Bionanoparticule lipidice

igu Adrian Bogdan

Universitatea Babe-Bolyai Facultatea de Biologie si Geologie Specializare Biochimie Anul 2 4/3/2013

1. Introducere :
BioNanoparticulele prezinta o platforma foarte atractiva pentru diversele aplicatii biologice, biomedicale si biotehnologice . Bionanoparticulele lipidice sunt biomolecule de dimensiuni mici , de ordinul nanometrilor (nm), care imita structura naturala a diverselor membrane lipidice. De fapt sunt obtinute din aceleasi componente ca si membranele biologice ,doar ca prin anumite procese tehnologice , dupa cum le voi prezenta . Dintre aceste bionanoparticule Lipidice voi aminti Lipozomii si SNALP.

2. Lipozomii :
Lipozomii sunt vezicule lipidice artificiale sau naturale(obtinute prin sonificarea membranelor biologice de interes) , formate dintr-un bistrat lipidic . Lipozomii au fost descoperiti de catre Dr.Alec Bangham (Hematolog) in anul 1961 , la Instotutul din Cambridge , in timpul unui test pe fosfolipide la microscopul electronic , acesta a observat ca in urma unor tratamente pe fosfolipide acestea tind sa formeze structuri de bistratificate sferic-inchise , le-a numit Liposomi ( din greaca: Lipo= gras , soma = corp ).

2.1 Obtinerea liposomilor si intrebuintarea lor :

Unda dintre cele mai bune metode de obtinere a liposomilor este ultrasonarea , astfel in solutiile apoase in care se gasesc lipidele de interes (ex. Membranare ) , prin ultrasonare acestea vor forma vezicule bistratificate . Prin aceasta metoda , liposomii pot fi modificati , in sensul ca prin adaugarea in solutia apoasa a unor medicamente, frag.ADN , ARN , proteine ..etc , acestia(nr.Liposomii) vor incapsula si aceste particule putand astfel sa le utilizam ca vectori de transfer , acestia prezentand aceleasi proprietati ca si fosfolipidele din membrane , deci vor primi un raspuns imun slab sau chiar nul. Formarea liposomilor si nanoliposomilor nu este un fenomen spontan , la inceput fosfolipidele formeaza fragmente bistratificate separate de moleculele de apa , iar atunci cand prin ultrasonare se da destula energie , aceste mici fragmente bistratificate se undesc , iar datorita caracterului lor hidrofob in interiorul bistratului si hidrofil la exterior , vor forma vezicule bistratificate , astfel daca in solutie sunt prezente medicamente , nutrienti , ADN , ARN ..etc acestia pot fi inglobati in interiorul veziculei si transportati. Mai exista o posibilitate de incorporare a unor particule, daca acestea sunt hidrofobe , se vor ingloba in bistratul lipidic , intrucat piciorusele fosfolipidelor se pot misca , le vor face loc si acestor particule hidrofobe . Pe langa faptul ca liposomii sunt folositi in scopuri terapeutice, sunt considerati ca fiind si membrane model , astfel s-au efectuat de-a lungul timpului teste si experimente pe liposomi pentru a vedea cum reactioneaza membranele biologice in anumite conditii de pH , temperatura , concentratii , sub actiunea UV si a altor agenti chimico-fizici si biologici .

2.2 Tipuri de Liposomi : 2.2.1 SNALPs (Stabile nucleic acid lipidic particles) :
SNALPs sunt particule lipidice de aprox.120 nm , bistratificate la fel ca si Liposomii , folosite pentru a furniza siRNA la mamifere in scopuri terapeutice . siRNA este Small interfering RNA ( un ARN de interferenta mic) , este o clasa de ARN dublu stratificat de 20-25 pb , joaca mai multe roluri dar cel mai notabil este acela de a interfera cu exprimarea unor gene , gene ce au secventa complementara cu a ARN . introducerea de prea mult siRNA poate duce la declansarea unor raspunsuri imune , de aceea se recomanda si s-a si convenit ca se introduc microRNA , pentru ca acest tip se molecula (nr.microRNA) se produce in mod spontan si in citoplasma celulelor. Celulele mamiferelor confunda siRNA cu un RNA viral si din aceasta cauza se declanseaza raspunsul imun specific . Aplicabilitatea SNALPs este data de capacitatea siRNA de a demola orice gena de interes . Ca de exemplu , unele boli pot fi stopate inactivand unele gene , inactivarea sau demolarea unor gene patogene cu ajutorul siRNA inglobat in SNALPs poate avea efect terapeutic benefic , insa trebuie cu mare grija studiat efectul anihilarii acelei gene inainte de a aplica acest tratament.

Am reusit sa culeg cateva exeplme de aplicatii terapeutice ale SNALPs : Combaterea Zaire Ebola Virus (ZEBOV) , prin administrarea unui compus SNALP care continea in interor ARNsi specific pentru a combare virusul EBOLA , virus care face ravagii in Africa si 9 din 10 oameni mor din cauza infectarii cu acest virus . Tratamentul a fost aplicat la cobaii care au fost expusi la o doza potential letala de ZEBOV , acestia insa au dat rezultate pozitive , iar astfel in mai 2010 a fost confirmat faptul ca tratamentul cu SNALP siRNA specific pentru ZEBOV da rezultatele dorite . Combaterea Cancerului Hepatic ( Hepatocellular carcinoma ) HCC , tot ca si in cazul ce mai sus , s-au administrat tratamente cu SNALPs care contin CSN5siRNA care actioneaza asupra complexului de semnalizare CSN5 din COP9 , inhiband dezvoltarea cancerului hepatic . CSN este un important reglator al Ubiqitinei . Tratarea tumorilor , administrarea de SNALP cu siRNA care actioneaza asupa a doua proteine deosebit de importante in ciclul celular al celulelor tumorale PLK1(polo-like kinaza 1) si KSP (kinesin spindle protein) . Experimentele au avut loc in 2007 si au avut mare succes .

2.2.2 Liposomi PEG-ilati :

Evita preluarea lor de catre Reticulul endoplasmic si au fost conceputi astfel incat sa aiba un timp de sedere in organism mai mare decat cel normal ( la om aprox.48h) . S-a inserat pe suprafata lor PEG-uri ( polietilenglicoli ) acestia fiind hidrofili . PEG-urile mascheaza oarecum liposomii, acestia sunt foarte greu recunoscuti de catre sistemul imunitar . Au o mai mare aplicabilitate decat liposomii obisnuiti , ajung in locurile unde permeabilitatea este potrivnica liposomilor obisnuiti, reusesc sa isi atinga tinta chiar daca aceasta este o tumora , o zona infectata sau chiar inflamata , in aceste regiuni peretele vascular este mai rigid .

2.2.3 Imunoliposomii :
Sunt diferiti de ceilalti liposomi prin faptul ca au pe suprafata bistratului anticorpi sau fragmente de anticorpi specifici pentru tinta lor, astfel maresc viteza si precizica cu care ajung la tinta. Accesul lor in alte organe in afara de ficat si splina este destul de dificl, dar sunt foarte buni vectori in terapiile de imunizare directa , adica injectarea lor direct in organul/organele tinta .

3. Componente ale bistratului lipidic:

Pe langa fofolipide , colesterol integrat intre piciorusele fosfolipidelor, se mai adauga la fabricarea liposomilor si alte substante cu rol de protejare sau dirijare .

 Se adauga antioxidanti , pentru a creste rezistivitatea lor , dar se aleg cu atentie pentru a nu intra in interiorul liposomilor. Agenti de chelare, cum este EDTA , reduc oxidarea catalitica , oxidare ce este indusa de ionii metalici. Se mai adauga agenti antifungici, antimicrobieni , pentru a nu fi infectati liposomii pe parcursul procesarii si livrarii .

4. Concluzii si observatii :
Dat fiind faptul ca liposomii sunt particule extrem de mici , sunt incluse in cadrul nanoparticulelor , avand scopuri terapeutice ,prin modul in care sunt folositi ca si vectori de transfer al unor medicamente , substante esentiale , ADN , ARN si a altor molecule de interes in interiorul organsimelor , dar sunt de asemenea un model in studiul membranelor biologice alaturi de membranele lipidice negre . Dupa cum am evidentiat in paginile de mai sus , cu ajutorul lor s-au putut estompa numeroase boli ( am enumerat doar cateva in acest referat) , fapt ce ma face sa cred ca merita studiati cu foarte mare atentie , intrucat au o aplicabilitate larga , cred cu tarie ca vor fi facute multe descoperiri revolutionare in viitorul apropiat, care vor avea la baza liposomii sau particule cu structura asemanatoare .

Bibliografie : 1. http://www.uniProt.org : Q92905 (CSN5_HUMAN) Reviewed, UniProtKB/Swiss-Prot , General annotation , function of COP9 in human liver . 2. http://en.wikipedia.org/wiki/Stable_nucleic_acid_lipid_particle 3. Xiaoyu Chen, Wenhua Huang, Blenda Chi Wong, Linlin Yin, Yuen Fan Wong, Min Xu, and Zhijun Yang-Liposomes prolong the therapeutic effect of anti-asthmatic medication via pulmonary delivery (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3299201/ ) 4. Y-H Lee, AD Judge, D Seo, M Kitade, LE Gmez-Quiroz, T Ishikawa,JB Andersen, B-K Kim, JU Marquardt, C Raggi, I Avital, EA Conner, I MacLachlan, VM Factor and SS Thorgeirsson Molecular targeting of CSN5 in human hepatocellular carcinoma: a mechanism of therapeutic response (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3140552/ ) 5. Lupulisa Dumitru , Liposomii vectori medicamentosi , Congresul Farmacistilor din Romania (ghid Novartis Consumer Health )