Instituto Tecnolgico Superior de Acayucan

Ingeniera Bioqumica

Cuarto semestre
Anlisis Instrumental

401-A

Unidad 1: Principios del anlisis instrumental 1.1. Mtodos clsicos e instrumentales

Capistran Moreno Ana Silvia De Los Santos Castillo Jos Esteban Garca Canales Rhoscio Martnez Anastasio Marcos Jair Pascual Contreras Alan Reyes Tolentino Jos Carlos

Ing. Ma. Marlen Uribe Alvarado

Aplicaciones de la Turbidimetra y Nefelometra

DEFINICIONES
Turbidimetra Es un mtodo en el que se mide la disminucin de la potencia de la radiacin transmitida debido a la dispersin. Se mide en un espectrofotmetro UV/Vis.

 Para determinar la concentracin del analito

mediante este mtodo aplicamos:

 En donde T es la transmitancia medida, It es la

intensidad de la fuente de radiacin transmitida, Io es la intensidad de la radiacin de la fuente transmitida por un blanco. La relacin entre T y la concentracin de las partculas dispersas es similar a la proporcionada por la ley de Beer:

 Siendo C la concentracin de las partculas

dispersantes expresada como masa por unidad de volumen; b es la longitud del camino ptico y k es una constante que depende de varios factores: tamao, forma de las partculas dispersantes y la longitud de onda.

 Nefelometra Es un mtodo para medir la intensidad de una radiacin dispersa en un ngulo de 90 con respecto a la fuente. Se mide en un espectrofluormetro.

 Para determinar la concentracin de analito en este

mtodo aplicamos:

 Donde

es una constante emprica del sistema, es la intensidad de la fuente de radiacin incidente. El valor de depende de una curva de calibracin preparada, usando una serie de patrones de concentracin conocida.

Aplicaciones
Imunoprecipitacin La imunoprecipitacin cuantificada por turbidimetra o nefelometra se emplea hoy en los laboratorios de autoinmunidad para determinar el factor reumtide. Tanto en los reactivos como en el suero pueden existir partculas que produzcan una dispersin de luz no deseada ej. lipoprotenas, quilomicrones Tambin puede interferir la suciedad.

 La intensidad de la luz dispersada. Las protenas

suelen tener un pico de absorcin en el ultravioleta y los cromgenos del suero entre 400-425nm; por todo ello se suele trabajar a frecuencias que oscilen entre 320-380nm y 500-600nm.

 Inmunodifusin radial En este caso se aade un antisuero especfico a la agarosa que, a su vez, se vierte sobre placas. Se forman pozos en el gel y se colocan en ellos estndares de protenas y problemas (antgenos). El antgeno difunde en el gel durante varias horas y va reaccionando con el Ac. En la zona de equivalencia se produce un anillo de precipitacin

 Inmunodifusin doble o tcnica de

Ouchterlony

Se forman pozos en el gel de agarosa, generalmente en patrn de roseta. Se depositan antisueros especficos en los pozos centrales y los estndares de protenas y los problemas en los pozos circundantes. Al difundir las muestras en el gel, donde el anticuerpo y el antgeno alcanzan la equivalencia, se forman bandas de precipitados insolubles.

 La posicin y forma de la banda se determinan segn

la concentracin del antgeno y del anticuerpo, y sus tamaos. La distancia de las bandas con respecto al anticuerpo es directamente proporcional a la cantidad de antgeno presente.

 REFERENCIAS L. Hernndez, C. Gonzlez, Introduccin al Anlisis

Instrumental. Editorial: Ariel Ciencia (2002) Editorial Acribia. S.A

R. Matissek, F.M. Schnepel, G. Steiner, Anlisis de los Alimentos. McPherson RA, Pincus MR, eds. Henry's Clinical Diagnosis and

Management byLaboratory Methods. 21st ed. Philadelphia, Pa: Saunders Elsevier; 2006.

http://webs2002.uab.es/ipividori/qca%20analii/T7.pdf