Antibiogramme par la mthode de diffusion en milieu glos

par Rmi Moreda daprs ldition janvier 2010 du comit de lantibiogramme de la socit franaise de microbiologie.

Prparation de linoculum Souche pure tudier et milieu densemencement

Isolement (18-24h sur milieu non slectif)

Suspension en eau physiologique de trouble quivalent au standard 8 Mc Farland 0,5 (10 UFC/mL).

Il est possible de partir dun bouillon, par exemple pour les bacilles Gram ngatif, Staphylococcus et Enterococcus : culture en bouillon Mueller - Hinton incub 3 5 h sous agitation et ajust ensuite 0,5 de Mc Farland.
7

Bacille Gram ngatif Staphylococcus* Enterococcus

- couvillonnage : diluer au 1/10 (10 UFC/mL) (10 goutte de pipette Pasteur dans 5 mL deau physiologique strile) - inondation : diluer au 1/100 (106 UFC/mL) (1 goutte de pipette Pasteur de suspension dans 5 mL deau physiologique strile)

Milieu : Mueller-Hinton 37C 18-24h

* pour Staphylococcus aureus et la recherche de SARM, dposer un disque FOX ou raliser en plus un petit Mueller-Hinton 30C ou Mueller-Hinton hypersal 37C, 24 48h avec inoculum charg et disque oxacilline. Streptococcus utiliser directement la suspension 0,5McF pour l couvillonnage. Pour la technique par inondation diluer au 1/10 (1 mL dans 9 mL) Milieu : Mueller-Hinton + 5% sang de mouton 37C sous atmosphre enrichie en CO2 18-24h.

Inoculum Technique par inondation Technique par couvillonnage

Technique privilgier car elle vite les arosols.

Aujourdhui dconseille car risque d aux arosols. Elle est nanmoins encore utilise en milieu professionnel.

Ensemencement

A laide dun couvillon essor, ensemencer toute la surface du milieu (3 passages orientation dcale de 60 pour la bote et lcouvillon)

Recouvrir la glose dinoculum

Aspirer le surplus

1/3 de tour

60 (1/3 de tour)

Laisser scher 15 minutes

Dpt

Dpt des disques dantibiotique selon schma de disposition (maximun 6 disques sur grande bote de ptri) Incubation 18-24 heures 37C en arobiose sauf cas cits plus haut.
Diamtre dinhibition en mm Pour chaque antibiotique, mesurer le diamtre de la zone dinhibition. Grce aux abaques 1d 0 1D 8 (exemple droite) dterminer la catgorie clinique de la bactrie vis vis de chaque Sensible Intermdiaire Rsistant antibiotique test (sensible, intermdiaire, CCS 5 1 10 CCI rsistant) et estimer la CMI. C c Concentration en antibiotique en g/cm3 ou mg/L
Diamtre dinhibition

}} }}
0 20

Lecture

Sensible

Intermdiaire Rsistant

16
Disque AB

Abaque de lecture CCI = c = concentration critique infrieure (CCS = C = suprieure) D = diamtre critique suprieur (d = infrieur) Rmi Moreda - Lyce Docteur Lacroix - Narbonne

Dans cet exemple la bactrie est intermdiaire vis vis de lantibiotique. Estimation de la CMI : 4 mg/L < CMI < 16 mg/L