PROIECT IDEI nr. 249/01.10.

2007, COD CNCSIS 440

Director proiect, Lect. dr. tefan Marius IMPACTUL UNOR TULPINI RIZOBACTERIENE ASUPRA PROCESELOR DE CRESTERE SI DEZVOLTARE LA PLANTE DE SOIA (GLYCINE MAX L. MERR.) - sintez lucrare 1. STADIUL ACTUAL AL CERCETRILOR PRIVIND COMPLEXITATEA INTERRELAIILOR STABILITE LA NIVELUL RIZOSFEREI PLANTELOR DE SOIA (GLYCINE MAX). Rdcinile plantelor constituie medii favorabile pentru creterea microorganismelor ale cror populaii numeroase i diferite se gsesc pe i n jurul acestora. Interaciunile dintre microorganismele din sol i rdcinile plantei satisfac necesiti nutritive importante att pentru plant ct i pentru microorganismele asociate (Brown, 1974, cit. de Limm, 1998). Aceasta se demonstreaz prin numrul mare de microorganisme gsite n rizoplan i n rizosfer (Alcamo, 2003). Dei puin cunoscut, rizosfera plantelor de soia poate fi considerat pe bun dreptate ca o interfa funcional esenial ntre plante i sol, interfa activ datorit prezenei microorganismelor - bacterii, ciuperci, protozoare, nematode (Arshad, Frankenberger, 1998). Descris de Hiltner n 1904 (cit. de Sylvia, 1999) ca regiunea din sol n care microorganismele sunt expuse influenelor specifice ale rdcinilor plantei, rizosfera este i n prezent definit cu destul ambiguitate. Pornind de la observaiile c splarea cu diferite grade de agitare a rdcinilor unei plante scoas cu menajament din pmnt evideniaz diferene importante n caracteristica diferitelor regiuni, rizosfera a fost definit ca stratul de sol ce ader de sistemul radicular dup agitarea uoar, care ndeprteaz solul ataat uor. Pentru a putea defini ceea ce rmne legat ferm de rdcini dup o agitare puternic n ap steril a fost creat termenul de rizoplan. Pentru unii cercettori rizoplanul reprezint habitatul sau nia ecologic furnizat de suprafaa rdcinii, deci nu o zon din jurul rdcinii ci nsi suprafaa ei (Davet, 1996). Astfel definit, conceptul de rizoplan ignor faptul c microorganismele nu sunt dispuse pe suprafaa rdcinii ntr-un singur plan, sub forma unui monostrat i c, cel puin n anumite regiuni, ele formeaz straturi de mai multe celule nainte de a veni n contact cu solul. n plus, n unele cazuri, rizoplanul se extinde i n structura rdcinii, deoarece frecvent epiderma i celulele corticale sunt lezate, favoriznd ptrunderea i localizarea microorganismelor din rizoplan. n 2001, Pinton i colab. redefinesc rizosfera, incluznd n aceast regiune att volumul de sol adiacent rdcinilor ct i esuturile radiculare colonizate de microorganisme. Dup o definiie fiziologic, rizosfera ar fi regiunea din solul periradicular n care se resimt efectele substanelor exudate de plant, care realizeaz aa numitul efect de rizosfer (Zarnea, 1994). Limitele i dimensiunile rizosferei Unii autori (Sylvia, Fuhrmann, Hartel, Zuberer, 1999) consider c rizosfera plantelor de soia se poate extinde pe mai mult de 5 mm de la rdcin i, cel mai important, este o zon cu activitate microbian crescut. n realitate ns, situaia este mult mai complex, limitele rizosferei depinznd nu numai de cantitatea de substane exudate de rdcini, ci i de proprietile fizico-chimice ale mediului, acestea afectnd direct distribuia i numrul microorganismelor. Dimensiunile rizosferei depind de particularitile structurale ale rdcinilor plantei, dar n general zona de contact cu solul este foarte mare. Din totalul biomasei plantei, rdcinile fibroase ale plantelor ierboase furnizeaz o suprafa mai mare dect sistemul radicular reprezentat de o rdcin principal. Microbiota rizosferei plantelor de soia La nivelul rizosferei este prezent un numr foarte mare de microorganisme aparinnd unor grupuri taxonomice diferite, densitatea lor scznd pe msura creterii distanei de la nivelul rdcinilor. Numrul de microorganisme din zona rizosferic prezint o mare importan n determinarea efectului de rizosfer care se cuantific prin raportul R/S. Acest raport a fost creat datorit diferenelor de cuantificare a numrului de microorganisme, fiind util n special pentru estimarea competenei rizosferice, considerat ca reprezentnd capacitatea unui organism de a coloniza rdcinile plantelor. Raportul R/S variaz, dup Clark (1966, cit. de Zarnea, 1994), existnd de 10-25 de ori mai multe microorganisme n rizosfer dect n solul liber, lipsit rdcini. El poate fi egal cu 50 la soia i poate ajunge, n situaii excepionale, la valori cuprinse ntre 100-200. Regiunea rizosferic stimuleaz multiplicarea n special a bacteriilor i fungilor. Algele i protozoarele nu sunt direct stimulate, ns numrul lor crete datorit dezvoltrii bacteriilor care furnizeaz nutrieni. Bacteriile, incluznd actinomicetele, sunt cele mai numeroase microorganisme din rizosfer, fiind prezente ntrun numr de aproximativ 106-109/g-1 sol (Sylvia i colab., 1999). Cu toate acestea ele reprezint doar o mic parte din biomasa total datorit dimensiunilor foarte mici. n zona rizosferei, bacteriile sunt reprezentate n special prin bacili Gram negativi i pozitivi, n proporie mai mic, prin coci i spirili.

ntre speciile identificate ca predominante sunt menionate cele din genurile Rhizobium, Achromobacter, Agrobacterium, Alcaligenes, Azotobacter, Corynebacterium, Pseudomonas (cele mai numeroase specii), Xanthomonas. Distribuia microorganismelor pe suprafaa rdcinilor plantelor de soia Studiile efectuate n trecut pe plante cultivate pe medii lichide sau n nisip sugerau c aproape ntreaga suprafa a rdcinilor este acoperit de microorganisme, care formeaz un compartiment continuu periradicualar, ca un manon, ce separ complet rdcina de sol. Lewis (1973) i Bowen (1973) cit. de Kloepper (1999) au demonstrat totui c, spre deosebire de micorize la care hifele fungice acoper complet rdcinile scurte laterale, relaia dintre bacterii i rdcini este diferit, colonizarea acestora avnd un caracter discontinuu. Studiile recente de microscopie electronic au artat c numai 7 pn la 15 % din suprafaa rdcinii este de fapt ocupat de microorganisme asociate sub forma unor colonii mici. Deplasarea microorganismelor la nivelul rizosferei plantelor de soia Microorganismele se pot deplasa prin sol, de-a lungul extensiilor radiculare. Deplasarea lor la nivelul rizosferei se poate realiza prin trei mecanisme diferite: transport activ (motilitatea microorganismului); transport pasiv (deplasarea apei la suprafaa rdcinii); deplasarea microorganismelor la nivelul apexului radicular pe msura ce celulele meristematice se multiplic. Dei bacteriile de pe boabele de soia vor coloniza rdcinile pe o distan de 3 cm de la smn, deplasarea lor ulterioar de-a lungul sistemului radicular este mult stimulat de deplasrile apei prin sol. Viteza de multiplicare a microorganismelor pe suprafaa rdcinilor Dinamica de cretere a bacteriilor pe suprafaa rdcinilor in vivo este foarte diferit de cea observat n laborator. Dup Kennedy (1998), posibilitile rdcinilor de a asigura creterea bacteriilor pot fi definite n raport de doi parametri: disponibilitatea de substane pentru cretere (nutrieni, exudate, celule descuamate), respectiv de factorul intensitate, apreciat prin timpul de generaie; prin factorul capacitate, respectiv prin aportul de materiale energetice de la rdcini, care determin biomasa microbian total de pe rdcin. Efectul de rizosfer La nivelul rizosferei, rdcinile plantelor de soia au o influen direct asupra compoziiei i densitii comunitii microbiene din sol, influen cunoscut sub numele de efect de rizosfer. Acest efect poate fi cuantificat prin raportul dintre numrul microorganismelor din solul rizosferic (R) i numrul microorganismelor corespondente din solul liber (S) raport R/S. n general, raportul variaz ntre 5 i 20, dar este normal i un raport de 100, adic populaiile microbiene sunt de 100 de ori mai numeroase n rizosfer n comparaie cu solul liber ce nconjur rdcinile (Cattelan i colab., 1999). Msurarea actual a efectului de rizosfer depinde n particular de plant i de maturitatea sa fiziologic (Lugtenberg i colab., 1999). Regiunile periradiculare sunt populate n mod preferenial de comuniti extrem de numeroase i active de microorganisme. Efectul stimulator al rdcinilor plantei este maxim la nivelul rizoplanului, unde se gsesc i cele mai numeroase microorganisme, scznd treptat spre numrul caracteristic solului, pe msur ce distana de la rdcin crete. Natura secreiilor radiculare Rdcinile plantei secret n rizosfer o varietate de substane organice care constituie o important surs de nutrieni pentru populaiile microbiene: exudate, mucilagii, mucigel, lizate. Compoziia exudatului radicular variaz n funcie de tipul i structura solului precum i n funcie de stadiul de dezvoltare al seminei i rdcinii, incluznd: zaharuri, aminoacizi, vitamine, taninuri, alcaloizi, fosfatide, precum i alte substane: factori de cretere, substane fluorescente, factori de stimulare ai eclozrii oulor de nematode, atractani fungici sau antifungice. Vrsta plantelor i efectul de rizosfer Primele rezultate care s scoat n eviden dependena efectului de rizosfer de vrsta plantelor au fost publicate de Starkey (1929, cit. de Sylvia i colab., 1999). Acesta a tras concluzia c efectul de rizosfer nu este maxim n primele etape ale dezvoltrii lor ontogenetice, ci numai dup ce acestea au atins apogeul creterii vegetative, au nflorit sau au nceput degenerarea vegetativ. Krasilnikov (1958, cit. de Zarnea, 1994) arat c numrul microorganismelor din rizosfer atinge un maxim n perioada de cretere a plantei i un al doilea dup nflorire. Microorganismele din rizosfer pot suferi modificri succesive pe msur ce planta crete de la germinarea seminei pn la atingerea maturitii. Pe parcursul dezvoltrii plantei n rizosfer apar modificri succesive reprezentate prin succedarea unor populaii microbiene oportuniste care se dezvolt rapid i care necesit factori de cretere. Aceste modificri succesive corespund cu modificrile aprute n materialele eliberate de ctre rdcinile plantei n rizosfer pe msura maturrii. n primele faze, carbohidraii i materialele mucilaginoase eliberate susin creterea unei populaii mari de microorganisme aflate n anurile celulelor epiteliale ale plantelor, pe suprafaa radicular sau n straturile mucilaginoase care nconjur rdcinile. Pe msur ce planta se matureaz, are loc autoliza unor materiale radiculare ca un proces normal de dezvoltare al rdcinii i sunt eliberate n sol zaharuri simple mpreun cu aminoacizi, stimulnd astfel creterea unor bacterii

ca Pseudomonas cu mari poteniale intrinseci de dezvoltare. Raportul R/S scade de obicei atunci cnd planta i nceteaz creterea i devine senescent. Efectul microorganismelor asupra plantelor de soia Dei unele aspecte ale interaciunii dintre microorganisme i plante sunt nc necunoscute sau controversate, exist observaii care pledeaz pentru o serie de efecte benefice (creterea capacitii plantei de a prelua P, Mg, Fe, Zn, Cu, stimularea fixrii biologice a azotului, stimularea creterii plantei, descompunerea reziduurilor plantei i a materiei organice) fr a exclude ns, n anumite cazuri, posibilitatea unor consecine negative (Sylvia, 1999). Plantele dezvoltate n solul obinuit, nesteril, sunt mai viguroase, iar producia de biomas vegetal este mai mare dect a plantelor martor cultivate n sol steril. n lipsa unor populaii microbiene adecvate n rizosfer, creterea plantei este perturbat (Lynch, 1990). Cele mai bine studiate efecte pozitive ale microorganismelor rizosferice asupra rdcinilor plantelor de soia sunt: fixarea azotului, asociaiile de tipul micorizelor, stimularea creterii plantei, descompunerea nutrienilor inaccesibili pentru plante, ciclul nutrienilor. Rolul microorganismelor rizosferice n nutriia plantelor Microorganismele faciliteaz sau particip la absorbia nutrienilor din sol, n special cnd acetia sunt limitani pentru cretere. Ele desfoar permanent o aciune de reciclare i solubilizare a nutrienilor minerali, intensificat de efectul de rizosfer. Plantele cultivate n mediu steril i inoculate cu microorganisme din rizosfera plantelor de soia absorb mai muli compui ai N, K, P, Ca, i Mg dect plantele martor, meninute n mediu steril. Aceast proprietate a fost descris i pentru Zn, Mn, Mo, n timp ce absorbia stroniului i a rubidiului este inhibat. n plus microorganismele solubilizeaz cantiti importante de compui minerali i degradeaz substanele organice, facilitnd acumularea de compui accesibili plantelor. Microorganismele din rizosfer au un efect benefic i asupra nutriiei cu fosfor. Katznelson, 1965 (cit. de Keister i Cregan, 1991) a evideniat n rizosfera mai multor specii de plante numeroase microorganisme care solubilizeaz fosforul din fosfaii organici i anorganici insolubili. De asemenea, microflora rizosferic mrete solubilitatea compuilor cu Fe prin introducerea agenilor chelani organici, precum i viteza de preluare a Ca a crui solubilitate este mrit prin introducerea de CO2 n rizosfer. Interaciunile nutriionale cel mai bine cunoscute sunt cele de tipul asociaiilor simbiotice: micorizele i cele care permit fixarea biologic a azotului. Asociaiile cu fixatorii de azot pun la dispoziia plantelor azotul pe care nu l pot prelua pe alt cale. Bacteriile fixatoare de azot formeaz nodoziti pe suprafaa rdcinilor, utilizeaz azotul liber din atmosfer i l transform n forme uor de preluat de ctre plant (Lucas-Garcia i colab., 2004). La rndul ei, planta furnizeaz nutrieni i creeaz un mediu lipsit de concuren pentru microorganisme. Efectul metaboliilor microbieni asupra dezvoltrii plantei Rdcinile sunt n permanent expuse influenei diferiilor stimulatori i inhibitori produi n cursul metabolismului microbian, care acioneaz sinergic ca regulatori de cretere. Sistemul radicular al plantelor din solul nesteril este mai bogat i mai bine dezvoltat dect cel al plantelor cu rdcinile sterile. Plantele respective cresc mai repede, sunt mai verzi, nflorirea este grbit i apariia fructelor mai timpurie. Aceste efecte stimulatoare pot fi produse i prin utilizarea filtratelor unor bacterii din rizosfer (Hirota, 1982, cit. de Zarnea, 1994). Astfel bacteriile Pseudomonas aurantiaca, P. fluorescens, P. radiobacter i Erwinia herbicicola produc o serie de vitamine ca tiamina, biotina, riboflavina i acidul pantotenic. Numeroase bacterii din rizosfer produc acid indolil-3-acetic (AIA), n special cnd triptofanul este prezent n mediu. Brown (1975, cit. de Sylvia i colab., 1999) a demonstrat c bacteriile din rizosfera plantelor tinere de gru produc 0,02-0,03 mg AIA/ml n absena triptofanului i 1-10 mg/ml n prezena lui. Aceste bacterii sunt rare n rizosfera plantelor btrne, probabil ca rezultat al scderii producerii de exudat radicular i al unei nevoi sczute de hormon de cretere pentru plant. De asemenea, numeroase bacterii, levuri i unii fungi (Fusarium) produc acid giberelic i giberiline cu efecte stimulatoare asupra creterii plantelor (mresc viteza de germinare a seminelor, asigur dezvoltarea sistemului radicular etc.) Arshad i Frankenberger (1991). Microorganismele realizeaz i un efect de epurare a mediului periradicular prin degradarea pesticidelor i ndeprtarea cantitilor excesive de substane organice i anorganice (Anderson i Coats, 1994). Substanele alelopatice (antagoniste) eliberate de microorganisme n rizosfer pot induce plantei capacitatea de a declana relaii amensale cu alte plante. Astfel de substane alelopatice ce nconjur unele plante pot preveni invazia habitatului de ctre alte plante, aceasta putnd reprezenta un tip de relaie sinergic ntre plant i microorganismele rizosferice. Utilizarea microorganismelor rizosferice: aplicaii biotehnologice Un efort deosebit este fcut n zilele noastre pentru o mai bun nelegere a interaciunilor dintre plante i microorganismele din rizosfer. Sunt propuse obiective majore ca modificarea i administrarea rizosferei i microorganismelor din aceast zon n scopul mbuntirii sntii plantei i al minimalizrii riscului apariiei bolilor. Acestea sunt obiective importante ale biotehnologiilor microbiene.

Un alt aspect interesant al interaciilor plant-rizosfer este reprezentat de posibilitatea influenrii numrului i tipului de microorganisme rizosferice prin modificarea genetic a plantelor. n mod ideal, aceste modificri pot fi fcute n scopul creterii prezenei i activitii unor microorganisme benefice n rizosfer, cum ar fi fixatorii de azot sau productorii de antibiotice, sau n scopul scderii prezenei i activitii unor microorganisme mai puin benefice din rizosfer (Zahir i colab., 2004). 2. STUDIUL CONDIIILOR NATURALE I EVALUAREA PRETABILITII SOLULUI LA SISTEMELE DE CULTUR Determinarea caracteristicilor agrofizice, agrochimice i agromicrobiologice iniiale ale solului Cercetrile privind influena microorganismelor rizosferice asupra dezvoltrii plantelor de soia se vor efectua n cadrul Staiunii Didactice Iai, Ferma Ezreni, ce aparine Universitii de tiine Agricole i Medicin Veterinar Ion Ionescu de la Brad Iai, situat la 2,5 km S-V de oraul Iai, n extremitatea sud-vestic a Cmpiei Moldovei, cunoscut sub denumirea de Cmpia Jijiei inferioare i Bahluiului, ce face parte din Podiul Central Moldovenesc. A fost selectat un teren cu panta de 3-4 %, sol de tip cernoziom cambic, lutoargilos, format pe depozite loessoide, avnd un pH slab acid (pH = 6,6), coninut n humus de circa 3,6-3,4 %, mijlociu aprovizionat n N (0,17 g/100 g sol) i P2O5 (12,6 g/100 mg sol) i bine n K2O (20,2 mg/100 g sol). Pentru caracterizarea complex a solului s-a executat un profil de sol n zona cmpului, la debutul experienelor in vivo. Descrierea morfologic a profilului de sol s-a fcut pe baza indicatorilor pedomorfologici prezentai n metodologia elaborrii studiilor pedologice (vol. III, I.C.P.A., 1987). n urma descrierii morfologice, solul a fost diagnosticat ca cernoziom cambic mezocalcaric regradat, adncimea de apariie a carbonatului de calciu fiind de 78 cm. Solul pe care se desfoar experiena are o textur lut argilos, prezentnd un pH slab acid pn la slab alcalin. Prezint un volum edafic util mare, cu regim aerohidric bun. Solul este relativ afnat exceptnd stratul subarabil unde se prezint slab tasat. Tasarea slab spre moderat a solului de pe treapta de adncime 19 28 cm este evideniat prin structura poliedric angular i prin distribuia neuniform a rdcinilor care sunt localizate preferenial pe feele elementelor structurale. Efectul negativ al tasrii solului este parial compensat de o reea dens de rdcini fasciculate i de activitatea mezofaunei. Galeriile rezultate (cervotocine) mresc permeabilitatea solului i favorizeaz infiltrarea mai rapid a apei. Solul a evoluat att sub influena vegetaiei forestiere ct i a celor de fnea i cultivate. Grosimea mai mic a orizontului humifer cu circa 15 cm fa de cernoziomurile cambice zonale i prezena cornevinelor atest evoluia polifazic a acestor soluri (Filipov, 2007). Datele obinute demonstreaz o morfologie de tipul Ap, Atp, Am, AB, Bv1, Bv2, Bv3k Cca1, Cca2, II Ck (Foto 1). Rezultatele analizelor chimice efectuate sunt prezentate n Tabelul 1. Analiza acestor valori ne indic faptul c solul pe care se execut experiena se caracterizeaz printr-un pH neutru uor acid n stratul lucrat de la suprafaa solului, cu valori cuprinse ntre 6.68 7.01 uniti pH. Pe intervalul 40-170 cm valorile pH-ului sunt cuprinse ntre limitele 7.12-8.19. Coninutul solului n humus are valori maxime pe orizontul 0-30 cm (2,40 %), scznd sub 0,5 % la adncimi mai mari de 50 cm. Analiza azotului total din sol (Nt) semnaleaz o aprovizionare medie, conform scrii propuse de Rusu M. (2005), pe orizontul 0-30 cm (1,78 %) i o aprovizionare slab n acest element pe orizontul Am (0,104 %). n ceea ce privete coninutul solului n P mobil, orizontul Ap (0-20 cm) are o aprovizionare bun (26 ppm), valorile scznd pe adncime, atingndu-se un minim pe intervalul 40-56 cm (2,70 ppm), valoare caracterizat ca fiind foarte slab. Aprovizionarea cu K-mobil este bun i foarte bun (dup ICPA, 1981). Investigaiile agromicrobiologice au fost efectuate n toamna anului 2007 i au vizat compoziia cantitativ i calitativ a microbiotei solului pe care se vor efectua experienele. Rezultatele analizelor cantitative (numr de uniti formatoare de colonii UFC apreciat pentru 1 gram de sol) sunt prezentate n Tabelul 2 i Fig. 1. Tabel 2. Numrul de UFC/g sol din solul analizat Proba 1 Adncimea 0-10 10-20 20-30 Nr. UFC/g sol 36,56 x 106 22,5 x 106 14 x 106

Foto 1. Profilul de sol analizat

I
Ap

Atp Am AB Bv1

Bv2

Bv3k

Cca1

Cca2

II
Ck

I Ap 0-19 cm; lut argilos; brun cenuiu foarte nchis (10YR 3/2); glomerular medie; frecvente macropori fini i medii; cervotocine rare; rdcini frecvente, nu face efervescena cu acid clorhidric; trecere clar. Atp 19-25 cm; lut argilos; brun foarte nchis (10YR 2/2); structura poliedric angular mare; moderat compact; distribuia rdcinilor neuniform, preferenial pe feele elementelor structurale; cervotocine rare; nu face efervescena cu acid clorhidric; trecere clar, ondulat. Am 25-32 cm; lut argilos; brun foarte nchis (10YR 2/2); structura glomerular mare; rdcini frecvente distribuite relativ uniform att pe feele elementelor structurale ct i n interiorul agregatelor structurale; nu face efervescena cu acid clorhidric; cervotocine rare; trecere treptat. AB 32-40 cm; lut argilos; brun glbui nchis (10YR 3/4); structura columnoid prismatic; rdcini frecvente n interiorul i preferenial pe suprafaa elementelor structurale; cervotocine rare; nu face efervescena cu acid clorhidric; distribuia humusului uniform descrescnd; trecere treptat. Bv1 40-51 cm; lut argilos; brun glbui nchis (10YR 4/4) structura columnoid prismatic medie; slab-moderat compact; distribuia rdcinilor preferenial pe feele elementelor structurale; melanocornevine rare; nu face efervescena cu acid clorhidric; trecere difuz. Bv2 51- 78 cm; lut argilos; brun glbui nchis (10YR 4/4) structura columnoid prismatic medie; slab-moderat compact; distribuia rdcinilor preferenial pe feele elementelor structurale; melanocornevine rare; nu face efervescena cu acid clorhidric; trecere difuz. Bv3k 78-90 cm; lut argilos; brun glbui (10YR 5/4); structura columnoid prismatic medie; slab-moderat compact; rdcini rare distribuite preferenial pe feele elementelor structurale; melanocornevine rare; efervescena moderat spre puternic; eflorescene i pseudomicelii de CaCO3; trecere treptat. Cca1 92-108 cm; lut mediu; galben bruniu (10YR 6/6); structura masiv; efervescena foarte puternic cu acid clorhidric; rdcini foarte rare; trecere difuz. Cca2 108-138 cm; lut mediu; galben bruniu (10YR 6/6); structura masiv; efervescena foarte puternic cu acid clorhidric; eflorescene, pete i vinioare frecvente de carbonat de calciu; rdcini foarte rare; trecere difuz. II Ck 138-160 cm; lut mediu; galben bruniu (10YR 6/6); structura masiv; efervescena foarte puternic cu acid clorhidric; concreiuni i ppui de loess frecvente de carbonat de calciu.

Din analiza datelor se constat c adncimea de prelevare a probelor indic schimbri caracteristice n distribuia numeric a microorganismelor. Astfel, cele mai multe microorganisme au fost identificate n straturile superficiale ale solului (adncimea de recoltare 10 cm) - Fig. 1, situaie explicabil prin prezena n acest orizont de sol a unor cantiti mari de substane organice utilizate de ctre microorganisme ca nutrieni. Fig. 1 - Distribuia numeric a microorganismelor n solul analizat
40 35 30 25 20 15 10 5 0

nr. UFC (x 106)

36,56 22,5 14

0-10 cm

10-20 cm

20-30 cm

Tabel 1. Proprieti chimice cernoziom cambic Ezreni (profil de sol 0-170 cm

Nr. crt

Orizontul Ap 0-20 cm Atp 20-28 cm Am 28-40 cm Bv1 40-56 cm Bv2 56-80 cm Btc 80-90 cm CCA1 90108 cm CCA2 109120 cm CCA3 120150 cm CCa 150170 cm

Argila <0,002 41.8 38.8 42.6 41.2 40.6 35.9 38.1 35.0 40.2 39.0

P 0,0020,02 30.3 31.6 30.0 31.9 31.2 29.4 31.8 28.5 25.5 27.5

NFam 0,20,05 3.0 3.3 3.4 3.6 3.6 3.0 3.7 5.0 4.9 6.1

NFsi 0,050,02 22.9 23.3 24.0 23.3 24.6 31.7 26.4 31.5 29.4 27.4

NG 0,2-2 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0

pH 6.68 6.78 7.01 7.12 7.32 7.95 8.08 8.14 8.16 8.19

CaCO3 % 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 8.9 17.3 10.8 13.4 16.5

Corg % 1.30 1.39 0.55 0.61 0.26 0.16 0.14 0.04 0.18 0.07

Humus 2.24 2.40 0.95 1.05 0.45 0.28 0.24 0.07 0.31 0.12

Nt % 0.178 0.149 0.104 0.165 0.110 0.109 0.080 0.072 0.068 0.043

P-AL ppm 26 10.43 3.58 2.70 7.89 10.30 7.56 4.15 5.07 6.36

K mobil 242 178 178 158 158 136 114 114 114 114

K sch (me) 0.44 0.34 0.32 0.26 0.28 0.30 0.32 0.29 0.44 0.29

Na sch (me) 0.17 0.23 0.26 0.15 0.17 0.87 1.05 1.02 0.96 0.94

Ca Sch (me) 15.21 15.38 14.54 11.85 19.05 17.35 15.20 15.27 15.18 12.43

Mg Sch (me) 1.65 1.59 1.41 1.07

T (me) 21.22 20.36 18.43 15.42 19.50 18.53 16.58 16.58 16.58 13.65

n urma analizei calitative s-au izolat, pe baza caracterelor macro-morfologice (forma coloniilor, suprafaa, aspectul marginilor, consistena, aderena, culoarea etc) un numr de 12 tulpini bacteriene notate A301A3012. n Tabelul 3 sunt prezentate principalele caractere macro-morfologice ale tulpinilor bacteriene izolate. NR. CRT. 1. Tabel 3. Descrierea macro-morfologic a tulpinilor izolate din solul analizat TULPINA CARACTERE MORFOLOGICE A301

Colonii de tip S, aspect vscos, margini regulate, slab aderente de substrat, alb-crem 2. A302 Colonii tip S, margini regulate, uor aderente de substrat, alb-crem 3. A303 Colonii de tip S, aspect mucos, perimetru circular, margini ntregi, slab aderente de substrat, translucide, rozii 4. A304 Colonii de tip S, mucoase, perimetru circular, slab aderente de substrat, nepigmentate 5. A305 Colonii de tip R, margini neregulate, transparente 6. A306 Colonii tip S, margini regulate, crem, uor aderente de substrat 7. A307 Colonii de tip S, aspect mucos, slab aderente de substrat, crem-roietice 8. A308 Colonii tip S, margini regulate, uor aderente de substrat, alb-crem 9. A309 Colonii de tip R, margini neregulate, opace 10. A3010 Colonii de tip S, mucoase, perimetru circular, slab aderente de substrat, albrozii 11. A3011 Colonii de tip S, aspect mucos, slab aderente de substrat, translucide 12. A3012 Colonii de tip R, margini neregulate, alb-crem Descrierea micro-morfologic s-a efectuat pe frotiuri colorate dup tehnica Gram, rezultatele fiind prezentate n Tabelul 4. Tabel 4. Descrierea micromorfologic a tulpinilor izolate TULPINA DESCRIEREA MICRO-MORFOLOGIC A301 A302 A303 A304 A305 A306 A307 A308 A309 A3010 A3011 A3012 Bacili de dimensiuni mici, Gram pozitivi, izolai, sporulai, spor central nedeformant Bacili de dimensiuni medii, Gram pozitivi, izolai, sporulai, spor central nedeformant Cocobacili, Gram pozitivi, dispui n grmezi neregulate, nesporulai Bacili de dimensiuni mici, Gram negativi, aglomerai, nesporulai Bacili Gram pozitivi, izolai, sporulai, spor central nedeformant Bacili dimensiuni mici, Gram negativi, izolai, nesporulai Bacili de dimensiuni mici, Gram negativi, izolai, nesporulai, cu capete ascuite Bacili de dimensiuni medii, Gram pozitivi, izolai, nesporulai Coci, Gram pozitivi, izolai Bacili de dimensiuni medii, Gram pozitivi, izolai, sporulai, spor subterminal, nedeformant Coci, Gram pozitivi, grupai n tetrade Filamente actinomicete

NR. CRT. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12.

Analiza micro-morfologic a tulpinilor izolate demonstreaz c microbiota solului analizat este reprezentat predominant prin bacili, Gram pozitivi, cel mai frecvent sporulai (Foto 2). n procente mai mici au fost descrise tulpini reprezentate morfologic prin coci Gram pozitivi, respectiv filamente de actinomicete.

Foto 2 - Aspectul micro-morfologic al tulpinii A202 (1000 x) 3. MATERIALIZAREA EXPERIENELOR N CMP Studiile prevzute n cadrul acestui contract de cercetare au fost demarate n cadrul Staiunii Didactice a Universitii de tiine Agricole i Medicina Veterinar Ion Ionescu de la Brad Iai - Ferma Ezreni, n toamna anului 2007. Experiena este monofactorial, iar amplasarea experienelor se va realiza dup metoda blocurilor randomizate pe doua rnduri, n 3 repetiii, suprafaa unei parcele fiind de 40 m2. BIBLIOGRAFIE SELECTIV 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 16. 17. Alcamo, I.E., 2003 Microbes and society, an introduction to microbiology, Jones and Bartlett Publishers, Boston, 294-315. Anderson, T.A., Coats, J.R., 1994 Bioremediation through rhizosphere technology, American Chemical Society, Washington, 56-70, 82-93. Arshad, M., Frankenberger, W.T., 1998 Plant growth-regulating substances in the rhizosphere: microbial production and functions, Adv. Agron., 62:45-151. Bai, Y.M., Pan, B., Charle, T.C., Smith, D.L., 2002 Co-inoculation dose and root zone temperature for plant growth promoting rhizobacteria on soybean [Glycine max (L.) Merr] grown in soil-less media, Soil Biology and Biochemistry, 34:1953-1957. Canarache A., 1990 Fizica solurilor agricole. Editura Ceres, Bucureti. Canarache A., 1998 A procedure for physical characterization of soil as related to crop grotw and Farming Tehniques. tiina Solului. Seria a III a, vol XXXII. Cattelan, A.J., Hartel, P.G., Fuhrmann, J.J., 1999 Screening for Plant GrowthPromoting Rhizobacteria to Promote Early Soybean Growth, Soil Science Society of America Journal, 63:16701680. Chebotar, V.K., Asis, C.A., Akao, S., 2001 Production of growth promoting substances and high colonization ability of rhizobacteria enhance the nitrogen fixation of soybean when inoculated with Bradyrhizobium japonicum, Biology and Fertility of Soils, 34:427-432. Dashti, N., Zhang, F., Hynes, R., Smith, D.L., 1998 Plant growth promoting rhizobacteria accelerate nodulation and increase nitrogen fixation activity by field grown soybean [Glycine max (L.) Merr.] under short season conditions, Plant and Soil, 2:205-213. Davet, P., 1996 Vie microbienne du sol et production vegetale, INRA, Paris, 206-272. Hossain, M.K.B, Alexander, M., 1984 Enhancing soybean rhizosphere colonization by Rhizobium japonicum, Appl. Environ. Microbiol., September, 48(3):468-472. Lucas-Garcia, J.A., Probanza, A., Ramos, B., Colon-Flores, J.J., Gutierrez-Manero, F.J., 2004 Effects of plant growth promoting rhizobateria (PGPRs) on the biological nitrogen fixation, nodulation and growth of Lupinus albus I. cv. Multolupa, Engineering, Life Sciences, 4:71-77. Keister, D.L., Cregan, P.B., 1991 The rhizosphere and plant growth Kluwer Academic Publishers, Dordrecht, Netherlands, 21-94, 113-165. Kemper, W.D., and R.C. Rosenau, 1986. Aggregate stability and size distribution. p. 425442. In A. Klute (ed.) Methods of soil analysis. Part 1. 2nd ed. Agron. Monogr. 9. ASA, Madison Kennedy, A.C., 1998 The rhizosphere and spermosphere, In: Sylvia DM, Fuhrmann JJ, Hartel PG, Zuberer DA, eds., Principles and applications of soil microbiology, Prentice Hall, Upper Saddle River, New Jersey, 389-407. Lynch, J.M., 1990 The rhizosphere, John Wiley and Sons, Chicester, U.K., 57-165. Onisie T., Jitreanu G., 1991 Agrotehnica, Lucrri practice, UAMV Iai

18. Pinton, R., Varanini, Z., Nannipieri, P., 2001 The rhizosphere: biochemistry and organic substances at the soil-plant interface, Marcel Dekker, New York, 56-89, 97-135. 19. Rus L., Onisie T., tefan Marius, Dunca Simona, 2004 Impactul sistemului de lucrare asupra distribuiei microorganismelor din sol - Lucrrile tiinifice, Seria Agronomie, vol. 47, Ed. Ion Ionescu de la Brad Iai, ISSN: 1454-7414, 357-362. 20. Sylvia, D.M., Fuhrmann, J.J., Hartel, P.G., Zuberer, D.A., 1999 Principles and applications of soil microbiology, Prentice Hall Inc, Upper Saddle River, NJ, 389-407. 21. enu I., 2005, Echipamente performante pentru arat i pregtit patul germinativ. Mecanizarea agriculturii. 22. Zahir, Z.A., Arshad, M., Frankenberger, W.T., 2004 Plant growth promoting rhizobacteria: applications and perspectives in agriculture, Advances in Agronomy, 81:97-168. 23. Zhang, F., Dashti, N., Hynes, R.K., Smith, D.L., 1996 Plant-growthpromoting rhizobacteria and soybean (Glycine max [L.] Merr.) nodulation and nitrogen fixation at suboptimal root zone temperatures, Annals of Botany, 77:453-459. 24. Zarnea, G., 1994 Tratat de microbiologie general, Vol. V, Ed. Academiei Romne, Bucureti, 587665.