n patologia infecioas cu bacterii anaerobe etiologia este reprezentat de specii anaerobe rezidente ale esutului cutanat (Eubacterium, Propinibacterium,

tractului respirator, Peptostreptococcus), cavitii bucale (Porphyromonas, Bacteroides, Peptostreptococcus, Fusobacterium, Veillonella, Actynomyces, Bifidobacterium), mucoasei vaginale (Lactobacillus +++, Prevotella sp., Prevotella pigmentes, Prevotella disiens, Peptostreptococcus ssp.), colonului (Bacterioides grup fragilis +++, Bilophila wadworthia, Peptostreptococcus ssp., Clostridium spp., Bifidobacterium spp., Eubacterium spp.). Ea include abcese cerebrale, infecii oculare, sinuzite, infecii bucale i dentare, complicaii ale anginei Vincent, actinomicoze, infecii pleuropulmonare, endocardite, abces hepatic, septicemie (5-10% din hemoculturi sunt pozitive pentru anaerobi), infecii introabdominale, colite pseudomembranoase, peritonite, infecii de tract genital, mionecroze, supuraii nchise (cu miros fetid), infecii situate n vecintea mucoaselor (bucal, anal, genital), puroi granular de culoare galben, infecii secundare dup mucturi, injecii intramusculare, traumatisme, intervenii chirurgicale la nivelul tractului digestiv, cior genitale, ortopedie). Examenul direct al produsului patologic evideniaz microorganisme sporulate sau o morfologie polimorf, iar culturile incubate n arrobioz ramn sterile. Prelevarea produselor patologice pentru diagnosticul bacteriilor anaerobe Recoltarea trebuie precedat de dezinfecie cu iod, apoi cu alcool 70 de grade. Urmeaz puncionarea focarului de infecie cu sering sau pipet Pasteur, cu chiureta n profunzime, evitnd formarea de bule de aer; recoltarea este de preferat s se fac n laborator, n caz contrar, proba se introduce n flacon cu mediu de transport pentru anaerobioz (mediu ce conine un gaz fr O2, mediu gelozat sau soluie tampon care permite supravieuirea bacteriilor n anaerobioz mai mult de 48 de ore i un indicator de anaerobioz, de exemplu, rezasurina) sau, ntr-o sering nchis la ambele extremiti. Recoltarea cu tamponul este prohibit. La nivelul laboratorului anaerobioza poate fi asigurat cu ajutorul mai multor dispozitive: gaz-vacuum (2 ore), gaz bag, jar cu anaerobioz (15 minute), camer cu anaerobioz (cu atmosfer 5:15:80/H2:CO2:N2 sau cu catalizator de Pd). Etapele diagnosticului microbiologic

La examenul macroscopic se poate constata supuraie cu aspect de granule de S, cu miros neplcut datorit produilor finali de metabolism, fluorescen roie, esuturile sunt necrotice, negre datorit pigmenilor produi de bacilii Gram-negativi pigmentai. La examenul microscopic coloraia Gram variabil este sugestiv pentru bacteriile anaerobe. n funcie de morfologie i afinitatea tinctorial: cocobacili Gram negativi: Prevotella, Prophyromonas, Haemophylus; bacili Gram-negativi fini efilai: Fusobacterium, Capnocytophaga; bacili foarte lungi, Gram-negativi, cu un capt punctat, iar cellalt ptrat: Leptotrichia; coci de dimensiuni mici, Gram-negativi: Veillonella; bacili Gram-pozitivi, sporulai: Clostridium; bacili Gram-pozitivi, nesporulai: Actinomyces, Propionibacterium, Bifidobacterium, Eubacterium. nsmnarea produsului patologic se realizeaz pe: mediu MacConkey cu incubare n aerobioz medii de mbogire pentru anaerobi (mediu cu tioglicolat) geloz snge

Toate mediile pentru anaerobi trebuie regenerate nainte de utilizare pe baie Marie, la 100oC, 20 minute. Gelozele repartizate n coloan nalt se incubeaz n aerobioz. Jarurile de anaerobioz se deschid la cel puin 24 de ore de incubare, iar n unele cazuri la 48 de ore. De obicei, pe mediile de anaerobi apar colonii cu caractere diferite, care uneori reprezint forme disociate ale aceleiai specii. Coloniile au miros fetid, adesea sunt pigmentate i sunt diferite i n general mult mai mari dect cele obinute pe mediile incubate n aerobioz. Se realizeaz examen microscopic pentru fiecare morfotip n parte. Morfotipurile se nsmneaz pe medii lichide mbogite cu vit. K1 i hemin de pe care se realizeaz testul indolului, catalazei, ureazei i aerotoleranei (cretere n atmosfer de 5% CO2).

- n cazul n care la examenul microsocpic se observ bacili, se realizeaz o serie de teste enzimatice: producerea de hemolizine, fosfolipaze (lecitinaz), lipaze, proteaze, fermentarea glucidelor, hidroliza esculinei, seroneutralizare i toxinotipie i stabilirea tipului fermentativ, dup incubare timp de 48 de ore n mediu TGY, urmat de extracia alcoolilor i acizilor volatili cu eter etilic i analiza cromatografic i respectiv, prin esterificarea i extracia compuilor nevolatili. Din fiecare morfotip se realizeaz o preidentificare cu ajutorul unei miniantibiograme: vancomicin, colistin, metronidazol, verde briliant, sruri biliare, SPS (sodiu polietanol sulfat). Vancomicin Kanamicin Colistin Rezisten SPS 5 g 10 g 10 g la % + V V V V + + V bil Oxgall 2 grup B. fragilis Prevotella Porphyromonas B. meolitycum Fusobacterium Weillonella Pepstostreptococcu s anaerobius Pepstostreptococcu s sp. Clostridium Eubacterium Actinobacterium Bifidobacterium Propionibacterium R R S R R R S S S S S S S R R R S S S R S S S S S S R V R S S S R R R R R R R Metronidaz ol 4 g S S S S S S S S S S R R R

S R

Diferena anaerobilor facultativi aparinnd clasei Actinobacteria (Actinomyces, Actinobacterium, Arcanobacterium, Bifidobacterium, Propionibacterium, Eubacterium) se realizeaz cu ajutorul testelor API pentru anaerobi.