Sunteți pe pagina 1din 6

Parazitologie

Asist univ Neagoelonelo

- ST]PLIMENTLPl

. EXA}IEN COPROPARAZITOLOGIC: EX. PARAZITOLOGIC AL FECALELOR

EXAMEN MICROSCOPIC

FECAI.,E :

Al) PREPARAT PROASPAT saucu Solutie Lugol Principiu metoda:

lama * lamela ( L+l) din FECALE

cu Ser Fiziologic (SF) caldut

- I)c o lanrtr clc tnic'rosc'ol)se uilft)-lsr lltt*gaaJ-Uteeuus solutieLu*tl

- J'eomogenizcuzd L:alc a-9gJlt!ill91lJgg_dlktLilg

- Amestecurilese acopera.fiecarear cdle o lamela

,le il,'

si la cg.fullcapat I lticanrra

in.liac:arc picattu"a cle SIt si sofutie Ingol

- ^!kcxdtnineazela micntscopul oTttic(MO) u Artanlai:

ohiectitul (Oh) dc l0-J0x

- .fbtrrtc ia.ftin -se trtilizcazaclcnttirtu in.screningrrlda tliagruistic.

- obsen'areamobilitatii tnfozoitilor

- pc prcparalcle:cu .rclulia Ittgol c'histi.sitro/itzoiti utktmti

vii pe trtrcparate le at Sl;'

in marutsc disting clur dc furufu|

microscopic

I)ezatanlu.i:

- seusuca-fbarterepede in l-2 ore:

- pe prcpdralttl cu SI'', ltarzrzitii nu sc dislirtg.finrte clar dc./bnclulmic:roscoptc','

- solulia Ingol contine iod care onoarLt trofozoitii (nu semaiobsena

mohilitatea).

Obsenalie:

din./bcalcsi ntr clinalt prclavat hiologic'

SolutiaLugol este.fblosita doar in exantinarea nric:rost:opictta prcparfitelor proaspeta

,4'2)F'ROTIU din FECALE l)rincipiu mcktela:

colorat cu Tricrom

sau Giemsa

- Pe o lama la un capat sepune I picahtru suspensie./bcalc:

- (lu latura unci lqmc esezolu in unchi dr: 15o sa ctalcazu lbcule le dc la ttn capal la t:elalat ctl lamei:

- l;roliul exeuttql

- .5ecoloreaza cu

- ^\'ce-rantincazac'u ()lt dc l00x

sa.fi.reazachimic:cu ulc:ool,

'l'ricrorn

sau Giemsa,

Avantaj:

- ltoLtta./i pastrat ani indahntguti firru risc'dc detcriorara

- s'epot obsenramai hine detalilc de ultastruclura f)e zavantE:

- cloruntiiJolositi sunt mai scumpi

ale parozitul

Parazitologie

Asist univ Neagoelonela

ba histolrtic

- Mediul I'qffle r

- Se insamanleaza

- Saadartga amidon

(:ot?rirc 'ar dc hort t:oagurtrt irt pran inc:rinarin rtthttri

pala mecliului ctt o suspensiede.fecale

untihiotit: t .\l;

(ghrcil da hronirc);

.sc ./irc:c ttin 21 in

2lh

tintp tlt: 3zilc:

cttte o picarrta

- Sc inathcaza la JT. (:

- eljtw-c-pu-Bgttltltti

(on.\to axantinerctr setlinrent (tle rr,fbzoiti

proasPete L+ I realizate din

ry:pa.mlelor Iistolytical

dcn,oltat la haza pantei meclitrlui.

rTtrcroscoprc0 d

de Entamoeba

CI) FROTIUTISULAR GLISAT

I)rincipittt1rctodq;

T'e'vutulde

Settseazao a II a

consislenlamoale si in centitate.fitarle nric:asepu,re

lantct,dcmicro,'.op paste lestrlsr,rcprcsc{rzu.

(stergeri)

in directii

oprrru o r"tor

tr)e o latttttde nticr,scop,

2

Prinlr-o miscare tle glisare

tma clealla.) .saetalt:oztt lcstrhtl

Cele 2 lame cu tesul elalal se.fixeazachimic ,la utloreraza (iiem,ya. H(+li.

lante tle microscop (lipite

Seetamineaza la MO at obiectitntldel00x.

C2)AMPRENTA TISULARA

Principillmalod9t;

- Pe o

lana de microscoP se preseaza usor at o penselq./ragntenntl tle

.ft'nru1

ler^ttt(utnsislenta mai

- .5'eindeparteaza tesumlde pe lama ctt a.jttbntlpcnsetei.

- Ampranlu /i.sulttruohlinula .sttkt,su,\cLrfltcc.

- se./ixeaza chimic,

- .re:utloreaze (]icm.ta satt 'l'ric:ront.

- Seexamineaza la M0 cu obiectitryldet00x.

- 'l'cstrhrl rcc'rttlal(elc c'onsistcrtlnrttui .fbrrrtu.t^i in

- ulterior se taic cu microtunnrlin sectiuni./bttrte.n&tiri

- sccliuniilc li'vtlarc oblinulc .te

- Se coloreaza m H&Ii sau T,ricront

c:ctttlitctta ntot ntarc ).tc intpara.fineaza,

(t)'aozu pa o lanttt tle ntrcrosc:o1t.si st:.fi.rctazat:ltintic

- ^\'ccxuntineqza la lv,l()ctr rshict:tit,ulclct00x. Avantqi :

Parazitologie

AsistunivNeagoelonela

- prin.fixare si colorare, se observq tlelalile

de ullrastrucnnw alc parazifitl tlar,si alre as!)ecte

hisIo1ntoktgi t:a indtt.sede p rczcrt lttpnrazilttIrri

- preparatele pol.fi pastrLte pe periottdc inclelungate clerimp.fara risutl

unei deteriorari.

Dl)PREPARAT rsnrrge/ LCR/ etc)

]' t'i ttciltitt ntLtt ttlrt.'

PRO^{SP.\T l:rnr:r* lanrela( L+l) clinPRELE\'.{TtrL BIOLOGIC LICHID

.]'e()lLtt}1utlat]1ic'|.t,sct)|)'\'L,||tlJ|L,|/)i('(||l|1

- Pic'ttlltt'tt.te ttc,t/tet'rtL'1 () l(ttjtL,lct.

- .\c'c.\'Ltntineit:Lt l(t ttjjLt.o.\L,olttrlrtlttit t.\l()l c,trrthir,r.,1r.,,,t()hl tlc,l(t-1().t

|(l(uy.!y_

.!!I1LLU,

- liturta ialiitt -.xt'trtili:ect:Lt (lL't'trrinLt itt.:c't'cititr.gtrlclt,tlttt!ps.xtic.

- ttl't.tct't'ctred ntohilitLttii .\lLtLliilt)r l.rLtt.tt:itttt.t, c.ttc.ttl)trtittttc Llc ilti.\1.(tl.e

I)ezavantai;

- .r(?rtsucosi

scdelcrioreuza.fottrte rcpttlc:itt _, lrtrzt

D2)FROTIUdin din PRELEVATITL BIoLoGIC

l)ri nc ilt itrtrtcto<!u,

LICHID (sangel LCR/ etc)

- Pe o lama

- ('ltr lttttrrtt ttttci

c{enti<:roscop sc pyzc

I 1ticaturu preleyat

tichid:

lamalt! dsazulu irt trnghi tlt: 15" plqqlllryl:sl.qy41t,-.sa tttalauza_tlt, lo un capat la

cclalat al lamci.

- I,'ro/iul a.yccutotsa./_ilCSZSt.himit. cttaltttol.

- ^tc coloreaza at hioktgicc lir:hidc)

Giemsa (Al!Ug! pcnlnr

- Sc examineaza ut 0h de I00"r Avanta.j:

sangc.) scttr 'l'ricrom

(pentru

celalalte Ttreletate

- poate.fi pastrat ani indefungati.fara riscdc deteriorare

- .tcprtt ttbScn'tttttai hinc:c[c:tulilcdt: ttltroslru(:lttftt ttlc: Sttttztziltrl I)ezat anta.i;

-

'

-

r€a6li1;ii./itlositi stltt ccya ntai .rctttttni

le.tt

c'ttlitttlit' L'rtt'( .ss, (.\'tc'ul(t 1tc' ltltrc'i L,()tnCt.(,iLtli:Ltte L.rr

godttrt.i

,.1(tJ)Ll(tte.,lte ltrttcl c,tr

])(t t'(t:i l(tl'1"'

Prrthu t/c.fbr'rtlr' lir'lrir/r, (lactrlt'

'

.\t' u(.1(ttt:!(t.liec'ttt'c' ii

pe .fi mctrtI goclcttIui )

tliltttrtt

intt'-trtt rLtntl)()n)

itt 1ti.,.,lr11

tr)tttr.oltrl lttt:itit.

L.()lttt.()lrl,e{Lrit.

ctt lt' un .g()(l(,lt (l)ctctt

c,.\.1.i/c/.-1.{.

c/c.c,.r/c,i/.\1,t./)/.

li.tit tlC ,Jt, tle

Parazitologie

Asist univ Neagoelonet

- .Seadaugd rrn reaclir'-,, Conjugatul

contine

anticorpi

(Daca exisla anligcne in pxtha. ucestcd wr.fi prin,re la

firndul godeului si conjugat)

specifici antiAg cuplati cu o enzimc, ntijloc " in sandy,ic'h" intre Ac clent'

- Incuhsrc t spalurc ttlterioara panlnt intlcparlareo cotljugotttlui ne.fixttt

- Seadaugaun al ll-lea reacli'tt ' Subflru&ll-pentru enzintadin

conjugat

-,.,e,tte initial incolor

(Daca exisla Ag

in proba, enzinra din tnnfitgatul .fixat la Ag'r,ri clagrutlusubstrwhrlctt

generarqre unui culori albastre)

- ^\c adatrga un ullirtt reaclit'

$pl!!ia

vireaza culoarea albastra la galben

dc Sk4tare a Llegrttdarii

enzinmtice a sttbstrafirhri.,

- Citireu placii

crt godeurile de analiz,a sa.fttt:c lu spcctrc/ittontetnt

unda ,,450nnt

la o hnnintt r:tt hmginea tlc

- Inlensilutea arlorii

lichidului

clin goclatrl crt prrsbu anttlixtta

cat si t,aloarea absorbantei

obtirurle

analizala.

spectro-fobmetric esle clirect proportionaln

u.t ancentralia

de antigene din proba

Attantaj:

-Sen,sibilitttle mdre tlc clcteclie ftntti marc dcc:ttlexantanul c:oprt4strrttzitobgi) I)ezavanla.i:

--frtlose,stc rcaclivi scumpi - .;eulilizeazd ntai.fi'ect,entin utnfirntorea cli(Tgttostit'ttltti - dureaza -2h

i :^pacilicitate riclicata

- le.:;lcalitativ .seexearta pe plac:i ctt

- I)r<tha licltidq

godeuri "lapetate" ctrAg sytec,ific:eparazitare

cu un tanrlxtn)

proha

i contrct,lulpoziliv exista anticorpi

pn

(ser sangvin tliluat

t conlrolul

negatit, s,e

anti parazit

(lgG/lgM),

ba

adauga .fiecare in cate un gotleu (Daca in

acestia se vor.fixa de Ag de pe.funclul godeului)

- Inc:ubare , spalarc ulteriouru pentru inclcpttrtarau rczichrrilor clin

- 5c adauga un reacliv'''

coniu$atul

'contine antiutrpi specifici anti IgG,/lgM umane cuplari anti pantzil in pnfia u(:cstia vor.fi ltrini'i la ntijlst: intic Ag

cu o enzima (l)aca exi'sltt Ig(i'lgM

de pe.firndul

godeufui si conjugat)

- Inutharc

- J'eadauga un al ll-lea

i ,spalure ulterioaru penlnt itrdclxtrraraa e,onjttS4t:rttthti ncli-rat

reactiv

"' Subslralul

pentnt enzinta tlin conjtqat

in prcha, enzinrsdin t:ortjtrgotttl fiiat

0)aca exisla IgG'lgh{ anli purztzit cu generarare unui culori alhastre)

=,, este initial incolor va clagraclasrthstrahrl

- J'c adauga un ullim rcoclirt

'

Sofutia da,\tt4tare

u tlegroelarii cnzintalic:ea.tubstttttttltri,

rtireazactrloarea albastra Ia galben

Citirea

unda-45\nnr

placii ctt gocleurilc c{t:analiztt se.fat:cla spee:tro.fittontetnt la o lrrntjnu ctr lunginrcatle

- Inlensilatea &lorii lichiduhri din triodaul at prcha anqlizuttr car si t,sloarea

obtinute

din proha cmalizata

spectrutfotontetric esle direcl proporlionala

absorbqrtrei

ctt concentralia cle anricorpi anti parazit

7\x

Palazitologie.

\sist

Lrnir .\ s'./rt.)e,It)tt€lcl

tc,'ltc'ctli|tt|i|,(lL,tl1i.qrL'II.c'lttIt,l.t|lttiltttttltlc.t.tltttt||t).!l.tt.litcl|lt.ttltli/tt:it

-

din proha de./bcale cxilminara - se e-yccttr(tpe srriptri

(/n strip

cuseldcs.lcttlculttil lin

3zone;

s(ttrcdscta

I zttna ' exlrentilatea carc t'ina in L'ontLtclcu proba de.lbcale tichitta

I-!,7onu intpragnala ctr un

(dihrcttaintr-un

lantpon)

(ltr4iugal

coniinc untic:orJtisltct'ifici durti.4gurytluti la lrctitittrlc

de lalex colotal ('Daca in

IA_zeM ZO^/A da CI'l'lttti RI|Z{ it,'t /t't't,). A. la o exlremilate este_impregnatat alti an

puraT.itur

proha

tle./bcale.ntntAg parazitare oce.steasc rtor lega la Conjttgat)

;pt!

+!e!llt_-,-,

trpo-r;-itia

ht:nz ttJbSttZi lo D _1,9.$!J:

11(-q

u

oIortt la

utnjugatul

.fixut de untisenul

13.Ia cealalta exlrcnrilale

e.sle impre:gnttltt cu anticoryti care se leagaTa

JAq

obligutortu (intli.ferent d, irin9-"*ii

liher

dL,!lp!U:it!t_q_lr,:!lf!l_!c_!:-ttt:tLt!t_LeplOrclL"-_Ohs: Colorarea

rye.fi-rut la Ag ltarazitur

benzii de control este un indicanr

,r,grr.eazaca testtrl

Lt.\l(tt.dlullil.sl

.r-rr c,.\-r,t,lttol c,ot.(,1.!

Interpretare

rezu.late .-

ll.eztrlalpttzitit'

prezcfllo ilg ptttttzilttt'c in prcbtt

ttlturititt tutei (trnor) bt:nzi tt:.stcoloratc in.fitnctitt

de urloarea pefiiatlelor

Ilcrultat ncgutit' ab.tantaAu pttruzilctrain pnsbtt ulturitiu nttntui u l-tsrsxiitlat:ttntrusl

clelatex din c:ort.jttgtttI bartdatle conlro!

Atanlai:

-.fitnrtc rupid

-.fiind mai

J)ezqt.,anla.L - sensihilitatede detectiemai scaztttttcu Iil,lSA

sacxcctrtoin 5-t0min

ie.ftinca I;l,lsA ltoate./i utilizut si in screeningtle ditrgnestit:

- !a.t1tle cltPislctt"(Lt ut'iltr'f ()t' tlc,.11).\' 1t1tt.Lt:itLrt. r,.\.//.t/.r 1tt.in ntctocla tltCtitt le ditt ltt.ttl-ttt irttttli::ttltt

- ,\r,c.\'c('ut(tpt

- P('R ttl(tt't.\lta.\'ltt.ttletttittl pttlt4t'trl tlc' cttltii

- P('R.\a I'(Ltli:L'(t:rtitt c,tilt'trlct j c'lttltt tnctittt'c'cr//'c'\L't'cl)t,tLt.st,t\'(ntittl tlt,3(l - 10 ot.t

tnt Ltl)(u.Ltl (ntl()tltLt lj:ul

ltat.lnttc

t.c.le't.)

ctlt,11c,i gL,lCtiittLt,rlt,.tc,tlitt,11).\' 1ts111.1_11r11

I elapa

II elapa

denaturarea

s!i!J913a

la 94"C, celc 2 catcneAI)N secles:pan. 2 sec:venterutcleoticlice denumite printeri se vor lega specific !a capetele

cnzime rerntosrtrhile(ADN polinrcraza)

r 4N'l'p-uri,

cornltlet gena,. prtxlus ttntplificure ADN)

KcneiIinto'

in prezcnttt unei primcrii wtr inititt L.ol)ia,.('dgcttL'i tinto,

III elapd " extensio,'polintcrzorea lo 72'(, primerii wtr copia

uttrtiilor genei tintu (umplit:ort tll)N/

- I,erificureo + vizuulivtreu

A.

Pn-ttlusul de

antplificare P('ll

.scincarcq.si se tnigreaza clec:trrlforetticpe tm gel tle

ugaroza colorut cu brrtnttrt.dtla ctitlitrrrr

Parazitologie

Asist univ Neagoelonela

Interpretare

dimznsfunii ampliconului ADN

viuyalizat

markersarr conlrcl

declimen.titrni al henzilorcle

urilizand un

AI)N cere e.stemigtat clcc,trtifitretic paralel ctt

electntforetic

-.,. se

face

produsu I de amplificare pCIl.

Aya4tqj:

- specificitale ridicara si sensibilitate.foarte ntare de detectie I)ezavantaj;

--foarte scump - din ace,stmrtlitt este.folo,sit exclusiv pentnr confirntarea diagnostictrhri

G.CTILTT]RA

si COLO\II

DEDEZVOLTARE a stadiiforde, crttrturnoebu.?.in

PLACI PETRI cuAGAR

DE Esheric,hiu coli

-

I'(llhtl

sdu

n'lacerahtl tisttlttr

ct:rebral

prin

recoltar tle la

ltacienrtrl

ur ct,tagar pe ccre au crescttt

sus,act de o in/bcrie

Acanthamoeba sp', se

colonii cleF.sharichia coli;

Se incubeaza la

Se exqmineaza micntscopic

in;annnteaza

inunclare in placi petri

temperatura camerei lintTttle 3 zile;

ltlucile

ctt agar rnsd.fttantat

u

zis_zapne :

Cu obiectivele mici sepot o,bseniuui

,.qceslea sugereaza suytru/hta mediului pentru a sa

prezante

hranicucoloniile hacterienede Li.coii

tt:oJbzllttilptLlplgulLgugg!(r r"rrr, _ oi' Ji, trGG

- '1'catlatrgtt trllerior in meclirt

dezvoharea tro.fozoitilor

u1-olllthi!LU(:

fttnrph0tcricino R azitrontygit

a) si se ohsena daca

rt- chi-rti mai are loc (scop tle astreciere a rezistentei la antibiotid.

TEST DE llltr\oFl-troRESCE\TA

resrrprafata celulelorparalitare in frofiuriisectiuni/anrprerrte tisulare

I\DIRECTA

(IFA) pentnr

rterectie.\.\TIGE\E

cte

- ,\c e)'eL,trl(tittclotulclLtl)epe () l

-

I

sectiune r fro tiu ianpren ta

- seclinnea t'.frolitt'/ amprenla

tnt(tt/entit,ftt.;t;rUt

prittttt

e/(lpLt -

l)in

te.\ttlul Ltttuli:Ltt \c

o.\'(curtr p(

()

lLtnlLt tle

ntic,ro.st:t4t o

IisuIara si se .fi xeaza chimic

lisulara.fixara

anticorytiumani spec:i/icianti

tesut,se vor.forma complexe Ac_Ag)

conline

anligerurl parztzitttr) clin resttr(Dacu Ag parazirar esrcprezent in

este pusa in c:gnlacl c,

ttn reactiv care

- Inc:uhare ) ^gpalare rama penrru iidepartare

- In a IIa etapa se adauga un alt reactiv care

anric,ryti ne.fi,ari

contine anticrtrpi

izoriocittrtttt

monoclonali

anlicttrpi ttmani c:ttPlalila ttn

Ag

Inuthorc

complex

(AMC) anti

exi,sla

./hnntcront (l;il'('.

tlc.fltutresccina)(' I)aca

clecontplexul

Ac-A1l

parazitar in tesul, anticorpi cuplati la.fluorocromi

t 'lpalare

lanw penlru

irulapartara

Ah'lc

sc ,t,or.fixa

nmrcari

'

ctr .flrrrtrocrcnr ne.fixari la

- ^5'eexatnineaza lamo la nticrL.scolnrl oplic tle .fluorcsccnltt strh e.rcilare

microscopului reaclia pozitiva

iluores'L'cnl

cefula parazitara

(trofozoir)

(IL,

apcrre colorata

a lampei

venle

in