Sunteți pe pagina 1din 6

METODOLOGII DE TESTARE TOXICOLOGICA (Mitchell L.

Schlossman, The chemistry and manufacture of cosmetics, 3 rd ed, Allured Publishing Corporation, 1988, USA ISBN 0-931710-75-8) Metodele utilizate pentru testarea toxicologic a produselor cosmetice pot fi grupate n trei categorii: in vivo (pe animale), in vitro (nu utilizeaz animale) i teste clinice pe oameni. Teste in vivo Teste pentru toxicitate acut teste care utilizeaz una sau mai multe doze din substana sau articolul testate, administrate n decurs de 24 ore. Se efectueaz pentru urmtoarele tipuri de iritaii: Iritaie cutanat primar i iritaie ocular primar: au scopul de a determina efectele iritative ale articolului testat dup o singur expunere a pielii, respectiv a ochilor. Durata i intensitatea expunerii poate varia n funcie de natura articolului testat i de utilizarea prevzut pentru acesta. Testul Draize presupune aplicarea de pansamente ocluzive n cazul iritaiei cutanate, respectiv, n cazul iritaiei oculare, tratarea a 6 iepuri, pentru 24 ore, cu observarea ulterioar a efectelor. Toxicitate oral acut i cutanat acut (absorbie transcutanat) : urmresc determinarea efectelor sistemice ale articolului testat dup o singur ingestie oral, respectiv expunere cutanat. Ca animale de experien sunt utilizai oareci sau obolani crora li se administreaz doze corelate cu greutatea corporal. Numrul uzual de animale este de 10, iar perioada de observare de 14 zile. Toxicitate acut prin inhalare are ca scop determinarea efectelor articolului testat, n form de aerosoli, n urma unei singure expuneri prin inhalare. Ca animale de exerien sunt utilizai oareci sau obolani, n numr de 10, durata expunerii fiind de 1 or iar perioada de observare de 14 zile. Foto-toxicitate i foto-iritaie acest test urmrete determinarea efectelor de iritaiei rezultate n urma unei singure expuneri cutanate la produsul testat, n combinaie cu anumite lungimi de und ale radiaiei UV (n urma absorbiei radiaiilor UV, anumite produse neiritative capt potenial iritativ). Cele mai uzuale teste utilizeaz porcuori de Guinea, supui unei singure expuneri. Teste de toxicitate subacut utilizeaz doze repetate din articolul testat administrate timp de mai multe zile sau sptmni. Iritaie cutanat subacut sau cumulativ are ca scop determinarea efectelor iritative cumulative cauzate de expunerile repetate ale pielii la articolul testat. Intensitatea expunerilor poate

fi variat n funcie de natura articolului i de utilizarea prevzut pentru acesta. Cel mai adesea se utilizeaz iepuri, expunerile fiind timp de 14 zile. Toxicitate cutanat subacut - are ca scop determinarea efectelor sistemice cumulative cauzate de expunerile repetate ale pielii la articolul testat. Intensitatea expunerilor poate fi variat funcie de natura articolului i de utilizarea prevzut pentru acesta, pentru testare, cel mai frecvent sunt folosii iepuri, expunerile ntinzndu-se pe o durat de 21 zile. Iritaie a mucoaselor (bucal, genital) urmrete determinarea efectelor iritative ale articolului testat asupra mucoaselor, n urma expunerilor repetate. Frecvena i intensitatea expunerilor poate fi variat n funcie de natura articolului i de utilizarea prevzut pentru acesta. Cele mai uzuale teste folosesc iepuri, porcuori de Guinea sau hamsteri, expunerile durnd cel mult 5 zile. Teste de sensibilizare au ca scop determinarea potenialului alergen i de sensibilizare al produsului testat. Aplicarea produsului poate fi: topic, prin injectare ori o combinaie a celor dou. Pot fi folosii i anumii adjuvani, cu rol de a excita sistemul imunitar. Frecvena i intensitatea expunerilor depind de tipul de test utilizat. Fotoalergie i fotosensibilizare - au ca scop determinarea potenialului alergogen i de sensibilizare al produsului testat, n urma expunerilor repetate i n combinaie cu radiaia ultraviolet. Sunt utilizai de obicei porcuori de Guinea, expui timp de mai multe sptmni, urmnd apoi o perioad de pauz i o faz de provocare Teste de toxicitate subcronic sunt considerate acele teste care utilizeaz doze repetate din produsul testat, administrate timp de cteva sptmni la cteva luni (de la 28 la 90 zile). naintea efecturii testului trebuie s se decid asupra unor variabile ca: dozarea, prepararea articolului testat, calea de administrare, numrul de animale, greutatea corporal, constatrile clinice urmrite, observaiile histopatologice i generale ce trebuie efectuate etc. Toxicitate subcronic oral urmrete determinarea efectelor fiziologice i biochimice ale articolului testat, n urma administrrii orale repetate. Animalele utilizate sunt de obicei obolani, doza stabilindu-se funcie de greutatea corporal. De regul, n cazul testrii substanelor ce vor fi utilizate pentru aplicare cutanat se alege calea de administrare oral pentru a asigura o expunere sistemic. Toxicitate cutanat subcronic sau absorbie transcutanat au ca scop determinarea efectelor cumulative sistemice n urma expunerilor cutanate repetate. Sunt utilizai de obicei iepuri, dozele administrate fiind n funcie de greutatea corporal.

Toxicitate subcronic prin inhalare are ca scop determinarea efectelor fiziologice i biochimice ale articolului testat aflat sub form de aerosoli, n urma unor multiple expuneri prin inhalare. Teste de toxicitate cronic utilizeaz doze repetate, timp de unul sau mai muli ani (de regul 1 sau 2 ani). naintea efecturii testului trebuie s se decid asupra unor variabile ca: dozarea, prepararea articolului testat, calea de administrare, numrul de animale, greutatea corporal, constatrile clinice, observaiile histopatologice i generale ce trebuiesc efectuate etc. Dintre aceste teste fac parte: testele de toxicitate cronic oral, toxicitate cutanat cronic sau absorbie transcutanat, toxicitate cronic prin inhalare, care se deosebesc de testele de toxicitate subcronic prin expunerea repetat i ndelungat i prin folosirea n testele de laborator a 2 specii de mamifere (una fiind o specie de roztoare). n plus se mai efectueaz testul de carcinogenicitate care are ca scop urmrirea animalelor de experien pe o perioad lung de timp (durata testului poate varia de la 18 luni la 2 ani) n vederea depistrii leziunilor neoplazice formate n timpul sau dup expunerea la diferite doze din produsul testat. Testul se efectueaz, de regul, pe 2 specii de mamifere, crora li se administreaz doze dependente de greutatea corporal. Cile de administrare sunt cele uzuale: oral, cutanat sau prin inhalare. Alte teste Teratogenitate pentru determinarea potenialului unui produs de a produce n organismul ftului anomalii/malformaii stucturale sau de alt natur, n urma expunerii mamei purttoare la acel produs. n mod normal se utilizeaz 2 specii de mamifere (obolan i iepure), calea de administrare fiind oral. Animalele de experien (femelele gestante se mpart n grupuri crora li se administreaz doze progresiv cresctoare din produsul testat (1 doz/grup), pe o perioad ce acoper cel puin perioada de organogenez. nainte de data naterii, femelele sunt eutanasiate, uterul extras i se efectueaz evaluarea strii ftului (mort sau viu). Ftul este apoi scos i conservat ntr-o manier care s permit evaluarea transformrilor/malformaiilor esuturilor moi i a celui osos. Efecte asupra reproducerii i fertilitii furnizeaz informaii referitoare la efectele produsului testat asupra principalelor faze ale procesului de reproducere, dar i asupra etapelor de alptare, nrcare, cretere i dezvoltare a urmailor. Produsul se administreaz oral la obolani sau oareci. n studiile pe o generaie articolul de testat este administrat prinilor naintea mperecherii, n timpul sarcinii i pn la nrcare. n studiile multigeneraie, produsul este n continuare administrat urmailor selectai, n timpul creterii pn la stadiul de adult, mperecherii i producerii propriilor urmai, pn ce acetia mplinesc 21 de zile.

Genotoxicitate urmrete determinarea mutaiilor genetice, a unor modificri ale structurii cromozomilor sau ale genelor, ADN-ului etc. Exist mai multe metode disponibile, majoritatea utiliznd roztoare. Metodele uzuale urmresc apariia de aberaii cromozomiale n celulele spermatogoniale, aberaii structurale ale cromozomilor din celulele mduvei osoase sau efectele negative asupra cromozomilor ori aparatului mitotic al eritroblastelor. Teste in vitro sunt teste care nu utilizeaz animalul viu ca atare (testele efectundu-se deci n afara organismului viu). Pentru experimente se pot folosi diverse sisteme, de la bacterii la diferite sisteme fizio-chimice. Principalele teste se refer la iritaia primar a ochilor i a pielii i la genotoxicitate. Iritaia primar a ochilor (iritaie ocular primar) * HET-CAM / CAMVA (Hen's Egg Test Chorioallantoic Membrane / Chorioallantoic Membrane Vascular Assay) - testele folosesc membrana corioalantoid a oulor de gin fecundate, puternic vascularizat, urmrindu-se schimbrile fiziologice ale acesteia n urma expunerii la articolul testat (lichid sau solid): hiperemie, hemoragie, coagulare, tromboz. Cu ct materialul este mai iritant cu att reaciile sunt mai rapide i mai severe. Fiecrei observaii i se atribuie o valoare numeric i apoi se extrapoleaz rezultatele pentru iritaia probabil a ochilor. * Teste fizio-chimice utilizeaz matrici proteice expuse la articolul testat, observndu-se i msurndu-se modificrile de opacitate care sunt corelate cu modificrile opacitii corneei. Observaiile sunt prelucrate i interpretate ntr-o manier similar cu cea de mai sus. * Teste ce utilizeaz culturi de celule - acestea sunt expuse la produsul testat, msurndu-se apoi modificrile produse n celul, de obicei pe baza unor reacii de culoare. * Teste pe ochi de cadavre de animale (de obicei de la vaci) - urmresc modificri ale corneei n urma expunerii la articolul testat, rezultatele fiind apoi extrapolate la om. Principala problem n acest caz o constituie obinerea i pstrarea n stare optim a ochilor destinai testelor. Iritaie cutanat primar: * Teste fizio-chimice similare cu cele pentru iritaia ocular. * Teste pe membrane membranele, constituite din matrici de natur proteic sunt expuse articolului testat. Se msoar timpul necesar trecerii produsului respectiv prin membran, iar rezultatele sunt extrapolate pentru aprecierea iritaiei cutanate probabile. * Teste ce utilizeaz culturi de celule similare celor pentru determinarea iritaiei oculare Genotoxicitate testele in vitro sunt considerate acelea care utilizeaz celule de mamifere, bacterii, drojdii sau fungi i au ca scop determinarea eventualelor mutaii genetice, schimbri n structura cromozomilor ori modificri ale genelor, ADN-ului etc.

Cele mai uzuale 3 teste sunt cele pentru: * mutaii genetice n celule de mamifere * mutaii inverse n celule bacteriene * aberaii cromozomiale n celule de mamifere Teste clinice Pe parcursul ultimilor ani, n scopul obinerii unor informaii ct mai exacte referitoare la sigurana produselor cosmetice introduse pe pia, industria cosmetic a nlocuit din ce n ce mai mult testele pe animale cu cele clinice. Pentru a putea testa produsele finite pe subieci umani este necesar estimarea prealabil a siguranei formulaiei respective, pe baza informaiilor ct mai complete i exacte despre sigurana materiilor prime/ingredientelor utilizate (de la furnizorii acestora) i, de asemenea, testarea acestor ingrediente prin metode in vitro. Teste uzuale de toxicitate pentru produsele cosmetice Tip produs cosmetic Produse pentru baie Deodorante / antiperspirante Make-up zona ochilor Tratament zona ochilor Parfumuri Produse pentru buze Makeup fa Lac de unghii ampoane / balsamuri Tratament piele corp Tratament piele fa Produse pentru plaj + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + A B + + C D E F G H I +

A = Teste umane tip pansament (patch) B = Iritaie primar C = Acnee D = Fototoxicitate E = Fotoalergie

F = Toxicitate ocular G = Factor de protecie solar (cnd este nevoie) H = Eficien I = Toxicitate vaginal