Sunteți pe pagina 1din 7

EVALUAREA TOXICITII SUBSTANELOR

Studiile/investigaiile toxicologice urmresc mai multe scopuri: stabilirea unei curbe doz-efect care s exprime relaia dintre dozele administrate i rspunsul = efectul toxic obinut. Parametrul cel mai important al curbei este panta: cu ct aceasta este mai abrupt cu att efectul advers este mai puternic. Aceasta nseamn c doar o cretere mic a dozei produce o cretere mare a intensitii efectelor adverse care pot pune n pericol viaa (exemplul medicamentelor Fentoin, Digitalin, Warfarin). n cazul altor medicamente, ns, chiar dublarea dozei nu produce o cretere semnificativ a efectelor adverse (curba doz-rspuns este mai puin abrupt); asigurarea securitii noilor compui chimici utilizai ca medicamente, aditivi alimentari sau cosmetici, pesticide etc. nainte ca acestea s fie nregistrate i comercializate; stabilirea modului de aciune sau a mecanismelor de producere a efectelor toxice; efectuarea de studii epidemiologice pentru a explica anumite observaii fcute pe populaie (spre exemplu relaia dintre fumat i cancerul pulmonar) sau pe grupuri profesionale. investigarea sau validarea de noi metode de testare/investigare, n special metode in vitro Aprecierea toxicitii Doza reprezint factorul cel mai important care determin toxicitatea unei substane. Acest parametru sau derivate ale sale se folosesc n scopul aprecierii toxicitii substanelor i al clasificrii toxicologice a acestora. Stabilirea relaiilor cantitative doz-efect furnizeaz informaii asupra securitii unui medicament. Doza este termenul general ce se refer la cantitatea de substan care introdus n organism produce un efect determinat. Doza letal (DL) reprezint cantitatea minim de substan care omoar un animal adult, n timp ce doza minim letal (DML) este cantitatea de toxic ce omoar un singur animal din lotul de experien (administrare per os sau parenteral) Rspunsurile individuale diferite ale animalelor de experien la administrarea aceleeai cantiti de toxic (medicament) au impus introducerea unor valori ale DL ca : Doza letal zero (DL 0 ) - desemneaz cantitatea de substan care determin fenomene toxice grave n lotul de animale fr a produce ns moartea lor.

DL25, DL50 (doza letal medie), DL100 - reprezint cantitatea de substan care provoac moartea a, respectiv, 25, 50, 100% din numrul animalelor de experien. DL01 - reprezint cantitatea de substan care provoac moartea a 1% din animalele lotului de experien (aproximeaz doza maxim subletal). DL99 - reprezint cantitatea de substan care provoac moartea a 99% din animalele lotului (poate fi considerat doza minim care produce moartea ntregului lot de animale de experien). DL01 i DL99 - exprim reactivitatea individual potenial la medicamentul respectiv, n timp ce DL50 exprim reactivitatea medie, avnd o valoare statistic mare. Cel mai frecvent utilizat este DL50; acest criteriu prezint cel mai mare grad de precizie (ntruct valoarea sa se afl n domeniul n care efectul este proporional cu doza corelaie rezultat din curba doz-efect); mergnd spre cele dou extreme (DL01 i DL99) gradul de imprecizie crete. Doza letal medie este criteriul de comparaie pentru diverse categorii de toxice i criteriul de baz n intoxicaiile acute; permite extrapolarea mai precis a dozelor i stabilirea intervalelor pentru interpretarea toxicitii, se folosete la determinarea coeficientului terapeutic i al celui de securitate a unei substane. n practica medical se utilizeaz trei tipuri de doze: terapeutic (optim), toxic i letal i noiunile de doz minim i doz maxim. Prin doza minim se nelege cantitatea cea mai mic dintr-un medicament care genereaz efect terapeutic, iar prin doz maxim cea mai mare cantitate de medicament ce poate fi folosit fr a produce reacii adverse. Doza toxic reprezint cantitatea de substan capabil s produc n organismul viu efecte toxice. Doza terapeutic reprezint de obicei cca 1/5 1/3 din doza maxim, n timp ce doza maxim reprezint cel puin din doza toxic. Efectul terapeutic se exprim prin doza eficace 50, DE50; aceasta se refer la cantitatea de substan capabil s produc un efect terapeutic sau farmcodinamic la 50% din indivizii lotului experimental. Riscul terapeutic (de manifestare a efectelor toxice sau a reaciilor nedorite) se determin prin raportarea dozelor toxice i letale la dozele eficace (DE), respectiv prin stabilirea indicelui terapeutic exprimat ca raportul DL50/DE50. Pentru aprecierea securitii

unui medicament sunt importani att indicele terapeutic, ct i factorul de securitate cert reprezentat de raportul DL1/DE99. Relaii doz-efect Sunt importante pentru determinarea unor parametri cantitativi ai aciunii farmacodinamice, cum sunt: potena (exprimat prin DE50) i eficacitatea maxim (exprimat prin efect maxim) i pentru determinarea toxicitii acute (exprimate prin DL50). Relaiile doz efect pot fi: *gradate creterea progresiv a efectului se obine prin creterea progresiv a dozelor. Aceste relaii pot fi liniare i exponeniale. * cuantale de tip totul sau nimic caracterizeaz distribuia rspunsului la doze diferite ntr-o populaie, neurmrindu-se o corelare a dozei cu intensitatea efectelor; n acest caz efectul este nul pn la o anumit doz prag, peste care o cretere foarte mic (cuantal) produce efect maxim, doze mai mari dect dect doza prag negenernd efecte mai mari dect cel maxim (de exemplu efecte precum moartea sau apariia unor tumori). Acest tip de relaii se folosesc n stabilirea DL50. a) Relaii gradate liniare sunt caracteristice medicamentelor ce acioneaz asupra celulei ntregi (de exemplu narcoticele i alcoolul asupra neuronilor) i se reprezint printr-o dreapt. b) Relaiile gradate exponeniale sunt valabile pentru medicamentele care acioneaz pe receptori specifici (majoritatea medicamentelor). Se pot reprezenta n grafic numeric printr-o hiperbol, iar n grafic semilogaritmic printr-o curb sigmoidal (cu poriunea din mijloc dreapt). Potena medicamentului corespunde proieciei curbei pe abscis i se exprim prin DE50, iar eficacitatea este dat de proiecia curbei pe ordonat i se exprim prin efect maxim.

Fig.1: curba hiperbolic doz-efect (A) i sigmoidal log doz-efect(B)

c) Relaiile cuantale definesc cel mai bine efectele toxice i cele letale asupra unei colectiviti de animale, aceste efecte fiind caracterizate prin prezena sau absena lor (totul sau nimic). Reprezentarea grafic doz rspuns este o curb sigmoid care poate fi transformat ntr-o dreapt prin diverse tehnici matematice.

Fig.2 Tipuri de relaii doz-efect: a) relaie gradat liniar; b) relaie gradat exponenial, c) relaie cuantal Efectele toxice observate la indivizi izolai au caracter gradat, intensitatea lor crescnd cu doza. Observate asupra unei colectiviti ele pot fi considerate de tip cuantal, fiind caracterizate prin prezena sau absena lor. Rspunsurile individuale la aciunea toxic sau letal a unui medicament se ncadreaz n curba normal de distribuie a variabilitii ntr-o populaie. Curba doz-efect are aspectul unui clopot, al crui vrf se situeaz la valoarea DL50 sau DT50. Curba are aspect mai plat sau mai ascuit n funcie de dispersia mai mare sau mai mic a rspunsurilor individuale, exprimat prin deviaia standard (d). Animalele care rspund la doze situate la DL50 sau DT50 2d sunt considerate a avea reactivitate normal (cca 95% din animale), restul constituind excepiile, cu sensibilitatea foarte mare sau foarte mic. Reprezentarea grafic cumulativ a relaiei doz-efect este o curb sigmoid (vezi mai sus relaii cuantale). Cu ct panta curbei (dreptei) este mai mic cu att riscul reaciilor toxice este mai mare, acestea putndu-se petrece pe o gam mai larg de doze.

Fig.3 a variiilor individuale

Fig.4

Fig.3 curba cuantal (n clopot), respectiv cumulativ (simpl) a distribuiei normale Fig.4 curbele cuantale cumulative log doz-efect la oareci, referitoare la efectul hipnotic i cel letal al fenobarbitalului (dup Levine R.R. Pharmacology, ed. a II-a, pag. 190. Little Brown, Boston, 1978) Ali parametri toxicologici: Similar cu DL i DL50 se definesc concentraia letal (CL) i concentraia letal 50 (CL50), care se refer la concentraia unui compus chimic n aer (experimentele efectuate prin inhalare), dar i n ap (pentru studiile de mediu). CL50 reprezint acea concentraie a compusului chimic n aer care provoac moartea a 50% din animalele de experien, ntr-un anumit timp (specificat, de obicei cteva ore). Aceti parametri toxicologici se exprim de obicei prin cantitatea de compus chimic (administrat de regul n form pur) pe kg greutate corporal, specificndu-se specia de animal pe care s-au efectuat testele i calea de expunere/administrare: oral, cutanat, injectare, inhalare etc.; pentru CL i CL50 se folosesc ca i uniti de msur pri per milion (ppm) sau mg per metru cub (mg/m3). n practic se mai utilizeaz i concentraia maxim admis (CMA) a unei substane pe unitatea de suprafa, volum sau mas. Acest parametru este util pentru aprecierea siguranei condiiilor de mediu. n cazul reziduurilor coninute n substraturi alimentare se utilizeaz limita maxim de reziduuri (LMR).

n studiile de toxicitate cronic se definete doza maxim tolerat (DMT) care reprezint cantitatea cea mai mare de substan care se anticipeaz c nu va afecta durata de via a animalelor prin alte efecte dect, eventual, cele carcinogene. Nivelul fr efecte toxice definete cantitatea de substan care, inclus n dieta unui lot de animale nu produce efecte toxice. Extrapolarea animale de experien om (stabilirea dozelor letale pentru om pe baza valorilor determinate pentru animale) se face lund n calcul (diviznd cu) un factor de siguran (cu valori de 100, 1000 sau 10 000) care, pe lng scopul de a asigura sigurana superioar a omului fa de animal vizeaz i sigurana celor mai sensibile grupuri a le populaiei, inclusiv a copiilor, protejarea mpotriva erorilor experimentale etc. Parametrii toxicologici definii mai sus sunt importani n aprecierea toxicitii substanelor chimice (n special a celei acute) i n alctuirea scrilor de toxicitate, caz n care este esenial s se precizeze calea de expunere (ntruct LD50 pentru acelai toxic poate fi diferit n funcie de calea de expunere). n practica toxicologic se folosesc mai multe clasificri toxicologice, diferite att prin numerotarea claselor de toxicitate ct i prin termenii utilizai la descrierea acestora. De aceea este important s se precizeze care este scara folosit n respectiva cercetare. Cele mai frecvent folosite clasificri ale toxicelor sunt Scara Hodge i Sterner i Scara Gosselin, Smith i Hodge.

Clase de toxicitate: Scala Hodge i Sterner Ci de administrare Oral, DL50 Clasa Caracterizare (1 doz la obolani), mg/kg 1 1-50 50-500 500-5000 500015000 15000 Inhalare, CL50 (expunere obolani , 4 ore), ppm 10 10-100 100-1000 1000-10000 10000-100000 100000 Cutanat, DL50 (1aplicare pe Doza letal pielea obolanilor), probabil mg/kg pentru om 5 5-43 44-340 350-2810 2820-22590 22600 1 grunte, 1 pictur 4 mL 30 mL 600 mL 1L 1L

1 2 3 4 5 6

Extrem de toxic Foarte toxic Moderat toxic Puin toxic Practic netoxic Aproximativ fr toxicitate

Clase de toxicitate: Scara Gosselin, Smith i Hodge Doza letal oral probabil la om Clasa 6 Super toxic 5 Extrem de toxic 4 Foarte toxic 3 Moderat toxic 2 Slab toxic 1 Practic netoxic 5 mg/kg 5-50 mg/kg 50-500 mg/kg 0,5-5 g/kg 5-15 g/kg 15 g/kg Doza Pentru persoane de 70 kg 1 grunte, cteva picturi 4 mL 30 mL 30-600 mL 600-1200 mL 1200 mL Pentru medicamente Doza letal 50 (DL50), mg/kg < 0,1 1 - 50 50 -500 500 - 5000 > 5000 Toxicitate foarte mare mare moderat mic foarte mic