Sunteți pe pagina 1din 38

Curs 9 Tipurile de metabolism litotrofic

Litotrofia = metabolismul care utilizeaz un compus anorganic ca surs de energie. Litotrofele iau electroni dintr-un compus anorganic mai uor dect dintr-unul organic. Majoritatea bacteriilor litotrofe sunt aerobe, producnd energie n aceeai manier ca organismele aerobe: - ele elibereaz electronii dintr-un substrat i i introduce ntr-un sistem de transport care va produce ATP prin fosforilare oxidativ.

Grupurile fiziologice de litotrofe

Grup fiziologic Bacterii ce utilizeaz hidrogenul

Sursa de energie H2 H2 CO NH3 N02 H2S sau S Fe


++

Produi finali oxidai H2O H2O CO2 N02 N03 SO4 Fe


+++

Organism Alcaligenes, Pseudomonas Metanobacterium Rhodospirillum, Azotobacter Nitrozomonas Nitrobacter Tiobacillus, Sulfolobus Gallionalla, Tiobacillus

Bacterii metanogene Carboxibacterii Nitrozobacterii Nitrobacterii Bacterii sulfoxidante Ferobacterii

Oxidri la litotrofe.

Metabolism fototrofic
Fototrofia = utilizarea luminii ca surs de energie pentru cretere, adic, energia luminoas este convertit n energie chimic sub form de ATP. Procariotele care convertesc energia luminoas n energie chimic includ cianobacteriile, bacteriile verzi i roii i halobacteriile. Cianobacteriile = realizeaz fotosinteza la plante, numit fotosinteza oxigenic; Bacteriile verzi i roii realizeaz fotosinteza fr oxigen; Halobacteriile utilizeaz fotofosforilarea nonfotosintetic cu ajutorul bacteriodopsinelor, care transform energia luminoas n ATP.

Diferenele dintre fotosinteza din plante i cea bacterian


Fotosinteza n plante Plante, alge, cianobacterii Clorofila a (650-750) nm prezent prezent da H2O Fotosinteza bacterian Bacterii verzi i roii Bacterioclorofila (800-1000 nm) Prezent Prezent Nu H2S, ali compui cu sulf sau ali compui organici

Organisme Tip de clorofila Fotosistem (fosforilarea ciclica) Fotosistem (fotofosforilarea non-ciclica) Productoare de O2 Donor fotosintetic de electroni

Fixarea autotrofic a CO2: utilizarea RUBP (ribulozo bifosfat carboxilaza) i a ciclului Calvin este cel mai ntlnit mecanism de fixare a CO2. RUBP este cea mai ntlnit enzim de pe planet (nitrogenaza, care fixeaz azotul este a doua). Ciclul Calvin este o cale anaerobic. Fixarea bioxidului de carbon la nivelul glucozei necesit 18 ATP i 12 NADPH2.

Ciclul Calvin i relaia acestuia cu sinteza materialului celular

Bacteriile metanogene, un grup foarte mare de procariote, utilizeaz bioxidul de carbon ca surs de cretere i ca acceptor final de electroni n procesul de producere al energiei prin care se produce metan. Calea utilizat de bacteriile metanogene reduce bioxidul de carbon la metil (CH3) cu ajutorul coenzimei metanopterin (MP), legat de acidul folic. MP-CH3 poate fi redus la metan sau MP poate fi nlocuit de vitamina B12 ca molecul de intrare n calea de fixare a bioxidului de carbon. B12-CH3 este substratul de fixare a monoxidului de carbon, mediat de CODH (monoxid carbon dehidrogenaza). CODH reduce bioxidul de carbon la monoxid i-l adaug compusului B12-CH3 pentru a forma acetil-CODH. Coenzima A nlocuiete CODH, rezultnd acetil coenzima A care este centrul metabolismului de biosintez. Efectul net este reducerea a 2 atomi de bioxid de carbon la acetil coenzima A.

Calea CODH sau acetil coenzima A de fixare a bioxidului de carbon la bacteriile metanogene.

La bacteriile fotosintetice verzi, calea de fixare a bioxidului de carbon implic reacii de decarboxilare n ciclul acizilor tricarboxilici. Primele dou reacii utilizate de bacteriile verzi sunt dou reacii catalizate de feredoxine, reducerea acetil coenzima A la piruvat i reducerea succinil coenzima A la alfacetoglutarat.

Fixarea bioxidului de carbon de ctre bacteriile verzi prin dou reacii catalizate de ferodoxin: sunt reversul oxidrii acizilor ceto catalizat de NAD i coenzima A n ciclul acizilor tricarboxilici.

Biosinteza Cile metabolismului central (ex. glicoliza i ciclul acizilor tricarboxilici), cu cteva modificri, funcioneaz ntr-o direcie sau n alta, n toate organismele. Motivul: aceste ci furnizeaz precursori pentru biosinteza materialului celular. Cnd o cale, cum ar fi EmbdenMeyerhof sau cea a acizilor tricarboxilici, funcioneaz pentru a furniza energie, adiional intermediarilor chimici pentru sinteza materialului celular, aceasta este o cale amfibolic. Cile glicolizei i a acizilor tricarboxilici sunt ci amfibolice deoarece furnizeaz ATP i intermediari chimici ce ajut la constituirea unor noi materiale celulare.

Biosinteza sau metabolismul intermediar este similar n toate organismele, n acelai mod n care sinteza proteinelor sau structura ADN este similar. Cnd biosinteza are loc n metabolismul central, civa dintre principalii precursori de sintez ai structurii celulare a procariotelor sunt: - poliglucide, care sunt polimeri ai glucozei sau altor glucide; - peptidglucan din perete celular, care este derivat de la glucozo fosfat; - aminoacizi pentru sinteza proteinelor care au surse variate; cele mai importante sunt acidul piruvic, acidul alfacetoglutaric i acidul oxalacetic; - nucleotide (ADN i ARN) care sunt sintetizate din ribozo fosfat. ATP i NAD fac parte din metabolismul purinelor; - triozo fosfai, precursori ai glicerolului, i acetil coenzima A, principalul precursor al lipidelor din membranele celulare; - vitamine i coenzime sintetizate pe diverse ci care pleac de la metabolismul central.

Principalele ci metabolice i relaiile dintre ele

Principalele ci de biosintez n celulele procariote.

Curs 10 Enzime utilizate in bioprocese


Enzime, cinetic, factori

enzimele = catalizatori biologici responsabili de majoritatea reaciilor chimice dintr-un organism. rol de meninere a procesului vieii - folosite tot mai mult n diagnoz i terapeutic. componentele macromoleculare ale majoritii enzimelor sunt proteine. enzimele se gsesc n toate esuturile i fluidele corpului. Enzimele intracelulare catalizeaz reaciile cailor metabolice. Enzimele plasmei membranare catalizeaz rspunsul la stimuli extracelulari i enzimele sistemului circulator sunt responsabile de reglarea compoziiei sngelui. Toate procesele semnificative ale vieii sunt dependente de activitatea enzimatic.

Clasificarea enzimelor
Iniial, enzimele erau denumite dup persoanele care le-au descoperit. Sistemul de clasificare al enzimelor devine tot mai complex. Uniunea Internaional a Biochimitilor (I.U.B.) grupeaz enzimele n 6 clase funcionale.
Numr Clasificare Proprieti biochimice Catalizeaz reaciile de oxidoreducere prin: transfer de hidrogen (transhidrogenaze sau dehidrogenaze), transfer de electroni (transelectronaze), combinarea direct a unui substrat cu oxigenul molecular (oxidare). Transfer grupri funcionale dintre un donor i un acceptor de molecule. Kinazele sunt trasferaze specializate care regleaz metabolismul prin transferul gruprii fosfat din ATP ctre alte molecule. Catalizeaz scindarea hidrolitic a substraturilor, determinnd desfacerea legturilor dintre atomii de carbon i ali atomi prin introducerea elementelor apei. Principalele legturi scin date la hidrolaze snt legturile: ester glicozidazic i peptidic. Leag apa, amoniu sau bioxid de carbon la duble legaturi, sau nltur aceste elemente pentru a produce duble legaturi. Realizeaz diferite izomerizri: de la izomeri L la D, schimbri de grupri chimice i altele. Catalizeaz reacii n care dou grupri chimice sunt unite cu energie cedat de ATP.

1.

Oxidoreductaze

2.

Transferaze

3.

Hidrolaze

4. 5. 6.

Liaze Izomeraze Ligaze

Sistemul Uniunii Internaionale a Biochimitilor specific un nume pentru fiecare enzim. Numele enzimei este compus din numele substratului, numele produsului rezultat dup cataliz i clasa funcional a enzimei. Deoarece multe enzime, cum ar fi alcool dehidrogenaza care este o enzim foarte uzual n comunitatea tiinific, nu respecta aceasta regula iar schimbarea numelui dup nomenclatura aprobat se face foarte lent. Enzimele sunt de asemenea clasificate pe baza compoziiei lor. Enzimele formate numai din proteine = simple enzime Enzimele formate din proteine i mici molecule organice = enzime complexe, holoenzime.

Enzimele sunt proteine

Enzimele complexe = holoenzime. - componenta proteic = apoenzim; - componenta neproteic = grupare prostetic sau coenzim (derivai solubili n ap ai vitaminelor) de obicei legaturi covalente. Cnd legtura dintre apoenzim i componentele neproteice nu este covalent, moleculele organice mici se numesc coenzime. Este de remarcat c majoritatea simptomelor clinice ale insuficienei vitaminice apare din malfunciile enzimelor n meninerea homeostazei. Componentele neproteice = molecula unui simplu ion metalic Enzimele care necesit n compoziia lor un metal = metalenzime dac ele leag i rein atomi de metale n toate condiiile, avnd o mare afinitate pentru acetia. Cele care au o afinitate mai mic pentru ioni metalici dar tot necesit legarea lor pentru a fi active, se numesc enzime metal-activate.

Rolul coenzimelor
Rolul funcional al coenzimelor este de a aciona ca transportori ai gruprilor chimice de la un reactant la altul. Gruprile chimice pot fi: - ionul hidrogen (H+ + 2e-) care este transportat de NAD; - molecula de hidrogen transportat de FAD; - grupa aminic (-NH2) transportat de piridoxalfosfat. Coenzimele transfer grupri chimice unui acceptor de molecule i apoi se regenereaz la forma iniial. Aceast regenerare a coenzimei i holoenzimei argumenteaz funcia enzimei drept catalizator chimic. Dei enzimele sunt nalt specifice reaciilor pe care le catalizeaz, nu se poate spune acelai lucru i despre substratele pe care le atac. De exemplu, n timp ce succinil dehidrogenaza (SDH) catalizeaz ntotdeauna o reacie de oxido-reducere i substratul este invariabil acidul succinic, alcool dehidrogenaza (ADH) atac diferii alcooli, de la metanol la butanol. In general, enzimele au specificitate pentru o serie de substrate dar sunt cel mai active asupra unui substrat. In cazul ADH, etanolul este substratul preferat.

Enzimele sunt specifice pentru configuraia steric (izomeri optici) a substratului. Enzimele care atac izomerii D ai glucidelor nu vor ataca i izomerii L. Enzimele cunoscute ca racemaze sunt excepii de la aceast regul: de fapt rolul lor este de a transforma izomerii D n L sau invers. In acest fel racemazele atac ambele forme izomere ale substratului. O enzim are un interval al specificitii substratului mai mult sau mai puin; se urmrete ca un substrat dat s poat fi atacat de un numr diferit de enzime, fiecare utiliznd acelai substrat i producnd acelai produs. Membrii individuali ai unui astfel grup de enzime se numesc izoenzime. Cele mai studiate izoenzime sunt lactat dehidrogenazele (LDH). LDH este o enzim tetrameric compus din toate aranjamentele posibile ale celor dou subuniti proteice. Aceste subuniti combin variate combinaii conducnd la 5 izomeri distinci. Aceste izoenzime catalizeaz aceeai reacie chimic, dar au diferite grade de eficient.

Interaciile enzim substrat


Interacia dintre enzim i substrat este relativ slab, dar aceste slabe interacii induc schimbri conformaionale n enzim care ntresc legaturile i aduc situsul catalitic n apropierea legaturilor substratului pentru a fi atacat. Dup ce legtura a avut loc, una sau mai multe mecanisme de cataliz formeaz complexe i produi de reacie. Aceste mecanisme de cataliz este posibil a fi n numr de patru: Cataliza prin legtur: n aceast form de cataliz, inducerea rearanjamentului structural are loc cu legarea substratului de enzim, ultima producnd leziuni ale legaturilor substratului, care atinge uor starea de tranziie; Cataliza prin apropriere i orientare: interaciile enzim-substrat orienteaz gruprile reactive i le aduc unele n apropierea altora; Cataliza care implic donorii de protoni (acizii) i acceptori (baze); Cataliza covalent: n cataliza care are loc prin mecanisme covalente, substratul este orientat ctre situsul activ al enzimei n aa fel nct ntre enzim, coenzim i substrat se formeaz o legtur covalent intermediar.

Formarea complexului enzim-substrat

Reacii chimice i viteza de reacie


In concordan cu conveniile internaionale, viteza unei reacii chimice = numrul de molecule de reactant care este convertit n produs finit ntr-o perioad de timp specific. Viteza de reacie este ntotdeauna dependent de concentraia substanelor chimice implicate n proces i de constantele caracteristice reaciei. De exemplu, reacia n care un reactant A este convertit n produsul B este scris astfel: A ---- B Viteza de reacie este exprimat algebric ca o descretere a concentraiei reactantului A: -[A] = k[B] sau ca o cretere a concentraiei produsului B: [B] = k[A]

-[A] = k[B] - semnul negativ semnific o descretere a concentraiei reactantului A, ca reacie care progreseaz, paranteza ptrat semnificnd concentraia molar iar constanta k este cunoscut ca o constant a vitezei de reacie. K este o constanta de proporionalitate care furnizeaz o legtur cantitativ ntre concentraia chimic i vitez. Fiecare reacie chimic are valori caracteristice pentru fiecare din constantele k; acestea sunt direct legate cu constanta de echilibru pentru acea reacie. Reacia poate fi rescris ca o expresie de echilibru, cu scopul de a vedea relaia dintre vitezele de reacie, constantele k i constantele de echilibru. K pentru reacia urmtoare este definit k+1 i reversul ei este k-1. La echilibru, viteza (v) a urmtoarei reacii (A --- B) este prin definiie egal cu cea a reaciei inverse (B --- A), o relaie, care algebric, se poate scrie:

v = vinvers

n care. Pentru prima parte a reaciei: v = (k+1)[A], i pentru inversul reaciei: vinvers = (k-1)[B] In ecuaiile de mai sus, k+1 i k-1 reprezint constantele vitezei de reacie pentru reacia n ambele sensuri. Negativul se refer numai pentru reacia invers nu pentru valorile negative ale constantei. Viteza de reacie [v] este egal produsului dintre k+1 i concentraiei molar a reactantului lui A. Viteza reaciei inverse este egal produsului n etapa invers dintre constanta k-1 i concentraia molar a lui B. La echilibru, viteza de reacie a urmtoarei ecuaii este egal cu cea a reaciei inverse, conducnd la echilibru constant al reaciei exprimate prin: [B]/[A] = (k+1)/(k-1) = Kechilibru Aceast ecuaie demonstreaz c pentru o reacie chimic, constanta de echilibru nu este numai egal vitezei de echilibru dintre produsul i concentraia reactanilor, dar este egal i cu constantele caracteristice reaciei.

Ordinul reaciilor chimice Ordinul reaciilor = numrul de molecule implicate n formarea reaciei complexe. Empiric, aceasta se determin nsumnd exponenii fiecrei reacii n ecuaie. O reacie caracterizat prin conversia unei molecule A la o molecul B cu nici o influen de la un alt reactant sau solvent este o reacie de prim ordin. Exponentul concentraiei substratului n ecuaie pentru acest tip de reacie este 1. O reacie cu dou substrate formnd dou produse este o reacie de ordin doi. Oricum, reactanii de ordin doi sau mai mare nu trebuie s fie de specii chimice diferite. Un exemplu de reacie de ordin doi este formarea ATP prin condensarea ADP cu ortofosfat: ADP + H2PO4 ATP + H2O Pentru aceast reacie urmtoarea reacie va fi scris: v = k1[ADP][H2PO4]

Enzimele drept catalizator biologici


In celule i organisme majoritatea reaciilor sunt catalizate de enzime, care sunt regenerate n timpul reaciei. Aceti catalizatori biologici sunt foarte importani din punct de vedere fiziologic, deoarece mresc viteza reaciilor care altfel ar fi prea mic pentru a ntreine viata. Enzimele cresc viteza reaciilor cteodat de un milion de ori dar de cele mai multe ori de pan la o mie de ori. Catalizatorii cresc viteza reaciilor fr s influeneze echilibrul lor. Enzimele cresc viteza reaciilor prin descreterea cantitii de energie necesar pentru a forma un complex de reactani. Acest complex este cunoscut drept starea tranziie. Enzimele i ali catalizatori accelereaz reaciile prin scderea energiei strii de tranziie. Energia liber necesar de a forma un complex este mult mai mic n reacia catalizat. Cantitatea de energie necesar pentru a ajunge la starea de tranziie este mai mic odat cu creterea proporiei de molecule care trec ctre starea de tranziie.

Cinetica Michaelis-Menten

In reaciile tipice catalizate de enzime, concentraiile reactantului i produsului sunt de obicei de sute sau mii de ori mai mari dect concentraia enzimei. Fiecare enzim catalizeaz conversia multor molecule de reactant = substrat. Reacia catalitic care convertete substratul la un produs implic formarea unei stri de tranziie i apare mult mai uor un loc de legare specific la nivelul enzimei. Acest loc, numit situsul catalitic al enzimei, se structureaz n timp pentru a crea o afinitate nalt de legare a substratului i un mediu favorabil reaciilor catalitice. Complexul format cnd se combin substratul cu enzima se numete complex enzim - substrat (ES). Produii de reacie cresc cnd complexul ES elibereaz enzimele. Intre legarea substratului de enzim i reapariia enzimei libere i produsului, au loc o serie reacii. La un minim de complex ES care trebuie format, acesta va trece prin starea de tranziie (ES*) n care apoi rezult o enzim i un produs complex (EP).

E + S -> ES -> ES* -> EP -> E + P Cinetica reaciilor simple ca cea de sus a fost pentru prima dat caracterizat de ctre biochimitii Michaelis i Menten. Conceptele pe care ei le-au dezvoltat continu s fie folosite i azi pentru nelegerea metabolismului. Ecuaia Michaelis-Menten:

reprezint o descriere cantitativ a relaiei dintre viteza unei reacii catalizat enzimatic [v1], concentraia substratului [S] i dou constante, Vmax i Km. Simbolurile utilizate n ecuaie se refer la viteza reaciei [v1], viteza maxim de reacie (Vmax), concentraia substratului [S] i constanta Michaelis-Menten (Km).

Ecuaia Michaelis-Menten poate fi utilizat s se demonstreze c la o concentraie a substratului care produce exact jumtate din viteza de reacie maxim, Vmax, concentraia substratului este numeric egal cu Km. Aceasta reprezint un instrument bioanalitic foarte simplu i puternic care a fost utilizat pentru a caracteriza enzimele normale i modificate, cum ar fi cele care produc simptome de boli genetice. Rearanjnd ecuaia Michaelis-Menten se obine:

Se observ c atunci cnd concentraia substratului este jumtate din necesar pentru a atinge viteza maxim de reacie, v1 va fi egal cu jumtate din Vmax; altfel spus, v1 = [Vmax/2]. La concentraia acestui substrat Vmax/v1 va fi exact egal cu 2: [S](1) = Km

Pentru enzimele de tipul Michaelis-Menten unde viteza de reacie observat este jumtate din maximul vitezei, concentraia substratului este numeric egal cu constanta Michaelis-Menten. Ecuaia Michaelis-Menten are aceeai form ca i ecuaia pentru o hiperbol rectangular. Analiza grafic a vitezei (v) fa de concentraia substratului [S] produce o hiperbol.
Graficul concentraiei substratului fa de viteza reaciei

Punctele marcate pe grafic A, B i C sunt interpretate astfel: la o concentraie mare a substratului n punctul C, viteza de reacie este aproape egal cu Vmax, i diferena de viteze la concentraii apropiate ale substratelor este aproape neglijabil. Cnd viteza de reacie devine independent de concentraia substratului, viteza va fi de ordin 0. Mici diferene n viteza de reacie la concentraiile substratului n jurul punctului C (aproape Vmax) reflect faptul c la aceste concentraii aproape toate enzimele sunt legate de substrat i viteza este dependent de substrat, deci de ordin 0. La concentraii mai mici de substrat ca cele din punctele A i B, vitezele mai mici de reacie indic c la un moment numai o proporie dintre moleculele de enzime sunt legate de substrat. La concentraia substratului din punctul B, exact jumtate din numrul de molecule sunt n complexul ES i viteza este exact jumtate din Vmax. La concentraiile substratului aproape de punctul A viteza pare s fie direct proporional cu concentraia substratului, i viteza de reacie este de ordin 1.

Inhibarea reaciilor catalizate de enzime Biochimitii Lineweaver i Burk au introdus o analiz a cineticii enzimatice, bazat pe urmtoarea rearanjare a ecuaiei MichaelisMenten: [1/v] = [Km (1)/ Vmax[S] + (1)/Vmax] Graficul 1/v funcie de 1/[S] este format dintr-o dreapt cu panta de Km/Vmax iar pe ordonat se poate calcula 1/Vmax.

Graficul Lineweaver-Burk

O alternativ liniar a ecuaiei Michaelis-Menten este transformarea Eadie-Hofstee:

v/[S] = -v [1/Km] + [Vmax/Km]

i cnd v/[S] este extrapolat pe axa y funcie de v, rezult o dreapt cu panta -1/Km i valoarea Vmax/Km care se gsete pe ordonat. Ambele transformri Lineweaver-Burk i Eadie-Hofstee ale ecuaiei Michaelis-Menten sunt folositoare n analiza inhibiiei enzimelor. Inhibitorii enzimelor se pot grupa n dou clase: cei care cauzeaz inactivarea ireversibil a enzimelor i aceia care au efecte inhibitoare reversibile.

Inhibitorii care cauzeaza o inactivarea ireversibil prin modificarea covalent a structurii enzimelor (cianura prin legarea covalent a citocromoxidazei mitocondriale, inhib toate reaciile asociate cu transportul de electroni). Efectul cinetic al inhibitorilor ireversibili este de a descrete concentraia enzimei active, cu descreterea concentraiei complexului ES. Deoarece limitarea vitezei reaciei enzimatice este k2[ES], este clar c n aceste circumstane reducerea concentraiei enzimei va conduce la descreterea vitezei reaciei. Inhibitorii ireversibili sunt considerai a fi otrvurile i sunt n general nepotrivite pentru procesele terapeutice. Inhibitorii reversibili pot fi mprii n dou mari categorii: inhibitori competitivi i inhibitori noncompetitivi. Poate fi i o a treia categorie, mai rar ntlnit, inhibitori necompetitivi.

Tipul de inhibitor

Legarea pe situsul enzimei Pe situsul catalitic, unde este n competiie cu substratul pentru legarea n echilibru dinamic. Legaturi ale complexului E sau ES complex altele dect la situsul catalitic. Legarea substratului nemodificat, dar complexul ESI nu poate forma produi.

Efect cinetic Vmax este neschimbat; Km, definit de [S] necesar pentru 1/n activitatea maxim, crete.

Inhibitor competitiv

Inhibitor noncompetitiv

Km apare nemodificat; Vmax descrete proporional cu concentraia inhibitorului.

Inhibitor necompetitiv

Legaturile numai de complexelor ES la alte locaii dect situsul catalitic. Legarea substratului modific structura enzimelor, fcnd posibil legarea inhibitorului de situs.

Aparent Vmax descrete; Km, definit de [S] necesar pentru 1/n activitatea maxim, descrete.

Aciunea inhibitorului competitiv

Cnd concentraia unui inhibitor scade, activitatea enzimei este regenarat. De obicei aceti inhibitori leag enzimele prin forte non-covalente i se menine un echilibru reversibil cu enzim. Echilibrul constant pentru disocierea complexelor enzim-inhibitor este cunoscut drept KI: KI = [E][I]/[E-complex] Importana lui KI este c n toate reaciile enzimatice n care substratul, inhibitorul i enzimele interacioneaz, Km i/sau Vmax pentru interacia substrat - enzim par s fie modificate. Aceste schimbri sunt consecina influenei lui KI n viteza general a reaciei. Efectele lui KI sunt cel mai bine observate n graficul Lineweaver-Burk.

Probabil cei mai cunoscui inhibitori sunt inhibitorii competitivi care de obicei se leag la situsul catalitic sau activ al enzimei. Majoritatea medicamentelor care modific activitatea enzimelor sunt de acest tip. Inhibitorii competitivi sunt utilizai ca modulatori clinici ai activitii enzimatice deoarece ei ofer dou rute pentru inhibiia reversibil a enzimelor n timp ce ceilali ofer numai una. La toi inhibitorii reversibili, descreterea concentraiei de inhibitori reversibili regenereaz enzimele libere active. Substratul i inhibitorii competitivi se leag la acelai situs concurnd unii cu alii pentru aceast legare. Crescnd concentraia substratului (S), n timp ce se tine concentraia inhibitorului constant, apare ruta a doua de inhibiie competitiv reversibil. Cu cat este mai mare proporia de substrat cu att este mai mare proporia de enzime prezente n complexele ES.

C. Inhibitorii noncompetitivi nu au nici un efect asupra Km a enzimelor pe care ei le inhib; nu intervin n echilibrul enzimelor, substratului i complexelor ES, constanta Michaelis-Menten, Km, nu este nici ea afectat. Complexele care conin inhibitor (ESI) sunt incapabile de a conduce la produsul final iar efectul inhibitorului noncompetitiv reduce concentraia complexelor ES care apoi pot conduce la produs. Cnd Vmax = k2[Etotal], i concentraia enzimei Etotal este diminuat de cantitatea complexului ESI format, inhibitorii noncompetitivi descresc Vmax.

A. Concentraii mari de substrat pot nlocui toi inhibitorii competitivi legai la situsurile active. Este evident c Vmax trebuie s fie neschimbat de inhibitorii competitivi. Aceast caracteristic a inhibitorilor competitivi este reflectat n graficul LineweaverBurk.

B. Ca s se ating Vmax sunt necesare concentraii mai mari de substrat n prezena inhibitorului competitiv, Km (concentraia substratului la jumtate din viteza maxim) este de asemenea mare.

Graficele Lineweaver-Burk

D. Analiza inhibiiei necompetitive conduce la schimbri ale valorilor lui Km i Vmax. Schimbarea ambelor constante conduce la grafice duble reciproce, valorile de pe axele x i y fiind roporional schimbate; aceasta conduce la apariia de linii paralele n reaciile inhibate i neinhibate