Facultad de Medicina Departamento de Microbiologa Centro de Documentacin e Informacin Mdica Club de Informtica Mdica y Telemedicina Editora del atlas:

Carla Donado Stefani

Universidad de Panam

Este atlas ha sido creado basado en el plan de estudio del curso de Microbiologa Mdica de la carrera de Dr. en Medicina de la Facultad de Medicina de la Universidad de Panam. El mismo pretende llevar al estudiante, mdico u otro profesional de la salud, las tcnicas bsicas microbiolgicas utilizadas en el diagnstico clnico.

Contenido por temas:

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TCNICAS BACTERIOLGICAS: Morfologa bacteriana usando tinciones especiales Efectos de los agentes qumicos sobre las bacterias

BACTERIAS DE IMPORTANCIA MDICA: Flora normal del cuerpo humano Cocos Gram positivos (pigenos) Bacilos Gram positivos aerobios Microorganismos transmitidos sexualmente Bacilos gram negativos fermentadores y no fermentadores (temporalmente inhabilitado)* Microbiologa de agua y alimentos (temporalmente inhabilitado)* Microorganismos anaerobios Mycobacterias

DIAGNSTICO VIROLGICO

MORFOLOGA Atlas Virtual de Microbiologa Mdica BACTERIANA Universidad de Panam USANDO Facultad de Medicina TINCIONES ESPECIALES
Morfologa Bacteriana

Tinciones especiales
Tincin de Gram: bacterias Gram positivas de color prpura, y bacterias Gram negativas de color rojo. Qu ocurre en la tincin de Gram?

Gram positivos

Gram negativos

Diferencias estructurales entre la pared celular bacteriana gram positiva y la gram negativa

Tincin de Moeller para esporas: resalta de color rojo la espora bacteriana, y de color morado el bacilo.

Bacillus subtilis
Tincin de Anthony para cpsulas: la leche litmus acta como contraste para crear un fondo rosa oscuro y la cpsula blanca.

Klebsiella pneumoniae

EFECTOS DE Atlas Virtual de Microbiologa LOS Mdica AGENTES QUMICOS SOBRE LAS BACTERIAS

Prueba de difusin en plato: en un agar Mller-Hinton, se siembra la muestra bacteriana y luego se proceden a colocar discos antibiticos para observar el efecto de los mismos sobre las colonias. E - TEST: es una tcnica que combina las tcnicas de dilucin y de difusin. Se trata de una tira plastificada que por una de sus superficies contiene un gradiente determinado de concentracin de un antimicrobiano, el cual al ponerse en contacto con el agar difunde de igual manera, formando un halo de inhibicin tipo elipse que converge en un ngulo que determina la Concentracin Inhibitoria mnima (CIM).

FLORA NORMAL DEL CUERPO HUMANO

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Significado de la flora normal

Sitios anatmicos con flora normal presente

MICROORGANISMOS TRANSMITIDOS SEXUALMENTE

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Agente etiolgico de la gonorrea: se trata de un diplococo, denominado "gonococo", que es la Neisseria gonorrhoeae.

Medio de cultivo agar "chocolate", ideal para cultivar N. gonorrhoeae

Agente etiolgico de la sfilis: se trata de una bacteria de morfologa "espirilada", en forma de tirabuzn, la cual es el Treponema pallidum. Agente etiolgico de la candidiasis: en este caso quien acta no es una bacteria, es una levadura denominada Candida albicans.

MICROORGANISMOS ANAEROBIOS

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Gas Pack: crea un microambiente anaerobio para el crecimiento de estas bacterias.

API para anaerobios: se observa el sistema API para las diferentes pruebas bioqumicas propias de los anaerobios, junto con el manual que indica la positividad de las mismas.

Clostridium en agar sangre

MYCOBACTERIUM

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CULTIVO DE MYCOBACTERIUM EN LOWENSTEN-JENSEN:

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Hecho a base de huevo y posee como inhibidor para bacterias gram positivas el verde malaquita. En la fotografa se aprecia crecimiento de M. tuberculosis.

Otros Mycobacterium en cultivo:

TINCIN DE ZIEL-NEELSEN:
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El azul de metileno sirve de contraste para la tincin rosada fuscia del Bacilo Alcohol cido Resistente (BAAR), como lo es M. tuberculosis.

DIAGNSTICO VIROLGICO

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Fotos por: Carla Donado Stefani Editado por: Carla Donado Stefani Colaboracin: Demetrio Serracn C.

DIAGNSTICO PRESUNTIVO EN EXAMEN DIRECTO DE MUESTRAS CLNICAS

Efecto citoptico del CitoMegaloVirus: en infeccin por CMV se observan clulas ms grandes que las normales, con inclusiones intranucleares basoflicas. Dicha inclusin tiene apariencia de un "ojo de bho". El CMV es un virus de ADN, por ello su dao es a nivel nuclear.

Virus de la Rabia (Rabdovirus): en esta muestra de tejido cerebral se observa la formacin de inclusiones intracitoplasmticas conocidas como "cuerpos de Negri".

DIAGNSTICO ANALIZANDO CULTIVOS DE CLULAS

FIBROBLASTOS NORMALES EN CULTIVO DE CLULAS

EFECTO CITOPTICO DEL CMV EN FIBROBLASTOS: se ven redondeados, parecen grumos.

CLULAS VERO NORMALES

EFECTO CITOPTICO DE CMV EN CULTIVO

DIAGNSTICO SEROLGICO VIRAL

Prueba de ELISA para diagnosticar Rubeola y Sarampin: se observan como positivos el color amarillo, amarillo claro. Se observa transparente como negativo. (El color lo determina el cromgeno que se utilice).

Prueba de ELISA para diagnosticar Virus Dengue y Virus del Oeste del Nilo: se observa como positivo el color verde, negativo transparente.
*Nota: lo que dice normal debera ser transparente, pero producto de un "accidente" qued verde.

DIAGNSTICO EN BASE A DILUCIONES

Dilucin del suero del paciente: se colocan microplatos con cultivo de clulas, se les aade a cada uno una cantidad constante del virus y luego el suero del paciente. Si el paciente tiene anticuerpos para el virus se evitar la formacin de Placas lticas (se observan como manchas transparentes en el medio azul). A mayor concentracin de suero del paciente, mayor cantidad de anticuerpos y menor formacin de Placas lticas.

Dilucin del virus: en este caso se toma la muestra al paciente, se hace una suspensin del virus de la muestra y luego se hacen varias diluciones las cuales se aaden a este medio clulas cultivadas. En este caso, a mayor dilucin de la suspensin viral, menor ser la formacin de las Placas lticas (recuerda que las placas lticas son producto del efecto del virus sobre las clulas).

COCOS GRAM POSITIVOS (PIGENOS) DE IMPORTANCIA MDICA

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Los cocos Gram positivos pueden ser: Staphylococcus o Streptococcus

La principal forma de diferenciarlos es haciendo la prueba de la catalasa, para la cual, los Staphylococcus son positivos y los Streptococcus son negativos. Staphylococcus aureus

Morfologas de cocos gram positivos

Pruebas realizadas

Cultivo en Manitol Sal: se basa en observar quin ferment el manitol sal. 1 = Enterococcus faecalis (Streptococcus) /No ferment. 2 = Staphylococcus aureus /S ferment. Prueba de hemlisis: detecta la presencia de hemolisina, enzima que permite la clasificacin de los Streptococcus en alfa, beta y gamma hemolticos. Es importante aclarar, que muchas otras bacterias, aparte de los Streptococcus pueden tener esta enzima. En este caso, tenemos sembrado un B. megaterium, pero se usa el cultivo para demostrar el grado de hemlisis, en este caso, una hemlisis beta, en la cual se puede observar claramente por detrs de la siembra.

Prueba de bilis esculina: la prueba positiva es de color negro, caracterstico de la desnaturalizacin de la bilis esculina. Enterococcus faecalis

BACILOS GRAM POSITIVOS AEROBIOS

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Bacillus megaterium

Pruebas realizadas
Prueba de amilasa: utilizando agar almidn, se siembra el B. megaterium en cuatro puntos equidistantes. Se deja incubar, y luego para definir si hubo o no consumo de almidn, y por ende presencia de amilasa en la bacteria, se aade yodo de Gram. La prueba positiva muestra un halo incoloro en donde hubo crecimiento.

Prueba de gelatina: permite medir la presencia de gelatinasa. Si luego de cierto tiempo de refrigeracin, la gelatina sigue en estado lquido, es indicativo de que la prueba result positiva, y que la bacteria posee la enzima gelatinasa. En este caso, el B. subtilis no posee la enzima gelatinasa, y por ende, el medio se solidific en refrigeracin.