Sunteți pe pagina 1din 18

2.

BAZELE FIZIOLOGICE ALE SISTEMULUI IMUNITAR 1

Sistemul imunitar este un ansamblu de organe, esuturi, celule i molecule complexe care au ca funcie aprarea organismului mpotriva agenilor strini, memorndu-i n vederea unei noi infecii, precum i recunoaterea i protejarea propriilor structuri.

ORGANIZAREA FUNCIONAL A SISTEMULUI IMUNITAR


n alctuirea sistemului imunitar intr urmtoarele tipuri de structuri, n funcie de specializarea lor funcional (fig. 2.1):

Fig. 2.1. Schema general a organizrii funcionale a sistemului imunitar la mamifere i psri. Ca particularitate la psri, a fost evideniat prezena bursei lui Fabricius i a limfonodulilor
1

Autori: N. Dojan i G. Gjil.

40

Fiziologia animalelor de ferm

1. organe productoare de celule ale sistemului imunitar, reprezentate de mduva osoas (hematogen). Mduva osoas conine celula stem pluripotent din care se difereniaz limfocitele prin linia limfoid, pe de o parte, celulele prezentatoare de antigen 2 i granulocitele prin linia mieloid, pe de alt parte; 2. organe limfoide de maturare i proliferare (organe limfoide primare), reprezentate de mduva osoas i timus, la mamifere, sau bursa lui Fabricius i timus, la psri. n aceste structuri se realizeaz proliferarea i maturarea limfocitelor. Mduva osoas i bursa lui Fabricius realizeaz proliferarea i maturarea limfocitelor B, iar timusul - a limfocitelor T, n absena stimulului antigenic; 3. organe limfoide de depozitare i proliferare (organe limfoide secundare), reprezentate de: - organe limfoide secundare sistemice: limfonoduri, la mamifere (limfonoduli, la psri) i splin; - structuri limfoide secundare mucosale (esutul limfoid asociat mucoasei intestinale), care pot fi la rndul lor grupate (tonsilele, plcile Peyer) sau izolate (foliculii limfoizi). Aici, limfocitele prolifereaz, de asemenea, dar numai n urma contactului cu stimulul antigenic. Mduva osoas (mduva hematogen) este considerat principalul organ limfopoietic al mamiferelor i psrilor. Mduva osoas se afl n trabeculele poriunii spongioase a oaselor. Aceasta conine celula stem limfopoietic din care se formeaz prin proliferare limfocite, macrofage i granulocite. Din punct de vedere structural i funcional, mduva osoas este alctuit din dou mari zone: stroma i zona hematopoietic. Stroma mduvei osoase conine o reea de fibre i celule reticulare cu rol de suport pentru zona hematopoietic a mduvei (fig. 2.2). De asemenea, stroma produce factori de cretere i dezvoltare, necesari pentru activarea celulelor stem din zona hematopoietic. Stroma reprezint, astfel, micromediul necesar hematopoiezei. Zona hematopoietic este format din colonii sau cuiburi de celule stem, localizate n reeaua de fibre reticulare. Celulele stem (uniti formatoare de
Fig. 2.2. Seciune histologic prin mduv osoas de porc (x 220). Pot fi observate diferite populaii de celule hematopoietice (dup Snchez-Vizcano Rodrguez, J.M., 2001, Course of introduction in swine Immunology)

Antigenul este o substan pe care organismul o recunoate ca non self i mpotriva creia elaboreaz un rspuns imun.
2

Bazele fiziologice ale sistemului imunitar

41

colonii (colony forming units) sunt la originea diferitelor linii celulare, fr a se cunoate cu exactitate ce anume st la baza diferenierii lor ntr-o linie celular sau alta. Timusul este un organ important n dezvoltarea sistemului imunitar n perioada embrionar i n primele sptmni de via. Timusul atinge dimensiunile maxime n prima pare a vieii postnatale (la porc, de exemplu, ntre sptmna a cincea i a opta de via), dup care scade considerabil n dimensiuni. Timusul are structur lobular, lobulii fiind nconjurai de un strat fin de esut conjunctiv din care pornesc septuri ce divid lobuli n civa sublobuli (fig. 2.3). Zona cortical a timusului conine o mare acumulare de limfocite proliferatoare de diferite dimensiuni, i puine celule epiteliale. Zona medular conine n principal celule epiteliale ce formeaz structuri concentrice, denumite corpusculii lui Hassal (celule epiteliale modificate prin hialinizarea citoplasmei; au funcii secretorii i fagocitare), i limfocite. Procesul de maturare (nvarea privind tolerarea a ceea ce este self, proFig. 2.3. Seciune histologic prin timus de porc (x 25): a septuri conjunctive ; b zon cortical ; c zon medular (dup SnchezVizcano Rodrguez, J.M., 2001, Course of introduction in swine Immunology)

priu, i reacia mpotriva moleculelor strine) al limfocitelor este realizat n timpul pasajului acestora din zona cortical spre zona medular, sub aciunea factorilor timici endocrini (vezi Capitolul 10, Endocrinologia). Celulele T proliferate i difereniate n timus rmn aici sau migreaz n organele limfoide secundare, unde formeaz zone T-dependente. Organele limfoide secundare sunt reprezentate la nivel sistemic, de ctre limfonoduri i splin (organe limfoide capsulate), iar la nivel de mucoas, de ctre esutul limfoid asociat mucoasei (amigdale i plcile Peyer, structuri necapsulate). Limfonodurile sunt formaiuni nodulare de esut conjunctiv dens amplasate pe lungimea vaselor limfatice, formnd lanuri ganglionare. Limfonodurile conin n structura lor o cortical cu foliculi limfoizi i esut limfoid difuz, i o medular (fig. 2.4). Foliculii limfoizi conin un centru germinativ alctuit n principal din limfocite B i cteva populaii de limfocite T, constituind zona T-independent a foliculului. esutul limfoid difuz reprezint zona T-dependent a foliculului, n care, alturi de limfocite T, se afl cantonate macrofage i celule dendritice. Medulara este amplasat la periferia unitilor nodulare i n jurul hilului i este alctuit dintr-o reea difuz de fibre srac n limfocite, macrofage i celule dendritice. Limfa ptrunde n limfonod prin vase aferente din zona convex i prsete limfonodul prin vase eferente din zona concav (hil) a limfonodului. La psri lipsete orga-

42

Fiziologia animalelor de ferm


Fig. 2.4. Seciune histologic prin limfonod de porc (x 25) : a- zona cortical ; b- foliculi limfoizi (celule B i celule T CD4+); c- esut limfoid difuz ; d zon medular amplasat la periferie (dup Snchez-Vizcano Rodrguez, J.M., 2001, Course of introduction in swine Immunology)

nizarea n limfonoduri a esutului limfoid asociat vaselor limfatice, rmnnd organizat doar sub form de limfonoduli. De asemenea, la psri, limfonodulii nu au rol de filtrare a plasmei limfatice. Rolul limfonodurilor este de a filtra limfa i a capta antigenii sosii pe calea circulaiei limfatice, procesndu-i cu ajutorul macrofagelor i limfocitelor din structura lor (funcie imunitar). Alte funcii ale limfonodurilor sunt prolifearea limfocitelor (funcie limfocitopoietic) i limfocitoclazia (Cornil, 1995). Splina este un organ limfoid secundar cu funcie dubl. Pe de o parte, splina filtreaz sngele n scopul capturrii i prelucrrii antigenilor (funcie imunitar). Pe de alt parte, splina are funcie hematopoietic, fiind mplicat n producerea eritrocitelor i a trombocitelor. Splina este alctuit dintr-o capsul de fibre musculare i colagen, ce adpostete poriunea funcional a splinei, reprezentat de pulpa alb i pulpa roie. Pulpa alb este esutul limfoid al splinei, localizat totdeauna n jurul unei artere sau arteriole, alctuind foliculi limfoizi i teci limfatice periarteriolare (fig. 2.5). Foliculii limfatici sunt alctuii din limfocite B, puine
Fig. 2.5. Seciune histologic prin splin (x 200): a capsul; b - pulp alb; c pulb roie; d trabecule (dup Snchez-Vizcano Rodrguez, J.M., 2001, Course of introduction in swine Immunology)

plasmocite i celule prezentatoare de antigen (macrofage i celule dendritice). Tecile limfatice periarteriolare sunt alctuite din limfocite T i puine limfocite B n zonele periferice. Pulpa roie splenic este alctuit din urmtoarele trei structuri: cordoanele splenice, sinusurile venoase i capilarele cu teci. Cordoanele splenice sunt alctuite dintr-o reea de fibre musculare pe suprafaa crora se afl un mare numr de celule libere n circulaia sanguin: monocite, hematii, plachete

Bazele fiziologice ale sistemului imunitar

43

sanguine i macrofage. Sinsusurile venoase sunt canale largi i anastomozate, cu orificii mari prin care pot trece cu uurin macrofagele n vederea realizrii funciei fagocitare. Capilarele sunt de tip fenestrat i sunt nconjurate de aglomerri de macrofage sub forma unor teci. La nivel de mucoase se afl amplasat esutul limfoid asociat acestora, care are o oarecare independen n cadrul sistemului imunitar. esutul limfoid asociat mucoasei este alctuit din limfonoduri, care au rolul de a proteja mucoasa intestinal mpotriva agresiunilor patogene. Aceasta deoarece un numr mare de ageni patogeni folosesc mucoasa intestinal ca poart de intrare n organismul animal. Circa 80% din mecanismele de aciune ale sistemului imunitar mucosal sunt mediate de diferite izotipuri de imunoglobuline A, cu excepia amigdalelor unde majoritatea imunoglobulinelor sintetizate sunt IgG, apoi IgA (vezi mai jos). Cele mai organizate structuri ale sistemului imunitar mucosal sunt amigdalele i plcile Peyer. La psri, esutul limfoid mucosal este reprezentat de esutul limfoid asociat tractusului intestinal ce include tonsilele cecocolice. Amigdalele sunt organe limfoide secundare necapsulate. Datorit amplasrii lor anatomice, ele sunt componente ale sistemului imunitar digestiv i respirator. Amplasate n imediata apropiere a epiteliului superficial, amigdalele sunt alctuite din limfonoduri agregate sau solitare, esut limfoid difuz (sau interfolicular) i cripte amigdaliene (care sunt invaginaii epiteliale). n criptele amigdaliene se afl limfocite cantonate n numr mare. Structura limfoid a amigdalelor este similar foliculilor limfoizi : centre germinative, care sunt structuri compacte formate din limfocite B incluse n esutul limfoid difuz alctuit la rndul lui n principal din limfocite T. Principalii anticorpi sintetizai de amigdale sunt IgG i IgA. Plcile Peyer sunt agregate de esut limgoid, necapsulate, localizate n mucoasa intestinal. Dup amplasarea lor anatomic se disting plci Peyer jejunale, de dimensiuni mici, amplasate n jejun i poriunea iniial a ileonului, i plci Peyer ileocecale, amplasate n poriunea terminal a ileonului.

PROPRIETILE FUNCIONALE ALE SISTEMULUI IMUNITAR


Principalele proprieti funcionale ale sistemului imunitar n ansamblul su sunt: 1) abilitatea de a deosebi componentele proprii organismului din care face parte de componente strine, 2) specificitatea rspunsului i 3) capacitatea de memorare. 1. Abilitatea sistemului imun de a deosebi componentele proprii de cele strine. Sistemul imun poate discrimina ntre componentele proprii (self) i cele strine (nonself), reacionnd mpotriva a tot ceea ce este diferit de organism (fa de antigeni). Sistemul imun poate reaciona mpotriva moleculelor strine, dar nu reacioneaz mpotriva moleculelor proprii organismului. n timpul dezvoltrii embrionare, limfocitele care reacioneaz mpotriva propriilor structuri sunt eliminate printr-un proces de apoptoz, pstrndu-se i trecnd n circulaie doar clonele celulare care reacioneaz doar mpotriva structurilor strine. Uneori, ns, sistemul

44

Fiziologia animalelor de ferm

imun nu reacioneaz mpotriva structurilor strine, fenomen denumit toleran. Alteori, sistemul imun reacioneaz mpotriva structurilor proprii, ceea ce este cunoscut sub numele de autoimunitate. 2. Specificitatea sistemului imun const n faptul c att limfocitele ct i anticorpii recunosc doar un epitop3. ntregul sistem imun poate recunoate milioane de antigeni, dar pentru fiecare determinant antigenic este produs o clon de limfocite sau anticorp specific: un determinant antigenic o celul. 3. Memoria. Cnd un antigen este prezentat pentru prima dat sistemului imun este produs un rspuns primar. Sunt produse limfocite cu memorie care rmn permanent n circulaie. Cnd acelai antigen vine din nou n contact cu sistemul imun este elaborat rspunsul secundar: limfocitele cu memorie sunt stimulate n sensul producerii cte unei clone limfocitare pentru fiecare antigen n parte. Acest rspuns secundar se deruleaz mai rapid i este mai eficient dect rspunsul primar.

CELULELE SISTEMULUI IMUNITAR: LEUCOCITELE Clasificarea leucocitelor


Clasificarea clasic, morfologic, a leucocitelor are la baz prezena granulaiilor n citoplasma lor, deosebindu-se leucocite granulocitare (neutrofilul, eozinofilul i bazofilul) ce conin granulaii n citoplasm, i leucocite agranulocitare (limfocitul i monocitul) ce nu conin sau conin un numr mic de granulaii n citoplasm (fig. 2.6). Nucleii granulocitelor prezint forme diferite i sunt n general fragmentai n lobi sau segmente legate ntre ele prin filamente, motiv pentru care granulocitele se mai numesc i leucocite polimorfonucleare. Limfocitele i monocitele sunt leucocite cu un singur nucleu n celula lor.

Fig. 2.6. Aspectul morfologic al leucocitelor la unele specii de animale de ferm. 1 limfocit mic de cal; 2 limfocit cu granulaii azurofile; 3 limfocit mare de cal; 4 neutrofil tnr de cal; 5 neutrofil cu nucleu nesegmentat de cal; 6 neutrofil cu nucleu polisegmentat de cal; 7 neutrofil cu nucleu polisegmentat de vac; 8 eozinofil de cal; 9 eozinofil de vac; 10 - mielocit eozinofil; 11 mielocit neutrofil (coloraie May-Grnwald Giemsa, dup K o l b , E., 1974)
3 Fragmentul din structura moleculei de antigen prin care acesta se leag de anticorp se numete epitop.

Bazele fiziologice ale sistemului imunitar

45

Un criteriu modern de clasificare a leucocitelor are la baz funciile acestora. Din acest punct de vedere se distinge un grup de leucocite reprezentat de limfocitele B i limfocitele T. Acest grup are rol esenial n imunitatea dobndit. Granulocitele neutrofile, eozinofile i bazofile formeaz grupul celulelor fagocitare. Monocitele i macrofagele la care se adaug celulele dendritice formeaz grupul celulelor prezentatoare de antigen. Principala funcie a acestui ultim grup este prezentarea de antigen. Dei nu acioneaz prin mecanisme specifice, ele aparin imunitii nnscute, dar au rol i n imunitatea dobndit.

Durata de via i numrul leucocitelor


Dup formare, lecucocitele sunt trecute n circulaia sanguin pentru un timp relativ scurt, pn n momentul n care prsesc sngele pentru a-i exercita funciile extravasculare. Granulocitele rmn n circulaia sanguin doar 6 10 ore, dup care o prsesc trecnd n esuturi, unde au o durat de via foarte variabil, n general, ns, de 2 3 zile. Odat ce au prsit circulaia sanguin, normal, granulocitele nu se mai ntorc n snge. Ele prsesc esuturile orientnduse spre focarele inflamatorii sau prsesc corpul pe cale gastrointestinal, urinar, respiratorie sau pe calea tractului reproductor. Pe suprafaa epiteliului acestor tracturi se afl leucocite cu rol de aprare mpotriva invaziei microbiene, constituind imunitatea local. n cazul unor infecii grave, durata de via a granulocitelor se reduce la cteva ore deoarece, dup ce i ndeplinesc funciile, sunt i ele distruse n cadrul aceluiai proces. Monocitele rmn n snge timp de 10 12 ore dup care traverseaz peretele capilar i trec n esuturi unde devin macrofage tisulare, form sub care supravieuiesc luni sau ani de zile. Numeroase macrofage rmn fixate n sinusoidele ficatului, splin, mduv osoas i limfonoduri. Limfocitele sunt recirculate repetat din snge n esuturi, apoi n limf i din nou n snge. Unele limfocite (T) au o durat de via mai lung (100 200 de zile), iar altele (B) au o durat de via mai scurt (2 4 zile), n funcie i de necesarul organismului pentru aceste celule. Numrul leucocitelor din snge este considerabil mai mic dect cel al eritrocitelor. n general, numrul leucocitelor oscileaz n jurul a 10 000/mmc de snge, la speciile domestice. Exprimarea procentual a diferitelor categorii de leucocite constituie formula leucocitar (tabelul 2.1). La porc, vac, oaie i capr, neutrofilele predomin procentual fa de limfocite. La cal, cine i pisic, limfocitele predomin fa de neutrofile. Granulocitele sunt stocate n mduva osoas, aceasta reprezentnd un rezervor de granulocite echivalnd cu producia lor pe 6 zile.

Leucopoieza
Leucopoieza este procesul de formare a lecucocitelor. Acest proces se deruleaz n mduva osoas, dei nu toate lecucocitele i desvresc aici procesul de formare. Toate celulele sistemului imunitar provin dintr-o singur celul progenitoare pluripotent din mduva osoas (fig. 2.7). Iniial, din aceasta se difereniaz dou linii celulare: linia limfoid i linia mieloid.

46

Fiziologia animalelor de ferm

Tabelul 2.1 Numrul de leucocite i formula leucocitar la diferite specii de animale (dup R e e c e , W.O., 1996) Specia Porc: 1 zi 1 spt. 2 spt. 6 spt. Cal Vac Oaie Capr Cine Pisic Gin Numrul de leucocite/mm3 de snge 10 000 12 000 10 000 12 000 10 000 12 000 15 000 22 000 8 000 11 000 7 000 10 000 7 000 10 000 8 000 12 000 9 000 13 000 10 000 15 000 20 000 30 000 Formula leucocitar (%) Neutrofile 70 50 40 30 35 50 60 25 30 25 30 35 40 65 70 55 60 25 - 30 Eozinofile 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 3-8 Bazofile <1 <1 <1 <1 <1 <1 <1 <1 <1 <1 1-4 Limfocite 20 40 50 55 60 30 40 60 65 60 65 50 55 20 25 30 35 55 - 60 Monocite 56 56 56 56 56 5 5 5 5 5 10

Linia limfoid se afl la originea limfocitelor. Limfocitele formate n mduv osoas hematogen trec n circulaie, de unde sunt cantonate n organele limfoide primare: timus i mduva hematogen, la mamifere, sau timus i bursa lui Fabricius, la p7sri. n timus se formeaz limfocitele T. n mduva hematogen se formeaz limfocitele B (de la bone, os). Limfocitele B sunt responsabile de sinteza de anticorpi (imunitatea umoral). Limfocitele T colaboreaz la producerea de anticorpi i la realizarea imunitii celulare. Linia mieloid se afl la originea celulelor accesorii, celulele prezentatoare de antigen sau fagocite: granulocite, monocite i celule dendritice. Fagocitele au rol esenial n imunitatea nnscut.

Funciile granulocitelor neutrofile


Neutrofilele sunt leucocite granulocitare cu diametrul cuprins ntre 12 i 15 microni, nucleu segmentat n 3 5 lobi i citoplasm bazofil. La femelele de mamifere, pe nucleul n interfaz poate fi identificat cromatina Barr (cromozomul X interfazic) ntr-un procent de 80% din cazuri. Gradul de maturare a neutrofilului se poate aprecia pe baza numrului de segmente nucleare. Raportul dintre granulocitele imature (cu nucleu nesegmentat) i cele mature se numete indice Arneth i are valori normale sub 0,06. Creterea acestui raport semnific predominana neutrofilelor tinere (activitate granulopoietic intens). Scderea raportului semnific procese de mbtrnire a seriei granulocitare. Neutrofilele conin granulaii care fixeaz colorantul neutru din sistemul de colorare May Grnwald - Giemsa. n frotiurile colorate May Grnwald Giemsa, granulaiile neutrofilelor au culoare brun. n figurile 1.6 1.19 din Capitolul 1, Sngele, este prezentat morfologia leucocitelor la diferite specii de animale. Funciile neutrofilelor sunt legate de aprarea antiinfecioas nespecific, constnd n distrugerea prin fagocitoz a agenilor infecioi ptruni n organism.

Bazele fiziologice ale sistemului imunitar

47

Fig. 2.7. Schema general a leucopoiezei. NK limfocite NK, TH limfocite T helper, TM limfocite T cu memorie, TK - limfocite T killer, TS limfocite T supresoare (dup Snchez-Vizcano Rodriguez, J.M., 2001, modificat)

Neutrofilele atac i distrug agenii infecioi chiar n snge. La scurt timp de la declanarea unui proces inflamator, neutrofilele din corp invadreaz zona respectiv, consecin a eliberrii din focarul inflamator a unor substane care atrag aceste celule. Neutrofilele constituie, astfel, cea de-a doua linie de aprare, dup macrofagele tisulare, primele celule care ajung la focarul inflamator i ncep activitatea fagocitar. Neutrofilele i celelalte granulocite nu intr n grupul celulelor prezentatoare de antigen, alturi de macrofage i celulele dendritice (vezi mai jos). Apartenena granulocitelor la acest grup e contestat de faptul c aceste celule nu emit semnale ctre limfocite n vederea activrii rspunsului imun. Fagocitoza Definit ca mecanismul celular de aprare a organismului mpotriva elementelor organice corpusculare i macromoleculare, termenul de fagocitoz a fost introdus nc din 1883 de ctre Mecinikov i provine de la cuvintele greceti fagein = a mnca i citos = celul. Termenului de fagocitoz i se asociaz cel de pinocitoz, care este fagocitoza lichidelor. Fagocitoza se desfoar n patru faze: aderare, nglobare, digestie i, ultima, facultativ, distrugerea leucocitelor fagocitare.

48

Fiziologia animalelor de ferm

Realizarea fagocitozei implic ntr-o prim etap acumularea focal a granulocitelor. Acumularea focal. n esen, acumularea focal este o migrare direcionat a granulocitelor spre un focar inflamator. Ptrunderea ntr-un teritoriu tisular a unui agent inflamator determin vasodilataie local. Granulocitele i micoreaz viteza de circulaie i se fixeaz pe peretele capilarelor, fenomen denumit marginaie leucocitar. Ulterior, ele emit pseudopode i se strecoar printre celulele endoteliale n spaiul interstiial, fenomen denumit diapedez. Diapedeza este urmat de deplasarea amboidal i acumularea n jurul agentului inflamator. Direcia de migrare este dictat prin fenomene de chemotactism pozitiv (atracie) sau negativ (respingere). Dei termenul de chemotactism sugereaz intervenia doar a mecanismelor chimice, la originea sa stau i mecanisme fizice. Mecanismele fizice ale chemotactismului sunt atracia electrostatic i tensiunea superficial. Atracia electrostatic se exercit ntre leucocitele ncrcate electropozitiv i focarul inflamator ncrcat electronegativ prin acumulare de acizi organici rezultai din liza tisular. Totodat, n focar se creaz suprafee rugoase i o tensiune superficial sczut care contribuie la atracia leucocitar. Mecanismele chimice presupun sinteza sau/i eliberarea de ctre esutul lezat a unor substane care difuzeaz la distan, putnd fi percepute i urmrite de ctre granulocit. Unele dintre aceste substane determin atracie leucocitar (chemotactism pozitiv), altele determin respingere leucocitar (chemotactism negativ). Chemotactismul implic existena de receptori membranari leucocitari. Printre substanele chemotactice pozitive se numr: ionii de calciu eliberai din esuturile distruse, toxinele bacteriene, opsoninele (factori specifici i nespecifici circulani de natur proteic cu rol de activare a procesului de acumulare focal), sistemul complement (vezi Imunologia) etc. Chemotactismul negativ este determinat de o serie de factori chimici : toxine microbiene, unii hormoni (hidrocortizonul) etc. Aderarea const n fixarea pseudopodelor granulocitului pe suprafaa corpusculului care urmeaz s fie fagocitat. Aderarea este realizat de factori fizici (rugozitatea corpusculului, electronegativitatea sa) i de factori chimici cum ar fi opsoninele i factorii sistemului complement. Aderarea direct, prin fixarea fagocitului pe antigen, este foarte rar, deoarece antigenii, mai ales agenii microbieni, sunt echipai cu structuri de suprafa antifagocitare (capsule, toxine etc.). De regul, aderarea este indirect, antigenii fiind, n prealabil, opsonizai (inactivai) prin fixarea pe suprafaa lor a opsoninelor (anticorpi). nglobarea const n ptrunderea particulei de antigen n interiorul fagocitului, acoperit de o vezicul membranar denumit fagozom. Vezicula se detaeaz n scurt timp de membran, rmnnd nconjurat de organite citoplasmatice. Digestia const n hidroliza proteinelor antigenice sub aciunea hidrolazelor eliberate din lizozom. Astfel, sunt blocate procesele metabolice din germenul nglobat, membrana acestuia este permeabilizat i apoi lizat. Distrugerea leucocitelor fagocitare este facultativ. Ea poate avea loc prin excesul de toxine eliberate n urma distrugerii agenilor patogeni sau chiar prin fenomene de autoliz datorate enzimelor lizozomale eliberate n citoplasm.

Bazele fiziologice ale sistemului imunitar

49

Funciile granulocitelor eozinofile


Eozinofilele sunt leucocite granulocitare cu nucleu bi- sau trisegmentat. Citoplasma lor conine granulaii eozinofile (cu afinitate pentru colorantul rou, eozina, din sistemul de colorare May-Grnwald - Giemsa). Eozinofilele au capacitate fagocitar, dar foarte redus. Eozinofilele devin mai numeroase n unele forme de parazitism. Ele se aglomereaz pe suprafaa paraziilor elibernd substane care pot realiza distrugerea acestora: dup ce formele parazitare sunt opsonizate (fixate de anticorpi), eozinofilele i descarc coninutul granular pe suprafaa formelor parazitare opsonizate, determinndu-le leziuni letale. Eozinofilele fagociteaz, astfel, numai complexele antigen-anticorp. Eozinofilele sunt implicate n anihilarea focarelor alergice. Ele anihileaz unele substane provenite din focarele inflamatorii, prevenind rspndirea procesului inflamator. Cortizolul reduce numrul de eozinofile din snge prin stimularea diapedezei acestora i prin inhibarea eliberrii acestora din mduva osoas. Pe aceast baz se poate testa funcia secretoare a corticosuprarenalei: administrarea de ACTH determin creterea cantitii de hormoni glucocorticoizi, care, la rndul lor, reduc eozinofilele din snge (testul Thorn). 40% din eozinofile se afl n circulaia sanguin, restul fiind cantonate n esuturi. Funciile granulocitelor bazofile Bazofilele sunt leucocite granulocitare cu nucleu de form neregulat i citoplasm cu granulaii de mrimi diferite. n frotiuri colorate May Grnwald Giemsa, granulaiile bazofilelor au culoare albastr. Uneori, granulaiile se pierd n cursul colorrii, n locul lor aprnd vacuole. Bazofilele din snge sunt ntr-o oarecare msur, dar nu n totalitate, similare mastocitelor, celule mari, localizate n imediata apropiere a capilarelor. Granulele bazofile conin histamin, bradikinin, serotonin, heparin, leucotriene i enzime lizozomale, substane care iniiaz rspunsul inflamator. Jumtate din histamina circulant este furnizat de bazofile. Ambele celule, bazofilul i mastocitul, elibereaz n snge heparina, substan care poate preveni coagularea sngelui i poate crete viteza de ndeprtare din snge a particulelor lipidice, dup un prnz gras. Mastocitele i bazofilele au rol n reaciile alergice. Aceste celule conin pe suprafaa membranei lor receptori pentru anticorpi IgE (cei asociai cu alergiile). Cnd anticorpii contacteaz antigenul specific, bazofilele i mastocitele se lizeaz elibernd coninutul granular, ducnd la manifestarea reaciior vasculare i tisulare ale alergiei: vasodilataie local, atragerea neutrofilelor i a eozinofilelor, creterea permeabilitii vasculare. Bazofilele stimuleaz reaciile alergice, n timp ce eozinofilele tind s le atenueze. Exist un echilibru al funciilor bazofilelor i al eozinofilelor n reaciile inflamatorii: bazofilele stimuleaz reaciile inflamatorii, apoi intervin eozinofilele, care le tempereaz. Bazofilele au capacitate fagocitar redus.

Funciile complexului monocito-macrofagic


Monocitele sunt celule circulante sanguine cu dimensiuni mari (diametru de 20 30 m) sau mici (diametru de 15 20 m), fiind, de regul, cele mai mari leuco-

50

Fiziologia animalelor de ferm

cite. Monocitele prezint un nucleu de form sferic sau oval, care se coloreaz slab i uniform violet, n sistemul de colorare May Grnwald Giemsa. Citoplasma monocitelor este abundent i se coloreaz slab. Monocitele n micare au, n general, o form triunghiular, cu unul dintre vrfuri rmas n urm. Monocitele aderente pe o suprafa (sticl) se aplatizeaz, nucleul rmnnd central. Monocitele circulante reprezint o form celular insuficient maturat. Ele fagociteaz bacterii, virusuri i complexe antigen-anticorp din snge, dar funcia lor fagocitar este slab. Monocitele ptrund n esuturi prin acelai fenomen de marginaie i diapedez ca i neutrofilele. Odat ajunse n esuturi, monocitele cresc mult n dimensiuni, chiar pn la 5 ori, ajungnd la un diametru de circa 80 m. De asemenea, n citoplasma monocitelor apare un numr mare de lizozomi, care le dau aspectul unui sac plin cu granule. Aceste celule sunt numite acum macrofage (celule fagocitare mari) i particip, iniial, la fagocitarea celulelor bacteriene. O parte din monocitele devenite macrofage sunt mobile, prezint proprieti de micare amoeboidal i chemotaxie (pot fi atrase de numeroase substane produse de esuturi), deplasnduse spre esuturi inflamate. Macrofagele sunt cele care ajung primele la un focar inflamator, constituind prima linie de aprare. Dei n primele zile de la declanarea unui focar inflamator, procentul neutrofilelor este mai mare dect al macrofagelor, ulterior, dup mai multe sptmni, macrofagele vor predomina datorit creterii produciei medulare de monocite. Ele predomin la locul inflamaiei i datorit duratei lor de via lungi. O mare parte din monocite, dup ce au devenit macrofage n esuturi, se fixeaz pe diferite structuri tisulare, rmnnd n aceast stare mai multe luni sau chiar ani de zile, pn sunt solicitate s-i ndeplineasc funciile de aprare. Ele pot fagocita bacterii, virusuri, fragmente necrotice de esuturi, ca i macrofagele mobile. Cnd sunt stimulate n mod corespunztor, ele se desprind de locul unde au fost fixate devenind macrofage mobile. Capacitatea fagocitar a macrofagelor este mult mai mare dect a neutrofilelor, un macrofag putnd fagocita pn la 100 de bacterii. Ele pot nghii chiar celule ntregi sau parazii, pe cnd neutrofilele nu pot fagocita particule mai mari dect bacteriile. De asemenea, dup digerarea particulelor ingerate, macrofagele elimin materialul rezidual, putnd s mai triasc timp de cteva luni. Monocitele, macrofagele mobile, macrofagele fixe precum i unele celule endoteliale specializate din mduva oaselor, splin i limfonoduli constituie sistemul monocito-macrofagic, cunoscut i sub numele de sistem reticulo-endotelial deoarece n trecut se considera c macrofagele provin din celulele endoteliale. Macrofagele fixate pe sinusurile capilare hepatice sunt cunoscute sub numele de celule Kupffer i au rol de aprare antiinfecioas pe traseul epiteliu digestiv ven port circulaie general. Ele fagociteaz microorganismele care eventual au ptruns prin epiteliul intestinal n vena port, mpiedicnd trecerea acestora n circulaia general. Pe suprafaa extern a alveolelor pulmonare sau fcnd parte chiar din structura alveolei se gsesc macrofage cu rol n fagocitarea microorganismelor din aerul inspirat. n limfonoduri, macrofagele cptuesc sinusurile limfatice. Aceste macrofage din limfonoduri au rol n distrugerea bacteriilor care au traversat

Bazele fiziologice ale sistemului imunitar

51

pielea sau diferite mucoase i au ptruns n circulaia limfatic, prevenind ptrunderea acestora n snge. Macrofagele din sinusurile splenice au rol n fagocitarea agenilor patogeni care au ptruns n circulaia sanguin. Pentru rolul macrofagelor n eritroliz i n metabolismul fierului, vezi Capitolul 1, Sngele. Celulele prezentatoare de antigen Macrofagele, monocitele, celulele dendritice 4, granulocitele (dup unii autori 5) i celulele B (n mic msur) formeaz grupul celulelor prezentatoare de antigen. Acest grup de celule ndeplinete urmtoarele funcii n cadrul sistemului imunitar: prezentare de antigen, sintez de interleukine 6 i fagocitoz.

Funciile limfocitelor
Locul limfocitelor n sistemul de aprare imunitar O parte din capacitatea de aprare a organismului mpotriva agenilor patogeni este consecina interveniei unor procese generale de aprare ale organismului, constituind imunitatea nespecific. Aceasta include: funcia de barier antiinfecioas a pielii, activitatea de liz a micoorganismelor de ctre sucul gastric i de ctre enzimele digestive, funcia de fagocitoz a granulocitelor i macrofagelor i funcia proteinelor protectoare (sistemul complement i interferonul, vezi Imunologia). O alt parte a capacitii de aprare a organismului mpotriva agenilor patogeni rezult din dezvoltarea de mecanisme specifice de aprare, constituind imunitatea specific. ntreaga imunitate specific este rodul activitii limfocitelor. Originea, proliferarea i maturarea limfocitelor n organism Limfocitele provin prin multiplicarea i diferenierea celulei stem pluripotente hematopoietice din mduva osoas. Ele ajung pe cale sanguin, o parte din ele n timus, iar cealalt parte rmn n mduva osoas, la mamifere, sau ajung n bursa lui Fabricius, la psri. n aceste organe, limfocitele se multiplic intens i suport o aa-numit preprocesare, constnd n instruirea i pregtirea pentru producerea de anticorpi. Preprocesarea limfocitelor n mduva osoas, la mamifere, respectiv, bursa lui Fabricius, la psri, duce la formarea de limfocite B (B de la bursa lui Fabricius, la psri sau bone = os, la mamifere). Prin preprocesarea n timus rezult limfocite T (timo-dependente). Dup unii autori, stimularea timic continu i asupra limfocitelor T care au prsit timusul, prin intermediul factorilor de stimulare secretai (vezi Sistemul endocrin). n organele limfoide primare (mduva osoas, timusul i bursa lui Fabricius) sunt preformate cel puin cte un milion de tipuri de limfocite T i B, cte un tip pentru fiecare antigen existent 7. Proliferarea celular n organele limfoide primare se face independent de stimulul antigenic. Dup preprocesare, limfocitele B i limfocitele T preformate circul liber prin
Aceste celule se gsesc n procent mai mare n piele i mucoase. Snchez-Vizcaino (vezi bibliografia). 6 Interleukinele fac parte din grupul citokinelor, substane mediatoare i stimulatoare ale imunitii. 7 Se estimeaz c omul vine n contact n timpul vieii cu aproximativ un milion de antigeni, astfel c este necesar acelai numr de tipuri de limfocite pentru protecia mpotriva acestor antigeni.
4
5

52

Fiziologia animalelor de ferm

snge cteva ore, apoi sunt sechestrate n organele limfoide secundare capsulate (limfonoduri i splin) i n formaiunile limfoide necapsulate8, reprezentate de amigdale, plcilePeyer, foliculi i apendicele cecal (esutul limfoid asociat mucoasei intestinale). n organele limfoide secundare, limfocitele ocup arii specifice, unde vor prolifera numai sub influena stimulului antigenic. Proprietile morfofuncionale ale limfocitelor B La microscopul optic nu pot fi observate diferene morfologice ntre cele dou tipuri de limfocite, T i B. Microscopul electronic, ns, arat c suprafaa membranar a limfocitelor T este neted, n schimb cea a celulelor B prezint numeroase prelungiri, care s-au dovedit a fi datorate imunoglobulinelor (fig. 2.8). Utilizarea diferiilor markeri de suprafa, n special a anticorpilor monoclonali, a permis diFig. 2.8. Morfologia celulelor B i a celulelor T relevat prin microscopia electronic n scanning: celulele T au suprafaa neted, n timp ce suprafaa celulelor B prezint numeroase proiecii (dup Snchez-Vizcano Rodriguez, J.M., 2001)

ferenierea mai multor populaii limfocitare, inclusiv a celulelor NK (vezi mai jos). Limfocitele B reprezint 8 18% din totalul limfocitelor circulante. Ele prezint pe suprafaa lor imunoglobuline (vezi mai jos), n principal IgM i IgG. Acestea permit interaciunea cu antigenul n forma lui nativ, fa de limfocitele T, care nu reacioneaz cu antigenul n forma lui nativ. Majoritatea antigenilor care reacioneaz cu limfocitele B sunt proteine, dar pot exista i polizaharide. Iniierea reaciei antigenice este realizat prin intermediul imunoglobulinelor membranare, dar producerea de anticorpi necesit, n majoritatea cazurilor, colaborarea unui tip de limfocite T i anume limfocitele T H CD+ (vezi mai jos). Antigenii care necesit aceast colaborare sunt numii antigeni T-dependeni, i constituie majoritatea. Ali antigeni, cum ar fi unele polizaharide bacteriene i lipopolizaharide pot induce producerea de anticorpi fr colaborarea cu limfocite T. Acetia sunt cunoscui ca antigeni T-independeni. Folosirea antigenilor monoclonali a permis ntocmirea unor adevrate hri imunologice ale suprafeelor celulare, grupnd proteinele membranare cu proprieti
8

Formaiunile limfoide necapsulate sunt considerate limfonoduri modificate.

Bazele fiziologice ale sistemului imunitar

53

antigenice n antigeni difereniai pe grupe sau antigeni CD (Clusters of Differentiation antigens). Antigenii CD limfocitari funcioneaz ca receptori pentru citokine. Ei pot fi utilizai i ca markeri celulari pentru identificarea diferitelor populaii de limfocite (Snchez-Vizcano, 2001). Plasmocitele Fiecare limfocit B stimulat de ctre un antigen T-dependent sau T-independent genereaz o clon de celule denumite plasmocite, care produce i secret anticorpi. Aceti anticorpi sunt specifici pentru epitopul care a indus rspunsul imun. Limfocitul B stimulat, sau plasmocitul (fig. 2.9), se difereniaz morfologic de limfocitul B originar (nucelu mare i citosol puin), apropiindu-se ca aspect de celulele implicate n sintez: nucleu mic i citosol mult, suprafaa sa rmnnd acoperit cu numeroase prelungiri membranare. Plasmocitele sunt localizate n principal n limfonoduri, pulpa roie a splinei, mduva hematogen, mucoasa intestinal i mucoasa respiratorie. Plasmocitele au o durata medie de via de 2 3 zile in vivo i doar cteva ore in vitro.
Fig. 2.9. Suprafaa unui plasmocit vzut la microscopul electronic n scanning: se observ numeroase proieciii membranare (dup Snchez-Vizcano Rodriguez, J.M., 2001)

Proprietile morfofuncionale ale limfocitelor T Aceste celule se difereniaz de limfocitele B prin aceea c au suprafaa neted (fr imunoglobuline), dar formeaz rozete cu eritrocite de oaie i sunt esterazopozitive. Limfocitele T joac principalul rol n aprarea imunitar. n primul rnd, aceste celule au rol n mecanismele de prezentare a antigenului ctre celulele B, iar n al doilea rnd au rol n imunitatea mediat celular (vezi mai jos). Pe membrana celulelor T au fost identificate dou tipuri de receptori notai TcR i TcR . Rolul acestora este de a interaciona cu antigenul prezentat de ctre celulele prezentatoare de antigen. Ca i n cazul limfocitelor B, anticorpii monoclonali au fcut posibil diferenierea antigenilor CD i clasificarea diferitelor tipuri de limfocite n subpopulaii pe baza deinerii acestori antigeni. De axemplu, toate celulele T dein antigenul CD3, ceea ce permite, distrugerea prin tratare cu un anticorp anti CD3 a acestor celule dintr-un transplant de mduv hematogen. Celulele T helper dein antigenul CD4. Celulele T citotoxine dein antigenul CD8. Antigenul CD56 este un marker al celulelor NK etc. (Snchez-Vizcano, 2001).

54

Fiziologia animalelor de ferm

Mecanismul de aciune al limfocitelor B Cnd un antigen specific vine n contact cu celula B corespunztoare, aceasta este activat. Respectiv, ea capt abilitatea de a se divide n numeroase plasmocite (fig. 2.10). Plasmocitele vor sintetiza anticorpi mpotriva antigenului respectiv. n acest sens, celulele B sunt stimulate de ctre citokinele produse de celulele T helper. Toate plasmocitele derivate dintr-o celul B parental poart numele de clon. O clon fabric un singur tip de anticorp, mpotriva unui singur antigen. Conform teoriei seleciei clonale, antigenul este cel care selecioneaz care celul B va produce o clon de plasmocite. Clona odat format ncepe s sintetizeze imunoglobuline. Cnd producia de anticorpi este suficient i antigenul este distrus, dezvoltarea plasmocitelor nceteaz. Acest prim rspuns imunitar al organismului la contactul cu un antigen constituie rspunsul imunitar primar. Anticorpii formai trec n snge i sunt transportai pn la contactul cu antigenul specific, pe care l inactiveaz prin reacia antigen-anticorp (aglutinare, precipitare, neutralizare, liz). O parte din celulele clonei nu particip la producia de anticorpi; n schimb, rmn n circulaia sanguin sub forma celulelor B cu memorie. Ct timp celulele B cu memorie se gsesc n corp, acesta este activ imunologic. Cnd acelai antigen va ptrunde din nou n organism, celulele B cu memorie vor fi activate pentru producia de noi plasmocite, care vor sintetiza anticorpi. Rspunsul imunitar dat de aceast dat este mult mai prompt i este denumit rspuns imunitar secundar. Aprarea antiinfecioas mediat de celulele B este numit i imunitate mediat de anticorpi, deoarece celulele B produc anticorpi. Acest tip de imunitate mai este denumit i imunitate umoral deoarece anticorpii sunt prezeni n umori. Imunoglobulinele Imunoglobulinle (Ig) sunt molecule proteice complexe (glicoproteine) produse de plasmocite ca rspuns la aciunea unui imunogen i care funcioneaz ca anticorpi. Sunt cunoscute cinci clase de imunoglobuline: IgM, IgD, IgG, IgA i IgE. IgM i IgD sunt receptori antigenici ai celulelor B. IgG sunt anticorpii predominani din ser. IgA sunt prezente n special n mucoase i au rol n imunitatea local. IgE sunt produse mai ales n caz de alergii, determinnd eliberarea de histamin. globulinele serice sunt anticorpi cu masa molecular cuprins ntre 150 i 900 kD, reprezentnd pn la 20% din totalul proteinelor plasmatice. Molecula lor coninnd lanuri proteice uoare i lanuri proteice grele prezint situsuri de legare a antigenului. Anticorpii acioneaz,n principal pe dou ci: prin atacul direct asupra agentului strin i prin activarea sistemului complement (vezi Imunologia). Mecanismul de aciune al limfocitelor T Spre deosebire de celulele B, celule T nu produc anticorpi. n schimb, celulele T atac direct celulele coninnd antigenul pe care i recunosc. Alte celule T regleaz rspunsul imun. n urma contactului cu antigenul specific, preparat i prezentat de ctre macrofage locale (vezi mai jos), clona specific de celulele T prolifereaz formnd un numr mare de celule T activate. Principala diferen este c, n loc s fabrice anticorpi, celulele T fabric celule T activate, pe care le lanseaz n circula-

Bazele fiziologice ale sistemului imunitar

55

ia limfatic i, de aici, n circulaia sanguin. Din circulaie, celulele T activate traverseaz capilarele trecnd n spaiul interstiial i din nou n limf, recirculnduse repetat timp de mai multe luni sau ani. Din multiplicarea celulelor T activate rezult mai multe tipuri de celule T: celule T citotoxice (T C ), celule T helper (T H ), celule T supresoare (T S ) i celule T cu memorie (T M ). Toate cele patru tipuri de celule sunt asemntoare morfologic, dar prezint funcii diferite.

Fig. 2.10. Schema de funcionare a celulelor B i a celulelor T. Cnd un antigen activeaz celula B corespunztoare, aceasta se multiplic i se difereniaz formnd celule cu memorie i o clon de plasmocite productoare de anticorpi. Antigenul activeaz celule T (citotoxice sau helper) numai dac acesta este prezentat de ctre o celul prezentatoare de antigen, cum ar fi macrofagul. Celulele T citotoxice activate atac apoi i distrug celulele antigenice; celulele T helper se divid formnd o clon de celule T helper care produce limfokine, celule T supresoare i celule T cu memorie (dup Mader, S., Biology, 4th ed, Ed. Wm.C. Brown Pub., IA, USA, 1993, modificat)

56

Fiziologia animalelor de ferm

Celulele T C atac direct i distrug celulele strine care au constituit antigen specific, cum ar fi celule infectate cu virus, sau celule canceroase. Ele nu fagociteaz aceste celule strine, ci se fixeaz pe suprafaa lor elibernd unele proteine denumite perforine care produc orificii n membrana celulelor atacate. Prin aceste orificii, schimbul de substan al celulei cu mediul devine necontrolabil, celula se umfl i se lizeaz n ntregime. Celulele T sunt responsabile de imunitatea celular, caracterizat prin distrugerea celulelor purttoare de antigen. Dintre cele patru tipuri de celule T, doar celulele T C sunt implicate direct n acest tip de imunitate. Celulele T H sunt cele mai numeroase dintre celulele T. Ele regleaz activitatea sistemului imun. Ca rspuns la contactul cu antigenul, celulele T H secret interleukine, inclusiv interferon 9. Limfokinele determin celulele T H s se cloneze i alte celule imunitare s-i realizeze funciile. De exemplu, celulele T H stimuleaz macrofagele pentru fagocitoz i celulele B s fabrice anticorpi. Deoarece virusul SIDA atac celulele T H , acest virus inactiveaz rspunsul imun. Cnd o celul T H se divide, clona rezultat conine celule T supresoare (T S ) i celule T cu memorie (T M ). Cnd s-a format un numr corespunztor de celule Ts, rspunsul imun nceteaz. Celulele T S sunt cele mai puin cunoscute. Se cunoate c ele sunt capabile s deprime att funcia celulelor T C , ct i a celulelor T H . Se consider c acest rol de deprimare servete la reglarea activitii celorlalte celule, ceea ce evit reaciile imune excesive, care ar putea provoca distrugeri n organism (boli autoimune). Celulele T M se formeaz i au rol similar celulelor B cu memorie. Celulele T M secret limfokine i stimuleaz macrofagele i celulele B ori de cte ori acelai antigen ptrunde n corp. Expunerea ulterioar la acelai antigen determin eliberarea de celule T activate ntr-un ritm mult mai rapid dect cu ocazia rspunsului primar. Celulele NK Celulele NK sunt o subpopulaie de limfocite T cu nsuiri aparte fa de populaiile limfocitare T descrise anterior. Numite iniial celule nule datorit absenei markerilor limfocitari T sau B tradiionali de pe suprafaa lor (formarea de rozete cu eritrocite de oaie i imunoglobulinele superficiale, respectiv), sistematizarea acestor celule a fost permis graie anticorpilor monoclonali. Vizualizare optic n SEM de ctre D. Micu i N. Manolescu (1980), celulele NK au rol n rspunsul imunitar nnscut. Aceste celule prezint activitate citotoxic mpotriva celulelor infectate cu virusuri i mpotriva celulelor tumorale, dei ele nu recunosc aceste celule prin intermediul unui stimul antigenic specific. n plus, ele secret citokine cum ar fi factorul de necroz tumoral i interferonul , fapt ce permite stimularea a diferite mecanisme de aprare limfocitar. La porc, celulele NK reprezint 9 19% din totalul limfocitelor circulante, n timp ce la alte specii, procentele variaz ntre 10 i 30. Celulele NK au morfologie variabil cu specia. La porc, celulele NK sunt de dimensiuni mici sau medii, fr granulaii citosolice. La obolan i la om, celulele NK sunt limfocite mari, cu granulaii citosolice. Aceste celule apar ntr-un procent mai mare la animalele tinere i diminueaz cu vrsta.
9

De exemplu, interleukina care stimuleaz celulele B s secrete anticorpi este numit interleukina-4.