Metode de sterilizare

- referat -

Introducerea microorganismelor n corpul uman prin intermediul unui produs farmaceutic contaminat, parenteral sau prin rni ale pielii poate avea ca rezultat boli grave sau chiar moartea. Produsele farmaceutice ca injecii, preparate oftalmologice, fluide de irigare, soluii de dializ i dispozitive medicale implantate n corp, trebuie s fie i s rmn sterile. Prin urmare, sterilizarea este o etap esenial n procesul de fabricare al oricrui produs ce ar putea fi injectat sau care vizeaz suprafee mucoase, rni ale pielii sau organele interne. Sterilizarea poate fi definit ca un proces ce ndeprteaz i distruge toate microorganismele cu ajutorul unui agent chimic sau un proces fizic. Cteva dintre cele mai comune proceduri recomandate pentru sterilizarea unui produs sunt urmtoarele: - Filtrarea; - Sterilizarea cu abur; - Sterilizarea uscat; - Radiaii ionizante; - Sterilizarea cu etilen oxid. Alegerea metodei potrivite depinde de tipul de formulare i de capacitatea acesteia de a rezista la tratametul aplicat prin procedura de sterilizare selectat. De exemplu o formulare lichid poate fi sterilizat folosind autoclava sau filtrarea aseptic, ntruct dispozitivele medicale sunt tratate radiaii ionizante. Uneori ns, lichidul este un produs biologic, cum ar fi interferonul sau o mic peptid ce nu pot fi sterilizate, prin urmare filtrarea pe cale aseptic este singura soluie. Eficacitatea tratamentului depinde de timpul cat a fost aplicat mostrei i de gradul iniial de contaminare. Aadar cu ct sunt mai puime microorganisme prezente ntr-o mostr cu att durata procesului de sterilizare va fi mai mic. Totui majoritatea medicamentelor sterile sunt fabricate pe cale aseptic, deoarece sterilizarea degradeaz stabilitatea chimic a produsului. Principalul obiectiv al procesului de sterilizare este distrugerea tuturor microorganismelor prezente ntr-o mostr dat. Metabolismul microbian se bazeaz pe utilizarea de compui anorganici i organici pentru a stimula creterea celulelor, diviziune i ntreinere. Reaciile enzimatice sunt eseniale pentru creterea microbian, reproducere, supravieuire i rspndirea n mediu. Toate procesele de sterilizare inactiveaz sau interfereaz cu aceste reacii enzimatice care susin metabolismul microbian. Cnd se expune o cultur microbian la un agent de sterilizare inactivarea microorganismelor urmeaz o curb exponenial a morii acestora. Probabilitatea ca o populaie de microorganisme sa supravieuiasc unui proces de sterilizare este determinat de numrul lor, tipul, i rezistena la procesul de sterilizare. n plus, supravieuirea microorganismelor este influenat i de ali factori cum ar fi umiditatea, energia termic i timpul expunerii. Sterilizarea cu abur Cnd un eantion este amplasat ntr-o autoclav ce utilizeaz abur saturat i presiune, este sterilizat prin procedeul numit sterilizare cu abur. Principiul de baz al acestei operaii este ca aerul din camer este nlocuit cu abur. Pentru a nltura mai eficient aerul din camer i din interiorul probelor, ciclul de sterilizare poate include mai multe etape de evacuare a aerului i aburului. Ciclurile pentru diferite produse sunt n funcie de penetrarea cldurii, distribuie, i rezistena probelor testate, n general folosindu-se temperaturi n jur de 121C i presiuni de 1-1.5 bari. Totui, timpul necesar pentru o sterilizare complet trebuie determinat n timpul procesului de validare a diferitelor configuraii de ncrcare. Aceste configuraii sunt bazate pe diferitele

tipuri i numrul de materiale tratate de orice proces particular de sterilizare. n timpul validrii se urmaresc doi parametri importani, i anume: Primul l reprezint distribuia cldurii n interiorul camerei, pentru a determina punctele reci. Acesta urmrete uniformitatea i variabilitatea cldurii n interiorul camerei. Al doilea parametru este penetrarea cldurii folosind configuraii cu sarcin real. Aceste sarcini reprezint tipuri materiale sterilizate zi de zi cum ar fi medii de cultur, instrumentaie de laborator, sticlrie, recipiente din plastic, i a deeurilor biologice. Amplasarea de indicatori biologici n autoclava, lng sau n interiorul sarcinilor va permite determinarea temperaturii i presiunii n fiecare mostr. Este important ca temperatura i presiunea corect s fie distribuite uniform n toate materialele aflata n camer pentru o distrugere complet a microorganismelor. Dup incubarea diferiilor indicatori biologici, absena creterii indic sterilizarea complet a tuturor materialelor. Sterilizarea uscat Aceast metod utilizeaz un cuptor de uscare cu aer filtrat i nclzit. Aerul este distribuit n camer prin convecie sau radiaie, printr-un sistem de suflante cu dispozitive pentru detecie, monitorizare i control a parametrilor fizici. Intervalul acceptabil de temperatur n camera goal este de +15C atunci cnd aceasta opereaz la nu mai puin de 250C. Pentru sterilizarea i depirogenarea sticlriei se folosete un proces continuu. Deoarece cldura uscat este frecvent folosit pentru a elimina substanele pirogene de pe sticlrie i recipiente, pentru validarea metodei trebuie fcute ncercri cu anumite concentraii cunoscute de pirogene. Pirogenii sunt bacterii care cauzeaz febr i alte stri patogene la om, de aceea este foarte important ca acestea s fie complet eliminate de pe materiale i echipamente. Sterilizarea gazoas cu etilen oxid Cel mai frecvent agent folosit n sterilizarea gazoas este etilen oxidul. Acest tip de sterilizare se folosete cnd proba nu poate rezista la temperatura ridicat utilizat n procedurile de sterilizare cu abur i cea uscat. Oxidul de etilen este foarte inflamabil, mutagenic i crete posibilitatea de a rmne reziduuri toxice n materialele tratate. Procesul se desfoar ntr-o camer presurizat, similar sterilizrii cu abur dar cu modificri unice sterilizatoarelor cu gaz. Dup ce procesul se ncheie, camera trebuie degazat pentru a permite monitorizarea microbian. Parametri ca difuziunea gazului, concentraia i coninutul de umiditate al materialului, timpul i temperatura sunt factori foarte importani pentru validarea procesului de sterilizare. De asemenea factori critici sunt umiditatea i concentraia gazului. Distribuia probelor n camer trebuie fcut astfel n cat sa maximizeze difuzia gazului i sa optimizeze penetrarea acestuia i moartea microbian. Sterilizarea cu radiaii ionizante Sterilizarea cu radiaii ionizante const n expunerea produsului ce se dorete a fi sterilizat ntr-un cmp de radiaii ionizante (radiaii gamma sau electroni accelerai), pentru o perioad de timp bine determinat. Efectele radiaiei ionizante (n particular efectul biocid) pot fi caracterizate prin mrimea fizic denumit doza absorbit (D), care exprim cantitatea de energie absorbit n unitatea de msur a materialului iradiat. D = dE/dm Unitatea de msur a dozei absorbite n Sistemul Internaional se numete Grey - simbol Gy; se utilizeaz ns i unitatea tolerat rad, 1 Gy = 100 rad.

Doza de sterilizare este doza necesar pentru a asigura sterilitatea unui produs la un coeficient de securitate (SAL) dat. SAL (sterility assurance level) este probabilitatea ca un obiect dintr-un lot s rmn nesteril, dup ce a fost supus procesului de sterilizare. De exemplu SAL = 10-3 nseamn c 1 produs din 1000 poate fi nesteril. Desigur, n plan practic, aceasta nu nsemn c un produs este mai puin steril dect altul aparinnd aceluiai lot. Pentru un proces de sterilizare dat, caracterizat prin parametrii si tehnologici, semnificaia valorii SAL este acea c sterilitatea unui produs dintr-o mie nu poate fi garantat. Valoarea SAL se stabilete n funcie de scopul n care se utilizeaz produsul. Astfel vata medical, produse farmaceutice administrate oral sau considerate aditivi alimentari (laxative, ceaiuri de plante, etc.) au un SAL mai tolerant. n schimb, pentru produsele medicale invazive, ce intru n contact cu fluidele corpului (snge, plasm) se impune SAL = 10-6, ceea ce nseamn c se acoper riscul ca 1 produs dintr-un milion s fie nesteril. Unele ri europene accept doar SAL = 10-6 pentru toate produsele medicale indiferent de utilizarea lor. Este important de contientizat faptul c expunerea la un proces de sterilizare validat nu este singurul factor implicat n asigurarea atingerii strii de sterilitate potrivite utilizrii produsului respectiv. O mare atenie trebuie acordat: coninutului microbiologic a materialelor prime i componentelor proprietilor de barier microbiologic ale ambalajelor controlului mediului n care produsul este fabricat, asamblat , mpachetat i depozitat. Sterilizarea este un exemplu de proces a crui eficacitate nu poate fi verificat prin inspectarea retrospectiv i testarea produsului finit. Din acest motiv procedurile de alegere a dozelor de iradiere i control a calitii procesului au constituit i constituie o tem predicat a standardelor internaionale dedicate acestui domeniu de activitate. nainte de utilizarea sterilizrii prin iradiere pentru un produs dat, se urmrete efectul iradierii asupra materialul din care este confecionat acesta. Se stabilete o doz maxim acceptabil pentru fiecare tip de produs i de ambalaj. Pentru determinarea dozei de sterilizare este necesar cunoaterea numrului i rezistenei la radiaie a populaiei naturale microbiene de pe produsele fabricate. Odat doza de sterilizare stabilit, la intervale de aproximativ trei luni se practic reverificarea ei prin detectarea eventualelor modificri ale masei microbiene iniiale. Fabricantul produsului etichetat steril are responsabilitatea ultim pentru corectitudinea i adecvarea operaiunilor de sterilizare i a controlului de asigurare a calitii. Proprietarul iradiatorului este responsabil pentru furnizarea dozei necesare conform specificailor unui proces valid i pentru un produs definit. Filtrarea Filtrarea prin materiale ce rein microorganisme este frecvent folosit pentru sterilizarea soluiilor instabile la cldur, prin ndeprtarea fizic a bacteriilor. Structural, un filtru este compus n general dintr-o membran poroas sigilat sau prins ntr-o carcas impermeabil. Eficacitatea unui mediu de filtrare sau a unui substrat depinde de mrimea porilor i poate depinde de adsorbia bacteriilor pe suprafaa sau n interiorul filtrului. Alegerea diametrului porilor membranei trebuie fcut astfel nct s se asigure reinerea tuturor microbilor. De exemplu membranele filtrante de sterilizare sunt capabile s rein un procent de 100% dintr-o cultur de 107 Brevundimonas diminuta ATCC 19146 pe cm2 de membran, la o presiune nu mai mic de 2 bari. Aceste membrane au diametrul porilor de 0.22 sau 0.2 m, n funcie de productor. Totui, unele studii au demonstrate c acest tip de filtre nu rein toate microorganismele n orice condiii. Unele tipuri de bacterii au ptruns prin aceste filtre ntr-un mod mai eficace dect B. diminuta. Aceste studii recomand folosirea filtrelor cu pori de 0,1 m, ns n practica industrial nc se folosesc cele cu pori de 0.22 m. 4

Filtrele de tip membran cu diametrul porilor de 0.45 m sunt capabile s rein doar microorganismele mai mari de tip Serratia marcescens ATCC 14756, presiunea de testare variind de la 0.33 pn la 3.4 bari. Filtrele cu pori de 0.1 m sunt testate folosind tulpini de Mycoplasma la o presiune de o.7 bari. Ali parametri importani n validarea procesului de filtrare sunt, dup cum urmeaz: - compatibilitatea produsului - sorbia - conservanii i ali aditivi - coninutul de endotoxin al efluentului Determinarea gradului de contaminare al soluiei ce urmeaz a fi filtrat este un parametru foarte important pentru determinarea eficacitii procesului de filtrare. Cunoaterea numrului de microorganisme din mostr, nainte i dup filtrare va putea stabilili eficiena procesului. De asemenea, presiunea, debitul i caracteristicile filtrului sunt foarte importante. Filtrele de tip membran sunt bazate pe materiale cum ar fi: Acetat de celuloz, Esteri de celuloz, Nitrat de celuloz, Fluorocarbonat, Polimeri acrilici, Policarbonat, Poliester, Policlorur de vinil, Vinil, Nailon, Metal. Integritatea unui filtru trebuie testat nainte i dup ncheierea procesului, pentru a demonstra integritatea sistemului. Cteva dintre aceste teste sunt urmtoarele: - punctul iniial de fierbere - testul de difuzie - testul de presiune Pentru ca procesul s fie validat ar trebui s existe o corelaie ntre aceste teste i retenia microorganismelor. Validarea procesului de sterilizare Scopul unui proces de sterilizare este distrugerea complet a tuturor microorganismelor prezente ntr-o proba de testare. Pentru ca procesul s fie reproductibil, consecvent i fiabil, acesta trebuie validat. Validarea unui proces de sterilizare const n a demonstra absena dezvoltrii bacteriilor i cunoaterea parametrilor pentru a ajunge la distrugerea masei microbiene. Pentru a determina eficacitatea unui proces de sterilizare se folosesc bioindicatori. Acetia furnizeaz dovezi directe c s-au atins condiiile letale necesare sterilizrii n timpul tratamentului. Ali indicatori ai procesului cum ar fi temperatura, concentraia gazului, umiditatea, presiunea, etc. pot fi nregistrai de ctre instrumente i sunt parametri critici n timpul studiilor de validare. Bioindicatorii sunt folosii n timpul procesului de validare pentru a determina cea mai mic probabilitate de a detecta o unitate nesteril ntr-un grup steril. Bioindicatorii sunt preparate standard de spori bacterieni specifice diferitelor tipuri de sterilizri. Procesarea aseptic Cnd sterilizarea nu este posibil datorit instabilitii termice a produsului, filtrarea steril i procesarea aseptic rmn variantele pentru a produce un medicament steril. Spre exemplu, o mare varietate de produse biologice (cum ar fi interferonul) i vaccinuri sunt obinute pe cale aseptic.