Morter o Embud o Matraz

Papel de filtro Alcoh ol Hojas de espina ca

Extraer los pigmentos fotosintticos y separarlos mediante una tcnica sencilla de cromatografa en papel.

1. Lavar las hojas de espinacas, retirar los nervios y ponerlas en un mortero, junto con el alcohol y una pequea cantidad de carbonato clcico (que evita la degradacin de los pigmentos fotosintticos). Triturar la mezcla hasta que las hojas se decoloren y el disolvente adquiera un color verde intenso. Fotografa 1. 2. Filtrar con un embudo y papel de filtro. Fotografa 2

Fotografa 1

Fotografa 2

Otros alumnos y alumnas machacando espinacas... 4. Colocar el filtrado en una placa Petri, y sobre ella pon un rectngulo de unos 15 centmetros de ancho por 10 centmetros de alto doblado en V para que se mantenga en pie sobre la placa de Petri. Fotografa 3 Dejar as el montaje y esperar unas horas. Los pigmentos se irn separando segn su adsorcin.Fotografa 4

fotografa 3 Al observar el papel donde hemos hecho la cromatografa, vemos cuatro bandas o zonas (figura A), que corresponden a los distintos pigmentos fotosintticos presentes en las hojas de espinaca. Segn su grado de solubilidad con el alcohol se reconocen estas bandas y en este orden: 1. clorofila b 2. clorofila a 3. xantofila 4. carotenos

Fotografa 4

Figura A Este es el aspecto final de la cromatografa obtenida con las hojas de espinacas

NOTA: Esta experiencia puede realizarse con otras hojas verdes si no se dispone de espinacas. Es interesante realizar tambin esta experiencia con otras sustancias como tinta china.

Quiored v 1.0 http://www.ugr.es/~quiored/doc/p23.pdf 1

Separacin de los pigmentos de la hoja de espinaca mediante cromatografa en capa fina

Introduccin La cromatografa en capa fina (CCF) es una forma de cromatografa de adsorcin slido-lquido que constituye una tcnica importante en Qumica Orgnica para el anlisis rpido de muestras que en algunos casos puede estar en el rango de los 10-9 g. Frecuentemente se usa para el seguimiento de la evolucin del progreso de una reaccin, o para el control y seguimiento de las separaciones que se producen mediante una cromatografa en columna preparativa. Para realizar el anlisis de una muestra por CCF se utiliza un adsorbente slido como gel de slice (SiO2. H2O) o almina (Al2O3), unido a una placa rectangular de de vidrio o plstico. El adsorbente sirve de fase estacionaria. La muestra se aplica en disolucin con un capilar de vidrio en un extremo de la placa, pero no sobre el mismo borde. A continuacin se introduce la placa en un tanque cerrado conteniendo un disolvente o mezcla de disolventes (fase mvil), de manera que la placa quede apoyada sobre el fondo y el punto con la muestra, por encima del nivel del lquido. El tanque contiene una atmsfera saturada en el disolvente para lo cual se introduce un trozo de papel de filtro que debe. La fase mvil asciende por capilaridad, de forma que se produce el mayor o menor avance de los componentes de de la mezcla, segn su polaridad. Procedimiento a. Preparacin de la muestra En un mortero, machacar una hoja de espinaca con una mezcla de 4 ml de hexano y 2 ml de etanol. Con una pipeta Pasteur transferir el extracto a un tubo de ensayo y agitar con mucha suavidad con una cantidad igual de agua, evitando la formacin de

Los colores de las plantas

HAY MS DE LO QUE PARECE DNDE ESTN LOS COLORES?
NIVEL :

2 ciclo ESO y Bachillerato

PROFESORES :

CENTRO :

Marta Lpez Garca M. Jos Burgos Pastor Natividad De Marco Redondo Isabel Barrio Rodrguez
JUSTIFICACIN Y OBJETIVOS:

I.E.S. Luis Garca Berlanga

Los objetivos de estas dos experiencias son: comprobar, mediante la tcnica de la cromatografa, la existencia de diferentes pigmentos presentes en las plantas, aunque no siempre se vean; y observar, con ayuda del microscopio ptico, las distintas estructuras celulares donde las plantas almacenan los pigmentos.

HAY MS DE LO QUE PARECE Material necesario Dos soportes con pinza, cuatro vasos de precipitados, dos matraces Erlenmeyer, dos tubos de ensayo con tapn, una gradilla, pipetas con aspirador, cristalizador, infiernillo, filtros, dos tiras de papel Wahtman n. 1, acetona, ter, etanol, benceno, hojas de lombarda y hojas de espinaca.

Aplicacin didctica Los colores de las plantas se deben a la combinacin de los diferentes pigmentos que contienen. Para aislar y extraer dichos pigmentos se pueden utilizar diferentes procedimientos. Uno de ellos es la cromatografa, que consiste en la separacin en bandas de los diferentes pigmentos en funcin de su solubilidad. En esta experiencia se han utilizado dos tcnicas:

Cromatografa en papel: Se basa en la diferencia de velocidad al desplazarse los distintos pigmentos sobre una banda de papel poroso. Los pigmentos deben estar previamente disueltos en un disolvente. Los ms solubles se desplazarn ms deprisa y los menos solubles ms despacio, apareciendo sobre el papel diferentes bandas de color. Para comprobarlo se ha utilizado un extracto de hoja de espinaca disuelto en etanol y otro de hoja de lombarda disuelto en acetona. De abajo arriba, con el extracto de espinaca se observan las siguientes bandas: clorofila a (verde claro), clorofila b (verde oscuro), xantofilas (amarilla) y carotenos (anaranjada). Con el de lombarda: clorofilas (verde), xantofilas (amarilla) y antocianinas (morada).

Cromatografa en tubo de ensayo: Se basa en la diferencia de solubilidad de los pigmentos. Con una mezcla de disolventes de distinta densidad, podemos conseguir que los diferentes pigmentos se separen en bandas, ya que cada tipo de pigmento es soluble en un tipo de disolvente. Utilizando el mismo extracto que en el caso anterior se aade ter y agua destilada al extracto de espinaca, y benceno y agua destilada al de lombarda. Con el extracto de la espinaca se obtienen tres bandas: xantofilas (abajo), clorofila b y clorofila a (arriba). En el caso de la lombarda se obtienen: antocianinas (abajo), xantofilas y clorofilas (arriba).

DNDE ESTN LOS COLORES? Material necesario Microscopio ptico, portaobjetos, cubreobjetos, pinzas, bistur, tijeras, Elodea canadiense, ptalos de rosa, patata y tomate.

Aplicacin didctica Los pigmentos que dan color a las plantas se encuentran en el interior de unos orgnulos celulares llamados cromatforos y vacuolas. Los cromatforos son orgnulos de forma ovoide rodeados por una doble membrana que almacenan pigmentos liposolubles. Pueden ser de distintos tipos: Cloroplastos: Presentes en las hojas verdes y responsables de la fotosntesis. Contienen varios tipos de pigmentos: clorofilas, de color verde; carotenos, de color rojo-anaranjado, y xantofilas, de color amarillo. Cromatforos no fotosintticos: Contienen carotenos y xantofilas, responsables de los colores amarillo, naranja y rojo de muchas flores y frutos. Leucoplastos: Son incoloros, aunque pueden almacenar sustancias, como el almidn, que les dan una coloracin blanquecina. Aparecen en hojas variegadas y en rganos de reserva como

races o rizomas, adems de en plantas parsitas.

Las vacuolas son orgnulos rodeados por una membrana simple que ocupan la prctica totalidad de la clula. Son abundantes en los ptalos de las flores y contienen pigmentos hidrosolubles de dos tipos: antocianinas, que dan una coloracin azul, violeta o rojo purpreo, y antoxantinas, que originan colores amarillo plido. Con esta actividad se pueden observar los distintos tipos de orgnulos celulares al microscopio ptico utilizando muestras vegetales diferentes: Observacin de cloroplastos: Tomando hojas de Elodea, se pone sobre un porta la parte ms fina de la hoja y, tras colocarle un cubre, se observa al microscopio. Observacin de cromatforos: Raspando pulpa de tomate, se pone un poco sobre el porta y se procede como en el caso anterior. Observacin de leucoplastos: Se raspa un poco de patata con el bistur y se procede de la misma manera. Observacin de vacuolas: Se corta un trocito de ptalo de rosa y, raspando con un bistur, se separa una capita fina que se pone sobre el porta para su observacin.

Pigmentos fotosintticos
Por el Ing. Agr. Carlos Gonzlez. Entre todos los caracteres ms externos de los vegetales, el ms notable y caracterstico es probablemente el color. El color no es nicamente un carcter llamativo de la vegetacin, sino que, adems, algunos de los pigmentos que lo condicionan estn estrechamente ligados a las actividades fisiolgicas del propio vegetal. Por consiguiente, el estudio de cmo las plantas viven y se desarrollan requieren el previo conocimiento de los pigmentos vegetales. Qu son los pigmentos? Si es posible encontrar en el reino vegetal todos los matices y combinaciones de colores del espectro, existe un predominio general de los colores primarios: verde, amarillo, rojo, azul. Estos colores son conferidos a los vegetales por determinados compuestos qumicos definidos, llamados pigmentos. El color particular que presenta un determinado rgano vegetal depende generalmente del predominio de uno u otro o la combinacin de ellos. Se debe tener claro que cuando un vegetal presenta un color blanco, es debido a la falta de tales pigmentos. La luz solar que incide sobre ellas no es absorbida selectivamente como ocurre en las partes coloreadas, sino que es transmitida o reflejada prcticamente sin sufrir modificacin. Las Clorofilas. El color verde tan uniformemente presente en los vegetales es debido a la presencia de dos pigmentos estrechamente emparentados llamados clorofila a y clorofila b . Se encuentran prcticamente en todas las plantas con semilla, helechos, musgos y algas. Pueden formarse en las races, tallos, hojas y frutos a condicin de que estos rganos estn situados por encima del suelo y queden expuestos a la luz. Tambin aunque aparentemente falten en algunas hojas de color rojo o amarillo, cuando se extraen las otras sustancias colorantes de estas, puede comprobarse incluso all la presencia de las clorofilas, que estaban enmascaradas por los dems pigmentos. Dnde estn los pigmentos? Estos pigmentos se encuentran en el interior de la clulas vegetales especficamente en una organela llamada cloroplasto . Los cloroplastos son simplemente plstidos que contienen pigmentos cloroflicos. Los compuestos cloroflicos estn ligados qumicamente con las estructuras internas del cloroplasto (membrana tilacoides) y se hallan retenidos en estado coloidal. Asociados con las clorofilas, existen tambin en los cloroplastos dos clases de pigmentos amarillos y amarillo-anaranjados que son los xantofilas y carotenides.

Cmo se dividen los solventes? Los pigmentos cloroflicos son insolubles en el solvente universal llamado agua. Pero s son solubles (afinidad qumica) en solventes orgnicos como por ejemplo alcohol etlico y acetona. A los solventes que extraen simultneamente todos los pigmentos de la hoja se los suele llamar extractantes. Existen otros solventes que presentan afinidad por algunos pigmentos y se los llama separadores, como por ejemplo el tetracloruro de carbono y el ter de petrleo. En el mtodo de extraccin simple, como se desarrolla ms adelante se utilizar como extractante el alcohol etlico y como separador el tetracloruro de carbono. Estos dos solventes orgnicos responden en forma diferente a los pigmentos cloroflicos, como as tambin a sus diferencias fsicas que hacen que sean dos lquidos no misibles y con diferente peso especfico. En el segundo mtodo por cromatografa se utilizar como extractante la acetona y como separador el ter de petrleo. Este mtodo se trata de una separacin ms fina de los pigmentos, y se basa en la absorcin y solubilidad diferenciales de varias sustancias entre las que se incluyen los pigmentos. Un soporte inerte como papel de filtro para la corrida y unos granos de carbonato de calcio para deshidratar la muestra, son los componentes necesarios para desarrollar la tcnica. Qu es la energa radiante o la luz? Para el adecuado conocimiento de la fotosntesis, de la sntesis y propiedades de la clorofila y de muchos otros procesos vegetales, es esencial un conocimiento elemental de las propiedades fsicas de la luz y otros tipos de energa radiante. sta se propaga a travs del espacio en forma de ondas. La luz del sol o la luz blanca procedente de cualquier fuente artificial aparece como homognea al ojo humano, pero cuando se la pasa a travs de un prisma, se descompone en un espectro de colores. El orden que aparecen los colores ms importantes en el espectro de la luz blanca son: el rojo, anaranjado, amarillo, amarillo-verdoso, vede, verde-azulado, azul, ndigo, violeta. Cada uno de estos colores responde a un rango diferente de longitud de onda de luz. La longitud de onda es la diferencia entre dos crestas de ondas sucesivas. Las longitudes de onda que producen la luz se hallan aproximadamente entre los 3900 en el violeta hasta 7600 en la zona ms alejada al rojo. Por debajo de la regin de la luz visible, en la escala de energa radiante, sigue la zona del ultravioleta (UV). Aquellos que estn por encima de la luz visible responden al infrarrojo (IR.). En la actualidad, todos estos fenmenos de la luz pueden ser explicados si se admite que la luz tiene naturaleza particulada (formada por partculas). Conforme a este concepto, un rayo de luz puede ser imaginado como una corriente de pequeas partculas, cada una de las cuales se llama fotn. Cuando tales fotones chocan contra una sustancia adecuada, su energa puede ser transferida a los electrones sobre los que golpean, realizando as reacciones fotosintticas. La manifestacin energtica de un fotn se llama cuanto. El valor energtico del cuanto vara inversamente con la longitud de onda. Qu es un espectroscopio?

Un espectroscopio es un aparato que nos puede decir a partir de un extracto alcohlico de hojas verdes, qu longitudes de onda o colores son capaces de ser absorbidos por los pigmentos cloroflicos.

Cmo funciona un espectroscopio? Se trata de colocar una lmpara puntiforme de gran intensidad encendida frente a un espectroscopio, el cual en su parte anterior presenta un orificio por donde pasa el haz de luz. Seguidamente hay un prisma que descompone la luz y la proyecta en una pantalla, en la cual se puede observar con una lente ocular, los diversos colores mencionados anteriormente. El paso a seguir es colocar entre la lmpara y el aparato un tubo de ensayo conteniendo el extracto alcohlico de las hojas verdes. Luego se pone el ojo sobre el ocular y se observa cules fueron los colores o longitudes de onda absorbidas por los pigmentos cloroflicos (espectro de la clorofila ) y cuales son dejadas pasar sin ningn problema. Por ltimo se puede tambin ver sobre el extracto alcohlico la fluorescencia, es decir, aparece el color verde por transparencia y el color rojo parduzco por reflexin.

Mtodos de separacin de pigmentos: a) Separacin de pigmentos vegetales por separacin simple.

b) Separacin de pigmentos vegetales por cromatografa sobre papel.

a. a. Separacin de pigmentos vegetales por separacin simple. Elementos: Mortero - Embudo cribado -Kitasato - Papel de filtro - Tubos de ensayo - Alcohol Tetracloruro de carbono - Hojas de espinaca o Acelga - Bomba de vaco. Objetivo: Extraer los pigmentos fotosintticos y separarlos mediante una tcnica sencilla de fases. Tcnica: 1. Lavar las hojas de espinacas o acelga, retirar los nervios y ponerlas en un mortero, junto con el solvente extractante (acetona). Triturar la mezcla hasta que las hojas se decoloren y el disolvente adquiera un color verde intenso. Fotografa 1. 2. 2. Filtrar con un embudo, papel de filtro y bomba de vaco. Fotografa 2

Fotografa 2 3. 3. Pasar el filtrado en dos tubos de ensayo (a y b) en partes iguales. El tubo a se lo dejar para trabajar con el espectroscopio en un lugar sombro. 4. 4. Al tubo b, se le agregar tetracloruro de carbono y luego se lo agitar por unos segundos. Se lo dejar reposar en una gradilla por 10 minutos.(Fotografa 7) 5. 5. Los pigmentos se irn separando segn su adsorcin o afinidad con los solventes.(Fotografa 8)

Fotografa 1

Fotografa 7

Fotografa 8 Al observar el tubo de ensayo donde se encuentran los dos solventes, vemos dos zonas (figura B), que corresponden a los distintos pigmentos fotosintticos presentes en las hojas de espinaca o acelga. Segn su grado de solubilidad con el alcohol y el tetracloruro de carbono se reconocen estas zonas heterogneas y no miscibles en este orden: 1. clorofila a + b + Tetracloruro de C. 2. xantofilas y carotenoides + Alcohol

Figura B

b) Separacin de pigmentos vegetales por cromatografa sobre papel. Elementos: Mortero- Embudo cribado -Kitasato - Papel de filtro - Tubos de ensayo Acetona - ter de Petrleo - Hojas de espinaca o Acelga - Cloruro de Calcio- Bomba de vaco - Capilar o Pipeta Pasteur - Vaso de precipitado. Objetivo: Extraer los pigmentos fotosintticos y separarlos mediante una tcnica compleja de cromatografa en papel.

Tcnica: 1. Lavar las hojas de espinacas o acelga, retirar los nervios y ponerlas en un mortero, junto con el solvente extractante (acetona). Triturar la mezcla hasta que las hojas se decoloren y el disolvente adquiera un color verde intenso. Fotografa 1. 2. Filtrar con un embudo, papel de filtro y bomba de vaco. Fotografa 2 3. Pasar el filtrado en un tubo de ensayo, colocar 3 a 5 perlas de Cloruro de calcio. Dejar reposar de 5 a 10 min. 4. Tomar con un capilar o pipeta el sobrenadante del tubo anterior. Sobre un rectngulo de papel de filtro de unos 15 centmetros de ancho por 10 centmetros de alto doblado en V (para que se mantenga en pie) se traza con lpiz, una lnea de siembra a 3 cm de la base. Sobre la lnea se realizan de 5 a 8 pasadas con el capilar cargado de pigmento dejando entre cada pasada que se evapore acetona. 5. Se coloca el papel ya sembrado en un vaso de precipitado que contendr el solvente separador (ter de petrleo), dejndolo unos 5 a 10 min. Fotografa3 6. Los pigmentos se irn separando segn su adsorcin o afinidad con el solvente. Fotografa 4

Fotografa 3 Fotografa 4 Al observar el papel donde hemos hecho la cromatografa, vemos cuatro bandas o zonas (figura A), que corresponden a los distintos pigmentos fotosintticos presentes en las hojas de espinaca. Segn su grado de solubilidad con el ter de petrleo se reconocen estas bandas y en este orden: clorofila b clorofila a xantofila carotenos

Figura A Este es el aspecto final de la cromatografa obtenida con las hojas de espinacas o acelga

Agosto 2002 Volver