Microbiologie-comunicari stiintifice Stefanescu Theodora

1.1 Introducere

Comparativ cu plantele i animalele, microorganismele se caracterizeaz printr-o vitez mult mai mare de sintez a proteinei i printr-un coninut proteic mai ridicat. De asemeni, sunt mult mai puin pretenioase n ceea ce privete nutrienii necesari creterii dect animalele. De exemplu, microorganismele accept surse de azot anorganice, pe cnd n cazul animalelor drept nutrieni pot fi folosite substane cu azot legat organic. Acelai raionament este valabil i pentru sursa de carbon. Dac inem seama de independena producerii proteinelor microbiene, de condiiile pedo-climatice i sezoniere rezult c acest domeniu i va pstra actualitatea i n viitor. Organizaia Mondial a Sntii, recomand folosirea concentratelor proteinicovitaminice obinute cu tulpini de drojdii n condiii strict controlate, ca cea mai eficient surs de vitaminizare a alimentelor pentru copii. Aceeai biomas uscat este folosit ca adaos n concentrate de supe, budinci sau n compoziiile din care se prepar pastele finoase. De exemplu, n ultimul caz biomasa adugat confer pastelor un gust mai bun i o culoare mai plcut dect concentratele din soia. O direcie nou de utilizare a biomasei obinut prin cultivarea drojdiilor este n terapeutic, sub form de medicament-aliment, destinat prevenirii i tratamentului unor afeciuni cu inciden crescut.(Dumitru .a.,2002) Procedeele de obinere a proteinelor de biosintez, bazate pe cultivarea bacteriilor, drojdiilor, ciupercilor unicelulare sau algelor trebuie s asigur costuri comparabile cu cele ale proteinelor obinute din sursele actuale. Economicitatea procesului de biosintez a proteinelor monocelulare este determinat n mare parte de natura substratului care servete drept surs de carbon i energie n procesul de fermentaie. Costurile substratului nu trebuie s depeasc 1/3 din costurile produsului, iar sursa de substrat trebuie s fie accesibil cantitativ, calitativ i economic.(Oniscu,1978) Producerea de protein microbian este cunoscut n literatura de specialitate sub termenul de "SINGLE-CELL-PROTEIN", termen care arat c proteina microbian respectiv provine n general de la microorganisme unicelulare.

1.2 Proteine obinute din biomas

Proteinele sunt indispensabile desfaurarii normale a metabolismului organismelor vii. n natur proteinele nu se gsesc n stare pur, ci rspndite n diferite produse naturale sau industriale folosite n hrana omului. Proteinele au rol plastic n dezvoltarea i regenerarea organismului animal. Pot avea rol energetic atunci cnd surplusul se transform n energie caloric. Pe lng faptul c reprezint componenta de baz a protoplasmei, unele proteine sunt catalizatori metabolici (enzimele) iar altele intr n alctuirea unor substane biologic active importante n desfurarea proceselor metabolice. Proteinele obinute prin biosintez se separ sub forma unei biomase furajere din care se purific i se separ proteina pur de culoare galben, far gust i miros. Se folosete sub form de fin n hrana animalelor.(Oniscu,1978) Proteinele sunt constituite din 20 de aminoacizi, legai n secvene specifice. Sunt macromolecule care transmit informaia i multiplele posibiliti de combinare a aminoacizilor determin varietatea molecular, diversitatea i specificitatea funcional a proteinelor. Numrul de aminoacizi din lanul unei molecule proteice cu masa molecular 50.000 e de aproximativ 400. Dac fiecare din cele 400 de poziii poate fi ocupat de unul din cei 20 de aminoacizi sunt posibile 20400 combinaii. Din acest motiv n regnul animal exist aproximativ 5 milioane de molecule proteice diferite, neidentificabile cu nici una din sutele de mii de molecule proteice existente n regnul vegetal. (Neniescu,1980) Din cei 20 de aminoacizi cunoscuti 8 sunt considerati eseniali, ntruct nu pot fi sintetizai n organismul omului si trebuie adui zilnic cu alimentele. Acetia sunt valina, lizina, leucina, izoleucina, metionina, triptofanul, treonina, fenilalanina. Pentru copiii sub 1 an histidina este aminoacid esenial. Ceilali au fost numii neeseniali ntruct pot fi sintetizai n organism din alte substante. Pentru sinteza proteinelor organismului este nevoie de aminoacizi eseniali i neeseniali n anumite proporii. 1.2.1 Valoarea nutritiv a proteinelor Organismele vii, datorit permanentelor transformri de mas i energie ce au loc n timpul vieii, sunt strns legate de mediul ambiant, prin necesitatea ncorporrii unor substane pe baza crora i desfoar procesele vitale. Numai prin continua asimilare a Page 2 of 25

unor substane din mediul extern se dezvolt i se ntreine structura foarte complex a materiei vii. Aceast necesitate de ncorporare de substane eseniale constituie funcia alimentaiei. Valoarea nutritiv se refer la coninutul n protein al celulei microbiene i la coninutul de aminoacizi eseniali al acestei proteine. Dup cum se observ din tabelul 2, proteina microbian este bogat n lizin, dar mai sczut n aminoacizi cu sulf, comparativ cu proteina din alte surse(fin de soia, fin de pete), sau cu proteina de referin F.A.O. Proteinele alimentare, reiesind din valoarea lor biochimica, se mpart n 3 categorii: I - proteinele din ou, carne, lapte, peste. Ele contin toti aminoacizii esentiali n proportii optime pentru sinteza proteinelor organismului, mentin echilibrul proteic n organism; II - proteinele din legume uscate, cereale. Acestea contin toti aminoacizii esentiali, dar nu n proportii suficiente pentru sinteza proteinelor omului; III - gelatina din oase, tendoane, cartilagii, zeina din porumb. n structura proteinelor porumbului lipsesc mai multi aminoacizi, si cei prezentati sunt n raporturi dezechilibrate si au valoarea biologica scazuta. Valoarea lor biologica poate fi marita prin asocierea cu proteine de calitate superioara. De exemplu: mamaliga cu lapte sau brnza. Lipsa proteinelor n alimentatie duce la stari de denutritie cronica, diferite boli (hepatoza, pelagra s.a.), istovirea celulelor nervoase, retinerea cresterii la copii, micsorarea sintezei hormonilor suprarenalelor, hipofizei, tiroidei, pancreasului, glandelor sexuale, micsorarea masei corpului, anemie, leucopenie, polihipovitaminoza, dereglari ale metabolismului mineral (osteoporoza); pielea devine uscata, unghiile - fragile, cade parul. Este daunator pentru organism si surplusul de proteine. Excesul lor n ratia alimentara se soldeaza cu suprancarcarea organismului cu produsele metabolismului proteic, cu intensificarea proceselor de putrefactie n intestine, cu suprancarcarea ficatului si rinichilor. Tabelul 2 Coninutul n aminoacizi eseniali al proteinelor din bacterii i drojdii, comparativ cu alte proteine.(Stancu, Segal,1975) Aminoacidul Cistin Fenilalanin Izoleucin Proteina F.A.O 2.0 2.8 4.2 Fin de soia 1.4 5.1 5.4 Fin de pete 1.0 4.0 4.6 Proteina din Proteina din drojdii 3.7 3.6 bacterii 0.6 2.9 3.6

Page 3 of 25

Leucin Lizin Metionin Treonin Triptofan Valin

4.8 4.2 2.8 2.8 1.4 4.2

7.7 6.5 1.4 4.0 1.5 5.0

7.3 7.0 2.6 4.2 1.2 5.2

5.9 7.0 1.2 3.9 0.5 4.0

5.6 6.5 2.0 4.0 0.9 4.5

Alimentatia rationala recomanda ingerarea n 24 ore a 1 g de proteine la 1 kg de greutate corporala. Asadar, o persoana cu masa corpului de 70 kg are nevoie zilnic de 70 g de proteine. Aportul minim de proteine nu trebuie totusi sa fie mai mic de 40 g zilnic. O cantitate de proteine sub acest indice are drept consecinta faptul ca organismul si consuma proteinele tesuturilor. n unele situatii organismul necesita cantitati crescute de proteine. n perioada de crestere, copiii au nevoie de 2 g la kg, femeile n perioada sarcinii - de l,5g/kg/corp, iar cnd alapteaza - de 2g/kg/ corp. Valoarea energetica a proteinelor trebuie sa constituie 10-15 % din totalul de calorii pe care l contine ratia alimentara. n lume nu sunt conceptii unice despre normele fiziologice ale organismului n proteine. Pentru un barbat cu masa corpului de 70 kg n vrsta de 18-40 ani ce nu depune efort fizic greu si locuieste n tara cu clima moderata necesitatea n proteine variaza ntre 55 g (Canada), 87 g (Rusia) si 120 g (Bulgaria). Aceste varietati se afla n functie de calitatea si valoarea biologica a produselor consumate.

Page 4 of 25

1.2.2 Surse de proteine Sursele de proteine se pot clasifica n funcie de origine i n funcie de modul cum sunt exploatate. Astfel proteinele pot fi de origine animal, vegetal sau microbian. Clasificarea n funcie de modul de exploatare mparte sursele de proteine n: - convenionale Din aceast categorie fac parte carnea i produsele din carne, laptele i produsele lactate, oule i cerealele. - semiconvenionale Sunt surse n curs de exploatare i fac parte seminele de plante oleaginoase i concentratele de pete. - neconvenionale Ca surse neconvenionale de proteine avem microorganime: bacterii, drojdii, mucegaiuri i alge microscopice.(Raicu .a.,1990) Utilizarea proteinelor microbiene pune mai multe probleme, dintre care cele mai importante sunt valoarea nutritiv, toxicitatea, digestibilitatea i acceptarea de ctre consumatori.Uniunea Internaional de Chimie Pur i Aplicat(I.U.P.A.C.) a stabilit c nici o surs nou de proteine nu poate fi admis n hrana animalelor, dect dac se constat absena oricrei toxiciti. Testele toxicologice includ toxicitatea acut(se urmrete timp de ase sptmni pe obolani), toxicitatea subcronic (3 luni) i toxicitatea cronic (2 ani). Digestibilitatea se refer la faptul c peretele celular microbian este nedigerabil i de aceea trebuie degradat pentru a favoriza accesul enzimelor digestive.Pentru a deveni digestibile trebuie degradat peretele celular care este nedigerabil. Proteinele neconvenionale acoper necesarul de furaje, fiind uor acceptate de ctre animale. Pentru a satisface nevoile umane trebuie combinate cu proteinele convenionale, astfel se pstreaz propietile organoleptice ale alimentelor clasice i sunt mai uor de acceptat. n tabelul 3 sunt prezentate comparativ sursele de proteine. Din datele prezentate se poate constata c sursele de proteine semiconvenionale i neconvenionale nu sunt inferioare n ceea ce privete coninutul n proteine, surselor considerate convenionale sau clasice.

Page 5 of 25

Tabelul 3 Compoziia chimic a unor surse de proteine destinate consumului uman, % Hidrai Surse de proteine Carne Lapte Convenionale Ou Pete Cereale Semine Semiconvenionale leguminoase Semine oleaginoase Proteine de biosintez Umiditate Proteine Lipide 63-74 83-87 73-75 64-78 10-12 10-12 5-10 5-7 16-20 3-6 12-14 15-20 8-14 22-25 19-40 45-50 6-20 3-5 11-15 1-17 1-6 2-3 20-50 1-5 de carbon 4-5 65-80 55-57 10-26 Celuloz Cenu 2-5 2-3 3-26 1-1,5 0,7-0,8 1-2 1-3 1-3 3-6 2-5 5-10

Neconvenionale

1.3 Microorganisme productoare de biomas

n natur sunt cunoscute n prezent peste 100000 specii de microorganiisme de tip procariot i eucariot. Dintre acestea, numai cteva sute au fost i sunt utilizate de om pentru producerea de substane utile.(Raicu .a.,1990) n tabelul 4 sunt prezentate principalele grupe de microorganisme utilizate pentru obinerea substanelor utile. Comparativ cu plantele i animalele, microorganismele se caracterizeaz printr-o vitez mult mai mare de sintez a proteinei i printr-un coninut proteic mai ridicat. De asemeni, sunt mult mai puin pretenioase n ceea ce privete nutrienii necesari creterii dect animalele. De exemplu, microorganismele accept surse de azot anorganice, pe cnd n cazul animalelor drept nutrieni pot fi folosite substane cu azot legat organic. Acelai raionament este valabil i pentru sursa de carbon. Dac inem seama de independena producerii proteinelor microbiene, de condiiile pedo-climatice i sezoniere rezult c acest domeniu i va pstra actualitatea i n viitor.

Page 6 of 25

Folosirea microorganismelor la producerea de protein ofer numeroase avantaje i anume: - au un coninut ridicat de protein (30-60%) de bun calitate; - se produc foarte rapid; - cultivarea microorganismelor este controlabil in cele mai stricte condiii, iar controlul calitii produsului este stpnit cu uurin de om; - prin selecie, se pot obine tulpini microbiene cu proprieti adecvate scopului urmrit de om; - microorganismele pot utiliza, ca surs organic de carbon, o gam practic nelimitat de materii prime reziduale de la alte industrii: melase, zer, reziduuri lemnoase, celuloz i stuf, ape de canal, petrol, gaze naturale, metanol. 1.3.1 Drojdiile Drojdiile sunt fr ndoial, cel mai important grup de microorganisme folosite de om de la nceputurile istoriei sale ca fiin social i pn n prezent. Din acest punct de vedere biotehnologia a fost mereu contemporan cu istoria uman, la nceput prin aspectele sale - acum numite tradiionale- de fabricare a pinii sau a vinului, pn n prezent cnd dezvoltarea geneticii i a biologiei moleculare a dus la dezvoltarea biotehnologiilor moderne.(Dumitru .a.,2002) Drojdiile au intrat n preocuprile specialitilor datorit coninutului mare de proteine cu valoare biologic ridicat. Drojdiile au un coninut de protein de 4656%.Proteina drojdiilor are un coninut mare de lizin, dar ceva mai sczut de metionin i triptofan. n afar de proteine, drojdiile sunt bogate n vitamine din grupul B, ergosterol i alte substane biologic active. Sunt utilizate drojdiile din genurile: Candida, Hansenula, Torulopsis, Pichia. Cea mai important din punct de vedere industrial i cea mai des utilizat este Candida utilis. Spre deosebire de bacterii, drojdiile au avantajul unei separri mai uoare din mediu, datorit dimensiunilor celulare mai mari i au un coninut mai redus de acizi nucleici (5-10%) (Faust V.,1983) Organizaia Mondial a Sntii, recomand folosirea concentratelor proteinicovitaminice obinute cu tulpini de drojdii n condiii strict controlate, ca cea mai eficient surs de vitaminizare a alimentelor pentru copii. Aceeai biomas uscat este folosit ca

Page 7 of 25

adaos n concentrate de supe, budinci sau n compoziiile din care se prepar pastele finoase. De exemplu, n ultimul caz biomasa adugat confer pastelor un gust mai bun i o culoare mai plcut dect concentratele din soia. Drojdia uscat se prezint sub form de pulbere, tiei sau sub form de granule. Introdus direct n consum nu a fost agreat de consumatori din cauza gustului. n scopul folosirii n alimentaie s-au realizat extracte, plasmolizate i autolizate de drojdii care au unele avantaje calitative importante. Datorit gustului mbuntit, al digestibilitii ameliorate i a eliminrii compuilor celulozici din membrana celular aceste produse au o acceptabilitate bun. Ele pot nlocui extractul de carne la prepararea supelor i pot fi folosite pentru mbuntirea gustului a o serie de preparate alimentare. n rile n curs de dezvoltare se ncearc nlocuirea crnii, n alimentaia copiilor i adulilor, cu extracte de drojdii sau utilizarea acestora n diferite combinaii de produse. n S.U.A. se folosesc n clinici i grdinie de copii extracte de drojdii, n doze de pn la 40g pe zi. Administrarea zilnic a extractului de drojdie asigur consumatorilor o cretere a capacitii de munc i intensificarea metabolismului bazal. 1.3.2 Bacteriile Bacteriile sunt un grup de microorganisme importante n biotehnologie. Sunt organisme de tip procariot i au fost folosite empiric nc din antichitate. (Raicu, .a.,1990) Celula bacterian are compoziia chimic variabil n funcie de specie, condiii de cultur i de prelucrare. Bacteriile au un coninut mare de protein:47-87% i vitamine din grupul B. Proteina este de bun calitate, avnd un coninut ridicat de lizin i un coninut bun de metionin i triptofan. Proteinele din bacterii sunt uor digerabile datorit rezistenei scazute a pereilor celulari la atacul enzimelor digestive din tractul intestinal. Bacteriile ofer avantajul unei rate de cretere mai rapide i unui coninut mai mare de triptofan i de aminoacizi cu sulf, dar prezint, n schimb, dezavantajul unui coninut mare de acizi nucleici (10-20%), care pot produce perturbri n metabolismul acidului uric n organismul animal, precum i costul ridicat al separrii celulelor de mediu, datorit dimensiunilor celulare mici. (Cooney C.,1980) Cele mai utilizate sunt bacteriile strict aerobe din genurile: Pseudomonas, Micrococcus, Corynebacterium, Klebsiella, Page 8 of 25 Arthrobacter, Brevibacterium,

Mycobacterium, Methylomonas, Methilococcus; bacteriile celulozolitice din genul Cellulomonas; bacteriile albastre-verzi din genurile: Nostoc, Oscillatoria, Spirulina. 1.3.3 Mucegaiurile Mucegaiurile sunt organisme de tip eucariot i formeaz la suprafaa a diverse alimente un esut vizibil cu ochiul liber. Din acest grup fac parte diferite specii folosite la fabricarea unor brnzeturi, buturi alcoolice, antibiotice,enzime, etc. (Raicu, .a., 1990) Cultivarea mucegaiurilor se face n condiii submerse, pe diferite substraturi de zaharide, de obicei pe deeuri alimentare. Rezultate bune s-au obinut i n cazul cultivrii cu hidrocarburi, astfel c se poate considera c producerea mucegaiurilor are aceleai posibiliti ca i cultivarea drojdiilor. Avantajele folosirii mucegaiurilor ca surs de proteine se datoreaz: - structurii filamentoase, care permite o separare uoar de mediu i asigur totodat proprieti fizice specifice, n special de realizare a unor produse structurate, fr a fi necesare eforturi deosebite; - coninutului lor n acizi nucleici mult mai mic dect al bacteriilor i drojdiilor. (Stancu M.,1975) Mucegaiurile conin 20-40% proteine. Ca i n cazul drojdiilor, coninutul n metionin i triptofan este mai sczut; coninutul n lizin i ali aminoacizi eseniali este bun. Ca i bacteriile i drojdiile, mucegaiurile conin, pe lng proteine, vitamine din grupul B. Cele mai folosite sunt din genurile: Rhizopus, Penicillium, Fusarium. (Rehm, Reed, 1986) 1.3.4 Algele Algele sunt o surs important de biomas datorit posibilitii de asimilare a dioxidului de carbon. Obinerea de biomas se realizeaz n bazine deschise sau lacuri naturale. S-a observat capacitatea algelor de a acumula metale grele, ceea ce implic un control riguros al proceselor de producie. Cele mai multe cercetri s-au efectuat pe algele verzi din genul Chlorella i Scenedesmus. Condiiile de cultivare trebuie s asigure concentraii adecvate de substane nutritive, cantitatea optim de CO2, condiii de iluminare, pH i temperatur potrivitei o agitare a mediului pentru uniformizare.

Page 9 of 25

Algele au un coninut proteic de 40-65%. Proteina algelor este mai srac n izoleucin i metionin, dar coninutul celorlali aminoacizi eseniali este bun. Avantajele pe care le prezint algele este determinat de faptul c, fiind microorganisme autotrofe, nu este nevoie de surs organic de carbon, susa se carbon fiind reprezentat de CO2 (Raicu, .a., 1990). Rezultatele practice ale cercetrilor au permis obinerea culturilor de Chlorella n condiii pilot cu fabricarea unei fini de alge, acceptat de consumatorii japonezi. Studiile ulterioare au aprofundat posibilitatea valorificrii n alimentaie a culturilor de Scenedesmus, ca apoi, evidenierea valorii nutritive a algei Spirulina s determine includerea acesteia n sursele poteniale de proteine obinute prin biosintez. O problem ce se pune este coninutul ridicat de acizi nucleici al microalgelor, coninut ce poate ajunge la 4%.

1.4 Materii prime folosite i factori care influeneaz producerea de biomas proteic
1.4.1 Materii prime Materia prim, aleas in funcie de particularitile de cretere ale

microorganismului, trebuie s fie convenabil din punct de vedere economic, adic al disponibilitii i preului de cost. De aceea, majoritatea cercettorilor se ndreapt spre utilizarea materiilor reziduale provenite din diferite industrii, care sunt nu numai avantajoase ca pre de cost, dar rezolv i problema polurii mediului. Aceste materii prime aparin la patru categorii: glucide, produse petroliere, metan, alcooli. 1.4.1.1 Glucide O serie de deeuri glucidice ale diverselor industrii pot servi ca materie prim pentru producerea microbian de biomas. n aceast categorie intr: -melasa i borhotul, deeuri ale fabricilor de zahr, care conin ca surs de carbon zaharoz. Pe acestea se dezvolt n special drojdiile din genul Candida: C. utilis, C. arborea, C. tropicalis i mucegaiurile din genul Fusarium -zerul, deeu al fabricilor de brnzeturi, care conine ca surs de carbon, lactoz. Pe acesta se dezvolt drojdii ca: Kluyveromyces (Saccharomyces) fragilis, Candida pseudotropicalis i mucegaiuri ca: Penicillium roqueforti, rhizopus oligosporus. Page 10 of 25

-apele reziduale ale fabricilor de amidon, care conin amidon. Pe acestea se dezvolt drojdiile (Candida utilis) i mucegaiurile. n cazul drojdiilor, amidonul trebuie hidrolizat n prealabil cu un preparat enzimatic amilolitic; -deeuri celulozice. Folosirea deeurilor celulozice la producerea de protein microbian este de mare importan, deoarece celuloza este disponibil n mare cantitate i la un pre de cost mic; totodat se rezolv n acest mod i problema polurii mediului nconjurtor. Deeurile celulozice sunt de dou categorii: deeuri celulozice ca atare: paie de gru, coceni de porumb, coji de floarea soarelui, rumegu de lemn. Pe acestea se dezvolt fie bacteriile celulozolitice din genul Cellulomonas, fie mucegaiurile ca, de exemplu, Chaetomium celluloliticum; hidrolizate ale diferitelor deeuri celulozice: hidrolizate din stuf, hidrolizate ale deeurilor agricole (coceni de porumb, paie de gru, coji de floarea soarelui), leii sulfitice. Toate acestea conin ca surs de carbon hexoze i pentoze. Cele mai folosite sunt leiile sulfitice, deeu al fabricilor de celuloz. n aceste fabrici exist o etap, n care se ndeprteaz lignina i hemicelulozele ce leag fibrele de celuloz n lemn, prin fierberea bucilor de lemn intr-un lichid acid, constnd din sulfit de calciu sau de sodiu, cu exces de SO2 liber. n timpul fierberii, lignina trece n lignosulfonai solubili, iar hemicelulozele sunt hidrolizate n glucide simple (hexoze i pentoze).Compoziia leiei sulfitice obinute dup ndeprtarea fibrelor de celuloz depinde de tipul de lemn folosit. n cazul arborilor cu lemn moale (Gimnosperme ca: pin, molid), leia sulfitic obinut conine n special manoz, deoarece hemicelulozele respective conin mai ales manan. n cazul arborilor cu lemn tare (Angiosperme ca: plop, fag, mesteacn), leia sulfitic conine n special xiloz, deoarece hemicelulozele respective conin mai ales pentozani, n special xilan. Pe leii sulfitice i alte hidrolizate ale deeurilor celulozice se dezvolt drojdiile din genul Candida: C. utilis, C. tropicalis. (Oura E.,1983) 1.4.1.2.Produse petroliere Petrolul lampant, motorina, ceara de parafin conin hidrocarburi saturate aciclice (n-alcani sau n-parafine), care pot fi folosite de unele microorganisme ca unic surs de carbon i energie. Microorganismele folosesc cu precdere n-alcanii lichizi cu C11 - C19; n-alcanii solizi cu C20 - C40, existeni n ceara de parafin, produs secundar obinut la producerea uleiurilor lubrifiante din petrol, pot fi de asemenea folosii dac sunt dizolvai ntr-un Page 11 of 25

solvent adecvat. Alcanii cu C2 - C10 sunt slab utilizai. Motorina conine predominant nparafine cu C14 - C16, iar petrolul lampant n-parafine cu C11 - C13.Dac se folosesc nparafine pure, ele se separ prin distilare fracionat din produsele petroliere respective. Microorganismele capabile s foloseasc n-alcanii sunt: bacteriile din genurile: Mycobacterium, Corynebacterium, Brevibacterium, Arthrobacter, Pseudomonas, Micrococcus; drojdiile din genurile: Candida (C. lipolytica, C. zeylanoides), Torulopsis (T. famata), Rhodotorula, Pichia, Delaromyces; mucegaiurile din genurile: Mucor , Aspergillus, Fusarium, Penicillium, Cephalosporium. ( Popa L.,1986) 1.4.1.3.Metanul Este un substrat disponibil la un pre de cost foarte sczut n unele regiuni ale globului. Fiind un substrat gazos, metanul ridic probleme la construirea bioreactoarelor, dar prezint n schimb avantajul c nu las n produsul finit reziduuri care s pun probleme sub aspect alimentar, ca n cazul n-parafinelor.(Cooney C.L.,1980) Utilizarea metanului la producerea de protein este limitat la un grup aparte de bacterii, bacteriile metilotrofe. Prin convenie internaional, s-a stabilit ca toate microorganismele capabile s utilizeze compuii cu un singur atom de carbon n afara CO2, adic metanul, metanolul i metilamin, ca unic surs de carbon i energie s poarte denumirea genetic de metilotrofe. n aceast categorie intr bacterii i drojdii (levuri). Bacteriile metilotrofe sunt Gram-negative, bacilare, nesporulate, strict aerobe, pigmentate n roz sau brun, unele formnd capsul, altele acumulnd cantiti mari de polihidroxibutirat. Bacteriile metilotrofe se mpart n dou grupe: -obligat metilotrofe care se dezvolt numai pe metan, metanol i metilamin. Ele aparin la cteva genuri i anume: Methylomonas, Methylosinus, Methylocystis, Methylococcus, Methylobacter, Methylophilus. La microscopul electronic s-a evideniat la aceste bacterii prezena unui sistem membranar intern, bine dezvoltat, derivat din membrana plasmatic i pe care ar fi localizat sistemul enzimatic implicat n oxidarea metanului i metanolului: -facultativ metilotrofe, capabile s utilizeze i alte surse de carbon i energie n afara metanului, metanolului i metilaminei. Sunt mai numeroase dect cele din prima grup i aparin unor genuri comune ca: Pseudomonas, Micrococcus, Bacillus, Corynebacterium, Streptomyces. (Topal N.D.,1978) 1.4.1.4 Alcoolii

Page 12 of 25

Metanolul i etanolul pot fi utilizai de numeroase microorganisme. Metanolul este o materie prim ideal pentru producia de proteine, deoarece este perfect miscibil cu apa; metabolizarea lui necesit un consum mai redus de oxigen dect n cazul hidrocarburilor, nu las reziduuri n celul i poate fi obinut n stare pur la un pre relativ sczut. Aceasta explic de ce, dup 1970, a crescut considerabil interesul pentru metanol ca materie prim n producerea de protein microbian.(Faust V.,1983). Pe metanol se dezvolt bacteriile metilotrofe obligate i facultative care se dezvolr i pe metan i, n plus, levurile metilotrofe. Spre deosebire de bacteriile metilotrofe, levurile metilotrofe sunt toate facultativ metilotrofe. Dintre sursele cu un singur atom de atom, levurile metilotrofe folosesc numai metanolul, nu i metanul, sau metilamina. n plus, n afara metanolului, ele mai pot folosi i alte surse de carbon i energie. Levurile metilotrofe aparin la cinci genuri: Kloeckera, Candida (C. boidinii, C. methanolica), Hansenula (H. Capsulata), Torulopsis (T. glabrata), Pichia (P. pinus). 1.4.3.Aerarea i agitarea Celulele de drojdii sunt facultativ aerobe, iar respiraia puternic aerob este o condiie indispensabil pentru generarea de mas celular. Oxigenul administrat sub form de aer nu servete numai pentru metabolismul de sintezal masei celulare, ci el antreneaz dioxidul de carbon, precum i alte produse volatile i provoac agitarea mediului. (Anghel .a., 1991) Cantitatea de aer i modul distribuirii sale constituie factori critici n eficiena producerii de mas celular. n cazul n care sursa de carbon e reprezentat de hidrocarburi, consumul de oxigen este de trei ori mai mare, dect n cazul glucidelor, care conin ele nsele oxigen (jumtate din greutatea lor). n cazul metanolului consumul de oxigen este intermediar ntre glucide i hidrocarburi. Modul de distribuire a aerului este de asemenea un factor important, dat fiind solubilitatea mic a oxigenului, care n mediul de cultur nu depete 5-6 mg/l. n scopul realizrii unei ct mai bune aerri, s-au construit diferite tipuri de bioreactoare, dintre care cele mai folosite sunt bioreactoarele Vogelbusch, n care dispersia aerului se realizeaz cu diferite tipuri de agitatoare, sau bioreactoarele Lefrancois, care realizeaz o amestecare intim a mediului cu aerul, prin crearea unor cureni n interiorul bioreactorului, care

Page 13 of 25

determin o urcare a lichidului n partea central i o coborre n zonele periferice. (Raicu,1990) Deoarece aerarea este nsoit de agitare, care antreneaz formarea de spum, folosirea substanelor antispumante este obligatorie. Prin adugare de uleiuri vegetale sau alte grsimi se formeaz o pelicul la suprafaa lichidului sau se folosesc antispumani care micoreaz tensiunea superficial cum ar fi: uleiuri siliconice, sulfonai, hidrocarburi parafinice, alcooli superiori, ciclohexan, tricloretilen. onsumul specific de antispumani variaz ntre 0,2 i 1% fa de masa de drojdie umed.(Anghel .a., 1991)

1.5 Tehnologia de producere a biomasei proteice

Tehnologia obinerii biomasei din microorganisme cuprinde urmtoarele operaii: - alegerea mediilor de cultur; - condiionarea i sterilizarea mediului; - multiplicarea biomasei; - separarea biomasei din mediul de cultur; - prelucrarea biomasei n vederea utilizrii n alimentaia alimentar sau uman. Condiionare i sterilizarea mediului de cultur. n scopul dezvoltrii normale i cu maxim eficien a culturii de microorganisme, este necesar s se asigure condiii optime de dezvoltare. Ca urmare, se procedeaz la corectarea substratului folosit, cu substane nutritive deficitare: substane azotoase, diferite sruri minerale, vitamine. Corecia se face n funcie de compoziia chimic a substratului utilizat. n acelai timp se face i corecia pH-ului, prin adugare de acizi, n scopul asigurrii pH-ului optim de dezvoltare al microorganismelor utilizate. Valoarea pH-ului n mute cazuri poate inhiba dezvoltarea unor fermentaii nedorite, avnd o influen selectiv aspra microorganismelor. n cazul produselor cu concentraie ridicat n substan util se face diluarea, produsele cu o cantitate mare de suspensii se limpezesc cu ajutorul separatoarelor centrifugale, iar cele care conin substane nocive pentru dezvoltarea microorganismelor, cazul leiilor bisulfitice, sunt supuse operaiei de eliminare a compuilor nocivi. Sterilizarea mediului, care se poate realiza prin tratare termic sau prin metode chimice, are o influen deosebit asupra randamentului i costului produciei. Sterilizarea termic d cele mai bune rezultate, deoarece nu introduce sau formeaz substane care s Page 14 of 25

afecteze negativ dezvoltarea microorganismelor. Procesul de sterilizare termic este influenat de temperatura i timpul de sterilizare, natura i numrul microorganismelor i de compoziia chimic a mediului. Procesul de sterilizare are loc dup o ecuaie exponenial de forma:
T1 T2 Z

t1 = t 2 10
unde: t1- timpul de sterilizare la temperatura T1; t2- timpul de sterilizare la temperatura T2;

z- timpul n minute necesar pentru parcurgerea unui ciclu logaritmic. Influena numrului de microorganisme este dat de relaia:
1 N t = 2.3 ln 1 k N2

unde: t- timpul necesar pentru sterilizare; N1- numrul de microorganisme la nceputul sterilizrii; N2- numrul de microorganisme care supravieuiesc dup timpul de sterilizare t. n prezent exist tendina de a se realiza sterilizarea mediului n flux continuu, la temperaturi ridicate, timp scurt. Explicaia const n faptul c ridicarea temperaturii n progresie aritmetic determin o reducere a duratei de sterilizare n progresie geometric. Acest fapt are o influen favorabil asupra dimensiunilor aparaturii, productivitii instalaiei i meninerii principiilor nutritive n mediul de cultur. Se consider c temperatura minim necesar pentru a avea o eficien a procesului de sterilizare este de 1050C.(Banu, 1998) Sterilizarea termic implic un consum mare de energie i n consecin cheltuieli importante. Ca urmare, n foarte puine cazuri se sterilizeaz toat cantitatea de mediu destinat multiplicrii microorganismelor. n mod obinuit, sterilizarea termic se aplic numai pentru mediul utilizat la obinerea maielei de nsmnare, mediul industrial fiind protejat mpotriva infeciilor, prin adugarea unor cantiti mici de substane antiseptice, la care sunt adaptate microorganismele respective, i prin crearea unor condiii optime de dezvoltare pentru microorganismul folosit.

Page 15 of 25

Folosirea substanelor chimice pentru protecia procesului mpotriva infeciilor, implic realizarea unor tulpini de microorganisme cu rezisten ridicat fa de substanele respective. Multiplicarea biomasei. Pentru dezvoltarea biomasei de microorganisme se pot folosi sisteme discontinue i continue. Tendina actual este de a se renuna la sistemele discontinue, cu productivitate redus i cu eficien economic mic. Deoarece eficiena procesului de obinere a biomasei este dependent de aceast faz, s-au desfurat cercetri ample, n vederea realizrii unor fermentatoare cu randament ct mai ridicat. Problemele care se pun n acest caz sunt urmtoarele: - realizarea unei aerri ct mai intensive i uniforme a mediului, pentru a asigura necesarul de oxigen; - realizarea unui sistem eficient de prevenire a formrii spumei; - valorificarea optim a capacitii fermentatorului; - asigurarea unui consum redus de energie raportat pe unitatea de produs finit obinut; - automatizarea complet a procesului de fermentare. n prezent exist mai multe tipuri de fermentatoare care trebuie alese n funcie de materia prim folosit i de microorganismul utilizat. Principalele eforturi ale constructorilor de fermentatoare au fost orientate n direcia asigurrii unei ct mai bune aerri a mediului, deoarece productivitatea este n funcie de cantitatea de oxigen dizolvat. Solubilitatea oxigenului este foarte mic in mediile de cultur, nedepind 5-6 mg/l. Solubilitatea oxigenului este n funcie de natura mediului de cultur, de nlimea stratului de lichid i n special, de sistemul de distribuire al aerului. n scopul realizrii unei ct mai bune aerri s-au construit diferite tipuri de fermentatoare cu dispozitive diferite de aerare. Cele mai folosite sunt fermentatoarele n care dispersia aerului se realizeaz cu diferite tipuri de agitatoare, ca n cazul instalaiilor Vogelbusch. Fermentatoarele sunt dotate cu dispozitive de automatizare care asigur controlul pH-ului, temperaturii, nivelului, reglarea aerrii i densitatea de celule. Automatizarea, n afar de faptul c permite un control riguros al procesului, mrete eficiena lui, deoarece aerarea se face n funcie de concentraia i faza n care se gsesc microorganismele. (Viesturs .a.,1991)

Page 16 of 25

Separarea biomasei de mediul de cultur. Pentru separarea biomasei i pentru splarea concentratului de biomas obinut, se folosesc separatoare centrifugale speciale cu o turaie cuprins ntre 4500-5000rot/min. Separatoarele moderne sunt prevzute cu dispozitive de reglare a concentraiei biomasei evacuate. Pentru fiecare tip de produs i substrat este necesar s se aleag separatorul adecvat. Separatoarele nu realizeaz n prima etap o ndeprtare complet a mediului de cultur, care este reinut n produs n proporie de 15-20 %. Ca urmare, pentru o eliminare complet i pentru realizarea unui produs cu caliti alimentare este absolut necesar s se fac splarea cu ap, n mai multe etape, urmat de separarea centrifugal. Pentru separarea biomasei se pot realiza i filtre rotative sub vid care pot asigura un coninut de substan uscat de 25 - 20 % n produsul finit. Prelucrarea biomasei. S-a constatat c proteinele de natur biologic, n special proteinele din drojdii sunt greu asimilate de ctre organismul animal i uman, datorit rezistenei opuse de ctre pereii celulari, astfel c numai n mic msur coninutul celular este utilizat de ctre organismul care l consum. Ca urmare s-au ncercat diverse procedee pentru ruperea pereilor celulari: procedee mecanice, termice, plasmoliza, hidroliza enzimatic sau acid etc. Dintre procedeele menionate, cele mai bune rezultate a dat plasmoliza celulelor prin tratament termic. S-a constatat c digestibilitatea biomasei proteice i accesibilitatea aminoacizilor este funcie de organismul pentru care se utilizeaz biomasa. Cnd este destinat organismelor al cror tub digestiv nu este bine dezvoltat sau este atrofiat, datorit unor cauze diferite, biomasa va trebui s fie nclzit puternic pentru a reduce efortul digestiv. Ca urmare, este necesar o plasmoliz la temperatur ridicat (800C), urmat de uscarea pe valuri. Dac este utilizat de organisme n bun stare fiziologic, tratamentul termic va fi moderat, pentru ca drojdiile s-i pstreze eficacitatea proteic maxim. n mod obinuit se face plasmoliza la 640C, urmat de uscare prin pulverizare. Pentru conservarea biomasei se folosete n mod frecvent metoda de uscare pe valuri sau prin pulverizare. Ultima metod este net superioar, prin faptul c asigur obinerea unor produse cu valoare biologic ridicat, dar implic instalaii costisitoare i consumuri mari de energie. Pentru a se asigura conservabilitatea produsului, umiditatea biomasei se reduce, prin uscare, la 7-8 %. Problema uscrii biomasei este dificil, deoarece apa este legat de Page 17 of 25

substane puternic hidrofile, iar pereii celulari mpiedic procesele de difuziune. Aplicarea unui proces de plasmoliz nainte de uscare, asigur obinerea unor randamente superioare la toate metodele de uscare. Tehnologia obinerii biomasei proteice din drojdii Drojdiile ocup un loc unic n lunga istorie a omenirii. Nici un alt grup de microorganisme nu a fost mai intim asociat cu progresul i bunstarea omenirii ca drojdiile. Din punct de vedere economic, drojdiile sunt nc cele mai importante microorganisme exploatate pe glob. n decursul evoluiei sale, omul a avut de a face cu aciunea detrimental a diferitelor microorganisme patogene, drojdia fiind probabil primul microorganism utilizat n scop beneficial. Pinea, vinul, berea, ampania, numeroase produse alimentare i ndeosebi buturi, sunt rezultatul fermentaiei realizate de aceast categorie de ageni microbieni originali: drojdiile sau levurile. Primele referiri care atest utilizarea drojdiilor pentru producerea prin fermentaie a berii (numit buga) n Egipt dateaz din anul 6000 .e.n. n urmtoarele cteva milenii fabricarea berii i a vinului, pe de o parte, i coacerea pinii din aluat dospit, pe de alt parte, s-au dezvoltat probabil n paralel. Din Egipt tehnologiile de fabricare a berii i a pinii au fost preluate n Grecia i de acolo n Roma Antic i Imperiul Roman. Meniuni documentare din secolul XII i XIV atest larga rspndire a procesului de preparare a berii n mnstirile din nordul Europei. Exist de asemenea informaii privind utilizarea buturilor spirtoase n China (anul1000 .e.n.) i obinerea de whisky n Irlanda (secolul XII).Se presupune c procesul de fabricare a spirtului a fost adus n Europa din rile Orientului Mijlociu, nsui termenul de alcool fiind de origine arab. Drojdiile reprezint un grup taxonomic complex i heterogen de microorganime monocelulare de tip eucariot, care se nmulesc prin nmugurire (mitoz), ca form general de reproducere i, n mod particular, prin ascospori formai pe cale asexuat i sexuat (n urma proceselor de conjugare ntre celule). Drojdiile au o compoziie chimic valoroas i dup cultivare n condiii de aerare i prelucrare sunt utilizate ca surs de proteine n alimentaia uman sau n alimentaia animalelor. n microbiologia industrial, din biomas de drojdie se obin: plasmolizate, autolizate, folosite ca aditivi alimentari sau pentru mbogirea n substane azotate a mediilor de Page 18 of 25

cultur destinate fermentaiilor. Cu ajutorul drojdiilor se pot obine avantajos, n condiii industriale, vitamine hidrosolubile (B1, B2, PP, ergosterol), enzime (-fructofuranozidaza i -galactozidaza), iar prin metode de inginerie genetic, din mutani ai speciei Saccharomyces cerevisiae, s-a obinut interferonul- substan cu efect antiviral i citostatic. Drojdiile au o larg rspndire n mediul ambiant, fiind ntlnite n toate habitatele naturale: sol, ape, aer, plante, animale. n sol, celulele de drojdie se ntlnesc n straturile superficiale, pn la adncimi de aproximativ 30 cm, n concentraii de 102-2*105 g-1. Cantitatea crete n solurile viilor i grdinilor, ca urmare a mbogirii solului n substane nutritive furnizate de fructele care cad la sol i sufer lent putrezirea. Din sol, prin aciunea unor factori fizici, mecanici i biologici, microorganismele ajung temporar n aer i se rspndesc la distane mari; din sol i aer drojdiile pot ajunge n ape, unele specii fiind ntlnite chiar la adncimi de 4000 m. n mod permanent, drojdiile se afl n microbiota epifit a plantelor (flori, fructe, frunze, rdcini); rspndirea drojdiilor este favorizat de insecte, care ,o dat cu nectarul / sucul, preiau i celule de drojdii care pot hiberna n tractul digestiv al insectelor. n organismul animal, drojdiile sunt prezente n biocenoza intestinal i se elimin pe ci naturale prin produsele de dejecie; n cantiti mai reduse se ntlnesc n cavitatea bucal i pe piele. Un grup restrns de drojdii sunt patogene (Candida albicans, Cryptococcus neoformans) i dau mbolnviri la om i animale. O proprietate important a unor drojdii cu importan n industria alimentar este aceea de a fermenta n condiii de anaerobioz, glucide (hexoze, diglucide, triglucide) cu formare de alcool etilic, dioxid de carbon i produse secundare care dau aroma caracteristic produselor fermentate. n condiiile de aerobioz, drojdiile asimileaz glucidele transformndu-le prin respiraie n dioxid de carbon i ap, iar energia eliberat favorizeaz creterea i nmulirea celulelor. n raport cu temperatura, majoritatea drojdiilor industriale sunt mezofile (temperatura optim 28-320C); exist i drojdii adaptate care sunt active la temperaturi de refrigerare (drojdii de vin) sau drojdii termofile active la 35-380C (din genul Candida). Drojdiile se dezvolt bine ntr-un domeniu larg de pH, cu valori limit ntre 2.5 i 8.5 i un pH optim la 5.5. Celulele de drojdie, ca i alte celule, reacioneaz activ la presiunea osmotic dat de concentraia substanelor dizolvate n mediul n care se afl suspendate. Dac mediul este hipotonic, cu o concentraie a substanelor dizolvate mai mic dect Page 19 of 25

concentraia intracelular, apa va ptrunde n celula care i mrete volumul i, dac se prelungete aceast stare de turgescen, celula sufer deteriorri fizice ireversibile. n mediul hipertonic, cnd concentraia mediului este superioar concentraiei intracelulare, apa din celul difuzeaz n exterior pentru a asigura izotonia, iar celula trece n starea de plasmoliz. n condiii naturale, se pot ntlni, ocazional (temporar), celule de drojdii n diferite stri: fiziologic activ, n care celulele cresc i se nmulesc; de anabioz, determinat de reducerea cantitii de ap liber din interiorul celulei, n care celula se menine n via, n schimb activitatea enzimatic este redus la minimum; de autoliz cnd, n condiii nefavorabile, are loc o solubilizare a compuilor sub aciunea enzimelor proprii (n special proteaze), care conduce la moartea fiziologic a celulei. Dintre toate microorganismele, drojdiile au fost cele mai studiate n vederea obinerii de biomas, respectiv protein, deoarece lipsa lor de toxicitate pentru organismul uman i animal a fost deja verificat i confirmat n timp. Folosirea drojdiilor ca surs de proteine presupune dou aspecte: -obinerea de drojdie furajer pentru nutriia animalelor; -obinerea de drojdie alimentar pentru nutriia omului. Condiiile tehnologice de fabricare sunt similare; difer materia prim utilizat i tratamentul final al produsului, drojdia alimentar fiind un produs mai rafinat dect drojdia furajer. n ceea ce privete materia prim, drojdia alimentar se obine pe melas sau pe zer. La baza procedeului producerii de biomas de ctre drojdii st fenomenul cunoscut sub numele de efect Pasteur, adic inhibarea fermentaiei prin respiraie. Pentru aceasta drojdia se cultiv n condiii de aerare intens, concentraia de zahr din mediu fiind meninut la un nivel sczut, pentru evitarea formrii de alcool, n favoarea producerii de biomas. Prima dat s-a aplicat acest principiu la producerea drojdiei comprimate cu S cerevisiae i acelai principiu st i n prezent la baza procedeelor folosite n fabricile de drojdie furajer i alimentar, care folosesc glucide ca surs de carbon. Tehnologia obinerii drojdiei pe produse petroliere s-a dezvoltat n dou direcii: cultivarea drojdiilor pe petrolul brut, conform procedeului de la Lavera, care realizeaz n acelai timp deparafinarea petrolului i dezvoltarea drojdiilor pe n-parafine purificate, dup procedeul laboratorului Grangemouth (Scoia).

Page 20 of 25

Primul procedeu prezint avantajul eliminrii operaiilor de separare a n-parafinelor care implic o instalaie complex i costisitoare, realiznd concomitent o purificare a petrolului. Dezavantajul metodei const n faptul c n produsul finit pot trece cantiti nsemnate de hidrocarburi aromatice, care sunt toxice pentru animale. Ca urmare, se impune un procedeu complex de purificare a drojdiei prin extracie cu diferii solveni, fapt care reduce din avantajele menionate. Procedeul de cultivare pe n-parafine permite, n condiiile actuale de dezvoltare tehnic, reducerea coninutului de substane aromatice la 0.05%, ceea ce nu reprezint nici un pericol pentru organism. Ca urmare, aceast metod este preferat primei, datorit evitrii riscurilor de toxicitate, majoritatea instalaiilor industriale avnd la baz acest procedeu. Industrial se folosesc n-parafinele cu C14-C22, dar se pot utiliza i parafinele solide, dup dizolvarea lor ntr-un solvent adecvat. Principalele etape de obinere a concentratului de proteine-vitamine, reprezentat de drojdia furajer i alimentar, sunt urmtoarele: Pregtirea inoculului: se pleac de la o cultur pur de drojdie (Candida utilis sau alt specie de Candida) obinut pe mal-agar, sau pe geloz glucozat cu adaos de extract de drojdie. Producerea biomasei de drojdie care cuprinde trei faze: faza iniial, n care drojdia

trece din starea latent n starea de nmugurire; faza acumulrii biomasei de drojdie, n care, creterea biomasei, se realizeaz prin apariia continu de generaii noi de celule, care se nmulesc prin nmugurire; faza final n care are loc maturarea celulelor de drojdie. Separarea biomasei de mediul de cultur care se face prin centrifugri i splri repetate. Purificarea care este absolut obligatorie, n cazul obinerii concentratului proteic de

levuri pe n-parafine din petrol, n scopul eliminrii hidrocarburilor reziduale, care dau gust neplcut i sunt toxice, precum i al degresrii, tot n vederea ameliorrii gustului. Lipidele i hidrocarburile reziduale se elimin prin splare cu solveni ca: etanol, eter, izopropanoll, butanol, hexan, sau amestecuri ale acestora. Prelucrarea biomasei care presupune dou operaii: plasmoliza i uscarea. Plasmoliza este necesar pentru ruperea pereilor celulari, care opun rezisten la aciunea acidului clorhidric din sucul gastric i a enzimelor digestive. n mod obinuit se face plasmoliza la 640C, urmat de uscare prin pulverizare. Drojdia furajer i alimentar se prezint ca un praf uscat, glbui-brun, cu gust i miros caracteristic, cu umiditate de 7 - 8%. Conine, n general, 50% proteine, 25 - 35% Page 21 of 25

glucide, 6% acizi nucleici, 6 - 8% substane minerale, 2 - 3% lipide, precum i vitamine din grupul B. Coninutul de acizi nucleici este destul de ridicat totui i, de aceea, pentru reducerea lui, dup ruperea pereilor celulari, se aplic diferite procedee ca: tratare cu amestec de NaCl i acetat de sodiu sau cu amestec de metanol sau etanol i HCl; tratare cu aminiac apos; tratament termic combinat cu RNA-az pancreatic. Utilizarea drojdiilor n elucidarea proceselor fundamentale biochimice, metabolice i genetice ale celulei vii reprezint o contribuie major a drojdiilor la progresul omenirii. Drojdiile sunt utilizate ca model pentru studiul mecanismelor de reglare a exprimrii genelor n celula eucariot. Drojdiile prezint numeroase avantaje pentru cercetrile de inginerie genetic. Fa de trecut, cnd drojdiile s-au impus n industriile tradiionale (alimentar i fabricarea buturilor), n prezent ele au devenit chiar mai importante pentru omenire, fiind adoptate n biotehnologia modern ca instrumente de manipulare a genelor. Comparativ cu bacteria Escherichia coli, timp de mai muli ani vedeta tehnicilor de inginerie genetic, drojdiile prezint avantaje care au determinat utilizarea lor preferenial n asemenea tehnici, pentru obinerea unor preparate farmaceutice, vaccinuri noi, preparate utilizate n industria alimentar. Pentru biotehnologii, drojdiile sunt n primul rnd organisme care mbin n mod fericit proprieti ale bacteriilor (viteza de cretere i multiplicare, simplitatea exigenelor nutritive) cu proprietile organismelor superioare. Rezult un avantaj considerabil: manipularea lor cu aceeai uurin sau chiar mai mare dect a bacteriilor i furnizarea de informaii aplicabile celulelor eucariote. Se preconizeaz n viitor realizarea unor stocuri de tulpini de drojdii cu caractere stabile, bine definite i a unor bnci de gene pentru clonare, necesare n scopul cultivrii drojdiilor pentru producerea de enzime, hormoni, diferite produse farmaceutice, obinute prin extracii laborioase din materiale de origine vegetal i animal. Creterea spectrului de microorganisme disponibile pentru scopuri industriale i de cercetare n laborator se impune ca o necesitate, ori drojdiile sunt de regul mai uor de manipulat i deci de preferat bacteriilor i mucegaiurilor. n general drojdiile se dezvolt n condiii de mediu cu valori de pH mai sczute dect cele optime pentru bacterii i n prezena a numeroase antibiotice. n consecin se practic n mod obinuit meninerea pe scar larg i fr dificulti deosebite a culturilor de drojdii lipsite de microorganisme contaminate. Drojdiile sunt mai uor i mai ieftin de Page 22 of 25

recoltat dect bacteriile, iar procesele tehnologice de producie nu ridic n aceeai msur cu bacteriile probleme de sntate public. Posibilitatea identificrii rapide i corecte a drojdiilor este important pentru industrie i medicin n vederea stabilirii cauzelor exacte ale contaminrii nedorite i, respectiv, ale anumitor boli. De asemenea verificarea unei anumite tulpini n procese industriale sau n laborator. Identificarea tulpinilor este o etap necesar n studiul drojdiilor gsite n medii care prezint interes pentru om (ap, sol, plante, insecte). Dei majoritatea speciilor sunt inofensive, rmn unele care pe diferite ci afecteaz negativ organismele superioare, inclusiv omul.

1.6 Utilizarea biomasei proteice obinut din microorganisme

Biomasa proteic se utilizeaz n principal la furajarea animalelor i n alimentaia omului, nlocuind cu succes proteinele vegetale i animale, putnd fi folosite ca atare, sub form uscat (granule, pudr) sau tratat n prealabil prin plasmoliz pentru mrirea digestibilitii. De asemenea poate fi adugat la diferite produse alimentare pentru a mri valoarea biologic a acestora. De exemplu, un adaos de 3% la fina alb de gru i confer un coninut mrit de tiamin, similar cu cel al finii integrale, redndu-i toate substanele minerale pierdute n tre, la care se adaug ameliorarea proteic. Astfel, biomasa proteic i derivatele acesteia (hidrolizatele sau autolizatele proteice) sunt folosite ca materie prim la fabricarea supelor concentrate, prjiturilor, produselor de panificaie, produselor energizante etc. Datorit coninutului de vitamine, macro- i microelemente, este folosit n scop curativ (ca materie prim n industria farmaceutic), n vederea ameliorrii i chiar vindecrii unor afeciuni digestive, hepatice, inflamatorii etc. S-a constatat c o diet cu pn la 35 g/zi de biomas proteic din drojdie, a condus la mbuntirea semnificativ a strii bolnavilor ce sufereau de arterioscleroz, diabet, obezitate. Echipamentul enzimatic complex al fungilor filamentoi le permite acestora de a consuma substraturi celulozice, motiv pentru care sunt folosii la mbogirea compoziiei nutreului n proteine. (Cote,1983) Avantajele utilizrii biomasei proteice ca hran pentru animale pot fi constatate din urmtoarele date prezentate: un adaos de 8 - 10% de biomas proteic aduce un spor n greutatea animalului 15 - 20% i reduce consumul de nutreuri cu cel puin 10%. Biomasa Page 23 of 25

poate nlocui 20 30% din cantitatea de lapte folosit la hrnirea vieilor, asigurnd n acelai timp un spor zilnic n greutate de 650 - 750 g. Concret, s-a constatat c de 1 kg de biomas proteic poate nlocui 4-6 l de lapte. La animalele de lapte, introducerea biomasei proteice n nutreuri mrete cantitatea de lapte produs i procentul de grsimi din acesta. Cantitatea de lapte a crescut cu 3 - 3.5 l n 24 de ore, iar cantitatea de grsimi cu 0.4 - 0.6 %. O influen favorabil o are adugarea de biomas proteic n hrana psrilor outoare. Un adaos de 5% biomas din drojdie din cantitatea total de nutreuri din raia psrilor mrete cu 20 - 40% producia de ou. Biomasa proteic contribuie de asemenea la mbuntirea gustului crnii, mrete vitalitatea animalelor i scade mortalitatea, n special a puilor, vieilor i purceilor. Cu rezultate bune se utilizeaz biomasa proteic n cresctoriile de pete i n apicultur pentru suplimentarea hranei albinelor. (Anghel,1993).

Page 24 of 25

Page 25 of 25