Sunteți pe pagina 1din 200

CAPITOLUL 1 NOIUNI INTRODUCTIVE

1.1. DEFINIIA I OBIECTUL BIOCHIMIEI


n accepiunea general, biochimia este tiina modern care studiaz materia vie i fenomenele specifice acesteia sub raportul compoziiei, naturii, organizrii moleculare, asamblrii i corelaiilor biomoleculelor componente, precum i al proceselor de degradare i biosintez a acestor biomolecule prin care se genereaz i se consum energia necesar vieii. BIOCHIMIA MATERIA VIE
(BIOMOLECULE COMPONENTE) COMPOZIIE NATUR ORGANIZARE MOLECULAR ASAMBLARE PROCESE DE DEGRADARE I BIOSINTEZ CORELAII

Biochimia este tiina care se ocup cu studiul bazelor moleculare ale vieii, adic investigheaz materia vie n unitatea ei structural i funcional, unitate care rezid att din similitudinea compoziiei chimice a sistemului de organizare biochimic, ct i din cea a proceselor biochimice comune tuturor formelor de via.
9

Prin coninutul i evoluia sa, biochimia este o tiin complex, cu caracter interdisciplinar, caracter ce reiese din impactul i raporturilor sale cu alte tiine, precum chimia organic, chimia fizic, biologia celular, fiziologia i care-i confer biochimiei noi coordonate.

1.2. CARACTERISTICILE BIOCHIMICE ALE ORGANISMELOR VII


Comparativ cu materia nevie, organismele vii se caracterizeaz printr-un ansamblu de principii i trsturi definitorii de organizare i funcionare la nivelul moleculelor, cum ar fi: - sunt sisteme deschise, adic se afl n permanent schimb de materie, energie i informaie cu mediul ambiant i au drept caracteristic definitorie metabolismul, concept care definete esena material i dinamismul vieii; - posed un grad nalt de organizare i complexitate, adic sunt alctuite din diferite tipuri de molecule i macromolecule cu structuri variate i funcii specifice; - reprezint o stare calitativ superioar att sub aspectul naturii, structurii i modului de asamblare a biomoleculelor componente, dar mai ales sub aspectul interaciunilor dintre coleciile de molecule specifice; - au capacitatea unic de a extrage i de a transforma energia din mediul ambiant, adaptnd-o i utiliznd-o pentru edificarea propriilor structuri i pentru meninerea organizrii structurale; - au capacitatea de autoreplicare precis din generaie n generaie, n forme identice ca mas, conformaie, structuri interne i proprieti; - pentru toate organismele vii, celula este unitatea morfologic i funcional ce conine echipamentul de baz complet pentru meninerea i continuitatea vieii.

10

1.3. COMPOZIIA CHIMIC A ORGANISMULUI ANIMAL


Toate organismele vii au compoziia chimic elementar de baz comun i reprezentat prin bioelemente i biomolecule. 1.3.1. BIOELEMENTE n compoziia materiei vii intr n mod constant 27 de elemente chimice (din cele 100 cunoscute), denumite bioelemente eseniale, care se mpart n: a) macroelemente sau bioelemente plastice (constitutive); b) microelemente sau oligoelemente. Macroelementele sunt nemetale (C, H, O, N, P, S, Cl) i metale (Na, K, Ca, Mg), au o pondere de circa 99% din masa organismului i intr n structura tuturor celulelor, esuturilor i lichidelor biologice. Dintre macroelemente, atomul de carbon reprezint elementul primordial n structura chimic a tuturor compuilor caracteristici materiei vii i are urmtoarele proprieti eseniale: - configuraie tetraedric ce i permite s formeze structuri sau reele tridimensionale; - are capacitatea de a forma legturi covalente stabile de tip C C sau legturi covalente ntre atomi de carbon i atomi de O, N, H, S, rezultnd o varietate de molecule. Microelementele sau oligoelementele, dei reprezint numai 1% din totalul bioelementelor, sunt componente structurale ale unor biomolecule importante (enzime, vitamine, hormoni, pigmeni). Din aceast categorie fac parte: I, F, B, Br, Mn, Fe, Co, Cu, Zn, Sn, Si, Mo, Se, As. Carena acestora determin o serie de dereglri metabolice. 1.3.2. BIOMOLECULE Biomoleculele sunt un ansamblu de molecule de diverse tipuri integrate n structura morfologic a materiei vii i care condiioneaz organizarea structural i funcional a organismului animal. Fiecare clas
11

de biomolecule ndeplinete n celul roluri bine determinate, specifice i ele sunt rezultatul seleciei pe scara evoluiei, fiind cele mai potrivite pentru funcia lor biologic. n funcie de natura, structura, dimensiunile i rolurile pe care le ndeplinesc, biomoleculele se clasific n dou categorii: - biomolecule anorganice; - biomolecule organice. 1.3.2.1. Biomolecule anorganice Din aceste biomolecule fac parte: apa i srurile minerale. I. Apa n organismul animal Apa este constituentul primordial, indispensabil vieii, deoarece constituie mediul celular lichid n care se desfoar toate reaciile biochimice specifice materiei vii. Ea este distribuit diferit n esuturi i lichide biologice, cum ar fi: plasm sanguin, limf i suc gastric 95%, muchi i piele 80%, ficat i plmni 75%, creier 70%. Activitatea metabolic normal la nivel celular necesit minim 65% ap. n organism apa se gsete sub dou forme: - apa liber, care se gsete n compartimentele extracelulare, respectiv spaii interstiiale i lichide circulante intravascular (snge i limf); - apa legat (de constituie), care se gsete n compartimentele intracelulare i particip la alctuirea structurii celulare i a mediului celular. Apa are proprieti fizico-chimice unice care decurg din asimetria electric i din caracterul bipolar al moleculelor, caracteristici ce au drept urmare asocierea acestora prin legturi de hidrogen: H H H :O H ... :O H ... :O H ...

12

Datorit acestor proprieti apa ndeplinete n organism urmtoarele roluri: este unul dintre cei mai buni solveni biologici pentru o multitudine de substane (mai puin pentru compui nepolari); rol structural, deoarece particip la constituia ansamblului celular, la organizarea morfologic a celulei i la formarea coloizilor celulari; disociaz i genereaz ioni H3O+ i HO, necesari n procesele de tamponare, n meninerea echilibrului acido-bazic i n biocataliz; particip direct n reacii de hidratare, hidroliz i redox; rol transportor, deoarece este mediul de vehiculare a diferitelor substane n organism; rol termoreglator, prin procesele respiraie i transpiraie, meninnd temperatura organismului n limite constante. Proveniena apei este n general exogen, doar o mic parte provenind din reaciile biochimice (origine endogen). II. Srurile minerale Srurile minerale se gsesc n cantiti variabile, dizolvate sau nedizolvate, n toate celulele, esuturile i lichidele biologice din organismul animal, sub form de cloruri, ioduri, carbonai, fosfai, sulfai, urai etc. Ele ndeplinesc n organism roluri foarte variate, cum ar fi: structural (intr n structura esutului osos i a dinilor - Ca, P, Mg, F), efectori enzimatici (activatori: Cl sau inhibitori: Hg2+, Pb2+), reglator (componente structurale ale unor hormoni i vitamine - Co, P, I), stimuleaz funcia de reproducere (Se) i digestia (Cl), intervin n energetica celular ( PO 3 4 ) i n meninerea pH-ului n limite constante (Na, K, Mg, Ca). n celul, cationii i anionii se menin ntr-un echilibru dinamic, n funcie de activitatea fiziologic.

13

1.3.2.2. Biomolecule organice Biomoleculele organice conin n structura lor atomi de C, H, O i eventual N, P, S, prezint o diversitate de structuri i ndeplinesc o multitudine de roluri n organism. Principalele clase de biomolecule organice specifice tuturor organismelor vii sunt: glucide lipide protide acizi nucleici enzime vitamine hormoni compui macroergici compui organici intermediari. Aceste biomolecule ndeplinesc n cadrul celulei diferite roluri i anume: structural - intr n structura celulei, membranelor i formaiunilor intracelulare, determinnd prin ansamblarea lor edificiul molecular al celulei (glucide, lipide, protide); biocatalitic - particip la desfurarea coordonat i la reglarea tuturor reaciilor chimice necesare activitii celulare (enzime); informaional - stocheaz, transmit i exprim informaia ereditar (acizii nucleici); energetic - servesc drept combustibil celular i, n urma proceselor proprii de degradare, elibereaz energia necesar funciilor vitale ale celulei, energie nglobat i stocat n compui macroergici (ATP,GTP); reglator - moduleaz activitile biochimice ale celulei, ca reglatori ai diferitelor procese (vitamine, hormoni). Ca dimensiuni, biomoleculele acoper un domeniu extrem de larg, iar forma i caracteristicile lor sunt extrem de importante pentru participarea lor la edificarea componentelor structurale ale celulei, precum i pentru specificitatea interaciunilor lor biochimice. n tabelul 1.1 este redat distribuia cantitativ a principalelor clase de biomolecule organice n diferite esuturi.
14

Tabelul 1.1 Distribuia cantitativ (valori procentuale medii) a principalelor clase de biomolecule organice n diferite esuturi esut Muchi Ficat Creier Piele Oase Snge Protide (%) 22 22 10 25 19 18 Lipide (%) 5 3 14 7 prezente 1 Glucide (%) 0,6 2 0,1 prezente prezente 0,1

Dei materia vie prezint grade diferite de complexitate structural i funcional, exist totui o schem unic de organizare biochimic i biologic. Ca rezultat al procesului evolutiv, aceast schem reflect creterea gradului de complexitate organizatoric n urmtoarea ierarhie: atomi molecule simple macromolecule complexe supramoleculare celule indivizi populaii specii ecosisteme. Formarea biomoleculelor organice este un proces unic care, n prima etap, pornete de la precursori chimici anorganici (molecule simple cu mase moleculare mici, ca: CO 2, H2O, N2, NO 3 , NH3) ce sunt convertii n metabolii intermediari (compui organici cu mas molecular mic: 50 150 Da, care apar n cursul proceselor metabolice). n a doua etap, metaboliii sunt transformai n molecule simple fundamentale (uniti structurale cu mas molecular cuprins ntre 100 350 Da, ca: oze, acizi grai, glicerol, aminoacizi, nucleotide). n etapa a treia, prin condensarea unui numr mare de molecule simple rezult macromoleculele (cu mase moleculare mari de 103 109 Da, cum ar fi poliglucide, lipide, proteine, acizi nucleici etc.). Urmtoarea treapt de organizare structural sunt sistemele supramoleculare (ca rezultat al asocierii macromoleculelor prin legturi chimice slabe de tipul celor de hidrogen, legturi ionice, prin fore Van

15

der Waals sau interaciuni hidrofobe). Se formeaz astfel ribozomii, complexele multienzimatice, lipoproteidele. Ultimul nivel de organizare l reprezint asamblarea acestor sisteme supramoleculare n formaiuni intracelulare (organite celulare ca: nucleu, mitocondrii, reticul endoplasmatic, lizozomi). Acest nivel marcheaz formarea celulei, cea mai mic entitate care manifest atributele strii de viu. Schematic, procesul unic al organizrii moleculare care ilustreaz trecerea de la forma chimic la forma biologic de micare a materiei este prezentat n figura 1.1.
PRECURSORI ANORGANICI: CO , CHIMICI H O, NH , ,N
2 2 3 2

M=18-64 Da

METABOLII INTERMEDIARI:
ACID PIRUVIC; ACID CITRIC, GLICERALDEHID-3 FOSFAT etc. M=50-150 Da

MOLECULE SIMPLE FUNDAMENTALE:


OZE, ACIZI GRAI, GLICEROL, AMINOACIZI, MONONUCLEOTIDE M=100-350 Da

MACROMOLECULE:
POLIGLUCIDE, LIPIDE, PROTIDE, ACIZI NUCLEICI M=103-109 Da

SISTEME SUPRAMOLECULARE:
RIBOZOMI, COMPLEXE MULTIENZIMATICE M=106-109 Da

FORMAIUNI INTRACELULARE:
NUCLEU, MITOCONDRII, LIZOZOMI, RETICUL ENDOPLASMATIC

CELULA 16

Figura 1.1 - Schema organizrii moleculare n celul

1.3.2.3. Celula Celula constituie unitatea de baz structural, funcional i genetic a tuturor organismelor vii. Sub aspect biochimic, celula reprezint o constelaie de macromolecule, molecule mici i ioni care se asambleaz dup un program genetic i care se gsesc n raporturi biochimice de strict condiionare i interaciune reciproc. Organizarea i funcionarea acestor componente biochimice ale celulei este asociat cu particularitile infrastructurii celulare i aceast corelaie legic ntre topografia i topochimia celulei determin proprietile sale fundamentale i anume: autoansamblarea; autoreglarea; autoreproducerea; autointegrarea. Caracterul esenial pe care se bazeaz diferenierea celulelor l reprezint natura mediului intracelular sau nivelul de organizare intracelular. Din acest punct de vedere celulele se clasific n dou tipuri principale: procariote i eucariote. Celulele procariote sunt considerate ca fiind primul tip de organism viu i care au organizarea intern cea mai simpl (tipul reprezentativ l constituie bacteriile i algele). Celulele eucariote reprezint un stadiu avansat n evoluia celulei vii i se caracterizeaz printr-un nalt grad de organizare structural intern specific (existena unor particule subcelulare distincte numite organite celulare, a unui sistem de membrane interne care delimiteaz organitele i compartimenteaz spaiul intracelular, a unui aparat genetic localizat n nucleu, delimitat de restul celulei, procese respiratorii localizate n mitocondrii etc.) n grupul celulelor eucariote se ncadreaz i celulele de origine animal i de aceea considerm necesar pentru lucrarea de fa s facem o prezentare general a topografiei celulei eucariote animale, preciznd totodat i funciile majore ale fiecrui compartiment subcelular, dup cum urmeaz: a) membrana plasmatic, care formeaz conturul celulei i delimiteaz mediul intern de cel extern al celulei. Este de natur
17

lipoproteic i regleaz transportul selectiv de substane intra- i extracelular, asigur homeostazia metabolic a celulei i meninerea n limite compatibile cu activitatea celular a presiunii osmotice, a concentraiei diferitelor componente i contribuie totodat la coordonarea intra- i intercelular (receptori membranari) a proceselor biochimice; b) citoplasma (citosol) este masa celular solubil ce nconjoar nucleul, constituit din dou componente: componenta nestructurat (citoplasma fundamental) i componenta structurat (organitele celulare). Este constituit dintr-o mare varietate de macromolecule, molecule, ioni i asigur traficul n cadrul celulei a produilor de sintez i de degradare biochimic, stabilind interaciuni biochimice ntre diferitele compartimente i formaiuni intracelulare; c) nucleul este cea mai mare i mai dens formaiune subcelular delimitat de o membran dubl cu numeroi pori nucleari. n spaiul interior al nucleului (nucleoplasma) se afl inclus nucleolul i granulele de cromatin ce reprezint sediul informaiei genetice pstrat n ADN, transmis celulei prin procesul secvenei ANDARNprotein, replicat pentru asigurarea perpeturii celulei prin procesul de biosintez a ADN; d) reticulul endoplasmatic reprezint o reea de canalicule i vezicule aplatizate, legate de membrana plasmatic, ce traverseaz celula. Exist dou tipuri de reticul endoplasmatic: neted i rugos (asociat cu ribozomii). Ribozomii sunt complexe nucleoproteice (alctuite din 65% acizi ribonucleici i 35% proteine) i reprezint sediul biosintezei proteinelor. Reticulul endoplasmatic particip la procesul de biosintez a proteinelor (prin intermediul complexului macromolecular numit polizom), ca i la transportul proteinelor i a altor substane prin celul, precum i la procese de detoxifiere celular; e) aparatul Golgi (dictozomii) reprezint o reea de tubuli sau vezicule aplatizate, limitate la regiuni restrnse din citoplasm i localizate de obicei lng nucleu. Funciile atribuite aparatului Golgi se refer la: acceptarea proteinelor biosintetizate la nivelul ribozomilor, concentrarea acestora i mpachetarea lor n granule dense, ce sunt ulterior secretate n lichidul extracelular, colectarea i asamblarea proteinelor necesare pentru biosinteza membranei lizozomilor, reprezint totodat sediul biosintezei heteropoliglucidelor; f) mitocondriile sunt particule infracelulare a cror mrime, form i numr variaz de la o celul la alta, constituite dintr- o membran dubl (una extern i alta intern), care delimiteaz un spaiu intermembranar, denumit spaiu matriceal. Din punct de vedere biochimic mitocondria este sediul metabolismului celular aerob (care
18

include cele trei procese biochimice fundamentale: ciclul Krebs, oxidarea acizilor grai i respiraia celular cuplat cu fosforilarea oxidativ), fiind considerat adevrat central energetic a celulei, reprezint sediul biosintezei ureei i hemului la animale i are aparat genetic propriu (AND mitocondrial i ribozomi proprii), fiind capabil s transcrie pro-gramul genetic (ADN-ARN); g) lizozomii sunt organite de form neregulat delimitate de o membran neted care le individualizeaz n spaiul citoplasmatic i servesc la transportul proteinelor i la degradarea intracelular a substanelor captate n celul prin fagocitoz (bacterii) sau pinocitoz (proteine, glucide, lipide i acizi nucleici); h) incluziunile citoplasmatice din care fac parte peroxizomii (particule citoplasmatice cu rol oxidativ, care conin oxidaze productoare de H2O2 i catalaza care descompune H2O2) i constitueni facultativi (sub form de granule, picturi, cristale sau vacuole care sunt rezultatul activitii metabolice a celulei: granule de protein, de melanin, leucocite granulare, picturi de lipide etc.); i) citoscheletul (microtubuli i microfilamente) reprezint un sistem de fibre pe care l au toate celulele, cu compoziie chimic special, care menine structura celulei i permite n acelai timp modificarea formei sau chiar micarea moleculelor celulei motoare (miozina, kinezina etc.) Organizarea ultrastructural a celulei eucariote este redat n figura 1.2.

19

Figura 1.2 - Ultrastructura celulei eucariote

20

CAPITOLUL 2 GLUCIDE
2.1. CONSIDERAII GENERALE
Glucidele (zaharurile) sunt categoria de biomolecule prezente n absolut toate tipurile de celule i organisme. n general sunt compui ternari, fiind alctuite din carbon, hidrogen i oxigen, i au formula general empiric (CH2O)m, ceea ce le-a atras denumirea improprie de hidrai de carbon, deoarece exist i excepii (de exemplu, deoxiriboza). Glucidele de origine vegetal sunt sintetizate de ctre plantele verzi direct din dioxid de carbon i ap sub aciunea luminii, n procesul de fotosintez i constituie componentele de baz ale hranei omului i animalelor, respectiv importante surse de energie. Glucidele existente n organismul animal se gsesc n cantiti mici (3% din masa corporal), sunt de natur exogen i au urmtoarele funcii: energetic, deoarece prin degradarea lor furnizeaz 50 70% din energia total care se produce n organismul animal; structural, deoarece intr n constituia substanei fundamentale a esutului conjunctiv sub form de gliconjugate cu proteinele (proteoglicanii), dar i n structura unor biomolecule de importan major: coenzime, glicolipide, acizi nucleici; surse de atomi de carbon, necesari biosintezei proteinelor, lipidelor, acizilor nucleici.

21

2.2. CLASIFICARE
Glucidele pot fi clasificate dup mai multe criterii, astfel: a) dup structura lor chimic pot fi: polihidroxialdehide, polihidroxicetone sau produi de condensare ai acestora; b) dup gradul de complexitate structural se mpart n: oze sau glucide simple; glucide complexe sau ozide. Ozele sunt glucidele care prin hidroliz nu mai pot fi scindate n molecule cu proprieti de glucide. Glucidele complexe sunt moleculele rezultate prin condensarea unui numr variabil de oze, respectiv 2 - 10 oze identice sau diferite i se numesc oligoglucide, sute sau chiar mii de oze i se numesc poliglucide. Din categoria glucidelor complexe fac parte deasemenea proteoglicanii, care sunt heteroglucide n sensul c alturi de componenta glucidic conin n structura lor i o component neglucidic numit aglicon. c) dup rolul pe care-l ndeplinesc n organismul viu sunt glucide de rezerv (de depozit) i glucide de constituie.

2.3. OZE
Ozele sunt glucidele cele mai simple care constituie unitile structurale ale glucidelor complexe. 2.3.1. STRUCTURA OZELOR

22

Ca structur ozele sunt polihidroxialdehide care conin n mole-

cul o grupare funcional aldehid

polihidroxicetone, care conin n molecul o grupare ceton ( C = O ) i se mai numesc cetoze. Pe lng gruparea carbonil, toi cei-lali atomi de carbon din structura unei oze au legat cte o grupare hidro-xil ( HO ). Deoarece conin numr variabil de atomi de carbon, ozele pot fi: trioze (C3), tetroze (C4), pentoze (C5), hexoze (C6), heptoze (C7). Ozele pot prezenta o structur aciclic (linear) i una ciclic. Structura linear este acea structur a ozelor care presupune c toi atomii din molecul se gsesc n acelai plan. Prin convenie s-a numerotat cu cifra 1 atomul de carbon din gruparea aldehid i cu cifra 2 cel din gruparea ceton. Structura ciclic este rezultatul unei reacii de adiie intramolecular a atomului de hidrogen de la gruparea OH a penultimului sau ultimului atom de carbon la dubla legtur carbonilic, reacie urmat de ciclizare (pentoze i hexoze). n urma acestei reacii, n molecula ozei respective se creeaz un ciclu de tip furan (4 atomi de C i unul de O), iar structura se numete furanozic sau un ciclu de tip piran (5 atomi de C i unul de O) i structura este piranozic.

C = O I H

i se mai numesc aldoze sau

n acelai timp apare un hidroxil nou la atomul de carbon carbonilic, numit hidroxil semiacetalic (la aldoze) sau semicetalic (la cetoze). Acest hidroxil semiacetalic sau semicetalic poate avea orientare spaial diferit fa de planul ciclului creat, orientare sau . Aceti doi noi
23

izomeri poart numele de anomeri, iar transformarea unuia n cellalt, mutarotaie. Astfel, glucoza prezint urmtoarele structuri posibile:

Structurile liniare i ciclice ale celor mai importante oze din celula vie: Trioze:

Pentoze:

24

Hexoze:

25

26

2.3.2. PROPRIETI FIZICE I CHIMICE ALE OZELOR 2.3.2.1. Proprieti fizice n general, ozele sunt substane solide, cristalizate, de culoare alb, cu gust dulce, uor solubile n ap i insolubile n solveni organici nepolari (eter, cloroform) . Au n structura lor cel puin un atom de carbon asimetric (adic un atom de carbon cu cele patru valene satisfcute de atomi sau radicali diferii, notat C*), de aceea ozele sunt considerate molecule chirale (asimetrice). Moleculele chirale stabilesc relaia de nesuperpozabilitate cu imaginea lor n oglind i se mai numesc enantiomere. Datorit asimetriei moleculare, ozele sunt substane optic active, adic au proprietatea de a roti planul luminii polarizate, atunci cnd sunt strbtute de aceasta i deci de a se prezenta sub forma a dou tipuri de izomeri optici: dextrogiri - sunt enantiomerii care rotesc planul luminii polarizate spre dreapta i se noteaz cu D sau (+) i levogiri, care rotesc planul luminii polarizate spre stnga i se noteaz cu L sau (). De exemplu, aldehida gliceric se poate prezenta sub forma urmtoarei perechi de enantiomeri:

Amestecul echimolecular de izomeri optici levogiri i dextrogiri se numete racemic i este optic inactiv. Racemicul poate fi ns dedublat n cei doi antipozi optici (+) i (). Ozele care difer prin configuraia unui singur atom de carbon asimetric se numesc oze epimere. Spre exemplu, glucoza, fructoza i manoza sunt epimere:

27

n cazul n care ntr-o molecul exist mai muli atomi de carbon asimetrici, numrul izomerilor optici se calculeaz dup formula: N=2n unde n = numrul atomilor de C*. 2.3.2.2. Proprieti chimice Fiind compui cu funciune mixt, carbonil i hidroxil, ozele prezint proprieti chimice specifice acestor grupri. Dintre acestea voi meniona numai reacia de reducere, de oxidare, de eterificare i esterificare datorit importanei biochimice att a reaciilor n sine, ct i a produilor care se formeaz. I. Reacia de reducere: ozele pot fi reduse la gruparea carbonil, transformndu-se n polialcooli (alditioli). Astfel glucoza se reduce la sorbitol, manoza la manitol, iar aldehida gliceric la glicerol.

28

II. Reacia de oxidare a ozelor are loc n condiii diferite de reacie i n funcie de acestea, respectiv de gruparea funcional care se oxideaz, rezult acizi carboxilici onici, zaharici i uronici.

Posibilitatea de oxidare a ozelor demonstreaz totodat caracterul lor reductor, datorat prezenei n molecul a gruprii aldehid (respectiv hidroxilului glicozidic). Ele pot reduce uor ionii de Cu2+ n mediu alcalin (reactivul Fehling) sau ionii de Ag+ n mediu alcalin (reactivul Tollens), cu formarea oxidului cupros Cu2O, precipitat rou-crmiziu, respectiv a argintului metalic.
29

III. Reacia de eterificare este reacia de eliminare de ap ntre hidroxilul glicozidic al unei oze i gruparea hidroxil a unui alcool cu formarea unei legturi de tip eter, numit legtur glicozidic. Rezult glicozizi sau eteri.

IV. Reacia de esterificare: n celula vie ozele sunt esterificate cu acid fosforic la gruparea OH de alcool primar sau la hidroxilul semiacetalic. Se obin esterii fosforici, adic forma activ a ozelor, bogat energetic, sub care ele particip n toate procesele metabolice. Cei mai importani esteri fosforici ai ozelor implicai n procesele metabolice de biosintez i degradare sunt: esteri ai triozelor:

esteri ai pentozelor:

30

esteri ai hexozelor:

Alturi de esterii fosforici care sunt considerai derivai ai ozelor rezultai n urma reaciei de esterificare, exist i derivai aminai ai ozelor, respectiv aminoglucidele. Acetia conin o grupare amin la atomul de carbon C2, grupare ce poate fi n unele cazuri acetilat sau sulfonat. Cele mai importante aminoglucide sunt: glucozamina, galactozamina i acidul neuraminic. 2.3.3. EXEMPLE DE OZE Ozele cu importan biochimic n organism sunt hexozele: glucoza, galactoza, fructoza, manoza. Glucoza: este principala oz din organismul animal; are rol energetic important, deoarece prin degradarea sa (glicoliz) genereaz energie care este stocat sub form de ATP (compus macroergic); este distribuit n toate celulele i lichidele organismului animal (cu excepia urinei); concentraia glucozei din snge se afl n limite constante (80 120 mg/100 ml), se numete glicemie i este asigurat prin aciunea antagonist a celor doi hormoni pancreatici: insulina (rol hipoglicemiant) i glucagonul (rol hiperglicemiant). Creterea coninutului de glucoz din snge determin diabetul zaharat. Galactoza: dei n cantitate mai mic, are rol foarte important pentru organism, deoarece, alturi de glucoz, intr n structura lactozei, principal surs energetic pentru sugari;

31

particip la structura lipidelor complexe (galactocerebrozide) ntlnite n creier i esutul nervos sau la structura glicoproteidelor. Fructoza: reprezint 30 - 60% din aportul glucidic la mamifere; se gsete liber n miere, fructe i melas, iar alturi de glucoz intr n structura zaharozei. Manoza: intr n structura unor glicoproteide i glicolipide din organismul animal, precum i a unor poliglucide vegetale (manani).

2.4. OLIGOGLUCIDE
Oligoglucidele sunt biomolecule formate dintr-un numr restrns de oze (2 - 8), cele mai importante pentru organismul animal fiind diglucidele. Diglucidele sunt cei mai simpli compui glicozidici rezultai prin condensarea a dou molecule de oze identice sau diferite. n structura lor apare o legtur glicozidic de tip eter, format fie prin condensarea hidroxilului semiacetalic al unei oze cu un hidroxil alcoolic al altei oze (diglucide reductoare), fie prin condensarea hidroxilului semiacetalic al unei oze cu hidroxilul semiacetalic al celeilalte oze (diglucide nereductoare). n figura 2.1 sunt redate exemple de diglucide reductoare i rolul lor biochimic, iar n figura 2.2 sunt redate exemple de diglucide nereductoare i rolul lor biochimic.

2.5. POLIGLUCIDE
Poliglucidele sunt macromolecule formate prin condensarea unui numr mare de oze identice (homoglicani). Din aceast categorie fac parte: amidonul, glicogenul i celuloza. Poliglucidele conin n structura lor uniti diglucide repetitive de acelai fel: - n(maltoz) n cazul amidonului i glicogenului; - n(celobioz) n cazul celulozei.
32

Pot avea structur liniar (celuloza) sau ramificat (amidon, glicogen).


DIGLUCIDE REDUCTOARE
(au proprieti reductoare datorit OH glicozidic liber)

MALTOZA:
este format din dou molecule de -glucoz legate C1 - C4; se gsete n seminele germinate de cereale, ndeosebi n orzul ncolit (mal); este unitatea diglucidic ce intr n structura amidonului; este scindat hidrolitic de enzima maltaz n ozele componente.

CELOBIOZA:
rezult prin condensarea a dou molecule de -glucoz, C1 - C4; este unitatea diglucidic structural a celulozei; este scindat de enzima celobiaz.

LACTOZA: IZOMALTOZA:
este format din dou molecule de glucoz legate C1 - C6; este constituentul structural al amilopectinei i glicogenului. este format din -galactoz i glucoz condensate C1 - C4; este diglucidul principal din lapte sintetizat de glanda mamar; este scindat de enzima lactaz din pancreas n ozele componente.

33

Figura 2.1
DIGLUCIDE NEREDUCTOARE
(nu posed nici o grupare hidroxil glicozidic liber i nu au caracter reductor)

ZAHAROZA:
este format prin condensarea -glucozei cu fructoza i apariia legturii C1 - C2; se gsete n cantiti importante n fructe, sfecla de zahr, miere; sub aciunea acizilor diluai sau a enzimei zaharaz este scindat hidrolitic i rezult un amestec echimolecular de -glucoz i fructoz, numit zahr invertit.

TREHALOZA:
este format din dou molecule de glucoz legate C1 - C1; este diglucidul specific pentru alge i ciuperci.

Figura 2.2

Constituie substane energetice de rezerv pentru organism. Sunt scindate hidrolitic pn la unitile structurale de baz (oze) de ctre enzime numite glicozidaze (hidrolaze). Glicogenul este produs de condensare al -glucozei, constituind rezerva de glucoz a organismului animal. Localizarea lui este predominant hepatic (glicogen hepatic), dar n anumite cantiti se gsete i n muchi (glicogen muscular).

34

Glicogenul este alctuit din uniti repetitive de maltoz (-glucoz legat C1 - C4), iar dup 6 - 7 resturi de glucoz la periferia moleculei i 3 - 4 resturi de glucoz n partea central a moleculei se stabilesc legturi glicozidice C1 - C6, determinnd o ramificare puternic a macromoleculei de glicogen. Structura schematic a moleculei de glicogen este:

n funcie de necesitile organismului, celula hepatic stocheaz glucoza sub form de glicogen sau o elibereaz pentru a reface glicemia (concentraia de glucoz din snge). Glicogenogeneza i glicogenoliza contribuie la meninerea glicemiei i sunt procese supuse unui complex mecanism de reglaj hormonal. n stare pur se prezint sub forma unei pulberi albe, solubil n ap, cu care formeaz soluii coloidale opalescente. Cu iodul formeaz coloraie rou-brun. Amidonul este poliglucidul de rezerv specific unor plante, constituind n acelai timp una dintre sursele de glucoz importante pentru organismul animal. La plante este stocat n semine sau tuberculi, fiind mobilizat hidrolitic, pe cale enzimatic, n cursul germinrii sau nmuguririi. Ca i glicogenul, este un produs de policondensare al glucozei. Este alctuit din dou componente:

35

- amiloza, constituit numai din uniti de maltoz, cu o structur neramificat; reprezint 30% din macromolecul; este solubil n ap, iar cu iodul se coloreaz n albastru nchis; - amilopectina, care reprezint 70%, are o structur ramificat, coninnd i uniti de izomaltoz (ramificarea intervine dup 25 - 30 resturi de glucoz); formeaz la cald soluii apoase, vscoase, care prin rcire se transform n gel; cu iodul se coloreaz n albastru-violet. Hidroliza enzimatic a amidonului n organism sau in vitro decurge treptat, cu fragmentarea moleculei i formarea unor compui numii dextrine, apoi maltoz i n final -glucoz: Amidon Dextrine Maltoz -glucoz. Celuloza este un produs de policondensare al -glucozei, avnd ca unitate repetitiv celobioza. Celuloza este compusul organic cel mai abundent de pe pmnt. Este foarte rezistent la hidroliz i intr n structura elementelor de rezisten din peretele celular vegetal. Celuloza poate fi degradat de un numr redus de microorganisme i protozoare capabile s produc un sistem enzimatic complex, celulozolitic, n care mai multe enzime acioneaz sinergic, hidroliznd macromolecula pn la glucoz. Prezena acestor microorganisme n rumenul i colonul animalelor ierbivore le face capabile s utilizeze celuloza ca surs major de hran.

2.6. PROTEOGLICANII
Proteoglicanii (heteroglicanii) sunt produi de policondensare a mai multor tipuri de uniti structurale i conin 95% lanuri glucidice i doar 5% component proteic. Sunt compui polianionici, cu mai multe fragmente poliglucidice grefate pe un miez proteic. Dei pn n prezent sunt recunoscute ase clase de glucozaminoglicani, anumite proprieti sunt comune tuturor substanelor cu compoziia menionat. Catenele heteropoliglucidice neramificate sunt constituite din uniti diglucidice repetitive, n care una din componente este o hexozamin, iar cealalt un acid uronic (o hexoz oxidat la C6, care devine COOH). O alt caracteristic o constituie gruprile sulfat, ataate fie prin legturi de tip amid la gruparea NH2 a ozelor aminate, fie prin legturi ester la grupri
36

OH. Gruprile carboxil de la acizii uronici, ca i gruprile sulfat contribuie la formarea sarcinii polianionice ridicate a proteoglicanilor. Att sarcina electric, ct i structura macromolecular sunt utile n exercitarea rolului biologic de lubrifiani i elemente de rezisten n esutul conjunctiv. Proteoglicanii formeaz soluii foarte vscoase i elastice, absorbind mari cantiti de ap. Aceasta face ca ei s acioneze att ca elemente de susinere a celulelor, ct i s contribuie la meninerea echilibrului apei i srurilor n organism. Acidul hialuronic se deosebete de ceilali proteoglicani prin faptul c nu conine grupri sulfat i nu se gsete legat de fragmente proteice. Spre deosebire de ceilali proteoglicani, el nu este specific celulei animale, fiind produs i de unele bacterii. Unitatea repetitiv din acidul hialuronic este alctuit din acid -glucuronic C1-N-acetilglucozamina C3:

Acidul hialuronic se gsete n lichidul sinovial, corpul vitros al ochiului, cordonul ombilical, n substana fundamental a esutului conjunctiv i n cartilaje. Condroitin sulfatul, din tendoanele cartilaginoase, ligamente, peretele aortei, creier, rinichi, plmni, are n unitatea repetitiv acid -glucuronic C1-N-acetilglucozamina-4sulfat C3:

37

Heparina, a crei unitate repetitiv este prezentat mai jos, are rol de anticoagulant i hipolipemiant:

Dermatan sulfatul i keratan sulfatul se gsesc n piele, pereii vaselor de snge, valvele cardiace. Prezint asemnri structurale cu condroitin sulfatul. Dermatan sulfatul prezint acid iduronic n locul acidului glucuronic:

38

CAPITOLUL 3 LIPIDE
3.1. CONSIDERAII GENERALE
Lipidele constituie acea clas de compui organici naturali, extrem de variat din punct de vedere structural, cu caracter hidrofob, apolar i respectiv proprietatea de a fi insolubile n mediu apos, dar solubile n solveni organici (cloroform, eter, benzen etc.). Din punct de vedere chimic, lipidele sunt esteri sau amide (ntr-o msur mai mic), ai acizilor grai cu diferii alcooli (se mai numesc lipide saponificabile). Sunt distribuite n toate celulele organismului animal, proporia i compoziia lor fiind caracteristic fiecrui tip de esut. Deasemenea produsele de origine animal, ca untul, laptele, oule, se difereniaz prin predominana calitativ i cantitativ a anumitor tipuri de lipide. Din punct de vedere biochimic lipidele ndeplinesc n organismul viu urmtorul rol: constituie o important surs de energie (au valoare energetic superioar glucidelor i protidelor); au rol plastic, respectiv intr n structura diferitelor componente celulare i infracelulare, iar n asociaie cu proteinele formeaz unitatea structural de baz a membranelor celulare i particulelor subcelulare; constituie un nveli protector al multor organe (sunt izolatori termici i mecanici); particip direct sau indirect la diferite procese metabolice ca activatori ai unor enzime, componente ale sistemului de transport al electronilor n mitocondrii etc.;

39

funcioneaz ca sistem de transport n lichidele biologice pentru substane liposolubile (vitamine liposolubile, hormoni, acizi grai eseniali).

3.2. CLASIFICARE

Exist mai multe criterii de clasificare pentru lipide, conform schemei urmtoare:
LIPIDE

N FUNCIE DE LOCALIZARE:

N FUNCIE DE ORIGINE:

LIPIDE DE CONSTITUIE (STRUCTUR) intr n citoplasma celulelor, membranelor i formaiunilor subcelulare; nu variaz funcie de starea de nutriie a organismului;

LIPIDE DE REZERV sunt localizate n esutul adipos i reprezint surs de energie pentru organism; variaz cantitativ n funcie de factorii alimentari i fiziologici;

LIPIDE EXOGENE (prin asimilaie) provenite prin aport alimentar utilizate pentru formarea de lipide proprii

LIPIDE ENDOGENE (proprii) provenite prin reacii de biosintez

N FUNCIE DE STRUCTURA CHIMIC:

LIPIDE SIMPLE (C, H, O) N FUNCIE DE NATURA ALCOOLULUI CONSTITUENT

LIPIDE COMPLEXE (C, H, O, N, P, S) N FUNCIE DE NATURA ALCOOLULUI CONSTITUENT

GLICERIDE

CERIDE

STERIDE

GLICEROFOSFOLIPIDE

SFINGOLIPIDE

3.3. COMPONENI CHIMICI STRUCTURALI


Principalii componeni chimici structurali ai lipidelor sunt acizii grai monocarboxilici (RCOOH) i anumii alcooli.

40

41

3.3.1. ACIZI GRAI n structura lipidelor animale intr n exclusivitate acizi grai cu urmtoarele caracteristici: au numr par de atomi de carbon (de la 4 la 26); radicalul alchil (R) este constituit dintr-un lan hidrocarbonat cu lungime variabil (21-30 atomi C), cu structur liniar, ciclic sau ramificat, avnd caracter saturat sau nesaturat (cu una, dou, trei sau patru duble legturi); radicalul alchil (R) constituie partea hidrofob a moleculei, iar gruparea carboxil (COOH) partea hidrofil; radicalul alchil (R) al unor acizi grai poate avea grefat i gruparea hidroxil (OH), rezultnd hidroxiacizi. Acizii grai saturai se gsesc distribuii n proporii variate n diferite esuturi i produse de origine animal, au caten linear saturat (4-30 atomi C), sunt solizi, iar punctele de topire cresc o dat cu creterea numrului de atomi de carbon din molecul. Exemple de acizi grai saturai foarte rspndii: acid butiric (C4) CH3(CH2)2COOH (n unt); acid miristic (C14) CH3(CH2)12COOH (majoritatea grsimilor naturale); acid palmitic (C16) CH3(CH2)14COOH (majoritatea grsimilor naturale); acid stearic (C18) CH3(CH2)16COOH (majoritatea grsimilor animale). Acizii grai nesaturai sunt mai rspndii n natur dect cei saturai, sunt lichizi (cu excepia acidului oleic care este semisolid), iar din punct de vedere fiziologic cei mai importani sunt acizii grai nesaturai cu 18 atomi de carbon. Acizii grai nesaturai cu structur linear sunt monocarboxilici, conin una sau mai multe duble legturi, au puncte de topire mai mici dect cei saturai cu acelai numr de atomi de carbon.

42

Exemple de acizi grai nesaturai cu caten linear:


Denumirea acidului Numr atomi C Formula Numrul i poziia dublelor legturi ( )

Palmitoleic Oleic Linoleic Linolenic Arahidonic Nervonic

16 18 18 18 20 24

CH3(CH2)5CH=CH(CH2)7COOH CH3(CH2)7CH=CH(CH2)7COOH CH3(CH2)4CH=CHCH2CH=CH (CH2)7COOH CH3CH2CH=CHCH2CH=CHCH2 CH=CH(CH2)7COOH CH3(CH2)4CH=CHCH2CH=CHCH2 CH=CH CH2CH=CH(CH2)3COOH CH3(CH2)7CH=CH(CH2)13COOH

9 9 9,12 9,12,15 5,8,11,14 15

Acizii: linoleic, linolenic i arahidonic sunt indispensabili pentru creterea, dezvoltarea i funcionarea normal a organismului animal i de aceea au fost denumii acizi grai eseniali (A.G.E.) sau vitamine F. Ei particip la formarea membranelor celulare, la metabolismul mitocondrial, intr n structura fosfolipidelor, sunt precursori ai prostaglandinelor. Prostaglandinele (PG) fac parte dintr-o clas special de acizi grai nesaturai denumii eicosanoizi, deoarece au catena format din 20 atomi de carbon. PG predomin n organele genitale i n plasma seminal, dar se gsesc i n esuturile altor organe: creier, inim, rinichi, uter, stomac, placent. Au rol hormonal (stimuleaz sinteza hormonilor n unele glande endocrine), stimuleaz contracia musculaturii netede (uter gravid, vezic urinar), exercit aciune vasodilatatoare, scznd presiunea sanguin, diminueaz aciditatea gastric, intervin n reglarea temperaturii corporale etc. Principala proprietate general a acizilor grai este caracterul lor hidrofob, deci nu sunt solubili n ap datorit catenei lungi de atomi de carbon puternic nepolar i care anuleaz caracterul polar al gruprii carboxil. Acizii grai pot reaciona cu hidroxizii alcalini (NaOH, KOH), la cald, reacie cunoscut sub numele de saponificare, i formeaz spunuri (sruri de sodiu sau potasiu) cu proprieti tensioactive i deci ageni exceleni de emulsionare. Deasemenea acizii grai se pot esterifica, iar

43

cei nesaturai vor adiiona la nivelul dublelor legturi atomi de hidrogen, halogeni, oxigen. 3.3.2. ALCOOLI Alcoolii care intr n constituia lipidelor (denumii i lipide nesaponificabile) pot fi clasificai n trei categorii, n funcie de structura chimic, dup cum urmeaz:
ALCOOLI ALCOOLI ALIFATICI NEAZOTAI: glicerina (glicerolul) din lipidele simple i complexe

ALCOOLI CICLICI mioinozitolul

alcoolii cetilic, cerilic, miricilic (din structura ceridelor)

intr n structura inozitidelor sterolii (au nucleu de baz ciclul steran - C17H28)

intr n structura steridelor ALCOOLI AMINAI (AMINOALCOOLI): colina colamina HO CH2 CH2 NH2

intr n structura lipidelor complexe sub form de esteri fosforici serina sfingozina H3C (CH2)12 CH = CH | H C OH | intr n structura glicerofosfolipidelor H C NH2

44

| CH2OH intr n structura sfingolipidelor

Trebuie subliniat faptul c alcoolii policiclici (sterolii) fac parte din clasa steroizi (steroide) i au diferite grupri chimice grefate pe nucleul steran care le confer activiti biologice variate. Dup origine, sterolii pot fi: a) zoosteroli (de origine animal: colesterolul, lanosterolul, copro-sterolul); b) fitosteroli (de origine vegetal: sitosterol, stigmasterol); c) micosteroli (din levuri, ciuperci i mucegaiuri: ergosterolul). Colesterolul este principalul sterol de origine animal distribuit, sub form liber sau esterificat n toate celulele organismului. Predomin n esutul nervos (creier, mduva spinrii), n glbenuul de ou, n calculii biliari, n piele, n glandele suprarenale. Este de origine exogen, dar i endogen, fiind sintetizat din acetilcoenzima A.

n organismul animal colesterolul are un rol biochimic deosebit de important i anume: prin esterificare cu acizi grai superiori formeaz lipidele complexe denumite colesteride; intr n structura biomembranelor celulare i contribuie la permeabilitatea acestora; acioneaz asupra permeabilitii eritrocitelor, influennd procesele de difuzie;

45

este antitoxic i antihemolitic (neutralizeaz efectul unor toxine sau inhib aciunea hemolitic a unor substane ptrunse n organism); are rol izolator n tecile de mielin, influennd transmiterea influxului nervos; este precursorul metabolic (provitamina) vitaminei D3; este precursorul metabolic primar al acizilor biliari i al hormonilor sexuali i corticosuprarenali. Concentraia normal de colesterol din snge se numete colesterolemie. n stri de hipercolesterolemie se intensific depunerea lui n esuturi (xantomatoza), favoriznd apariia aterosclerozei. Acizii biliari reprezint un ansamblu de compui steroizi secretai de bil n intestin sub form de sruri alcaline (sruri biliare). Acizii biliari sunt produii finali ai metabolizrii colesterolului la nivelul ficatului i ulterior sunt deversai n bil. Structura chimic de baz din care deriv acizii biliari este acidul colanic:

n funcie de numrul i de poziia gruprilor OH grefate pe molecula acidului colanic deriv mai multe tipuri de acizi biliari: acidul colic (3,7 i 12 OH); acidul deoxicolic (3,12 OH); acidul litocolic (3 OH). Acizii biliari se conjug n ficat la nivelul gruprii carboxil (COOH) cu aminoacizii glicocol (HOOCCH2NH2) sau taurin (H2NCH2CH2SO3H) i rezult acidul glicocolic i taurocolic, sub
46

form de sruri de Na i K denumite sruri biliare. Srurile biliare sunt secretate n bil i deversate n intestin, unde acioneaz ca ageni de emulsionare a lipidelor alimentare, uurnd astfel scindarea enzimatic i absorbia acestora prin transformarea lor n picturi foarte fine cu interior hidrofob i exterior hidrofil. Ca i spunurile, srurile biliare sunt substane tensioactive care micoreaz tensiunea superficial de la suprafaa lipidelor insolubile n mediu apos, ducnd la apariia agregatelor micelare.

3.4. ACILGLICEROLII (GLICERIDE)


Gliceridele sunt lipidele simple cele mai rspndite, ele intrnd n componena tuturor celulelor animale i vegetale i constituind forma de depozit a lipidelor la animale i plante. 3.4.1. CONSIDERAII GENERALE n organismul animal sunt n general gliceride de rezerv, localizate n esutul adipos i mai puin gliceride de constituie, reprezentnd astfel sursa major de energie pentru organism. Sunt buni izolatori termici i mecanici cu rol de protecie n organism, iar n combinaie cu proteinele (particule lipoproteice) servesc ca transportori ai acizilor grai (via sistem limfatic i snge) n organism. Din punct de vedere al structurii chimice gliceridele sunt esteri ai glicerolului cu diferii acizi grai, esterificarea avnd loc la o grupare hidroxil din molecula glicerolului (i rezult monoglicerid), la dou grupri hidroxil (diglicerid) sau la trei grupri hidroxil (triglicerid). Dintre toate gliceridele, trigliceridele sunt cele mai rspndite n organismul animal. Structura general a unei trigliceride este:

47

n care: R, R1 i R2 sunt radicali ai acizilor grai constitueni, identici sau diferii. Trigliceridele naturale de origine animal sunt mixte, innd seama de acizii grai constitueni. O astfel de triglicerid mixt ce conine acid palmitic n poziia , acid oleic n poziia i acid stearic n poziia ' are urmtoarea structur:

Denumirea ei clasic este palmitoleostearin sau palmitoil- oleoil-' stearoilglicerol. 3.4.2. PROPRIETI GENERALE ALE TRIGLICERIDELOR Proprietile trigliceridelor (fizice i chimice) sunt determinate de natura acizilor grai pe care i conin. Din punct de vedere al strii de agregare, cele cu acizi grai nesaturai sunt lichide (uleiuri - gliceride vegetale), iar cele cu acizi grai saturai sau cu acizi grai nesaturai, dar cu dublele legturi n poziia trans sunt solide sau semisolide (unturi i seuri - gliceride animale).

48

Din punct de vedere al proprietilor chimice, trigliceridele vor da reacii caracteristice legturilor ester i dublei legturi (dac acizii grai constitueni sunt nesaturai). Hidroliza trigliceridelor are loc fie chimic (sub aciunea unor acizi minerali), fie enzimatic, sub aciunea lipazelor, cu eliberarea glicerolului i acizilor grai constitueni.

Hidroliza are loc de fapt n trepte, cu eliberarea succesiv a acizilor grai , ' i n final . Saponificarea este o reacie de hidroliz n mediu alcalin, n urma creia se elibereaz spunuri (sruri ale acizilor grai)

Indicele de saponificare reprezint cantitatea de KOH n miligrame necesar pentru a saponifica un gram de triglicerid. Acest indice (Is) permite caracterizarea compoziiei chimice, respectiv a naturii acizilor grai ce intr n structura trigliceridelor. Valoarea indicelui de saponificare este invers proporional cu masa molecular a trigliceridei, respectiv cu masa molecular a acizilor grai constitueni (cu lungimea catenei de atomi de carbon). Saponificarea este procesul care st la baza obinerii spunurilor. Hidrogenarea este o proprietate caracteristic trigliceridelor de natur vegetal, uleiurilor lichide, care conin preponderent acizi grai nesaturai. Prin adiia catalitic de hidrogen la dublele legturi, acetia se transform n acizi grai saturai, solizi. Pe aceast proprietate se bazeaz procesul industrial de obinere a margarinelor din uleiuri vegetale. Ca urmare a procesului de hidrogenare, vitaminele liposolubile, inclusiv
49

acizii grai eseniali (vitamine F) sunt distruse. De aceea margarinele trebuie s fie mbogite ulterior cu aceste vitamine liposolubile (A, D, E). Halogenarea trigliceridelor nesaturate decurge dup acelai mecanism ca i hidrogenarea, ele adiionnd brom sau iod. Indicele de iod este o mrime ce caracterizeaz gradul de nesaturare al trigliceridelor. El reprezint cantitatea de iod n grame care se adiioneaz la 100 g trigliceride. Rncezirea este un proces natural, complex, de degradare pe care l sufer uleiurile i grsimile n timp, n condiii necorespunztoare de conservare. Sub aciunea umezelii i a unor microorganisme care se instaleaz, trigliceridele sunt parial hidrolizate. Acizii grai nesaturai eliberai pot fi oxidai cu oxigenul din aer la dublele legturi i rezult astfel acizi grai i aldehide-acizi cu mase moleculare mici.

De asemenea, prin oxidarea acizilor grai pot rezulta i acizi -cetonici, care prin decarboxilare formeaz metil-cetone cu C8 - C12.

Toi aceti produi rezultai (acizi grai cu mase moleculare mici, mai ales acidul butanoic, aldehide-acizi i metil-cetone) confer mirosul caracteristic, neplcut, de rnced.

50

Procesul de rncezire poate fi prevenit cu ajutorul unor substane antioxidante naturale, cum sunt tocoferolii, vitamine E, carotenii care inhib procesul de rncezire.

3.5. CERIDE
Ceridele, numite i ceruri, sunt esteri ai acizilor grai cu alcooli superiori. Structura lor general poate fi reprezentat astfel: R1 O CO R2 R1 = radical al alcoolului R2 = radical al acidului gras Att acizii grai, ct i alcoolii conin 16-34 atomi de carbon. Ceridele sunt secretate de diferite organe ale plantelor: frunze, tulpini, fructe. Ele se depun pe suprafaa acestora, avnd rol protector. De asemenea, ceridele pot fi ntlnite i la unele organisme animale. Astfel, ceara de albine, lanolina de pe lna oilor sunt amestecuri de ceride caracteristice acestor specii. Fiind solide i mai puin uleioase la atingere dect grsimile, cerurile sunt folosite n industria farmaceutic i cosmetic, precum i pentru obinerea unor alifii, unguente i creme de lustruit.

3.6. STERIDE
Steridele sunt lipide simple constituite din acizi grai superiori (preponderent palmitic, oleic i linoleic), esterificai cu alcooli policiclici (steroli). Dac alcoolul este colesterolul, esterificarea are loc la gruparea OH de la C3 i produsul de reacie se va numi colesterid. Steridele sunt componente existente n cantiti mici n toate celulele organismului animal, inclusiv n produse de origine animal: lapte, ou.

3.7. GLICEROFOSFOLIPIDE

51

Glicerofosfolipidele sunt lipide complexe, n structura lor particip sub form esterificat acizi grai, glicerol, acid fosforic, precum i un alt alcool cu mas molecular mic, n special un aminoalcool. Ele sunt lipide de constituie, intr n structura membranelor plasmatice. Acestea sunt alctuite de fapt din 40-50% fosfolipide i 50-60% proteine, precum i din glicolipide. Alcoolii ce pot intra n structura fosfolipidelor sunt: colina, colamina, serina i inozitolul. n funcie de natura celui de-al doilea alcool, glicerofosfolipidele se mpart n : lecitine (colinglicerofosfolipide), care conin colin cefaline (colaminglicerofosfolipide), care conin colamin seringlicerofosfolipide, care conin serin inozitolglicerofosfolipide, care conin inozitol. Structura general poate fi reprezentat astfel:

Cele mai rspndite sunt lecitinele i cefalinele. Acizii grai ntlnii cel mai frecvent n structura lor sunt acidul stearic, acidul palmintic i acidul oleic.

52

De obicei n poziia este esterificat un acid gras nesaturat (acid oleic). Aceast structur confer glicerofosfolipidelor att un caracter amfoter (sunt amfioni), ct i un caracter amfipatic. Caracterul amfipatic este determinat de prezena unei componente hidrofobe, liposolubil (catenele celor doi acizi grai) i a unei componente hidrofile, solubile n ap (fosforil-colina, fosforil-colamina, respectiv fosforil-serina). Datorit acestor dou componente, moleculele se pot orienta diferit n structurile celulare, formeaz straturi duble de lecitine i cefaline n care sunt apoi incluse macromolecule de proteine. De asemenea, sunt incluse molecule de steroli, precum i de glicolipide. n felul acesta ele alctuiesc structura membranelor plasmatice, determinndu-le permeabilitatea, fenomenele de osmoz i de transport activ al diferitelor biomolecule n interiorul organismului. Prezena macromoleculelor proteice orientate pe suprafaa extern a membranei, pe suprafaa intern a sa, incluse n interiorul membranei sau pe ntreaga grosime a acesteia, determin tocmai permeabilitatea membranelor plasmatice. Proteinele din structura membranelor sunt n acelai timp biochimic i biologic active. Ele pot fi enzime sau complexe enzimatice specifice, pot fi receptori pentru mesagerii chimici de lumin, presiune sau excitaii mecanice, sau pot fi proteine transportoare ale substanelor hidrofile. n felul acesta membranele plasmatice i ndeplinesc rolul lor complex de a asigura compartimentarea celular, precum i transportul diferitelor substane att din mediu spre celule i invers, ct i ntre citosol i organitele celulare. n organism colinfosfolipidele i colaminfosfolipidele sunt scindate hidrolitic sub aciunea unor fosfolipaze i rezult lizolecitina i lizofosfatidilcolamina cu aciune hemolizant. Dintre glicerofosfatide lecitinele i cefalinele se gsesc n toate celulele organismului animal, preponderent n creier i n glbenuul de ou.
53

Serinfosfolipidele predomin n esutul cerebral, unde se gsesc alturi de inozitolfosfolipide.

3.8. SFINGOLIPIDE
Sunt lipide complexe care conin obligatoriu un alcool cu 18 atomi de carbon, numit sfingozin (sau omologul su saturat dihidrosfingozina). Sunt lipidele distribuite n special n esutul cerebral, unde particip la constituia membranelor celulare (de regul n amestec cu alte substane). Structura general a unei sfingolipide este de forma:
H 18 H3 C (CH2)12 C = C H HC OH HC NH CO R1 H2 1 C O R2 Sfingolipid

unde: R1 = radical al unui acid gras saturat (lignoceric) sau nesaturat (nervonic); R2 = radical fosforilcolin, fosforilcolamin, galactoz, acid Nacetilneuraminic, legat la C1 din sfingozin. n funcie de natura radicalului R2 exist mai multe tipuri de sfingolipide: sfingomieline, care conin fosforilcolin sau fosforilcolamin; cerebrozide, care conin -galactoz sau -glucoz; sulfatide, care conin galactozo-2sulfat; gangliozide, care conin acid N-acetilneuraminic. Dintre acestea cele mai abundente i importante sfingolipide sunt sfingomielinele care intr n structura tecilor de mielin, ndeplinind datorit caracterului lor hidrofob rol de izolatori ai tecilor de mielin din axoni.

54

Cerebrozidele, sulfatidele i gangliozidele pot fi ncadrate n categoria glicoconjugatelor i au funcii celulare importante: par s intervin n specificitatea de esut i de organ, n recunoaterea celul-celul, n imunitatea tisular sau n restaurarea excitabilitii esutului la impulsurile nervoase, pierdut prin congelare sau prin inhibare cu proteine bazice.

55

CAPITOLUL 4 PROTIDE
4.1. CONSIDERAII GENERALE
Protidele sunt componente chimice primordiale ale materiei vii, compui organici naturali, care prin structura i proprietile lor definesc esena vieii constituind baza material a existenei i a tuturor fenomenelor specifice acesteia. Denumire lor deriv de la cuvntul grecesc proteios care nseamn de prim rang, de cea mai mare importan. Protidele se caracterizeaz prin urmtoarele trsturi definitorii: sunt constituenii universali i indispensabili ai tuturor formelor de via (purttorii materiali ai vieii), asigurnd organizarea, meninerea structurii morfologice i manifestarea funciilor vitale ale celulelor; sunt biomacromolecule alctuite din uniti structurale de baz, numite aminoacizi, legate una de alta prin legturi peptidice ( CO NH ); dei prezint structuri chimice i funcii biologice diferite, sunt alctuite din 20-22 aminoacizi fundamentali, aceiai la toate vieuitoarele, de la cea mai simpl bacterie pn la om; prezint un grad nalt de organizare structural ntr-o permanent interaciune cu sistemele chimice ambiante; se prezint ntr-o mare diversitate de tipuri diferite structural i funcional, ca rezultat al unui numr infinit de posibiliti de organizare molecular; prezint proprieti fizice i biochimice specifice, consecin a organizrii structurale i respectiv a conformaiei spaiale a macromoleculelor;
56

sunt biomacromolecule informaionale implicate n transmiterea informaiei de la o celul la alta sau de la un organism la altul; se afl ntr-o strns interdependen cu acizii nucleici, n sensul c biosinteza proteinelor se realizeaz pe baza informaiei genetice stocat n ADN, iar unele protide sunt enzime implicate n procesul de biosintez al acizilor nucleici. Datorit gradului nalt de diversitate structural, protidele ndeplinesc funcii fundamentale, specifice organismelor vii, cum ar fi:

PROTIDE
COMPONENTE PLASTICE: particip la realizarea i meninerea structurii celulelor, membranelor i formaiunilor intracelulare BIOCATALIZATORI (ENZIME) prezint activitate enzimatic, cataliznd reaciile biochimice de sintez i degradare din organism. HORMONI particip la reglarea proceselor metabolice PIGMENI RESPIRATORI transport pe cale sangu-in oxigenul molecular la esuturi sau depoziteaz oxigenul n muchi. SISTEME TAMPON intervin n meninerea echilibrului acido-bazic (meninerea pH-ului n limite fiziologice) n organism PURTTORI MATERIALI AI TUTUROR NSUIRILOR BIOLOGICE intervin n procesele de difereniere, cretere, dezvoltare i reproducere celular TRANSPORTORI ndeplinesc funcii de transport i depozitare a ionilor metalici, vitamine, oxigen, dioxid de carbon SUBSTANE DE SUSINERE I REZISTEN MECANIC ndeplinesc funcii mecanice n oase, piele, muchi, vase sanguine ANTICORPI confer imunitate organismului contra unor ageni patogeni externi

SUBSTANE CU ROL CONTRACTIL ndeplinesc activitatea contractil i locomotoare

57

Din punct de vedere al compoziiei chimice elementare, majoritatea protidelor sunt substane cel puin cuaternare (C, H, O, N); unele conin sulf i fosfor, iar altele conin metale (fier, cupru, magneziu etc.) Distribuia protidelor n organismul animal difer n funcie de organ i specie, deci sunt organo-specifice i specie-specifice.

4.2. CLASIFICARE
Clasificarea protidelor se face dup mai multe criterii, conform schemei urmtoare:
PROTIDE

N FUNCIE DE CONFORMAIE I MORFOLOGIE:

N FUNCIE DE STRUCTUR:

PROTEINE FIBRILARE: keratin e (din piele, pr, unghii, coarne, ln, pene) colagen (din tendoane, esut conjunctiv) miozina (din muchi) fibroina (din mtase)

PROTEINE GLOBULARE: enzi me antic orpi horm oni albu mine fibri nogen hemo globin

PEPTIDE oligopeptid e (2-10 aminoacizi) polipeptide (10-100 aminoacizi)

PROTEIDE holoproteide (proteine) heteroproteide: au pe lng gruparea proteic i o component neproteic (prostetic)

4.3. COMPONENI CHIMICI STRUCTURALI


Unitatea structural de baz a protidelor o reprezint aminoacizii legai prin legturi covalente numite legturi peptidice ( CO NH).

58

59

4.3.1. AMINOACIZI Structura fiecrei protide se caracterizeaz printr-un numr finit i variabil de aminoacizi. Natura, numrul, proporia i secvena aminoacizilor constitueni determin diversitatea enorm a tipurilor de protide. 4.3.1.1. Structur, clasificare i rol biochimic Aminoacizii sunt compui biochimici cu funcie mixt, deoarece conin o grupare funcional carboxil (COOH) i o grupare funcional amin (NH2), ambele grefate la acelai atom de carbon din poziia (C2).
R H C NH2 COOH

n funcie de particularitile structurale ale radicalului R, aminoacizi se clasific astfel:


1. AMINOACIZI ACICLICI: a) AMINOACIZI MONOAMINOMONOCARBOXILICI CU RADICAL (R) ALIFATIC:

60

b) AMINOACIZI MONOAMINOMONOCARBOXILICI CU O GRUPARE HIDROXIL (HIDROXIAMINOACIZI):

c) AMINOACIZI MONOAMINOMONOCARBOXILICI CU SULF (TIOAMINOACIZI):

d) AMINOACIZI MONOAMINODICARBOXILICI:

e) AMINOACIZI DIAMINOMONOCARBOXILICI:

61

2. AMINOACIZI CICLICI a) AMINOACIZI HOMEOCICLICI (CU NUCLEU AROMATIC):

b) AMINOACIZI HETEROCICLICI:

62

n funcie de caracterul pe care-l manifest catenele laterale (R) aminoacizii componeni ai protidelor naturale se clasific n: a) aminoacizi cu catene apolare: glicocol, alanin, leucin, izoleucin, metionon, fenilalanin, triptofan; b) aminoacizi cu catene polare: serina, treonina, cisteina, tirozina, asparagina, glutamina; c) aminoacizi cu catene ionizabile: acidul aspartic, acidul glutamic, lizina, arginina, prolina. n organismul animal au fost identificai aminoacizi care nu intr n structura protidelor, dar care au rol important n celul: fie sunt componeni structurali ai altor biomolecule (-alanina, acidul -aminobutiric), fie sunt produi intermediari n diferite reacii biochimice (citrulina, ornitina, homocisteina, dihidroxifenilalanina). Importana fundamental a aminoacizilor const n participarea lor n structura proteinelor. Biosinteza proteinelor proprii specifice organismului animal este direct corelat cu aportul de aminoacizi exogeni, provenii din hran. Organismul animal nu poate sintetiza dect aproximativ 50% din setul de aminoacizi necesari biosintezei proteinelor proprii, restul de aminoacizi fiind procurai prin hran (proteine alimentare aminoacizi proteine biosintez proprii). degradare Din acest punct de vedere aminoacizii pot fi clasificai n trei categorii: a) aminoacizi eseniali (indispensabili pentru creterea i dezvoltarea normal a organismului, care nu se pot sintetiza i deci trebuie procurai prin hran); b) aminoacizi semieseniali (sunt sintetizai n cantiti nesatisfctoare n organism i trebuie suplimentai prin hran); c) aminoacizi neeseniali (sunt sintetizai de organism i pot lipsi din hran). Dintre aminoacizii eseniali amintim: valina, leucina, metionina, lizina, fenilalanina, treonina, triptofanul, aminoacizi care se gsesc n germenii seminelor de leguminoase, n plantele rdcinoase, dar i n produse animaliere ca: lapte, brnz, ou, carne de pete. Lipsa lor din alimentaie provoac tulburri de cretere i dezvoltare, tulburri de fertilitate, atrofierea unor glande.
63 hidrolitic

Alimentaia animalelor trebuie s fie complet i echilibrat n aminoacizi (respectiv proteine) cu valoare alimentar complet. Pentru aceasta este nevoie de cunoaterea precis a calitii sursei de protein, nivelului proteic optim al raiei, valoarea aminoacidului limitativ. Echilibrarea raiei proteice se face prin adugarea la nutreurile vegetale a aminoacizilor de sintez sau a proteinelor de origine animal (fin de oase, de carne, de snge, de pete, de scoic). 4.3.1.2. Proprietile generale ale aminoacizilor a) Aminoacizii sunt substane optic active (cu excepia glicocolului), deoarece au n molecula lor cel puin un atom de carbon asimetric (C) la care sunt legate cele dou grupri funcionale, amino i carboxil; b) Aminoacizii n totalitate prezint o anumit solubilitate n ap, datorit celor dou grupri (NH2 i COOH) care determin n soluie apoas polarizarea aminoacizilor (amfiioni):

Gradul de solubilitate n ap variaz n funcie de natura radicalului R i de pH-ul soluiei. Totodat aminoacizii sunt puin solubili n solveni organici.
Variaia solubilitii aminoacizilor n ap i solveni organici n funcie de natura lor este utilizat n separarea, identificarea i determinarea lor cantitativ prin tehnica de analiz fizico-chimic numit cromatografie.

c) Aminoacizii sunt substane cu caracter amfoter (deoarece se gsesc n soluie sub form de amfiioni), astfel n mediul acid se comport ca baze (acceptori de protoni), iar n mediu bazic se comport ca acizi (donatori de protoni). Ionii astfel formai migreaz sub aciunea unui cmp electric spre catod (K) sau anod (A+) n funcie de valoarea pH-ului soluiei.

64

cmp electric
+

cmp electric

A aminoacid exist o valoare K Pentru fiecare de pH numit pH izoelectric (pHi), la care sarcina net a moleculei este zero (numrul sarcinilor pozitive este teoretic egal cu cel al sarcinilor negative) i drept urmare aminoacizii nu migreaz n cmp electric. Valoarea pHi depinde de structura aminoacidului i la aceast valoare solubilitatea aminoacidului este minim. d) Aminoacizii, datorit caracterului amfoter, constituie sisteme tampon (au aciune de tamponare) foarte eficiente pentru meninerea constant a pH-ului celular. e) Aminoacizii sunt biomolecule cu reactivitate chimic mare datorit prezenei n structura lor att a gruprii carboxil, ct i a gruprii amino. Datorit gruprii carboxil (COOH) aminoacizii reacioneaz cu: bazele (NaOH) i formeaz sruri; alcoolii i formeaz esteri; amoniacul i formeaz amide; aminele i rezult amide substituite; elimin CO2 (decarboxilare) i rezult amine. n organismul animal reaciile de decarboxilare a aminoacizilor (catalizate de enzimele specifice - aminoacid decarboxilaze) conduc la formarea de amine biogene care exercit diferite aciuni farmaco-dinamice sau sunt precursori ai unor coenzime, hormoni i vitamine. Unele dintre ele sunt toxice pentru organism (putresceina, cadaverina), fiind prezente n carnea alterat. Datorit gruprii (NH2) aminoacizii pot reaciona cu: 65

alchilderivai halogenai i rezult derivai cuaternari de amoniu; cloruri acide cu formare de amide substituite; dioxidul de carbon i rezult carbamino-derivai (aceast reacie st la baza transportului CO2 de la esuturi la pulmon de ctre aminoacidul lisin din structura hemoglobinei); ninhidrina i formeaz compui colorai n marea lor majoritate albastru intens; 2,4 dinitrofluorbenzenul i rezult 2,4-dinitrofenil derivai colorai n galben. Datorit prezenei ambelor grupri, amino i carboxil, aminoacizii pot condensa ntre ei cu formare de legturi peptidice (CONH) ntre gruparea amino a unui aminoacid i gruparea carboxil a altui aminoacid, rezultnd compui numii peptide.
R1 R2 R3 H2N CH COOH + H2N CH COOH + H2N CH COOH R1 R3 H2N CH CO NH CH CO NH CH COOH R2 TRIPEPTID 2H2O

Moleculele ce conin 2, 3, 4 sau chiar 10 aminoacizi condensai se numesc dipeptide, tripeptide, tetrapeptide, respectiv decapeptide, iar la modul general oligopeptide. Polipeptidele sunt molecule ce conin n structura lor mai mult de 10 aminoacizi condensai, iar proteinele sunt macromolecule cu mase moleculare mari (1103 - 1105) i cu un nalt grad de organizare structural. n structura unui lan peptidic apare ntotdeauna un aminoacid cu gruparea amino liber (se numete a.acid N-terminal), ales prin convenie n stnga lanului i un aminoacid cu gruparea carboxil liber (se numete a.acid C-terminal), ales prin convenie cel din dreapta lanului.

66

4.3.2. PEPTIDE Denumirea peptidelor se stabilete prin indicarea succesiv a denumirii fiecrui aminoacid component al moleculei de peptid cu adugarea sufixului il la fiecare denumire; excepie face numai aminoacidul C-terminal cu grupare carboxil liber, care-i menine denumirea neschim-bat. De exemplu: o tripeptid cu structura: H2N Ala Asp Cis COOH va fi denumit Alanil Aspartil Cistein. Dintre proprietile generale ale peptidelor (oligo i polipeptide) amintim: sunt solubile n mediu apos, oligopeptidele formnd soluii propriu-zise, iar polipeptidele dispersii coloidale; au caracter amfoter i formeaz sruri solubile cu acizii i cu bazele; avnd n constituie cel puin 3 aminoacizi, deci minim dou legturi peptidice, peptidele (att oligo, ct i polipeptidele), reacioneaz cu ionii de cupru n mediu alcalin i formeaz compui cu structur de chelai de culoare albastr (reacia biuretului); prin hidroliz acid sau enzimatic sunt scindate n aminoacizii constitueni. n organismul animal au fost identificate o serie de peptide deosebite prin gradul de complexitate structural i prin funciile biochimice pe care le ndeplinesc. Un tripeptid important pentru organismul viu este glutationul rezultat prin condensarea acidului glutamic, cisteinei i glicocolului.

67

Legarea cistinei de acidul glutamic se realizeaz prin gruparea carboxil din poziia a acidului glutamic. Glutationul se prezint n dou forme structurale distincte: glutation redus (GSH) i glutation oxidat (GSSG). Glutationul oxidat provine din dou molecule de glutation redus care se oxideaz la nivelul gruprii tiol (SH) cu formarea gruprii disulfurice caracteristic cistinei:

Datorit gruprii tiol (SH) libere, glutationul prezint proprieti biologice. Astfel: Glutationul particip la procesele redox din celul prin transfer de hidrogen; Protejaz gruprile tiol (SH) din structura unor enzime contra oxidrii; se comport ca activator al unor enzime SH-dependente; Glutationul poate fi donator de hidrogen pentru anumii compui pe care i trece din stare oxidat n stare redus. n unele procese biochimice, glutationul redus acioneaz ca o coenzim, comportndu-se ca donator de hidrogen; GSH acioneaz ca antioxidant, meninnd n stare redus activ diferii compui (acidul ascorbic, adrenalina, hemoglobina); Glutationul prezint aciune antitoxic; n organismul animal, GSH acioneaz n strns corelaie cu insulina - hormon pancreatic care intervine n reglarea glicemiei.

68

Ocitocina i vasopresina sunt octapeptide ciclice care prezint o mare asemnare din punct de vedere structural. Ocitocina i vasopresina (primii hormoni polipeptidici sintetizai n laborator) sunt peptide cu proprieti hormonale secretate de lobul posterior al hipofizei (neurohipofiz). Ocitocina stimuleaz lactaia i contracia musculaturii netede (muchiul uterin), nlesnind expulzarea ftului. Vasopresina determin constricia vaselor sanguine avnd aciune hipertensiv i regleaz eliminarea apei din organism pe cale renal, prezint proprieti antidiuretice. Dac vasopresina este sintetizat de organism n cantiti insuficiente, se instaleaz diabetul insipid care se manifest prin eliminare exagerat de ap prin urin (poliurie). Polipeptidele sunt constituite din 10-100 aminoacizi. Insulina este o polipeptid cu rol hormonal secretat de pancreas. A fost descoperit de fiziologul romn Nicolae Paulescu cu opt luni naintea canadienilor. Molecula de insulin are o configuraie spaial elicoidal i este constituit din 51 aminoacizi ordonai bicatenar. O caten A este format din 21 aminoacizi i a doua caten B este constituit din 30 aminoacizi. Aceste catene sunt legate intercatenar prin dou puni disulfurice stabilite ntre radicalii de cistein din poziiile 7 ale ambelor catene i respectiv ntre radicalii de cistein din poziia 20 a catenei A i din poziia 19 a catenei B. Exist i o a treia punte disulfur intracatenar, stabilit ntre radicalii cistein din poziiile 6 i 11 ale catenei A. Existena punilor disulfurice intercatenare este determinant pentru activitatea hormonal a insulinei.

Figura 4.1 - Reprezentarea schematic a structurii insulinei

69

Insulina prezint unele variaii structurale n funcie de specie, care se manifest n secvena aminoacizilor din poziiile 8, 9 i 10 ale catenei A. Insulina intervine n reglarea concentraiei de glucoz din snge (glicemie), exercitnd un efect hipoglicemiant. n insuficienta secreie de insulin se declaneaz diabetul zaharat, care se manifest prin creterea glicemiei peste nivelul normal (80-120 mg glucoz/100 ml snge uman) i apariia de glucoz n urin (glicozurie). Glucagonul este un polipeptid cu rol hormonal, secretat de pancreas. Structura glucagonului este alctuit din 29 aminoacizi dispui monocatenar. Spre deosebire de insulin, glucagonul conine metionin i triptofan i nu conine cistein, izoleucin i prolin. Glucagonul are efect hiperglicemiant. Din aciunea antagonic insulin glucagon se regleaz glicemia care astfel se menine n limite normale. O polipeptid recent descoperit n creier este scotofobina, alctuit din 14 aminoacizi i care are rol n procesele de memorare, fiind implicat n codificarea informaiei primite n sistemul nervos central. De asemenea, corticotropina (ACTH sau hormonul adrenocorticotrop) este polipeptid secretat de lobul anterior al hipofizei; este format din 39 aminoacizi i stimuleaz biosinteza i secreia hormonilor steroizi de ctre corticosuprarenal. Hormonul melanocit este polipeptid secretat de lobul anterior al hipofizei i stimuleaz producerea de celule melanocite ale pielii, iar gastrinele sunt polipeptide sintetizate de mucoasa gastric, cu rol n stimularea secreiei gastrice. Printre polipeptidele naturale elaborate de microorganisme se numr antibioticele, care prezint interes n chimioterapia modern, deoarece manifest aciuni de antibiotice, iar amanitina i faloidina sunt peptide extrem de toxice (otrvuri), coninute n unele specii de ciuperci. 4.3.3. PROTEINE Holoproteidele sau proteinele sunt biomacromolecule primordiale ale organismului viu, cu un nalt grad de organizare structural i cu rol fundamental n structura i implicit n funciile celulei. Sunt
70

biocomponente constituite dintr-un numr mare de aminoacizi (legai prin legturi peptidice) al cror tip i succesiune n catena polipeptidic este determinat genetic. Enorma diversitate structural i funcional a proteinelor animale (care poate fi specie-specific i organo-specific) este determinat att de numrul, tipurile i secvena aminoacizilor componeni, ct i de organizarea spaial, configuraional a moleculei de protein. 4.3.3.1. Structura proteinelor Proteinele sunt macromolecule cu structur complex, n care atomii i grupele de atomi constitueni sunt dispui conform unui aranjament spaial conformaional, n cadrul aceleiai configuraii a moleculei de protein (configuraie = dispunerea tridimensional a atomilor n raport cu un anumit centru de referin sau cu o anumit component a structurii considerat rigid; conformaie = modalitatea n care atomii sunt repartizai n spaiu tridimensional, ca o consecin a rotirii acestora n jurul unei legturi simple existente n molecula respectiv). Structura general a proteinelor este determinat de urmtorii factori: a) caracterul legturii peptidice (caracter parial de dubl legtur, datorit delocalizrii electronilor ai legturii C = O); b) geometria legturii peptidice (legtura peptidic, avnd caracter parial de dubl legtur, nu permite o rotaie liber a atomilor de C i N n jurul ei, fapt ce se repercuteaz asupra organizrii spaiale a proteinelor); c) natura catenelor laterale (R) ale aminoacizilor componeni care pot prezenta grupri polare (provenite din gruprile funcionale COOH, NH2, OH, SH) sau nepolare; d) conformaia (organizarea stereospecific). Structura global a macromoleculelor proteice este o rezultant a coexistenei i interaciunii mai multor nivele de organizare, i anume: 1. Primar 2. Secundar 3. Teriar
71

4. Cuaternar. 1. Structura primar este structura de baz a fiecrei proteine i reprezint numrul, tipul, proporia i ordinea aminoacizilor n catena polipeptidic. Ea se caracterizeaz prin: existena legturilor peptidice (CONH) care se stabilesc ntre diferii aminoacizi; existena unei succesiuni (secven) bine definite a aminoacizilor n catenele polipeptidice, secven sub control genetic (prin informaia cuprins n AND); determin configuraia de ansamblu specific fiecrei proteine.

Figura 4.2 - Structura primar a unui lan polipeptidic

2. Structura secundar: reprezint aranjamentul spaial al lanului polipeptidic (evideniat prin studii de microscopie electronic sau analiz cu raze X), aranjament datorat multiplelor legturi de hidrogen intra- i intercatenare ce se stabilesc ntre gruprile NH i CO din legturi peptidice diferite. Formarea acestor legturi de hidrogen este posibil datorit distribuiei diferite a electronilor la nivelul legturii peptidice, legtur care devine parial ionizat, deoarece atomul de O va avea un exces de electroni (), iar atomul de N un deficit de electroni (+). Dei legturile de hidrogen sunt relativ slabe, totui stabilitatea structurii secundare este asigurat prin posibilitatea formrii acestor legturi ntr-un numr mare i prin repartizarea lor uniform de-a lungul catenelor polipeptidice. Structura secundar este reprezentat prin trei modele (conformaii): -helix, n planuri pliate i tip colagen.

72

Modelul -helix rezult prin spiralarea catenei polipeptidice ntr-o elice orientat de la stnga la dreapta (orientare care predomin n structura proteinelor native i este mai stabil din punct de vedere energetic). Aceast structur are urmtoarele caracteristici: pe fiecare spir (tur) sunt 3,6 aminoacizi; distana dintre ture este 5,4 ; toate gruprile NH i CO formeaz legturi de hidrogen; radicalii R ai tuturor aminoacizilor sunt orientai spre exteriorul elicei, deasupra sau dedesubtul planului legturilor peptidice. O astfel de structur se ntlnete n -keratina din firul de pr uman, lna i blana animalelor. Modelul n planuri pliate ( -pliere, foaie -pliat): n aceast structur lanul polipeptidic sufer o ndoire cu un unghi de 90 , care se face n dreptul atomului de C , purttor al gruprilor COOH i NH2 implicate n legturi peptidice. Aceast ndoire (pliere) a lanului polipeptidic determin apariia de legturi de hidrogen intercatenare ntre dou sau mai multe lanuri polipeptidice (ntre atomii de H dintr-o legtur peptidic a unui lan polipeptidic i atomii de O dintr-o legtur peptidic a altui lan polipeptidic), legturi care confer stabilitate acestei structuri. Modelul n planuri pliate este de tip paralel (-keratina) i antiparalel (fibroina din mtasea natural).

73

Figura 4.3 - Conformaia -helix a lanului polipeptidic

Figura 4.4 - Modelul n planuri pliate

Figura 4.5 - Modelul tip colagen


74

Proteinele cu structur -pliere sunt flexibile, dar nu elastice i sunt n general proteinele sub form de filamente (proteine fibrilare). Rezult astfel c -keratina cu structur -pliere este mai relaxat dect -keratina care are o configuraie -helix, ntre ele existnd o transformare reversibil de forma: -keratina (-helix) -keratina (-pliere)

Modelul tip colagen: este conformaie specific colagenului (protein fibrilar prezent n oase, tendoane, cartilaje, esut conjunctiv, constituind aproximativ 30% din totalul proteinelor din organism). Din punct de vedere structural molecula de colagen se prezint ca un superhelix format din 3 lanuri polipeptidice spiralate (triplu helix), fiecare caten spiralat fiind rsucit spre stnga i nfurat att n jurul propriei axe, ct i n jurul axei comune celor trei catene. Fibra de colagen apare astfel ca o funie mpletit a crei stabilitate este realizat prin legturi de hidrogen intercatenare, legturi electrostatice, fore Van der Waals i puni disulfurice, care i confer o rigiditate extrem. Fiecare caten polipeptidic are ca unitate repetitiv un triplet de aminoacizi: glicocol - prolin - hidroxiprolin, care prin structura lor chimic nu permit adoptarea conformaiei -helix sau -pliere, ci faciliteaz adoptarea conformaiei triplu helix. Trei catene polipeptidice formeaz unitatea structural repetitiv a colagenului i care poart numele de tropocolagen. n fiecare molecul de tropocolagen exist dou catene polipeptidice de un tip i una de un alt tip, iar la una din extremitile moleculei se gsesc grupri chimice ionizate. Moleculele de tropocolagen sunt orientate n acelai sens i asociate n fibrile de forma:

75

Figura 4.6 - Structura triplu helix a colagenului

Figura 4.7 - Conformaia unui lan polipeptidic din structura triplu helix a colagenului

76

3. Structura teriar este o organizare spaial complex rezultat prin nfurarea lanului polipeptidic ntr-o suprastructur tridimensional (globular). Proteinele cu structur teriar, respectiv proteinele globulare, prin nfurarea lor, formeaz un miez hidrofob, format din radicali nepolari i o parte extern hidrofil, cu grupri chimice disociabile ale aminoacizilor constitueni. Structura teriar, prin complexitatea sa, include att structura primar, ct i structura secundar (-helix n principal sau -pliere n secundar); ntre structura secundar i cea teriar exist numeroase similitudini, de aceea s-a acreditat i terminologia de structur secundoteriar. Structura teriar a proteinelor globulare poate fi clasificat, n funcie de secvena zonelor cu structuri secundare ordonate, astfel: conformaia , care conine doar catene -helix antiparalele grupate dou cte dou; conformaia , care conine numai catene cu structur -pliat antiparalele; conformaia +, care conine att catene -helix, ct i catene cu structur -pliat plasate n diferite pri ale moleculei. Foaia -pliat este format din lanuri antiparalele, avnd la capete grupate catenele -helix; conformaia /, n care segmente cu structur secundar orientate paralel ntr-o foaie -pliat alterneaz cu segmente cu structur secundar -helix aflate de o parte i de alta a foii pliate. Structura teriar este un stadiu avansat de organizare spaial a structurii proteinelor, a crei complexitate este determinat de existena unor multiple interaciuni chimice intramoleculare, cum ar fi: legturi covalente formate prin puni disulfurice stabilite ntre radicalii de cistein; + legturi ionice stabilite ntre grupri polare ( NH 3 i COO din diferii amoniacizi); legturi de hidrogen nepeptidice;

77

legturi de tip eter, de tip ester, prin fore Van der Waals sau interaciuni hidrofobe; legturi dipol-dipol (stabilite ntre gruprile OH din serin, treonin). Toate aceste legturi sunt ns legturi slabe (cu excepia celor covalente), care confer structurii teriare o anumit labilitate i care se pot desface sub aciunea unor factori fizici sau chimici, fenomen cunoscut sub numele de denaturarea proteinelor, proces nsoit de cele mai multe ori de pierderea proprietilor biologice.

Figura 4.8 - Structura teriar a unei proteine (reprezentare schematic)

4. Structura cuaternar reprezint cel mai nalt grad de organizare molecular a proteinelor, caracteristic proteinelor native, care exist ca agregate moleculare formate din mai multe catene polipeptidice unite n subuniti. Structura cuaternar reprezint asocierea unor catene polipeptidice identice, numite protomeri (care au deja structur primar, secundar, teriar definit), ntr-un ansamblu (agregat) denumit oligomer. n funcie de numrul protomerilor (care pot fi identici sau diferii) proteinele oligomere pot fi dimeri, trimeri, tetrameri. Legturile dintre protomeri se manifest la suprafaa fiecrui protomer, sunt legturi de hidrogen i de tip electrostatic i au rolul de a stabiliza agregatul molecular. Asamblarea proteinei oligomere are loc prin alturarea unor poriuni din suprafaa monomerilor, precizia cu care se realizeaz asamblarea

78

i stabilitatea configuraiei proteinei oligomere fiind asigurate de principiul complementaritii subunitilor. Un exemplu de protein oligomer l constituie componenta proteic a hemoglobinei (Hb) - pigment sanguin - denumit globin. Structura cuaternar a globinei este un tetramer constituit din patru protomeri, respectiv din patru catene polipeptidice: 2 catene identice (fiecare avnd 141 aminoacizi) i 2 catene identice (fiecare avnd 146 aminoacizi). Cei patru protomeri se constituie n cte dou subuniti, fiecare subunitate avnd o caten polipeptidic i una . Asocierea celor patru protomeri pentru formarea structurii cuaternare a Hb este redat prin relaia:

2 +2
monomeri monomeri

tetramer 22

n situaia n care anumii factori fizici sau chimici induc disocierea subunitilor, aceasta presupune totodat modificarea conformaional a proteinei i respectiv pierderea activitii ei biologice. 4.3.3.2. Proprieti generale a proteinelor A. Proprieti fizico-chimice Starea de agregare: n stare pur sunt substane solide, cristaline sau amorfe, stabile la temperatur obinuit, iar la t>50 C se denatureaz. Masa molecular variaz de la cteva mii la milioane de Daltoni (1 Da este unitatea atomic de mas = 1,67 10-24 g). Pentru deter79

minarea masei moleculare se folosesc, ca metode curente, ultracentrifugarea i cromatografia de excludere molecular. Solubilitatea proteinelor: proteinele globulare sunt solubile n ap i n soluii saline, iar cele fibrilare sunt insolubile. Solubilitatea proteinelor depinde de pH-ul i compoziia mediului. Caracterul coloidal: datorit configuraiei macromoleculare proteinele se comport n soluii diluate ca nite coloizi hidrofili (sisteme heterogene constituite dintr-o faz dispersat - proteina care manifest afinitate pentru mediul de dispersie reprezentat de ap). Datorit caracterului coloidal proteinele nu dializeaz prin membrane semipermeabile i se denatureaz reversibil. Disocierea proteinelor: proteinele sunt polielectrolii avnd caracter amfoter (n mediu acid se comport ca baze, iar n mediu bazic ca acizi). Prezena concomitent a ionilor negativi carboxilat (COO) i a + ionilor pozitivi amoniu ( NH 3 ) pe un lan polipeptidic induce proteinelor un caracter amfiionic (ioni bipolari). n funcie de structura primar a fiecrei proteine, ca i de pH-ul mediului, pentru orice protein exist o valoare de pH, numit pH izoelectric (pHi), la care sarcina global a proteinei este zero, starea coloidal se destabilizeaz, iar proteinele prezint solubilitate minim. La pH>pHi sarcina global a proteinei este negativ (anion), iar la pH<pHi sarcina global a proteinei este pozitiv (cation) Comportarea electroforetic: datorit caracterului amfoter proteinele pot migra ntr-un cmp electric, la catod (K ) sau anod (A+), n funcie de sarcina lor global.
+ +

H3N

protein

COO

H+ HO

H3N

cation

COOH
COO

H2 N

A+

anion

Deplasarea n cmp electric a proteinelor d posibilitatea fracionrii lor prin metoda analitic denumit electroforez. Trebuie menionat c la pHi proteinele nu migreaz n cmp electric, deci mobilitatea electroforetic este nul.

80

Comportarea ca sistem tampon: caracterul amfoter al proteinelor d posibilitatea acestora de a se comporta ca sisteme tampon, participnd astfel la meninerea pH-ului fiziologic. Absorbia n ultraviolet: datorit prezenei n molecul a aminoacizilor cu nucleu aromatic (tirozina, de exemplu) proteinele absorb n domeniul ultraviolet la = 280 nm, proprietate utilizat pentru determinarea cantitativ a proteinelor prin metoda spectrofotometric. B. Proprieti chimice Reaciile chimice la care particip proteinele se pot clasifica n patru categorii: Reacii datorate prezenei legturilor peptidice, care pot fi la rndul lor clasificate n: a) reacii de hidroliz: sunt reaciile de scindare hidrolitic a legturilor peptidice, n mediu acid, bazic sau sub aciunea enzimelor proteolitice, cu punerea n libertate a aminoacizilor componeni ai macromoleculei proteice. b) reacia biuretului: proteinele, ca urmare a prezenei legturilor peptidice, reacioneaz cu ionii de Cu2+, n mediu alcalin, formnd combinaii complexe de tip chelat de culoare albastr-violet. Reacii datorate gruprii amino ( NH2) libere: Toi aminoacizii componeni ai proteinelor reacioneaz cu ninhidrina prin intermediul gruprii amino (care se elibereaz sub form de amoniac) i formeaz o coloraie albastr-violet (cu cteva excepii, cum ar fi: prolina, cisteina, hidroxiprolina). Reacii de precipitare: n funcie de natura reactivilor de precipitare, proteinele precipit reversibil i ireversibil. Precipitarea reversibil (salifierea) se realizeaz n prezena unor concentraii mari de electrolii tari, (NH4)2SO4 sau Na2SO4, fr modificarea structurii spaiale, iar dup ndeprtarea agenilor chimici de precipitare proteinele revin la starea lor nativ, fr modificarea proprietilor biologice ale acestora. Precipitarea ireversibil este nsoit de modificri profunde ale structurii proteinelor, care se denatureaz i nu se mai pot redizolva, rmnnd n stare precipitat. Precipitarea ireversibil se poate face cu
81

acizi minerali concentrai (HNO3, HCl), cu acizi organici (acid tricloracetic, picric, sulfosalicilic), cu sruri de metale grele (Pb2+, Hg2+) sau cu solveni organici (aceton, alcool). Reacii datorate catenelor laterale: sunt reacii chimice n care sunt implicai radicalii provenii de la aminoacizii ce alctuiesc structura primar a unei proteine. Aceste reacii sunt diverse, n funcie de natura catenei laterale (esterificare, alchilare etc.) C. Proprieti imunologice. Reacia antigen-anticorp Procesele imunologice se definesc ca reacii de aprare a organismului mpotriva unor microorganisme, toxine sau chiar celule ale organismului care au dobndit caractere anormale. Sistemul imun la om i mamifere cuprinde un ansamblu de macromolecule circulante specifice (anticorpi) i nespecifice (complement, lizozim), precum i celule imunocompetente: properdin, limfocite (de tip T i B), leucocite, macrofage. Sistemul imun asigur realizarea reaciei de aprare a organismului definit ca rspuns imun. n rspunsul imun umoral sunt implicate proteine oligomere numite anticorpi sau imunoglobuline biosintetizate de limfocitele B (produse n mduva osoas) ca rspuns la ptrunderea n organism a unor proteine strine numite antigeni. Limfocitele T (produse n timus i n mduva osoas) intervin n imunitatea mediat celular, interacioneaz cu antigenul i prolifereaz masiv; o parte din ele rmn ca celule cu memorie imunologic, n timp ce alt parte iniiaz distrugerea antigenului prin cooperare cu limfocitele B. Antigenul (Ag) sunt macromolecule strine pentru organismul n care au ptruns i care o dat introduse n organism, pe cale natural sau injectare, declaneaz biosinteza unor proteine specifice de autoaprare numite anticorpi. Antigenul reacioneaz cu anticorpii formai, determinnd reacia antigen-anticorp, reacie prin care este anihilat aciunea nociv a antigenului. Cei mai muli antigeni sunt proteine, peptide, poliglucide sau acizi nucleici. Antigenii conin la suprafa secvene structurale numite determinani antigenici sau epitopi, care sunt recunoscute de ctre anticorpi
82

specifici. Putem spune c antigenul este polivalent, iar determinanii antigenici sunt diferite grupri chimice (NH2, COOH, OH, SH) sau radicali ai unor aminoacizi ciclici.
Figura 4.9 - Reprezentarea schematic a unui antigen (1, 2, 3, 4 sunt determinani antigenici)

Anticorpul (Ac) sau imunoglobulinele (Ig) sunt substane de natur proteic cu rol de aprare, a cror biosintez este declanat de ctre antigen i care posed capacitatea de a reaciona specific cu antigenul care a provocat formarea lor. Sinteza anticorpilor constituie rspunsul imun n cadrul reaciei de aprare a organismului mpotriva antigenilor, iar procesul biochimic de formare a anticorpilor se numete imunizare. Sinteza anticorpilor se realizeaz exclusiv de ctre limfocitele B, iar un antigen declaneaz producerea unei grupe de anticorpi care sunt api s reacioneze cu determinani diferii de pe molecula antigenului. Spre deosebire de antigeni, anticorpii sunt bivaleni, molecula lor coninnd dou situs-uri sau zone de combinare (paratrop) la nivelul crora se leag antigenii.

Figura 4.10 - Reprezentarea schematic a unor anticorpi divaleni

Din punct de vedere structural molecula de imunoglobulin este o protein tetramer constituit din dou lanuri polipeptidice grele identice (H-heavy) i dou lanuri uoare (L - light) identice legate
83

prin legturi disulfurice intercatenare, fiecare din lanuri avnd dou regiuni distincte: una variabil i alta constant. Lanurile grele sunt prevzute cu o regiune flexibil (regiune balama) care conine dou fragmente identice Fab (antigen binding fragment), susceptibile pentru legare la antigen i fragmentul Fc (crystallizable frag-ment), uor cristalizabil i incompatibil pentru legare la antigen.
Ag Ag H2N
Fab 1 Fab 2

NH2 NH2 Lan uor (L)

H2N

HOOC Fc1 HOOC COOH

COOH Fc2

Lan greu (H) Glucide

Figura 4.11 - Schema structural a unei molecule de anticorp

Reacia antigen-anticorp este procesul imunologic de aprare a organismului i se manifest prin neutralizarea antigenilor ptruni n organism. Ea este stereospecific, are la baz complementaritatea epitopparatop i este nsoit de formare de complexe moleculare (precipitine) cu structur ca de reea, ce pot fi solubile sau insolubile. Legturile din complexul Ag-Ac sunt legturi slabe (electrovalente, de hidrogen, legturi Van der Waals), iar interacia dintre antigen i anticorp este caracterizat prin procese de precipitare sau de aglutinare n urma crora se instaleaz o stare de rezisten specific, denumit stare de imunitate. Deci produsul reaciei Ag-Ac este un complex imun, inactiv, conform reaciei:

84

Ag + Ac

Ag - Ac
Complex imun

Figura 4.12 - Diagrama schematic a complexului Ag-Ac

4.3.3.3. Proteine cu importan biologic Ipoteza c n organismele vii exist aproximativ zece miliarde de tipuri de proteine ne ndreptete s subliniem imposibilitatea descrierii i caracterizrii lor n totalitate. Totui s-a ncercat o clasificare general a proteinelor n funcie de morfologia molecular i de solubilitate, astfel:
HOLOPROTEIDE (PROTEINE)

1. PROTEINE GLOBULARE (SOLUBILE): PROTAMINE

2. PROTEINE FIBRILARE

85

HISTONE ALBUMINE GLOBULINE PROLAMINE GLUTEINE

A. INSOLUBILE (SCLEROPROTEINE): KERATINE FIBROINE COLAGENE

B. SOLUBILE: FIBRINOGEN MIOZINA ACTINA TROPOMIOZINA TROPONINA

1. Proteinele globulare se gsesc n celul sub form solubil n citoplasm, n faza lipidic a membranelor celulare, au form elipsoidal sau sferic i sunt solubile n ap. n proteinele globulare secvenele cu structur secundar organizat alterneaz cu secvene fr structur organizat, care permit nfurarea macromoleculei proteice sub forma unui ghem. Dintre proteinele globulare, cele mai simple sunt protaminele (cu M 5 KDa, de natur exclusiv animal - intr alturi de acizii nucleici n cromatina din celulele spermatice ale petilor) i histonele (cu M 20 KDa, se gsesc n stare liber n leucocite i sperma petilor sau asociate cu acizii nucleici n celulele glandulare, n eritrocite i pot fi implicate n reglarea activitii genelor). Albuminele sunt proteine globulare cu mas molecular mare, uor solubile n ap, soluii saline, acizi i baze diluate. Au structur teriar, precipit numai n prezena soluiilor saturate de (NH4)2SO4 sau Na2SO4, iar prin nclzire la 60 - 70C coaguleaz. Sunt rspndite n citoplasm i n diferite lichide i produse biologice, cum ar fi: n plasma sanguin (50 - 60%): serum albuminele; n lapte: lactoalbumina; n albuul de ou: ovalbumina; n esutul muscular: mioalbumina; n semine de leguminoase: legumelina. n organismul animal albuminele ndeplinesc urmtoarele funcii: - regleaz presiunea osmotic a sngelui i a pH-ului sanguin; - asigur transportul unor substane ca: acizi grai, biliari sau unele medicamente; - constituie rezerv de proteine.
86

Globulinele au mas molecular mai mare dect albuminele (M 104 - 105 Da) i cristalizeaz mai greu dect acestea; sunt insolubile n ap, dar solubile n soluii slab saline i slab alcaline; precipit n soluii semisaturate de (NH4)2SO4 (50%) i se denatureaz termic ceva mai greu dect albuminele. n organismul animal se gsesc rspndite n urmtoarele lichide, esuturi i produse biologice: n plasma sanguin (38 - 48%): serumglobuline; n lapte: lactoglobuline; n ou: ovoglobuline; n muchi: miozina (protein contractil). Globulinele din plasma sanguin sunt heterogene, separndu-se prin electroforez n mai multe fraciuni: 1, 2, 1, 2, i -globulinele (n acestea din urm se includ anticorpii). Deasemenea, componenta de natur proteic a diferitelor heteroproteide, cum ar fi: hemoglobina, mioglobina sau citocromii sunt globuline. Prolaminele i gluteinele sunt proteine globulare de natur exclusiv vegetal, avnd coninut ridicat de acid glutamic i aspartic. Se gsesc n boabele de gru, secar, ovz, porumb. 2. Proteinele fibrilare se prezint sub form de molecule filiforme (alungite) care confer organismului rol de susinere, protecie i rezisten mecanic. n organism se gsesc n stare solid i intr n constituia esutului conjunctiv, de susinere i epidermic. Sunt rezistente la aciunea soluiilor saline, acide sau alcaline i nu sunt hidrolizate de enzimele proteolitice. Din proteinele fibrilare insolubile (scleroproteine) fac parte: keratinele care intr n constituia epidermei, prului, coarnelor, copitelor. Sunt proteine cu sulf, insolubile n ap i n soluii saline; fibroina din mtasea natural; colagenele: sunt componente proteice principale ale esutului conjunctiv, ligamente, tendoane, cartilagii, piele i n general ale tuturor esuturilor i organelor. Sunt insolubile n ap, rezistente la aciunea enzimelor proteolitice, iar prin fierbere cu apa fibrilele de colagen sufer modificri structurale profunde, cu desfacerea legturilor intercatenare i

87

a triplului helix i transformarea lor n gelatine, solubile i hidrolizabile de ctre enzimele proteolitice; elastina intr n structura fibrelor elastice din artere i tendoane, dar n comparaie cu colagenul are elasticitate redus (asemntoare cu cea a cauciucului). Nu se transform n gelatine i este degradat de enzima elastaz din extractele pancreatice. Proteinele fibrilare solubile se gsesc n snge i n esutul muscular i intervin n procesul de coagulare a sngelui sau n contracia muscular. Fibrinogenul este o protein fibrilar solubil, hexamer (format din dou lanuri , dou i dou ), cu rol esenial n procesul de coagulare a sngelui. Conversia fibrinogenului solubil n fibrin insolubil se realizeaz conform schemei:
Trombina Fibrinaz

FIBRINOGEN
(SOLUBIL)

Ca

2+

FIBRIN
(INSOLUBIL, SOLID)

TROMBUS (CHEAG)

Acest proces este un lan ntreg de reacii enzimatice care implic cel puin 10 factori i care reprezint procesul de coagulare a sngelui. Miozina este o holoproteid cu structur mixt (globular i fibrilar) care constituie suportul biochimic al contraciei musculare datorit proprietilor sale contractile i mai ales enzimatice (activitate ATP-azic). Exist dou tipuri de miozine: I i II, dar n filamentele musculare groase a fost identificat doar miozina de tip II. Ea are mas molecular mare i este format din trei catene polipeptidice nfurate helicoidal i strnse laolalt ntr-o configuraie rsucit: fiecare din cele trei helixuri paralele se nfoar ntr-un segment terminal cu aspect globular, la una din extremitile moleculei. Un filament de miozin este format dintr-un mnunchi de 80 molecule, decalate aproximativ 6 nm una fa de alta, avnd la extremiti segmentele voluminoase (globulare) care formeaz proiecii de degete dispuse n spiral n jurul mnunchiului. Aceste degete oscilante (de fapt extremitile cu aspect globular) pot lega filamentele de actin, formnd complexul actomiozina.

88

Figura 4.13 - Miozina: seciune transversal i longitudinal

Actina este protein muscular contractil, localizat la nivelul filamentelor subiri; sub aspect structural este un polimer constituit din subuniti globulare (G-actina), cu M = 50 - 60.000 Da, prin polimerizarea crora (la concentraii saline fiziologice) au rezultat filamente de F-actin. Fiecare filament este constituit din dou lanuri nfurate n dublu helix, orientate n acelai sens i conin fiecare 300 - 400 monomeri.

Figura 4.14 - Filament de F-actin

n procesul contraciei musculare, capetele globulare ale miozinei (proieciile de degete) se aga de situsurile active ale filamentelor de F-actin. La acest proces particip i tropomiozina i troponina, polipeptide ce mediaz reglarea contraciei prin intermediul ionilor de calciu. Datorit faptului c 18 - 22% din greutatea esutului muscular o reprezint holoproteidele, s-a ncercat o clasificare a proteinelor fibrei musculare n funcie de localizarea lor histologic: a) Proteinele stromei sunt proteinele care intr n compoziia membranei propriu-zise a fibrei musculare (denumit sarcolem), precum i n compoziia esutului conjunctiv care unete fibrele musculare n fas89

cicule. Acestea sunt: colagenul, elastina i reticulina, mucine i mucoine (acestea din urm asigurnd alunecarea fasciculelor); b) Proteinele miofibrilare sunt proteinele structurale ale esutului muscular care au rol att n activitatea muchiului viu, ct i n comportarea muchiului dup sacrificarea animalului, respectiv n stadiul de rigiditate i maturare a crnii. Aceste proteine miofibrilare sunt reprezentate de miozin, actin, tropomiozin, troponin, paramiozin, metamiozin, contractin; c) Proteinele sarcoplasmatice cuprind grupul de proteine din fluidul intracelular (sarcoplasm), fluid care nvelete miofibrilele dispuse paralel din alctuirea fibrei musculare. Aceste proteine contribuie la determinarea unor caracteristici organoleptice ale crnii: gustul, culoarea, mirosul. Din proteinele sarcoplasmatice fac parte: miogenul, mioalbumina, mioglobulina, globulina X, oximioglobina (aceasta din urm se afl n profunzimea muchiului i d culoare roie). 4.3.4. HETEROPROTEIDE Heteroproteidele sunt proteinele conjugate, adic acele proteide alctuite dintr-o component proteic (aminoacizi) i o component neproteic, numit i component prostetic, reprezentat de radicali ai acidului fosforic, ioni metalici, glucide, lipide, acizi nucleici, pigmeni. n funcie de natura gruprii prostetice, heteroproteidele se clasific astfel:
HETEROPROTEIDE 1. METALPROTEIDE:
FERITINA HEMOSIDERINA SIDEROFILINA TRANSFERINELE CERULOPLASMINA AZURINA ANHIDRAZA CARBONIC

4. LIPOPROTEIDE:
DE DENSITATE NALT (HDL) DE DENSITATE JOAS (LDL) DE DENSITATE INTERMEDIAR (IDL) DE DENSITATE FOARTE JOAS (VLDL) CHILOMICRONII

2. FOSFOPROTEIDE: 90

5. CROMOPROTEIDE:

CAZEINELE VITELINELE

HEMOGLOBINA (Hb) MIOGLOBINA I DERIVAII SI CROMOPROTEIDE NEPORFIRINICE

3. GLICOPROTEIDE:
HAPTOGLOBULINE OVOMUCOIDUL OVOMUCINA AVIDINA LIZOZIMUL

6. NUCLEOPROTEIDE:
ACIZI NUCLEICI

1. METALPROTEIDELE sunt heteroproteide a cror component prostetic este un ion metalic, cum ar fi: Fe2+, Fe3+, Cu2+, Co2+, Mg2+, Zn2+ etc. Ionul metalic se leag de componenta proteic prin legturi covalente i covalent-coordinative, formnd o structur stabil de chelat. Metalul poate stabili legtura covalent-coordinativ cu diferite grupri chimice din structura lanului polipeptidic sau cu molecule mici care se afl n apropierea ionului metalic, numite liganzi. Exemple de metalproteide: Feritina - conine 23% Fe, predomin n ficat, splin, mucoasa intestinal i mduva osoas i reprezint depozitul de fier din organism; Hemosiderina - conine 37% Fe, se gsete n sistemul reticulo-endotelial i are rol n meninerea sideremiei n limite fiziolo-gice n anemia feripriv; Siderofilina - conine Fe, se afl n splin i are rol de transportor de fier n organism; Transferina - conine Fe, Cu i Zn, se afl n plasma sanguin i are rol de transportor de fier, cupru i zinc n organism; Ceruloplasmina - conine Cu, se afl n plasma sanguin i are rol de transportor al cuprului n organism i n procesele de oxido-reducere din organism (de exemplu: oxideaz vitamina C); Azurina - conine Cu, se gsete n unele bacterii i este similar cu ceruloplasmina; Anhidraza carbonic este heteroproteid cu Zn2+ sau Co2+ i se gsete n eritrocite.

91

2. FOSFOPROTEIDELE sunt heteroproteide a cror component prostetic este reprezentat de radicalul acidului ortofosforic ( PO3H2). Acest radical se leag de componenta proteic prin intermediul aminoacidului serin (i rezult fosforilserina) sau prin intermediul aminoacidului treonin (i rezult fosforiltreonina).
HOOC NH2 NH CH CO H2C O PO3H2
COMPONENTA PROTEIC COMPONENTA PROSTETIC

Figura 4.15 - Schema unei fosfoproteide

Prezena radicalului fosforil (PO3H2) n molecula acestor heteroproteide, le confer acestora caracter acid i deci proprietatea de a forma sruri de calciu sau potasiu. Exemple de fosfoproteide: Cazeinele sunt heteroproteidele din lapte i constituie cca 80% din proteinele laptelui. Sunt substane heterogene care cuprind 4 fraciuni denumite: , , i -cazeine, care difer ntre ele prin coninutul n fosfor, prin raporturile cantitative ntre aminoacizi, prin mobilitatea electroforetic i punct izoelectric. Compoziia cazeinei variaz de la o specie la alta, astfel cazeina uman are un coninut mai ridicat de sulf, deoarece conine cistein i glucide ntr-o mai mare proporie dect laptele de vac, n timp ce laptele de oaie are un coninut mai mare de acid sialic. n lapte, cazeina se gsete n proporie de 90% sub form coloidal (micele de cazein), iar restul de 10% este cazeina solubil (format din mici agregate). Cele dou forme se gsesc ntr-un echilibru influenat de ionii de Ca2+ prezeni n lapte. Prin fierberea laptelui cazeinele nu coaguleaz, ele avnd rol de protecie asupra albuminelor i globulinelor prezente n lapte; coagularea cazeinelor se poate face sub aciunea bacteriilor lactice (fermentaia lactic) sau cu cheag (endopeptidaz cu activitate proteolitic secretat de stomacul rumegtoarelor tinere). n procesul de coagulare este necesar

92

i prezena ionilor de Ca2+ i rezult un produs numit paracazeinat de calciu, componentul principal al brnzei. Cazeinele sunt proteine complete, deoarece conin toi aminoacizii eseniali, ceea ce confer laptelui atributul de aliment cu valoare nutritiv complet. Vitelinele sunt fosfoproteidele din glbenuul de ou, asociate cu lecitinele, care se caracterizeaz printr-un coninut ridicat de fosfor i de aminoacidul serin (peste 34%). Vitelinele din glbenuul de ou se mai numesc i ovoviteline i au rolul de a furniza fosforul i aminoacizii necesari dezvoltrii embrionului. 3. GLIPOPROTEIDELE sunt heteroproteide a cror component prostetic este de natur glucidic (oze, derivai ai ozelor, diglucide, poliglucide). n aceste heteroproteide predominant este componenta proteic, dar structura lor nu este pe deplin elucidat. Sunt macromolecule solubile n ap, cu care formeaz soluii vscoase, pot fi acide (n esutul conjunctiv) sau neutre (n plasm, tractul gastrointestinal, urin), se gsesc n amestec cu mucopoliglucidele sau asociate cu enzime i hormoni. Glicoproteidele au o larg rspndire n esutul animal, predominnd n plasm, secreia mucoaselor, umoarea vitroas, cordonul ombilical, ou. ndeplinesc n organismul viu diverse roluri biologice, cum ar fi: sunt constitueni structurali ai celulelor, intervin n procesele de recunoatere de la suprafaa celulelor, n antigenitatea suprafeelor celulare, sunt componente ale matricelor extracelulare i ale mucinelor tractusului gastrointestinal i urogenital. Exemple de glicoproteide: Glicoproteidele de grup sanguin (din eritrocite, care determin specificitatea de grup sanguin); Haptoglobulinele (glicoproteide serice, dar i din fluidul cerebrospinal, lichid pleural); Ovomucoidul i ovomucina (din ou); Avidina (secretat de mucoasa oviductului); Lizozimul (din ou i din alte esuturi animale).

93

4. LIPOPROTEIDELE sunt heteroproteidele a cror component prostetic este de natur lipidic (fosfolipide, trigliceride, colesterol liber sau esterificat). Componentele proteice ale lipoproteinelor se numesc apolipoproteine, locul lor de sintez fiind n ficat i intestin. ntre componenta proteic i cea prostetic se stabilesc legturi ionice sau prin fore Van der Waals. Lipoproteidele circulante care se gsesc n plasma sanguin i limf se difereniaz n mai multe fraciuni pe baza densitii lor, astfel: - lipoproteide de densitate nalt (mare) - HDL; - lipoproteide de densitate joas (mic) - LDL; - lipoproteide de densitate intermediar - IDL; - lipoproteide de densitate foarte joas (foarte mic) - VLDL. n lapte au fost identificate lactolipoproteide, iar n ou lipovitelina. n organismul animal lipoproteidele ndeplinesc diverse roluri ca: intr n constituia membranelor celulare, furnizeaz energie, particip la transportul substanelor liposolubile (vitamine, hormoni, medicamente, toxine etc.), particip la transportul de lipide necesare dezvoltrii embrionului din ou, regleaz procesele metabolice celulare. 5. CROMOPROTEIDE Cromoproteidele sunt heteroproteidele a cror grupare prostetic este o substan colorat (pigment) care confer culoare ntregii molecule. Dup natura chimic a componentei prostetice, cromoproteidele se clasific n: a) cromoproteide porfirinice b) cromoproteide neporfirinice. a) Cromoproteidele porfirinice au drept component prostetic de baz un nucleu tetrapirolic, numit porfirin (porfin), substituit cu diferii radicali (metil, vinil, propionil), rezultnd astfel protoporfirina. Cele 4 nuclee pirolice se leag ntre ele prin intermediul a patru radicali metin (CH). Protoporfirina reprezint componenta prostetic specific diferitelor cromoproteide de origine animal. Ea chelateaz un ion de Fe 2+ i formeaz substana numit hem, care st la baza structurii urmtorilor compui heminici: hemoglobina, mioglobina, hemenzimele etc.

94

Hemoglobina (Hb) este pigment respirator care fixeaz reversibil oxigenul i-l transport la esuturi, asigurnd rezerva de oxigen necesar oxidrii celulare; este pigment de culoare roie, component a hematiilor (reprezint 90% din proteinele totale ale hematiilor); se afl concentrat n citoplasm; ca structur este constituit din: Hemoglobina (Hb) = Componenta Componenta (Globina) + (Hem) proteic prostetic

Structura hemului. Hemul este o feroprotoporfirin n care atomul de Fe este divalent. Hemul este format din protoporfirina IX (adic un inel tetrapirolic la care sunt ataate patru grupri metil, dou vinil i dou lanuri propionat), care a chelatat un ion de Fe 2+ legat prin legturi covalent coordinative de atomii de azot din ciclurile A i C i prin legturi covalente cu atomii de azot din ciclurile B i D. Totodat atomul de Fe din hem poate forma n plus i dou legturi adiionale: cu un rest de histidin din globin, cu apa (n hemoglobina redus), cu O2 (n hemoglobina oxigenat) sau CO, CN.

Figura 4.16 - Structura hemului

95

Structura globinei. Globina este componenta proteic a hemoglobinei i ca structur este o protein globular tetramer, n care cei patru protomeri se prezint ca perechi de catene polipeptidice de tip i de tip . 2 catene + 2 catene 22
tetramer

ntre catenele i se formeaz legturi electrostatice (COO , NH3+), iar ntre catenele i legturi de hidrogen. Molecula tetramer de globin conine 4 molecule de hem deoarece fiecare din cele 4 catene polipeptidice leag cte o molecul de hem. Inelele de hem sunt plasate cte unul pe fiecare lan globinic ntr-o cavitate (buzunar al hemului) format n regiunea hidrofil a globinei.

(A)

(B)

Figura 4.17 - Molecula tetramer de globin (A) Organizarea cuaternar a structurii globinei (B)

Asamblarea structural a globinei cu hemul se realizeaz prin urmtoarele legturi: covalent-coordinative ntre Fe din hem i doi radicali de histidin aflai n poziii diferite ale catenei polipeptidice (un radical coordineaz direct fierul, iar cellalt se leag indirect prin intermediul unei molecule de ap);
96

interaciuni electrostatice ntre ionii carboxil (COO) de la resturile propionice 6 i 7 i ionii NH3+ ai lizinei din structura globinei; fore Van der Waals stabilite ntre radicalii metil i vinil ai hemului cu radicali provenii de la aminoacizi nepolari din globin (fig. 4.18). Trebuie subliniat faptul c hemul este invariabil pentru toate speciile animale, n timp ce globina prezint specificitate de specie. Rolul hemoglobinei. I. Funcia biologic esenial a hemoglobinei const n transportul oxigenului molecular (O2) de la plmni la esuturi (capilarele tisulare) i dioxidul de carbon (CO2) de la esuturi la plmni. Acest transport se realizeaz pe baza capacitii Hb de a forma cu O 2 un compus disociabil denumit oxihemoglobina - Hb(O2)4. Hb + 4O2 Hb(O2)4 + 4H2O

97

Figura 4.18 - Structura hemoglobinei (asamblarea globinei cu hemul)

Sensul acestei reacii reversibile depinde de presiunea parial a O2 i anume: la nivelul alveolelor pulmonare, unde presiunea parial a O 2 este mai mare, se formeaz oxihemoglobina, iar la nivelul capilarelor tisulare (esuturi), unde presiunea parial a O2 este sczut, oxihemoglobina disociaz elibernd O2 necesar oxigenrii esuturilor.
98

Se numete putere oxiforic a Hb volumul de O2 pe care Hb l poate lega din 100 ml snge. Legarea reversibil a oxigenului la hemoglobin se realizeaz prin coordinarea acestuia de ctre ionul de Fe2+: mai nti se rupe legtura covalent-coordinativ dintre Fe2+ i ap i apoi se interpune oxigenul ntre radicalul de histidin din globin i Fe2+ din hem.
=N HIS Fe2+ N N H O H HIS N =N HIS Fe2+ N N N + H2O

+ O2 O2

O2

Figura 4.19 - Mecanismul formrii oxihemoglobinei

n fapt, formarea oxihemoglobinei const n ruperea legturilor ionice i de hidrogen dintre cele dou subuniti ale globinei, obinerea unei forme mai relaxate n care lanurile polipeptidice au o afinitate mai mare pentru oxigen (rezult oxihemoglobina). Fixarea i eliberarea oxigenului de ctre hemoglobin este un proces dependent de pH, cunoscut sub numele de EFECT BOHR. II. Un alt rol esenial al hemoglobinei este transportul dioxidului de carbon (CO2). Dioxidul de carbon rezultat n urma proceselor metabolice este transformat n ioni bicarbonat sau se fixeaz la hemoglobin (la nivelul gruprilor amino libere din globin), formnd carbhemoglobina. Hb NH2 + CO2 Hb NH COO + H+
grupare carbamino

III. Hemoglobina acioneaz ca sistem tampon: oxihemoglobinat alcalin (KHbO2)/oxihemoglobin acid (HHbO2). Sub aceast form Hb particip la reglarea pH-ului sanguin.

99

S-au identificat mai multe tipuri de hemoglobine care caracterizeaz diferite stadii de dezvoltare: embrionar, fetal i postnatal. Aceste hemoglobine difer prin structura primar a catenelor i sunt urmtoarele: hemoglobin fetal (HbF), hemoglobin embrionar (HbE), hemoglobin adult (HbA). S-a identificat o familie de boli denumite generic hemoglobinopatii (care sunt cauzate de biosinteza de hemoglobine, cu structuri anormale sau de biosinteza insuficient de hemoglobin normal), cum ar fi: anemia hemolitic, anemia falciform, talasemiile. Derivai ai hemoglobinei. Carboxihemoglobina (HbCO) este un compus toxic, puin disociabil, care rezult prin legarea monoxidului de carbon (n locul apei) de ctre hemoglobin. Afinitatea Hb pentru CO este mai mare dect pentru O2. Formarea HbCO blocheaz funcia respiratorie i produce intoxicaii (respectiv asfixii) cnd atinge 50% concentraie n snge. Heminele, care sunt derivai toxici ai hemoglobinei, conin ionul Fe3+ i de aceea sunt incapabile de a lega oxigenul molecular. Din categoria heminelor fac parte: - Methemoglobina (HbM) rezult prin oxidarea Fe2+ din hemoglobin la Fe3+ i stabilirea unei legturi covalente Fe3+ grupare hidroxil (OH). Methemoglobina este un produs toxic. Ea se sintetizeaz n eritrocite n cantiti mici, dar procesul este controlat de enzime specifice pentru ca HbM s nu depeasc valoarea critic de 0,4% din coninutul total de hemoglobin. Acest prag critic poate fi depit n intoxicaii cu azotii sau azotai din pesticide, ngrminte, medicamente. - Clorhemina rezult prin legarea covalent a unui atom de clor de ionul Fe3+. Clorhemina nu conine globin i se poate prepara n laborator prin aciunea acidului acetic i a clorurii de sodiu asupra hemoglobinei. Reacia este nsoit de formarea unor cristale caracteristice (cristale Teichman), utilizate n criminalistic la depistarea urmelor de snge. Mioglobina (Mb) este cromoproteida de culoare roie prezent n muchi. Ea prezint similitudini structurale i funcionale cu hemoglobina i are rol n transportul O 2 la nivelul esutului muscular, fiind totodat o form de rezerv a oxigenului necesar oxidrii celulare.
100

Citocromii (b, c1, c2, a, a3) sunt cromoproteide a cror component prostetic este similar cu hemul din Hb. Sunt enzime din clasa oxidoreductazelor, participnd la reaciile de oxidoreducere prin transfer de electroni la nivel mitocondrial. Hemenzimele sunt enzime din clasa oxidoreductazelor care au n structura lor o component prostetic asemntoare hemului din structura Hb. b) Cromoproteide neporfirinice. Sunt acele heteroproteide la care gruparea prostetic este format din pigmeni colorai n galben-portocaliu sau rou, numii carotenoide. De aceea, cromoproteidele neporfirinice se mai numesc i carotenoproteide. 6. NUCLEOPROTEIDE Nucleoproteidele sunt heteroproteide la care gruparea prostetic este reprezentat de acizi nucleici. n funcie de natura componentei proteice, nucleoproteidele se clasific n: nucleoprotamine i nucleohistone, iar n funcie de natura chimic a gruprii prostetice se clasific n: ribonucleoproteide, a cror component prostetic este acidul ribonucleic (ARN) i deoxiribonucleoproteide, a cror component prostetic este acidul deoxiribonucleic (ADN). - Ribonucleoproteidele sunt localizate n citoplasma celular, cu precdere la nivelul ribozomilor i ntr-o anumit proporie n nucleul celular; - Deoxiribonucleoproteidele sunt localizate n nucleul tuturor celulelor i reprezint componentele structurale ale cromozomilor i genelor. Nucleoproteidele constituie baza molecular a unor procese biochimice fundamentale, ca: stocarea, transmiterea i exprimarea informaiei ereditare, biosinteza proteinelor, diviziunea celular. Acizii nucleici sunt biomacromolecule informaionale de importan biologic fundamental, cu urmtoarele caracteristici: pstreaz, transmit i exprim caracterele ereditare; sunt purttorii informaiei genetice ce se transmite din generaie n generaie;

101

constituie baza molecular a biosintezei proteinelor i enzimelor; reprezint baza molecular pentru diferenierea i reglarea celular; reprezint baza molecular pentru constana replicrii celulare. Dup natura componentei glucidice coninut n molecul, acizii nucleici sunt de dou tipuri: a) cei care conin deoxiriboz i se numesc acizi deoxiribonucleici (ADN); b) cei care conin riboz i se numesc acizi ribonucleici (ARN). Structura acizilor nucleici. Unitatea chimic structural de baz a acizilor nucleici este nucleotidul, format dintr-o baz azotat (purinic sau pirimidinic), pentoz (deoxiriboz sau riboz) i radical al acidului ortofosforic (PO3H2). Toate aceste componente structurale ale nucleotidului sunt legate covalent n ordinea: baz azotat pentoz fosfat. Nucleozidul este compusul constituit din dou uniti chimice: baza azotat i pentoza. n acizii nucleici nucleotidele componente se asambleaz succesiv (se condenseaz) prin intermediul unor legturi 3' 5' fosfodiesterice, stabilite ntre pentozele nucleotidelor adiacente (bazele azotate nu sunt implicate n alte legturi covalente dect cele pe care le stabilesc cu pentoza). Rezult astfel lanuri de nucleotide care alctuiesc polinucleotidele, respectiv acizii nucleici ADN i ARN. Structura schematic a acizilor nucleici este redat n figura 4.20.

102

ACIZI NUCLEICI (ADN i ARN) (polinucleotide)

MONONUCLEOTIDE

NUCLEOZID

RADICAL PO3H2

BAZ AZOTAT

PENTOZ

PURINICE: adenin (A) guanin (G)

PIRIMIDINICE: citozin (C) timin (T) uracil (U)

DEOXIRIBOZ

RIBOZ

Figura 4.20 - Structura schematic a acizilor nucleici

Exemple de baze azotate purinice:

Exemple de baze azotate pirimidinice:

103

Exemple de pentoze:

Nucleotidele pot fi definite ca esteri fosforici ai nucleozidelor care rezult prin esterificarea acidului ortofosforic cu o grupare hidroxil aparinnd pentozei. n funcie de natura pentozei constituente, nucleotidele pot fi: deoxiribonucleotide (conin 2deoxiDriboza) i ribonucleotide (conin Driboza). n deoxiribonucleotide acidul fosforic este esterificat cu gruprile hidroxil din poziiile 3' i 5' ale deoxiribozei, iar n ribonucleotide acidul fosforic este esterificat cu gruprile hidroxil din poziiile 2', 3', 5' ale ribozei. Exemplu de nucleotid monofosfat care conine adenin:

104

Nucleotidele sunt esteri att monofosforici, ct i di- sau trifosforici. Gruprile fosfat sunt ataate la gruparea hidroxil din poziia 5' a pentozei. Aceti compui se mai numesc nucleozid 5' fosfai sau 5' nucleotide. Nucleozidele 5' fosfai (mono, di i trifosforilate) poart diverse denumiri n funcie de natura bazei azotate, dar i n funcie de natura pentozei i pot fi: AMP i dAMP; ADP i dADP; ATP i dATP; GMP i dGMP; GDP i dGDP;GTP i dGTP; CMP i dCMP; CDP i dCDP; CTP i dCTP; TMP i dTMP; TDP i dTDP; TTP i dTTP; UMP ; UDP i UTP. Semnificaia biochimic a ATP, ADP i AMP este extrem de important, deoarece aceste nucleotide: particip n procesele de conservare i utilizare a energiei eliberate n cadrul metabolismului celular (se mai numesc compui macroergici); acioneaz ca substane donatoare sau acceptoare de grupri fosfat n diferite reacii metabolice. Dintre ele ATP este compusul macroergic (bogat n energie) universal al materiei vii, care deine un rol biochimic decisiv n reaciile i procesele metabolice. n structura lui chimic are dou legturi macroergice (Ai B), fiind acumulator i generator de energie.

105

Figura 4.21 - Structura ATP, ADP i AMP

Prin hidroliza ATP se elibereaz 8000 - 10000 cal/mol, energie necesar desfurrii reaciilor metabolice. Reacia:
2 ATP-aza

ATP
1

ADP + Pi(H3PO4) + E

implic dou aspecte: 1 - formarea ATP din ADP i Pi care reprezint conservarea energiei chimice (E) rezultat din metabolismul celular; 2 - hidroliza ATP (sub aciunea hidrolitic a ATP-azei) n ADP i Pi care reprezint eliberarea i utilizarea energiei chimice stocate n molecula de ATP. Prin policondensarea mononucleotidelor se formeaz polinucleotidele, reacia avnd loc fie ntre nucleotide identice (i rezult homopolinucleotidele) sau ntre nucleotide diferite (i rezult heteropolinucleotidele). Acizii nucleici sunt deci polinucleotide i anume: polideoxiribonucleotide (respectiv ADN) i poliribonucleotide (respectiv ARN).
106

Structura, rolul i proprietile ADN. 1. Structura primar a ADN este reprezentat de tipul, numrul i secvena de baze azotate constituente ale mononucleotidelor. Cele 4 tipuri de nucleotide (d-AMP, d-GMP, d-CMP i d-TMP) se unesc printr-o legtur fosfodiester stabilit ntre radicalul fosforic care esterific gruparea OH din poziia 5' a deoxiribozei din molecula unui nucleotid i gruparea OH din poziia 3' a deoxiribozei aparinnd nucleotidului adiacent. Se realizeaz astfel o structur simetric 3' 5' n care nucleotidul terminal are grupare hidroxil de la carbonul 3' liber i gruparea hidroxil de la carbonul 5' fosforilat. S-a demonstrat c ntr-o molecul de ADN, indiferent de specie, suma bazelor purinice (A + G) este egal cu cea a bazelor pirimidinice (T + C), iar rapoartele A/T i G/T aproximativ egale cu unitatea. De aceea s-a emis ipoteza c exist o complementaritate ntre adenin i timin (se mperecheaz prin dou legturi de hidrogen A==T) i ntre guanin i citozin (se mperecheaz prin trei legturi de hidrogen C G). 2. Structura secundar reprezint organizarea n spaiu, respectiv configuraia tridimensional a ADN. Pe baza datelor experimentale obinute prin metoda difraciei cu raze X, Watson i Crik au elaborat modelul dublu-helicoidal (dublu helix orientat spre dreapta) al ADN. Acest model se caracterizeaz prin: este constituit din dou catene polinucleotidice care se mpletesc n jurul unui ax comun, cptnd forma unei spirale duble orientat spre dreapta; catenele polinucleotidice sunt orientate antiparalel (respectiv o caten este orientat pe direcia 5' - 3', iar cealalt pe direcia 3' - 5') i sunt stabilizate prin multiple legturi de hidrogen realizate ntre baze azotate complementare (A==T i C G), dar i prin interaciuni Van der Waals ntre baze azotate vecine dintr-un lan polinucleotidic; bazele purinice i pirimidinice sunt dispuse n interiorul helixului, crend un mediu hidrofob, iar radicalii fosforici i deoxiriboza (polare) sunt orientate spre exterior; o tur complet a dublului helix are diametrul de 34 i conine zece perechi de baze azotate;

107

Figura 4.22 - Structura unui fragment dintr-o caten a macromoleculei de ADN

datorit perechilor de baze azotate, fiecare din cele dou catene polinucleotidice diferite ale ADN devine replic complementar a celeilalte; succesiunea nucleotidelor (bazelor azotate) nmagazineaz informaia genetic care se transmite nealterat din generaie n generaie; raportul molar A + T / G + C este un indice caracteristic fiecrei specii (n general este supraunitar la animale i plante sau ntre 0,36 - 2,70 la bacterii).

108

(B)

(A)

Figura 4.23 - Modelul schematic dublu helix a ADN: (A) - reprezentarea schematic a celor dou catene polinucleotidice rsucite; (B) - vedere din interiorul dublu helixului

Sunt descrise trei forme similare ale ADN-ului dublu helicoidal: A, B i C. Forma B a ADN este biologic activ i se gsete n filamente la o umiditate de 92%; forma B este convertit n A cnd umiditatea filamentului se reduce sub 75%, iar forma C este asemntoare cu A, numai c dimensiunea unei ture este de 33 . n cromozomii celulelor procariote i eucariote, acizii deoxiribonucleici sunt mpachetai foarte compact, macromoleculele prezentnd un aspect pliat. Aceast structur superncolcit este mult mai bogat n energie liber i presupune disocierea legturilor de hidrogen i deschiderea dublului helix ntr-o mic regiune a macromoleculei.
109

3. Localizarea intracelular a ADN. Aceasta difer sensibil n funcie de gradul de evoluie al sistemului biologic. La procariote exist un singur ADN dublu catenar circular supernfurat care constituie un cromozom circular asociat parial cu membrana plasmatic (rezult un cromoid = aparat genetic simplu, necompartimentat). La eucariote aproximativ 98% din totalul ADN este distribuit n nucleu (ADN - nuclear), unde se afl cuplat cu proteine bazice (histone sau protamine), formnd cromatina. Deasemenea au fost puse n eviden cantiti mici de ADN mitocondrial (un ADN satelit localizat n matricea mitocondrial). 4. Proprietile generale ale ADN. Datorit existenei bazelor azotate, ADN absoarbe puternic n domeniul ultraviolet (maxim de absorbie la 260 nm), dar aceast absorban este inferioar celei prezentate de bazele azotate individuale (efect hipocrom = efect de mascare a bazelor azotate). La temperatura de 80-90C macromolecula de ADN sufer un proces de denaturare care presupune separarea celor dou catene ale dublului helix, scderea vscozitii, masei moleculare i activitii optice, dar creterea absorbiei n domeniul ultraviolet (efect hipercrom). Prin anularea legturilor de hidrogen, bazele azotate nu mai sunt plasate n poziii paralele suprapuse i astfel crete absorbia n U.V. Dac se rcete lent o soluie de ADN denaturat, cele dou catene polinucleotidice se pot recombina, reconstituind aproape perfect structura bicatenar anterioar, cu conservarea proprietilor biologice ale acestora (procesul se numete renaturare sau normalizare). Renaturarea st la baza procesului de hibridare prin care una din catenele despiralizate ale ADN denaturate termic se poate recombina cu o caten de ARN, rezultnd o molecul hibrid ADN ARN cu structur dublu elicoidal (un astfel de hibrid cu via scurt se formeaz i n cazul replicrii ADN). Sub aciunea unor endonucleaze (care acioneaz n interiorul catenelor polinucleotidice) moleculele de ADN sunt scindate hidrolitic rezultnd oligodeoxiribonucleotidele.

110

5. Funciile biologice ale ADN. ADN constituie baza molecular a conservrii i transmiterii din generaie n generaie a informaiei genetice; Asigur i controleaz biosinteza proteinelor (enzimelor); ADN asigur diferenierea i reglarea celular, precum i constana replicrii celulare; ADN reprezint baza molecular a mutaiilor genetice naturale sau induse. Structura, rolul i proprietile ARN. 1. Structura primar a ARN este reprezentat printr-o singur caten poliribonucleotidic, constituit dintr-un numr variabil de uniti structurale fundamentale, numite ribonucleotide. Fiecare ribonucleotid are, n locul deoxiribozei din ADN, riboza i n locul timinei, uracilul. Cele 4 ribonucleotide (AMP, GMP, CMP i UMP) sunt dispuse ntr-o secven specific prin stabilirea de legturi fosfodiester 3' - 5' ntre ele. 2. Localizare, tipuri de ARN i funciile lor. ARN se gsesc att n citoplasm, ct i n nucleu, predominnd n prima. Orice celul include 3 tipuri majore de ARN, care sunt urmtoarele: ARN ribozomal (ARNr), localizat n cantitatea cea mai mare n ribozomi i este implicat n biosinteza proteinelor. Se gsete combinat cu proteinele, cu care formeaz complexe ribonucleoproteice, numite ribozomi, care sunt de altfel locul de biosintez a proteinelor; ARN de transport (ARNt) sau ARN solubil (ARNs), reprezint 15% din totalul ARN din celule i este localizat n partea solubil a celulei (citosol). El leag specific fiecare din cei aproximativ 20 aminoacizi implicai n biosinteza proteinelor (reprezentnd forma lor de transport) i i transfer la nivelul ribozomilor. Deci el funcioneaz ca izoreceptor pentru aminoacizi, dar i ca adaptor care ordoneaz fiecare aminoacid; ARN mesager (ARNm) sau ARN de informaie (ARNi), reprezint 2-4%, din totalul ARN celular i este mesagerul informaiei din
111

ADN cromozomial (fiecare molecul de ARNm determin biosinteza unei singure molecule de protein). Att ARNt, ct i ARNm particip n procesul de biosintez al proteinelor i sunt considerai ca factori de legtur informaional ntre ADN i proteine. Diferitele tipuri de ARN sunt localizate n nucleul i citoplasma celulelor organismelor animale, dar la celulele bacteriene ntreg coninutul de ARN este localizat numai n citoplasm.

112

CAPITOLUL 5 ENERGETICA ORGANISMULUI VIU


5.1. CONSIDERAII GENERALE
n organismul viu se petrec numeroase transformri interne, chimice i fizice, de o mare complexitate i care sunt nsoite de conversii de energie. Dinamismul materiei vii este rezultanta unitii i interaciunilor proceselor biochimice de degradare i sintez, procese care se petrec simultan i care sunt nsoite de transformri energetice, respectiv: energia generat prin reaciile biochimice de degradare a unor biomolecule este utilizat pentru biosinteza altor biomolecule sau este transformat n diferite forme utile de energie necesar proceselor vitale. Energetica organismului viu (bioenergetica) studiaz legile dup care decurg procesele de transformare a energiei n organismele vii (procese generatoare i consumatoare de energie), respectiv procesele bioenergetice. Transformrile bioenergetice care sunt strict corelate cu procesele metabolice din organismul viu se realizeaz prin intermediul unor substane chimice bogate n energie, denumite compui macroergici. Aceti compui au proprietatea specific de a stoca energia chimic rezultat n procesele de degradare (catabolism) i de a furniza energie pentru procesele de biosintez (anabolism) sau alte procese consumatoare de energie. Dup specific, transformrile de energie n organismele vii se pot clasifica astfel:

113

TRANSFORMRI BIOENERGETICE TRANSFORMAREA ENERGIEI SOLARE N ENERGIE CHIMIC (STOCAT N MOLECULE ORGANICE: GLUCIDE, LIPIDE, PROTEINE): - se realizeaz prin fotosintez de ctre plantele verzi TRANSFORMAREA ENERGIEI CHIMICE DIN MOLECULELE ORGANICE N ENERGIE UTILIZAT DE CTRE ORGANISM (N SPECIAL SUB FORM DE ATP): - se realizeaz la organismele heterotrofe TRANSFORMAREA ENERGIEI CHIMICE STOCATE N MOLECULELE DE ATP (SAU ALI COMPUI MACROERGICI) N ALTE FORME DE ENERGIE (CALORIC, MECANIC, OSMOTIC)

Sistemele biologice sunt sisteme deschise caracterizate prin schimb permanent de materie i energie cu mediul ambiant.

5.2. COMPUI MACROERGICI


Denumirea de compui macroergici sau de substane bogate n energie este atribuit acelor molecule specializate n stocarea i eliberarea energiei. Toi aceti compui conin legturi fosforice macroergice. Compusul macroergic cu rol central n energetica organismului viu este adenozintrifosfatul (ATP), principal acumulator i furnizor de energie n procesele metabolice. Schematic, rolul central al ATP n energetica celular se prezint astfel:
CATABOLISM

ALIMENTE

BIOMOLECULE: GLUCIDE, LIPIDE, PROTIDE, ACIZI NUCLEICI

ENERGIE

ADP

Pi (fosfat anorganic)

ATP
ADP

ENERGIE

114

ANABOLISM

CO2

INTERMEDIARI METABOLICI

ANABOLISM

Rezult c: procesele de catabolism sunt procese generatoare de energie, conservat i stocat n ATP conform reaciei: ADP + Pi + E ATP n acelai timp, procesele de anabolism sunt procese consumatoare de energie furnizat prin reacia de hidroliz a ATP: ATP ADP + Pi + E sau ATP AMP + PPi + E
pirofosfat

unde: ADP = adenozindifosfat AMP = adenozinmonofosfat Pi = H3PO4 PPi = H4P2O7 Caracterul ATP de compus macroergic este conferit de particularitile sale structurale, respectiv de componenta pirofosfat, care nglobeaz dou legturi de tip anhidrid fosforic ce nmagazineaz o cantitate mare de energie.
legturi macroergice

O O O HO P O P O P O ADENOZIN (BAZ AZOTAT + PENTOZ) O O O

Figura 5.1 - Structura schematic a ATP

n reacia de hidroliz a ATP are loc scindarea legturilor de tip anhidrid, cu eliberare de una sau dou molecule de H3PO4 i a unei cantiti mari de energie chimic necesar celulei (8000 10000 cal/mol ATP). Pe lng ATP, pentru anumite procese biochimice sunt necesari compui macroergici specifici (respectiv alte nucleotide trifosforilate), derivai de la restul bazelor azotate, ca: GTP, CTP, UTP, TTP.
115

Fiecare celul conine ntr-un anumit moment doar o cantitate redus de ATP, care dureaz foarte puin timp, i nu poate fi obinut din afara celulei. Nici ATP, nici ADP i nici AMP nu pot difuza spontan prin membrana celular. Fiecare celul trebuie s-i biosintetizeze singur compuii macroergici necesari, realiznd o permanent recirculare a fosforului i a compuilor fosforilai. Una dintre cele mai otrvitoare substane, cianura, blocheaz aproape toate procesele de sintez a ATP i moartea survine ntr-un timp scurt deoarece necesarul energetic al proceselor care susin viaa nu mai poate fi asigurat. n afar de ATP, n cantiti mici i numai ca intermediari n procesul general de obinere a ATP mai apar i ali compui macroergici: Fosfoenolpiruvatul sau enoilfosfatul (prezent n toate celulele vii):
CH2 CH2 C O PO3H2 + HOH C OH + H3PO4 + energie COOH COOH
(forma enol instabil)

CH3 CO COOH
acid piruvic (forma ceto)

Creatinfosfatul sau fosfocreatina specific celor trei tipuri de muchi (cardiac, striat, neted):
NH2 CPK C = NH + ATP N CH3 CH2 COOH creatin
2 HN PO 3

C = NH N CH3 CH2 COOH

+ ADP

creatinfosfat (CP)

Reacia este catalizat de enzima creatinfosfokinaz (CPK).


116

Tioesterii derivai de la Coenzima A (R CO SCoA): Acetia se formeaz n reacia dintre acizii carboxilici i coenzima A (CoA SH), reacie dependent de ATP i catalizat de enzima tiokinaz.
ATP

CH3 COOH + HS CoA


H2O

CH3 CO SCoA + AMP + PPi


acetil Coenzima A (compus macroergic)

Prin reacia de hidroliz a acetil-coenzimei A rezult cca 7500 calorii/mol.

117

CAPITOLUL 6 ENZIME
6.1. CONSIDERAII GENERALE
Totalitatea reaciilor biochimice de degradare i sintez care determin metabolismul organismului viu sunt catalizate de molecule specializate, numite enzime. Enzimele sunt biocatalizatori, reprezentnd o clas special de molecule proteice dotate cu activitate catalitic. Ca biocatalizatori, enzimele prezint urmtoarele caracteristici generale definitorii: sunt cei mai eficieni catalizatori cunoscui (dei acioneaz la concentraii foarte mici - de ordinul micromolilor - manifest o activitate extrem de intens); sunt substane care micoreaz energia de activare a moleculelor asupra crora acioneaz (numite substrat S ), pe care le transform n produi de reacie (P); nu se consum i nu se transform n reaciile pe care le catalizeaz; catalizeaz numai reaciile termodinamic posibile; nu modific starea final de echilibru a reaciilor, ci mresc numai viteza cu care se realizeaz acest echilibru; se caracterizeaz printr-o specificitate remarcabil a funciei catalitice, determinnd att mecanismele de producere a unui anumit tip de reacie, ct i capacitatea de recunoatere numai a unui anumit substrat; unele enzime au proprieti reglatoare (respectiv pot discerne i decide iniierea, desfurarea sau stoparea unei reacii sau succesiuni de reacii biochimice).

118

6.2. STRUCTURA I CONFORMAIA ENZIMELOR Deoarece enzimele sunt biocatalizatori de natur proteic, ele sunt alctuite dintr-un numr foarte mare de aminoacizi dispui ntr-o configuraie spaial determinat specific pentru activitatea catalitic a enzimei. De aceea structura chimic de ansamblu a enzimelor este dictat de nivelurile de organizare structural a proteinelor. Unele enzime sunt monocomponente (holoproteide), fiind alctuite numai din macromolecula proteic care include i centrul catalitic (situsul catalitic) unde substratul accede la enzim. Majoritatea enzimelor sunt ns biocomponente (heteroproteide), adic sunt proteine conjugate cu o grupare prostetic numit cofactor:
APOENZIMA (PROTEIN) ENZIME BICOMPONENTE COFACTOR ENZIMATIC (COENZIME, GRUPRI PROSTETICE, IONI METALICI)

APOENZIMA este macromolecula proteic a enzimei, termolabil, nedializabil, dotat cu activitate catalitic. n structura apoenzimei este localizat situsul catalitic (zon distinct la care se leag specific substratul de reacie) i situsul allosteric (n cazul enzimelor allosterice) la care se leag efectorul allosteric. Totodat apoenzima determin specificitatea de substrat n reacia pe care o catalizeaz i sufer modificri conformaionale n anumite limite permisive. COFACTORII ENZIMATICI sunt componente neproteice, micromolecule cu structuri chimice diferite, indispensabile pentru manifestarea activitii catalitice. Cofactorul enzimatic este componenta termostabil, dializabil, nu reacioneaz dect n prezena apoenzimei , facilitnd aciunea acesteia asupra substratului i determin mecanismul prin care apoenzima i exercit proprietile catalitice.
119

Dup natura chimic i modul de legare la apoenzim, cofactorii se clasific n: - coenzime (reprezentate prin micromolecule organice care se ataeaz temporar la apoenzim, iar la finele reaciei se detaeaz de aceasta; n general sunt derivate de la vitamine, de tip heminic sau de tip nucleotide trifosforilate; - grupri prostetice (legate puternic de molecula apoenzimei prin legturi covalente); - ioni metalici (indispensabili pentru exercitarea funciei catalitice a unor enzime, care se leag sub form de chelat cu anumii aminoacizi din molecula apoenzimei). SITUSUL CATALITIC este acea zon (regiune) existent n apoenzim, la care se ataeaz n mod specific substratul de reacie (S) pe care enzima l transform n produs de reacie (P). Deci rolul situsului catalitic este: a) recunoate i leag substratul (S) pe baza complementaritii stereochimice dintre enzim i substrat, formnd un complex supramolecular activat enzim-substrat (ES); b) transform substratul n produi de reacie (P); E+S [ES] E + P
Apoenzim Cofactor Situs catalitic

[ES]

c) asigur marea specificitate de substrat a enzimelor care au capacitatea de a fi selective pentru un anumit substrat (deci de a cataliza un singur tip de reacie biochimic). Unele enzime manifest specificitate absolut de substrat, recunoscnd numai o anumit molecul, n timp ce altele recunosc o anumit grupare funcional sau o anumit legtur chimic i transform mai multe molecule care conin gruparea sau legtura chimic recunoscut, deci au specificitate relativ de substrat.

120

Situsul catalitic se caracterizeaz printr-o anume configuraie spaial i printr-o structur specific care creeaz o compatibilitate ntre situs i un anumit substrat ce se va ataa la acest situs catalitic. Situsul catalitic este localizat n poriunea intern, hidrofob a moleculei de apoenzim, este constituit dintr-un grup de aminoacizi care difer prin funcia lor de ali aminoacizi componeni ai apoenzimei i mpreun cu regiunea din molecul la care se ataeaz cofactorul formeaz centrul catalitic al enzimei bicomponente. La enzimele monocomponente, centrul catalitic este sinonim cu situsul catalitic. Enzimele care exercit n afar de activitate catalitic i rol reglator se numesc enzime allosterice. Acestea conin n afar de situsul catalitic i un al doilea situs numit allosteric, la care se pot lega anumite molecule numite efectori allosterici sau modulatori allosterici (activatori sau inhibitori). Legarea acestor efectori allosterici la situsurile allosterice este selectiv i reversibil i moduleaz tranziiile moleculei de enzim ntre dou conformaii posibile pe care aceasta le poate adopta. Prin aceste tranziii (numite tranziii allosterice) se permite sau nu accesarea situsului catalitic de ctre molecula de substrat. De exemplu, fixarea activatorului la situsul allosteric induce modificri conformaionale discrete ale enzimei, care permit accesul substratului la situsul catalitic prin modelarea conformaional adecvat a acestuia; n schimb, fixarea inhibitorului allosteric produce distorsiuni ale conformaiei tridimensionale ale enzimei, capabile s transforme arhitectura situsului catalitic astfel nct s devin inacesibil substratului (fig. 6.1). Efectorii allosterici sunt clasificai n efectori homotropici i heterotropici.
Situs allosteric pentru activator Situs catalitic Situs allosteric Protomeri pentru inhibitor Activator Substrat

Inhibitor Situs catalitic inaccesibil pentru substrat

121

Figura 6.1 - Conformaia activ i inactiv a unei enzime allosterice

Efectorii homotropici sunt reprezentai de nsi substratul allosteric care funcioneaz ca efector allosteric activator. Efectorii heterotropici sunt molecule diferite de substrat, activatori sau inhibitori, iar efectul se numete heterotropic. Dac efectorul este un produs final de reacie (D) dintr-o secven de reacii nlnuite n care enzima allosteric (EA) catalizeaz prima reacie, efectorul heterotropic exercit o inhibiie de tip feedback. Acest tip de inhibiie intervine n reglarea feedback:
EA E2 E3

A B C D. Cnd concentraia lui D a atins valoarea necesar pentru celul, el devine inhibitor allosteric pentru EA. Deoarece enzimele sunt biocatalizatori de natur proteic, organizarea lor structural determin ncadrarea acestora n patru grupe principale: - enzimele monomere, alctuite dintr-o singur caten polipeptidic cu o structur globular i care au mase moleculare mici; ele catalizeaz reacii de hidroliz; - enzimele oligomere, alctuite din dou sau mai multe catene polipeptidice identice sau diferite, asociate ntr-o structur de ansamblu compact. Aceste lanuri polipeptidice sunt uor de separat i de aceea se mai numesc i subuniti structurale identice sau diferite, numite protomeri. Majoritatea enzimelor implicate n reacii metabolice sunt enzime oligomere, n acestea fiind incluse i enzimele allosterice; - izoenzimele reprezint forme moleculare multiple ale aceleiai enzime, care catalizeaz aceeai reacie biochimic i au aceeai origine (celul, esut, lichid biologic dintr-un organism). Au ns proprieti fizico-chimice i imunologice diferite. Un exemplu de polimorfism enzimatic l reprezint enzima lactat dehidrogenaz (LDH), enzim care catalizeaz transformarea acidului lactic n acid piruvic i care se prezint ca un ansamblu de cinci izoenzime separabile electroforetic i denumite LDH1, LDH2, LDH3, LDH4, LDH5;
122

- sistemele multienzimatice, formate dintr-un numr de enzime asociate prin legturi necovalente care catalizeaz un ansamblu de reacii nlnuite.

6.3. MECANISMUL REACIILOR ENZIMATICE


Aa cum am artat anterior, o reacie enzimatic decurge n dou etape: 1) S + E [ ES ]
COMPLEX ACTIVAT ENZIM-SUBSTRAT E

2) [ES] E + P Transformarea chimic S P se realizeaz prin intermediul unei stri de tranziie a substratului (S*), care reflect o activare (excitare) a moleculelor reactante; aceast stare de tranziie este de fapt o stare n care moleculele de substrat sunt aduse la un nivel energetic superior, n raport cu nivelul energetic iniial. Trecerea de la o stare iniial (S) la o stare activat (tranzitorie), (S*), n procesul de transformare a substratului de reacie (S) n produs (P) necesit o anumit cantitate de energie (E) numit energie de activare. Energia de activare (E) exprim diferena finit ntre nivelul de energie al strii de tranziie a moleculelor activate i nivelul de energie a moleculelor aflate n stare iniial. Ea desemneaz cantitatea de energie necesar pentru ca toate moleculele dintr-un mol de substan s ating o stare activat. Ca orice catalizator, enzimele scad energia de activare a moleculelor de substrat.

123

Figura 6.2 - Diagrama profilelor energetice a unei reacii necatalizate i catalizate de enzima E

Din analiza diagramei rezult c n reacia catalizat energia de activare (E) este mai mic dect n cazul reaciei necatalizate, fapt ce denot c un procent mai mare de molecule se vor gsi n stare activat n prezena enzimei, devenind astfel apte de a reaciona cu o vitez de reacie mai mare, permind conversia rapid n produi. n reaciile necatalizate energia de activare poate fi generat de coliziunile care apar ntre molecule. Dac moleculele care se ciocnesc sunt orientate corespunztor, apare starea de tranziie activat care face ca reacia s aib loc. Rata de formare a strii de tranziie determin viteza de reacie. Creterea temperaturii care crete viteza de deplasare a moleculelor favorizeaz coliziunea acestora i implicit viteza de reacie. La temperatura fiziologic (cel mai adesa 37C) cele mai multe reacii biochimice s-ar desfura cu viteze imperceptibile. La temperaturile fiziologice, la un pH aproape neutru i la concentraiile sczute ale reactanilor (molecule stabile) reaciile biochimice rapide necesare vieii nu s-ar fi putut desfura n absena enzimelor. Viteza de desfurare a reaciilor enzimatice reflect activitatea enzimatic.

6.4. CINETICA ENZIMATIC

124

6.4.1. VITEZA DE REACIE; ORDIN DE REACIE Cinetica chimic studiaz legile dup care se petrec n timp reaciile chimice sub raportul vitezelor de reacie, respectiv al evoluiei n timp a transformrilor caracteristice unei reacii chimice. Studiul cinetic al activitii enzimatice se bazeaz pe msurarea cantitativ a vitezei de desfurare a reaciei catalizate. Viteza de reacie (v) reprezint cantitatea de substrat (S) care se transform n unitatea de timp (t) sau cantitatea de produs (P) care se formeaz n unitatea de timp (t):
v = dS dP =+ = K[S]n dt dt

Viteza de reacie constituie un parametru de exprimare cantitativ a activitii enzimatice. Sub raport cinetic, reaciile chimice enzimatice se difereniaz prin ordinul cinetic de reacie (notat cu n), care exprim dependena vitezei de reacie de concentraia reactanilor. Reaciile frecvent ntlnite sunt de ordinul 0 i de ordinul nti: - pentru n=0 (reacii de ordin 0) viteza de reacie este constant (v = K[S]0 = K) i enzima este saturat n substrat; - pentru n=1 (reacie de ordinul nti) viteza crete direct proporional cu concentraia substratului (v = K[Sx]). 6.4.2. FACTORI CARE INFLUENEAZ ACTIVITATEA ENZIMATIC 1. Concentraia substratului Creterea concentraiei substratului determin creterea vitezei de reacie pn la o valoare denumit Vmax (viteza maxim), dup care rmne constant:

125

Figura 6.3 - Reprezentarea grafic a vitezei de reacie enzimatic n funcie de concentraia substratului

Km = constanta Michaelis este acea concentraie de substrat la care viteza de desfurare a unei reacii enzimatice este jumtate din viteza maxim. Km este un parametru specific fiecrei enzime, care reflect afinitatea enzimei pentru substrat. 2. Concentraia enzimei Viteza reaciei enzimatice este direct proporional cu concentraia enzimei. 3. Temperatura Temperatura influeneaz activitatea enzimatic i viteza de reacie. Cu creterea temperaturii viteza de reacie crete, dublndu-se la fiecare 10C, dar scade brusc atunci cnd se depete o anumit valoare, de obicei 40C. Totui s-au descris enzime stabile la temperaturi ridicate, n special la microorganisme. Pentru enzime care catalizeaz aceeai reacie, dar izolate din surse diferite, pot fi descrise temperaturi optime diferite (de exemplu -amilaza bacterian i cea pancreatic).

126

Figura 6.4 - Influena temperaturii asupra vitezei de reacie enzimatic

4. Influena pH-ului Stabilitatea conformaiei unei proteine este influenat de starea gruprilor ionizabile din catenele laterale ale aminoacizilor, iar n cazul enzimelor funcionarea situsului catalitic depinde de conformaia global a moleculei proteice. De asemenea ionizarea substratului poate fi o condiie sau o barier n calea aciunii enzimei. De aceea pH-ul afecteaz rata de desfurare a reaciilor enzimatice. De obicei pH-ul optim de aciune a unei enzime este identic cu pH-ul esutului, organului sau celulei n care enzima acioneaz.

127

Figura 6.5 - Influena pH-ului asupra vitezei de reacie enzimatic

5. Aciunea efectorilor enzimatici Efectorii enzimatici sunt substane de natur chimic foarte diferit, care modific n sens pozitiv sau negativ activitatea enzimelor (viteza de reacie). Dup aciunea pe care o exercit asupra activitii enzimatice, se clasific n: - efectori activatori; - efectori inhibitori; - efectori allosterici. Efectori activatori: - anioni - Cl activeaz -amilaza; - cationi - K+, Ca2+, Mg2+, Mn2+; - molecule - acizii grai activeaz lipazele. Efectorii inhibitori abolesc total sau parial activitatea enzimatic. Dup modul de aciune se mpart n dou grupe: inhibitori competitivi i inhibitori necompetitivi. a. Inhibiia competitiv are loc n cazul n care inhibitorul prezint analogie structural cu substratul, competiionnd cu acesta pentru ocuparea situsului catalitic.
128

Exemplu: enzima succinatdehidrogenaza n care acidul malonic este inhibitorul competitiv: acid succinic HOOC CH2 CH2 COOH substrat acid malonic HOOC CH2 COOH inhibitor competitiv b. Inhibiia necompetitiv este realizat de ageni care afecteaz conformaia general a enzimei i implicit situsul catalitic. n aceast manier acioneaz agenii denaturani ai proteinelor (cationii metalelor grele, radiaiile, acizii organici). Exprimarea cantitativ a activitii enzimatice se face prin uniti de activitate (UI). UI = cantitatea de enzim care catalizeaz transformarea a 1 M substrat (sau producerea a 1 M produs de reacie) /min/l/ n condiii optime de temperatur i pH.

6.5. CLASIFICAREA I NOMENCLATURA ENZIMELOR


Actuala clasificare i nomenclatur a enzimelor se bazeaz pe principiile i regulile stabilite de Comisia de enzime a Uniunii Internaionale de Biochimie (IUB). Clasificarea i nomenclatura enzimelor implic un sistem numeric codificat, criteriul esenial de clasificare constituindu-l tipul de reacie chimic catalizat de o anumit enzim. Identitatea fiecrei enzime este stabilit printr-un numr de cod i un nume sistematic. Astfel, fiecare enzim este caracterizat printr-un numr de cod de forma: EC W. X. Y. Z, unde: EC - Comisia de enzime a Uniunii internaionale de biochimie; W - clasa enzimatic din care face parte; X - subclasa enzimatic - numrul general al substratului sau al grupului de substrate asupra crora acioneaz enzima (de exemplu, oxidoreductazele care au X=2 acioneaz asupra gruprii alcool secundar a substratului); Y - numrul substratului specific sau al coenzimei; Z- numrul de serie (ordine) al enzimei. n funcie de natura reaciilor pe care le catalizeaz, enzimele au fost clasificate n ase clase enzimatice; fiecare clas cuprinde subclase
129

enzimatice delimitate de natura substratului i coenzimelor implicate n reacie (tabelul 6.1).


CLASELE DE ENZIME OXIREDUCTAZE
catalizeaz reaciile care decurg cu transfer de hidrogen, oxigen sau electroni

LIAZE
- catalizeaz scindarea legturilor chimice fr aportul apei

TRANSFERAZE
catalizeaz transferul unor grupri specifice de la un substrat donor la un substrat acceptor

IZOMERAZE
- catalizeaz reaciile de rearanjare intramolecular a atomilor sau gruprilor funcionale din molecula substratului

HIDROLAZE
catalizeaz reaciile de liz a moleculelor de substrat sub aciunea apei

LIGAZE
- catalizeaz reaciile de formare ale unor noi legturi chimice cu consum de ATP (GTP)

Numele sistematic indic natura substratului (donatorului), natura acceptorului i tipul de reacie catalizat de enzim. De exemplu, enzima cu numrul de cod EC 1.1.1.27 are numele sistemic lactatdehidrogenaza. Numrul de cod al acestei enzime indic: 1 - Clasa enzimatic 1 (oxireductaze); 1 - Substratul general sau grupul de substrate - 1 (gruparea asupra creia acioneaz substratul este > CH OH); 1 - Coenzima NAD+; 27 - numrul de serie (ordine) al enzimei. Numele sistematic indic: lactat - natura substratului (acidul lactic); dehidrogenaza - reacia catalizat de enzim (dehidrogenare).
Tabelul 6.1 Clase enzimatice i exemple de subclase
Clasa enzimatic Oxidoreductaze Oxidaze Caracteristici Utilizeaz oxigenul ca acceptor de electroni, dar nu l
130

Dehidrogenaze Oxigenaze Peroxidaze Transferaze Metiltransferaze Aminotransferaze Kinaze Fosforilaze Hidrolaze Fosfataze Fosfodiesteraze Proteaze Liaze Decarboxilaze Aldolaze Izomeraze Racemaze Mutaze Ligaze Carboxilaze Sintetaze

ncorporeaz n substrat Utilizeaz ca acceptori de electroni alte molecule dect oxigenul (ex. NAD+) ncorporeaz oxigenul direct n substrat Utilizeaz apa oxigenat (peroxidul de hidrogen) ca acceptor de electroni Transfer radicalul metil Transfer gruparea amino de pe un aminoacid pe un cetoacid 2 Transfer gruparea PO 3 de la ATP la substrat
2 Transfer gruparea PO 3 din fosfatul anorganic pe substrat 2 Elibereaz radicalul PO 3 din substrat sub aciunea apei Cliveaz legturile fosfodiester de tipul celor din acizi nucleici Cliveaz legturile amidice de tipul celor din proteine

Produc dioxid de carbon n urma unor reacii de eliminare Formeaz aldehide ca urmare a unor reacii de scindare Determin interconversia stereoizomerilor D i L Transfer grupe de atomi n cadrul aceleiai molecule Utilizeaz ca substrat dioxidul de carbon Unesc dou molecule n reacii ATP dependente

6.6. CARACTERISTICILE I MECANISMUL DE ACIUNE AL FIECREI CLASE DE ENZIME


6.6.1. OXIDOREDUCTAZE Enzimele din aceast clas catalizeaz reacii redox caracterizate prin: a. transfer de hidrogen (transhidrogenaze; dehidrogenaze); b. transfer de electroni (transelectronaze);

131

c. reacii de combinare a unui substrat cu oxigenul (oxigenaze). Exemple: a. Dehidrogenazele funcioneaz n prezena unor coenzime care joac rol de acceptori intermediari ntre substrat i produsul final. Coenzimele oxidoreductazelor sunt derivai ai vitaminelor, coninnd n plus o pentoz i o baz azotat A (adenina): Nicotinamid vitamina PP (niacina) Adenin baz azotat purinic Dinucleotid NAD+

Flavin vitamina B2 (riboflavina) Adenin Dinucleotid FAD

132

Reaciile generale catalizate de dehidrogenaze sunt: SH2 + NAD+


substrat redus coenzima oxidat dehidrogenaza NAD+ dependent

S
substrat oxidat

+ NADH + H+
coenzima redus

SH2 + FAD
substrat redus coenzima oxidat dehidrogenaza FAD dependent

S
substrat oxidat

+ FADH + H+
coenzima redus

b. Transelectronaze - coenzima derivat de la hem cit (Fe2+)


forma redus e +e

cit (Fe3+)
forma oxidat

c. Oxidaze - realizeaz transferul de electroni direct pe O 2 i se numesc oxidaze (citocromoxidaza) sau catalizeaz ncorporarea oxigenului n molecula unui substrat i se numesc oxigenaze. 2 cit (Fe2+) + O2
2e citocrom C oxidaza +2e

2 cit (Fe3+) + O 2 2

133

O metalenzim care catalizeaz dismutaia anionului superoxid . O 2 (radical liber al oxigenului extrem de reactiv i iniiator al fenomenelor de lipoperoxidare membranar) n ap oxigenat (compus stabil i mai puin toxic) este SUPEROXID DISMUTAZA (SOD). . + 2 O 2 + 2H
SOD

H2O2 + O2

Ea este localizat n citosol i este prima treapt de aprare a organismului viu mpotriva speciilor reactive ale oxigenului. Exist mai multe forme ale acestei enzime: - una hibrid, coninnd Mn/Fe, izolat din mitocondria de E. Coli; - alta coninnd Cu/Zn, existent n citosol i izolat din eritrocite bovine.

Figura 6.6 - Superpoziia liganzilor la situsul activ al Fe-SOD i Mn-SOD

d. Peroxidaze - utilizeaz H2O2 (peroxidul de hidrogen sau apa oxigenat) ca donor de oxigen:
134

H2O2 SH2 + O
substrat redus

peroxidaze

H2O + O S + H2O
substrat oxidat

________________________________ SH2 + H2O2


peroxidaze

+ 2H2O

Unele peroxidaze sunt heteroproteide seleniu dependente i ca exemplu menionm glutation peroxidaza. n reaciile catalizate de peroxidazele care au glutationul drept cofactor, glutationul redus (GSH) funcioneaz ca donor de hidrogen i electroni, iar peroxizii ca acceptori. 2GSH GS SG ROOR 2R OH

e. Catalaze - catalizeaz o reacie n care H2O funcioneaz att ca donor, ct i ca acceptor de oxigen. Rolul catalazelor este de a detoxifia celula de H2O2: H2O2 + H2O2
catalaze

O2 + 2H2O

6.6.2. TRANSFERAZE Aceste enzime transfer diferite grupri funcionale ntre un donor i un acceptor. Gruprile amino, acil, fosfat, metil i glicozil sunt cel mai adesea transferate. Aminotransferazele (transaminaze) transfer o grupare amino de pe un aminoacid (donor) pe un -cetoacid (acceptor) cu formarea unui nou aminoacid i a unui nou -cetoacid.

COOH O CH NH2 CH2 + CH3 C COOH CH2 COOH

135

COOH C=O CH2 CH2 COOH

NH2 + CH3 CH COOH

AAT acidul piruvic -cetoacid 1 acidul glutamic aminoacid 1 acidul -cetoglutaric -cetoacid 2 alanina aminoacid 2

n acest caz AAT = GPT (glutamat piruvat transaminaza). Coenzima transaminazelor este un derivat al vitaminei B6 numit piridoxalfosfat. Ca donori de grupri amino funcioneaz aminoacizii urmtori: acidul aspartic, glutamic, alanina, iar ca acceptori: acidul piruvic, oxalilacetic, -cetoglutaric. Kinazele sunt enzime care catalizeaz transferul unui radical fosforic de la ATP sau alt nucleozid trifosforilat la o grupare OH sau NH2 acceptoare. Ele se mai numesc i fosfotransferaze. De exemplu, glucokinaza catalizeaz fosforilarea glucozei:

glucoza

glucozo-6-fosfat

Glicoziltransferazele sunt implicate n biosinteza poliglucidelor, transfernd un radical glicozil pe o molecul poliglucidic preexistent (primer):

136

Aciltransferazele sau transacilazele asigur transferul gruprii acil (RCO) de pe un donor pe un acceptor. Coenzima transacilazelor se numete Coenzim A (CoASH), molecul complex care conine un radical provenit de la acidul pantotenic (vitamin din complexul B) fosforilat, un ADP i un radical de cisteamin:
acid pantotenic (vitamina din grupul B) CoA SH cisteamina H2N H2C CH2 SH ADP

Gruparea tiol (SH) este gruparea activ la care se leag radicalul acil. Unul dintre cei mai importani radicali acil este radicalul CH3CO (acetil) care este transferat sub form de acetilcoenzim A (CH3COS CoA). Acesta este un metabolit important, intervenind att n reacii anabolice, ct i catabolice (caracter amfibolic):
137

Coenzima A

6.6.3. HIDROLAZE n aceast clas sunt cuprinse foarte multe enzime care catalizeaz reaciile de descompunere (scindare) a substanelor complexe n molecule mai simple, numai cu participarea apei. XOY + HOH XOH + YOH Exemple: esteraze: lipaze, fosfataze, ATP-aze; glucidaze: amilaza, maltaza, lactaza; peptidhidrolaze (proteaze): pepsina, tripsina, carboxipeptidaze etc. 6.6.4. LIAZE

138

Sunt enzime care catalizeaz scindarea diferitelor substrate fr participarea apei. Ele acioneaz prin ruperea legturilor dintre diferii atomi: CC, CN, CO, CS:

6.6.5. IZOMERAZE Catalizeaz reaciile de transformare a unui substrat ntr-un izomer al su:

glucoza

galactoza

6.6.6. LIGAZE sau SINTETAZE Sunt enzime specific anabolice al cror scop l constituie unirea mai multor substrate, avnd ca rezultat formarea unei substane mai
139

complexe. Reaciile catalizate de ligaze au loc numai n prezena unor furnizori de energie (ATP, GTP, UTP) i se soldeaz cu formarea unor noi legturi chimice: COOH piruvat carboxilaza ATP + HCO3 + CO CH3 COOH CO + ADP + H3PO4 CH2 COOH
acid oxalilacetic

acid piruvic

140

CAPITOLUL 7 BIOCHIMIA PROCESELOR METABOLICE


7.1. CONSIDERAII GENERALE
Organismele animale au ca proprietate specific posibilitatea de a lua din mediul nconjurtor substanele nutritive pe care le folosesc n scopul biosintezei componenilor structurali i funcionali proprii, asigurndu-i astfel creterea, dezvoltarea, reproducerea. Acest lucru se realizeaz printr-un numr mare de reacii chimice enzimatice care se condiioneaz reciproc i care poart numele de metabolism. Metabolismul reprezint ansamblul proceselor biochimice de degradare (catabolism) i sintez (anabolism) din care rezult substane chimice necesare vieii. Se poate spune c metabolismul reprezint esena material a vieii, el realizndu-se n strns interdependen cu mediul ambiant. Procesele metabolice presupun transformri energetice, fiind nsoite de generare (procese exergonice) sau de consum (procese endergonice). Se tie c sursa de energie pentru via este soarele i c energia solar este transformat de plantele verzi n energie chimic n procesul de fotosintez. Aceast energie chimic este stocat n molecule organice (glucoz, alte glucide, trigliceride, proteine), preluate ulterior de organismele heterotrofe direct sau indirect din plante i degradate pn la CO 2 i H2O cu eliberarea energiei chimice nmagazinate. O mare parte a acestei energii este stocat sub form de compui macroergici (ATP), iar restul este transformat direct n cldur. La rndul lor, aceti compui macroergici sunt utilizai pentru biosinteza macromoleculelor proprii organismului din precursori mai simpli, pentru efectuarea de lucru mecanic (contracia muscular) i pentru transportul activ (lucru osmotic) prin membrane. Putem spune c metabolismul const din dou procese unitare i inseparabile, catabolism i anabolism, cu urmtoarele caracteristici:
141

METABOLISM CATABOLISM (DEGRADARE): n care compuii macromoleculari sunt transformai n molecule simple
SE ELIBEREAZ

ANABOLISM (SINTEZ): n care se formeaz macromolecule proprii din precursori mai simpli
SE CONSUM

ENERGIE

ENERGIE

Acest circuit energetic (flux) este comun tuturor formelor de via. n ceea ce privete procesul de catabolism, acesta parcurge urmtoarele etape:
PROTIDE AMINOACIZI GLUCIDE OZE ACID PIRUVIC ACETILCOENZIMA A NH3 ATP NADH (H+) FADH2 H2O O2
COENZIME REDUSE

LIPIDE GLICEROL + ACIZI GRAI

BIOMOLECULE COMPLEXE (COMBUSTIBILI) CRMIZILE EDIFICIULUI MACROMOLECULAR METABOLII SIMPLI

CICLUL KREBS

CO2

RESPIRAIA CELULAR ENERGIE FOSFORILARE OXIDATIV ATP 142

Rezult c n catabolism au loc reacii de oxidare la care particip coenzimele reduse: NADH(H+), FADH2 i NADPH(H+) i rezult energie sub form de ATP. Anabolismul este procesul metabolic consumator de energie, prin care se biosintetizeaz din precursori simpli (metabolii) provenii din procesele de catabolism, biomolecule complexe. Anabolismul este deci procesul invers catabolismului, n care au loc reacii de reducere la care particip coenzimele oxidate: NAD+, NADP+ i FAD i care utilizeaz energie (ATP) pentru sinteza biomoleculelor complexe.

7.2. ASPECTE DE METABOLISM GLUCIDIC


Glucidele sunt biomolecule cu rol energetic i structural, sintetizate de plantele verzi, din compui simpli (CO2, H2O i energie solar), iar n organismul animal ajung pe cale exogen (hran). Compuii gluci-dici din hran asigur o mare parte din necesarul caloric pentru ani-male, se depun (se acumuleaz) sau sunt convertite n alte biomolecule necesare celulelor. Metabolismul glucidic cuprinde: - degradarea (catabolismul) glucidelor; - biosinteza (anabolismul) glucidelor. 7.2.1. DEGRADAREA GLUCIDELOR 7.2.1.1. Digestia Pentru a putea fi absorbite prin peretele intestinal, oligo- i poliglucidele sunt supuse unei digestii prealabile sub aciunea unor enzime din clasa hidrolaze i anume glucidaze. Oligo- i poliglucidele care nu sunt hidrolizate enzimatic nu pot fi absorbite, ajung n tractul intestinal inferior unde sunt preluate de bacterii. Acestea, avnd mai multe tipuri de glucidaze dect organismele animale, hidrolizeaz compuii glucidici pn la nivel de oze, pe care le folosesc n metabolismele proprii i apoi elimin n intestin produi de metabolism ce pot determina creterea motilitii intestinale i crampe.
143

Schema digestiei glucidelor cuprinde urmtoarele etape:

OLIGO- I POLIGLUCIDE

HIDROLIZ ENZIMATIC N CAVITATEA BUCAL SUB ACIUNEA -AMILA-ZEI SALIVARE (pH = 6,8)

HIDROLIZ ENZIMATIC SUB ACIUNEA CELULA-ZEI, N RUMEN I CONTI-NU N INTESTIN

LA POLIGASTRICE

LA MONOGASTRICE

DEXTRINE

OZE

HIDROLIZ CHIMIC N STOMAC (pH = 1,5 2,5) I APOI N DUODEN SUB ACIUNEA -AMILAZEI PANCREATICE OZE

ABSORBIA OZELOR PRIN PERETELE INTESTINAL: prin difuzie simpl (trioze, pentoze); sub form de oze fosforilate (esteri fosforici ai hexozelor)

PRELUAREA OZELOR (DUP CE UNELE AU FOST DEFOSFORILATE) DE FLUXUL SANGUIN I AJUNG PRIN VENA PORT LA FICAT, UNDE TOATE OZELE SUNT TRANSFORMATE N GLUCOZ

STOCAT SUB FORM DE GLICOGEN HEPATIC;

STOCAT N MUCHI SUB FORM DE GLICOGEN MUSCULAR

144

7.2.1.2. Glicogenoliza n organismul animal glucoza este stocat sub form de glicogen, de unde este eliberat n funcie de necesitile organismului. Glicogenul hepatic constituie principala rezerv de glucoz imediat disponibil nu att pentru necesitile proprii ale ficatului, ct pentru aprovizionarea cu glucoz a creierului i eritrocitelor. Glicogenoliza (catabolismul glicogenului) este procesul biochimic, enzimatic, prin care macromolecula de glicogen este scindat la nivel hepatic sau muscular, cu formare n final de glucozo-6-fosfat, respectiv glucoz. Glicogenoliza ncepe la capetele nereductoare ale lanurilor de glicogen i este un proces de fosforoliz prin care sunt eliberate molecule de glucoz fosforilate. Enzima care intervine n procesul de fosforoliz este fosforilaza hepatic, care exist n dou forme : - forma b puin activ; - forma a foarte activ. Iniierea glicogenolizei (respectiv activarea fosforilazei a) se afl sub controlul unor hormoni pancreatici, adrenalina i glucagonul, ce acioneaz corelat sau independent. Glicogenul hepatic i muscular este stocat n citoplasm (sub form de agregate granulare), unde exist pe lng enzima fosforilaz i alte enzime implicate n scindarea legturilor C1-C6, respectiv o enzim de deramifiere (glucantransferaza) i o glicozidaz. Principalele etape ale glicogenolizei sunt redate n schema urmtoare:
GLICOGEN (C6H10O5)n H3PO4 (C6H10O5)n-1 + 1P) DERAMIFIERE FOSFOROLIZ SUB ACIUNEA FOSFORILAZEI a

GLUCOZO-1-FOSFAT (GIZOMERIZARE SUB ACIUNEA FOSFOGLUCOMUTAZ

DEXTRINE PUTERNIC RAMIFICATE

GLUCOZO-6-FOSFAT (G-6-P) HOH GLUCOZ + H3PO4 SNGE ESUTURI (GLICEMIA)

145

7.2.1.3. Glicoliza Glicoliza este procesul de degradare enzimatic a glucozei, respectiv procesul complex de oxidare intracelular a glucozei n scopul obinerii de energie sub form de ATP necesar celulelor eucariote, vegetale i animale. Acest proces se realizeaz prin dou ci metabolice: I - glicoliza anaerob, care are loc n citoplasm, se desfoar n prezena oxigenului (O2), dar fr participarea lui i const n degradarea glucozei pn la acid lactic ca produs final, rezultnd totodat o cantitate mic de energie sub form de ATP; II - glicoliza aerob, care se realizeaz n condiiile participrii directe a oxigenului i const n degradarea glucozei pn la produi finali: CO2, H2O i o cantitate mare de energie sub form de ATP. Acest tip de glicoliz cuprinde mai multe etape: a) degradarea glucozei pn la acid piruvic (prin reacii comune cu glicoliza anaerob); b) ciclul acizilor tricarboxilici sau ciclul Krebs, format dintr-o succesiune de reacii ce se desfoar n matrixul mitocondrial; c) lanul respirator (sistemul transportor de electroni sau respiraia celular) cuplat cu fosforilarea oxidativ, proces n care coenzimele reduse rezultate din ciclul Krebs sunt oxidate de ctre oxigenul molecular, rezultnd ap i energie stocat n molecula de ATP. Procesele sunt localizate n membrana mitocondrial intern.
I - GLICOLIZA ANAEROB (ETAPELE DEGRADRII CITOPLASMATICE A GLUCOZEI)

Reprezint succesiunea de reacii enzimatice care se petrec n condiiile aprovizionrii insuficiente cu oxigen a esutului muscular. Este un proces rapid de generare a unei cantiti relativ mici de energie, rezultnd totodat i produi de metabolism ce pot fi utilizai n reacii de biosintez. Reacia general a procesului de degradare anaerob a glucozei este:
146

GLICOLIZ

C6H12O6
glucoz

ANAEROB

CH3 2HC OH + 2ATP COOH


acid lactic

Enzimele care catalizeaz lanul de reacii enzimatice ce alctuiesc glicoliza anaerob sunt localizate n citoplasm, unde este transferat i glucoza printr-un proces de transport pasiv cu ajutorul unei proteine. Pentru ca acest proces generator de energie s aib loc n celul, trebuie ca moleculele combustibil s fie mai nti activate, adic s treac ntr-o stare de energie mai ridicat. Etapele glicolizei anaerobe sunt: 1. Formarea glucozo-1-fosfatului (activare):

2. Izomerizarea glucozo-6-fosfatului la fructozo-6-fosfat:

fructozo-6-fosfat

147

3. Formarea fructozo-1,6-difosfatului

4. Scindarea fructozo-1,6-difosfatului n triozofosfai:

5. Izomerizarea i stabilirea echilibrului ntre triozele fosforilate:


CH2 O PO3H2 CO CH2OH CHO CHOH CH2 O PO3H2

triozofosfatizomeraza

Echilibrul este deplasat spre formarea gliceraldehid-3-fosfatului (GAP) care va intra n etapele ulterioare ale glicolizei; deci glucoza 2GAP. 6. Oxidarea GAP la acid 3-fosfogliceric are loc n dou etape catalizate de dou enzime diferite: a.
CHO CHOH + H3PO4 CH2 O PO3H2
NAD+ NADH(H+)

CO O PO3H2 CHOH CH2 O PO3H2


acid 1,3-difosfogliceric

gliceraldehid-3-Pdehidrogenaza

148

b.
CO O PO3H2 CHOH + ADP CH2 O PO3H2 COOH CHOH
fosfoglicerokinaza (Mg)

+ ATP

CH2 O PO3H2
acid 3-fosfogliceric

7. Formarea acidului 2-fosfogliceric:


COOH CHOH CH2 O PO3H2 COOH
fosfogliceromutaza

HC O PO3H2 CH2OH
acid 2-fosfogliceric

8. Formarea acidului 2-fosfoenolpiruvic:


COOH HC O PO3H2 CHOH
HOH enolaza

COOH C O PO3H2 CH2


acid 2-fosfoenolpiruvic compus energizat

9. Formarea acidului piruvic:


COOH C O PO3H2 + ADP CH2 COOH
piruvatkinaza

CO CH3

+ ATP

Deoarece s-au format 2 trioze/mol glucoz 2 2 ATP/mol glucoz = 4 ATP/mol glucoz. Atunci cnd celula are nevoie urgent de energie sau atunci cnd aprovizionarea cu oxigen este insuficient, acidul piruvic nu trece n
149

mitocondrie pentru degradarea final, ci rmne n citoplasm unde este transformat n acid lactic. 10. Formarea acidului lactic:
COOH CO + NADH(H+) CH3 COOH
LDH

CHOH + NAD+ CH3


acid lactic
+

2 trioze/mol glucoz consum cei 2NADH(H ) rezultai din reacia 6, pentru formare de acid lactic. Aceast ultim reacie ilustreaz fluxul coenzimei NAD+/ NADH(H+) ntre mai multe enzime independente:
S1H2 redus enzima 1 S1 oxidat NADH(H+) NAD+ enzima 2 S2 oxidat S2H2 redus

n cazul glicolizei anaerobe S1H2 = gliceraldehid-3-fosfat S2H2 = acid lactic Bilanul energetic al procesului de glicoliz anaerob: din etapa 6 i 9 rezult 2 moli ATP pe fiecare trioz, ceea ce nseamn 4 moli ATP n total; n etapa 1 i 3 se consum 2 moli ATP; n final 4ATP 2ATP = 2ATP/mol de glucoz. n prezentarea anterioar, pentru simplificare, s-a pornit glicoliza utiliznd drept combustibil glucoza, dar n muchi, din rezerva de glicogen muscular, glucoza este eliberat printr-un proces de fosforoliz sub form de ester fosforic (G1P) care apoi trece n G6P. Se reduce

150

astfel consumul de ATP pe glicoliza anaerob cu un mol i n acest caz bilanul energetic va fi: 4ATPrezultai 1ATPconsumat = 3 moli ATP/mol de glicogen. Schema general a procesului de glicoliz anaerob

151

n afar de muchiul scheletic care n primele faze de efort funcioneaz anaerob, n organismul animal mai sunt i alte celule care produc
152

acid lactic, deoarece utilizeaz glicoliza anaerob ca furnizor energetic. S-au descris celule din rinichi i din retin care funcioneaz virtual anaerob, ca i eritrocitele mature care neavnd mitocondrii folosesc aceeai cale de obinere a ATP. Acumularea acidului lactic n celul este nociv, ntruct scade pH-ul citoplasmatic, inhibnd enzimele, inclusiv cele din glicoliz. De aceea el este eliminat n snge, care l transport la ficat, unde este reconvertit n piruvat i apoi n glucoz. Procesul se numete gluconeogenez, iar ciclul fiziologic prin care acidul lactic este metabolizat, ciclul Cori.
FICAT SNGE MUCHI

glicogen

glucoz

glicogen

glucoz
4/5

glucoz glicoliza anaerob

CO2 + H2O + E

1/5

gluconeogeneza ac.lactic

ac.lactic

ac.lactic

FERMENTAIILE GLUCIDELOR Procesul de degradare enzimatic a glucidelor de ctre microorganisme poart numele de fermentaie. Fermentaiile sunt produse numai de ctre microorganismele heterotrofe, care i asigur n felul acesta hrana, ct i energia necesar nmulirii i dezvoltrii lor. n funcie de caracteristicile microorganismelor, ct i n funcie de produsul final rezultat, fermentaiile se pot clasifica astfel: lactic (produs final acidul lactic) - fermentaii anaerobe alcoolic (produs final etanolul) butiric (produs final acidul butiric) acetic (produs final acidul acetic) - fermentaii aerobe
153

citric (produs final acidul citric) Fermentaia lactic (cenobioza) este procesul de degradare anaerob a glucidelor sub aciunea bacteriilor lactice. Bacteriile lactice transform glucoza n acid lactic dup un mecanism asemntor cu cel al glicolizei anaerobe din muchi. Bilanul energetic al procesului fermentativ este de 2 moli ATP/mol glucoz. Fermentaia lactic poate fi: - homofermentativ, cnd pe lng acid lactic rezult cantiti mici de alcool etilic, acizi volatili, substane de arome; - heterofermentativ, cnd pe lng acid lactic rezult cantiti mari de produi secundari, cum ar fi: etanolul, dioxidul de carbon. Fermentaia lactic este utilizat n procesele de obinere a produselor lactate (iaurt, brnzeturi), n conservarea nutreurilor prin nsilozare i n fermentarea i conservarea legumelor. Procesul de fermentaie lactic poate folosi ca substrat i alte hexoze (fructoz, galactoz, manoz), diglucide (lactoz, zaharoz, maltoz) sau poliglucide (amidon) i are trei faze: faza preliminar, caracterizat printr-o fermentaie violent, nsoit de degajare de gaze, a crei durat este funcie de temperatur i de natura produsului supus fermentaiei (se recomand un toptim = 18-20C); faza principal sau faza determinant a fermentaiei, ce const ntr-o acumulare masiv de acid lactic (crete de la 0,3 la 1,5%); faza final, care se caracterizeaz printr-o reducere treptat de acid lactic ca urmare a dezvoltrii unor microorganisme care l consum. O dat cu consumarea lui ncepe alterarea ntr-o msur mai mare sau mai mic a produselor rezultate n urma fermentaiei lactice. STAREA PSE A CRNII Starea PSE a crnii (n special de porc) este o stare anormal a muchiului ce se caracterizeaz prin aspectul pal, moale (soft) i exudativ (exudative) al acestuia. Aceast stare influeneaz negativ calitatea crnii, se instaleaz dup sacrificarea animalului, cnd se ntre154

rupe circulaia sanguin i se creeaz condiii favorizante pentru glicoliza anaerob. Rezult acid lactic care se acumuleaz rapid n muchi, determin scderea pH-ului pn la o valoare cuprins ntre 5,3-5,4 (valoare la care majoritatea enzimelor glicolizei anaerobe devin inactive) i permite instalarea strii anormale PSE. Cu ct viteza de desfurare a glicolizei anaerobe n muchiul aflat n rigiditate va fi mai mare, cu att se va instala mai rapid aceast stare anormal. II - GLICOLIZA AEROB sau procesul de metabolizare a piruvatului pe cale aerob (cu participarea oxigenului) este un proces enzimatic care se realizeaz n mitocondrie. Acidul piruvic obinut prin metabolizarea anaerob a glucozei este decarboxilat oxidativ n prezena coenzimei A i transformat n acetilCoA:
COOH piruvatC = O + NAD+ + CoASH decarboxilaz CH3
acid piruvic

CH3 CO S CoA + CO2 + NADH(H+)

acetilCoA

n mecanismul de reacie intervin i coenzimele NAD+ care sunt reduse la NADH(H+), tiaminpirofosfatul i ionii de magneziu. AcetilCoA intr apoi ntr-un proces enzimatic ciclic de degradare din care rezult CO2, coenzime reduse i ATP, denumit ciclul acizilor tricarboxilici (ciclul acidului citric) sau ciclul Krebs. Ciclul Krebs este o cale oxidativ major, comun, de degradare a glucidelor, lipidelor, proteinelor care furnizeaz n acelai timp i o serie de precursori implicai n procese de biosintez a aminoacizilor, a bazelor azotate purinice sau pirimidinice sau a nucleului porfirinic din structura hemului. Etapele ciclului Krebs: 1. Formarea acidului citric Iniierea ciclului este datorat acidului oxalilacetic. Printr-o reacie de transacetilare, sub aciunea enzimei citratsintaza, are loc condensarea

155

acetilcoenzimei A cu acidul oxalilacetic, rezultnd acid citric, primul acid tricarboxilic format n acest proces.
COOH C=O CH2 COOH
CoASH

+ CH3 CO SCoA
Acetil coenzim A

H2O Citrat-sintaz

Acid oxalilacetic

COOH CH2 HO C COOH CH2 COOH


Acid citric

2. Izomerizarea acidului citric n acid izocitric n prezena aconitazei.


COOH CH2 HO C COOH CH2 COOH Acid citric COOH CH2 HC COOH HO CH COOH
Acid izocitric

aconitaz

3. Oxidarea i decarboxilarea acidului izocitric Sub aciunea izocitrat dehidrogenazei i a coenzimei NAD+ are loc oxidarea gruprii hidroxil la gruparea ceto. n acelai timp enzima determin decarboxilarea cu eliberarea primei molecule de dioxid de carbon. Rezult acid -cetoglutaric.
COOH NADH + H+ CO2 CH2 NAD+ HC COOH Izocitrat dehidrogenaz HO CH COOH 4. Decarboxilarea oxidativ a acidului
Acid izocitric

COOH CH2 CH2 C=O COOH -cetoglutaric

Acid -cetoglutaric

156

Sub aciunea unui complex enzimatic (-cetoglutarat decarboxilaza) are loc eliminarea celei de a doua molecule de dioxid de carbon, iar gruparea ceto este oxidat cu ajutorul NAD + la grupare carboxil. Radicalul succinil astfel format este fixat de ctre coenzima A sub form de succinil-coenzima A.
COOH CH2 CH2 C=O COOH COOH CH2 CH2 CO SCoA
Succinil - CoA

CoASH NAD+

NADH + H+

CO2

-cetoglutarat dehidrogenaz

Acid -cetoglutaric

Legtura tioester din structura succinil-coenzimei A este foarte bogat n energie. Aceasta este transferat, n prezena succinil-coenzima A - sintazei, unei molecule de GDP, care fixeaz ionul fosfat i se transform n GTP. n acelai timp rezult i acidul succinic liber.
COOH CH2 CH2 CO SCoA COOH CH2 CH2 COOH

+ GDP

GTP

CoASH

Succinil-CoA sintaz

Succinil - CoA

Acid succinic

Ulterior, ionul fosfat i energia din GTP pot fi transferate pe ADP. GTP + ADP GDP + ATP

Aceasta este singura reacie a ciclului Krebs n care se elibereaz energie sub form de ATP direct de pe substrat. 5. Oxidarea acidului succinic la acid malic
157

Acest proces are loc prin dou reacii. Prima o reprezint dehidrogenarea acidului succinic sub aciunea succinat dehidrogenazei i a FAD, rezultnd acidul fumaric. n cea de a doua reacie el este hidratat n prezena fumarazei, cu formare de acid malic.
COOH CH2 CH2 COOH COOH CH HC COOH
Acid fumaric

FAD

FADH2

H2O Fumaraz

Succinat dehidrogenaz

COOH HO CH CH2 COOH


Acid malic

Acid succinic

6. Oxidarea acidului malic n prezena malat dehidrogenazei cu NAD conduce la formarea acidului oxalilacetic. Acesta nchide, astfel, ciclul i poate relua, n continuare, procesul de fixare i degradare a acetilcoenzimei A.
+

COOH HO CH CH2 COOH


Acid malic

NAD+

NADH +

Malat dehidrogena

Aa cum rezult din schema urmtoare, degradarea unui rest de CH3CO sub form de acetilcoenzima A prin ciclu reacie.

Schema general a ciclului Krebs:


158

Ecuaia general, sintetic, a acestui proces ce se desfoar n cadrul ciclului Krebs poate fi redat astfel: CH3COSCoA
3NAD+ FAD ADP +

2CO2 + 3NADH + FADH2 + ATP

Coenzimele reduse NADH i FADH2 intr apoi n lanul respirator, unde sunt oxidate de ctre oxigenul molecular, cu formare de ap, iar energia eliberat este stocat prin fosforilare oxidativ n molecule de ATP.
LANUL RESPIRATOR

Coenzimele reduse NADH i FADH 2 rezultate n etapele anterioare de degradare i n principal n ciclul Krebs sunt reoxidate de ctre oxigenul molecular n lanul respirator cuplat cu fosforilarea oxidativ. De fapt aceasta este efectiv etapa aerob a ntregului metabolism aerob. Aceast oxidare a NADH i FADH2 este cuplat cu reacia de

159

fosforilare a ADP la ATP i de aceea ea poart numele de fosforilare oxidativ. Schematic, reaciile de oxidare a coenzimelor cuplate cu fosforilarea oxidativ pot fi redate astfel: NADH + H+ + O2 NAD+ + H2O FADH2 + O2 FAD + H2O ADP + HPO 2 ATP 4 G0 = 218,8 kJ/mol G0 = 181,6 kJ/mol G0 = + 31,5 kJ/mol

Dup cum se vede, oxidarea coenzimelor reduse are loc cu o mare scdere a energiei libere, aceasta fiind utilizat n reaia de fosforilare oxidativ. Mecanismul reaciei de oxidare a coenzimelor implic, de fapt, dou etape intermediare i anume: oxidarea coenzimelor, cu eliberare de electroni i protoni NADH NAD+ + H+ + 2e FADH2 FAD + 2H+ + 2e transportul electronilor pe moleculele de oxigen i oxidarea lor la ap O2 + 4H+ + 4e 2H2O n mitocondrii, sediul respiraiei celulare, electronii eliberai de coenzime nu ajung direct pe moleculele de oxigen. Ei sunt transferai intermediar de pe un acceptor pe altul i abia n final pe moleculele de oxigen. Aceasta poart numele de lanul transportor de electroni sau lanul respirator. El este constituit dintr-o flavoprotein ca prim acceptor de electroni, coenzima Q i patru citocromi b, cl, c i a (citocromoxidaza). Coenzima Q sau ubichinona are o structur asemntoare cu cea a vitaminelor K i poate exista n form oxidat i redus. Pe aceast proprietate se bazeaz mecanismul prin care ea preia atomii de hidrogen de la flavoproteine. CoQ
oxidat + 2H 2H

CoQH2
redus

160

Oxidarea coenzimei Q de ctre citocromul b are loc prin transferul electronilor pe ionul de fier din structura hemului. Cit b (Fe3+)
oxidat + e e

Cit b (Fe2+)
redus

Mecanismul transferului atomilor de hidrogen, respectiv al electronilor, de pe coenzima Q pe citocromul b poate fi redat prin reacia: CoQH2 + 2Cit b (Fe3+) CoQ + 2Cit b (Fe2+) + 2H+ Toate enzimele ce alctuiesc lanul respirator transportor de electroni sunt localizate n interiorul membranei mitocondriale, ntr-o succesiune strict ce permite transferul direct al electronilor. n acelai timp aceste enzime se caracterizeaz prin poteniale de oxidoreducere a cror valoare scade succesiv. De aceea transferul electronilor este nsoit de o scdere treptat a energiei libere G0. Transportul atomilor de hidrogen i al electronilor n cadrul lanului respirator poate fi reprezentat prin urmtoarea schem:
NADH + H+ NAD+
2H G0 = 38,5 kJ/mol 2H

Flavoprotein FADH2 FAD 2H+


2H

CoQ

2e

Cit b

2e G0 = 34,7 kJ/mol 2e

Cit c1

Cit c

2e 2e G0 = 102,1 kJ/mol

Cit a + a3 H2O

O2

161

Din aceast schem se observ c NADH i FADH 2 sunt donorii iniiali de electroni, n timp ce oxigenul este acceptorul final. Transferul electronilor de pe citocromul a pe molecula de oxigen, cu formarea moleculei de ap, are loc conform ecuaiei: 2Cit a (Fe2+) + O2 + 2H+ 2Cit a (Fe3+) + H2O
form redus form oxidat

Celulele au capacitatea i mecanismul necesar pentru a cupla acest proces de oxidare nsoit de o scdere a energiei libere cu procesul de fosforilare a ADP, prin care energia este stocat n molecule de ATP. Dup cum rezult din schem, oxidarea fiecrui mol de NADH determin formarea a trei moli de ATP; un mol de NADH este echivalent din punct de vedere energetic cu trei moli de ATP:
3ADP + 3

NADH + H+ + O2

NAD+ + H2O + 3ATP

Oxidarea unui mol de FADH2 este cuplat cu fosforilarea a doi moli de ADP i este echivalent din punct de vedere energetic cu doi moli de ATP :
3ADP + 3

FADH2 + O2

FAD + H2O + 2ATP

Mecanismul cuplrii transportului de electroni cu reacia de fosforilare a ADP implic transferul de protoni din matricea mitocondriei spre spaiul intermembranal al acesteia. Fosforilarea ADP i sinteza de ATP sunt catalizate de ATP-sintaza. Pentru formarea ATP este necesar o cantitate de energie, condiie care este ndeplinit numai de trei segmente din lanul respirator: NADH + H+
ATP

CoQH2

Cit b
ATP

Cit c

162

Cit a + a3 O2 2 Reglarea respiraiei celulare Desfurarea lanului ATP respirator cuplat cu fosforilarea oxidativ este direct determinat de concentraia n acetilcoenzima A i n oxigen, dar n realitate reglarea sa are loc prin valoarea raportului ATP/ADP din celul. Producerea de ATP prin fosforilare oxidativ este direct comandat de necesitile energetice ale celulei, respectiv de consumul de ATP n reaciile endergonice sau pentru alte scopuri. Datorit acestei cuplri, degradarea aerob reprezint un mod eficient i economic de furnizare de energie ce se stocheaz sub form de ATP. Aceast energie este utilizat de celul n primul rnd n biosinteza diferitelor componente necesare.

Schema general a glicolizei aerobe:

Din aceast schem se observ c dintr-un mol de glucoz se formeaz: - 6 CO2 - 10 NADH echivalent cu 10 3 = 30 ATP - 2 FADH2 echivalent cu 2 2 = 4 ATP - 4 ATP direct n reacii = 4 ATP
163

Total = 38 ATP Reacia general de oxidare a glucozei n procesul respiraiei celulare va fi:
C6H12O6 + 6O2 + 38(ADP + HPO 2 4 ) 6CO2 + 38ATP + 44H2O

glucoz

sau C6H12O6 + 6O2 6CO2 + 6H2O H = 2870 kJ/mol

Degradarea aerob a glucozei este, deci, deosebit de eficient, genernd 38 moli ATP/1 mol glucoz, ceea ce nseamn c 38% din energia eliberat prin degradare este conservat sub form de ATP (1 ATP 8000 calorii). 7.2.1.4. Calea pentozofosfailor (untul hexoz-monofosfailor) Este o cale alternativ oxidativ de degradare a glucozei (circa 8 - 30% din glucoz este degradat pe aceast cale). Este calea de degradare ce rspunde unor cerine specifice ale celulei, asigurnd necesarul de pentoze (pentru sinteza nucleotidelor i a acizilor nucleici), asigur necesarul de coenzime NADPH(H+) pentru sinteza acizilor grai (lipide) i pentru alte procese de biosintez. Sediul procesului este n ficat, cristalin, glanda mamar, rinichi i este alctuit din dou etape: a) etapele oxidative (ireversibile) b) etapele nonoxidative (reversibile) a. Etapele oxidative Glucozo-6-fosfatul este transformat n ribozo-5-fosfat i CO2, concomitent cu oxidarea NADP+ la NADPH(H+):

164

b. Etapele nonoxidative Nevoile tisulare pentru cei 2 produi ai etapei oxidative, NADPH(H+) i ribozo-5-fosfatul, variaz foarte mult. Celulele adipoase i hepatice posed cantiti mari din enzimele cii pentozofosfailor spre deosebire de celulele musculare la care aceste enzime lipsesc. Pe de alt parte, cererea pentru unul dintre cei doi produi ai cii metabolice este mai mare dect pentru cellalt (la celulele n diviziune nu este necesar NADPH(H+), cci nu se sintetizeaz lipide, n schimb cererea de ribozo-5fosfat este foarte mare).

165

Pentru a echilibra producerea i excesul de compui rezultai n prima etap, intervin reaciile celei de-a doua etape. Etapa nonoxidativ este rezultatul aciunii n echip a dou enzime, transcetolaza i transaldolaza, care realizeaz interconversia glucidelor n concordan cu nevoile metabolice ale celulelor. Aceste enzime detaeaz de la o cetoz fosforilat uniti de 2 i de 3 atomi de carbon i le ataeaz la aldoze:

ribozo-5-fosfat aldoza (R-5-P)

ribulozo-5-fosfat cetoza

xilulozo-5-fosfat cetoza (X-5-P)

Doar o parte din ribozo-5-fosfat parcurge aceast reacie, restul intr n urmtoarea:

166

R1 R2 R3

2C5 C7 + C3 C5 + C4

C3 + C7 transcetolaza C4 + C6 transaldolaza C3 + C6 transcetolaza

Cele dou molecule de gliceraldehid-3-fosfat vor fi transformate n glucoz prin reaciile inverse glicolizei.

167

Calea pentozofosfailor este extrem de flexibil, corelnd producerea de metabolii cu consumul acestora:

Calea pentozofosfailor este ntlnit i la plante. n perioada de cretere a tulpinilor predomin calea oxidativ, iar n cea de formare i coacere a seminelor i boabelor cea de-a doua. 7.2.2. BIOSINTEZA GLUCIDELOR 7.2.2.1. Glicogenogeneza Glicogenogeneza este procesul prin care se sintetizeaz glicogen din glucoz. Sediul biosintezei glicogenului este n principal celula hepatic i ntr-o msur mai mic celula muscular. Formarea glicogenului este un proces endergonic (consumator de energie), are loc prin adugarea succesiv de uniti de glucoz activat (fosforilat) la molecule de glicogen preexistent (glicogen primer). Sinteza moleculei de glicogen folosete ca primer iniial o protein, glicogenina, care transfer opt radicali glucidici pe gruparea OH a tirozinei din structura proprie. Proteina rmne n interiorul moleculei de glicogen. Adugarea noilor uniti de glucoz se face la captul nereductor al lanului poliglucidic:

168

ETAPE

1. Activarea glucozei a.

b.

c.

169

2. Transferul glucozei activate pe molecula primer:

3. Ramificarea Cnd lanul glucidic ajunge la o lungime de opt uniti de glucoz, intervine enzima de ramificare care permite stabilirea legturilor C1C6 (formarea fragmentelor de izomaltoz). intervenia compusului macroergic UTP n activarea ozelor are loc ori de cte ori este vorba despre biosinteza unor structuri glucidice mai complexe, att n regnul vegetal, ct i animal. Biosinteza diglucidelor, biosinteza amidonului la plante, au loc ntr-o manier similar (inclusiv prezena enzimei de ramificare n sinteza amilopectinei).
*

170

Schema sintezei glicogenului din glucoz

7.2.2.2. Gluconeogeneza Gluconeogeneza este procesul de biosintez a glucozei din precursori neglucidici, care pot fi transformai n acid piruvic. Acest proces exclude acizii grai i acetilCoA, dar include acidul lactic, unii aminoacizi, glicerol. Importana procesului rezid n faptul c permite conversia la glicogen a altor molecule, meninnd n acest fel glicemia la valori relativ constante. Aceasta este important pentru c o serie de esuturi i celule (creierul, eritrocitele, retina, celulele parenchimului renal) folosesc exclusiv glucoza ca resurs energetic. Rezerva de glicogen a ficatului este mic i se epuizeaz dup 24 de ore de nfometare. Dar tot ficatul este cel care face ca viaa s poat continua pentru c el este singurul capabil s biosintetizeze glucoza. Punctul de plecare l constituie acidul piruvic. Examinnd calea glicolitic observm c doar 3 dintre reacii sunt ireversibile: (1) fosforilarea glucozei de ctre hexokinaza (glucokinaza) cu consum de ATP; (2) fosforilarea fructozo-6-P cu consum de ATP;
171

(3) transformarea fosfoenolpiruvatului n acid piruvic; Biosinteza glucozei pe calea invers este posibil cu condiia gsirii unor modaliti de trecere peste aceste puncte cheie (ireversibile). a) Calea gluconeogenetic pornind de la acid piruvic:

Enzimele din chenar sunt diferite de cele care apar n glicoliz.

172

b) Sinteza glucozei din glicerol (provenit din esutul adipos prin hidroliza gliceridelor)

Plantele i bacteriile sunt capabile s transforme i acetilCoA n glucoz prin intermediul unei succesiuni de reacii numit ciclu glioxilat. 7.2.2.3. Biosinteza lactozei Lactoza este un diglucid reductor sintetizat n glanda mamar, format prin condensarea unei molecule de -galactoz cu o molecul de -glucoz, condensare n urma creia apare o legtur de tip eter C1C4. Biosinteza ei pornete de la -glucoz, care este activat mai nti n prezen de UTP (uridintrifosfat). Etapele biosintezei lactozei sunt: glucokinaz glucoza + ATP G 6 P + ADP sanguin G 6P G1P
pirofosforilaza

1. G 1 P + UTP 2. UDP G

UDP G + H4P2O7 (PPi)

4epimeraza

UDP galactoz
glicoziltransferaza H2O

3. UDP galactoz + G 1 P

lactoz

173

URIDINDIFOSFAT GLUCOZ (UDP G)

7.2.3. REGLAREA METABOLISMULUI GLUCIDIC Acest mecanism de reglare implic stabilirea unui echilibru ntre glicogenogenez (biosintez de glicogen din glucoz) i glicogenoliz (degradare de glicogen cu formare de glucoz), echilibru care se afl sub control hormonal. Hormonii implicai n reglarea metabolismului glucidic sunt : insulina, cu rol hipoglicemiant i glucagonul, adrenalina, hormonii corticoizi i cei tiroidieni, cu rol hiperglicemiant. Din jocul antagonist al celor dou tipuri de hormoni se asigur meninerea glicemiei (a nivelului fiziologic de glucoz n snge) n limite constante. Reglarea glicemiei se poate face i pe cale nervoas, prin activarea sau inhibarea unor enzime care particip la metabolismul glucidic. Principala dereglare biochimic care are drept urmare creterea nivelului de glucoz din snge poart numele de diabet zaharat i se datoreaz unei secreii insuficiente de insulin de ctre pancreas.

174

7.3. ASPECTE DE METABOLISM LIPIDIC


7.3.1. CONSIDERAII GENERALE Principala clas de compui biochimici cu rol energetic, att pentru celul, ct i pentru organism ca ntreg, o reprezint lipidele. Cea mai mare parte din rezerva energetic a organismului animal este reprezentat de esutul adipos. Aici au loc procese de hidroliz a trigliceridelor cu eliberare de acizi grai, utilizai apoi pentru necesitile energetice ale altor organe i esuturi. 7.3.2. DEGRADAREA LIPIDELOR 7.3.2.1. Digestia lipidelor La monogastrice, sediul digestiei totale este intestinul subire unde, n prezena sucului intestinal i pancreatic (ce conine enzime de tip esterazic), precum i a srurilor biliare, are loc un proces de emulsionare a lipidelor i apoi de scindare hidrolitic. Emulsionarea lipidelor simple, adic transformarea lor n picturi foarte fine, favorizeaz atacul enzimelor din clasa hidrolazelor, respectiv lipazelor, proces n urma cruia rezult glicerol i acizi grai. Scindarea hidrolitic a lipidelor complexe are loc n duoden sub aciunea fosfolipazelor prezente acolo. La poligastrice, lipidele simple i complexe ajung n rumen, unde acioneaz microorganismele rumenale ce secret enzime capabile s hidrolizeze aceste lipide. 7.3.2.2. Absorbia lipidelor Acizii grai cu mas molecular mai mic (10-12 atomi de carbon) rezultai n urma digestiei lipidelor se absorb direct prin mucoasa intestinal i prin vena port ajung n ficat.

175

Acizii grai cu mas molecular mare (peste 12 atomi de carbon) se esterific n mucoasa intestinal, rezultnd mono-, di i trigliceridele. Aceste trigliceride nou sintetizate formeaz complexe lipoproteice ce ajung pe cale sanguin la ficat. La poligastrice, acizii grai nesaturai se transform n acizi grai saturai sub aciunea hidrogenazelor rumenale, rezultnd, n special, acid stearic. Colesterolul se absoarbe fie direct prin peretele intestinal, fie sub form esterificat i vehiculat tot n complexele lipoproteice. 7.3.2.3. Degradarea trigliceridelor Catabolismul trigliceridelor ncepe printr-un proces de hidroliz enzimatic sub aciunea lipazelor specifice i se desfoar n citoplasm.
CH2OCOR1
R1COOH

CH2OH

HCOCOR2 lipaze CH2OCOR3


triglicerid

HCOCOR2 lipaze CH2OCOR3


diglicerid

R3COOH

CH2OH

HCOCOR2 lipaze CH2OH


monoglicerid

R2COOH

CH2OH HCOH CH2OH


glicerol

Glicerolul format poate intra n diferite ci metabolice n funcie de necesitile energetice ale celulei: - se transform n aldehid gliceric parcurgnd etapele glicolizei; - se transform n glucoz pe calea gluconeogenezei; - este utilizat la sinteza altor trigliceride i lipide complexe. Acizii grai rezultai n urma catabolismului trigliceridelor intr ntr-un proces de degradare enzimatic localizat n mitocondrie, format dintr-o succesiune de reacii care poart numele de -oxidare.

176

Schema metabolizrii glicerolului este:


GLICEROL ATP ADP -Glicerofosfat NAD+ NADH(H+) Gliceraldehid-3 fosfat resintez de trigliceride i lipide complexe

Dihidroxiacetonfosfat

Fructozo-1,6 difosfat Fructozo-6 fosfat Glucozo-6 fosfat

Piruvat AcetilCoA

C.K. Glucoz Respiraie celular

CO2

Glicogen

H2O

ATP

7.3.2.4. Degradarea acizilor grai

177

Pentru a putea fi transportai din citosol n mitocondrie, unde are loc procesul -oxidrii, acizii grai trebuie activai n prezen de coenzima A (HSCoA) i de aciltiokinaz, cu formare de acid gras activat, singura form sub care acizii grai pot strbate membrana mitocondrial. Aceast reacie necesit un consum de ATP care este hidrolizat la AMP i acid pirofosforic. RCOOH + ATP + CoASH RCOSCoA + AMP + H4P2O7
acid gras acid gras activat (acil gras CoA) pirofosfataz

2H3PO4 Transferul acidului gras activat prin membrana mitocondrial este posibil numai dup cuplarea acestuia cu carnitina, cnd rezult acilgras-carnitina, ce este preluat de tranzlocaz (o protein specific) i adus n mitocondrie:
RCH2COSCoA + CARNITINA CITOSOL MEMBRAN MITOCONDRIAL MATRIX MITOCONDRIAL
carnitinaciltransferaza

RCH2COCARNITINA

CARNITINA

RCH2COCARNITINA RCH2COSCoA acilgras CoA intr n procesul -oxidrii

-oxidarea reprezint o succesiune de patru reacii enzimatice n urma crora se elibereaz cte o molecul de acetilCoA i rezult un acid gras activat cu doi atomi de carbon mai puin dect cel iniial . Acest acid gras intr din nou n secvena celor patru reacii i procesul se repet
178

pn cnd tot acidul gras activat s-a transformat numai n molecule de acetilCoA. Procesul complet de degradare are aspectul unei spirale (spirala Lynen), pe fiecare tur eliberndu-se o molecul de acetilCoA, un NADH(H+) i un FADH2. Spirala Lynen:
acid gras cu n atomi C CH3COSCoA NADH(H+) FADH2 CH3COSCoA NADH(H+) FADH2 acid gras cu n-4 atomi C

acid gras cu n-2 atomi C

Etapele -oxidrii sunt:

179

acid gras cu 2 atomi mai puin

acetil CoA

Bilanul energetic al -oxidrii:

nr. de ture din nr. de atomi de C ai acidului 1 spirala Lynen = 2

pentru fiecare tur rezult : 1 NADH(H+) = 3 ATP 1 FADH2 = 2 ATP Total 5 ATP

nr. moleculelor de nr. de atomi de C ai acidului acetilCoA eliberate = 2


180

fiecare molecul de acetilCoA intr n ciclul Krebs 12 ATP pe 1 ciclu Krebs. Exemplu: pentru acidul palmitic (C16) bilanul energetic al -oxidrii se calculeaz astfel: nr. ture Lynen =
16 1 = 7 2 16 = 8 molecule 2

7 5ATP / tur = 35 ATP spiral Lynen nr. molecule CH3COSCoA = 8 12ATP / C.K. = 96 ATP 96 ATP + 35 ATP = 131 ATP 131 ATP 1 ATP (consumat la activare) = 130 ATP
*

1 ATP 7000 calorii

Oxidarea acizilor grai nesaturai decurge la fel ca la cei saturai pn se ajunge n vecintatea dublelor legturi, care sunt n poziie cis, ceea ce mpiedic recunoaterea de ctre acil grasCoAdehidrogenaza. n acest moment este necesar intervenia unei izomeraze care transform izomerul cis n cel trans, n continuare fiind parcurse aceleai etape. La acizii polinesaturai, cum ar fi acidul linoleic, cu dou duble legturi, n cazul primei se procedeaz ca mai sus, iar n cazul celei de-a doua intervine o hidrogenaz care-l aduce n starea saturat normal pentru -oxidare. Oxidarea acizilor grai cu numr impar de atomi de carbon. Procesul apare n special la plante, dar ntr-o mic proporie i la animale, unde acizii grai cu numr impar de atomi de carbon provin din hrana de origine vegetal. Degradarea are loc pe calea -oxidrii pn cnd se ajunge la un fragment final de -cetoacil cu 5 atomi de carbon, n loc de acetoacetilCoA cu 4 atomi de carbon. Prin ruperea acestuia rezult acetil-CoA i propionilCoA:
CH3-CH2-CO-CH2-CO-S-CoA + CoA-SH CH3-CH2-CO-S-CoA + CH3-CO-S-CoA
propionilCoA

181

PropionilCoA este transformat n succionilCoA care intr n ciclul acizilor tricarboxilici.


CH3-CH2-CO-S-CoA + + ATP
propionilCoAcarboxilaza AMP + PPi

COOH CH3-CH-CO-S-CoA
metilmalonilCoA metilmalonilCoA epimeraza

HOOC-CH2-CH2-CO-S-CoA
succinilCoA

metilmalonilCoAmutaza

CH3-CH-CO-S-CoA COOH

Ultima enzim necesit prezena celei mai complexe coenzime, deoxiadenozilcobalamina, un derivat al vitaminei B12. Aceast cale de metabolizare a propionatului este important ntruct el poate proveni i din degradarea a patru aminoacizi, valina, izoleucina, metionina i treonina, ca i din carena lateral a colesterolului. Deficiena n enzima metilmalonilCoAmutaza sau incapacitatea organismului de a sintetiza cofactorul necesar pornind de la vitamina B12 conduce la o stare patologic numit acidoza metilmalonic, care este fatal n prima perioad de via. Oxidarea acizilor grai la nivelul peroxizomilor. Peroxizomii sunt vezicule mici, ataate de membrana multor celule animale. -oxidarea acizilor grai la nivelul peroxizomilor difer de cea mitocondrial prin aceea c FADH2 este direct oxidat de O2, producnd H2O2. Funcia peroxizomilor este mai puin neleas dect a altor organite, dar se crede c au un rol important n preluarea i degradarea acizilor grai cu mai mult de 18 atomi de carbon, pe care sistemul mitocondrial nu-i oxideaz. 7.3.2.5. Formarea corpilor cetonici Dup cum s-a menionat, organismul poate fi n situaia de a folosi catabolismul acizilor grai ca principal surs de energie. Aceasta se ntmpl n perioadele de nfometare, cnd rezerva de glicogen s-a consumat, sau la diabetici, care nu pot reine glucoza. n aceste situaii celulele adipoase pun n circulaie cantiti mari de acizi grai liberi care sunt preluai de ficat i acesta produce cantiti excesive de acetilCoA, excesiv n sensul c se depete capacitatea de alimentare a ciclului Krebs. Procesul prin care, n ficat, mai exact n mitocondriile hepatocitelor, excesul de acetilCoA este convertit n aceton, acid acetilacetic i
182

acid -hidroxibutiric se numete cetogenez, iar aceti produi se numesc corpi cetonici. 2CH3-CO-S-CoA CH3-CO-CH2-CO-S-CoA + CoA-SH
acetoacetilCoA

Aceast reacie este inversa celei catalizate de -cetotiolaza (etapa d din -oxidare).

Acidul acetilacetic i acidul -hidroxibutiric pot fi folosii de unele celule (inclusiv cele din creier) pentru obinerea de energie, dup o transformare enzimatic n acetilCoA. Totui, atunci cnd producerea corpilor cetonici depete capacitatea de eliminare urinar i utilizare, se instaleaz o stare patologic numit acidoza metabolic sau cetoza. 7.3.3. BIOSINTEZA LIPIDELOR

183

Biosinteza lipidelor apare mai ales ca urmare a excesului de glucide, nlocuind glicogenul cu o form de depozitare mai convenabil, lipidele neutre. Alcoolul i unii aminoacizi pot de asemenea genera lipide. Biosinteza lipidelor apare la animale ca urmare a unui exces de hran i mai puin pentru necesitile reparatorii ale membranelor celulare. La plante, cu excepia celor la care lipidele reprezint forma de rezerv a combustibilului metabolic (oleaginoase), are loc numai pentru a asigura creterea i repararea structurilor membranare. 7.3.3.1. Biosinteza acizilor grai Att n regnul vegetal, ct i n cel animal, precursorul este acetilCoA, care poate proveni din glucide (prin decarboxilarea acidului piruvic rezultat n glicoliz), din lipide (din -oxidarea acizilor grai), din aminoacizii glucoformatori care se transform n acid piruvic. n funcie de localizarea procesului de biosintez exist dou ci: - calea citoplasmatic (calea malonilCoA) - calea mitocondrial (calea elongaiei). Principiul general respectat n ambele ci de biosintez, att n regnul vegetal, ct i animal, este acela c spre deosebire de cile metabolice, n care gruparea acil este vehiculat sub form de acetilCoA, n biosintez intervine un sistem multienzimatic complex, acilgras sintetaza. Una dintre componentele acesteia este proteina purttoare de grupri acil (Acyl Carrier Protein-ACP). Aceasta prezint asemnri cu coenzima A, inclusiv n modul de legare a gruprii acil: P -Riboza-Adenina CoA-SH P -Pantotenat-Cisteamina-SH ACP P -Pantotenat-Cisteamina-SH CH3-CO-S-ACP
CoA-SH CoA-SH

CH3-CO-S-CoA + HS-ACP R-CO-S-CoA + HS-ACP

R-CO-S-ACP

184

Biosinteza acizilor grai pe calea malonilCoA are loc n citoplasm. Prima etap const n formarea malonilCoA prin carboxilarea acetilCoA sub aciunea unei carboxilaze care are drept coenzim biotina i necesit ATP i Mg:
CH3-CO-S-CoA + CO2 + ATP HOOC-CH2-CO-S-CoA + ADP + H3PO4
malonilCoA

Mecanismul biosintezei const n transferul succesiv al cte unei uniti de malonilCoA pe acetilCoA-ACP (iniial pe acetil-ACP), eliberndu-se cte un CO2:
CH3-CO-S-ACP + HOOC-CH2-CO-S-CoA
malonilCoA-ACP-aciltransferaza -cetoacilCoAsintaza

CH3-CO-CH2-CO-S-ACP + CO2 + CoA-SH

Urmeaz patru reacii care au ca scop reducerea la acil grasCoA activat:


CH3-CO-CH2-CO-S-ACP
reducere

(-cetoacil-ACP) -cetoacil-ACP reductaza (-hidroxibutiril-ACP)

OH NADP+ CH3-CH-CH2-CO-S-ACP
deshidratare HOH

NADPH(H+)

CH3-CH=CH-CO-S-ACP
reducere NADPH(H ) NADP+
+

(crotonil-ACP sau -enoil-ACP)

CH3-CH2-CH2-CO-S-ACP

(butiril-ACP sau acil-ACP)

Ciclul se poate relua avnd n loc de acetil-ACP, butiril-ACP, pn la acidul palmitic. n aceast cale rolul central revine malonil-CoA. Totui implicarea acetilCoA este nemijlocit n acest proces. AcetilCoA este transferat din mitocondrie (locul de producere) n citosol (locul de utilizare) printr-un proces enzimatic complex, avnd n vedere impermeabilitatea membranei mitocondriale interne:

185

Succesiunea oxaloacetat malat piruvat este destinat transferului electronilor de la NADH(H+) la NADPH(H+). O alt surs pentru coenzima NADPH(H+) este i untul pentozofosfailor prezentat anterior. Cea de-a doua cale este numit i calea elongaiei deoarece are ca precursor acidul palmitic sintetizat n citoplasm. Reaciile sunt ca i cele prezentate la calea malonilCoA, cu excepia faptului c unitatea adugat este acetilCoA. La sfritul parcurgerii celor patru reacii (acilare, reducere, deshidratare, reducere) se obine un acid saturat cu 2 atomi de carbon n plus. 7.3.3.2. Biosinteza glicerolului Biosinteza glicerolului are ca precursori triozele fosforilate din glicoliz:
NADP+ ATP

C-HO CH2OH CH2-O- P

NADPH(H )

186

CH2-OH CHOH CH2-O- P

ADP

CH2-OH CHOH CH2OH

NADP+

CH2-OH C=O CH2-OH

NADPH(H )

7.3.3.3. Biosinteza gliceridelor Biosinteza gliceridelor folosete ca precursori glicerolul activat sub form de glicerofosfat i acizii grai activai sub form de acil grasCoA:
ADP

CH2HO CHOH CH2OH


glicerol

CH2OH CHOH -glicerokinaza -glicerofosfat CH2-O- P


ATP

R1-CO-S-CoA R2-CO-S-CoA -2CoA-SH aciltransferaza

CH2-O-CO-R1 CH-O-CO-R2 CH2-O- P


acid fosfatidic HOH H3PO4 fosfataza

Biosinteza ca precursor acetilCoA. 7.3.4. REGLAREA METABOLISMULUI LIPIDIC

CH2-O-CO-R1 CH-O-CO-R2 CH2-O-CO-R3 colesterolului are

R3-CO-S-CoA -CoA-SH aciltransferaza

CH2-O-CO-R1 CH-O-CO-R2 -OH tot CH molecula de 2

Acest mecanism de reglare implic un echilibru ntre lipoliz (degradarea lipidelor) i lipogenez (biosinteza lipidelor). n metabolismul lipidelor se pot produce diferite dereglri, cunoscute sub numele de lipidoze, care constau n tulburri de digestie i ad187

sorbie, tulburri ale mecanismului de mobilizare a lipidelor depozitate, tul-burri de transport sau ale etapelor chimice de catabolizare sau anabolizare. Hiperlipemia este o stare patologic caracterizat prin creterea anormal a gliceridelor n snge, ceea ce confer acestuia un aspect lactescent. Tulburrile cauzate de depozitarea lipidelor pot fi: - sfingomielinozele (acumularea sfingomielinei n reticulul endotelial, n celulele nervoase sau n alte esuturi); - cerebrozidoze (formare de cerebrozide anormale care se depoziteaz n ficat i mduva osoas); - steatoza sau infiltraia gras a ficatului.

7.4. ASPECTE DE METABOLISM PROTIDIC


Protidele (n spe proteinele i acizii nucleici) sunt biomolecule fundamentale pentru organizarea i funcionarea organismului animal. Proteinele din hran sunt preluate i transformate n aminoacizi care sunt folosii ulterior la sinteza de proteine proprii organismului. 7.4.1. DIGESTIA PROTEINELOR Schema digestiei proteinelor la monogastrice este:
PROTEINE ALIMENTARE
N STOMAC LA pH=1,5-2,5 SUB ACIUNEA PEPSINEI (ENZIM PROTEOLITIC)

FRAGMENTE MOLECULARE PROTEICE CU MAS MOLECULAR MAI MIC (POLIPEPTIDE, PROTEOZE I PEPTONE)

N DUODEN LA pH=7,5-8,7 SUB ACIUNEA TRIPSINEI I CHIMOTRIPSINEI

OLIGOPEPTIDE CU 6-8 AMINOACIZI

SUB ACIUNEA CARBOXIPEPTIDAZEI I AMINOPEPTIDAZEI

DIPEPTIDE

DIPEPTIDAZE

AMINOACIZI

Trebuie menionat faptul c n stomac exist pepsinogenul (form inactiv) care, sub aciunea acidului clorhidric, trece n pepsin (forma activ a acestei peptidaze), iar n duoden tripsina (care este forma activ)

188

i se obine n pancreasul exocrin din tripsinogen (forma inactiv) sub aciunea enterochinazei. De altfel, toate enzimele proteolitice care acioneaz asupra macromoleculelor proteice, pe tot parcursul tractului digestiv, se clasific n dou categorii: - endopeptidaze - enzime hidrolitice care acioneaz n interiorul lanului polipeptidic i scindeaz legturile peptidice (CO-NH), cum ar fi: pepsina, tripsina i chimotripsina; - exopeptidaze, care scindeaz lanul polipeptidic la capete i pot fi carboxipeptidaze (scindeaz hidrolitic gruparea carboxil) sau aminopeptidaze (care scindeaz hidrolitic gruparea NH2 de la captul lanului). La poligastrice, digestia proteinelor ingerate ncepe n prestomace, sub aciunea unor microorganisme rumenale care secret enzime proteolitice i care scindeaz aproximativ 50% din totalul proteinelor ingerate. Rezult polipeptide mici a cror hidroliz final are loc n duoden cu formare de aminoacizi. n sucul gastric la animalele sugare exist renina, enzim care precipit cazeina din lapte pentru ca astfel precipitat s staioneze mai mult n stomac pentru a fi hidrolizat. 7.4.2. ABSORBIA PROTEINELOR Absorbia proteinelor se poate realiza numai sub form de aminoacizi la nivelul intestinului subire, printr-un fenomen de competiie, sub aciunea unor proteine specifice dependente de ionii de Na, numite translocaze. S-au identificat n epiteliul intestinal nu mai puin de 7 sisteme transportoare specifice care acioneaz pe tipuri de aminoacizi. O dat absorbii, aminoacizii ajung prin vena port la ficat, unde o parte sunt catabolizai, iar alt parte sunt preluai de snge i dui la toate celulele pentru utilizarea lor n biosinteza proteinelor hepatice, tisulare, plasmatice i enzimatice. Fetusul i nou-nscuii pot absorbi i proteine intacte prin procesul de endocitoz (pinocitoz), care const n internalizarea unor fragmente din membrana plasmatic de care sunt legate proteinele strine i care prezint importan pentru transferul anticorpilor materni n special la mamifere.
189

7.4.3. CATABOLISMUL AMINOACIZILOR Catabolismul aminoacizilor este procesul de degradare a acestora, la nivel celular, printr-una din urmtoarele ci generale de catabolizare: I. deaminarea; II. decarboxilarea; III. transaminarea. I - Deaminarea este procesul enzimatic de degradare a aminoacizilor prin care acetia pierd gruparea amino (NH2), rezultnd amoniac i un alt compus. n acest proces acioneaz aminoacid deaminazele (AAD), enzime din clasa liazelor. n funcie de mecanismul de deaminare, exist patru posibiliti de desfurare a acestui proces: a. Deaminarea oxidativ:
R CH-NH2 COOH
aminoacidoxidaza FMN FMNH2 H2O2 O2

R + HOH C=NH COOH

R C=O + NH3 COOH


-cetoacid

Aceiai produi se obin i n prezena altei dehidrogenaze dependente de NADP+.


R CH-NH2 COOH
HOH

NADP+ NADPH(H+)

R C=O + NH3 COOH


-cetoacid

b. Deaminarea hidrolitic
R CH-NH2 + HOH COOH
NAD+ NADH(H+)

190

R CH-OH + NH3 COOH


-hidroxiacid

c. Deaminarea reductiv caracteristic bacteriilor


R CH-NH2 + H2 COOH R CH2 + NH3 COOH

acid carboxilic

d. Deaminarea intramolecular
COOH CH2 H-C-NH2 COOH COOH CH CH COOH

AAD

+ NH3

acid aspartic

acid fumaric

II - Decarboxilarea aminoacizilor este procesul enzimatic care are loc sub aciunea aminoacildecarboxilazelor i prin care aminoacizii pierd gruparea carboxil sub form de dioxid de carbon. Rezult produi numii amine biogene.
R CH-NH2 COOH
CO2

R CH2 NH2

Aminele biogene au funcii specifice. De exemplu, histamina, provenit din decarboxilarea histidinei, este localizat mai ales n granulele mastocitelor, n plachetele sanguine, n leucocitele bazofile. Induce creterea permeabilitii capilarelor, este vasodilatator, produce contracia muchilor netezi, crete secreia nazal, lacrimal i bronic. Tiramina

191

provine din tirozin i este prezent n brnzeturile fermentate. Exercit aciuni antagoniste histaminei. Prin decarboxilarea aminoacizilor cu mai multe grupri amino (poliaminici, de exemplu lisina sau arginina) rezult poliamine, substane cu rol esenial n controlul biosintezei acizilor nucleici i a proteinelor. La plante aminele biogene intervin nu numai n reglarea biosintezei proteinelor i acizilor nucleici, dar constituie precursori pentru biosinteza unor alcaloizi (ornitina pentru cocain, cadaverina pentru spartein). III - Transaminarea este reacia reversibil prin care gruparea amino este transferat de pe un aminoacid pe un -cetoacid, cu formarea unui alt aminoacid i a unui alt -cetoacid, transferul fiind realizat de enzimele numite transaminaze. Toate transaminazele au drept cofactor un derivat al vitaminei B6, piridoxalfosfatul, care funcioneaz ca acceptor intermediar al gruprii amino:
CHO HO H3C piridoxalfosfatul CH2O

Transaminarea este cea mai comun reacie care implic aminoacizii liberi i numai treonina i lisina nu particip la astfel de reacii. Un cuplu obligatoriu prezent este acidul glutamic - acid -cetoglutaric:
COOH CH3 CH2 CH2 + C=O COOH CH-NH2 COOH COOH CH2 CH2 C=O COOH

glutamat-piruvat transaminaza (GPT)

CH3 CH-NH2 COOH


alanina (Ala)

ac. glutamic (Glu)

ac. piruvic

ac. -cetoglutaric

COOH COOH CH2 C=O CH2 + CH2 CH-NH2 COOH COOH


Glu

glutamat-oxalilacetat transaminaza (GOT)

192

ac. oxalilacetic

ac. -cetoglutaric ac. aspartic (Asp)

COOH CH2 CH2 C=O COOH

COOH CH-NH2 + CH2 COOH

Distribuia unora dintre transaminaze n anumite esuturi animale este utilizat ca diagnostic prin determinarea cantitii de enzim eliberat datorit lezrii esutului hepatic. Trebuie menionat c transaminarea este un proces complex de degradare i sintez a aminoacizilor, ntruct permite biosinteza altor aminoacizi pe baza cetoacizilor provenii din hran sau din alte procese metabolice. 7.4.4. METABOLISMUL AMONIACULUI Amoniacul, care se formeaz la nivel celular prin deaminarea aminoacizilor, din diferite amine biogene sau din catabolizarea bazelor azotate (componente structurale ale acizilor nucleici), este un compus toxic pentru organismul viu (mai ales pentru sistemul nervos central). De aceea organismul viu posed mecanisme eficiente i rapide de blocare i eliminare a amoniacului toxic, de fapt mecanisme de detoxifiere, care pot fi de dou feluri: a) transformarea amoniacului toxic n uree netoxic (ciclul ureogenetic) i eliminarea acesteia pe cale renal; b) transformarea amoniacului toxic n glutamin, substan netoxic. a) Transformarea amoniacului n uree se realizeaz prin procesul de ureogenez, la nivel hepatic. Ciclul ureogenezei, ca i cel al acizilor tricarboxilici, a fost descoperit de Sir Hans Krebs; ciclul ncepe i se termin cu ornitina ntr-o succesiune de doar patru reacii enzimatice ce se desfoar n mitocondrie.

193

Mai nti amoniacul intr n ciclu dup condensare cu bicarbo natul HCO 3 (forma de vehiculare a CO2), cnd rezult carbamoilfosfatul. Acesta reacioneaz cu ornitina, formnd citrulina. Citrulina reacioneaz cu aspartatul i rezult argininosuccinatul care va fi scindat n arginin i acid fumaric. Prin hidroliza argininei se elibereaz ureea i se reface ornitina. Schema general a ciclului ureogenetic este:

b) Transformarea amoniacului n glutamin este procesul de detoxifiere al organismului viu prin care amoniacul este blocat de acidul glutamic i rezult glutamina, compus netoxic:
COOH CH2 CH2 HC-NH2 COOH O C NH2 CH2 CH2 HC-NH2 COOH
glutamina

ATP

+ NH3
H2O

acid glutamic

194

Glutamina intervine n meninerea echilibrului acido-bazic la nivelul rinichiului i furnizeaz atomii de azot necesari biosintezei bazelor azotate adenin i guanin. La unele specii de psri, reptile, nevertebrate, amoniacul se elimin sub form de acid uric:

7.4.5. CATABOLISMUL ACIZILOR NUCLEICI Acizii nucleici sunt polinucleotide, nucleotidele fiind componente structurale ale compuilor macroergici (ATP, GTP,CTT, TTP i UTP) i totodat unitile monomere constituente ale acizilor nucleici. Schema general a catabolismului acizilor nucleici este urmtoarea:
ACIZI NUCLEICI DIN HRAN (POLINUCLEOTIDE)
N DUODEN SUB ACIUNEA DEOXIRIBONUCLEAZELOR, RIBONUCLEAZELOR I A APEI H2O H3PO4

MONONUCLEOTIDE (BAZ AZOTAT + PENTOZ + H3PO4)

SUB ACIUNEA NUCLEOTIDAZELOR

BAZE AZOTATE PENTOZE

PURINICE (A i G)

NUCLEOZIDE

SUB ACIUNEA NUCLEOZIDAZELOR

PIRIMIDINICE (U,T,C) RIBOZ DEOXIRIBOZ

Pentozele rezultate din catabolismul acizilor nucleici se absorb la nivelul intestinului subire. Bazele azotate insolubile n mediul apos din intestin se absorb foarte greu. Degradarea bazelor azotate se face pe urmtoarele ci: a) degradarea bazelor azotate purinice - la om, maimu, psri, reptile, cine dalmaian degradarea acestora este calea metabolic de formare a acidului uric. Acidul uric se biosintetizeaz n ficat, funcia res195

pectiv denumindu-se uricopoez i se elimin pe cale renal. La marea majoritate a mamiferelor produsul final l constituie alantoina care provine din transformarea enzimatic a acidului uric sub aciunea uricazei. Schema general de biosintez a acidului uric este:

La om concentraia fiziologic de acid uric din snge este de 2-5 mg/100 ml snge, valorile mrite (hiperuricemia) nregistrndu-se n afeciunea numit gut, care se manifest prin depuneri de urat monosodic n cartilaje i tendoane. b) degradarea (catabolismul) bazelor pirimidinice: Citozina sufer un proces de deaminare i trece n uracil, iar din metil-citozin rezult timina. Att uracilul, ct i timina se degradeaz printr-o secven de reacii cu formare n final de -alanin, respectiv + aminobutirat H3N CH2 CH COO . CH3

196

7.4.6. BIOSINTEZA ACIZILOR NUCLEICI Precursorii imediai n biosinteza ADN i ARN sunt nucleozid-5' fosfaii, prezeni n stare liber n nucleul celular, iar enzimele implicate sunt ADN i ARN-nucleotidil-transferazele. 7.4.6.1. Biosinteza ADN Este procesul care se realizeaz nainte de fiecare diviziune celular, asigurnd transmiterea informaiei genetice din generaie n generaie i necesit existena unei molecule de ADN ce funcioneaz ca tipar (model), purtnd numele de ADN primer. Procesul de biosintez a ADN const n dou etape principale: - despiralizarea moleculei de ADN primer la un capt prin ruperea legturilor de hidrogen dintre bazele azotate complementare, rezultnd dou catene (lanuri) polinucleotidice care nu se desprind din macromolecula de ADN primer (se formeaz furca replicativ); - pe fiecare caten polinucleotidic despiralizat, ce servete ca matri, se sintetizeaz o caten nou, replic, care copiaz succesiunea de baze azotate ntr-o manier complementar (adenintimin, guanin-citozin). Rezult astfel dou molecule de ADN hibrid, nou sintetizate, care conin fiecare cte un lan polinucleotidic vechi, din molecula de ADN-mam i cte un lan nou - fiica, complementar i antiparalel, replic a mamei.
caten fiic

caten mam furca replicativ ADN primer caten fiic

caten mam

197

lan nou lan vechi

Figura 7.1 - Schema replicrii semiconservative a ADN


1 - ADN primer 2 - DESPIRALIZAREA CATENEI MAM 3 - FORMAREA CATENELOR FIICE PRIN COPIEREA SUCCESIUNII DE BAZE AZOTATE NTR-O MANIER COMPLEMENTAR 4 - MOLECULE DE ADN HIBRID

Procesul acesta se mai numete replicare, deoarece catena nou format nu este identic cu matria, ci este o replic a acesteia care conine bazele azotate complementare. Totodat biosinteza ADN este semiconservativ, deoarece molecula de ADN primer se conserv, ea regsindu-se n moleculele noi de ADN sub forma cte unui lan polinucleotidic. Dup ncetarea biosintezei, fiecare molecul de ADN hibrid sufer o rotaie n jurul axei proprii, rezultnd astfel structura dublu elicoidal, specific moleculei de ADN bicatenar. Tot procesul replicativ al biosintezei ADN se afl sub controlul unor enzime specifice ca: topoizomeraza, helicaza, ADN-polimeraza, ct i a ionilor de Mg2+. Energia necesar acestei biosinteze este furnizat de scindarea legturilor macroergice ale fiecrui nucleotid trifosforilat ce particip la biosintez i care trece n deoxiribonucleotid monofosforilat: ndATP ndGTP ndCTP ndTTP
ADN-polimeraza Mg2+ ADN primer

dAMP dGMP dCMP + 4nH4P2O7 + E dTMP n ADN primer

198

7.4.6.2. Biosinteza ARN Deoarece moleculele de ARN nu se pot autoreplica, pentru biosinteza lor este nevoie tot de ADN primer ca matri i de enzima specific ADN-polimeraza. Dup despiralizarea lanului de ADN primer, pe fiecare caten polinucleotidic se sintetizeaz o molecul monocatenar de ARN, respectnd principiul complementaritii bazelor azotate, cu excepia faptului c timina din ADN este nlocuit cu uracil. Dup o scurt coexisten, acidul nucleic hibrid ADN-ARN se desface, ARN este translocat n citoplasm unde i exercit rolul. Biosinteza macromoleculelor de ARN i n mod special a celor de ARNm are loc prin transcripie, proces n care are loc transferul informaiei genetice din ADN la molecula de ARN m nou sintetizat prin copierea secvenei de nucleotide corespunztoare. Enzima care recunoate pe una din catenele de ADN-activ punctul de iniiere (promotorul) biosintezei ARNm este ARN-polimeraza. Aceast enzim determin despiralizarea i desfacerea parial a celor dou catene de ADN din unitatea de transcriere, adic din regiunea n care este nscris informaia genetic rspunztoare de sinteza proteinei specifice. O dat rupte legturile de hidrogen, enzima poate realiza biosinteza noului lan poliribonucleotidic, utiliznd ribonucleotidele trifosforilate existente n nucleu. Acestea stabilesc legturi de hidrogen cu bazele complementare de pe catena matri, iar enzima realizeaz stabilirea legturilor 3' - 5' fosfodiesterice, cu punerea n libertate a pirofosfatului, energia eliberat fiind utilizat n formarea noului lan nucleotidic. Biosinteza are loc n sensul 5' - 3'.

n momentul n care ARN-polimeraza a parcurs ntreaga unitate de transcriere, lanul poliribonucleotidic nou sintetizat, respectiv molecula ARNm, se desprinde de pe catena matri a ADN-activ care l-a codificat,
199

iar cele dou catene ale ADN i refac legturile de hidrogen. Molecula de ARNm trece n citoplasm sub form de complex ribonucleoproteic, denumit i informozom. Mecanismele de biosintez a celorlalte dou tipuri de ARN (ribozomal i de transfer) sunt aceleai ca pentru ARN m, dar fiecare tip este codificat de regiuni bine determinate de pe una din catenele ADN, diferite de cele care codific ARNm. Biosinteza ARNr are loc n nucleol, transcrierea lui fiind realizat de ADN nucleolar. Imediat ce este sintetizat, ARN r se asociaz cu proteine, constituind fibrilele nucleolare. 7.4.7. BIOSINTEZA PROTEINELOR 7.4.7.1. Codul genetic Macromoleculele de ADN din cromozomi reprezint suportul material al informaiei genetice, al transmiterii caracterelor ereditare din generaie n generaie. O serie de constatri dovedesc acest lucru: - La organismele superioare exist o corelaie ntre cantitatea de ADN din celul i cantitatea de informaii genetice. Astfel, cantitatea de ADN coninut n nucleii celulelor somatice, diploide (cu 2n cromozomi) este de dou ori mai mare fa de cea coninut n nucleii gameilor, haploizi (cu n cromozomi). - Agenii fizici sau chimici care pot s produc mutaii sunt capabili s altereze structura ADN. - S-a constatat c prin transferul unor fragmente de ADN de la un organism la altul se transmit i caracterele ereditare corespunztoare. - Infecia viral. Genele sunt purttoarele fiecrei informaii genetice, a fiecrui caracter ereditar. Fiecare gen reprezint un fragment de ADN n care informaia genetic este codificat printr-o secven caracteristic a nucleotidelor. Ea este cea care permite celulei biosinteza unei proteine specifice. Aa se explic de ce o mutaie la nivelul unei gene se traduce printr-o protein modificat, urmat de dispariia sau alterarea activitii biologice a acesteia. Dar o mutaie poate avea i un efect favorabil, conferind organismului un caracter benefic. Evoluia speciilor are la baz tocmai selecia natural a mutaiilor favorabile.

200

Biosinteza proteinelor specifice i, deci, transferul de informaii, conform regulei o gen o enzim sau mai corect o gen un lan polipeptidic, se realizeaz cu participarea direct a celor trei tipuri de ARN. Au loc, astfel, urmtoarele transferuri de informaii: - Transfer ADN ADN. Prin replicare, n procesul de biosintez a ADN, are loc conservarea informaiei genetice. - Transfer ADN ARN. Prin transcripie are loc transmiterea informaiei de la ADN la diversele tipuri de ARN i n primul rnd la ARNm. - Transfer ARN protein. Prin translaie are loc biosinteza proteinei specifice, conform informaiei coninute n ARNm. n afar de acestea, la virusuri cu ARN mai exist dou posibiliti: - Transfer ARN ARN. n acest fel are loc replicarea genomului ribonucleic. - Transfer ARN ADN. Un genom ribonucleic poate fi astfel integrat n genomul deoxiribonucleic al celulei gazd, parazitate. Toate aceste transferuri de informaii de la ADN la protein prin intermediul ARN au loc conform codului genetic. Acesta este constituit din codoni. Un codon reprezint o succesiune de trei nucleotide care codific un aminoacid. n biosinteza unei proteine, aminoacizii se succed exact n ordinea n care se succed codonii n ARNm. Exist 64 de codoni (4 nucleotide luate cte 3 reprezint 43 = 64 de posibiliti). Din totalul lor doar 61 de codoni codific aminoacizi. Cum nu exist dect 21 de aminoacizi, nseamn c sunt mai muli codoni care pot codifica acelai aminoacid. Acetia poart numele de codoni sinonimi. n structura codonilor sinonimi primele dou nucleotide sunt aceleai, numai al treilea nucleotid difer. Aceast structur reprezint factorul de stabilitate genetic ce permite ca nlocuirea unei singure baze azotate cu alta la nivelul celui de al treilea nucleotid s nu aib repercusiuni asupra naturii aminoacidului codificat, deci s nu induc o mutaie. Exist i trei codoni non-sens, care nu codific nici un aminoacid. Ei indic sfritul mesajului, al informaiei genetice. Un codon non-sens dicteaz ncetarea transferului de aminoacizi, sfritul biosintezei proteinei. Codul genetic este universal, de la virusuri i bacterii pn la plante i animale superioare, inclusiv om. Mecanismul codificrii se realizeaz prin transcripie i translaie.
201

7.4.7.2. Etapele biosintezei proteinelor Proteinele sunt modul de expresie a informaiei genetice i, ca atare, rolul major n biosinteza lor l joac acizii nucleici. Este necesar transferul de informaie de la ADN prin intermediul ARN m pn la molecula proteic. Biosinteza unei proteine implic, deci, cele dou procese ale codificrii, transcripia i translaia.
Transcripie Translaie

ADN

ARNm

Protein

Aa cum s-a artat, prin transcripie are loc biosinteza ARNm, cu transcrierea exact a succesiunii de codoni (de nucleotide) ai genei din ADN n molecula monocatenar a ARNm. Aceasta conine exact aceeai succesiune de codoni care permite biosinteza unei proteine specifice genei respective. Uneori, moleculele de ARNm sunt policistronice, rezultnd prin transcrierea mai multor gene (cistroni) i includ informaia necesar pentru biosinteza mai multor proteine. Acesta este cazul enzimelor care particip ntr-o secven de reacii metabolice, iar genele lor corespunztoare sunt grupate ntr-un operon. Biosinteza propriu-zis a proteinelor, asamblarea aminoacizilor n lanul polipeptidic n ordinea dictat de ARN m au loc n procesul de translaie. Prin translaie are loc descifrarea codului genetic, transformarea succesiunii de codoni (nucleotide) n succesiune de aminoacizi. Cu alte cuvinte, are loc traducerea limbajului codonilor n limbaj al aminoacizilor. Translaia are la baz acelai principiu fundamental al replicrii ADN sau al transcripiei ARNm i anume complementaritatea bazelor azotate. Decodificarea sau recunoaterea codonilor din ARN m i asamblarea aminoacizilor n succesiunea dictat de acesta sunt realizate de ctre ARN de transfer. Fiecare ARNt se caracterizeaz printr-un anumit anticodon specific. Prin acest anticodon ARNt respectiv, care poart legat aminoacidul specific, va recunoate codonul corespunztor din structura ARNm. n felul acesta, pe baza complementaritii specifice ntre codonii succesivi ai ARNm i anticodonii ARNt se asigur ncorporarea ordonat, corect, conform informaiei genetice, a aminoacizilor n proteina ce se sintetizeaz. ARN de transfer joac rolul unui adaptor molecular: pe de o

202

parte recunoate i leag aminoacidul specific corespunztor anticodonului caracteristic, iar pe de alt parte transport acest aminoacid la nivelul lanului polipeptidic unde este ncorporat n locul corect, specificat de codonul complementar din ARN mesager. Acest mecanism de translaie, respectiv de biosintez a proteinelor implic urmtoarele etape principale: - activarea aminoacizilor - iniierea lanului polipeptidic - elongaia (alungirea lanului polipeptidic) - terminarea biosintezei lanului polipeptidic i eliberarea protei-nei native. n desfurarea acestor etape sunt implicai o serie de componeni specifici, factori absolut necesari: - aminoacizi - ARN de transfer, ATP, Mg2+, aminoacil-sintetaz - ARN mesager - uniti ribozomale 30S i 50S asamblate sub form de ribozomi funcionali 80S sau 70S, care la rndul lor se ataeaz pe ARNm i formeaz agregate numite poliribozomi sau polizomi; fiecare ribozom funcional are dou situsuri: unul denumit situs A (acceptor), pentru fixarea aminoacil-ARNt, iar cellalt denumit situs P (peptidil sau donator) pentru fixarea peptidil-ARNt - GTP ca furnizor al energiei necesare diferitelor reacii de iniiere, alungire, de eliberare a lanului polipeptidic - o serie de ali factori ce intervin n procesele de iniiere, alungire i eliberare a lanului polipeptidic, ei nii fiind de natur proteic. Activarea aminoacizilor Prima etap n biosinteza proteinelor este reprezentat de o succesiune de dou reacii catalizate de aceeai enzim numit aminoacil-ARN t -sintetaz, caracteristic pentru fiecare aminoacid n parte ce urmeaz s participe n structura proteinei. ntr-o prim reacie, aminoacidul este activat cu ATP i transformat n aminoacil-AMP legat de enzim. n felul acesta are loc ridicarea aminoacizilor la un potenial energetic foarte nalt, necesar pentru a asigura stabilirea legturilor peptidice ntre ei. n continuare, aminoacidul astfel activat este legat la molecula de ARN t specific, la captul la care succesiunea de nucleotide este CCA. Paralel are loc eliberarea AMP. Se
203

formeaz, astfel, complexul aminoacil-ARNt, cu participarea aceleiai enzime, aminoacil-ARNt-sintetaza.


aa1 + ATP
aminoacil-ARNt-sintetaz (E1) Mg2+ PPa ARNt1

aa1 AMP E1
AMP E1

aa1 ARNt1

Aminoacil - ARNt - sintetaza este enzima care recunoate pe de o parte aminoacidul corespunztor, ea neputnd cataliza dect activarea acestuia. Pe de alt parte, ea recunoate i ARNt corespunztor, de care poate lega numai aminoacidul pe care l-a activat i nu altul. Aceast enzim confer o nalt specificitate absolut necesar pentru evitarea erorilor n biosinteza proteinelor. Celula nu dispune de un alt mecanism de control prin care s verifice natura aminoacidului i s evite ncorporarea unui aminoacid eventual incorect fixat. n fiecare celul exist cel puin 20 de tipuri de enzim aminoacil - ARNt - sintetaz, cte un tip pentru fiecare aminoacid pe care l recunoate i l activeaz ca aminoacil-ARNt. Sub aceast form, fiecare aminoacid este transportat la polizomi, locul de biosintez, de ncorporare n lanul proteic. Iniierea biosintezei lanului polipeptidic n aceast etap particip ribozomii, ARN mesager, o serie de factori de iniiere care asambleaz ribozomii pe ARNm formnd polizomii, concomitent cu recunoaterea codonului de iniiere a biosintezei de ctre metionin - ARNt, la captul 5' al ARNm. Elongaia lanului polipeptidic n aceast etap are loc formarea treptat a legturilor peptidice ntre aminoacizi, care conduc la biosinteza lanului polipeptidic. O dat cu fixarea primului aminoacil-ARNt pe ribozomi la situsul P (peptidil) are loc selectarea urmtorului aminoacil-ARNt i fixarea sa la situsul A cu anticodonul corespunztor cu codonul de pe ARN m. Aceast fixare necesit energie furnizat de GTP, precum i o serie de factori de elongaie. Formarea legturilor peptidice, catalizat de o peptidil-transferaz sau peptid-sintetaz, are loc ntre gruparea amino - NH 2 a aminoacidului nou adus i gruparea carboxil - COOH a celui legat deja n lanul peptidic iniiat. Lanul peptidic se sintetizeaz de la captul su -NH 2 terminal spre cel -COOH terminal. Noul lan peptidic format rmne legat de ARN t specific ultimului aminoacid, n situsul P.
204

n continuare are loc translocarea peptidil-ARNt pe situsul P pe seama energiei furnizate prin hidroliza GTP. n acelai timp, ribozomul se deplaseaz fa de ARNm pentru a permite codonului urmtor s fixeze n situsul A un aminoacil-ARNt cu anticodonul complementar. Urmeaz aceeai succesiune de reacii care conduc la stabilirea unei noi legturi peptidice. Procesul continu pn la traducerea ntregului mesaj nscris n molecula de ARNm. Citirea acestui mesaj se face de la captul 5' spre cel 3' al ARNm. Moleculele de ARN de transfer eliberate trec n citoplasm i particip la legarea i transportul altor molecule de aminoacizi la locul de biosintez a proteinei respective. ncetarea biosintezei proteice ntreruperea procesului de elongaie este determinat de apariia codonilor non-sens din molecula ARNm pe ribozomul funcional. Aceti codoni pun punct mesajului, biosinteza lanului polipeptidic este sistat i, n acelai timp, se rupe legtura acestuia cu ARN t care a transportat ultimul aminoacid. Proteina astfel sintetizat este pus n libertate cu configuraia tridimensional caracteristic. Se consider c mai ales distribuia resturilor de cistein, precum i a aminoacizilor hidrofobi sunt factori ce determin configuraia spaial care se stabilete chiar n timpul procesului de elongaie.
205

O dat cu eliberarea proteinei native are loc i eliberarea ribozomilor de pe ARNm, precum i a ARNt, acetia putnd relua procesul de biosintez al unei alte proteine.

7.5. INTERCONEXIUNI METABOLICE


7.5.1. CONSIDERAII GENERALE Metabolismul, respectiv totalitatea reaciilor enzimatice de degradare i sintez care se petrec n organismul viu, se caracterizeaz printr-o mare diversitate biochimic. Transformrile metabolice implic o interconexiune a diferitelor reacii biochimice exprimat pe baza unor corelaii care au caracter unitar i integrativ. Corelaiile metabolice se stabilesc prin apariia unor metabolii comuni i prin ci metabolice comune ntre catabolismul i anabolismul biomoleculelor ce aparin diferitelor clase de compui biochimici. Anumii metabolii comuni, ca de exemplu acetilcoenzima A, rezultat din metabolismele intermediare, constituie puncte de interferen (de rscruce) ale acestor ci. De asemenea, unele ci metabolice reprezint ci comune pentru diferite secvene de reacii biochimice, ca de exemplu Ciclul Krebs, care este definit n acest context ca fiind calea comun major de metabolizare a glucidelor, lipidelor, protidelor.

206

7.5.2. EXEMPLE DE CORELATII (INTERCONEXIUNI) METABOLICE CORELAIA NTRE METABOLISMUL GLUCIDICLIPIDIC-PROTIDIC ( SCHEM)

GLUCIDE

LIPIDE

PROTIDE

OZE (Glucoz)

ACIZI GRAI
-oxidare

deaminare

AMINOACIZI

deaminare

transaminare

Glicoliza BIOSINTEZ BIOSINTEZ

ACETIL-CoA

-CETOACIZI (ACID PIRUVIC)


(ACID -CETOGLUTARIC) ACID OXALILACETIC

COLESTEROL

CORPI CETONICI

CICLUL KREBS

ACID FUMARIC RESPIRAIA CELULAR ACID OXALILACETIC ACID ASPARTIC

CICLUL UREOGENETIC

+
FOSFORILAREA OXIDATIV

BIOSINTEZ

BAZE AZOTATE PURINICE I PIRIMIDINICE

207

BIBLIOGRAFIE SELECTIV
1. ALBERTS B., BRAY D., LEWIS J., RAFF M. - Molecular Biology of the Cell, Garland, New York, 1999. 2. CHAMPBELL P., SMITH A. - Biochemistry Illustrated, Churchill Livingstone, London, 2000. 3. CHEFTEL J.C. et CHEFTEL H. - Introduction a la biochimie et a la technologie des alimentes, Technique et Documentation, Paris, 1992. 4. CHIRIL R. - Biochimie vegetal, Ed. Printech, Bucureti, 2000. 5. DAVIDSON V., SITTMAN D. - Biochemistry, Harwal Publ., Philadelphia, 1994. 6. GRBAN Z. - Noiuni de biologie molecular, Ed. Eurobit, Timioara, 1997. 7. IONESCU E., ERBAN M. - Biochimie animal, Ed. Fundaiei Romnia de Mine, Bucureti, 2001. 8. LEHNINGER A., NELSON D., COY M. - Principles of Biochemistry, Worth Publ., New York, 2000. 9. PAPUC C., ERBAN M. - Biochimie structural, Ed. Printech, Bucureti, 2003. 10. POP A., ERBAN M. Elemente de biochimie veterinar, Ed. Printech, Bucureti, 1999. 11. ROOIU N., ERBAN M. - Biochimie medical, Ed. Muntenia, Constana, 2003. 12. STREYER L., BERG J., TIMOCZOKO J. - Biochemistry, W. Freeman Comp., New York, 2002. 13. ERBAN M. - Biochimie medical veterinar, Ed. Didactic i Pedagogic, Bucureti, 1982.

208