Seminar CEEX ERPISA 14 decembrie 2006

Metode neconventionale de reducere a unor contaminanti prezenti in medii naturale

Academia Romn
Institutul de Biologie Bucureti Centrul de Microbiologie
COLECTIVUL DE CERCETARE: Dr. Mugur tefnescu CS III Responsabil proiect Dr. Anca Voicu CS I Dr. Mihaela Marilena Lzroaie CS Maria Neagu - Contabil ef Ana Dinu Asistent I Daniela Mielu Asistent III

Partener n cadrul Proiectului de Cercetare Evaluarea i remedierea polurii istorice a stratelor acvifere prin tehnologii neconvenionale ERPISA

OBIECTIVELE PROIECTULUI DE CERCETARE

Studiul documentar al tehnologiilor microbiene de remediere. Prelevarea probelor din siturile contaminate i studiul microbiotei indigene. Izolarea i selectarea microorganismelor hidrocarbon-oxidante; estimarea potenialului degradativ al contaminanilor petrolieri. Studii privind capacitatea de biosintez a unor metabolii cu rol n optimizarea biodisponibilitii i conversiei contaminanilor petrolieri. Experimente de simulare n laborator privind atenuarea gradului de poluare, utiliznd microorganisme hidrocarbon-oxidante performante. Elaborarea protocolului de lucru al biotehnologiei propuse, n vederea aplicaiilor in situ.

REMEDIEREA MEDIILOR CONTAMINATE CU HIDROCARBURI - principalele aspecte abordate Ape reziduale din industria petrolier lamuri petroliere Soluri i sedimente din schele i parcuri petroliere Ape de suprafa Acvifere din judetul Prahova Ap de mare zona Constana

Habitate poluate cu reziduuri petroliere

IZOLAREA DE TULPINI MICROBIENE HIDROCARBONHIDROCARBON-OXIDANTE METOD RAPID DE SCREENING A MICROORGANISMELOR HIDROCARBONHIDROCARBON-OXIDANTE CARACTERIZAREA TULPINILOR BACTERIENE HIDROCARBONHIDROCARBON-OXIDANTE OBINEREA DE COMPUI TENSIOACTIVI BACTERIENI TOLERANA UNOR TULPINI BACTERIENE HIDROCARBONHIDROCARBON-OXIDANTE LA DIFERITE TIPURI DE HIDROCARBURI, INCLUSIV BTX REZISTENTA TULPINILOR TULPINILOR BACTERIENE HIDROCARBONHIDROCARBON-OXIDANTE LA DIFERITE TIPURI DE ANTIBIOTICE STUDIUL RESPIRAIEI CELULARE N PREZENA HIDROCARBURILOR SELECTAREA DE TULPINI BACTERIENE HIDROCARBONHIDROCARBON-OXIDANTE HALOTOLERANTE GRADUL DE HIDROFOBICITATE AL SUPRAFEELOR CELULARE N PREZENA DIFERITELOR TIPURI DE HIDROCARBURI

ROLUL SINERGISMULUI MICROBIAN N DEGRADAREA IEIULUI BRUT STIMULAREA ACTIVITII BACTERIILOR HIDROCARBON-OXIDANTE PRIN ADAOS DE NUTRIENI STIMULAREA BIODEGRADRII IEIULUI BRUT PRIN MBUNTIREA TRANSFERULUI DE MAS AL CONTAMINANTULUI INFLUENA NATURII I CONCENTRAIEI SUBSTRATULUI PETROLIER ASUPRA BIODEGRADRII ACESTUIA DINAMICA ACTIVITII DEHIDROGENAZICE N CURSUL BIODEGRADRII IEIULUI BRUT STUDII DE MICROSCOPIE ELECTRONIC PENTRU EVIDENIEREA MODIFICRILOR STRUCTURALE INDUSE DE HIDROCARBURI BACTERIILOR HIDROCARBON-OXIDANTE EXPERIMENTE DE LABORATOR DE SIMULARE A PROCESULUI DE BIOREMEDIERE A SOLULUI POLUAT CU IEI BRUT I LAM PETROLIER EXPERIMENTE DE BIOREMEDIERE A SOLULUI POLUAT CU LAM PETROLIER DIN PARCURI PETROLIERE

BIOREMEDIEREA = BIOTEHNOLOGIA MEDIULUI POLUAT, BIOREMEDIATION, ENVIRONMENTAL BIOTECHNOLOGY

MICROORGANISME UTILIZATE N BIOREMEDIERE:

DEFINIIE: Eliminarea cu ajutorul microorganismelor a poluanilor din mediu transformarea poluanilor toxici n compui netoxici, fr afectarea mediului.

S provin din natur, de preferin din situsul poluat supus bioremedierii. S nu fie rezultatul unor activiti de manipulare genetic. S nu fie patogene sau toxice. S manifeste flexibilitate metabolic. S posede echipament enzimatic adecvat. S se dezvolte pe seama agentului poluant, disprnd odat cu mineralizarea total a acestuia. S se integreze n condiiile naturale ale habitatului, fr s afecteze echilibrul biologic. S nu produc efecte nedorite care s contravin legislaiilor i normelor de protecie a mediului.

AGENTUL POLUANT

PUNCT CONTACT

MICROORGANISME

PARAMETRI FIZICO-CHIMICI (N, P, Mg, K; O2; t0; pH; umiditate; etc.)

CO2, H2O, biomas microbian, ali compui netoxici

Elementele implicate n procesul de bioremediere (triunghiul bioremedierii)

PRINCIPALELE CATEGORII DE AGENI POLUANI DEVERSAI N MEDIU

COMPUI ANORGANICI

COMPUI ORGANICI

Metale volatile Metale nevolatile Azbest Materiale radioactive Cianuri anorganice

COMPUI REACTIVI

Halogenai volatili (H VOCs) Halogenai semivolatili (H SVOCs) Nehalogenai volatili (NH VOCs) Nehalogenai semivolatili (NH SVOCs) HIDROCARBURI Pesticide Bifenili policlorurai (PCBs) Dioxine, furani Cianuri organice

Oxidani Reductori

ETAPELE IMPLEMENTRII BIOTEHNOLOGIILOR ADECVATE DE REMEDIERE A MEDIULUI POLUAT

Descrierea sitului poluat
- fizic - chimic - geologic - climatic - microbiologic - vegetaie, etc.

Caracterizarea mediului

Evaluarea gradului de risc

- identificarea surselor de (hazard) poluare - identificarea cilor de poluare i a intelor de poluare - evaluarea probabilitii consecinelor (nalt, medie, sczut, neglijabil) - evaluarea magnitudinii consecinelor (sever, moderat, blnd, neglijabil)

BIOREMEDIEREA MEDIULUI POLUAT CU HIDROCARBURI

Biodegradare Evaporare Sorbie Degradare chimic (fotooxidare, autooxidare) Dispersie Dizolvare

BIOREMEDIEREA INTRINSEC (bioremedierea pasiv, atenuare natural)

BIOREMEDIEREA STIMULAT

IN SITU EX SITU

Parametri optimizai: aport O2 nutrieni - macroelemente (N, P) - microelemente (S, K, Mg, Ca, Mn, Fe, Na, Co, Cu, Mo, Zn) raport echilibrat C:N:P i C:S co-metabolii microorganisme hidrocarbon-oxidante

MICROORGANISME HIDROCARBON-OXIDANTE
Achromobacter, Acinetobacter, Actinomyces, Alcaligenes, Arthrobacter, Bacillus, Brevibacterium, Corynebacterium, Flavobacterium, Micrococcus, Mycobacterium, Nocardia, Pseudomonas, Spirillum, Vibrio

BACTERII:

CIANOBACTERII:

Anabaena, Nostoc, Oscillatoria

LEVURI:

Candida, Rhodotorula, Saccharomyces Aspergillus, Cladosporium, Fusarium, Penicillium, Graphium, Trichoderma, Paecilomyces Amphora, Chlorella, Chlamydomonas, Dunaliella, Porphyridium, Ulva

FUNGI FILAMENTOSI:

ALGE:

CARACTERISTICI FIZIOLOGICE ALE MICROORGANISMELOR HIDROCARBON-OXIDANTE

Adeziunea celulelor microbiene la suprafee hidrofobe Sinteza de compui tensioactivi cu proprieti emulsionante Sisteme de transport a hidrocarburilor prin membranele celulelor Utilizarea hidrocarburilor ca unic surs de C i energie, n mod selectiv: 1. n-parafine (n-alcani) 2. izoparafine (izoalcani) 3. aromatice mononucleare 4. cicloparafine (cicloalcani, naftene) 5. aromatice polinucleare (PAHs) 6. asfaltene

Donori de electroni = hidrocarburi Reaciii enzimatice - oxigenaze - dehidrogenaze - hidrolaze Calea aerob: O2 CO2, H2O, biomas Calea anaerob: NO3, NO2, Fe3+, Mn4+, SO42-, CO2 N2, Fe2+, Mn2+, S2-, CH4

BIODEGRADAREA HIDROCARBURILOR

Acceptori de electroni

FACTORII CARE INFLUENEAZ BIOREMEDIEREA MEDIILOR POLUATE CU REZIDUURI PETROLIERE

FACTORI FIZICI
caracteristicile mediului poluat (permeabilitate, porozitate, granulozitate, etc.) prezena O2 umiditate temperatur pH, Eh aderena poluantului la particulele de sol sau sedimente natura i concentraia poluantului gradul de toxicitate al poluantului concentraia compuilor toxici solubilitatea poluantului (>1000 mg/l) bioaccesibilitatea poluantului prezena sau absena unui co-substrat salinitatea mediului prezena nutrienilor accesibili coninutul organic din mediu biodegradabilitatea poluantului (BOD/COD>0,1) densitatea microorganismelor indigene capabile s degradeze poluantul

FACTORI CHIMICI

FACTORI BIOLOGICI

PROCESE MOLECULARE I BIOCHIMICE DE ADAPTARE A MICROORGANISMELOR LA AGENI POLUANI (inclusiv xenobiotici)

9 Inducerea sistemelor enzimatice specifice substratului 9 Dezvoltarea unei subpopulaii specifice 9 Selecia de mutante 9 Mecanisme genetice de aprare

TEHNOLOGII DE BIOREMEDIERE
BIOREMEDIEREA SOLULUI
EX SITU:
Bioreactoare Land farming Bioslurry Biopile Composting (static / agitare mecanic)

IN SITU:

Bioaugmentare (enhanced bioremediation) Land treatment Co-metabolism Bioslurry Bioventilare (bioventing) Biosparging Biofiltrare Stimulare cu ageni tensioactivi Fitoremediere

BIOREMEDIEREA APELOR SUBTERANE

EX SITU:
Bioreactoare

IN SITU:

Bioaugmentare (enhanced bioremediation) Bioventilare (bioventing) Barbotare cu aer Biofiltrare Biosparging Co-metabolism Stimulare cu ageni tensioactivi Bariere permeabile / impermeabile

BIOREMEDIEREA MEDIULUI MARIN

Bioaugmentare Stimulare cu ageni tensioactivi Utilizare de resturi vegetale adsorbante

Bioremedierea solurilor Tehnologii IN SITU

Biotehnologie bazat pe stimularea procesului de degradare a contaminanilor din sol prin injectarea de aer atmosferic, nutrieni (azot i fosfor)
Destinat decontaminrii IN SITU a POLs (petroleum, oils and lubricants) Slab aerare a solului Saturare cu ap a solului Procente reduse de nutrieni (azot si fosfor) Biodegradare aerob redus, prin cometabolism sau anaerobioz Temperatura sczut FACTORI LIMITANI:

Bioremedierea solurilor Tehnologii IN SITU

BIOREMEDIEREA SOLURILOR CONTAMINATE PRIN INJECIE DE AP OXIGENAT

Aplicat n situri cu poluare constant i n pnza de ap freatic

CONTAMINANI
Hidrocarburi petroliere BTEX MTBE VOCs Compui halogenai Ioni metalici

EFECTE
- Stimularea microbiotei existente - Creterea vitezei de bioremediere prin circulaia apei n sol - Metabolizarea aerob a contaminanilor, declorurarea acestora, imobilizarea IN SITU a metalelor dizolvate, prin aportul de O2

ENHANCED BIOREMEDIATION (BIOSTIMULARE, BIOAUGMENTARE)

Bioremedierea solurilor Tehnologii IN SITU

Biotehnologie de cretere a ratei de biodegradare a solului contaminat, prin aport de nutrieni i oxigen, dizolvai n ap de injecie. Activitatea microbian este stimulat prin circulaia apei, suplimentat cu inocul Proces aerob sau anaerob

PAHs SVOCs BTEX pesticide

CONTAMINANI

LAND FARMING

Bioremedierea solurilor Tehnologii EX SITU

Excavare, etalare pe o platform ce permite colectarea fluidelor de drenaj, amestecare

Monitorizare Tratament ntrerupt n sezonul rece

Tehnologie de remediere EX SITU a solului contaminat, prin umezire, aerare, aport de nutrieni i ageni de gonflare, pentru favorizarea aerrii i circulaiei fluidelor, n vederea creterii ratei de degradare microbiene a contaminanilor

CONTAMINANI
SVOCS VOCS PAHS HO NHO P

BIOPILES
Bioremedierea solurilor Tehnologii EX SITU

Biotehnologie derivat din metoda Land Farming, bazat pe ridicarea solului contaminat n movile de civa metri nlime, asigurndu-se aerarea i umiditatea + aportul de nutrieni. Contaminanii sunt redui la CO2 i H2O, n interval de 3-6 luni

COMPOSTING
Bioremedierea solurilor Tehnologii EX SITU

Biotehnologie care comparativ Land Farming-ului necesit condiii termofile (55-60 C) ce favorizeaz activitile bio-degradative. Solul poluat cu contaminani biodegradabili este aditivat cu ageni de gonflare de tipul: paielor, fnului, pnuelor de porumb, care permit buna circulaie a apei i a aerului, elemente indispensabile metabolismului microbian aerob.

STATIC PILE COMPOSTING Movilele sunt aerate prin suflante sau pompe MECHANICALLY AGITATED IN VESSEL COMPOSTING solul contaminat este plasat n utilaje care realizeaz amestecarea i aerarea WINDROW COMPOSTING plasare n movile lungi, amestecate periodic cu utilaje specifice

TIPURI DE TEHNOLOGII

BIOREMEDIEREA APELOR SUBTERANE

Tehnologiile de depoluare a (Bioventing) acioneaz i decontaminrii apelor subterane solurilor asupra

TRATAREA APELOR SUBTERANE n sistem recirculare

Sonde de extracie Tratarea microbian, la suprafa, prin adaos de nutrieni i oxigen n apele extrase Tratamente aerobe (oxygen respiration) - reducerea hidrocarburilor petroliere contaminante alifatice (Hexan) i aromatice (Benzen, Naftalen) Tehnologii: Direct sparging of air Injection well oxygen Saturarea cu ap cu un volum rodicat de aer sau oxigen Adiia de ap oxigenat Tratamente anoxice (nitrat respiration) Tratamente anaerobe (non-oxigen respiration) Tratamente co-metabolice Contaminani: solveni clorurai Deversarea apelor decontaminate n ape de suprafa

PARAMETRI Conductivitatea hidraulic a acviferului Biodegradabilitatea contaminanilor Microbiota indigen

AIR SPARGING BIOREMEDIATION (IN SITU AIR STRIPPING; IN SITU VOLATILIZATION)

Tehnologie IN SITU de reducere a constituenilor volatili ai contaminanilor petrolieri adsorbii n sol i dizolvai n apa subteran

Injecia de aer n subteran favorizeaz volatilizarea contaminanilor

GLOSAR (termeni biotehnologici cu utilizare frecventa)

Adverse effect Benthic Bioassay

Bioavailable Biota Bioturbation Capping Ecological status EQS Groundwater

reduced chemical or ecological status living in, on or closely associated with aquatic sediment at some life stage laboratory or field experiment, in which a lower species is exposed to whole sediment, or its pore contaminants are available in such a quantity that it causes a toxic effect to this test species (Brils et al., 1997) available to living organisms living organisms resuspension of settled sediment due to activity of biota covering of contaminated sediment with clen sediment expression of the quality of the structure and functioning of aquatic ecosystems associated with surface water Environmental Quality Standard all water which is bellow the surface of the ground in the saturation zone and in direct contact with the ground or subsoil

Hazard HOC Hyporheic Impact Management Model ecosystem

set of inherent properties of a contaminant which makes it capable of causing adverse effect (van Leeuwen and Hermens, 1995) Hydrophobic Organic Compounds saturated sediment zone, under and laterally adjacent to freshwater bodies where there is active exchange between ground water and surface water (Palmer et al., 2000) an observable, adverse effect a set of continuous interventions in order to achieve sustainability intermediate sized systen, such as a dug-out pond or in situ enclosure, that can be replicated and manipulated to test both structural and functional parameters, representative for ecosystem (Touart, 1994) Polycycling Aromatic Hydrocarbon (hazardous compound) Polychlorinated Byphenyle (hazardous compound) living in the water column the direct or indirect introduction, as a result of human activity, of substances or heat into the air, water or land which may be harmful to human health or the quality of aquatic ecosystems or terrestrial ecosystems directly depending on aquatic ecosystem, which result in damage to material property, or interfere with amenities and other legitimate uses of environment Persistent Organic Polutant (hazardous compound) the probability of an adverse effect from a given exposure to a contaminant (van Leeuwen and Hermens, 1995)

PAH PCB Pelagic Pollution

POP Risk

Sediment TIE Toxic effect Triad approach

suspended or deposited solids, of mineral as well as organic nature, acting as a main component of a matrix, which has been, or is susceptible to be transported by water Toxicity Identification Evaluation reduced functioning of an organism, with mortality being the most drastic expression of that, due to exposure to a contaminant the simultaneous observation of the three complementary components: hazard assessment through chemical analysis, risk assessment through sediment laboratory or field assays and impact assessment through a field inventory of the benthic community Total Suspended Solids areas of marsh, fen, peatland or water, whether natural or artificial, permanent or temporary, with water that is static or flowing, fresh, brackish or salt including areas of marine water the depth of which at low tide does not exceed six meters. Wetland may incorporate riparian and coastal zones adjacent to the wetland and islands or bodies of marine water deeper than six meters at low tide lying within the wetlands

TSS Wetlands