Laboratorio de Bioqumica.

Grupo H2

INFORME PRCTICA 5: DETERMINACIN DE GLUCOSA Y COLESTEROL EN SANGRE Silvia Juliana Becerra Anaya. Cdigo: 2080117 Andrea Katherine Gonzlez. Cdigo: 2080139 Universidad Industrial de Santander Facultad de Ciencias Bsicas Escuela de Qumica Recibido: Luis Oveimar Barbosa Jaimes. Aceptado: Octubre 3, 2012
RESUMEN En la prctica se llev a cabo la determinacin de glucosa y colesterol en una muestra de sangre. Para cual, se utilizaron los reactivos de Biosystems para uso in vitro en el laboratorio clnico. Los compuestos de inters se cuantificaron por espectrofotometra a 505 nm.

INTRODUCCIN: La glucosa es la principal fuente de energa para el metabolismo celular, esta se almacena en el hgado el cual tiene un papel importante en el mantenimiento de la glucosa en sangre, su determinacin es til para el diagnstico de numerosas enfermedades metablicas principalmente la diabetes mellitus. Al igual que la glucosa, es necesario la determinacin del colesterol en sangre para la prevencin cardiovascular ya que se ha visto que este contribuye a la formacin de ateromas, lo cual es debido a que es una sustancia cerosa que se puede encontrar en todo nuestro cuerpo (tejidos corporales y plasma sanguneo). [1] En la presente prctica se determina la concentracin de glucosa y colesterol en sangre mediante complejos coloreados que se cuantifican por espectrofotometra a una longitud de onda de especfica. OBJETIVOS GENERALES: Determinacin de glucosa y colesterol en sangre mediante la formacin de complejos coloreados para su posterior cuantificacin por espectrofotometra a una longitud de onda especifica. Analizar los resultados obtenidos de las concentraciones de glucosa y colesterol, por comparacin con los niveles promedio de estos. MARCO TERICO La glucosa es un azcar que es utilizada como fuente de energa para el organismo, esta se incrementa en la sangre al ingerir alimentos diferentes al agua, lo que se consume desaparece de la sangre mediante el empleo de una hormona reguladora producida por el pncreas conocida como insulina, cuando ocurre lo contrario se secreta otra hormona llamada glucagn que permite mantener los niveles de glucosa en sangre. El anlisis de la glucosa permite medir la concentracin de esta presente en la sangre para la prevencin o diagnstico de una diabetes mellitus o sacarina, esta enfermedad se caracteriza por presentar valores superiores a 140 mg/dL, entre 70 y 110 mg/dL se consideran valores normales, pero inferiores a 60 mg/dL desencadena una hipoglicemia. Su determinacin se realiza despus de la oxidacin enzimtica en presencia de glucosa oxidasa. El perxido de hidrogeno formado reacciona bajo la catlisis de peroxidasa con fenol 1

Determinacin de glucosa y colesterol en sangre

y 4-aminofenazona formando un complejo rojovioleta usando la quinoneimina como indicador, el cual es posible cuantificarlo por espectrofotometra, a continuacin se muestran las reacciones sucedidas:
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1. Determinacin de Glucosa Las soluciones mostradas en la Tabla 1 se colocaron en tubos de ensayo, estos se incubaron a 37 C durante 5 minutos. Finalmente, se ley su absorbancia a =505 nm. Tabla 1. Parte experimental para la determinacin de glucosa. Blanco Patrn Muestra Patrn (S1) 10 L Muestra 10 L 1 mL 1 mL 1 mL Reactivo A1 A1. Reactivo: Fosfatos 100 mmol/L, fenol 5 mmol/L, glucosa oxidasa > 10 U/mL, peroxidasa>1 U/mL, 4-aminoantipirina 0,4 mmol/L, pH 7,5 S1. Patrn de Glucosa/Urea/Creatinina. Glucosa 100 mg/dL (5,55 mmol/L), urea 50 mg/dL, creatinina 2 mg/dL. Patrn primario acuoso. [3] 2. Determinacin de Colesterol Las soluciones de Tabla 2 se colocaron en tubos de ensayo, estos se incubaron a 37 C durante 15 minutos. Posteriormente, se ley su absorbancia a =505 nm. Tabla 2. Parte experimental para la determinacin de colesterol. Blanco Patrn Muestra Patrn (S2) 10 L Muestra 10 L 1 mL 1 mL 1 mL Reactivo A2 A2. Reactivo. Pipes 35 mmol/L, colato sdico 0,5 mmol/L, fenol 28 mmol/L, colesterol esterasa > 0,2 U/mL, colesterol oxidasa > 0,1 U/mL, peroxidasa > 0,8 U/mL, 4-aminoantipirina 0,5 mmol/L, pH 7,0. S2. Patrn de Colesterol. Colesterol 200 mg/dL (5,18 mmol/L). Patrn primario acuoso. [4] RESULTADOS Y DISCUSIN Tabla 3. Datos experimentales Glucosa 2

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La reaccin 1 se realiza en presencia de glucosa oxidasa y la 2 en peroxidasa. El colesterol es una sustancia que se encuentra en todos los tejidos normalmente en la sangre, el organismo necesita colesterol para la sntesis de hormonas y sales biliares que desempean una fuente importante en la absorcin de las grasas procedentes de los alimentos, si la cantidad de este es grande puede contribuye a la formacin de ateromas. Este es posible medirlo mediante un examen de triglicridos en sangre, el cual se determina despus de la hidrlisis enzimtica y la oxidacin. El indicador es la quinoneimina formada por el perxido de hidrogeno y 4-aminoantipirina en presencia de fenol y peroxidasa, el principio de la reaccin se encuentra a continuacin. [2]
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La reaccin 3 se realiza en presencia de lipasa, 4 en colesterol oxidasa (CHO) y la 5 en peroxidasa (POD). PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL Se extrajo el suero de una muestra de sangre para realizar las respectivas determinaciones.

Determinacin de glucosa y colesterol en sangre

Solucin Reactivo A1 + Patrn S1 Reactivo A1 + Muestra

Absorbancia 0,325 0,272

Pese a los valores reportados en la tabla anterior se procedi a calcular la concentracin de colesterol en la muestra. [ [ ] ] [ ]

Teniendo en cuenta los valores reportados en la tabla anterior, se calcula la concentracin de glucosa en la muestra a partir de la siguiente ecuacin: [ [ ] ] [ ]

La concentracin obtenida se encuentra dentro del rango normal (70-110 mg/ dL) de glucosa, lo cual quiere decir que el paciente no presenta sntomas de hiperglicemia ni hipoglicemia, a pesar de que se realiz un anlisis al azar en donde se mide la concentracin de glucosa en una muestra de sangre en cualquier horario habitual, otros anlisis que se pueden determinar para analizar los niveles de glucosa en sangre corresponden a: - Anlisis de glucosa en ayunas: Este mide la glucosa en una muestra de sangre obtenida cuando la persona no ha comido ni tomado nada (excepto agua) por al menos 8 horas. -Anlisis de tolerancia a la glucosa: Este comienza con un anlisis en ayunas de la glucosa. Luego el paciente toma una bebida dulce con una cantidad medida de glucosa. Los niveles de glucosa son medidos en varias muestras de sangre obtenidas a intervalos especficos de tiempo. [5] Es importante destacar que para la determinacin de glucosa la muestra de sangre tomada del paciente se realiz cuando este se encontraba sentado, sin fumar ni ingerir alcohol durante las anteriores 12 horas, adems de resaltarse que este anlisis a diferencia de otros se puede medir en cualquier momento del da. Tabla 4. Datos experimentales Colesterol Solucin Absorbancia 0,024 Reactivo A2 + Patrn S2 1 Reactivo A2 + Muestra

La concentracin de colesterol obtenida no es un valor vlido, por tanto, se concluye que la determinacin no se pudo llevar a cabo. Esto se observa en las absorbancias reportadas para el patrn y la muestra; ya que para el primero se obtuvo un valor prcticamente despreciable, debido posiblemente a que durante el procedimiento se utilizaron solamente 10 L, cantidad que no fue suficiente para ser detectada. Cabe mencionar que la muestra de sangre fue tomada luego de que la persona ingiriera alimentos, lo que pudo causar un alto contenido lipdico en la misma; interfiriendo en la determinacin de colesterol. El perfil lipdico lo constituye la cuantificacin analtica de una serie de lpidos que son transportados en la sangre por los diferentes tipos de lipoprotenas plasmticas. La determinacin de estos parmetros es un procedimiento analtico bsico para el diagnstico y seguimiento de enfermedades metablicas, primarias o secundarias. Entre estos parmetros analticos que se pueden determinar estn: el colesterol total, el colesterol transportado por las LDL, el colesterol transportado por las HDL, los triglicridos totales, ciertas apoprotenas particulares etc. Condiciones para una determinacin eficaz de colesterol en sangre: -El paciente debe encontrarse en un estado fisiolgico regular (sin ejercicio vigoroso) y bajo su dieta ordinaria del da anterior a la prueba. -La muestra debe recolectarse en ayuno total excepto agua, durante un lapso de 12 a 14 horas antes de la prueba. 3

Determinacin de glucosa y colesterol en sangre

-La muestra debe recolectarse en tubo recolector al vaco de tapn rojo el cual no contiene anticoagulante. -La muestra debe centrifugarse a 3500 rpm para separar el suero, si este se obtiene turbio, la muestra es inaceptable. [6] Debido a que no se tuvieron en cuenta varias de las condiciones mencionadas anteriormente, no se pudo determinar de manera efectiva la concentracin de colesterol en la muestra de sangre. CONCLUSIONES El colesterol es una sustancia lipdica presente en todas las clulas del organismo. Puede ser cuantificado por mtodos espectrofotomtricos, ya que segn reacciones acopladas, forma un complejo coloreado, el cual es detectado a una longitud de onda especfica. Para la determinacin de colesterol total se utilizan reactivos comerciales que incluyen las enzimas y sustratos necesarios para la cuantificacin de todas las formas de colesterol presentes en el suero. La glucosa es un azcar que es utilizada como fuente de energa para el organismo, est puede ser cuantificada mediante la formacin de complejos coloreados por mtodos espectrofotomtricos a una longitud de onda determinada. El anlisis de glucosa en sangre es posible determinarlo en cualquier horario habitual como no sucede con el colesterol, debido a las posibles interferencias del material lipdico generado por ingerir alimentos en los momentos previos al anlisis.

http://books.google.com.co/books?id=p3DCb9lTL x8C&pg=PA1129&lpg=PA1129&dq=glucosa+y+ colesterol+bioquimica&source=bl&ots=Y_ZNSW MjTQ&sig=jqN_12yt3uz2zqcA5hQfYHqX1UM& hl=es&sa=X&ei=E2xsUJaoFrOH0QGVk4HIAg& ved=0CDkQ6AEwAg <Septiembre 30 de 2012>. [2]BRICEO VERONICA; OGOO CRISTIAN; CHUQUIMARCA LENIN. Escuela de Bioqumica y Farmacia, Laboratorio de Bioqumica Clnica. Ecuador. Disponible en: http://es.scribd.com/doc/45351469/bioquimica <Septiembre 30 de 2012>. [3] GLUCOSA. GLUCOSA OXIDASA/ PEROXIDASA. BioSystems S.A. Costa Brava 30, Barcelona (Spain). Disponible en: http://www.biolinker.com.ar/productos/PDF_BIO/ 11538%20Glucosa.pdf <Septiembre 30 de 2012>.

[4] COLESTEROL. COLESTEROL OXIDASA/ PEROXIDASA. BioSystems, S.A. Costa Brava 30, Barcelona (Spain). Disponible en: http://www.biolinker.com.ar/productos/PDF_BIO/ 11506-11539%20Colesterol.pdf <Septiembre 30 de 2012>. [5] VILA LUIS. Grupo de Diabetes de la Sociedad Andaluza de Medicina Familiar y Comunitaria.2010. Disponible en: http://www.grupodiabetessamfyc.cica.es/index.php /guia-clinica/guia-clinica/diagnostico.html <Septiembre 30 de 2012>. [6] MORN, V. Obtencin de muestras sanguneas de Calidad analtica; 1 ed; ed. Mdica Panamericana S.A. de C.V; Mxico D.F. 2001.pp 65.

BIBLIOGRAFA [1] THOMAS M. DEVLIN. Bioqumica. Cuarta edicin; ed. Revert S. A., Espaa.2004. pp: 11281132.Disponible en: