UNIVERSITATEA ALEXANDRU IOAN CUZA IAI

FACULTATEA DE CHIMIE SPECIALIZAREA : C. P. C. F.

Noi perspective privind cataliza tiaminei: De la cataliza enzimatic la cataliza biomimetic

Student, Lcrmioara-Alexandra Vrnceanu

Iai 2013

Generaliti
n aceast lucrare este prezentat detaliat mecanismul de aciune al enzimelor de tiamin, bazat pe compleci metalici de tranziie si metale bivalente post- tranziie din compuii modelului, derivai de tiamin, sintetizai, caracterizai cu tehnici spectroscopice i determinarea structurii cristalelor cu raze X. S-a propus ca reacia enyimatic s fie iniiat cu o conformaie V de pirofosfat de tiamin, impuse de mdeiul enzimatic. Pirofosfatul de tiamin este legat de substratul prot eic prin intermediul pirofosfatului de oxigen. n reacie, formarea intermediarului de "aldehid activ" impune conformaia S la timin , n timp ce un ion metalic bivalent poate fi legat prin sit -ul molecule N1' , n aceast etap. n final , imobilizarea tiaminei i a derivailor dioxidului de siliciu au un effect dramatic asupra decarboxilazei acidului piruvic, reducerea timpului de conversie de la 330 minute pentru sistemul omogen pn la mai puin de 5 minute pentru sistemul heterogen.

Introducere
Pirofosfatul de tiamin (TPP) este cofactorul multor enzyme , incluznd carboxilaze, transketolaze, i altele.

Schema 1 Catalizeaz decraboxilarea a -ketoacidului i formaiuni ale -ketolilor. Pirofosfatul de tiamin poate ntreprinde 3 conformaii depinznd de orientarea relativ dou inele de pirimidin i tiazol , determinat de unghiurile detorsionate.
T = C(5_)C(3, 5_)N(3)C(2), P =N(3)C(3, 5_)C(5_)C(4_)

Aceste conformaii sunt comune F, gsite n toi derivaii liberi ai timinei , cu

T = 0, P = 90.

Conformaia S este gsit constant n doi substitueni derivai ai tiaminei, cu

T =100, P = 150.

i cel mai rar conformaia V cu

T = 90, P = 90.

cnd grupul C4NH2 se apropie de grupul tiazolic C2H . Metalele bivalente sunt de asemenea necesare pentru aciunea enzimelor de tiamin (Mg , Ca2+ in vivo) sau tranziia sau post-tranziia metalelor (Ni2+ , Co2+ , Zn2+, Cd2+ in vitro). Mecanismul acceptat al aciunii timinei n enzimele sale a fost propus de Breslow i implic adiia acidului piruvic la atomul de C2 a tiazolului, urmnd deprotonarea sa i formarea de ilide.
2+

Schema 2

Intermediarul A este numit "aldehid activ"i prezint o interaciune electrostatic O - S ce contriubuie la neutralizarea intern a ncrcturii tiazolului.
+

Interaciunea tiaminelor cu ionii metalici

Pentru a investiga rolul bivalent al metalelor n aciunea enzimatic a tiaminei este foarte important s elucidm modul n care metalele sunt legate de derivaii tiaminei , cum ar fi situsurile de coordonare. Spre acest scop primele cercetri au fost direcionate in pregtirea i elucidarea structurilor metalelor bivalente cu tiamin i derivai. Toate acestea au euat s dea rspunsul la aceast ntrbare , pe parcursul ncrcrii nete positive a inelului tiazolic i protonarea uoar a atomului de pirimidin N1' (pKa=5) rezultnd specii cu dubl ncrctur. Astfel, mai multe complexe de tip sare au fost raportate n literatura de specialitate a formulei [MX4]2-[Th]2+ sau [MX3]2-[Th]2+ , depinznd e pH.Toate acestea nu conin legtur direct metalt-ligand. Un exemplu este Hg2+ fin formula din schema 3.

Schema 3 Anterior , Pt2+ i Pd2+ erau raportai la derivaii de tiamin (schema 4), cu toate acestea a fost propus pentru prima dat s avem o structur zwitterionic , cu metalele legate de sit-ul pirimidinic N1'.

. Schema 4 Aceasta demonstreaz importana acestei poziii ca potenial de coordonare a situ-lui de ioni metalici. Indic de asemenea i faptul c ncrctura net pozitiv a N3 de tizol a fost motivul real pentru dificultatea de a cera complexe cu legaturi directe metal-ligand. n in termediarul "aldehid activ" a catalizei tiaminei (schema 2) ncrctura net pozitiv a N3 a tiazolului este neutralizat parial pe plan intern , de la interaciunea electrostatic S+- O- , rezultat de la o ncrcare parial pozitiv migreaz la poziia S1 a inelului. Prin urmare am crezut c dac derivaii de tiamin "aldehid activ " sunt folosii n loc de tiamina n sine problema formrii complexului cu legtur direct metal-ligand poate fi depit. Acest lucru a fost dovedit a fi adevrat, folosind "aldehide activ" 2 - tiamin (-hydroxybenzyl) (HBT) i 2 - tiamin (-hydroxycyclohexylmethyl) (HCMT) i metale Zn2 +, Cd2 +, Hg2 +, Co2 +, i Ni2 + .Lucru la pH-ul 5.3, toate complexele obinute a ucorespuns formulelor zwitterionice MLCl3 i prezenta la interaciune direct M-N1'. Important a fost, de asemenea, faptul c toi liganzii fie liberi sau n complex, adopt conformaia S, i de aceea interaciunea intern S + O continu s fie aceeai n complexe, ca liganzi.

Interaciunea tiaminei mono si pirofosfat aldehida activa. Derivati cu ioni metalici bivalenti

De cnd esterii fosfai ai tiaminei sunt factorii pentru aciunea enzimatic , o concluzie mai bun asupra ionilor metalici nu poate fi tras fr un studiu detaliat a interaciunii metalelor bivalente cu esterii de fosfat de tiamin. Cu acest scop s-au continuat eforturile cercetrilor ncepnd de la interaciunea dintre derivaii monofosfai de tiamin "aldehid activ" (HBTMP)cu ionii metalici bivaleni , urmate de derivai de pirofosfat de tiamin "aldehid activ" (HBTPP i HETPP). Depinznd de pH s-au obinut 3 complexe din interacia dintre HBTMP cu Zn2+, Cd 2+ i Hg2+ n soluii apoase. Exist la pH~1 o sare dubl a formulei [MCl4] 2-[LH]22+ (L este HBTMP, M este metal) pH~3,5 M(LH)Cl3 a formulei zwitterionice, cu metalele legate prin coninutul fosfat pH~6 complex a formulei MLCl2 cu metalele lipite simultan prin N1' i oxigen pirofosfat 2+ Hg produce complexul HgL2Cl2, la pH ~7 cu metale legate la sit-ul N1'numai al coninutului pirimidinei. Structura de cristal a ligandului liber i complexulHgL2Cl2 apar in conformaia S pentru ligand.

Conformatia ca tiamina se poate afirma in timpul actiunii enzimatice

Folosind modelul de peptide Asp ASPASNLysIleu mimeaza mediul de proteine, din jurul fraciunii de pirofosfat TPP, am studiat sistemul Ternar [M2 +] tabelul 1: decarboxilare benzoil formiatului catalizat de catalizatorii tiaminei(1) Condiii de reacie: toate reaciile au fost efectuate la 37C n MeOH (1mL) cu formiat de benzoil (200 mol), tiamin catalizator (20 mol) i NaOH (40 mol). (2) Condiii de reacie: toate reaciile au fost efectuate la 37C n MeOH (1mL) cu formiat de benzoil (200 mol), benzaldehide (400 mol), tiamin catalizator (20 mol) i NaOH(40 mol). n ambele cazuri, bromo benzen a fost folosit ca standard intern.

Atomi de oxigen pirofosfat i site-ul N 1 pirimidin nc o dat s-au dovedit a fi site-uri metalice de coordonare i de tiamin, o dat mai mult, a fost gsit n conformaia S. Aici trebuie remarcat c baza apropie atomul de C2H de tiazol mai devreme a fost propus s fie grup de pirimidin4 - NH2, formnd astfel ilide, atragerea de protoni i iniierea de reacie . Un astfel de rol a grupului 4 - NH2 necesit o conformaie V pentru tiamin, gsit numai rareori n derivatii si liberi. Cu toate acestea, aceast conformaie a fost n mod constant gsit n structura de cristal a mai multor exemple de tiamina, evident impuse i stabilizate de mediul enzimatic. Metale precum Mg2 + si Ca2 + au fost leagate de pirofosfat tiamin cu apoenzime n cadrul grupului de pirofosfat Aceste rezultate au artat c att conformaiile V i sunt importante i, eventual, reciproc vor reui n mecanismul de aciune al enzimelor de tiamin , ca n schema de 5. Conformaia V iniiaz reacia prin atragerea unui proton din C2 i crearea unui ylide, iar conformaia S este adoptat dup formarea de intermediari "aldehid activ", atunci cnd un metal poate, de asemenea, s se coordoneaze cu N 1, pe langa grupul de pirofosfat. Conformaia S favorizeaz electrostatice interaciune o S + O (2a) , care faciliteaz eliberarea de protoni i aldehid i regenereaz ylide.

Schema 5

Cataliza biomimetic
Legarea de pirofosfat de tiamin i derivaii si pe dioxidul de siliciu prin intermediul grupului pirofosfat este de ateptat pentru a produce materiale , unde dioxidul de siliciu ar nlocui mediul de proteine a enzimelor naturale. Aceste materiale ar fi, de asemenea, de ateptat pentru a cataliza reaciile de tiamin n vitro. De fapt, TPP i derivaii si au fost imobilizai pe dioxidul de siliciu potrivit reaciei din schema 6.

Schema 6

n acelai mod, intermediari "aldehid activ" HBTPP i HETPP au fost, de asemenea, imobilizai pe siliciu i proprietile lor catalitice au fost evaluate i n comparaie cu cele ale TPP n sine. Materialele obinute au corespuns formulei n [HBTPPOP2O6SiO3/2] xSiO2, xSiO2 [HETOP2O6SiO3/2] i [Th OP2O6 SiO3/2] n xH2O. Activitatea lor catalitica ulterior au fost evaluate n lipsa de aldehide corespunztoare (1), (3) sau n prezena ei (2), (4), dup cum urmeaz

Este evident c imobilizarea derivaiolr irofosfat ai tiaminei sunt catalizatori mult mai eficient dect sistemele omogene corespunztoare, reducerea timpului de reacie la 330 minute sistemului omogene de mai puin de 5 minute, numai pentru randament de 100% n ambele reactii (1), (3) i (2), (4). Mecanismele detaliate de aciune au fost propuse pentru ambele reactii ca n schema 7.

Schema 7

Concluzii
formarea uoar de complexe cu legturi directe metal-ligand a metalelor bivalente cu tiamine derivai de " aldehid activ" , atunci tiamina n sine , indic puternic faptul c interacia metalelor n aciune enzimatice ar trebui s urmeze formarea de intermediarului "aldehid activ". Conformaie S poate fi important n cicluri enzimatice, deoarece aceasta este reinut dup formarea legturii ditecte metal-ligand. Amndoua sit-uri N1' foi grupul fosfat al fosfat tiaminei poate fi important pentru legarea sit+urilor metalelor Importana conformaiunii S n mecanismul de aciune enzimatic a tiaminei este accentuat Natura metalului este important n determinarea coordonarii sitului.

Bibliografie
M. Louloudi and N. Hadjiliadis, Structural aspects of thiamine, its derivatives and their metal complexes in relation to the enzymatic action of thiamine enzymes, Coordination Chemistry Reviews, vol. 135-136, pp. 429468, 1994. J. Pletcher and M. Sax, Crystal andmolecular structure of thiamine pyrophosphare hydrochloride, Journal of the American Chemical Society, vol. 94, no. 11, pp. 39984005, 1972. R. Breslow, Themechanism of thiamine action, Chemistry & Industry, p. 28, 1956. G. Malandrinos, M. Louloudi, and N. Hadjiliadis, Thiamine models and perspectives on the mechanism of action of thiamine-dependent enzymes, Chemical Society Reviews, vol. 35, no. 8, pp. 684692, 2006. N. Hadjiliadis, A. Yannopoulos, and R. Bau, Complexes of mercury(II) with thiamine, Inorganica Chimica Acta, vol. 69, pp. 109115, 1983. N. Hadjiliadis, J. Markopoulos, O. Pneumatikakis, D. Katakis, and T. Theophanides, Interaction of thiamine and its phosphate esters with Pt(II) and Pd(II), Inorganica Chimica Acta, vol. 25, pp. 2131, 1977. M. Louloudi, N. Hadjiliadis, J.-A. Feng, S. Sukumar, and R. Bau, Interaction of Zn2+, Cd2+, and Hg2+ with 2-(-hydroxybenzyl)thiamin and 2-(-hydroxy-cyclohexylmethyl)thiamin. Crystal structure of the complex Hg(2-(-hydroxybenzyl)thiamin)Cl3 H2O, Journal of the American Chemical Society, vol. 112, no. 20, pp. 72337238, 1990. M. Louloudi, N. Hadjiliadis, J. P. Lussac, and R. Bau, Transition and group IIB metal complexes with active aldehyde derivatives of thiamine, Metal-Based Drugs, vol. 1,no. 2-3, pp. 221231, 1994. K. Dodi, I. P. Gerothanassis, N. Hadjiliadis, et al., Complexes of Zn2+, Cd2+, and Hg2+ with 2-(-Hydroxybenzyl)thiamine