Sunteți pe pagina 1din 6

CURS1 - Celulele stem mezenchimale: generalitati Celulele stem sunt celule care au atat capacitatea de autoreplicare (reinoire) cat

si capacitatea de diferentiere in alte tipuri celulare; practic sunt celule nespecializate care dau nastere unor celule specializate. Celulele stem sunt de doua tipuri: embrionare, sunt celulele recoltate din embrioni pana in stadiul de blastocist si ele au capacitatea de a da nastere tuturor tesuturilor din organism; adulte, rezida in majoritatea tesuturilor adulte si contribuie la mentinerea homeostaziei tisulare si la reinoirea celulelor tisulare in caz de leziune; se crede ca si ele pot da nastere altor tipuri de celule dar oricum capacitatea lor de diferentiere este mult mai redusa decat a celor embrionare; in stroma maduvei osoase exista un subset de celule nehematopoietice numite celulel stem mezenchimale; aceste celule pot fi recoltate si cultivate in vitro si induse sa se diferentieze terminal in osteoblasti, condrocite, adipocite, tenocite, celule neurale si celule ale stromei hematopoietice;

S-a crezut multa vreme ca aceste celule stem adulte au un potential de diferentiere restrictionat la tipurile de celule din tesutul in care se gasesc. S-a constatat insa ca aceste celule stem adulte pot da nastere si altor tipuri celule, din alte tesuturi. De exemplu, celule stem hematopoietica poate da nastere la celule ovale hepatice (bloodto-liver). Celula stem neurala, pe langa cele trei tipuri de celule din creierul adult, poate produce celule stem hematopietice (brain-to-blood). Celulele stem mezenchimale din maduva pot produce celule asemanatoare celulelor neuronale (marrow-to-brain).

celulele stem adulte (cum sunt cele hematopoietice si mezenchimale) au capacitatea de a parasi tesutul lor gazda, pot circula in sange si apoi se pot grefa in tesutul tinta. Pentru a-si pune in functiune programul de diferentiere este necesar ca aceste celule sa ajunga intr-un micromediu tisular optim.

TIPURILE DE CELULE STEM UMANE Celula stem Locatia (sursa). Hematopoietica Maduva osoasa Neurala Epitelial. Mesenchimala Creier Epiderma Maduva osoasa Masa celulara interna a blastocistului; celulale germinale promordiale

Tipuri celulare produse Celule sanguine, celule endoteliale, celule ovale hepatice, celule musculare. Neuroni, astrocite, oligodendrocite si celule sanguine. Toate celulele din straturile epidermei. Os, cartilaj, tendon, tesut adipos, tesut muscular, celule neurale.

Embrionara

Toate tipurile celulare

CARACTERISTICILE CELULELOR STEM MEZENCHIMALE (CSM).


cel mai frecvent probele de maduva osoasa se obtin prin punctie sau in cursul interventiilor chirurgicale; dupa depunerea celulelor pe placile de cultura, in mediu de cultura suplimentat cu ser fetal bovin se obtine cultura primara de celule stem mezenchimale; la microscopia optica obisnuita culturile de CSM se prezinta ca o populatie omogena de celule de forma asemanatoare fibroblastilor. Studiile asupra ciclului celular au aratat ca doar o fractiune din CSM prolifereaza activ (~10%), restul sunt blocate la stadiul G0/G1 al ciclului celular. Acest procent mare de celule aflate la stadiul G0/G1 sugereaza competenta si disponibilitatea lor spre diferentiere.

Figura 1. Aspectul culturilor de CSM

Figure 1. hMSCs in culture appear fibroblastic and homogeneous in size and morphology by second passage.

cultura primara este apoi expandata; unele preparate de CSM pot rezista pana la 15 replicari dar altele inceteaza sa prolifereze dupa circa 4 replicari, in functie de procedura folosita la recoltarea maduvei, frecventa scazuta a CSM in materialul recoltat si varsta donorului. In ciuda potentialului lor expansiv in vitro, CSM nu isi pierd kariotipul normal si activitatea telomerazei, totusi cultivarea de lunga durata interfera cu functionarea normala a celulelor si duce la aparitia semnelor de senescenta si apoptoza celulara. Cu ajutorul anticorpilor monoclonali s-a reusit o mai buna caracterizare a fenotipului CSM si s-a descoperit ca aceste celule n-au un fenotip specific: ele imprumuta

carateristici moleculare ale celulelor mezenchimale, endoteliale, epiteliale si musculare. CSM nu exprima markeri specifici liniei hematopoietice (CD45, CD34 si CD14). Tabel II caracteristicile moleculare ale celulelor stem mezenchimale din maduva osoasa. Marker type Specific antigens Cytokines and growth factors Cytokine and growth factor receptors Designation

SH2, SH3, SH4 STRO-1 -smooth muscle actin MAB1740 Interleukins: 1 , 6, 7, 8, 11, 12, 14, and 15 LIF, SCF, Flt-3 ligand GM-CSF, G-CSF, M-CSF IL-1R, IL-3R, IL-4R, IL-6R, IL-7R, LIFR, SCFR, G-CSFR, IFN R, TNFIR, TNFIIR, TGFIR, TGFIIR, bFGFR, PDGFR, EGFR Integrins: v3, v5 Integrin chains: 1, 2, 3, 4, 5, v, 1, 3, 4 ICAM-1, ICAM-2, VCAM-1, ALCAM-1, LFA-3, L-selectin, Adhesion molecules endoglin, CD44 Collagen type I, III, IV, V, and VI Fibronectin, laminin Extracellular matrix Hyaluronan, proteoglycans CSM produce o gama larga de factori de crestere, interleukine si chemokine hematopoietice si nehematopoietice si desi unii factori sunt exprimati constitutiv alti factori sunt exprimati doar dupa stimulare. Acesti factori sunt importanti si au rol inductiv/reglator nu numai pentru CSM cat si pentru celelalte tipuri celulare din micromediul maduvei osoase, lucru intarit si de constatarea ca CSM secreta un numar important de molecule din matricea extracelulara, cum sunt fibronectina, laminina, colagen si proteoglicani si un numar de receptori celulari implicati in interactiunile celula-matrice si celula-celula. Foarte importanta este expresia puternica a CD44 (receptor pentru liganzi de genul acidului hialuronic si osteopontinului), care joaca un rol central in organizarea matricei extracelulare din maduva osoasa si os. Figura 2. Detalii ale micromediul din maduva osoasa in care rezida CSM

Figure 1. Anatomical and immunohistological relationship of marrow stromal cells to marrow pericytes. A) Marrow vascular structures as seen in a histological section of human adult bone marrow. hc = hematopoietic cells; ad = adipocytes; a = artery; VS = venous sinusoid; PCA = pre-capillary arteriole. Note the thin wall of the venous sinusoid. B) Semi-thin section from low-temperature processed glycolmethacrylate embedded human adult bone marrow reacted for ALP. Arrows point to three arterioles emerging from a parent artery (A). Note that while there is no ALP activity in the wall of the large size parent artery, a strong reaction is noted in the arteriolar walls. C, D) Details of the arterioles shown in A and B. Note that ALP activity is associated with pericytes (P). E) Section of human adult bone marrow immunolabeled for alpha-SMA. Note the reactivity of an arteriolar wall, and the complete absence of reactivity in the hematopoietic cords (hc) interspersed between adipocytes (ad). F) Detail of the wall of a marrow venous sinusoid lined by thin processes of adventitial reticular cells (venous pericytes). Note the extension of cell processes apparently away from the wall of the venous sinusoid (vs) and into the adjacent hematopoietic cord ALP reaction. G, H) High power views of hematopoietic cords in sections reacted for ALP (G) and alpha-SMA (H). Note the presence of ALP activity identifying "reticular" cells, and the absence of labeling for alpha-SMA. HETEROGENICITATEA CULTURILOR DE CELULE STEM MEZENCHIMALE cand se investigheaza culturile de CSM din punct de vedere proliferativ, acestea par a fi neomogene. studiile au aratat ca in culturile de CSM exista o populatie celulara latenta, formata din celule mici si agranulare (celule RS-1), cu o capacitate redusa de a genera colonii de celule (uncommitted); aceste celule au un profil antigenic diferit de majoritatea celulelor proliferative din culturile de CSM. Totusi, aceste celule RS-1

pot fi facute sa prolifereze in anumite conditii si se crede ca reprezinta un rezervor ex-vivo de celule care se reinoiesc (celule stem autentice), neangajate inca spre proliferare sau diferentiere in cultura. marea majoritate a celulelor dintr-o cultura de CSM sunt celule proliferative, care in functie de conditiile de mediu, manifesta potential de diferentiere spre anumite linii celulare (committed). Circa 30% din aceste celule au un triplu potential de diferentiere: spre calea osteocitara, condrocitara si adipoasa, restul celulelor prezinta un potential de diferentiere spre calea osteocitara si condrocitara sau doar osteocitara. Nu s-au identificat celule cu potential dual de diferentiere spre calea osteocitara/adipoasa sau condrocitara/adipocitara si nici nu s-au identificat celule cu potential de diferentiere limitat strict la calea condrocitara sau adipocitara. S-au identificat insa celule cu un potential cvadruplu de diferentiere: spre calea osteocitara, condrocitara, adipocitara si a stromei hematopoietice.

Culturile de celule stem mezenchimale obtinute din maduva osoasa nu sunt omogene ci sunt formate din celule latente si angajate in proliferare, cu diferite potentiale de diferentiere. Pe masura ce aceste celule prolifereaza si se diferentiaza isi pierd capacitatea de autoreinoire (stemicitatea). IERARHIA PROLIFERATIVA A CELULELOR STEM MEZENCHIMALE Maduva osoasa este considerata in vivo ca fiind locul in care rezida celulele stem mezenchimale neangajate (uncommitted), care prin potentialul lor de autoreinoire si de diferentiere furnizeaza organismului celule mezenchimale nediferentiate si diferentiate, pe durata intregii existente a acestuia. Conceptul de ierarhie proliferativa a fost dezvoltat pentru a explica existenta unor populatii celulare intr-un tesut si care cuprind atat celule stem, cat si progenitori neangajati (uncommitted) si angajati (committed). Conceptul se bazeaza pe presupunerea ca proliferarea, diferentierea si maturarea celulelor sunt procese independente: celulele stem se divid fara a se matura iar celulele pornite pe care diferentierii se pot matura dar isi pierd capacitatea de diviziune. Totusi, populatia de celule progenitoare angajate (committed) se divid si se si matureaza, prezentand proprietati intermediare intre celulele stem si celulele functionale mature. Asadar, notiunea de stemicitatea celulelor stem nu este o proprietate a unui tip particular de celula ci este spectrul posibilitatilor de diferentiere un tipurilor celulare dintr-o populatie de celule. In figura de mai jos este prezentata ierarhia proliferativa a celulelor stem mezechimale din maduva osoasa (ce tipuri celulare pot lua nastere din celulele stem mezenchimale in conditii de stimulare potrivita). Figure 3. Schematic diagram for the proliferative hierarchy of mesenchymal progenitors. The diagram has been constructed with data from studies performed with expanded human bone marrow-derived mesenchymal progenitor cells. It shows two main compartments containing either uncommitted multipotent mesenchymal stem cells (MSC) or committed mesenchymal progenitors with decreasing stemness, as indicated in the bottom triangle. The committed progenitors are named as colony forming units (CFU) and their differentiation potential into S, hematopoieticsupporting stroma; O, osteoblasts; C, chondrocytes; T, tenocytes; A, adipocytes; skM, skeletal; smM, smooth; cM, cardiac muscle cells; As, astrocytes; Ol, oligodendrocytes; and N, neurons. The third compartment represents, for sake of simplicity, only the mature mesenchymal phenotypes.