa Cre (R2)
Cre + loxP Recombinación
- R1 x R2

Gen no funcional
4. Otras técnicas de silenciamiento de genes

- Sistema Cre - loxP

4. Otras técnicas de silenciamiento de genes
- Sistema Cre - loxP
4. Otras técnicas de silenciamiento de genes
- Sistema Cre - loxP
4. Otras técnicas de silenciamiento de genes
- Sistema Cre - loxP
4. Otras técnicas de silenciamiento de genes
4. Otras técnicas de silenciamiento de genes
- “Floxeo” de genes (floxed genes)
- RNA anti-sentido
- RNA de interferencia (siRNA)
4. Otras técnicas de silenciamiento de genes
- siRNA
4. Otras técnicas de silenciamiento de genes
- “Floxeo” de genes (floxed genes)
- RNA anti-sentido
- RNA de interferencia (siRNA)
- Expresión de dominantes negativos