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Juan Carlos Torres Foronda Henry Leonardo Patio Valencia Reinaldo Cardona Narvez

TCCA TPA TCCA

2010

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS ANALISIS BROMATOLOGICOS A LOS ALIMENTOS

POR Juan Carlos Torres Foronda (TCCA) Henry Leonardo Patio Valencia (TPA) Reinaldo Cardona Narvez (TCCA)

1era Edicin
Pruebas de laboratorio Alimentos SENA Agroindustrial Quindio

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ndice

1. Anlisis Bromatolgicos de los alimentos.. 3 2. Control de calidad de aguas .. 18 3. Prueba de plataforma de lcteos ... 29

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Anlisis Bromatolgicos De los Alimentos


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DETERMINACION DE GRASA

Pesar 5 gr de muestra en vidrio reloj, tomar nota de la cantidad pesada. Pesar en un beacker 2,5 gr de tierra diatomcea (celite) Depositar en el tubo de hidrlisis la muestra con 50 ml de HCL al 4 N. Adicionar al tubo de hidrolisis la tierra diatomcea (celite)

Adicionar en el tubo de hidrlisis 50 ml de HCL al 4 N.

Lavar las fritas, verificar que no estn tapados los filtros y adicionar 25 gr de arena de mar y 2,5 de celite. Llevar los tubos y las fritas al equipo de hidrlisis y colocarlos de forma correcta. Dejar ebullir por 30 y luego filtrar con trampa de H2O. 1
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Dejar ebullir por 30 y luego filtrar con trampa de H2O. Llevar a secar las fritas por 24 h a 60 C en estufa de aire circulante. Adicionar en la frita 25 gr de arena de mar. Pesar los vasos de grasa vacios luego agregar solvente (hexano) hasta la palabra (BCHI) y colocarlos en el equipo Soxhlet Standard. Colocar las fritas en el equipo Soxhlet Standard. Programar el equipo del botn (Programa 7).

Oprimir el botn Star para dar inicio al equipo.

Esperar que el proceso finalice por completo. Sacar los vasos de grasa y llevar a la cabina extractora hasta que no se perciba olor a hexano. 2
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Pesar el vaso con grasa y luego aplicar formula. %G: (Pv2-Pv1)/Gr M x 100

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DETERMINACION DE MATERIA SECA

Tomar muestra de 3 mm de alimento. Pesar caja petri vaca y anotar peso. Pesar 1 gr de muestra y anotar peso. Sumar los datos de la caja petri y la muestra. Llevar a la estufa de aire circulante 1-h a 105C. Colocar en el desecador y dejar 15. Pesar la caja petri llena. Llevar a la estufa de aire circulante 15 a 105C. Sacar y colocar desecador por 15. Pesar la caja petri llena. Repetir este procedimiento hasta tener un peso constante. Aplicar formula %Ms:(Cp1-Cp2)/GrM x 100
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en

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DETERMINACION DE pH

Conectar el equipo a 110 V Lavar el electrodo con H2O destilada. Calibrar el equipo con las soluciones Buffer 7 y 4. Sumergir el electrodo en la solucin Buffer 7 presionar el botn y esperar Cal quede en a que 7. Juagar con H 2O destilada. Sumergir el electrodo en la solucin Buffer 4 presionar

Cal
el botn y esperar a que quede en 4. Juagar con H2O destilada Tomar 10 ml de muestra en un beacker si es liquida o si es solida tomar 1 gr y diluirlo en 10 ml de H2O destilada. Sumergir el electrodo en la muestra y presionar el botn despus Read anotar resultado y juagar el electrodo con H2O destilada.

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DETERMINACIN DE MINERALES

Lavar el crisol y purgar agua destilada.

con

Secar en la mufla a 500C x 30 Dejar en el desecador hasta que estn fros. Pesar el crisol vacio y tomar nota. Tarar el crisol y pesar 1.000g de muestra tomar nota. Incinerar con mechero hasta la formacin de llama al interior del crisol. Llevar luego de la propagacin de la llama a la mufla a 550c x 3 horas o hasta formar ceniza blanquecina. Extraer a desecador hasta que se enfren. Pesar el crisol tomar nota.

%minerales= peso crisol lleno peso crisol vaci x 100% Gramos de muestra

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DETERMINACION DE FIBRA

Tomar de 3 5 gr de muestra y desengrasar con hexano por 24 horas. Secar la muestra a 60C por 12 horas. Pesar en vidrio reloj 1gr de muestra. Colocar en un Beacker con 200 ml de H2SO4 al 0,26 N. Anotar peso correcto.

Para preparar 1 litro de H2SO4 al 0,26 N se deben medir 7,13 ml de este acido.

Llevar a calentamiento y dejar ebullir durante 30 min. Filtrar con embudo buchner y con la trampa de agua. Colocar papel filtro en beacker y con KOH arrastrar la muestra. Para preparar 1 litro de KOH al 0,23 N se deben pesar 12,90 gr de esta base.

Llevar a calentamiento y dejar ebullir durante 30 min.

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Pesar el papel filtro, anotar el peso y filtrar correctamente. Colocar papel filtro en vidrio reloj y llevar a secar en estufa de aire circulante, 60C 30 min. Pesar el papel filtro y aplicar la formula. %F: (PP2- PP1)/gr muestra x 100

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DETERMINACIN DE PORCENTAJE DE ACIDEZ Pesar 9 gr de muestra. Diluir con 40ml de agua destilada si es necesario. Transferir a un erlenmeyer de 100ml. Adicionar de 3 a 5 gotas de fenolftalena. Titular con NaOH 0.1N estandarizado hasta obtener color rosa tenue. % de acidez= ml x Pe x N x 100% G de muestra

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DETERMINACIN DE BRIX Lavar prisma y porta prisma con agua destilada. Secar l prisma con un pao suavemente. Depositar agua destilada en el prisma y cerrar. Hacer lectura (0 Bx) calibrar a 0 Bx. Realizar la lectura nuevamente 0 Bx repetir lavado si es necesario. Secar prisma y porta prisma. Depositar muestra en el prisma Hacer la lectura Repetir lectura 3 veces establecer promedio Dejar equipo en condiciones ptimas de limpieza.

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DETERMINACION DE PROTEINA

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Gr = 1.4x10x6.25x0.1 %PE

Muestra slida? Si No

Depositar la muestra en el tubo de digestin.

Tomar jeringa seca y llenar totalmente sin derrames externos. Pesar la jeringa llena y tarar la balanza Depositar el contenido en el tubo de digestin Colocar la jeringa en la balanza y tomar el peso de esta

Adicionar de 20 a 30 ml de H2S04 95-98% p 1.84g/ml. Adicionar el catalizador


(pastilla kjeldahl)

Desintegrar totalmente.

la

muestra

Tapar los tubos con el tubo de aspiracin dejar el montaje sobre la gradilla.

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Calentar la unidad de digestin en nivel 10 x15. Hacer verificacin del correcto funcionamiento del scrubber. Colocar la boquilla en el tubo de aspiracin. Encender el scrubber y abrir el grifo de agua. Llevar la unidad de calentamiento a nivel 3 y hacer el montaje de las muestras. Aumentar el nivel gradualmente con intervalos de tiempo (hasta nivel 10). Dejar las muestras hasta digestin total (color verde esmeralda a las 3 horas apx.). Pasar las muestras a la gradilla y dejar en reposo con el scrubber hasta que no haya vapor. Destilar en la unidad de destilacin. Presionar el swchit posterior superior derecho.
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1. Revisar el filtro de salida de aire. 2. comprobar la hermeticidad del condensador y recolector. 3. verificar el color de la solucin neutralizante (azul rey). 4. realizar la prueba de aspiracin con agua destilada.

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Esperar la preparacin de vapor por parte del equipo


(90``).

Presionar Buscar LAVADOS Presionar

Star

Repetir el lavado por 3 veces. Hacer un lavado general Presionar Buscar DESTILACION

Presionar

Configurar parmetros con Edit Ente H3BO3 2% =70 ml NaOH 32%= 90 ml H2O 10%= 50ml Delay = 40 seg No modificar los parmetros si no es necesario

Ubicar la muestra en la unidad y un erlenmeyer que contenga de 3 a 5 gotas de indicador mixto. Presionar para iniciar la destilacin Star
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Tomar el erlenmeyer y titular con H2SO4 0.1N estandarizado. Tomar nota de consumo de solucin. %P=1.4 x ml x 0.1 x 6.25 g de muestra

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Anlisis fisicoqumico de aguas


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ALCALINADAD FENOLFTALEINA

Tomar 100 mililitros de muestra medidos con probeta y adicionarlos a un Erlenmeyer de 250 mililitros. Adicionar 3 gotas del indicador de fenolftalena, mezclar suavemente. Si no aparece ningn color, la alcalinidad a la fenolftalena (F) es igual a cero (0); si por el contrario aparece un color rosado o violeta, continuar. Titular la muestra con cido sulfrico 0.02 Normal, gota a gota hasta la desaparicin del color. ( o titular a un pH de 8.3).
Mililitros H2SO4(cido Sulfrico) x 0.02Normal X 1000 Mililitros muestra

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ALCALINAD TOTAL

Tomar 100 mililitros de la muestra o una parte alcuota diluida a 100 mililitros con agua destilada, y pasarlos a un Erlenmeyer de 250 mililitros. Agregar 4 gotas del indicador mixto y mezclar. Si aparece un color anaranjado, la alcalinidad total (T) es Igual a cero (0), si el color es azul,
continuar.

Titular la muestra azul con cido sulfrico 0.02 N y con agitacin moderada hasta la aparicin del color anaranjado.
Mililitros H2SO4, 0.02N X 1000 ml muestra

RELACIONES DE ALCALINIDAD Resultado de la titulacin F=0 F<T F=T F>T F=T Hidrxidos mg/L (CaCO3) 0 0 0 2F - T 0 Carbonatos mg/L (CaCO3) 0 2F 2F 2(T-F) 0 Bicarbonatos mg/L (CaCO3) T T 2F 0 0

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DUREZA

Adicionar 1 mililitro de la solucin reguladora de amonio y mezclar. Si se utilizan pastillas indicadoras para dureza total, se puede emplear solucin concentrada de amonaco de la misma cantidad. Agregar con la cucharilla o esptula de medicin una pequea cantidad del indicador de polvo Negro Eriocromo T, o una pastilla indicadora para dureza total segn el caso. Agregar con la cucharilla o esptula de medicin una pequea cantidad del indicador de polvo Negro Eriocromo T, o una pastilla indicadora para dureza total segn el caso. Mezclar hasta la completa disolucin del indicador. Si aparece un color azul o un verde definidos, la dureza total es igual a cero (0), pero si la coloracin es vino tinto, continuar. Titular la muestra desde una bureta con la solucin estndar de EDTA 0.01 M, gota a gota y agitando constantemente hasta que con una ltima adicin, aparezca el color azul o el verde. CaCO3 = A x B x C x 1000 M Donde: DT = Dureza total A = mililitros de EDTA 0.01M (cido Etilendiaminotetra-actico) consumidos en la titulacin 0.01 Molar B = Concentracin Molar de EDTA (cido Etilendiaminotetra-actico 0.01 Molar) C = Peso frmula gramo del carbonato de calcio (100 gramos). 1000 = Factor de conversin a miligramos por litro (miligramos/litro)

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CLORUROS Medir en probeta 100 mililitros de agua destilada (blanco) y 100 mililitros de muestra problema y colocar cada uno de ellos en un Erlenmeyer de 250 mililitros.
EXPRESIN DE RESULTADOS

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rango de mg/L- Cl-

Aproximar en: (mg/L- Cl-) *

0 - 50 50 - 100 100 - 200 200 - 500

1 2 5 10

Aproximar al nmero entero ms cercano divisible por el nmero referencia en cada rango. 36.4 se escribir 36 53 se escribir 52 128 se escribir 130 312 se escribir 310

Adicionar en cada uno de los recipientes 3 gotas de indicador de fenolftalena Si se obtiene un color rojo, adicionar gotas de cido sulfrico 0.1 Normal lentamente y con agitacin suave hasta un ligero tinte rosado. Si no se obtiene coloracin, agregar gotas de hidrxido de sodio 0.1 Normal hasta igualar el tinte. Colocar en cada solucin 1 mililitro del indicador de cromato de potasio 5% y mezclar. Se debe presentar un color amarillo intenso. Titular el blanco con la solucin de nitrato de plata 0.1N, muy lentamente hasta la obtencin de un color marrn definido. Normalmente no deben gastarse ms de 0.4 mililitro en esta operacin. Proceder de igual manera con la muestra problema hasta alcanzar una tonalidad igual a la del blanco.

CLORUROS miligramos/litro Cl(A B) x C x D x 1000 M

A = Mililitros de nitrato de plata gastados en la titulacin de la muestra de agua B = Mililitros de nitrato de plata gastados en la titulacin del blanco. C = Concentracin normal del nitrato de plata utilizado en las titulaciones (0.0141 Normal) D = Peso equivalente gramo de in cloruro (35.45 gramos), o de la especie en que se desee expresar el resultado. 1000 = Factor de conversin a miligramos por litro (miligramos/litro) M= muestra M = Volumen en mililitros de la muestra de agua titulada.

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DETERMINACIN DE HIERRO

Medir en probeta 50 mililitros de agua agitada y verterla en un Erlenmeyer de 250 mililitros. Colocar en un Erlenmeyer de 250 mililitros, 50 mililitros de agua destilada medida en igual forma, para utilizarla como blanco en la determinacin. Adicionar tanto al blanco como a la muestra, 2 mililitros de cido clorhdrico concentrado, 1 mililitro de hidroxilamina y 2 o 3 perlas de vidrio (o tubos capilares). Calentar hasta ebullicin moderada las soluciones as obtenidas y dentro de una cmara de extraccin, para reducir su volumen a 15 o 20 mililitros aproximadamente. Dejar enfriar los Erlenmeyer a temperatura ambiente y transferir cuantitativamente su contenido a tubos de Nessler de 50 mililitros con lavados sucesivos de agua destilada sin sobrepasar los 35 mililitros. Si es necesario, filtrar por papel.

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Agregar a cada tubo de Nessler, 10 mililitros de la solucin reguladora de acetato de amonio y 2 mililitros de fenntrolina. Completar el volumen a 50 mililitros con agua destilada y mezclar suficientemente su contenido. Dejar los tubos en reposo durante 15 minutos como mnimo para que se desarrolle totalmente el color. Calibrar el equipo a 100% de TRAMITANCIA con el blanco y luego leer para las muestras su propio porcentaje de TRAMITANCIA.

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CALIBRACION

Diluir 5 mililitros de la solucin patrn concentrada de hierro (1 mililitro = 0.2 miligramos de hierro (Fe) en agua destilada y completar su volumen a 100 mililitros. En esta nueva solucin estndar, 1 mililitro = 0.01 miligramo de Hierro de Fe. Preparar una serie de patrones de hierro, entre 0.0 y 1.5 miligramos por litro o partes por milln, pipeteando en tubos de Nessler de 50 mililitros, los volmenes de solucin estndar indicado en la tabla anexa y completar luego a la seal de enrase con agua destilada. Colocar los patrones en Erlenmeyer de 250 mililitros y contine el procedimiento indicado anteriormente a partir de la adicin del cido clorhdrico y la hidroxilamina.

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Estndar mililitros /50 mililitros 0.000 0.25 0.50 1.00 1.50 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.50

Concentracin miligramos por litro Fe BLANCO 0.00 0.05 0.10 0.20 0.30 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.50

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ACIDEZ MINERAL EN H2 O Preparar NaOH al 0,02 N e indicador anaranjado de metilo. Medir 50 100 ml de muestra y adicionar de 3 a 5 gotas del anaranjado de metilo. Titular con el NaOH hasta que haya un viraje de color (Naranja a Amarillo). Aplicar formula: C muestra x 1000 Mileq x 50 mg CaCO3 Eq-gr Mileq Viraje de color cuando el pH pasa de 3,1 4,4. Anaranjado de metilo 0,5 gr en 100 ml de etanol.

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ACIDEZ CARBONACEA EN H2O Preparar NaOH al 0,02 N e indicador fenolftalena. Medir 50 100 ml de muestra y adicionar de 3 a 5 gotas de la fenolftalena. Titular con el NaOH hasta que haya un viraje de color (Rosa Tenue). Aplicar formula: C muestra x 1000 Mileq x 50 mg CaCO3 Eq-gr Mileq Viraje de color cuando el pH pasa de 8,0 9,0. Fenolftalena 0,5 gr en 100 ml de etanol.

ACIDEZ TOTAL EN H2O Sumar resultado de acidez mineral y acidez carbonacea.

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Pruebas de plataforma En Lcteos


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Acidez por Alcohol: 1. 2. 3. 4. Adicionar 10 ml de leche en un tubo de Ensayo Adicionar 10 ml de alcohol etlico al 68% Agitar Observar la formacin de grumos

Interpre tacin: Presencia de grumos: leche acida Ausencia de grumos: leche fresca Acidez titulable 1. 2. 3. 4. Tomar 10 ml de leche en un erlenmeyer de 100ml Adicionar de 3 a 5 gotas de fenolftalena al 1% Titular con bureta de 25 ml usando NaOH 0.1N Aparicin de rosado tenue y aplicar formula

%ACIDO LACTICO= N x L x P.E x 100% ml de muestra

Acido silico 1. Adicionar 10ml de leche en un tubo de ensayo 2. Agregar 5 gotas de cloruro frrico (FeCl3) 26% 3. Agitar Interpretacin: Color rosado intenso: Positivo Color amarillo: Negativo

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Cloruros 1. 2. 3. 4. Tomar en tubo de ensayo 5ml del reactivo Nitrato de plata (AgNO3) de concentracin 0.1 N Adicionar de 2 gotas de cromato de potasio KMnO4 10% Agitar y adicionar 1ml de leche y mezclar

Interpretacin: Color rojo ladrillo o amarillo canario: Positivo

Densidad 1. 2. 3. 4. 5. Tomar probeta de250 ml lavar con la muestra Llenar la probeta hasta el volumen total Introducir termo lactodensmetro suavemente Dar giro al termo lactodensmetro Tomar la lectura segn el instrumento

Fosfatasa 1. 2. 3. 4. 5. Tomar 5ml de la solucin tampn en un tubo de ensayo Tapar el tubo y llevar a bao mara por 3 minutos a 37C Adicionar 1ml de leche tapar y mezclar bien Incubar por 2 horas a 37C Retirar los tubos y observar color

Interpretacin: Color amarillo de intensidad variable: positivo No hay cambio de color: Negativo

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Harinas- fculas

1. Tomar 5ml de leche en tubo de ensayo 2. Adicionar 5 gotas de lugol Interpretacin: Color azul: Positivo Color amarillento: Negativo

Hipocloritos 1. Prueba 1: Tomar 5ml de leche e tubo de ensayo y Adicionar 1.5ml de sln Yodo yoduro de potasio Anotar el color de la leche

2. Prueba 2: Si no hay cambio de color agregar 4ml de acido Clorhdrico diluido (HCl) mezclar y observar el color de la cuajada 3. Prueba 3: En el bao mara a 85C colocar el tubo y dejar en reposo 10min La cuajada sube, enfriar rpidamente con agua fra 4. Prueba 4: Agregar al liquido formado debajo de la cuajada de 0.5ml a 1ml De solucin de almidn soluble observar el color Comparar las pruebas con la tabla

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Concentraci n de Cl disponible Prueba 1

1000ppm

500ppm

200ppm

100ppm

40ppm

20ppm

Prueba 2

Prueba 3

Prueba 4

Pardo amarillent o Pardo amarillent o Pardo amarillent o Azul Violaceo

Amarillo intenso Amarillo intenso Amarillo intenso Azul Violaceo

Amarillo plido Amarillo claro Amarillo

---------------------Amarillo

-----------

----------

----------Amarillo Plido Rojo Violaceo

----------

Amarillen to Rojo Violaceo plido

Azul Violaceo

Rojo violceo oscuro

Determinacin De Grasa Reactivos: 1. Alcohol Isoamlico 2. cido Sulfrico 90-91% 3. Tcnica: 1. Colocar en el butirmetro Gerber 10 ms o menos 0,2 ml de cido Sulfrico. 2. Adicionar 11 ml de leche por las paredes del butirmetro. 3. Adicionar 1 ml de alcohol Isoamlico y colocar el tapn de seguridad hasta que quede firme. 4. Golpear con la palma de la mano hasta que no se observe partculas blancas 5. Invertirlo completamente 3 veces para mezclar cido contenido en el bulbo terminal. 6. Centrifugar por 5 minutos. 7. Despus de centrifugar pasar los butirmetro con el tapn hacia abajo a bao Mara a 65C, mnimo 3 minutos y mximo 10. 8. Mantener el nivel del agua por sobre el nivel de la columna de grasa en el butirmetro. 9. Para leer presionar con la llave hasta que la base de la columna de grasa quede a nivel de una divisin principal. 10. Anotar las lecturas en la escala correspondiente al punto ms bajo del menisco de grasa y en la interface de la grasa-cido; la diferencia entre las dos lecturas da el porcentaje de m/m de grasa en la leche.

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Prueba de reductasa (Azul de metileno)

Reactivos: 1- Azul de metileno Tcnica: 1-Tomar 6 tubos de ensayo y adicionar a cada tubo 1 ml de azul de metileno y 10 ml de muestra evitando la exposicin directa del sol 2-Tan pronto como se agregue el reactivo, tapar los tubos sin apretar y llevar a incubar a 37C 3- Observar y mezclar el contenido de los tubos cada 30 minutos hasta tomar una decoloracin el azul de metileno (azul a blanco)

Interpretacin:

Tiempo de decoloracin

Nmero aproximado de bacterias Ms de 20 millones aprox. 20 millones 500.000 a 4 millones 100.000 a 500.000 menos de 100.000

Clasificacin de la leche

20 minutos o menos 20 minutos a 2 horas 2 a 5 horas 5 a 8 horas ms de 8 horas

Psima Mala Regular Buena excelente

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Agua oxigenada

Reactivos: 1- cido vandico (disolver 1 gramo de V2O5 en 100 ml de H2SO4 diluido en 6 volmenes de H2SO4 + 94 volmenes de agua) CONTROL POSITIVO: Leche + agua oxigenada Tcnica: 1-En un tubo de ensayo tomar aproximadamente 10 ml de leche y adicionar 10 a 20 gotas del reactivo de pentoxido de vanadio ya preparado. Interpretacin: Positivo: color rosa curaba-salmn Reactivos: Yoduro de potasio (disolver 25 gramos de yoduro de potasio en 100 ml de agua destilada) Tcnica: 1- En un tubo de ensayo adicionar 10 ml de leche y adicionar 10 gotas de solucin de yoduro de potasio. Interpretacin: Positivo: color rojizo, debido al yodo desprendido.

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Neutralizantes:

Reactivos: 1- Solucin alcohlica de alizarina (disolver 0.5 gramos de alizarina en 1000ml de alcohol de 75% neutralizado) Control Positivo: leche + bicarbonato de sodio

Tcnica: 1- en un tubo de ensayo colocar 2 ml de muestra bien mezclada 2-agregar 3 ml de la solucin de alizarina, mezclar y agitar. Interpretacin: Positivo: coloracin rojo-violeta

Determinacin de formaldehidos:

Reactivos: 1- Solucin acuosa de cloruro frrico al 1% 2- cido sulfrico 1820-1825 Control Positivo: Solucin diluida de formaldehido del 38-40% en 100 ml de agua Tcnica: 1- colocar en un tubo de ensayo 3 ml de leche 2- agregar 3 gotas de solucin de cloruro frrico, agitar por las paredes del tubo 3- agregar con cuidado sin que se mezcle con la leche cido sulfrico en cantidad suficiente para que forme una capa de 1-2 cms de espesor. Interpretacin:

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Positivo: aparece inmediatamente un anillo de color violeta en la interface del cido y la leche.

Pruebas de laboratorio Alimentos SENA Agroindustrial Quindio

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