LP 5 Tema Genul Streptococcus/ Staphylococcus

Prezentarea a fost realizat de: Lupu Raluca gr.9 Prepeli Cristina gr.7 Dragomir Teodora gr.7 Aisa Roxana gr.9 Pasnicenco Arina gr.9

Genul Streptoccocus

Obiective:
1.Definiie 2.ncadrare 3.Clasificare 4.Examen de laborator

1.Definiie

Streptococci = coci sferici Gram-pozitivi, care formeaz perechi sau lanuri n cursul diviziunii celulare.Sunt pretenioi nutritiv, imobili i nesporulai.Unele specii au capsul.

2.ncadrare

Cresc bine la presiuni reduse ale oxigenului, iar unele specii chiar n prezena de 5% CO2.Catalaz i oxidaz negativi. Majoritatea sunt hemolitici.

3.Clasificare

Se impune utilizarea a 2 criterii de clasificare: A) Aspectul hemolizei pe agar-snge B) Clasificarea antigenic Lancefield

A)Dup aspectul hemolizei

streptococi -hemolitici- zon clar de hemoliz complet n jurul coloniei, efect al aciunii hemolizinelor produse de germen; streptococi -hemolitici- zon de hemoliz verzuie, incomplet datorat producerii de peroxid de hidrogen; streptococi -zon de hemoliz alfa nconjurat de o zon ngust de beta-hemoliz; streptococi nehemolitici

B)Clasificarea antigenic Rebecca Lancefield (1933)

-Criteriu de clasificare este prezena polizaharidului C n peretele celular, un antigen cu specificitate de grup. ag. este prezent la toate grupele de streptococi cu excepie grupa D i pneumococul. -Streptococi grupabili, ncadrai n 20 grupe serologice notate cu A H i K W.Acetia se identific prin reacii de aglutinare, reacie de latex-aglutinare. Streptococi negrupabili nu au antigenul de grup e.g. Streptococcus pneumoniae si majoritatea streptococilor comensali ai mucoasei oro-faringiene i bucale.

fig.1 reacie de latex-aglutinare

Criteriu filogenetic de clasificare

Este realizat pe baza analizelor efectuate prin metode ale biologiei moleculare.Exist 6 grupri de specii n cadrul genului Streptococcus: I. Grupul piogenic II. Grupul anginosus III. Grupul mitis IV. Grupul salivarius V. Grupul bovis VI. Grupul mutan

C.I. Grupul piogenic

1. S. pyogenes 2. S. agalactiae 3. Streptococi grupele C, G I. Grupul piogenic - S. pyogenes
sunt beta-hemolitici starea de portaj naso-faringian este prezent la 1030% din oameni principalul patogen uman asociat cu invazia local sau sistemic i cu dezordini imunologice poststreptococice Bolile poststreptococice reumatismul articular acut (RAA), glomerulonefrita acut poststreptococic (GNAPS), coreea Sydenham(afectare SNC) Afectarea cordului Valve i corzi tendinoase ngroate Miocard hipertrofiat

Boli invazive datorate streptococilor piogeni:

a)Erizipel al gambei b)Erizipel al feei

c)Celulit d)Fasceit necrozant

Boli localizate:
a)Faringita streptococic b) Angina streptococic c) Amigdalit purulent d) Scarlatina e)Impetigo streptococic

Boli streptococice.
Boli invazive datorate streptococilor piogeni:
a)Erizipel al gambei b)Erizipel al feei c)Celulit

d)Fasceit necrozant

Boli localizate:

a)Faringita streptococic

b) Angina streptococic

c) Amigdalit purulent

d) Scarlatina

e)Impetigo streptococic

Bolile poststreptococice

a)reumatismul articular acut (RAA) b)glomerulonefrita acut poststreptococic (GNAPS), coreea Sydenham(afectare SNC) Afectarea cordului Valve i corzi tendinoase ngroate Miocard hipertrofiat

4.Examen de laborator
Podus patologic:S. pyogenes: secreie faringian, secreie din leziuni tegumentare, snge pentru serologie 1 Exam. Microscopic direct - coci GRAM +) S. pyogenes: coci rotunzi, dispui n lanuri 2. Izolarea bacteriei: - mediul de mbogire - Geloz-snge - Bulion-snge; 3. Identificare: a) pe baza caracterelor de cultur: col S cu hemoliz beta (clar, transparent) -Streptococi b-hemolitici b) Determinarea hidrocarbonatului C din peretele bacterian prin reacii de precipitare i aglutinare si stabilirea grupelor Lancefield.

Reacia latex-aglutinare

4. Antibiograma Streptococul de grup A: i-a pstrat sensibilitatea fa de penicilin nu se efectueaz Antibiograma (numai n situaii speciale, de ex. alergie la penicilin sau monitorizarea rezistenei la penicilin i alte antibiotice. Pentru ceilali streptococi se efectueaz Atb. 5. Evidenierea Anticorpilor testul ASLO - Streptolizina O = SLO= este un Ag care determin formarea de Ac anti-SLO = ASLO.ASLO crete n primele 7 zile pn n sptmnile 3-4 cnd se menine n platou i apoi scade titrul pn la valori normale pn la 6 luni, dac s-a intervenit cu un tratament corespunztor (vindecare); sau poate s creasc titrul Ac dac nu a fost tratat bolnavul sau s-a produs o complicaie (RAA, afectare cardiac, glomerulonefrit renal acut, coreea minor etc.). - Dg (+) la titrul de 1/200 UI/ml - Val < 1/200 UI/ml nu exist infecie streptococic - Val > 1/200 UI/ml este infecie streptococic n evoluie.

Genul Staphylococcus
Obiective:
1.Referine la : a) Clasificarea pe baza producerii de coagulaz. b) Habitat. c) Produs patologic. 2. Examenul microscopic direct al pp. 3. Izolare 5. Determinarea patogenitii 4.Identificarea bacteriei 6. Tipizarea bacteriilor a) Caractere morfotinctoriale b) Caractere de cultur 7. Antibiograma c) Caractere biochimice 8. Actiunea agentilor fizici si chimici
**Testul catalazei ** Producerea de coagulaza

1.Referine la : a) Clasificarea pe baza producerii de coagulaz b) Habitat c) Produs patologic

a)Clasificarea pe baza producerii de coagulaz.

Coagulaza este o enzim, care depoziteaz fibrina la suprafaa stafilococilor.Ea depoziteaz fibrina la suprafaa stafilococilor. Exist: -Stafilococi coagulazo-pozitivi: S. aureus -Stafilococi coagulazo-negativi (SCN) cu importan clinic: S. lugdunensis, S. schleiferi, S.hyicus, S. epidermidis, S. haemolyticus, S. Saprophyticus

1.Referine la : a) Clasificarea pe baza producerii de coagulaz b) Habitat c) Produs patologic

b) Habitat - Unele specii-flor normal a tegumentelor i mucoaselor - 40% sunt purttori nazali de S.aureus - Prin contaminarea alimentelor >toxiinfecii alimentare c) Produs patologic - portaj: secreie din cavitatea nazal anterioar, secreie faringean, probe de pe tegumente (zona axilar, perianal) - plgi, otite, infecii tegumentare puroiul (S. aureus) - infecii urinare urin (S. saprophyticus, S. aureus) - infecii gastro-intestinale, toxiinfecii alimentare materii fecale, vomismente, alimente. - meningite LCR - septicemie, snge (S. aureus, SCN) - pneumonie sput. - infecii nosocomiale - S. aureus meticilino-rezistent (MRSA, SARM), SCN meticilinorezistent

2. Examenul microscopic direct al pp.

Exist 2 tipuri de examen microscopic direct al pp: - macroscopic: puroi cremos, filamentos, glbui. - microscopic: coloraia Gram: coci gram (+), dispui n grmezi asemntoare ciorchinilor de strugure i celule inflamatorii.

3.Izolare
- Mediul de mbogire: mediul hiperclorurat - Chapman (Ch) (fig.2) - Este nepretenios, poate fi cultivat pe geloz snge (fig. 3) - Incubare aerob la 37C, 18 24 ore. fig.2 fig.3

4.Identificarea bacteriei :a) Caractere morfotinctoriale b) Caractere de cultur c) Caractere biochimice

a)

Caractere morfotinctoriale
Frotiu din cultur pur: coci Gram (+), n grmezi.

4.Identificarea bacteriei :a) Caractere morfotinctoriale b) Caractere de cultur c) Caractere biochimice

b) Caractere de cultur
Colonii S cu pigment galben-auriu pn la citrin. Colonii de tip S-smooth, lucioase, opace. n mediile lichide tulbur uniform bulionul. a)Colonii pigmentate (alb, galben) b) Pe geloz snge: hemoliz beta

4.Identificarea bacteriei :a) Caractere morfotinctoriale b) Caractere de cultur c) Caractere biochimice

c) Caractere biochimice :- catalaz +

**Testul catalazei
Difereniaz coloniile de staphylococ de cele de streptococ.Deoarece ambele bacterii cresc pe mediu cu snge se recomand folosirea vrfurilor coloniilor de stafilococ sau streptococ pentru a evita reacii fals pozitive datorit catalazei eritrocitare(din mediu cu geloza snge). Pe o lam de microscop depune 1-2 picaturi de H2O2 , peste picatura de reactiv se adaug coloniile testate. Citire si interpretare: Test pozitiv-apariia bulelor de gaz pn la efervescen, STAFILOCOC Test negativ-absena bulelor, STREPTOCOC

4.Identificarea bacteriei :a) Caractere morfotinctoriale b) Caractere de cultur c) Caractere biochimice

**Producerea de coagulaz 1)Coagulaza liber-enzima extracelular care transform fibrinogenul din plasm n fibrin. Se evideniaz prin punerea n contact a culturii n bulion cu plasma. 2)Coagulaza legat leag fibrinogenul ducnd la agregarea bacteriilor. Se evideniaz pe lam prin adugarea plasmei peste suspensia de stafilococ. Citire i interpretare: Test pozitiv- apariia de grunji, care las pictura limpede nseamn reacie pozitiv. Test negativ- amestecul rmne omogen; - producere de pigment: de la auriu la portocaliu, galben citrin (S. aureus, S.lugdunensis, S. chromogenes, .a.) - producerea de hemolizine pe geloz-snge - hemoliza beta (S. aureus, S. haemolyticus, .a.) - nu prezint hemoliz (majoritatea tulpinilor SCN).

4.Identificarea bacteriei :a) Caractere morfotinctoriale b) Caractere de cultur c) Caractere biochimice

Citirea testului (+/-)

5. Determinarea patogenitii

Determinarea patogenitii
in vitro: producerea de coagulaz, hemolizine, descompunerea manitolului in vivo: inoculare la animale de laborator (cobai, iepure)

6. Tipizarea bacteriilor
Pentru identificarea sursei de infecie - prin lizotipie (determinarea sensibilitii stafilococului fa de bacteriofagi; este o sensibilitate stabil a stafilococului). - prin metode de biologie molecular

7. Antibiograma
-Metoda difuzimetric sau determinarea CMI -Mediul Muller Hinton -Conform standardelor CLSI sau EUCAST Tulpini rezistente: MRSA, VISA, VRSA-bacterii ALERTE !

Antibiograma :Mediul Muller Hinton

8.Aciunea agenilor fizici i chimici

n puroi supravieuiesc sptmni. Sunt distrui la 60 grade, timp de o or. Alcoolul de 70 grade distruge stafilococci n decurs de o or. Sunt rezisteni la multe peniciline >> betalactamaze MRSA, VISA, VRSA.