UMF Carol Davila Bucureti

Organite nedelimitate de membrane

ef de lucrri Dr. Sanda Maria Creoiu

2012

Organite nedelimitate de membrane

ORGANITE CELULARE
Organitele celulare sunt structuri permanente, cu durat de via mai mic dect a celulei i care se rennoiesc permanent. O parte din organite sunt observabile la microscopul optic i pot fi numite structurale. Ele au dimensiuni de ordinal micrometrilor: mitocondria, aparatul Golgi, centrul celular, ergastoplasma. Alte organite pot fi observate numai la microscopul electronic, avnd dimensiuni de ordinul nanometrilor i sunt numite ultrastructurale: reticulul endoplasmic neted i rugos, lizozomii, peroxizomii, ribozomii, microtubulii, microfilamentele.

ef de lucrri Dr. Sanda Maria Creoiu

Organitele celulare se pot clasifica n: organite delimitate de membrane i organite nedelimitate de membrane.

ORGANITE CELULARE NEDELIMITATE DE MEMBRANE RIBOZOM II

Istoric. Ribozomii sunt denumii i granulele lui Palade, deoarece au fost descoperii la microscopul electronic (n 1951) de savantul american de origine romn George Emil Palade (19 noiembrie 1912, Iai d. 8 octombrie 2008),
3

Organite nedelimitate de membrane

laureat al premiului Nobel 1974.El a pus n eviden particule intracitoplasmatice bogate n ARN, la nivelul crora se realizeaz biosinteza proteinelor. Termenul de ribozom a fost propus de Richard B. Roberts n 1958 . Etimologie. Denumirea de ribozomi provine de la acidul ribonucleic din structura acestora i de la cuvntul grecesc soma corp. Tipuri de ribozomi, localizare . Ribozomii sunt organite citoplasmatice gsite att la procariote ct i la eucariote. La eucariote, ribozomii sunt prezeni n toate tipurile celulare, cu excepia hematiei adulte , dar i n matricea unor organite celulare cum sunt cloroplastele i mitocondriile, unde au rol n sinteza protein-enzimelor specifice. Ribozomii mitocondriali sunt ntotdeauna mai mici fa de ribozomii citoplasmatici i comparabili cu ribozomii procariotelor ceea ce reflect originea pe scara evoluiei a mitocondriei. Ribozomii sunt gsii n celul sub dou forme : liberi i ataai reticulului endoplasmic. Starea n care se gsesc ribozomii depinde de prezena n lanul poliptetidic sintetizat a unei se cvene numite semnal de orientare ctre reticulul endoplasmic (ER-targeting signal sequence). Ribozomii liberi Gsii n citoplasm (citosol) Pot apare singuri sau n grupuri sub form de poliribozomi sau polizomi (ataai de un ARNm) Mai numeroi n celulele implicate n sinteza proteinelor solubile n citoplasm sau care formeaz structuri citoplasmatice importante sau elemente motile. Ribozomii ataai Se gsesc ataai la exteriorul reticulului endoplasmic formnd RER
4

ef de lucrri Dr. Sanda Maria Creoiu

Apar n cantiti mai mari n celulele care secret proteine de export , proteine care n general conin puni disulfurice sau aminoacizi cu cisteina

necesitnd sinteza n lumenul RE Responsabili de sinteza proteinelor care vor intra n constituia membranelor sau vor fi mpachetate n vezicule i stocate n citoplasm sau exportate nafara celulei Celulele angajate n procese intense de sintez proteic conin un numr foarte mare de ribozomi. Ribozomii sunt responsabili de bazofilia citoplasmei. Dup valoarea constantei de sedimentare se descriu la procariote ribozomi 70 S i la eucariote ribozomi 80 S (unitatea Svedberg este o msur a ratei de sedimentare a unui component centrifugat, care depinde att de greutatea molecular ct i de forma tridimensional a componentului). Aceasta diferen de structur st la baza utilizrii antibioticelor care distrug doar ribozomii

procariotici ai bacteriilor fr a aciona asupra ribozomilor 80S. Ribozomii mitocondriali sunt protejai de aciunea antibioticelor prin prezena dublei membrane. Dimensiunile ribozomilor sunt cuprinse ntre 15 30 nm. Structural sunt formai din ribonucleoproteine RNP- i din molecule de ARNr (3 la procariote i 4 la eucariote). Componenta proteic are rol de a stabiliza structura i influnteaz mai degraba abilitatea ARNr de a sintetiza proteine dect de a participa direct la procesul de cataliz. Practic, din punct de vedere funcional ribozomii, prin componenta ARNr, traduc informatia nscris pe ARNm, pentru a forma lanuri polipeptidice i de aceea sunt considerai astazi ca particule enzimatice din categoria ribozimelor. Cele mai cunoscute ribozime naturale sunt: peptidil
5

Organite nedelimitate de membrane

transferaza 23S ARNr, RNase P, Group I and Group II introns, GIR1, branching ribozyme, Leadzyme. n citoplasm, ribozomii pot disocia reversibil n 2 subuniti: mare i mic (50 S i 30 S la procariote i 60 S i 40 S la eucariote). Cele 2 subuniti se asambleaz n funcie de concentraia ionilor de Mg2+ din citoplasm. Pentru ca cele dou subuniti sa fie mpreun concentraia optim a Mg 2+ este de 10-3 M. Sub acest nivel subunitile se dezasambleaz i organitul dispare din citoplasm.

Subunitatea mic ribozomal 40S

Alctuit dintr-o molecul ARN: 18S Conine aprox. 33 lanuri proteice (notate S1S33), cu greutate

molecular mic

Subunitatea mare ribozomal 60S

Alctuit din 3 molecule ARN: 28S, 5,8S (provenite dintr-un transcript

comun de 45S) i 5S Conine aprox. 50 lanuri proteice (notate L1L50), cu greutate

molecular mic Numrul acestora difer de la un tip celular la altul, dar este diferit i n aceeai celul n raport cu momentele de activitate i repaus ale celulei. Biogeneza ribozomilor. Biogeneza ribozomilor are loc n citoplasma i n nucleol i implic funcionarea coordonat a peste 200 de proteine i procesarea celor 4 ARNr cat si asamblarea acestora cu RNP. RNP sunt sintetizate n

citoplasm n vecinatatea nucleului. Componentele proteice ale subunitilor mare i mic sunt importate n nucleu prin porii nucleari cu diametru de 120nm. Prin porii nucleari sunt importate prin transport activ peste 560000 RNP pe minut. ARNr este transcris cu vitez foarte mare n nucleol aici gsindu-se toate cele 45
6

ef de lucrri Dr. Sanda Maria Creoiu

de gene care codific ARNr. Dup aceea este asamblat cu subunitile ribozomale i este exportat prin porii nucleari n citoplasm. Funcia ribozomilor. Ribozomii constituie sediul biosintezei proteinelor prin interaciuni ntre ARNm, ARNt i ARNr fiind denumii aparatul de traducere al celulei. Etapele traducerii informaiei genetice 1. 2. 3. 4. Sinteza aminoacil-ARNt Iniierea sintezei lanului polipeptidic Elongarea lanului polipeptidic ncheierea sintezei lanului polipeptidic

1. Sinteza aminoacil-ARNt
Se realizeaz de ctre aminoacil-ARNt sintetaze 20 de enzime ce

recunosc specific cei 20 aminoacizi i anticodonii asociai de la nivelul moleculeor de ARNt Aminoacil-ARNt realizeaz legtura dintre secvena codonilor din

ARNm i structura primar a proteinelor

Situsurile de legare ARN ale ribozomului

1. 2. 3. Situsul pentru ARNm Situsuri pentru ARNt Situsul A: leag aminoacil-ARNt Situsul P: leag polipeptidul n curs de sintez cuplat cu ARNt Situsul E: leag o molecul de ARNt fr rest aminoacil/peptidil

Organite nedelimitate de membrane

2.Iniierea sintezei lanului polipeptidic

Se formeaz un complex de preiniiere din: subunitatea mic

ribozomal, primul aminoacil-ARNt, iniiator, (ntotdeauna metionin-ARNt) i factorii eucariotici de iniiere eIF1 eIF4 Complexul se ataeaz pe ARNm i detecteaz codonul start

(ntotdeauna AUG) Se formeaz complexul de iniiere prin legarea subunitii ribozomale

60S i pierderea factorilor de iniiere. Met-ARNt este situat n situsul P al ribozomului. Met-ARNt este folosit o singur dat n sinteza unui lan peptidic i este numit ARNt de iniiere n situsul A se ataeaz aminoacil-ARNt corespunztor urmtorului

codon din ARNm aminoacid, Este catalizat sinteza legturii peptidice dintre metionin i al doilea cu transferul dipeptidului pe al doile a ARNt (sub aciunea

transpeptidazei din subunitatea 60S) , rezultnd ATNt dipeptidil Simultan, subunitatea mare ribozomal se deplaseaz cu 3 baze n

direcia 3 a ARNm, astfel nct ARNt iniiator ajunge n situsul E

4. Elongarea
ncepe cnd ARNt-dipeptidil este transferat din situsul A n situsul P,

proces care va continua pe toat lungimea ARNm ntotdeauna n situsul A se va alinia un alt codon care va fi recunoscut

de anticodonul corespunztor din ARNt i care va lega un nou aminoacid la catena polipeptidic

ef de lucrri Dr. Sanda Maria Creoiu

5. Terminarea sintezei lanului polipeptidic

Are loc cnd n dreptul situsului A ajunge codonul stop (UAA; UAG;

UGA) pentru care nu exist ARNt cu anticodon complementar Codonii stop sunt recunoscui de o protein numita factor de

terminare, care se leag n situsul A i produce hidroliza legturii dintre catena polipeptidic i ARNt din situsul P Lanul polipeptidic este modificat n continuare prin hidroliza i

ndeprtarea radicalului metionil.

PROTEAZOMII
Definiie, structur. Proteazomii sunt complexe moleculare proteolitice intracelulare, ATP-dependente, implicate n degradarea proteinelor etichetate cu poli-ubiquitin. Proteazomii se gsesc n toate tipurile celulare (ntr-o celula uman sunt n jur de 20.000 30.000 de proteazomi). Proteazomii au fost

descoperiti de Alfred Goldberg i Martin Rechsteiner n 1980. Complexul proteazomic 26S are masa molecular de 2.400 kDa, form de butoia i este alctuit din urmtoarele componente: particula miez sau de baz format din 4 inele suprapuse fiecare alctuit din apte proteine protomerice: dou inele centrale cu situsuri catalitice avnd activitate de treonin-proteaze (dou situsuri cu activitate de

chimotripsina care diger aminoacizii hidrofobi, dou situsuri cu activitate de tripsina care digera aminoacizii bazici si dou situsuri caspazice de clivare a aminoacizilor acizi) i dou inele fr activitate catalic cunoscut;
9

Organite nedelimitate de membrane

dou particule reglatoare identice, cte una la fiecare capt al particulei miez. Fiecare particul reglatoare are n structura sa 14 proteine (numite PA700) diferite de cele din particula miez, ase dintre acestea fiind ATPaze. Unele dintre subunitile particulei reglatoare au situsuri care permit recunoasterea ubiquitinei. Funcie. Degradarea proteinelor este eseniala pentru celul deoarece: asigur aminoacizi pentru o nou sintez proteic; ndeparteaz enzimele aflate n exces; ndeparteaz factorii de transcripie (aciunea genelor) care nu mai sunt necesari. n celule exist dou organite intracelulare eseniale n procesele de digestie a proteinelor denaturate sau inutile (n exces) : lizozomii: pentru proteine extracelulare ajunse n celul prin

endocitoz, endocitoz mediat de receptori i fagocitoz; proteazomii: pentru proteine endogene (proteine sintetizate n

celul), factori de transcriere, cicline ale ciclului celular, proteine codificate de virusuri, proteine incorect pliate datorit unor greeli de translaie (produse de gene cu erori) i proteine degradate de molecule din citosol. Calea de degradare a proteinelor mediat de ubiquitin a fost descris de Aaron Ciechanover, Avram Hershko i Irwin Rose care au primit premiul Nobel n 2004. Proteazomii degradeaz proteinele n peptide mici care sunt apoi

hidrolizate de exopeptidaze citoplasmatice. Digestia proteinelor ncepe cnd proteinei ce urmeaz a fi digerate i se ataeaz un mic polipeptid numit
10

ef de lucrri Dr. Sanda Maria Creoiu

ubiquitin. Ubiquitina (Ub) este o protein globular de 76 de aminoacizi i are un capt C-terminal aflat n spaiul apos (citosol). Are aceeai structura la bacterii, drojdii si mamifere. Proteinele destinate procesului de degradare sunt conjugate cu ubiquitina care se leag de captul N-terminal al unui reziduu de lizin. Urmeaz ataarea altor molecule de ubiquitin cu formarea unui lan. Ubiquitina este ataat proteinei ce urmeaz a fi digerat sub influena a trei enzime: E1 (enzima de activare a Ub) care modifica Ub n aa fel nct Gly din captul C-terminal s reacioneze cu Lys de pe protein; E2 (enzima de conjugare a Ub) care ataeaza Ub la protein; E3 (Ub ligaze) cu rolul de a recunoate proteina substrat i de a i lega ubiquitina. Legarea ubiquitinei reprezint semnalul care permite proteinei s intre n complexul proteazomic.

Etapele procesului de digestie

complexul protein-ubiquitin se leag de situsul de recunoastere al ubiquitinei de pe particula reglatoare; proteina este depliat i transferat n cavitatea central a particulei miez; se desfac anumite legaturi peptidice ale lanului sub aciunea situsurilor active din inelele centrale, rezultatul fiind un set de peptide avnd n medie 8-10 aminoacizi;

11

Organite nedelimitate de membrane

fragmentele

de

peptide

prsesc

particula

miez

pe

cale

necunoscut putnd fi degradate n continuare pn la aminoacizi individuali de ctre peptidaze din citosol sau pot fi incorporate in clasa I a moleculelor de histocompatibilitate pentru a fi prezentate sistemului imun ca potentiale antigene ; particula reglatoare elibereaz apoi ubiquitina pentru a fi refolosit. Un mare procent dintre proteinele care sunt sintetizate in citosol nu ating niciodata starea funcional deoarece conin erori de structur aprute n urma proceselor de translaie sau pliere. Aceste produse ribozomale defecte sunt rapid ubiquitinizate i degradate in proteazomi, re prezentnd o sursa importanta de peptide din clasa MHC I. Astfel, peptidele mici cu 8-10 aminoacizi sunt

transportate n reticulul endoplasmic (RE) de ctre un transportor asociat cu complexul de prezentare a antigenelor (TAP). n RE peptidele se leag i stabilizeaz heterodimerii de MHC I, legare supravegheat de proteine

chapoerone cum ar fi BiP, calreticulina i ERp57. Dup asamblare moleculele de MHC purttoare de peptide antigenice sunt translocate prin aparatul Golgi spre suprafaa celular, unde sunt expuse i vor ntlni celule T purttoare de receptori specifici complementari (TCR) care distrug celula inta infectat. Majoritatea substraturilor care au epitopi MHC I sunt conjugate cu un lant multiubiquitinat, care l orienteaz catre proteazom pentru a fi degradat. Calea de degradare proteazomic este esenial pentru numeroase procese celulare inclusiv rspunsul din stresul oxidativ. Proteazomii regleaz numeroase aspecte ale transcripiei att prin

mecanisme proteolitice ct i prin mecanisme non-proteolitice.

12

ef de lucrri Dr. Sanda Maria Creoiu

interactioneaz cu cromatina ca urmare a ubiquitinizarii histonei H2b i induce metilarea histonei H3; regleaza transcripia prin turn-overul activatorilor; regleaza recrutarea i schimbul co-activatorilor i co-represorilor prin ambele mecanisme; recruteaz ARN polimeraza la locul transcripiei; intervin n elongare; sunt necesari pentru terminarea transcripiei. Blocarea digestiei intrace lulare la nivelul proteazomilor poate ajuta la protejarea celulei. Blocarea degradrii se face cu inhibitori de proteazomi care produc acumularea intracelular a proteinelor greit mpachetate sau degradate i marcate cu ubiquitina. Consecina este declanarea unui rspuns de tip heat shock care protejeaja celula de ageni toxici sau temperaturi crescute. Implicaii clinice. Companiile de medicamente se afl permanent n cutarea unui inhibitor de proteazomi care s susin abilitatea unei celule de a: rezista n condiii de ischemie sau la meninerea organelor dup transplant; modula cantitatea i durata de via a ciclinelor i a factorilor de transcripie; trata cancerelor cu medicamente ca Velacade care inhib proteoliza mediat de ubiquitin. Bortezomib este un medicament inhibitor de proteazomi, utilizat in tratamentul mielomului multiplu boala cu niveluri ridicate de proteazomi.

13

Organite nedelimitate de membrane

Medicamentul blocheaz aciunea proteolitic a proteazomului i inhib ciclinele stopnd diviziunea haotic a celulelor canceroase. Inhibitorii de proteazomi sunt substante de viitor i n tratamentul bolilor autoimune cum ar fi lupusul eritematos diseminat (LES) i artrita reumatoid. Der asemenea, fibroza chistic este o boal produs de degradarea prea rapid a transportorului de clor la nivelul proteazomilor.

INCLUZIUNILE CELULARE
Incluziunile celulare sunt depozite de molecule organice i anorganice care apar n citoplasma celulelor, avnd caracter tranzitoriu sau definitiv, ireversibil, normal sau patologic. Incluziunile fiziologice sunt cele mai mobilizabile, modificndu-se

permanent n raport cu starea celulei sau n funcie de necesitile organismului. Spre deosebire de organite, incluziunile nu au funcii specifice. n funcie de proveniena lor incluziunile se pot clasifica n: exogene i endogene. Incluziunile celulare exogene pot apare n celule n condiii fiziologice (spre exemplu carotenul din morcovi) sau n condiii patologice (incluziuni de metale grele sau particule de de azbest, siliciu, carbon, praf). Incluziunile celulare endogene sunt de cele mai multe ori depozite intracelulare de lipide , glucide, proteine, pigmeni, ioni, etc. Incluziunile de natur glucidic Depozitele de glucide din celulele animale sunt sub form de glicogen, iar cele din celulele vegetale sub form de amidon. Celulele animale bogate n depozite glucidice sunt hepatocitele i celulele musculare la nivelul crora se gsesc cantiti mari de incluziuni de glicogen. Depozitele de glicogen sunt utilizate n situaia n care celula este supus unor activiti mecanice intense (ex. contracia muscular), sau n condiii de activitate
14

ef de lucrri Dr. Sanda Maria Creoiu

intens de sintez. Aceste depozite se formeaz prin glicogenogenez i sunt utilizate de celul n urma procesului de glicogenoliz. Glicogenul poate fi pus n eviden la MO prin coloraia carmine amoniacal Best, evideniindu-se sub form de plaje mai mult sau mai puin ntinse, dar nu ocup niciodat ntreaga citoplasm. Incluziunile de glicogen apar la ME sub form de bastonae (particule alfa) sau de rozet (particule beta). n patologie se observ depozite mari de glicogen n boala Pompe caracterizat prin hepatomegalie. Incluziunile de natur lipidic Incluziunile lipidice pot fi ntlnite n celul n urmtoarele circumstane: -tranzitoriu celula hepatic postprandial, sub form de picturi lipidice izolate, proporionale ca numr cu cantitatea de lipide ingerate, sunt repede metabolizate i dispar din citoplasm la cateva ore dup ingestie -temporar, pe o durata de timp variabil n celulele secretorii din glanda mamar n lactaie, dispar din celul dup terminarea perioadei de lactaie -permanent n celule i adipocite brune. Adipocitele albe formeaz esutul adipos alb, alctuind paniculul adipos. Au form rotunjit cnd sunt izolate sau poligonal cand sunt grupate. Incluziunea lipidic este unic - unilocular i ocup ntreaga citoplasm care este mpins spre periferia celulei, predominant n jurul nucleului. Celula capt aa -numitul aspect de inel cu pecete. Aceste celule au rol n metabolismul lipidic, de protecie a principalelor organe i n termogenez la nivelul tegumentului (n hipoderm). Adipocitele brune formeaz esutul adipos brun, bine dezvoltat la nounscut i n copilrie i care apoi involueaz. La adult persist n regiunea
15

specializate

ale

esutului conjunctiv numite

adipocite, celule grase sau lipocite. Aceste celule sunt de 2 tipuri : adipocite albe

Organite nedelimitate de membrane

interscapular i inghinal. Celulele adipoase brune au form rotunjit, conin n citoplasm numeroase incluziuni lipidice adipocit multilocular. Nucleul este sferic, eucromatic, situat central, iar citoplasma are aspect vacuolar, spumos datorit numeroaselor incluziuni lipidice. n patologie se pot observa numeroase incluziuni lipidice n hepatocite la alcoolici. Incluziuni de natur proteic Apar n celule secretorii exo- i endocrine n momente de supraproducie , cnd nu pot fi exocitate n acelai ritm cu cel n care se produc i rmn stocate in citoplasm sau atunci cnd exocitoza este mediat de receptori, necesitnd un semnal extracelular. Aceste incluziuni se gsesc n vezicule delimitate de endomembrane. Frecvent, n celulele glandelor salivare, ale stomacului sau n celulele pancreasului exocrin se pot observa vezicule secretorii, care conin precursori enzimatici (zimogeni). Aceti precursori sunt precursorul amilazei n glande salivare, pepsinogenul n ce lulele principale ale stomacului i tripsinogenul n pancreas. Veziculele sunt stocate la polul apical al celulelor i se elibereaz prin exocitoz. Incluziuni de natur glicoproteic Aceste incluziuni apar la polul apical al celulelor epiteliale care secret mucus stocat n vezicule delimitate de membrane sub form de precursor denumit mucinogen. Mucinogenii sunt eliberai din celul prin exocitoz, se hidrateaz i formeaz mucusul. Cel mai edificator exemplu de celul secretoare de glicoproteine este celula caliciform singura gland unicelular, gsit n epiteliul din tractul digestiv i respirator. Rolul mucusului este acela de a proteja mucoasele. Iritaiile locale duc uneori la eliberarea ntregului coninut celular.

Incluziunile pigmentare
Pot apare n condiii fiziologice i patologice.
16

ef de lucrri Dr. Sanda Maria Creoiu

Incluziuni fiziologice Melanina pigment negru evident n epidermul pielii, n SNC substana
neagr i locus caeruleus. n celulele pielii, pigmentul este sintetizat n melanocite, celule stelate, cu aspect de fulg de nea n microscopia optic. Pigmentul este apoi transferat i depozitat n cheratinocite, n cantiti variabile n funcie de ras.

Lipofuscina sau pigmentul de uzur se observ pe msura naintrii n

vrst a organismului, n special la nivelul miocardocitelor i al celulelor nervoase, dar i n macrofage. Lipofuscina este de fapt produsul nedigerat al unor reacii litice la nivel subcelular. Pe msur ce organitele mbtrnesc sunt degradate i ceea ce nu poate fi reutilizat din structura lor rmne sub forma lipofuscinei. Deoarece neuronii nu se divid de -a lungul anilor se acumuleaz pigment, numit de aceea pigment de uzur. Lipofuscina se acumuleaz i n celulele adipoase, fiind responsabil de culoarea galben a adipocitelor. Macrofagele pot conine lipofuscin provenit din cele mai variate surse: celule moarte, organite proprii, bacterii moarte etc.

Hemosiderina - este reziduul nedigerabil rezultat n urma distrugerii

hematiilor, cuvntul hemo- provenind de la hemoglobin,care conine fier. Macrofage bogate n hemosiderin se pot observa n cantiti mari n splin i ficat, locurile de elecie pentru distrugerea hematiilor mbtrnite. In coloraia HE poate fi confundat cu lipofuscina sau melanina, dar se evideniaz specific prin coloraia cu albastru de Prusia pentru fier.

Incluziuni patologice
Pigmenii biliari pot apare n anumite condiii patologice sub form de bilirubin n celulele Kupfer sau chiar n hepatocite.

17