Sunteți pe pagina 1din 114

ENZIMELE

Natura chimic i rolul biologic al enzimelor. Dovezile naturii proteice a enzimelor. Diferena dintre aciunea enzimelor i catalizatorilor nebiologici. Structura enzimelor. Proenzimele (zimogenii). Noiune despre centrul activ i centrul alosteric al enzimelor. Izoenzimele i rolul lor. Cofactorii enzimelor. Coenzimele i ionii metalici. Funciile de coenzime a vitaminelor i microelementelor. Natura chimic (structura) vitaminelor B1, B2, B6, PP i rolul lor ca coenzime. Mecanismul de aciune al enzimelor. Centrul activ al enzimelor i rolul lui n formarea i transformarea complecilor intermediari dintre enzim i substrat. Rolul modificrilor conformaionale reciproce ale moleculei enzimei i

OBIECTIVELE:

ENZIM de la grecescul EN ZYME- n drojdii

Enzime catalizatori biologici de natur proteic, ce mresc viteza reaciilor chimice E- acioneaz strict ntr-o anumit consecutivitate i cu o anumit specificitate

Enzimologietiina, ce se ocup cu studierea E

Enzimodiagnostica - este determinarea


activittii E, care se pot modifica n diferite patologii cu scop de diagnoz.

Enzimoterapia - este utilizarea E,


extrase i purificate sau sintetizate n laborator, n tratamentul diferitor patologii.

Natura chimic a E

1. 2. 3. 4. 5. 6.

E- sunt proteine i posed toate proprietile fizico-chimice specifice acestor molecule (solubilitate, proprieti osmotice, sarcin electric net, denaturare termic) Dovezile experimentale: Sunt alctuite din AA Prezint macromolecule n ap formeaz sol. coloidale cu propriet. sale specifice Prezint electrolii amfolii Se supun denaturrii Au fost sintetizate n condiii de laborator din AA (ribonucleaza, lizozima)

Asemnrile E cu catalizatorii neorganici


1.

2.

3. 4.

catalizeaz numai reaciile posibile din punct de vedere energetic nu modific echilibrul reaciilor reversibile nu modific direcia reaciei nu se consum n procesul reaciilor.

Deosebirile E de catalizatorii neorganici


1.

2. 3.

4. 5. 6.

Viteza catalizei enzimatice este cu mult mai mare dect a celei nebiologice (1 mg de Fe n componena catalazei poate nlocui o ton de Fe metalic). E posed specificitate nalt. E catalizeaz reaciile chimice n condiii blnde (presiunea obinuit, temperatura 37C, pH aproape neutru). E catalizeaz reaciile fr formarea produselor intermediare randamentul este de 100% Activitatea E, de aici i reaciile enzimatice se regleaz. Viteza reaciilor este direct proporional cu cantitatea E.

Structura enzimelor

Masa molecular a E e de mii de ori mai mare dect masa molecular a substratului (S)

S - substana asupra creia acioneaz E


E acioneaz nu cu toat molecula dar cu un anumit sector denumit centrul

activ (CA) CA - locul care asigur interaciunea E cu


S i transformarea ulterioar a acestuia.

Particularitile CA
1. este o structur

tridimensional unical, format din radicali ai aminoacizilor distanai n catena primar proteic;

2. Posed grupri funcionale

active (-OH, -SH, -NH2, -COOH, etc.)

CENTRUL ACTIV:
3. Are form de adncitur sau cavitate, cptuit cu AA hidrofobi,unde nu-i acces de ap (ex. cnd apa este un reagent al reaciei). CA conine AA polari. 4. Ocup o parte relativ mic din volumul E i majoritatea resturilor de AA n molecula E nu contacteaz cu S 5. S relativ slab se leag cu E 6. CA este alctuit din 2 sectoare: Sectorul de contact (de legare) Sectorul catalitic

Organizarea funcional a enzimelor Centrul alosteric


1. Este centrul reglator 2. Fixeaz modulatorul

alosteric 3. Adiionarea modulatorului modific conformaia enzimei i secundar activitatea ei 4. Modulatorul pozitiv

Reglarea alosteric a activitii enzimatice

Enzime alosterice

Moleculele enzimelor alosterice sunt mai mari, mai complexe i sunt oligomere pare Au cinetica lor viteza reaciilor n dependen de c% S are form sigmoidal, dar nu hiperbolic, cauzat de urmrile interaciunii ntre protomerii ce leag S n mod cooperativ
Sunt 2 tipuri de E alosterice Homotrope - modulatorul i S constituie aceeai substan Acumularea S activeaz v reaciei catalizate de aceast E (ex: alcoolul activeaz alcoolDH, E ce l scindeaz) Heterotrope - modulatorul se deosebete dup structur de S.

1.

2.

Structura enzimelor
Deosebim: 1. E simple alctuite numai din AA 2. E conjugate - formate din: a. partea proteic - apoenzim b. partea neproteic - cofactor. Cofactori molecule (sau ioni) mici, mai stabili la aciune dect apoE (gr prostetic, Co; ioni metalici) Cofactorul strns legat n structura E grupare prostetic (FMN; FAD) Cofactorul slab legat, uor disociabil coenzim (NAD; NADP) n calitate de cofactori apar frecvent cationii unor metale i, foarte rar, unii anioni

Coenzimele (CoE)
1. Sunt parte component a centrului 2. 3. 4.

activ Contribuie la stabilizarea conformaiei enzimei Contribuie la fixarea substratului Particip nemijlocit la actul catalitic

Clasificarea CoE

1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8.

CoE vitaminice

Tiaminice Flavinice Nicotinamidice Piridoxinice Folice Cobamidice Biotinice lipoice

CoE nevitaminice
1. Porfirinele (hemurile de divers natur) 2. Nucleotidele 3. Fosfaii monozaharidelor

Derivaii vitaminei B1 TMP, TDP (TPP)cocarboxilaza, TTP Rolul: 1. Decarboxilarea oxidativ a piruvatului 2. Decarboxilarea oxidativ a cetoglutaratului 3. Reacii de transcetolare

Coenzimele tiaminice

Reacia sumar a decarboxilrii oxidative a piruvatului cu participarea TPP (deriv. Vit. B1)

1. 2. 3.

4.

5. 6. 7.

Derivai ai vitaminei B2 FMN i FAD Rolul: Particip n reaciile de oxido-reducere: Dezaminarea AA Degradarea aldehidelor (aldehidDH) Degradarea purinelor (xantinoxidaza) Ciclul Krebs (succinatDH) Oxidarea AG DOP (dihidrolipoilDH)

Coenzimele flavinice

Reacia de dehidrogenare a succinatului cu participarea FAD derivatul vit. B2

Sunt derivai ai vitaminei PP niacina, niacinamida, B5 se include n structura a 2 Co- NAD i NADP Rolul Particip n reaciile de oxido-reducere (dehidrogenarea S transferul unui hibrid ion (H+ i 2 e). Alt proton rmne n soluie H+

Coenzimele nicotinamidice

Coenzimele nicotinamidice

Reacia de dehidrogenare a malatului cu participarea NAD derivatul vit. PP

Coenzimele piridoxinice

1. 2. 3.

Derivai a vitaminei B6 Co piridoxalfosfat i piridoxaminfosfat Rolul: Transaminarea AA Decarboxilarea AA Transsulfurarea

Reacia de transaminare a aminoacizilor cu participarea PALP i PAMP derivaii vit. B6

Ionii de metale cofactori aiiE Dup modul de legare rolul ionului metalic E
sunt: Metaloenzime care conin n calitate de cofactori ioni de metale, strns legai de apoE Exemple: Citocromi, peroxidaza, catalaza (Fe) Citocromoxidaza (Cu) alcoolDH; carboxipeptidaza (Zn) E metaloactive a cror activitate crete n prezena ionului metalic, care leag metalul slab Metalele sunt fixate de apoenzim prin legturi electrostatice la care particip resturile de AA acizi (Asp, Glu) sau bazici (Arg, Lyz, His)

1. 2. 3.

1. 2. 3. 4.

Ionii metalici ce intr n componena metaloenzimelor ndeplinesc urmtoarele funcii: Stabilizeaz structura E Particip la legarea S Particip nemijlocit la cataliz Fixarea cofactorului la apoE (ex: Zn leag NAD la alcoolDH)

Co pantotenice (B3)- HSCoA


biosinteza AG 2. biosinteza Col 3. sinteza corpilor cetonici 4. Oxidarea AG 5. Ciclul Krebs 6. Sinteza aminolevulinatului 7. DOP 8. DO a alfa cetoglutaratului Transferul grupelor acil
1.

Co biotinice vitamina H

Gluconeogenez (I cale piruvatdecarboxilaza) Sinteza AG (formarea lui malonil CoA) Transformarea propionil-CoA n succinil CoA (oxidarea AG cu numr impar) Intervine n catabolismul Leu

Co cobamidice B12 -ciancobalamina

1. 2.

Vitamin antipernicioas pentru om i factor de cretere pentru microorganisme n ficat sunt 3 compui cobalaminici: meti-; hidroxo- i deoxiadenozil-cobalamin Rolul: Co pentru unele transmetilaze (homocistein metionin) Co pentru anumite mutaze (izomeraze)- metilmalonil Co A----

Co folice sau pteridinice


Bc-acidul folic Forma activ- acidul tetrahidrofolic Rol: transferul gruprilor cu un C: metil (CH3), metilen(-CH2), formil (COH), formimino (CH=NH)

Mecanismul de aciune al E

Pentru decurgerea unei reacii este necesar ca molecula de S i E s contacteze ntre ele, pentru aceasta e necesar de contientizarea unei noiuni ca: Energia de activare este energia necesar tuturor moleculelor unui mol de S, care la o anumit t pot s ating starea de tranziie (corespunztoare apixului barierii energetice ) (KJ/mol; kcal/mol) E - micoreaz energia de activare ale reaciilor chimice. Cu ct mai mult scade energie de activare, cu att mai eficient acioneaz catalizatorul, i cu att mai mult se accelereaz reacia.

Enzymes Lower a Reactions Activation Energy

Etapele aciunii enzimatice


E + S <> ES <> ES* <> EP <> E+P I et. III et. II et. I et. formarea complexului enzimsubstrat (E-S) II et. cataliza transformarea S n produsul reaciei (P) de ctre

Mecanismul de aciune al enzimelor.

1.

Procesul catalizei enzimatice poate fi divizat convenional n trei stadii: Difuzia S spre E i legarea cu CA al E formarea complexului ES. Prima etap de scurt durat depinde de concentraia substratului i de viteza lui de difuzie spre centrul activ al enzimei.

Mecanismul de aciune al E
Transformarea complexului primar ES n unul sau cteva complexe activate - ES*, ES** (este cea mai lent). Are loc dereglarea legturilor S, ruperea lor sau formarea noilor legturi n urma interaciunii grupelor catalitice ale E. 3. Desprirea produselor reaciei de CA al E i difuzia lor n mediul ambiant (complexul EP disociaz n E i P). 2.

Ipoteza lact-cheie (Fischer) i coincidena forat (Koshland)

Modelul clasic (Emil Fischer) consider c potrivirea S cu CA al E este analog cu potrivirea lact-cheie. Acest model presupune o rigiditate a structurii enzimei n zona CA. modelul Koshland, numit centrul activ indus- potrivire indus , presupune c CA nu este rigid, c forma acestuia se modific n momentul legrii S.

Teoria cheie-lact - Fisher

Teoria coincidenei induse Koshland

Conceptul clasic "lactcheie

E+S-- ES- E+P

Conceptul coencidenei inductive coincidena forat (Kochland)

Mecanismul de aciune al E E poate fi lmurit prin La nivel molecular aciunea

1.

2.

3.

4.

urmtoarele efecte: Efectul de orientare a substratelor (CA al E fixeaz S i le orienteaz ntr-un mod convenabil pentru aciunea gr. catalitice) Efectul de deformare a S (dup unirea n CA molecula S se ntinde, se deformeaz favoriznd scindarea ei) Cataliza acido-bazic (n procesul fixrii S n CA asupra lui acioneaz grupele electrofile ale sectorului catalitic, are loc redistribuirea densitii electronice n S i ruperea legturilor din S Cataliza covalent formarea legturilor covalente ntre CA i S, complexul ES e foarte instabil, uor disociaz elibernd P reaciei

Clasificarea actual a enzimelor. Toate E se mpart n ase clase,

clasele n subclase, subclasele n subsubclase, i numrul su de ordin. Ex: LDH - 1.1.1.27 Clasa reprezint tipul de reacie, catalizat de enzime Subclasa precizeaz aciunea E - indic gruparea sau legtura chimic interesat n reacie Subsubclasa precizeaz natura acceptorului care particip la reacii

Denumirea E denumirea S +tipul reaciei catalizate +aza

1. 2.

Clasificarea actual a enzimelor Oxidoreductaze, catalizeaz reaciii de oxido-

3. 4.

5.

6.

reducere; Transferaze, catalizeaz transferuri grupelor funcionale de la un S la altul (metil, amino, acil,); Hidrolaze catalizeaz scindri de legturi covalente cu adiionarea apei ; Liaze, catalizeaz ruperea leg. C-C, C-S i C-N; fr adiionarea apei, adiia la legturi duble i reaciile inverse. Izomeraze, catalizeaz toate tipurile de transformri n cadrul uneia i aceleai molecul ; Ligaze (sintetaze), catalizeaz formarea de legturi ntre carbon i O, S, N, cuplate cu hidroliza legturilor macroergice (utilizarea ATP).

Clasificarea enzimelor.
- catalizeaz reaciii de oxidoreducere; -catalizeaz transferuri grupelor funcionale de la un S la altul (metil, amino, acil,); -catalizeaz scindri de legturi covalente cu adiionarea apei ;
-catalizeaz ruperea leg. C-C, C-S i C-N; fr adiionarea apei, adiia la legturi duble i reaciile inverse.

-catalizeaz toate tipurile de transformri n cadrul uneia i aceleai molecul ;


- catalizeaz formarea de legturi ntre carbon i O, S, N, cuplate cu hidroliza legturilor macroergice (utilizarea ATP).

Izoenzimele- izoE
1. 2. 3. 1. 2. 3. 4. 5.

forme moleculare multiple ale E, ce catalizeaz aceeai reacie chimic, dar difer prin structur, proprieti fizice, chimice i cinetice Diferite forme de izoE se pot gsi: mpreun (LDH din ficat); n esuturi diferite (fosfotaza acid n prostat i hematii); sau n diferite pri ale aceleiai celule (MDH MC i Cit) IzoE difer ntre ele prin: sarcina electric (ce permite separarea lor prin electroforez); V max de cataliz, sensibilitatea fa de modulatorii allos; pH-optim de aciune; termolabilitate, au afinitate diferit fa de S.

Sunt E cu structur cuaternar, alctuite din cel puin 2 protomeri diferii Ex. LDH (lactat piruvat) Prezint un tetramer, alctuit din 2 tipuri de subuniti (H inim; Mmuchi) n diferite raporturi; codificate de gene diferite. HHHH inim; HHHM;HHMM; HMMM; MMMM muchi

1.

2. 1. 2. 3. 4. 5.

Rol: n controlul metabolic ( faciliteaza adaptarea metabolismului in diferite esuturi.) Ex: in miocard predomina H4, inhibata de ctre piruvat deaceea orienteaz oxidarea piruvatului pe cale aeroba. M4 este activat de catre piruvat i orienteaz transformarea piruvatului pe cale anaerob spre lactat. n diagnosticul unelor stri patologice (variaia diferitor forme de izoE) Exemple de izoenzime: creatinkinaza (2 tipuri de monomeri: MMuscle i B brain MDH Aldolaza Fosfataza alcalin Fosfataza acid

Creatinfosfokinaza (CPK)
CPK M2 CPK MB CPK B2 Muchi scheltic Muchi cardiac Creier Miodistrofii Miocardiopa tii Ischemii cerebrale

PROPRIETILE ENZIMELOR

1.

Proprietile generale ale E (termolabilitatea, specificitatea), aciunea pH-ului asupra activitii enzimatice. 2. Activarea i inhibarea enzimelor: a) mecanismele de activare (proteoliza parial, activarea alosteric, autostructurarea cuaternar, fosforilarea i defosforilarea, reactivarea). b) mecanismele de inhibiie (specific i nespecific, reversibil i ireversibil, alosteric i competitiv). 3. Organizarea enzimelor n celul (ansamblurile enzimatice, compartimentalizarea). Reglarea activitii enzimatice n celul importana principiului de retroinhibitie. 4. Deosebirea privind componena enzimatic a organelor i esuturilor. Enzimele organospecifice. Modificarea activitii enzimatice n diferite afeciuni (enzimodiagnosticul). 5. Metodele de obinere i purificare ale enzimelor. Cromatografia de afinitate. 6. Utilizarea enzimelor n practica medical. ntrebuinarea enzimelor imobilizate n medicin. 7. Unitile de activitate ale enzimelor.

Obiectivele:

Factorii care influieniaz activitatea E


Temperatura PH Concentraia S Concentraia E electroliii

Termolabilitatea (t)

E sunt termolabile t optim a E din organism 35 - 40 C odat cu creterea t cu 10C (dac lum punctul de plecare 0 ) - V reaciei enzimatice sporete de 1,5 ori, atingnd max la t 40C. Majorarea de mai departe duce la micorarea activitii enzimatice - denaturarea proteinei. Unele E a microorganismelor termofile sunt active la t de 80C La t joase E se inactiveaz (excepii: catalaza: activitate max la t=0 C)

Termolabilitatea (t)

v reaciei odat cu t

este nterpretat prin prisma "energiei de activare". Pentru fiecare E se poate stabili o t optim la care V atinge valoarea max, mai departe V scade din cauza denaturrii.

Fiecare E are pH optim propriu (manifest activitate max). Majoritatea E celulare au pH-ul optim- 6-8 (7,4) (excepii: hidrolazele acide lizozomale pH= 5; MAO din membrana MC externa pH= 10).

Aciunea pH asupra activitii enzimatice

1. 2. 3. 4.

La E digestive pH optim este cel al sediului lor de aciune: Pepsina pH 1,5 2, Amilaza pancreatic - pH 6,4-7,2, Tripsina - pH 7,8-8,0 Arginaza- pH 9,5-10 etc.

1. 2. 3.

pH optim e dependent de: gradul de ionizare a grupelor funcionale, afinitii E fa de S, stabilitii E.


In CA al E se afl grupri ionizabile, acide sau bazice. Acestea interacioneaz direct cu ionii H+ si OH-, rezultatul fiind creterea sau scderea gradului lor de disociere, acionnd ca adevrai inhibitori ai E (amilaza n sucul gastric). Ionii H+ si OH- au un efect denaturant asupra E - rup legturile, ce determin structura teriar.

Deci mrind sau micornd pH-ul mediului, se poate regla activitatea catalitic a E. Dependena activitii E de variaia pH-ului curb n forma de clopot.

[E]

n condiii standard 2 mol de E ntr-o anumit perioad de timp vor transforma de 2 ori mai multe molecule de S dect 1 mol de E (relaie direct proporional).

Grafic se reprezint sub form de o curb de tip hiperbolic. n perioada iniial a reaciei V crete pe msur ce crete [S]. La un moment dat cnd CA al E se ocup de S V nu mai crete. Ea rmne constant i corespunde V max a reaciei. n cazul E alosterice curba reprezint un aspect sigmoid

[S]

Analiza curbei hiperbolice arat c ea reprezint 3 zone: a. V de reacie crete proporional cu c% S b. Creterea este mai ncet

Aceast curb este numit curba lui Michaelis-Menten i se exprim prin ecuaia: [S] V=Vmax x _________

Km +[S]
unde: V-V reaciei la un moment dat Vmax- viteza max Km-constanta lui Michaelis Menten [S] C% molar a S Km- este acea concentraie de S pentru care v de reacie este jumtate din Vmax. Km reflect afinitatea E pentru S i anume cu ct Km este mai mic cu att afinitatea este mai mare i

Specificitatea
este capacitatea unei enzime de a selecta dintr-un numr mare de S unul particular, -este condiionat de complimentaritatea conformaional i electrostatic ntre CA al E i S.
-

E S4 S2

1 S

Deci fiecare E catalizeaz un anumit tip de reactii sau transformarea unui anumit S.

Specificitatea:

1. Specificitatea de reacie: E-catalizeaz un anumit tip


de reacie ce st la baza clasificrii enzimelor: o hidroliza, o reacie redox, formarea unei legturi, etc.

Specificitatea de substrat a enzimelor


I. Specificitatea absolut de substrat

enzima catalizeaz transformarea doar a unui singur substrat

Specificitatea de substrat a enzimelor II. Specificitatea relativ de substrat enzima catalizeaz transformarea unei grup numeros de substane cu diferit structur chimic n acelai mod Ex. citocromul P450 hidrolizeaz cteva mii de substane

Specificitatea de substrat a enzimelor

specificitate relativa de substrat - asigura transformarea unui grup de substante inrudite chimic i se intlnete n diferite ipostaze:

Specificitatea de substrat a enzimelor


III. Specificitatea absolut de grup E catalizeaz transformarea unui grup de substrate analogice structural (ADH - unui grup de alcooli
monohidroxilici, recunoscind gruparea OH

Specificitatea de substrat a enzimelor


IV. Specificitatea relativ de grup enzima catalizeaz transformarea unei anumite grupe sau legturi chimice din diverse substane chimice Ex. pepsina hidrolizeaz legturile peptidice formate de gruprile carboxilice ale aminoacizilor aromatici Phe, Tir i Trp

Specificitatea relativ de grup

Specificitatea de substrat a enzimelor

- transform mai puine substrate: lipazele digestive specific recunosc pozitia legaturii esterice intre glicerina i acizi grai:

E catalizeaz transformarea numai a unuia din stereoizomerii posibili (D sau L; sau numai a izomerului cissau trans-). Ex: Amilaza scindeaz legturile 14 glucozidice din amidon sau glicogen i nu influeneaz asupra legturilor din celuloz.

V.Specificitate stereochimic

Mecanismele de activare a E Sunt : 1. nespecifice: temperatura , iradierea 2. specifice Se activeaz la: 1. majorarea concentraiei S cnd este insuficient 2. majorarea cantitii E 3. introducerea Co cnd sunt insuficiente 4. Introducerea ionilor metalelor Fe, Cu

Se cunosc urmtoarele tipuri de reglare a activitii enzimatice: 1. Reglare covalent - proteoliza limitata 2. Reglare covalent fosforilare/ defosforilare 3. Autostructurarea cuaternar 4. Alosteric 5. Reactivare
-

Proteoliz limitat
Unele enzime (proteine) se sintetizeaz n forma neactiv de precursor proenzime (zimogeni) Exemplu: 1) enzimele digestiei: pepsinogenul, chimotripsinogenul, tripsinogenul, proelastaza, procarboxipeptidaza - scindeaza proteinele in stomac i duoden. 2) coagularea singelui e determinat de cascada de reacii cu activitate proteolitic; 3) hormonii proteici (insulina); 4) proteinele fibrilare (colagenul).

Mecanismele de activare a proenzimelor este proteoliza limitata - este scindarea unui sector al catenei n rezultat E se restructureaz i se formeaz CA. H+ Pepsinogen ------pepsin -42AA

Importanla biologic a prezenei formelor neactive .


1. Protejaz de proteoliz proteinele celulelor productoare de E. 2. Este o forma de rezerv a E, care rapid pot fi activate i intervin n reacie.

Reglarea covalent (fosforilare-defosforilare)


Activitatea unor E se modific prin fosforilare. Reaciile de fosforilare sunt catalizate de kinaze specifice. E-OH + ATP -------- E-O-P +ADP Defosforilarea are loc sub aciunea fosfotazei specifice E-OP +H2O------- E-OH +H3PO4

unele E sunt active n forma fosforilat, iar altele n forma defosforilat. Ex.: glicogen fosforilaza activ n forma fosforilat; glicogen sintaza este activ n forma defosforilat

Autostructurarea cuaternar

Este caracteristic E ce posed structur cuaternar Fiecare protomer n parte nu posed activitate enzimatic La asamblarea lor se modific conformaia fiecrui protomer i corespunztor se modific i conformaia CA, devenind astfel favorabil pentru fixarea i transformarea S

CA

E E

s AlloM

1.

Inhibiia activitii Deosebim: enzimelor

inhibiie nespecific (T, pH, agenii denaturrii ) 2. inhibiie specific Inhibiia poate fi reversibil i ireversibil. La inhibiiia ireversibil: I covalent se fixeaz de E cu formarea EI nedisociabil. Exemple: Diizopropilfluorfosfatul (toxina neuroparalitica) se fixeaz de OH-serinei n CA a acetilholinesterazei (scindeaz acetilcolina) cu formarea E neactive. n rezultat se menine efectul acetilcolinei n permanen ce duce la paralici muscular i moarte. - ionii metalelor grele (Hg, Pb) inhib gruparea SH a multor E; acidul iodacetic- inhib ribonucleaza La o inhibiiie reversibil - inhibitori se fixeaza slab, necovalent de E

Deosebim: 1. Inhibiie competitiv 2. Inhibiie necompetitiv 3. Inhibiie prin exces de S 4. Inhibiie alosteric

I se aseamn dup structur cu S. Apare o competiie dintre I i S pentru CA. Nu e posibil simultan fixarea S i a I. E va fixa pe acel competitor care se afl intr-o concentraie mai mare. E+I ---- EI Inhibiia competitiv diminueaz v catalizei (nu modific V max, dar crete mult Km, micornd afinitatea E pentru S). Exemplu: inhibiia SDH cu malonat (SDH -oxideaza succinatul in fumarat). Malonatul inhib aceasta E datorit asemnrii cu S. Sulfamidele substituie acidul p-amino-benzoic din a. folic, indispensabil pentru creterea microorganismelor, mpedicnd dezvoltarea lor (antibacterian).

Inhibiia competitiv

inhibiia

enzimei (SDH)cu malonat. SDH oxideaza succinatul in fumarat) Malonatul inhiba aceasta E datorita asemanarii cu S. Particularitatea principal a acestui tip de inhibiie este c poate fi nlturat cu adugarea n exes a S(succinat).

Inhibiia necompetitiv

inhibitorul nu se aseamn ca structura cu S I i S se leag simultan cu E dar locusurile sint diferite E+S+I--------- ESI Acest tip de inhibiie nu se nltur prin exces de substrat. I necompetitivi scad V max dar nu afecteaz Km Ex: cianurile, CO se fixeaz cu Fe 3+ din citocromoxidaz ---se ntrerupe LR I poate fi nlturat de substane care l leag numite reactivatori

I i S se leag simultan cu E n locusuri diferite

Mrirea concentraiei de S nu micoreaza inhibiia.

Cei

mai de vaz inhibitori de acest tip n celulele vii sint produsele intermediare ale metabolismului, care reversibil se fixeaz la unele E reglatoare i modific activitatea lor.

Inhibiia noncompetetiv I se leag la complexul ES, inhib activitatea E E+S----ES +I-----ESI inhibiia prin modificarea covalent a moleculei E - prin fosforilare pe baza ATP-ului. Unele E fosforilate pierd activitatea de exemplu enzima glicogensintaza Inhibiia prin exces de S n CA se fixeaz simultan surplus de S ce nu poate fi transformat. Este o inhibiie reversibil nlturarea S.

Inhibiie

alosteric - inhibitorul (efectorul) se leag n centrul alosteric al enzimei, modificnd conformaia moleculei (structura teriar) ce are ca consecin deformarea centrului activ.

E S CA CA E

M Allos

Retroinhibiie

Fiecare celul a organismului conine setul su specific de E. Unele se gsesc n toate celulele, altele sunt prezente doar n anumite celule sau anumite compartimente celulare. Funcia fiecrei E, nu este izolat, ci strins legat de funcia altor enzime. Astiel din E aparte se formeaza sisteme polienzimatice sau conveiere. Se cunosc urmatoarele tipuri de organizare a sistemelor polienzimatice: 1. - funcional, 2. - structural-funcional 3. - mixt.

Sistemele polienzimatice Tipurile de organizare a sistemelor polienzimatice

Organizarea funcional

enzimele sunt asociate n sistemul polienzimatic cu ajutorul metaboliilor, care difuzeaz de la o enzim la alta. produsul reaciei primei E servete drept S pentru E urmtoare etc. Ex.: glicoliza. Toate enzimele participante la glicoliza sunt n stare solubil, legtura se face doar prin intermediarii metabolici.
E1 E2 E3 E4 A---------------- B------------- C---------- D---------- P

Organizarea structural-funcional

E sunt fixate prin legturi slabe pe o protein central, care poate fi chiar una din E. Proteina central dispune de un bra care fixeaz S i l duce la E1, care l transform n P1; P1devine S2 , braul l preia i l duce la E2, care l transform n P2. Avantajul este c braul duce de fiecare dat S la E corespunztoare, potrivindu-l cu mare exactitate pe CA, ceea ce asigur n ansamblu o vitez mai mare dect cea corespunztoare aciunii E neasociate. Ex.- complexul polienzimatic piruvatdehidrogenazic, constituit din 3 E i 5 Co sintetaza acizilor grai constituit din 7 E legate structural de PPA, care n ansamblu ndeplinesc funcia de sinteza a AG.

Tipul mixt de organizare

reprezint o mbinare a ambelor tipuri de organizare, adic o parte din sistemul polienzimatic are organizare structurala, iar cealalta parte - organizare funcional. Ex.- ciclul Krebs, unde o parte din enzime sunt asociate n complex structural (complexul 2-oxoglutaratdehidrogenazic), ar alt parte se leag funcional prin metaboliii de legtur.

Unitile de msurare a activitii E


1 UI cantitatea de E care catalizeaz transformarea unui mol de S ntr-un minut n condiii standard 2. 1 Cat (catal) cantitatea de E care catalizeaz transformarea unui mol de S ntr-o secund n condiii standard(1U.I.=16,67 nkat) Condiiile standard - pHul ~ 7,0; t = 25C; p = 1 atm; C substratelor 1 M.
1.

Metodele de separare i purificare ale E


1. Dializ 2. Salifiere 3. Cromatografie 4. Gel-filtrare 5. Electroforez

Cea mai eficient cromatografia de afinitate

Metodele de determinare a activitii E


Viteza reaciei este proporional cu 1.Viteza consumului substratului 2.Viteza formrii produsului 3.Viteza transformrii coenzimei Cantitatea substanei respective se determin colorimetric.

Deosebirea privind componena enzimatic a organelor i esuturilor. Enzimele organospecifice. Modificarea activitii enzimatice n diferite afeciuni (enzimodiagnosticul).

Enzimele indicatorii sunt localizate intracelular: n citoplasm (LDH, aldolaza), n MC * glutamatdehidrogenaza), n lizosomi (-glucoronidaza, fosfataza alcalin). Acestea E n norm n plasm se gsesc n c % foarte mici. La afeciunile celulare activitatea acestor E n plasm este brusc mrit.

Utilizarea E n practica medical


Preparatele farmaceutice contemporane sunt asociate i conin ca regul urmtoarele enzime:

tripsin, chimotripsin, lipaz, amilaz, pancreatin, bromelain, papain, rutin (vit. P).

Utilizarea E n practica medical


Efectele exercitate de preparatele enzimatice

1.De substituie (E digestive) 2.Fibrinolitic i trombolitic 3.Antiedematic 4.Analgezic 5.Antiinflamatoare 6.Imunomodulatoare

Terapia cu enzime

Enzimele sunt ageni terapeutici unici ce produc efecte importante i specifice. Motivele care au limitat folosirea larg a enzimelor ca medicaie e natura protC:IC6:legat de natura proteic: - distribuie redus n organism, dependena de dimensiuni, sarcina i de fenomenele de glicozilare (prin glicozilare proteinele sunt recunoscute de receptori i fixate n anumite locuri - posibilitate mic de dirijare extrahepatic, ficatul avnd tendin de a capta i reine proteinele strine; - inactivarea lor sub aciunea proteazelor digestive n cazul administrarii orale, iar proteazele tisulare le scurteaza de asemeni actiunea; - potentialul lor antigenic, anticorpii formati pot

prin N-acilare a fost crescut semiviata asparaginazei, folosit n leucemie - S-au incercat de asemeni metode de obinere a enzimelor imobilizate. De ex. prin reticularea enzimei, ce conduce la agregate insolubile, prin adsorbie pe polimeri sintetici ori prin ataare covalent, sau prin incorporare ntr-un gel in cursul polimerizarii. Aceste preparate catiga rezistena la enzimele proteolitice i sunt mai putin imunoactive dar pot fi alterate proprietaisile farmacocinetice. Asemenea avantaje au dovedit conjugatii cu polietilenglicol (PEG) ai arginazei, ai glutaminasparaginazei sau ribonucleaza supusa reticularii, enzime cu efect antitumoral. Un succes n terapia defectelor genetice a fost imobilizarea enzimelor din ciclul ureogenetic pe un suport de fibrina. S-au propus noi forme farmaceutice prin incapsularea enzimelor in lipozomi microsfere cu membrana bistratificata lipido proteica, in hematii umane, in fantome eritrocitare sau in alti transportori celulari. Noile forme
-

Tehnici propuse pentru optimizarea proprietilor terapeutice ale enzimelor.