Oxidarea biologic Lanul respirator Fosforilarea oxidativ

OBIECTIVELE

Oxidarea biologic. Dehidrogenarea substratelor - sursa energetic pentru sinteza ATP - ului. Enziniele dehidrogenni. Lanul respirator (schema). Complexele enzimatice. Acceptorii principali de electroni i protoni, structura lor chimic. Potenialul de oxido-reducere a componentelor lanului respirator. Fosforilarea oxidativ. Locurile de fosforilare. Produsele finale ale oxidrii. Reglarea intensitii funcionrii lanului respirator. Coeficientul P/O, controlul respirator. Decuplarea produselor de oxidare i fosforilare, principalii ageni decuplani. Rolul biologic al produsului de decuplare, respiraia liber. Mitocondriile, structura i permeabilitatea selectiv a membranelor pentru diferii cumpui.. Sistemele-navet de transport al echivalenilor de reducere. Ipotezele principale, care explic procesele fosforilrii oxidative. Ipoteza lui Mitchell. Oxidarea microzomal, rolul citocromului P450 n reaciile de oxido-reducere. Vitaminele i rolul lor n procesele de oxidare biologic. Noiune de radicali liberi. Oxidarea peroxidic a acizilor grai nesaturai din membrane. Sistemele de protecie a celulei de acumilarea radicalilor liberi.

Oxidarea biologic. Dehidrogenarea substratelor. Enzimele dehidrogenrii.

Oxidarea biologic (OB) reprezint totalitatea reaciilor de oxido-reducere ce decurg n celule i esuturi. Rolul: asigur organismul cu energie accesibil n form de ATP. OB are loc prin reacii de dehidrogenare donarea atomilor de H2 sub form de protoni i electroni: H22H +2 . Are loc sub aciunea enzimelor dehidrogenaze, ale cror Co sunt NAD+ i FAD

SUBSTRATELE NAD
Izocitrat +NAD alfa-cetoglutarat +NADH+H E- izocitratDH 2. Alfa-cetoglutarat +NAD succinil Coa +NADH+H E-alfacetoglutaratDH 3.Malat +NAD OA+NADH+H E-malatDH 4.Lactat +NAD Piruvat +NADH+H E-lactatDH 5. Gliceraldehidfosfat +NAD +H3PO41,3 difosfoglicerat +NADH+H E- GAP DH 6. Hidroxiacil CoA +NAD cetoacil Co-A +NADH+H E-hidroxiacil -CoA DH
1.

SUBSTRATELE FAD dependente

Succinat +FAD Fumarat +FADH2 E- succinat DH Acil CoA + FAD enoil-CoA+FADH2 E- acil CoA DH NADH+H+ i FADH2 rezultai n reaciile de oxidare a acestor substrate transfer p i n lanul respirator.

Lanul respirator (LR). Rolul. Structura.

1.

2.

LR - un ansamblu (complex) de enzime i sisteme de oxido-reducere, ce particip la transferul H+ i de la Co reduse (NADH, FADH2) la O2 cu formarea H2O. Este ultima etap a degradrii aerobe. Este localizat n membrana intern a MC Funcia LR: Prin transferul protonilor i electronilor Co se reoxideaz, putnd asigura dehidrogenri n continuare. Cnd Co se reoxideaz, se elibereaz energie ce servete la sinteza ATP.

Componentele LR
1. NADH+H sau FADH2 2. Flavoproteinele FP: preiau p i e- de la NADH+H sau FADH2 FPN (NADH DH) - ca Co FMN - preia H2 de la NADH+H FPs (succinatDH)- ca Co FAD- preia H2 de la FADH2 3. CoQ-ubichinona pn la CoQ sunt transportai att p ct i e4. Sistemul de citocromi: b, c1, c, a i a3
1. 2.

Sunt compui heteroproteici,a cror grupare prostetic este hemul Transport doar e Fe+++ + e- Fe++ 1 citocrom transport doar 1e- - 2 e- sunt transportai de 2 citocromi

5. Fe-S proteinele sunt localizate : a. ntre FP i CoQ b. ntre cit b i citc1

Schema LR

Structura componentelor LR

O CH3O CH 3 CH 3 CH3O O (CH 2 CH C CH 2)nH

coenzyme Q

2 e + 2 H+
OH CH3O CH 3 CH 3 CH3O OH (CH 2 CH C CH 2)nH

coenzyme QH2

CH3 CH3 HC S CH2 protein

N H3C N

CH3 Fe N CH3 N CH S CH2 protein

OOC

CH2 CH2

CH2 CH2 COO

CH3

Heme c

Potenialul de O/R

Transferul p i de la NADH sau FADH2 pn la O2 se face prin intermediul mai multor sisteme redox. Fiecare sistem redox (O/R) este alctuit dintr-un donor i acceptor de echivaleni reductori. Fiecare sistem redox din LR posed un potenial de oxido-reducere (potenial redox), care se msoar n voli. Potenialul redox standard E0 mrime egal cu fora electromotoare exprimat n voli, ce apare n semiconductor, n care donorul de e- i acceptorul acioneaz n concentraie de 1,0 mol, la t =25 *c, i pH 7,0 formnd un echilibru cu elecrodul ce adiioneaz e- de la donor i-i transfer la acceptor.

Cu ct potenialul redox este mai electronegativ cu att este mai nalt capacitatea de a ceda , i invers, cu ct potenialul este mai electropozitiv, cu att este mai nalt capacitatea sistemului de a adiiona electroni. Sistemele redox sunt aranjate n ordinea creterii potenialului de oxido-reducere.

transferul n trepte permite eliberarea energiei n pachete a crei valoare este n jurul lui 7,3 kcal/mol (ct necesit sinteza unui mol de ATP din ADP i H3PO4). Torentul de e orientat n direcia micorrii energiei libere a sistemului Cu ct e mai mare diferena potenialului dintre 2 redox perechi cu att mai mare e diminuarea energiei libere la transferul . tiind potenialul redox al fiecrei perechi se pot calcula modificarea energiei libere standard. G = -nFE n-numrul de F-constanta lui Faraday (23062 cal/Vmol) E0-diferena de potenial G = -223062[+0,82-(-0,32)] = -52,6 kcal 7,3 x 3 = 21,9 cal Randamentul utilizrii energiei libere 42%

FOSFORILAREA OXIDATIV

reprezint sinteza ATP din ADP i Pi (cuplat cu LR), pe seama energiei eliberate la transferul echivalenilor reductori n LR de la coenzimele reduse la O2. Deoarece transferul de are loc treptat, energia se elibereaz n pachete n trepte . Pentru a se forma ATP diferena de potenial trebuie s fie nu mai mic de 0,22V. Funcionarea cuplat a LR i FO este asigurat de 5 complexe

Composition of Respiratory Chain Complexes

Complex denumirea No. of Proteins Gruprile prostetice

Complexul I

NADH Dehidrogenaza
Succinat-CoQ Reductaza CoQ-cit c Reductaza Citochrom Oxidaza

46

FMN, Fe-S
FAD, cit b560, Fe-S cit b562, cit b566, Fe-S, cit c1, cit a, cit a3, Cu

Complexul II Complexul III Complexul IV

11

13

Complexul I- NADH CoQ reductaz

Cderea de potenail 0,42V G0 = -19,4 kcal/mol - 1mol ATP, restul se degaj sub form de cldur Inhibat: rotenon(otrav pentru peti), Na amital (barbiturat); pericidin (antibiotic)

Complexul II- succinat - CoQ-reductaza

Variaia de potenial este de 0,07V; G0 = -3,2 kcal/mol nu se sintetizeaz ATP Inhibat malonat (inhibiie competitiv)

Complexul III- CoQ- citocrom c reductaza

Variaia de potenial este de 0,21V; G0 = -7,75 kcal se sintetizeaz 1mol de ATP. Inhibat antimicina A

Complexul IV- citocromoxidaz

Catalizeaz adiia a 4 la O2 molecular (a 2 la O). O2 + 4 + 4H+ 2H2O Cderea de potenial de 0,54V. G = -24,8 kcal se sintetizeaz 1mol de ATP Inhibat: CO, ozide, cianide.

Complexul V ATP-sintetaz

1.

2.

a.
b. c.

alctuit din: F0 strbate membrana intern a MC, const din 4 tipuri de protein ce formeaz un sistem de pori transmembranari prin care trec protonii- canal de protoni F1- partea catalitic - factor de cuplare 1: se afl n intregime n matrixul mitocondrial (form de sfer). e alctuit din cinci tipuri de proteine (3), (3), , , . la acest nivel are loc reacia de condensare a ADP + Pi ATP+H2O Inhibat: oligomicin, atractilatul (glicozid)

Mitochondrial ATP Synthase E. coli ATP Synthase These images depicting models of ATP Synthase subunit structure were provided by John Walker. Some equivalent subunits from different organisms have different names.

Toate componentele LR sunt dispuse n membrana intern a mitocondriilor. CoQ i cit c funcioneaz individual, iar celelalte componente se grupeaz n complexe.

1. 2.

3.

Locusurile unde are loc sinteza ATP se numesc puncte de fosforilare. n LR (lanul respirator) deosebim 3 puncte de fosforilare: NADH+H----CoQ Cit b----citc cita--cita3

Lanul respirator
OAA Suc Fum MDH 2H+ 2H+ + NADH + 2H matrix NAD FAD FADH2
CI membrana intern NADHDH C II SDH C III Cyt bc1

Mal

2H+ O2 H2O
C IV Cyt c ox

H+

3H+ ATP

ATPase

2e-

QH2 cyt cox cyt cred 2H+ 2H+ 2H+ H+ ATP 3H+

2H+
spaiul intermembranar

2H+

10H+ims/4H+m = 2.5H+ per ATP

Bilanul general n procesele LR-FO.

NADH + H+ + O2 + 3ADP + 3Pi NAD+ + 3ATP + 4H2O FADH + H+ + O2 + 2ADP + 2Pi FAD + 2ATP + 3H2O Raportul ntre numrul de moli de ATP produi i O2 consumat este numit ct de fosforilare P/O. De la NADH+H pn la O2 - P/O = 3/1 ramura lung, De la FADH2 pn la O2 - P/O = 2/1 ramura medie. P/O reflect cuplarea transportului H+ i (respiraia) i fosforilarea (sinteza ATP). Coeficient indic ce cantitate de P anorganic (H3PO4) se transform n P organic (ATP) la transportul unei perechi de H+ i n LR.

Ipoteze principale cu privire la procesele de FO. Ipoteza lui Mitchell

Prin ce mecanism energia eliberat n LR este cuplat cu formarea ATP? Teoria chimic, numit i a intermediatorilor comuni (produi intermediatori macroergici, precursori de ATP). Teoria conformaional (energia este preluat de o protein ntr-o conformaie activ, ce stimuleaz ATP). Teoria chemiosmotic (Mitchell, 1961).

Ipoteza lui Mitchell

Ce postuleaz c starea intermediar energetic care determin sinteza ATP din ADP+Pi e reprezentat de gradientul de protoni, ce se stabilete ntre faa interioar i cea exterioar a membranei interne a MC n timpul transferului de electroni. la transferul unei perechi de (energia eliberat) pompeaz 3 perechi de H2+ din interiorul MC spre exterior(spaiu intermembranar). Astfel partea extern a membranei interne a MC pozitiv, dar cea intern negativ apare gradient de c%/ potenialul transmembranar

Gradientul protonilor are 2 componente : 1. Electric (potenial de membran - 2 de pH ( pH)gradientul H+ Protonii revin din spaiu intermembranar n mitocondrii prin partea F0 (deoarece restul membranei este impermiabil). Acest flux de protoni este fora morice care determin la nivelul subunitii F1 sinteza de ATP din ADP+Pi Unul din postulatele teoriei chemiosmotice prevede c apa rezultat n reacia de formare a ATP din ADP i Pi se ionizeaz spontan, ionii H+fiind dirijati spre interiorul mitocondriei (ei urmnd s creeze gradientul protonic) n timp ce ionii OH- snt dirijati spre spapul intermembranar

Datele experimentale ce confirm:

S-a confirmat generarea gradientului de protoni n cele 3 puncte ale LR. Anume gradientul de protoni se utilizeaz la sinteza ATP. S-a demonstrat ca pH matrixului mitocondrial crete, iar cel al mediului extern al membranei MC scade (acid). S-a argumentat c transferul H+ din MC n timpul transportului de i revenirii lor prin ATP-sintetaza sunt comparabile cu viteza lor din cadrul FO n MC intacte.

Transportul mitocondrial al ATP i ADP

ATP/ADP-translocazeiasigur transferul ADP din citozol n MC n schimbul ATP din MCcitozol. Fosfattranslocaza transfer Pi n MC, nsoit de deplasarea ionilor de H2.

ADP + Pi ATP ATP4 __ ++

matrix lower [H+]

3 H+

ATP4 ADP3 H2PO4 H+

higher [H+] cytosol

energy requiring reactions

ADP + Pi

Controlul respirator

1. 2. 3.

Organismele vii sintetizeaz ATP n raport cu necesititatea lui de aceea FO cuplat cu LR este riguros controlat. Deoarece LR i FO etapa final a degradrii G, L, P controlul respirator se poate efectua att prin compui direct implicai n LR i FO, ct i prin intermediatorii degradrii celor 3 clase. Rolul primordial i revine ADP. F1 din ATP - sintetaz rmne blocat n lips de ADP. Intensitatea transferului de protoni prin F0 deasemenea e determinat de nivelul ADP. ADP reglator alosteric (+) pentru mai multe E ce sunt implicate n degradarea G, L i P.

Controlul respirator

Controlul respiraiei se nfptuiete prin intermediul acceptorului - ADP. Lipsa de ADP - inhib respiraia i stopeaz fosforilarea. La adugarea de ADP crete brusc consumul de 02 ---- se activeaza lantul respirator i ADP se fosforileaz la ATP.

Decuplarea produselor de oxidare i fosforilare, principalii ageni decuplani.

1.

2.

La FO contribue: Integritatea membranei interne a MC orice leziune duce la perderea capacitii de FO (n timp ce transferul de poate continua). Impermeabilitatea membranei interne pentru ionii H+ OHK+ Cl-. FO poate fi decuplat cu ajutorul unor substane chimice, ce inhib sinteza ATP dar neafectnd decuplani ageni decuplani. La aciunea lor respiraia crete, iar FO este inhibat. protonofori ionoforele

AD

Protonoforii mresc permeabilitatea membranei pentru protoni(H+), lichidnd potenialul transmembranar. 1. a.g. liberi 2. 2,4 dinitrofenol 3. salicilaii (antiinflamatoare) 4. dicumarol (anticoagulant) 5. T3 i T4 (h.gl.tiroide) Ionoforele ei leag i transfer ionii prin membran: - valinomicina ( K+) , nigericina ( K+), gramicidina A Na+, K+; H+.

Decuplanii
2,4Dinitrophenol
OH

H+

NO2

NO2

H+

O NO2

+ H+

H+

NO2

Inhibitorii ai fosforilrii acioneaz asupra ATPsintetazei. Oligomicina blocheaz ptrunderea H+ prin FO (nchide canalul) cu ncetul slbete respiraia ntrerupere.

Inhibitorii Fosorilrii de ADP

Oligomycin
Atractyloside

Fosforilarea oxidativ este influenat de o serie de ageni clasai n 3 grupe : - agenti de decuplare- permit transportul electronilordar blocheaz fosforilarea. Ex.2,4 dinitrofenolul faciliteaz trecerea prin membran a H+ - inhibitorii fosforilrii oxidative Ex Oligomicina mpedic i transportul i fosforilarea oxidativ. - Ionoforii - formeaz complexe liposolubile cu cationi specifici trecndui prin membran.

Respiraia liber

are loc decuplarea FO de LR i toat energia este convertit n cldur, care nu se utilizeaz la executarea funciilor celulare. Astfel MC devin o sob, ce produc cldur. E necesar n situaii, cnd necesitatea cldurii este mai mare dect ATP. n esutul adipos brun MC sunt specializate la producerea cldurii (nou-nscui, animale n hibernare) termogenina.

Oxidarea microsomal

Un alt tip de reacii de OB este cel oxigenazic. Acestea sunt catalizate de monooxigenaze. Lanurile monooxigenazice de oxidare sunt lanuri scurte de transport al H+ i a cror surs sunt NADPH+H SH + O2 +NADPH + H+ S-OH + H2O + NADP+ reducerea O2 i incorporarea lui n anumii compui chimici (include un atom de O, cellalt este redus la H2O). un asemenea lan este microsomial - localizat n RE al celulelor hepatice i suprarenale. Rol esenial l are cit P450 (activatorul O2). El cuprinde o FP (FAD) la nivelul creia H2 este disproporionat n H+ i .

Rolul OM

Rolul: plastic i dezintoxicare. n ficat hidroxilarea medicamentelor, neutralizarea toxinelor, hormonilor (sunt eliminai). n medulosuprarenale sinteza noradrenalinei i adrenalinei. n corticosuprarenale sinteza colesterolului, hormonilor gluco- i mineralocorticoizi.

Noiune de radicali liberi. Oxidarea peroxidic a AG nesaturai. Sistemul de protecie.

La reducerea incomplet a O2 se formeaz forme reactogene i agresive ale substanei cum ar fi: superoxidanionul, peroxid; hidroxil sau peroxidul de hidrogen.

Aceti produi iniiaz OPL, ce se petrece n lan cu generarea de peroxizi a AG nesaturai. n condiii fiziologice ORL i OPL sunt implicate n rennoirea membranelor biologice, degradarea substanelor fagocitare; biosinteza icosanoizilor. Amplificarea lor poate condiiona moartea celulei (lezarea membranelor). SAO sistem de protecie AO (enzimatic, neenzimatic) SOD transformarea O2- n H2O2 2 O2- +2H+ O2- + H2O2 Catalaza 2H2O2 2H2O + O2 Glutation reductaza glutationperoxidaza

Oh my! Now what?

Alcohol Metabolism
Peroxisome H2O2

EtOH
Cytosol O2 NADPH NADP+ ER NAD+

CAT
H2O
Aminotriazole

MEOS P450

ADH
NADH

Pyrazole

Acetaldehyde
NAD+ Mitochondrion

AlDH
NADH
Disulfiram (antabuse) Chlorpropamide (diabetes)

Acetate Extra-hepatic tissue

Eric Niederhoffer