Sunteți pe pagina 1din 17

CURS III Genetica bacterian

Organizarea materialului genetic n celula bacterian

Structura genomului bacterian Genomul bacterian reprezint totalitatea determinanilor genetici bacterieni. Este organizat astfel: nuclear (cromozomul) extranuclear (extracromozomial) este reprezentat de acizii nucleici ADN, ARN; exist un singur cromozom. ADN

1. Cromozomul

cantitatea de ADN/cromozom este constant pentru o anumit specie i tulpin bacterian; ADN este un dublu helix circularizat, format din baze azotate: purinice (A,G) i pirimidinice (C,T); de-a lungul ADN se gsesc genele (uniti funcionale ale materialului genetic). O secven de trei baze azotate: codonul (codific informaia pentru un aminoacid i inserarea lui ntr-un lan polipeptidic). ARN are aceeai structur de baze cu excepia timidinei, care este nlocuit cu uracil (U).

2.

Extracromozomial

Plasmidele:

propriu-zise

episomii

asigur

supravieuirea celulelor n condiii deosebite de mediu. Sunt alctuite din ADN dublu catenar helicoidal. Plasmidele propriu-zise nu se integreaz n cromozomi; se multiplic numai n stare autonom; se cunosc urmtoarele tipuri: factorul IR: conine determinani genetici ai rezistenei fa de factorul RTF (resistence transfer factor); factorul R: comand sintezele responsabile rezistenei; factorul col- deine informaia de a elabora colicine; factorii de sex (F) codific transmiterea materialului genetic factorii inductori de toxine ( E. coli enteropatogen); factorii de colonizare sau fimbriali favorizeaz aderena bacteriilor la factori tol intervin n procese metabolice importante (modificri de

chimioterapice;

cromozomial prin conjugare;

nivelul mucoaselor (E. coli, Shigella);

catabolism); factori de transducie, PUB 110 intervin n fenomene genetice bacteriene, asigur transferul de material genetic. Episomii fragmente de ADN integrate n cromozomul bacterial ce confer bacteriei

proprieti deosebite; factorul F (fertility-factor): controleaz capacitatea unei bacterii de a aciona ca donator de material genetic.
2

Elemente genetice transpozabile:

Secvene de inserie (SI) fragmente mici de ADN care nu dein informaia necesar iniierii sintezei unei proteine; inserarea acestora la nivelul cromozomului, plasmidelor sau epizomilor pot duce la variaii fenotipice; Transpozoni (Tn) fragmente de ADN care pot iniia sinteza unei proteine; prezena acestora inserat la nivelul cromozomilor sau a plasmidelor

poate interveni n patogenitatea germenilor. Microorganismele pot deveni patogene, rezistente la chimioterapice. Variabilitatea microbian Clasic, se cunosc dou mecanisme eseniale cu rol n generarea: 1. Variabilitii genetice: 1) mutaiile genetice: modificri profunde de genom; se transmit descendenilor; 2) recombinarea genetic. 2. Variabilitii fenotipice modificri trectoare, n cursul vieii unui individ bacterian, ale unor proprieti ce nu se transmit la descendeni. Schimbarea caracterelor unei bacterii se poate realiza prin intervenia elementelor extracromozomiale: plasmidele (factor R, col, tol, factor F, etc.). Variaii genetice 1) Mutaiile genetice

Sunt schimbri n secvena nucleotidelor de-a lungul catenei liniare de ADN, care duc la schimbri de gene, schimbri ce se asociaz cu modificri funcionale ca rezultat al unei informaii diferite de cea iniial. Cauzele mutaiilor Mutaiile pot fi determinate: spontan de ageni fizici (radiaii ionizante i neionizante: radiaii cosmice, induse prin ageni mutageni fizici (UV, X), chimici (acid nitros, izotopi radioactivi din natur); hidroxilamina etil sau metil metan sulfonat). Mutaiile duc la apariia de caractere genetice noi i stabile markeri. Markerii difereniaz mutantele de tulpinile parentale sau de celulele la care n-au aprut modificri. Ei pot consta n absena sau prezena cililor, dobndirea rezistenei la chimioterapice, caractere noi biochimice care pot consta n ctiguri sau pierderi de enzime. 2) Recombinarea genetic Se realizeaz ntre molecule de ADN dublu catenare (ntre plasmide sau ntre plasmide i cromozomul bacteriei purttoare). Recombinarea genetic se realizeaz dup transferul de material genetic ntre dou celule bacteriene de aceeai specie sau specii nrudite. Transferul este incomplet, se transfer numai un fragment de ADN. Transferul de material genetic cromozomial i plasmidic Se evideniaz trei mecanisme distincte de transfer genetic: a). transformarea = este transferul realizat prin preluarea de molecule ADN de la o tulpin donor de ctre celulele tulpinii receptor. Tulpina receptor trebuie s se gseasc ntr-o stare de competen i prezen de receptori cromozomici ce pot ngdui inseria de material genetic.
4

n cazul plasmidelor, trebuie transmis celulelor receptoare cel puin o molecul ntreag de ADN. b). transducia = este transferul de material genetic de la o celul bacterian la alta prin intermediul unui bacteriofag. Bacteriofagii temperai (profag) pot deveni viruleni, desprinzndu-se din genom cu o parte din genele acestuia. Ulterior, intrnd n celulele receptoare, devine profag i include n genomul acesteia genele desprinse. Prin transducie se transmit i plasmide (RTF i R).

Procesul de transducie

c). conjugarea = procesul de transfer de material genetic ce se petrece prin contact direct ntre cele dou celule. Transferul este controlat de prezena factorului F (de fertilitate). Celulele donatoare poart numele de celule F+ i celulele receptoare F. ntre cele dou celule se formeaz puni de legtur ntre fimbriile de pe suprafaa celulei. Prin conjugare se transmite material cromozomial sau plasmide (factor R, RTF, col).
6

Dac factorul F+ se gsete sub forma unui multiplu al su Hfr (high frequency recombination), conjugarea se face cu o frecven de sute de ori mai mare.

Procesul de conjugare

Transfecia Este un transfer de material genetic realizat ntre celule din punct de vedere filogenetic ndeprtate. De exemplu: Bacterie + acid nucleic viral modificri n sintezele proteice i de patogenitate. Celul eucariot + acid nucleic bacterian sau viral (bacteriofag) malignizarea celulei. Transmiterea informaiei genetice la descendeni Se realizeaz printr-un proces de duplicare a materialului genetic, n cursul procesului de replicare a ADN. Acesta se distribuie la cele dou celule fiice rezultate prin diviziune celular.

Procesul de transfecie

Agenii chimici selectivi (chimioterapice)


Clasificarea chimioterapicelor Chimioterapicele sunt substane cu efect negativ asupra bacteriilor. Pentru clasificarea lor s-a utilizat un numr mare de criterii. 1) Dup originea lor, se pot distinge:
8

Chimioterapice naturale, antibiotice propriu-zise, produse de fungi sau Chimioterapice semisintetice substane sintetizate n laborator pe un nucleu

bacterii (Penicilina, Polimixina, Streptomicina, Bacitracina);

elaborat de un microorganism viu: Penicilina V, Penicilina G, Ampicilina, Meticilina; Chimioterapice sintetice substane obinute n laborator prin sinteze

chimice integral: Sulfamidele, Acidul nalidixic (Negram), Trimetoprin (Biseptolul), Acid izonicotinic (HIN), Acid Paraaminosalicilic (PAS), Nitrofurantoinul. 2) Dup structura chimic exist urmtoarele categorii de chimioterapice: a) Beta-lactamine: Peniciline: Penicilina G, Penicilina V, Penicilina de depozit (Moldamin), Ampicilina, Oxacilina, Cloxacilina, Carbenicilina, Amoxicilina, Carboxipeniciline, Ticarcilina, Imipenem. Cefalosporine (CEFEME): prima generaie (Cefalexin, Cefalothin, Cefapirin, Cefadroxil, Cefazolin, Cefaclor); a doua generaie (Cefuroxim, Cefonicid, Ceforamid, Cefoxitin, Cefotetan, Cefotiam, Cefamandol, Ceftibuten); a treia generaie (Cefotaxim, Ceftazidim, Ceftriaxon, Cefoperazona, Moxalactam); a patra generaie (Cefepima, Carbacefema); b) Carbapenemi; Monobactami; Inhibitori de beta-lactamz (IBL); Aminoglicozide: Streptomicin, Kanamicin, Gentamicin, Neomicin,

Spectinomicin, Amikacin, Tobramicin, Netilmicin; c) Glicopeptide: Vancomicina, Teicoplamina; d) Polimixine: Polimixina B, Polimixina E (Colistin);

e) Alte antibiotice: Cloramfenicol, Tetracicline, Macrolide (Eritromicin, Oleandomicin, Spiramicin), Lincosamide (Lincomicin, Clindamicin, Novobiocin), Rifampicine (Rifampicin); f) Chimioterapice antibacteriene considerate Non-Antibiotice: Sulfamide, Trimetroprin (Biseptol), Acid nalixidic (Negram), Nitrofurantoin (Nitrofuran), Tiosemicarbazona, Isoniazida, Acid paraaminosalicilic (PAS), Quinolone (Norfloxacin, Ciprofloxacin, Ofloxacin). 3) Dup spectrul de activitate: Substane antibacteriene cu spectru de aciune larg: Cloramfenicol, Cu spectru ngust de aciune: pentru germeni Gram + : Peniciline, Eritromicina, Oxacilina, Lincomicina, pentru germeni Gram - : coci: Probencid bacili: Streptomicina (S), Kanamicina (K), Polimixine (Po), Amikacin (Ak), Tetraciclinele, Cefalosporinele;

Clindamicina, Oleandomicina, Vancomicina;

Colimicina (Co), Acid Nalixidic (Nx) Tuberculostatice: HIN, PAS, Streptomicina

4) Dup modul de aciune: Bactericide: efect letal asupra celulelor bacteriene; glicopeptide (Vancomicina, Teicoplamina); betalactamine (cefalosporine); fluorochinolone (norfloxacin, ofloxacin, pefloxacin, ciprofloxacin), Metronidazol i derivaii; aminoglicozide (Gentamicina, Kanamicina, Tobramicina, Neomicina, Amikacina). Bacteriostatice: mpiedic multiplicarea germenilor bacterieni fr a-i omor:

macrolide (Eritromicina, Claritromicina, Azitromicina); lincozamide (Lincomicina, Clindamicina), tetracicline, cloramfenicoli.


10

7.2. Mecanismul de aciune al agenilor antimicrobieni 1. Antagoniti metabolici competitivi: Sulfamidele, PAS. Aceti ageni au o structur asemntoare cu PAB (acidul paraaminohidroxibenzoic); reacioneaz cu enzime sau catalizeaz producerea acidului folic. n final, apar substane asemntoare structural cu acidul folic, dar nu identice, neutilizabile n metabolismul proteic. 2. Inhibitori ai sintezei peretelui bacterian Peniciline intervin tardiv Cefalosporine Cicloserina Vancomicina Bacitracina 3. Alterarea funciei membranei citoplasmatice: Polimixine B,F, (Colistin, Nistatina), Amfotericina B. Acestea produc o dezorganizare celular a membranei; bacteria pierde ap, aminoacizi, purine i pirimidine. Poate fi folosit i n tratamentul micozelor sistemice. n practic se folosesc ca ageni antibacterieni locali. Amfotericina B acioneaz mai ales asupra fungilor, producnd rupturi celulare, cu scurgeri de citoplasm i ioni. 4. Inhibitori ai sintezelor proteice: Streptomicina (S), Neomicina (Ne), Kanamicina (K), Tetraciclina (T), Eritromicina (E), Lincomicina, Clindamicina, Gentamicina i Tobramicina. Streptomicina, Kanamicina, Neomicina, Gentamicina, Tobramicina acioneaz pe unitile 30S ribozomiale, determinnd o citire incorect a mesajului, perturb intervin timpuriu n procesul de formare a peptidoglicanilor

11

legarea ARNt la complexul ribozom ARNm, genereaz poducerea de proteine anormale. Tetraciclina blocheaz legarea ARNt pe unitile ribozomale 30S, mpiedic inducerea de noi aminoacizi n lanul polipeptidic. Eritromicina inhib legarea aminoacizilor n lanul de polipeptide. Clindamicina blocheaz enzima polipeptidiltransferaz, mpiedic formarea legturilor polipeptidice. Lincomicina i Clindamicina prezint activitate similar Eritromicinei. 5. Inhibiia sintezei de acizi nucleici: - Rifampicina inhib selectiv sinteza de ADN celular prin formarea unui complex cu unul din lanurile de ADN nuclear mpiedicnd aciunea ARN polimerazei ADN dependente pentru catalizarea sintezei de ARNm complementar. - Chinolonele (acid nalidixic) i fluorochinolonele (norfloxocina, ofloxacina, ciprofoxacina, difloxacina) inhib rapid ADN bacterian, n timp ce sinteza de ARN continu prin inhibarea ADNtopoizomerazelor. Rezistena la chimioterapice Rezistena la chimioterapice se poate defini prin proprietatea unor microorganisme patogene de a deveni insensibile la efectul toxic al acestora. Rezistena bacterian poate fi natural (de specie) sau dobndit ( prin apariia de tulpini rezistente n cadrul speciilor iniial sensibile): Rezistena natural: - reprezint rezistena tuturor speciilor din cadrul unei - este de tip genetic i total. Prezena chimioterapicului determin activarea unor gene responsabile de rezisten la chimioterapice. n acest grup s-au identificat: micobacteriile (B. Koch) pentru penicilin, anaerobi la aminoglicozide sau pseudomonodaceae pentru majoritatea chimioterapicelor.
12

familii, fa de unul sau mai multe chimioterapice;

Rezistena dobndit: - reprezint rezistena aprut n mod spontan n prezena unui chimioterapic. n prezena acestuia apar mutante rezistente formnd populaii bacteriene eterogene. Chimioterapicul prin multiplicare joac rol de presor de selecie distrugnd tulpinile sensibile i selectnd pe cele rezistente. Rezistena dobndit poate fi realizat prin transfer cromozomial (genotipic) sau extracromozomial (plasmide n procent de 90%). Rezistena bacterian se poate manifesta fa de un singur antibiotic (monovalent) sau fa de mai multe antibiotice (polivalent). Rezistena dobndit poate fi adaptativ sau definitiv. Transferul rezistenei genotipe de la o celul donoare la o celul receptoare se poate realiza prin: a. Transfer cromozomial b. Transfer plasmidic La unele celule bacteriene pot exista n citoplasm complexe genetice (fragmente de ADN) plasmide R responsabile de rezistena la chimioterapice. Transferul acestor plasmide de la alte celule bacteriene se face prin mecanisme de conjugare, transducie sau transformare. Acest transfer este controlat de un factor RTF (factorul de transfer al rezistenei). Aceast modalitate de apariie a rezistenei a fost semnalat la enterobacterii (prin conjugare) i la stafilococi (transducie). Mecanisme biochimice ale rezistenei Dup transferul rezistenei la chimioterapice intervin mecanisme metabolice ce favorizeaz realizarea rezistenei: -scderea permeabilitii membranei plasmatice la chimioterapice (betalactamine, cloramfenicoli);

13

-elaborarea

de

enzime

care

denatureaz

antibioticul

(betalactamine,

aminoglicoside); - producerea n exces de metabolit (PAB) analog structural cu antibioticul cu al crui metabolism interfer: inhibiia competitiv cu antibioticul (sulfamide, betalactamine, cloramfenicoli). - dezvoltarea unei ci metabolice secundare (shunt): scoaterea antibioticului din circuitul metabolic; - modificarea structurii proteinelor ribozomale (tetraciclina, aminoglicoside, streptomicina). Toate aceste transformri metabolice au ca urmare i apariia de modificri n morfologia bacterian, cu precdere, n patogenitatea bacterian (creterea capacitii de virulen sau toxinogenez). Aspecte clinice i epidemiologice ale fenomenului de rezisten Rezistena la chimioterapice a fost semnalat la o serie de microorganisme. Astfel putem exemplifica pentru: Peniciline: stafilococ, gonococ, meningococ, enterococ; Tetracicline: stafilococ, bacterii intestinale (Klebsiella); Cloramfenicoli: bacterii intestinale, hemofili; Streptomicine: bacterii intestinale, B. Koch. Apariia rezistenei la chimioterapice uzuale a avut ca urmare imediat creterea ratei infeciilor intraspitaliceti (infecii determinate de E. coli, Proteus, Klebsiella, Piocianic) i apariia fenomenului dependenei fa de antibiotic. Chimioterapicul reprezint un factor de cretere pentru unele microorganisme, de exemplu tulpini streptomicino-dependente: meningococ, Salmonella, E. coli. Variantele microbiene dependente de un anumit chimioterapic sufer modificri minore n ceea ce privete morfologia i scderea virulenei.

14

n cazul unei conduite terapeutice incorecte, chimioterapicul va avea o influen negativ. Chimioterapicul va juca rol de presor selectiv grbind multiplicarea populaiei bacteriene minoritare rezistente la chimioterapice. 1. Chimioterapicul va putea declana apariia: ocului endotoxic prin distrugerea, ntr-un interval scurt de timp, a unui numr mare de germeni Gram negativi, cu eliberare masiv de endotoxine. n plus atacul masiv i rapid al antibioticului nu permite instalarea imunitii (ex. Penicilina). 2. Dismicrobismul este o stare patologic ce apare prin distrugerea florei microbiene normale de la nivelul anumitor nie ecologice (cavitatea oral, intestin, vagin). Distrugerea florei microbiene autohtone duce la selectarea anumitor tulpini cu potenial ridicat de patogenitate, determinnd eneterocolite postantibiotice, angina ulcero-necrotic, etc. 3. Avitaminozele pot apare ca urmare a distrugerii masive a florei saprofite intestinale, ce sintetizeaz vitamine din complexul B i K (ex. cicline). 4. Afectarea funciilor rinichiului poate avea loc dup tratament cu polimixine, aminoglicozide. 5. Afectarea funciilor hepatice dup administrarea de sulfamide i Rifampicin. 6. Leziuni medulare (aplazii) pot fi semnalate dup tratamentul cu Cloramfenicol. 7. Afectarea nervului acustic dup administrarea ndelungat de Streptomicin cu predilecie la copii mici. 8. Efect teratogen dup administrarea de Cloramfenicol la gravide. Conduita corect n tratamentul cu antibiotice n dirijarea administrrii unui chimioterapic trebuie respectate anumite principii: - cunoaterea sensibilitii bacteriilor prin intermediul anitbiogramei, principalii indicatori fiind: concentraia minim inhibitorie (CMI) i concentraia minim bactericid (CMB);
15

- testarea la doze de atac i ntreinere de antibiotic s asigure o concentraie optim n umori i esuturi cu efect inhibitor asupra microorganismului infectant; - schimbarea periodic a asociaiilor de antibiotice (bacteriostatic + bactericid). Pentru a se stabili calitatea unui antibiotic se face necesar stabilirea in vivo a ratei de absorbie, a ratei de eliminare i capacitatea medicamentului de a penetra zona infectant prin: Indicele terapeutic reprezint raportul dintre doza minim toxic pentru Nivelul seric se cerceteaz concentraia unui chimioterapic n umorile organismul uman i doza minim activ antibacterian;

bolnavului cruia i se aplic tratamentul. Depinde de doza administrat, greutatea organismului, modul de administrare i rata de eliminare. Condiiile pe care trebuie s le ndeplineasc un chimioterapic: Spectru larg de aciune; S nu creeze rezisten rapid; S nu modifice flora ecologic; S nu fie distrus de aciditatea sucului gastric cnd se administreaz oral sau

de proteinele plasmatice cnd se administreaz parenteral; S fie solubil n lichidele biologice; S ating n scurt timp o concentraie optim de aciune n umori i esuturi,

iar catabolizarea lui s se fac ncet.

Exemple de principalele clase de ageni terapeutici antibacterieni cu spectru de aciune asupra bacteriilor implicate n afeciuni ale cavitii orale.
Denumire Peniciline de biosintez Penicilina V Spectru natural active asupra bacteriilor Gram pozitive (coci i bacili), asupra cocilor Gram negativi, spirochetelor 16

Penicilina G Peniciline de semisintez rezistente la penicilinaz Oxacilina Meticilina Cloxacilina Aminopenicilinele Ampicilin Amoxicilin Penemele Imipenem Cefalosporine de generaia I Cefalotin Cefazolin Cephalexin (oral) Cefalosporine de generaia II Cefuroxim Ceftibuten (oral) Cefalosporine de generaia III Ceftazidime Cefixime (oral)

i florei anaerobe acelai spectru de aciune, fiind antibioticele de elecie n infecii cu stafilococi productori de penicilinaz spectru larg, care cuprinde i bacili Gramnegativi din familia Enterobacteriaceae; sensibile la aciunea penicilinazelor secretate de bacterii Gram-pozitive au spectru larg de aciune foarte bun asupra bacteriilor Gram-pozitive i Gram-negative, inclusiv asupra celor anaerobe au spectru larg de aciune, asemntor Aminopenicilinelor, activ mai ales pe coci Grampozitivi (S. aureus) sunt active pe bacili Gram-negativi din familia Enterobacteriaceae, genul Haemophilus i anaerobi sunt antibiotice de rezerv n infeciile cu etiologie multipl

17