Sunteți pe pagina 1din 18

Diagnostic in infectia cu virusuri gripale

Orientare clinica
febra (3-5 zile), mialgie, cefalee, astenie (>2 saptamani), tuse neproductiva, faringita, rinoree.

Gripa nu se diagnosticheaza clinic!!!


Simptomatologie asemanatoare cu infectii determinate de:

Mycoplasma pneumoniae, adenovirusuri, virusul respirator sincitial, rhinovirusuri, virusuri paragripale, si Legionella spp.

Forma clinic

Etiologie viral Etiologie viral comun rar Rhino, v. gripale, coronavirusuri Enterovirusuri (Cox) Adeno-, v. rujeolic V. paragripale V. gripei aviare, Micoplasme

Guturai, Rhinofaringite

LaringoVRS, V. traheobronsite paragripale Bronsite Pneumonii V. gripale V. gripale, SARS

DIAGNOSTICUL DE GRIPA

ETIOLOGIE POSIBILA

Produs Patologic

IZOLARE

Dg. DIRECT =detectie directa DA PCR si IF

Dg. INDIRECT =serologie DA studii epidemiolog ice

V GRIPALE
(A, B, C) SNF (ENF) ANF ATB

OGE Culturi celulare

Produse patologice :
a)Spalatura nazo faringiana (SNF) = Exsudat nazo faringian
Recoltare. N- tampoane sterile cu coada introduse in cornetul nazal inferior, secretii de la nivelul peretelui posterior al nazofarinxului. F - tampon prin cavitatea bucala pentru secretii de pe peretele lateral/posterior al orofaringelui si din orice arie adiacenta cu inflamatie, exudat sau ulceratie. se evita atingerea tamponului de limba, obraji sau buze pentru evitarea cotaminarii. Stocare si transport. optim imediat dupa recoltare (cand nu este posibil: -70 C, cu transport pe zapada carbonica) Prelucrare. tamponul sau secretiile recoltate sunt dispuse intr-un tub steril cu circa 15 ml mediu minim o ora, timp necesar elutiei virusului. centrifugare la 2500 - 15 minute, la 4 C. Supernatantul este indepartat si sedimentul este resuspendat in 3-4 ml TFS sau mediu. In final depozitul de celule reluat in TFS serveste pentru izolare virala sau pentru efectuarea de frotiuri ce vor fi testate in imunofluorescenta.

Produse patologice :
a) exsudat nazo faringian b) aspiratul nazofaringian se obtine folosind un speculum nazal prin administrarea a 3 ml ser fiziologic in nari cu o seringa atasata la un tub de plastic.

c) lavaj traheobronsic se obtine prin bronhoscopie in conditii speciale de catre personal calificat.

Directii de diagnostic
IZOLARE OGE/ c.c. DETECTIE RAPIDA RIF / Rt PCR DIAGNOSTIC SEROLOGIC

Izolare virala
diagnostic de electie

1.-culturi primare de rinichi de maimuta rhesus. -linia continua epiteliala de rinichi de caine (MDCK). 2. pe OGE- 9-11 zile, inoculat
intraamniotic intraalantoidian.

V. GRIPAL ESTE NONCITOPATOGEN!!


HA - hemaglutinina NA - neuraminidaza
Nucleocapsida helicoidala ARNss anvelopa transcriptaza

Tipuri v gripal: A, B, C Subtipuri: A(H1N1) A(H3,N2)

Matrice

Dupa HA si NA 16 tipuri de HA 9 tipuri de NA

Demonstrarea izolarii v.gripale pe culturi de celule - HEMADSORBTIE

48 ore dupa inocularea v. gripal se incearca detectia virusului prin hemadsorbtie, obisnuit cu eritrocite de cobai Hematiile adsorbite specific rozeteaza la periferia celulelor infectate.

DEMONSTRAREA PREZENTEI VIRUSULUI IN OGE REACTIA DE HEMAGLUTINARE -RHA

UHA

Etape: Ag. viral - dilutii binare suspensie de hematii

Se incubeaza la temperatura camerei - 30 minute


Martorul reactiei contine suspensie hematii Rol RHA: Demonstrarea prezentei virusului hemaglutinant Titrarea antigenului hemaglutinant

IDENTIFICAREA V. GRIPALE R. HEMAGLUTINO-INHIBARE RHAI


Etape:

Ag. viral hemaglutinant Dilutii binare din serurile imune de referinta


60 min la 37C. Sistem indicator - suspensia de hematii. Se incubeaza 60 min la temperatura camerei
cunoscuti)-

(Ac antivirali

Reactia de identificare a virusurilor gripale

UHAI

DIAGNOSTIC SEROLOGIC RHAI = Tulpini de referinta + ser pacient

diagnostic retrospectiv, recoltarea de probe de ser pereche cresteri semnificative (de peste 4 ori) a titrului Ac specifici sau determinarea rezultatului vaccinarii

OMS - Global Influenza Surveillance Network


2012-2013 Emisfera de Nord A / California/7/2009 (H1N1) -like virus; A / Victoria/361/2011 (H3N2)-like virus; B / Wisconsin/1/2010-like virus.

Reactia de Imunofluorescenta directa (RIF)


test rapid, reproductibil, ieftin detecteaza ANTIGENE VIRALE cu anticorpi marcati cu fluorocromi
Anticorpi marcati cu

fluoresceina sau rhodamina

ID

PP

Reactia de Imunofluorescenta (RIF)


Aplicatii DIAGNOSTIC IN
Infectiile herpetice Infectiile respiratorii (Gripa) Rabia

Teste moleculare

NAT (nucleic acid tests) RT PCR


Swine flu real-time PCR kit Quick Diagnosis of Flu Strains Possible with New Microchip Test - FluChip, Inexpensive Test Detects influenza Infections Quickly and Accurately MChip FDA Approves New Laboratory Test To Detect Human Infections With Avian Influenza A/H5 Viruses (