2.2.

Canale ionice
Canalele ionice regleaz fluxul ionilor prin membran la toate celulele vii. Acestea sunt proteine membranare integrale sau mai precis un ansamblu format din cteva proteine. Astfel de ansambluri proteice cu multe subuniti implic de regul un aranjament circular a mai multor proteine identice sau omoloage mpachetate foarte aproape una de alta, formnd un por prin bistratul lipidic al membranei. Subunitatea (subunitile) care formeaz porul reprezint subunitatea (subunitile) , n timp ce subunitile auxiliare sunt notate cu , , .a.m.d. n timp ce unele canale permit trecerea ionilor doar pe baza sarcinii lor electrice, majoritatea canalelor sunt reprezentate de pori cu o deschidere egal n dimensiune cu diametrul a 1-2 atomi n punctul cel mai ngust. Acetia permit trecerea doar a unui tip de ion, cum ar fi Na+ sau K+, transportndu-l prin membran cu o vitez similar celei cu care acesta se mic liber ntr -o soluie (milioane de ioni pe secund). n unele canale ionice, trecerea prin por este facilitat de o poart, care poate fi deschis sau nchis de un semnal chimic sau electric, de temperatur, presiune etc. Ca rol biologic, canalele voltaj dependente, sunt foarte importante n cadrul sistemului nervos, unde au rol n generarea i transmiterea impulsului nervos i unde se gsesc n numr foarte mare. n consecin, multe toxine ofensive sau defensive, ntlnite la o gam larg de specii de animale (veninul erpilor, scorpionilor, pianjenilor etc.) acioneaz prin blocarea acestor canale. n plus, canalele ionice figureaz ca facilitnd o mare varietate de procese biologice ce presupun schimbri n celul, cum ar fi: contracia muchiului neted, cardiac i scheletic, transportul epitelial al nutrienilor i al ionilor, n activarea celulelor T (limfocite) sau eliminarea insulinei de ctre celulele beta din pancreas .a.m.d. n cutarea unor noi medicamente, inta principal o au aceste canale ionice. Canalele ionice sunt clasificate dup natura factorului implicat n deschiderea/nchiderea porii, dup tipul ionilor pe care i transport, sau dup numrul de pori. Canalele ionice clasificate dup factorul implicat n deschiderea sau nchiderea porii: (vezi i fiierul prezentare_05.pdf) 2.2.1. Canale ionice voltaj dependente (voltage-gated) 2.2.1.1. Canale de Na+ voltaj dependente. Acest tip cuprinde nou subtipuri i sunt rspunztoare de generarea i propagarea potenialului de aciune. Canalul este format dintr-o subunitate de dimensiune foarte mare (aprox. 4000 aminoacizi) asociat cu alte proteine drept subuniti . Subunitatea este alctuit din patru domenii omoloage (I-IV), fiecare domeniu fiind alctuit la rndul lui din 6 segmente (S1S6) transmembranare, deci n total de 24 de segmente transmembranare. La acestea se mai coasambleaz o serie de subuniti care traverseaz membrana. Att subunitile ct i sunt puternic glicozilate (adiia zaharidelor la proteine i lipide).

Sit de legare a neurotoxinei TTX capabil s inactiveze funcionalitatea canalului Filtru pentru selectivitatea ionului Senzorul de voltaj al domeniului IV

D IV DI

EXTRACELULAR

D IV D III

D III D II Subunitatea a canalului de Na voltaj-dependent vzut din exteriorul membranei celulare. Prin culori diferite sunt reprezentate cele 4 domenii, fiecare fiind constituit din 6 segmente transmembranare. Segmentul colorat cu negru din cadrul fiecrui domeniu este senzorul de voltaj.
+

INTRACELULAR

Poart de inactivare

Seciune transversal prin subunitatea a canalului de + Na voltaj-dependent. Prin culorile rou i verde sunt evideniate domeniile III respectiv IV. Cu negru este evideniat segmentul cu rol de senzor de voltaj.

EXTRACELULAR Subunitatea 1 constituit din 4 domenii transmembranare omoloage reprezentate prin culori diferite (rou, verde, albastru i galben) Subunitatea

Subunitatea 2

Punte disulfidic

Subunitatea INTRACELULAR Canalul de Ca

2+

voltaj-dependent.

2.2.1.2. Canale de Ca2+ voltaj dependente. Acest tip cuprinde zece subtipuri. Canalele de Ca2+ sunt alctuite din 4 tipuri de subuniti: 1, 2-, i (vezi fig. alturat). Subunitatea 1 conine i filtrul canalului ionic avnd proprieti de poart. n cadrul acestei subuniti sunt 4 domenii omoloage coninnd 6 helixuri transmembranare. Patru dintre aceste ase helixuri formeaz un senzor electric (de voltaj). Subunitatea este format din proteine hidrofile care nu sunt glicozilate i de aceea este situat n mediul intracelular i este rspunztoare de traficul efectuat prin subunitatea 1. Subunitatea este o glicoprotein cu patru segmente transmembranare situat pe partea lateral subunitii 1. Subunitatea 2 este o protein extra celular, nalt glicozilat, ataat subunitii prin puni disulfidice. n timp ce unitatea 2 are rol structural, subunitatea moduleaz activarea sau inactivarea voltaj-dependent a canalului. Canalele de Ca2+ voltaj-dependente joac un rol important att n corelarea depolarizrii celulei musculare cu contracia ct i n corelarea excitrii celulei nervoase cu eliberarea neurotransmitorului.

2.2.1.3. Canale de K+ voltaj dependente. Aceste canale sunt eseniale n structura membranelor excitabile. Ele joac un rol deosebit n timpul desfurrii potenialului de aciune, mai ales n scopul restabilirii potenialului de repaus. Canalele de K+ reprezint o familie compus din 12 subfamilii ce reunesc 40 de variante. Canalele de K+ voltaj-dependente sunt structuri tetramerice cu subunitatea constituit din 4 domenii cu cte 6 segmente transmembranare. Cele 6 segmente ce compun domeniul sunt omoloage unui

Subunitatea

domeniu ntlnit la canalele de Na+. Corespunztor canalelor de Na+, canalele de K+ se asambleaz sub form tetrameric, formnd un canal ionic funcional. (6TM-1P). 2.2.1.4. Canale de protoni (H+) voltaj dependente. Aceste canale se deschid n timpul depolarizrii, ns depind foarte mult de pH (pHsenzitive). n consecin, aceste canale se deschid doar atunci cnd gradientul electrochimic este orientat ctre exterior, adic deschiderea lor va permite protonilor (H+) doar s prseasc celula. Funcia lor este s opreasc instaurarea unei mediu acid n celul. O alt funcie foarte important apare n cazul fagocitelor (euzinofile, neutrofile, macrofage). Cnd o bacterie este nglobat de ctre fagocit, NADPH-oxidaza (nicotinamid adenin dinucleotid phosfat oxidaza) genereaz superoxizi prin transferul de electroni de la NADPH n interiorul celulei i i cupleaz cu oxigenul molecular formnd superoxid (O2-) care este un radical liber extrem de reactiv i care distruge bacteria. NADPH-oxidaza este electrogen, transportnd electroni prin membran, iar canalele protonice (H+) se deschid pentru a permite contrabalansarea sarcinilor negative prin fluxul de protoni (H+).

2.2.2. Canale ionice ligand-dependente (ligand gated) Aceste canale se activeaz sau inactiveaz n prezena unui ligand58. Canalele ionice ligand-dependente sunt cunoscute i sub numele de receptori ionotropi. Acetia se nchid sau se deschid ca rspuns la unirea cu un mesager chimic. Aceti receptori sunt foarte selectivi pentru mai muli ioni (Na+, K+, Ca2+ sau Cl-). Astfel de receptori sunt localizai la nivelul sinapselor, transformnd direct semnalul chimic presinaptic, reprezentat de eliminarea neurotransmitorului, ntr-un semnal electric postsinaptic. Canalul are, de regul, o structur tetrameric sau pentameric, fiecare subunitate avnd n structur un domeniu extracelular la care se leag ligandul i un domeniu transmembranar format dintr-un numr variabil de helixuri n funcie de tip.

58

Un ligand poate fi un atom/ion sau molecul care n general doneaz unul sau mai muli electroni prin intermediul unei legturi covalente coordinative sau pune n comun electroni printr-o legtur covalent unuia sau mai multor atomi/ioni centrali.

Reprezentare schematic, general, a poriunii transmembranare a unui canal ionic neurotransmitor-dependent. (n acest caz ligandul este reprezentat de un neurotransmitor)

2.2.2.1. Receptori pentru acetilcolin59 (nicotinici, muscarinici). Acetia sunt reprezentai de proteine membranare integrale care rspund la unirea cu neurotransmitorul acetilcolina (Ach). 2.2.2.2. Receptori pentru glutamat. Acetia sunt localizai n membrana neuronal. Glutamatul este cel mai rspndit neurotransmitor din corp. El fiind prezent n peste 50% din esutul nervos. Receptorul primar pentru glutamat este senzitiv la NMDA (N-metil-D-aspartat) care acioneaz direct asupra porului central. 2.2.2.3. Receptori P2X ATP-dependeni (ATP-gated) Receptorii P2X sunt o familie permeabil pentru diveri cationi. Aceti receptori se deschid ca rspuns la legarea ATP extracelular. Acetia fac parte dintr-o familie mai mare a receptorilor purinergici implicai, probabil, n apoptoz i secreia de citochine60. 2.2.2.4. Receptori GABA Acetia reprezint o clas de receptori care rspund la neurotransmitorul GABA (acid gamma-amino-butiric), inhibitor principal n sistemul nervos central al vertebratelor. 2.2.3. Canale ionice dependente de ali factori. 2.2.3.1. Canale ionice dependente de lumin. n aceast categorie intr canalele pentru rodopsin care se deschid sub aciunea luminii. Exist dou tipuri de astfel de canale, ambele permind trecerea protonilor (H+). 2.2.3.2. Canale nucleotid-ciclic-dependente. Aceste canale sunt activate de ctre un ligand chimic care este, n acest caz particular, reprezentat de o nucleotid ciclic intracelular, cAMP sau cGMP, i sunt permeabile cationilor monovaleni (Na+, K+), foarte rar celor bivaleni (Ca2+). Aceste canale au zone ncrcate negativ sau pozitiv care rspund la modificri aprute la nivelul potenialului de membran. Ca nalele nucleotid-ciclic-dependente joac un rol important n funcionalitatea diverselor sisteme, cum ar fi, sistemul olfactiv sau sistemul vizual. n cadrul analizatorului vizual, canalele cGMP-dependente au fost identificate la nivelul membranei externe a celulelor fotoreceptoare de la nivelul retinei. Ca rspuns la un nivel ridicat de cGMP, canalele sunt deschise i permit cationilor s ptrund n celul, cauznd o depolarizare (-40mv, dark current). Dac, n acest stadiu de ntuneric, un foton lovete fotoreceptorul, n celul se produce o reacie n lan care are ca rezultat scderea concentraiei de cGMP cauznd o hiperpolarizare. Astfel, aceste celule sunt mai mult active dect inactive. Etapele prin care se genereaz informaia vizual sunt urmtoarele:
59 60

Acetilcolina este un neurotransmitor prezent att n sistemul nervos periferic ct i n sistemul nervos central. Termen generic pentru molecule semnal utilizate n comunicarea celular, ex. hormoni i neurotransmitori.

- rodopsina i iodopsina de pe partea exterioar a membranei absorb un foton schimbnd astfel conformaia cofactorului retinal de la conformaia cis la trans. - stadiul 1 de amplificare fiecare astfel de modificare are ca rezultat o serie de intermediari instabili, ultimul legndu-se de o protein G n membran care activeaz transducina (o protein din interiorul celulei). n acest stadiu fiecare rodopsin foto-activat determin, la rndul ei, activarea a aproximativ 100 de transducine. Fiecare molecul de transducin activeaz ulterior o molecul de fosfodiesteraz. - stadiul 2 de amplificare o singur molecul de fosfodiesteraz este capabil s hidrolizeze aproximativ 1000 de molecule de cGMP. ntruct concentraia de cGMP scade, canalele nucleotid-ciclic-dependente se nchid. Ca urmare a acestui fapt Na+ nu mai poate ptrunde n celul i fotoreceptorul se hiperpolarizeaz (ncrcarea electric de pe faa intern a membranei devine tot mai negativ). Hiperpolarizarea ncetinete mult eliberarea glutamatului (neurotransmitor capabil s excite sau s inhibe celulele bipolare postsinaptice). Astfel reducerea glutamatului se va traduce n celule bipolare hiperpolarizate i celule bipolare depolarizate, n funcie de natura receptorilor (ionotropi sau metabotropi) prezeni n terminalul postsinaptic. Astfel, un fotoreceptor elimin mult mai puin neurotransmitor cnd este stimulat de lumin. Acest mecanism particular are dou avantaje: - n primul rnd, fotoreceptorii cu bastonae sau cu conuri sunt depolarizai la ntuneric, ceea ce nseamn c muli ioni de Na+ ptrund n celul. Astfel, deschiderea sau nchiderea ntmpltoare a canalelor de Na+ nu va afecta potenialul membranei. Numai nchiderea unui numr extrem de mare de canale datorat absorbiei unui foton va modifica potenialul i va semnaliza prezena luminii. Prin urmare sistemul este imun la zgomot. - n al doilea rnd, amplificarea foarte puternic n dou etape creeaz o sensibilitate deosebit, prin faptul c un singur foton va afecta potenialul membranar i va fi perceput de creier ca stimul luminos. Prin aceast caracteristic se difereniaz celulele cu bastonae de cele cu conuri. Cele cu bastonae sunt foarte sensibile, ele fiind utile n vederea pe timp de noapte. Cele cu conuri au o cinetic a reaciilor chimice foarte mare, n ceea ce privete rata de amplificare. 2.2.3.3. Canale de K+ redresoare (inward61 rectifier potassium channels)(2TM-1P) Aceste canale sunt reunite sunt aceast denumire ntruct ele permit trecerea mai multor sarcini pozitive K+ nspre interiorul celulei dect nspre exteriorul celulei. Din punct de vedere funcional au n componen o subunitate format din 4 domenii, fiecare domeniu avnd n componen 2 segmente transmembranare care formeaz i porul. 2.2.3.4. Canale de K+ cu doi pori identici (twin-pore domain K+ channels (4TM-2P)) Ele sunt alctuite dintr-o subunitate care are n componen 4 domenii transmembranare, fiecare domeniu fiind constituit din 2x2 segmente transmembranare, care formeaz 2 pori identici. Canalele de K+, att cele redresoare ct i cele cu 2 pori identici, au fost identificate n foarte multe tipuri de celule (macrofage, celulele muchiului cardiac, leucocite, neuroni i celulele endoteliale). Pentru detalii suplimentare putei consulta cartea Ion channels and disease, Channelopathies, disponibil n format .pdf; fiecare capitol dedicat unei anumite categorii de canale are un mic subcapitol legat de structur, unde este prezentat schematic structura.

61

Termenul de inward se refer la caracteristica de a permite sarcinilor pozitive s treac mult mai uor n direcia intern (nspre interiorul celulei). Prin convenie inward current este considerat negativ n timp ce outward current (sarcinile pozitive se mic spre exteriorul celulei) este considerat pozitiv.