LUCRRI PROPUSE

1. DETERMINAREA ACTIVITII ENZIMATICE Introducere Activitatea celulelor corpului uman poate fi asemnat cu activitatea unei fabrici chimice. Doar civa dintre miile de compui necesari activitii corpului nostru sunt obinui direct din alimentaie. Majoritatea acestora sunt sintetizai n celule, ceea ce nseamn c sute de reacii chimice au loc n celule n fiecare minut al vieii noastre. Aproape toate aceste reacii sunt catalizate de ctre enzime, molecule proteice care mresc viteza reaciilor chimice fr a suferi vreo modificare. Fr enzime, viaa aa cum este tiut de noi nu poate fi trit. Ca toi catalizatorii, enzimele nu influeneaz echilibrul chimic al reaciei. Aceasta nseamn c enzimele nu pot determina desfurarea unei reacii dac aceasta nu este posibil i n absena lor. Enzimele determin doar creterea vitezei de reacie. Catalizatorii biologici, inclusiv enzimele, sunt remarcabili din dou puncte de vedere: sunt deosebit de eficieni - pot determina o cretere a vitezei de reacie de 109 pn la 1020 ori. sunt foarte specifici. Puterea de cataliz a unei enzime se poate observa ntr-un exemplu familiar tuturor: descompunerea apei oxigenate cu formare de ap i oxigen conform ecuaiei reaciei chimice : 2H2O2 2 H2O + O2 Reacia, dei puternic favorizat termodinamic, este foarte lent n lipsa unui catalizator. Din acest motiv se poate achiziiona o sticl de ap oxigenat i se poate pstra mult timp fr ca aceasta s se descompun. Dac, ns, se va aduga ion feric (de ex. FeCl3) se va constata c viteza de reacie crete de aproximativ 1000 de ori; de asemenea, hemoglobina, o protein ce conine fier determin o cretere semnificativ a vitezei de descompunere. Astfel, dac se pune ap oxigenat pe un deget tiat se va observa imediat punerea n libertate a oxigenului, reacia fiind de 1 million de ori mai rapid dect n cazul absenei catalizatorului. Exist ns i cazuri cnd se pot atinge viteze de reacie mult mai mari. De exemplu catalaza, o enzim coninut de multe celule, mrete viteza de descompunere a apei oxigenate de 1 miliard de ori. Prezena acesteia n organismele vii se datoreaz faptului c n unele reacii celulare se produce apa oxigenat, un periculos agent oxidant i deci este necesar producerea catalazei pentru descopunerea acesteia. Exemplele menionate arat c viteza de reacie depinde semnificativ de prezena catalizatorului precum i de natura acestuia. Peroxidaza, o enzim frecvent ntlnit n plante, reduce H2O2 la ap. Un tip de peroxidaz se gsete i n eritrocite, celule foarte sensibile la acumularea de ap oxigenat.

Determinarea activitii catalazei prezint o deosebit importan n analiza laptelui. n mod normal, laptele nu trebuie s manifeste o activitate catalazic. Dac n lapte este depistat aceast enzim, exist indicaii asupra prezenei leucocitelor, care provin de la unele maladii de secreie sau ale ugerului. Activitatea catalazic din laptele pasteurizat reprezint i un indiciu c acest proces a fost efectuat defectuos deoarece exist nc forme vegetative care conin catalaz. Principiul metodei Metoda este bazat pe faptul c bicromatul de potasiu, n mediu de acid acetic, este redus de apa oxigenat la acetat cromic, care poate fi determinat colorimetric la lungimea de und de 570 nm. Deoarece bicromatul nu absoarbe n aceast regiune, prezena acestuia n mediul de reacie nu interfer la determinarea colorimetric a acetatului cromic. Preparatul de catalaz este lsat s acioneze aupra H2O2 o perioad fix de timp, dup care reacia este stopat cu un amestec de bicromat-acid acetic glacial. Cantitatea de H2O2 rmas dup stoparea reaciei enzimatice este determinat n urma msurtorii spectrofotometrice. Reactivi i soluii (1) Reactiv bicromat-acid acetic glacial, se prepar prin amestecarea unei pri de K2Cr2O7 soluie 5%, cu trei pri de acid acetic glacial; (2) Soluie tampon K2HPO4-KH2PO4 0,01 M, pH 7 ; (3) Soluie H2O2 0,08 M, obinut prin pipetarea a 0,88 mL perhidrol (soluie 30%) i diluarea cu soluie tampon (2), pn la 100 mL; (4) Soluie H2O2 0,16M, preparat n soluia tampon (2); (5) Preparat enzimatic. Mod de lucru Construirea curbei etalon. Din soluia stoc (3), avnd concentraia de 80 moli H2O2/mL, se fac diluii conform Tabelului1. Tabelul 1 mL soluie (2) 1,0 0,9 0,8 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 mL soluie (3) 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1,0 moli H2O2/mL 0 8 16 24 32 40 48 56 64 72 80

La 1 mL soluie H2O2 diluat conform tabelului, se adaug 2 mL reactiv bicromat (1). Probele se incubeaz la fierbere timp de 10 minute, se rcesc sub jet de ap i se colorimetreaz la 570 nm, fa de ap distilat. Determinarea activitii enzimatice n cinci eprubete se pipeteaz 0,1 mL preparat enzimatic, 0,4 mL soluie tampon i 0,5 soluie H2O2 0,16 M (4) (n aceast ordine). Reacia este lsat 15 s, 30 s, 45 s, 60 s i respectiv 120 s dup care se stopeaz cu 2,0 mL reactiv bicromat. Separat se prepar un martor astfel: 0,4 mL soluie tampon + 0,5 mL soluie H2O2 0,16 M (4) + 2,0 mL reactiv bicromat + 0,1 mL preparat enzimatic. Toate eprubetele se nclzesc pe baie de ap la fierbere, timp de 10 minute, se rcesc i se colorimetreaz la 570 nm, fa de ap distilat. Calculul rezultatelor Utiliznd curba de etalonare i pe baza valorilor extinciilor obinute se determin concentraia apei oxigenate n moli H2O2 consumai/ 1 mL preparat enzimatic. Constanta de vitez monomolecular k pentru descompunerea H2O2, sub aciunea catalazei, se determin grafic i analitic utiliznd ecuaia cinetic pentru o reacie de ordinul 1 : S 1 k = log 0 S t unde S0 este concentraia iniial de H2O2, iar S este concentraia de peroxid dup t minute. Se compar rezultatele obinute prin cele dou metode. tiind c o unitate de activitate enzimatic corespunde la formarea a 1 mol de produs pe minut, se evalueaz activitatea enzimatic a catalazei. 2. EXTRACIA HIDROCARBURILOR POLIAROMATICE DIN PROBE DE AP I SOL Introducere Una dintre cele mai importante preocupri ale cercettorilor din multe ri, n domeniul proteciei mediului, este aceea legat de scurgerile sau deversrile n mediul nconjurtor a unor variate clase de poluani organici. Muli dintre aceti compui figureaz deja n topul listei Ageniei de Protecia Mediului din SUA, fiind considerai cei mai importani poluani oraganici, din cauza potenialului lor cancerigen, hepatotoxic i mutagenic. Unii dintre acetia, cum sunt compuii bifenilici policlorurai, hidrocarburile policiclice aromatice i esterii ftalici sunt rezultatul activitilor industriale, n timp ce

pesticidele organoclorurate, ierbicidele, fungicidele i insecticidele provin din agricultur. Pentru determinarea coninutului de substane poluante din probele de mediu se folosesc instrumente moderne de analiz (n special cromatografe) de mare selectivitate i sensibilitate. Prepararea probelor joac un rol important n cadrul metodelor de analiz cromatografic i de aceea reprezint problema cheie a analizelor; n general, pregtirea probelor este cea mai laborioas i ndelungat etap a ntregii proceduri analitice. Concentraiile mici (ng/L-g/L) de poluani organici nevolatili din ap i complexitatea matricilor de mediu necesit aplicarea unor proceduri specifice de prelucrare a probelor nainte de efectuarea oricrei evaluri a polurii apei prin tehnici cromatografice. Rolul etapei de prelucrare este acela de concentrare a probei, de izolare a substanei de analizat i de purificare a matricei prin ndeprtarea, ct mai mult posibil, a compuilor de interferen. Tehnicile utilizate cel mai frecvent pentru pregtirea probelor apoase sunt extracia lichid-lichid (LLE) i extracia n faz solid (SPE). Evaluarea sistematic a diferitelor metode de extracie, aplicabile mai multor clase de poluani organici din ap, este important n descoperirea procedurilor de pregtire eficient a probelor. Ca i multe alte substane poluante, hidrocarburile poliaromatice (PAH) pot fi determinate folosind metodele cromatografice. O bun separare cromatografic este condiionat de o foarte corect etap de izolare, concentrare i purificare a probei.
Scopul lucrrii n aceast lucrare se urmrete determinarea hidrocarburilor poliaromatice din probe contaminate de sol i/sau ape, prin diferite metode de extracie: n baia cu ultrasunete, cu extractor Soxhlet, n faz solid (SPE) i n sistem lichid lichid, urmate de analiza extractelor prin cromatografie (gaz cromatografie sau HPLC). Mod de lucru Pentru trasarea curbei de etalonare se utilizeaz soluii cu un coninut de 6 PAH-uri: naftalin (N), acenaften (AN) acenaftilen (ANE), fenantren (F), antracen (A), piren (P), cu concentraii de 100 ppb, 50 ppb and 5 ppb n diclorometan (DCM), respectiv n metanol (MeOH). Standardul intern utilizat este n-heptadecanul. a. Extracie cu baia cu ultrasunete n baia cu ultrasunete se introduce un pahar Erlenmeyer cu dop rodat n care se gsesc 10 g de sol contaminat i 25 mL diclorometan. Dup 10 minute coninutul paharului se filtreaz. Din filtrat se scot 5 mL peste care se adaug 2 L nheptadecan. Proba se analizeaz apoi prin cromatografie.

b. Extracie Soxhlet Un cartu de extracie n care se gsesc 20 g sol contaminat se introduce ntr-un aparat Soxhlet n care se mai adaug diclorometan astfel nct s se umple trei sferturi din volumul acestuia. Dup 60 de minute, extractul din balonul Soxhlet se concentreaz pn la 50 mL i se transvazeaz cantitativ ntr-un balon cotat de 50 mL. Se adaug apoi 2 L n heptadecan i se analizeaz cromatografic. c. Extracie n faz solid (SPE) Se activeaz cartuul extractorului (C18) cu aproximativ 1 mL metanol. Volume diferite de probe apoase (cca 20 mL, respectiv 200 mL), de concentraie 100 ppb sau 5 ppb, vor fi trecute prin cartuul SPE la un debit de 2 mL/min, urmate de splare cu 1 mL ap bidistilat i de eluarea poluanilor cu 1 mL acetat de etil (EtAc). Se adaug apoi o cantitate cunoscut de standard intern (0,5 L) i se analizeaz prin cromatografie. d. Extracie lichid lichid (LLE) Un volum de 250 mL de prob apoas de analizat se extrage de trei ori cu cte 30 mL diclorometan. Extractele reunite se usuc pe sulfat de sodiu anhidru, dup care soluia organic este concentrat sub vid pn la 10 mL, i apoi n curent de azot pn la 1 mL. Se adaug 0,25 L n-heptadecan i se analizez cromatografic. Prelucrarea datelor experimentale: Se traseaz curba de etalonare (sau se verific curba dat). Se apreciaz eficiena metodelor de pregtire a probelor folosite. Se evalueaz cantitile de PAH uri din sol/ap, folosind curba de etalonare. Observaie: n timpul alocat probei de concurs este posibil utilizarea doar a dou din cele patru metode de pregtire a probelor.

Ediia a VIII -a, 2000 CINETICA IODURRII ACETONEI N MEDIU ACID Scopul lucrrii

Studiul cineticii reaciei de iodurare a acetonei n mediu acid.

Aspecte teoretice

Reacia decurge dup un mecanism complex, datorit cruia viteza depinde doar de concentraia acetonei i a acidului. Se consider ordinul total de reacie ca fiind 2 (ordine pariale 1 fa de aceton i respectiv, fa de acid). Ecuaia diferenial are forma:
dx =k(a x)(b x) dt unde: a = concentraia iniial a acetonei; b = concentraia iniial a acidului; x = conversia corespunztoare timpului t. Ecuaia cinetic integrat va avea forma:
k=
Mod de lucru

1 a(b x ) ln t (b a ) b(a x )

Se prepar amestecul de reacie ntr-un balon de 250 cm3, folosind cte 25 cm3 HCl 1N i respectiv, I2 n KI 0,1N, 1,8 cm3 aceton, ap distilat. Se iau din vasul de reacie 7 probe a cte 25 ml la intervale de 15 minute. Variaia conversiei x n timp se urmrete prin titrarea iodului cu tiosulfat de sodiu.
Prelucrarea datelor experimentale

A) Se calculeaz a i b. B) Se determin x n funcie de volumele de titrare. C) Se calculeaz constanta de vitez a) din ecuaia cinetic b) grafic

RAPORT DE ACTIVITATE 1. Explicitai modul de calcul pentru concentraiile a i b. 10 puncte

2.Explicai rolul NaHCO3

5 puncte

3. Descriei modul n care are loc titrarea

5 puncte

4. Explicitai modul de calcul pentru conversia x i interpretai evoluia sa n 15 puncte timp.

5. Comparai valorile constantelor de vitez obinute prin cele dou metode i 15 puncte explicai aceastcomparaie

Nr. crt. 1 2 3 4 5 6 7

Timp, [min]

VNa 2S2O3 , [ml]

x, [

k, [

Aptitudini practice i precizia rezultatelor

10 puncte

Ediia a IX - a, 2001 DETERMINAREA CONSTANTEI DE ECHILIBRU A UNUI COMPLEX

Aspecte teoretice

(3) Dac iniial exist a moli de H2 i b moli de I2, iar la echilibru se transform cte x moli din fiecare reactant, constanta de echilibru se va calcula cu relaia: 4x 2 Kc = (4) (a x )(b x ) Cu ajutorul constantei de echilibru, folosind izoterma standard de reacie: 0 G T = RT ln K c (5) se poate calcula variaia entalpiei libere standard de reacie. n aceast lucrare se va determina constanta de echilibru pentru reacia: Co2+ + 4 SCN[Co(SCN)4]2(6) Concentraia la echilibru a ionului complex colorat [Co(SCN)4]2- se va determina cu ajutorul spectrofotometrului, pe baza legii Lambert Beer:

Pentru o reacie reversibil n sisteme omogene: '1C + '2 D 1A + 2 B constanta de echilibru este dat de expresia: cC .c D Kc = c A .c B De exemplu, pentru reacia: 2HI H2 + I2
' 1 ' 2 1 2

(1) (2)

E = c l
unde: E extincia msurat experimental; coeficientul molar de extincie; c concentraia soluiei (mol/l); l grosimea cuvei (cm).
Mod de lucru

(7)

1. Din soluiile de azotat de cobalt 0,01M i sulfocianur de amoniu 0,1 M preparate n solvent ap aceton (1:1) se pregtesc succesiv 8 probe a cror compoziie se d n Tabelul 1: 2. Se nregistreaz spectrul de absorbie pentru proba 2 prin msurarea extinciei la diferite lungimi de und. Se poate presupune c spectrul probei 2

este spectrul caracteristic ionului complex [Co(SCN)4]2-. Din acest grafic se poate determina pe baza legii Lambert - Beer (7) coeficientul molar de extincie, , al combinaiei complexe la lungimea de und corespunztoare absorbiei maxime.
3. Se verific la cteva lungimi de und c absorbia probei 1, care conine ioni de Co2+ necomplexat, este neglijabil. 4. La lungimea de und corespunztoare maximului de absorbie din spectrul probei 2 se determin extinciile corespunztoare amestecurilor 3 - 8. Cu ajutorul coeficientului de extincie molar, , gsit la punctul 2 se calculeaz concentraiile corespunztoare la echilibru (x) pentru ionul complex [Co(SCN)4]2-.

Tabel 1 Nr. 1 2 3 4 5 6 7 8

Co2+ , V [mL] 1 1 1 1 1 1 1 1

SCN- ,V [mL] 0 5,0 4,0 3,5 3,0 2,5 2,0 1,5

Solvent [mL] 5,0 0 1 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5

RAPORT DE ACTIVITATE

1. Completai tabelul:

20 puncte

Nr. 1 2 3 4 5 6 7 8

Co2+ V a 103 [ml] [ion g/l] 1 1 1 1 1 1 1 1

SCNSolvent 2 [ml] V b 10 [ml] [ion g/l] 0 5 5,0 0 4,0 1 3,5 1,5 3,0 2,0 2,5 2,5 2,0 3,0 1,5 3,5

x [ ]

2. Explicai de ce spectrul probei 2 se poate considera spectrul caracteristic ionului complex [Co(SCN)4]2-. 10 puncte

3. Explicai de ce este necesar pasul 3.

5 puncte

4. Calculai constanta de echilibru.

10 puncte

5. Calculai entalpia liber standard de reacie

5 puncte

Abiliti practice

10 puncte

RAPORT DE ACTIVITATE - REZOLVARE 1.Completai tabelul: 20 puncte

Nr. 1 2 3 4 5 6 7 8

V [mL] 1 1 1 1 1 1 1 1

Co2+ a 103 [ion g/L] 1,67 1,67 1,67 1,67 1,67 1,67 1,67 1,67

SCNV b 102 [mL] [ion g/L] 0 0 5,0 8,33 4,0 6,67 3,5 5,83 3,0 5,00 2,5 4,17 2,0 3,33 1,5 2,50

Solvent [mL] 5 0 1 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5

x 103 [ion g/L] 0 1,67 0,84 0,78 0,57 0,42 0,26 0,15

2. Explicai de ce spectrul probei 2 se poate considera spectrul caracteristic ionului complex [Co(SCN)4]2-. 10 puncte

Pentru proba 2 ionul reactant SCN- se gsete n exces deplasnd echilibrul reaciei spre dreapta. n consecin, la echilibru, n proba 2 se poate considera c exist doar ioni SCN- i [Co(SCN)4]2-. Deoarece ionul de SCN- nu absoarbe n vizibil rezult c spectrul obinut este caracteristic ionului complex [Co(SCN)4]2-.

3. Explicai de ce este necesar pasul 3.

5 puncte

Pasul 3 este necesar pentru a demonstra c ionul Co2+ nu absoarbe n domeniul vizibil. Dac ionul Co2+ ar avea absorbie mare atunci absorbana obinut ar fi dat de ambii ioni (Co2+ i [Co(SCN)4]2+) prezeni n soluie.

4. Calculai constanta de echilibru.

10 puncte

Din spectrul probei 2 se calculeaz coeficientul molar de extincie utiliznd relaia: E , se obine = 482,1 L/(ion g cm); (l = 1 cm) = cl Concentraiile corespunztoare la echilibru (x) pentru ionul complex [Co(SCN)4]2- se determin cu ajutorul coeficientului de E molar de extincie aflat anterior: x = l Constanta de echilibru se calculeaz cu x relaia: K = (a x )(b 4 x ) 4 Pentru fiecare valoare x se calculeaza constanta de echilibru. Valorile obinute se mediaz apoi obinndu-se constanta de echilibru.
5. Calculai entalpia liber standard de reacie 5 puncte

Pentru calculul entalpiei libere se va folosi valoarea medie a constantei de echilibru, considernd temperatura de lucru 250C i utiliznd izoterma standard de reacie: G0298 = - RT ln K

Abiliti practice

10 puncte

Ediia a VII a, 1999 DETERMINAREA IZOTERMEI DE ADSORBIE Aspecte teoretice

Dac se pune n contact un gaz sau un lichid cu un solid cu care nu reacioneaz, se constat c o parte din gaz sau lichid este reinut la suprafaa solidului. Acest fenomen se numete adsorbie. Gradul de reinere al substanei adsorbite de ctre adsorbant este caracterizat prin adsorbia specific , definit ca raportul ntre cantitatea adsorbit nd (n moli) i masa adsorbantului m (n grame): mol nd (1) = m g Adsorbia specific depinde de natura adsorbantului i a substanei adsorbite, de temperatur, de natura fazei fluide n care se gsete substana care se adsoarbe (gaz sau lichid) i de compoziia acestei faze. La adsorbia din faz lichid binar, va depinde att de natura solventului ct i de concentraia c a substanei de adsorbit aflat la echilibru n soluie. Concentraia c se exprim n mol/L. Dependena (c), la o temperatur dat se numete izoterm de adsorbie. Se studiaz experimental adsorbia p-nitrofenolului din soluie apoas pe crbune activ pulverulent, verificnd valabilitatea ecuaiei Freundlich pentru izoterma de adsorbie: = kc1/n (2) Logaritmnd, se obine:
lg = lg k + 1 lg c n

(3)

n care k i n sunt constante ce depind de natura componenilor sistemului i de temperatur, dar nu depind de concentraia c sau de puterea de adsorbie. Izoterma de adsorbie se poate astfel reprezenta n coordonate - c sau lg - lg c, ca n Fig. 1, respectiv Fig. 2.
T3 T2 T1 lg k c Fig. 2 lgc lg

T1>T2>T3

Fig. 1

Figura 2 permite confirmarea modelului Freundlich i determinarea constantelor de adsorbie k i n din date experimentale: lg k este ordonata la origine i n =1/tg .
Mod de lucru

Se utilizeaz 6 soluii apoase de p-nitrofenol preparate din soluia stoc de concentraie 20 mmol/l conform tabelului 1. Aceste soluii vor avea concentraia iniial c0. Tabelul 1 Nr. prob V [mL] p-nitrofenol V [mL] ap 1 5 45 2 10 40 3 15 35 4 20 30 5 30 20 6 50 -

Soluiile se vor prepara pe rnd, la volum constant total de 50 mL n pahare Erlenmeyer cu dop rodat. n vederea efecturii adsorbiei n fiecare pahar se introduce cte 1 g de crbune activ. Dup 10 minute de agitare manual (timp n care se presupune c s-a atins echilibrul) se filtreaz individual coninutul fiecrui pahar, din care urmeaz s se determine concentraia c de p-nitrofenol rmas dup adsorbie. Aceste concentraii se vor determina spectrofotometric, pe baza spectrelor de adsorbie nregistrate automat la spectrometrul UV-VIS-NIR, tiind c pentru nregistrarea acestora se va dilua la cte 10 mL soluie din fiecare filtrat conform tabelului 2. Pentru a mri sensibilitatea metodei spectrale, n fiecare prob se adaug 0,5 mL NaOH 0,1N. Tabelul 2 Nr. prob Vfiltrat, [mL] 1 9,5 2 5 3 2 4 2 5 1 6 1

Prelucrarea datelor experimentale

Calculul concentraiilor finale de echilibru c, se va efectua pe baza extinciei msurate la lungimea de und a maximului de adsorbie din curba (dreapta) de etalonare ce se va construi cu datele experimentale din tabelul 3. Tabelul 3 c [mol/l]x105 Abs. 0,3 0,07 0,5 0,13 1 0,28 2 0,52 3 0,79 4 1,01

Adsorbia specific se va calcula conform relaiei (1). Se vor calcula parametrii izotermei de adsorbie att grafic ct i analitic.
RAPORT DE ACTIVITATE 1. Se traseaz dreapta de etalonare 5 puncte

2. Se tabeleaz rezultatele obinute.

15 puncte

Nr. prob c0 [mol/L] cf [mol/L]

 [mol/g]

3. Se traseaz izoterma de adsorbie

5 puncte

4. Se reprezint grafic lg =f (lg c)

5 puncte

Abiliti practice

10 puncte